Orientadores: Sergio Furtado dos Reis, Cibele Queiroz da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_EduardoGuimaraes_M.pdf: 1025576 bytes, checksum: decfa56a6b5116b10b4d83a367a74da9 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador: Denise Vaz de Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zoppi_ClaudioCesar_D.pdf: 3992666 bytes, checksum: e8868a527d2a2640dbb8ec1f303e49d4 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O treinamento físico induz uma série de adaptações no organismo que leva à melhora na performance esportiva. No entanto, os atletas podem ser submetidos a cargas extremamente altas de treinamento e quando a recuperação não é suficiente este atleta pode ser acometido pelo overtraining. Alguns autores, sugerem que a causa da sua instalação seja o excesso de formação de radicais livres. Nosso objetivo neste trabalho foi analisar os efeitos de um protocolo de overreaching em biomarcadores de ataque oxidativo, enzimas antioxidantes e capacidade oxidativa. Para tanto submetemos 25 animais a um protocolo de treinamento de onze semanas nas quais as oito primeiras constituíam um protocolo de treinamento e as últimas três constituíram o protocolo de overreaching. Foram medidos como marcadores de ataque oxidativo, os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs) e de proteínas carboniladas (PC) dosamos ainda atividade das enzimas antioxidantes glutationa redutase (GR) e catalase (CA T) e ainda como marcador de capacidade oxidativa, dosamos a atividade da enzima citrato sintase (CS) e ainda medimos a concentração da proteína de estresse HSP72 para avaliarmos os níveis de estresse imposto às fibras nos músculos sóleo (SO), extensor digital longo (EDL) e semi tendinoso (ST) .Embora o treinamento induziu aumento no ataque oxidativo, as enzimas antioxidantes e a capacidade oxidativa avaliados aqui pela atividade das enzimas GR, CAT e CS também aumentaram em todos os músculos, o protocolo de overreaching induziu um panorama de estresse oxidativo observado pela queda da atividade das enzimas antioxidantes e aumento dos marcadores de ataque oxidativo devido ao alto nível de estresse imposto por este protocolo, avaliado pelos níveis de HSP72, que também induziu queda na atividade da CS. Nossos dados permitem concluir que o estresse oxidativo é um fator que leva à instalação do overreaching e que o monitoramento destes marcadores pode ser uma ferramenta útil na prática para se evitar a instalação deste processo / Abstract: Physical training is known to induce several adaptations. These adaptations are desired to increase athletic performance. Frequently athletes are submitted to hard training in order to push performance to its upper limits, although when loads are excessive and the regeneration is not enough the athlete is said to be overtraining. Overtraining syndrome is the result from an imbalance between training loads and regeneration processes, and induces autonomic changes that impair performance. Overreaching is known as the initial phase of overtraining and is known as a metabolic imbalance leading to a decrease in A TP synthesis and inducing short term fatigue. Free radicals are well known high reactive molecules that can oxidize intracellular structures and so impair cell function and are increased during strenuous exercise. So the aim of this work is to study the behavior of oxidative stress markers in subjects submitted to an overreaching protocol!. In this study we used 30 animais divided in training group (n=25) and a control group (n=5). The exercise protocol consisted in a 8 weeks endurance training and a 3 weeks overreaching protocol!. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARs) and carbonylated proteins (PC) were measured as oxidative attack markers, glutathione reductase (GR), catalase (CAT) and citrate syntheses (CS) activities were measured as muscle antioxidant and oxidative markers and also stress protein HSP72 were measured to ensure stress levels in soleus (SO), extensor digitallongus (EDL) and semitendinuous (ST) muscles. Although endurance training induced increase in TBARs an PC levels, antioxidant and oxidative enzymes were also increased and at the end of training protocol the stress markers TBARs, PC and HSP72 levels were back to baseline values. On the other hand, overreaching protocol induced oxidative stress situation leading to decreases in antioxidant and oxidative enzymes and giving rise to TBARs and PC levels. HSP72 was also highly expressed suggesting a high stress imposed by the overreaching protocol. In conclusion, our data suggest that overreaching can be induced by oxidative stress and the measure of these markers could be a useful tool in sports field as markers of overreaching installation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Ivany Ferraz Marques Valio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:16:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sanches_MariaCristina_D.pdf: 10864077 bytes, checksum: 5dc232f263b3666a9af447cbfe8066d4 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Lianas são dominantes em clareiras naturais ou originadas por ação antrópica e tal distribuição nos dá indícios que esta forma de vida necessita de alta irradiância para o seu crescimento e desenvolvimento. Lianas enraízam-se no solo e usam outras plantas, especialmente árvores para o seu crescimento e ascensão ao dossel. Uma vez que iniciam seu crescimento no chão de uma floresta e então ascendem ao dossel, elas podem experimentar extremas diferenças na quantidade de radiação. No presente trabalho foram estudados alguns aspectos da influência da irradiância sobre o crescimento e atividade fotossintética em duas espécies de lianas, Canavalia parviflora Benth. (Fabaceae) e Gouania virgata Reissk (Rhamnaceae). Ambas são oriundas de uma floresta estacional semidecidual, no município de Campinas, SP. O objetivo geral foi avaliar a extensão da tolerância ao sombreamento bem como as limitações em alta densidade de fluxo de fótons, nas respostas de crescimento e atividade fotossintética nestas espécies. Em uma primeira etapa foram estudados os efeitos da redução da densidade de fluxo de fótons somada à redução da razão V NE sobre o crescimento e a morfologia das lianas, tanto em condições controladas como em sombreamento natural. Depois o papel dos cotilédones e das folhas primárias sobre o crescimento inicial foram também avaliados, através de sua remoção, em diferentes condições de luminosidade. Finalmente a atividade fotossintética, medida por meio de trocas gasosas e emissão da fluorescência da clorofila foram estudadas nas espécies mantidas em diferentes condições de luminosidade. Apesar da sua distribuição em locais de maior incidência luminosa, como bordas e clareiras, ambas as espécies conseguiram crescer sob baixa DFF (densidade de fluxo de fótons) e alterada qualidade espectral. Canavalia, mostrou-se sensível ao sombreamento com alteração da qualidade espectral, com um conjunto de respostas que incluíram redução da área foliar, do número de folhas, aumento do comprimento do pecíolo ao lado de reduções da área foliar específica (AFE) e da razão de área foliar (RAF) quando as plantas sombreadas foram comparadas às plantas submetidas ao sombreamento neutro. A alocação de fotossintatos foi alterada: aumento da razão da massa do caule (RMC) e redução da razão de massa foliar (RMF) foi evidenciada em sombreamento com baixa razão V NE. Gouania apresentou aumento significativo da altura, a qual foi acompanhada pelo aumento do comprimento do entrenó sob sombreamento com alteração da razão vermelho/vermelho-extremo (V NE), principalmente em 1,8% da DFF. Em Gouania, o padrão de direcionamento de fotossintatos para os diferentes órgãos foi pouco afetado pela alteração da qualidade espectral. De forma geral, Canavalia respondeu ao sombreamento natural com aumentos na AFE, na RAF e na RMF. Gouania mostrou decréscimos na RMF e com tendências para aumentos da RMC e manutenção da razão de massa da raiz (RMR). Em ambas as espécies, a taxa de crescimento relativo (TCR) foi determinada pelo seu componente fisiológico, a taxa de assimilação líquida (TAL). Em mais baixa densidade de fluxo de fótons, o crescimento de Canavalia foi alcançado através de ajustes morfológicos como pelo aumento da RAF, AFE e RMF. Em Gouania não foi encontrada uma relação entre TCR e RAF, bem como entre TCR e AFE. Canavalia exibiu crescimento compensatório quando apenas uma folha jovem foi removida, tanto em casa de vegetação, quanto em 14% da DFF, mostrando que esta espécie é capaz de arcar com eventos destrutivos mesmo em condições de DFF relativamente baixas. A remoção total dos cotilédones afetou adversamente o crescimento nesta espécie, apontando para a importância deste órgão no seu estabelecimento inicial. Em Gouania a tolerância a uma possível predação foi alta, uma vez que as espécies apresentaram 100% de sobrevivência em 40, 14 e 1,6% da DFF, mesmo com remoção total de cotilédones ou folhas primárias. Também a perda destes tecidos não afetou as taxas de crescimento e o padrão de alocação de fotossintatos, mesmo sob 1,6 % da DFF. O crescimento inicial lento ao lado de uma alta razão raiz/parte aérea (RIPA) no momento em que os cotilédones ou folhas primárias foram removidos, proporcionaram fonte de carbono para suportar o crescimento. Ambas as espécies apresentaram as mais altas taxas fotossintéticas no início da manhã, quando a densidade de fluxo de fótons ainda não havia atingido o seu valor máximo do dia. Queda nos valores de assimilação próximo ao meio-dia foi detectada, devido ao fechamento dos estômatos. Esta resposta preveniu as plantas contra perda de água, uma vez que as taxas de transpiração acompanharam as quedas na assimilação e condutância estomática. Canavalia exibiu uma alta eficiência do uso da água refletindo um padrão de conservação de água, preferencialmente ao ganho de carbono em si. Em Gouania uma maior eficiência foi observada em condições de 1,5% da DFF. Ambas as espécies ajustaram-se fisiologicamente aos diferentes níveis de luz impostos. Canavalia apresentou decréscimos nos valores de assimilação máxima (Amáx), transpiração máxima (Emáx) e condutância estomática máxima (gsmáx) em paralelo à redução de fluxo de fótons. Gouania mostrou altas taxas fotossintéticas mesmo em 10% da DFF. Em condições de radiação plena, as espécies apresentaram saturação lumínica da fotossíntese em aproximadamente 500 µmol m-2 S-l, enquanto que sob 1,5% as taxas de saturação lumínicas foram mais baixas. Canavalia exibiu pontos de compensação de luz mais baixos em radiação plena e mais altos em 1,5%, enquanto Gouania apresentou um padrão reverso. Marcada redução do rendimento quântico efetivo (?F/Fm') no horário do pico da irradiância, em condições de mais alta densidade luminosa, foi verificada em ambas as espécies. Depois do ocaso, as taxas do ?F/Fm' foram recuperadas. A queda do ?F/Fm' em radiação plena e em 40% da DFF foi acompanhada pelos aumentos da extinção não fotoquímica (NPQ). Sob condições de 1,5% da DFF, as espécies apresentaram valores pouco alterados do ?F/Fm'. Quando as plantas sombreadas foram submetidas a breves exposições à alta irradiância, elas exibiram um desempenho fotossintético reduzido, evidenciado pela queda mais acentuada do ?F/Fm' e a baixa taxa de transporte de elétrons (ETR) em relação às plantas mantidas em 40 e 100% da DFF. A manutenção das plantas em diferentes níveis de luz acarretou em alterações das propriedades espectrais das folhas. Em Canavalia, o sombreamento de 1,5% da DFF resultou em aumento significativo da absorbância com decréscimos na transmitância e reflectância. Em Gouania observou-se redução da reflectância em 1,5% da DFF. Apesar de Gouania não exibir pronunciadas alterações das suas propriedades espectrais em condições de sombreamento, esta espécie foi superior na eficiência da absorbância em relação à Canavalia. O aumento da eficiência da absorção nas espécies ocorreram em função dos aumentos na AFE nesta condições. Maior conteúdo de clorofila a, b e total foi observado nas plantas crescendo em condições de 10 e 1,5% da DFF, quando comparadas às plantas mantidas em radiação plena. Porém a razão da clorofila a!b não foi alterada em função da irradiância. As plantas mantidas em radiação plena exibiram um maior conteúdo de carotenóides totais por conteúdo de clorofila, evidenciando o papel protetor deste grupo de pigmentos contra o excesso de radiação. Estas duas espécies de lianas são encontradas em locais de maior incidência luminosa, como na borda da Floresta, mas esta distribuição não implica que suas respostas fisiológicas relacionadas ao crescimento e atividade fotossintética seja típica de plantas heliófitas como as espécies de início de sucessão. De fato, os dados apresentados neste trabalho sugerem que estas plantas têm um comportamento fisiológico intermediário entre espécies heliófitas e aquele encontrado em plantas tolerantes ao sombreamento / Abstract: The lianas are copious in natural and man-made clearings and it appears that these forms of life require high irradiance for development and growth. Lianas are rooted in the soil and use other plants, especially trees as support. Since these plants begin their growth on the forest floor, then ascend to the canopy, they can experience extreme differences in radiation quantity and spectral quality. In the present study, the influence of photosynthetically active radiation (PAR) on some traits of growth and photosynthetic activities were evaluated in two liana species, Canavalia parviflora Benth. (Fabaceae) and Gouania virgata Reissk (Rhamnaceae). The species grew naturally in a fragment of a tropical semi-deciduous forest, located in Campinas, SP. Three aspects were taken into account. First, the effects of light quality and quantity on growth responses and morphology were examined in both controlled conditions and natural deep shade imposed by a closed canopy. In controlled conditions, the species were maintained under contrasting red/far-red ratios, characteristic of the open and shade forest understorey, but under the same PAR. After that, the role of cotyledons and primary leaves was verified. Experiments of removal of parts (cotyledons or primary leaves) were conducted under greenhouse conditions and under reduced irradiance. Finally, gas exchange, stomatal conductance and transpiration were measured in these species to investigate the constraints on these responses under high (full sunlight), medium (44% PAR), intermediate (10% PAR) and low irradiance (1,5% PAR). Alterations in chlorophyll fluorescence, changes in specific leaf area and pigment composition were also investigated. In spite of their occurrence, both species were capable of exhibiting adaptations to a low irradiance and altered spectral quality. Canavalia was sensitive to shade with low red / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Orientadores: Vanderlei Rodrigues, Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_FabianaMartinsde_D.pdf: 4232239 bytes, checksum: 7f4299766a3d13a21cf8ba1f768d36e3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios bioquímicos e da caracterização de alguns componentes deste complexo multienzimático. Este nematódeo é utilizado como modelo experimental para o estudo da estrongiloidíase humana, uma helmintíase com alta prevalência em regiões tropicais e subtropicais. Para tanto, foram obtidos dois estágios de desenvolvimento de S. venezuelensis a partir de infecções experimentais em Rattus norvegicus, o estágio infectante de vida-livre (larva filarioíde, L3) e o parasitário (fêmea partenogenética, F). Para os ensaios bioquímicos foram obtidos os extratos brutos de ambos estágios, os quais foram submetidos aos ensaios de atividades (quimiotripsina e tripsina-símile), utilizando substratos sintéticos fluorogênicos, na presença e na ausência de inibidores específicos do proteassoma 26S (MG132 e PSI). Além disso, o extrato foi submetido ao SDS-PAGE, seguido pela técnica de ¿Western-blot¿ utilizando anticorpos específicos para o proteassoma 20S e para ubiquitina. Para os experimentos moleculares foram obtidos RNA de ambos os estágios, os quais foram submetidos a amplificações utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos para as subunidades alfa 6 e beta 6 do proteassoma 20S (¿core¿ proteolítico) e as subunidades ATPase 3 e S5a do complexo regulatório 19S do proteassoma 26S. O DNA genômico foi amplificado para todas as subunidades com exceção da S5a. Os produtos de amplificação obtidos foram submetidos à busca de homologia no banco de dados, após sequenciamento dos mesmos. Os resultados confirmaram a presença do proteassoma 26S no nematódeo S. venezuelensis, através da atividade específica de quimiotripsina e tripsina-símile e a presença de bandas protéicas características reveladas pelos anticorpos específicos, bem como pela análise molecular das subunidades. No entanto, novos estudos serão necessários para inferir a importância deste complexo multienzimático neste parasita / Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and identifying some components of this multienzymatic complex. This nematode has been used as a model and tool for the studies on strongyloidiasis, a helminthiasis of high prevalence in tropical and subtropical regions. In this study, two development stages of S. venezuelensis, namely infective larvae (third-stage larvae) and parasitic stages, were used for experimental infections in Rattus norvegicus. In biochemical experiments the crude extracts of the both stages were submitted at proteolytic activities (chymotrypsin-like and trypsin-like) using fluorogenic peptides in presence and absence of proteasome inhibitors (MG132 and PSI). Moreover, the crude extracts were submitted at SDS-PAGE and western-blot methods using specifics antibodies. In molecular experiments, RNA of both stages were amplifed with specific oligonucleotides to alfa 6 and beta 6 subunits of the 20S proteasome (proteolytic core) and ATPase 3 and S5a of the regulatory particle (19S). The genomic DNA was amplifed to all subunits, excepting of S5a subunit. Results show the presence of the 26S proteasome in proteolytic activities from S. venezulensis of the chymotrypsin-like and trypsin-like and the presence of the labeled bands by the antibodies, as well as molecular analysis of the subunits. However, new studies will be necessary to define the importance of these multienzymatic complex on the parasite biology / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientadores: Marcos Silveira Buckeridge, Paulo Eugenio Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:16:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dechoum_MicheledeSa_M.pdf: 1344463 bytes, checksum: 08f845b92f214eff53c4dd02e24097b3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Em grande parte dos trópicos, a vegetação é composta por um mosaico de áreas de savanas e de florestas. De acordo com muitos pesquisadores, a distribuição atual de formações florestais e savânicas é resultado de alterações climáticas que ocorreram durante o Pleistoceno e o início do Holoceno e que ocasionaram grandes mudanças na cobertura vegetacional e na distribuição de espécies vegetais. Na maioria dos casos, apesar das formações savânicas e florestais serem contíguas, sem barreiras ecológicas definidas entre suas populações, há poucas trocas de elementos florísticos entre as duas formações. Há, entretanto, diversos gêneros de plantas que apresentam espécies de mata e espécies de cerrado, que são muito afins, chamadas de espécies vicariantes. Acreditase que as diferenças ecológicas e fisiológicas existentes entre espécies florestais e savânicas determinem a distribuição destes dois grupos de plantas, tendo um importante papel na dinâmica do limite savana-floresta. Dessa forma, fica evidente que estudos comparativos sobre espécies vicariantes constituem excelente oportunidade de se detectar diferenças ecológicas entre matas e cerrados. O objetivo do presente trabalho foi compreender as diferenças relacionadas à adaptação e estabelecimento de plântulas das espécies vicariantes Hymenaea courbaril var. stilbocarpa (Hayne) Lee & Lang. e H. stigonocarpa Mart., nos seus respectivos ambientes naturais, utilizando-se parâmetros de fotossíntese e de crescimento. Para tanto, foram realizados experimentos sob diferentes intensidades luminosas e em diferentes substratos, em condições naturais e conhecidas e, parcialmente, controladas. Com os resultados obtidos nos experimentos realizados, pôde-se identificar diferenças entre as duas espécies estudadas ligadas à disponibilidade de água e, principalmente, à luz, resultantes da adaptação das plântulas aos seus respectivos ambientes. No início do desenvolvimento, a espécie de mata investiu no crescimento da parte aérea e foi mais tolerante à sombra e menos tolerante à luz, enquanto a espécie de cerrado investiu na parte subterrânea e foi mais tolerante à luz e menos tolerante à sombra. As plântulas de H. stigonocarpa parecem apresentar uma plasticidade menor em relação a H. courbaril var stilbocarpa e, como consequencia, uma baixa capacidade de ocupação de novos ambientes. Postula-se no presente trabalho que a espécie Hymenaea courbaril tenha originado a espécie H. stigonocarpa, que é exclusiva dos cerrados brasileiros / Abstract: Some parts of the tropical regions are composed of a mosaic of savannah and forest areas. The actual distribution of forest and savannah formations is thought to be a result of climatic alterations that occurred during the Pleistocene. They began in the Holocene and led to great changes in vegetation covering and plant species distribution. Although savannah and forest formations are contiguous and there are no ecological barriers between their populations, there is limited exchange of floristic elements between these two biomes. Nevertheless, there are many plant genera present in the forest and savannah, which present very similar species. They are called congeneric species. It is thought that ecological and physiological differences between forest and savannah species determine the distribution of congeneric pairs, having some importance for the dynamics of the borders between forest and savannah. Thus, comparative studies on the ecophysiology of congeneric species represent an important contribution for the detection of ecological differences between forests and savannas. The purpose of this work was to investigate the differences related to ecophysiological aspects of the establishment of seedlings of the congeneric species Hymenaea courbaril var. stilbocarpa (Hayne) Lee & Lang. and H. stigonocarpa Mart. Our approach was based on measurements of growing patterns and photosynthesis. Experiments were made under different light intensities and different types of soil, under natural and partially controlled conditions. On the basis of these experiments, it was possible to identify different behaviours of the two studied species regarding water availability and light responses. In the beginning of development, the forest species invested on shoot growth and it was also more tolerant to shadow, whereas the savannah species invested more on root growth, being more tolerant to light and less tolerant to shadow. Whereas H. Stigonocarpa did not survive under the dark understorey of the forest, H. courbaril survived in the savannah at least for the experimental period, suggesting that seedlings of the former species seem to show a lower plasticity for physiological responses in comparison with H. courbaril. As a consequence, H. stigonocarpa is probably less capable to occupy new environments. This work postulates that, on the basis of the ecophysiological behaviour, the species Hymenaea courbaril has probably originated H. stigonocarpa, which is exclusively found in the Brazilian savannas / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5587_1.pdf: 1696084 bytes, checksum: cd6a790cc623fff1e18807d3c5d4b618 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A Tuberculose (TB) é uma patologia cujo diagnóstico precoce e tratamento adequado são essenciais para a eficácia dos programas públicos de controle da doença, os quais buscam curar os doentes e evitar a transmissão da doença. O diagnóstico laboratorial envolve a baciloscopia realizada com auxílio da coloração de Ziehl- Neelsen, uma metodologia rápida, barata e acessível, com uma sensibilidade de 104 bacilos/ml e a cultura que é mais sensível mas cujo resultado pode demorar entre 9 a 45 dias. Para o diagnóstico de tuberculose espera-se que as técnicas de amplificação genéticas melhorem a velocidade, sensibilidade e especificidade para a detecção de micobactérias. Neste sentido foram objetos deste estudo o desenvolvimento de uma técnica molecular para diagnóstico de tuberculose paucibacilar e a caracterização genotípica de isolados de Mycobacterium tuberculosis (M.tb). Uma reação de heminested PCR voltada para o diagnóstico de tuberculose e utilizando como alvo, o marcador genético IS6110, foi elaborada a partir de criteriosa escolha de primers e condicões ideais de concentração dos primers e cloreto de magnésio e de temperaturas de anelamento. A sensibilidade da técnica foi de 30 fg e pode ser concluída em até 3 dias após a coleta de amostras biológicas para análise. Comparada com a PCR convencional, a heminested PCR aumenta a sensibilidade e especificidade, o que é importante, especialmente nas amostras biológicas paucibacilares. Os resultados da caracterização genotípica de 61 isolamentos de M.tb obtidos durante os anos de 2000 a 2002, possibilitaram através da técnica do Double Repetitive Elements-PCR (DREPCR) identificar cinco grupos de pacientes, designados I, II, III, IV e V com 4, 3, 6, 2 e 2 pacientes respectivamente, portadores de cepas com 100% de similaridade e apresentando respectivamente 5, 5, 1, 2 e 5 bandas na eletroforese em gel de agarose. As cepas com mesmo perfil de resistência a drogas apresentaram perfis genéticos distintos, exceto três do grupo I. A melhor correlação epidemiológica dos grupos foi a apresentada pelo grupo I. Três membros são da mesma familía, todos portadores de cepas resistentes a isoniazida e rifampicina. São três mulheres com diagnóstico de diabetes mellitus . O primeiro caso diagnosticado de TB nessas pacientes foi em 1999 e o segundo em 2000. O terceiro caso foi diagnosticado na filha desta última em 2002. O impacto da genotipagem nestes casos, foi a análise da dinâmica de transmissão e a imediata utilização de esquema terapêutico adequado para a filha, já que era conhecida a Artur Henrique Bach Diagnóstico e Genotipagem de M.tuberculosis resistência aos antimicrobianos de primeira escolha utilizados para o tratamento das outras duas pacientes

Orientador: Woodruff Whitman Benson / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T08:19:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chaves_GabrielaWiedemann_M.pdf: 3448950 bytes, checksum: a7fe2647d2609aedbdcd285ca207d31a (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Predadores frequentemente reconhecem suas presas visualmente através de características tais como presença de movimento, destaque do ambiente, e sinais deixados pela presa, como folhas danificadas por fitófagos. Realizei um estudo experimental relacionando as características visuais de presas com o risco de ataque por predadores, visando responder às seguintes questões: (i) Predadores não especializados visualmente orientados atacam presas chamativas em função de sua conspicuidade, ou as evitam? (ii) Presas mais perfeitas (com cabeças) são mais atacadas, pois são reconhecidas como alimento pelos predadores? Os predadores direcionariam seus ataques para a cabeça, assim conseguindo subjugar a presa com maior rapidez? (iii) Presas maiores são mais atacadas por serem mais visíveis ou por representarem maior quantidade de recursos? Presas maiores são atacadas por predadores de maior porte? (iv) A localização de presas (em cima ou embaixo da folha) afeta o risco de predação? (V) Presas associadas a danos foliares são mais atacadas, pois os predadores visualmente orientados usariam o dano como pista visual para encontrar lagartas? Fabriquei modelos de lagartas de lepidóptera com massa de modelar para usar como presas em experimentos montados na Reserva Florestal de Linhares, município de Linhares, ES, nos meses de abril, julho e dezembro de 1997. Modelos cilíndricos de massa de modelar (Verde e 1,5 mm de diâmetro x 20,0 mm de comprimento no caso do tratamento controle) foram fixados na vegetação numa altura de l-2m do solo, espaçados um do outro por 10m, e vistoriados para sinais de ataque após cinco dias. Coloquei ao todo 90 modelos de cada tipo para a maioria dos experimentos, com exceção do experimento referente a danos foliares onde foram 180 modelos de cada tipo em abril, 450 em julho e 360 em dezembro. A grande maioria dos danos foram produzidos por insetos (geralmente acima de 95%), a maioria aparentemente por vespas sociais. As taxas de ataque diminuíram com a cripticidade, porém a coloração da presa não teve influência sobre as tentativas de predação. Os ataques foram direcionados diferencialmente às extremidades do corpo, principalmente para a região cefálica em larvas com cabeças artificiais, como o esperado caso o predador visasse reduzir as reações de larvas e o tempo de manipulação. A análise das marcas de mandíbulas de insetos predadores mostra que larvas maiores são atacadas por predadores de maior tamanho. Isto pode estar relacionado a capacidade de defesa da presa e de manipulação e transporte pelo predador. Lagartas embaixo de folhas foram atacadas na mesma frequência que em outras situações, sugerindo que o habito de ficar sob folhas não esta diretamente relacionado ao risco de detecção por predadores visualmente orientados. Modelos situados em folhas visivelmente danificadas receberam mais ataques do que aqueles em folhas controles com danos crípticos, sugerindo que danos de herbivoria servem efetivamente como pistas visuais para muitos predadores. Adicionalmente, os resultados destes experimentos evidenciaram que diversas táticas comportamentais observadas em predadores no laboratório são relevantes para comunidades de predadores em condições naturais / Abstract: Predators commonly recognize their prey visually through characteristics such as movement, background mismatching and signs such as leaf damage. Using artificial caterpillar prey made from modeling clay, I experimentally investigated the relationship between predation risk and prey characteristics, seeking to answer the following questions: (i) Visually oriented unspecialized predators attack prey in function of their conspicuousness, or avoid colorful prey? (ii) More exact caterpillar models (with heads) would better mislead the predators resulting in higher attacks rates? Do predators concentrate their attacks on the cephalic region, supposedly permitting prey to be subjugated more rapidly? (iii) Are larger prey more attacked, as might be expected due to their greater visibility and resource value? Are larger prey attacked by bigger predators? (iv) Are prey situated on the undersides ofleaves less subject to predator attack? Are prey associated with damaged leaves more attacked, possibly because such damage gives them away to predators? I made imitation plasticine caterpillars which were set out in experiments undertaken at the Linhares Forest Preserve, Espírito Santo, Brazil, during April, July and December of 1997. The basic design used medium green cylindrical models 1.5 mm in diameteI x 20 mm long that glued to 1-2-m-high leaves at 10m intervals. I examined models for attack damage after 5 days. Experimental models varied in size, shape, color and leaf surface to which they were affixed. Each treatment on each date consisted of 90 models, except for the "Leaf Damage" experiment where I used 180 sets ofmodels (3 treatments) in April, 450 in July and 360 in December. The models were attacked principally by predaceous insects (usually more than 95% of the attacks), most apparently being social wasps. Although the more cryptic, green models tended to be attacked less, attack rates did not vary significantly with color. The attacks were concentrated near the extremities ofthe model prey, and when distinct heads were provided, the cephalic region was especially attacked. This behavior perhaps allows the predator to kill the prey faster, thereby diminishing a predator's injury risk and prey manipulation time. The measurement of the bite marks preserved in the clay showed that larger predators attacked larger artificial prey. Models placed on the upper and lower surfaces ofleaves were attacked at similar rates. Therefore, the habit of staying under leaves does not seem to be an adaptation to reduce predator detection. Models located on damaged leafs were more attacked, suggesting that leaf damage is used as a visual cue in prey detection by visually hunting predators. Additionally, my results provi de evidence that several predator tactics observed in the laboratory are relevant to predator communities in nature / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T07:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_MonicadeCampos_M.pdf: 11738135 bytes, checksum: 923bf4a53465671a3a728451203b86eb (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A transfonnação da sínfise pubiana em um ligamento durante a prenhez, e sua involução no puerpério oferece um modelo ímpar para o estudo do metabolismo do tecido conjuntivo. A separação dos ossos pubianos inicia-se no 12° dia de prenhez, sendo que o espaço entre as superficies articulares aumenta cerca de 1 mm por dia até o parto. Após o parto, esse espaço fecha-se rapidamente, mas não retoma às características do animal virgem. Um dos aspectos mais notáveis deste evento é a remodelação da matriz extracelular, decorrente tanto das alterações qualitativas quanto quantitativas dos componentes da matriz extracelular.Para estudar a organização estrutural e possíveis modificações do colágeno, foi realizado um estudo histoquímico, ultra-estrutural e morfométrico das fibras de colágeno. Os resultados obtidos através dos métodos empregados mostraram que, em camundongos nuliparos, a sínfise é composta por duas populações de colágeno segregadas em compartimentos diferentes: uma população de fibras grossas que se continuam com o periósteo, constituídas por fibrilas finas e grossas; e uma 28 população que fonna uma trama fibrilar na região central da fibrocartilagem, composta basicamente por fibrilas fmas. No 15° dia de prenhez não se nota mais a compartimentalização das fibras, sendo observado um ligamento fonnado por fibras grossas de colágeno com padrão fibrilar bimodal. A partir do 17° dia de prenhez inicia-se o processo de relaxamento do ligamento pubiano que se continuam até 24 horas após o parto; nesta etapa as fibras de colágeno separam­se, com diferentes graus de agregação, sendo observados e padrões de distribuição fibrilar variáveis. Estes resultados sugerem que durante a prenhez, o ligamento pubiano passa por mudanças na sua morfologia, principalmente devido ao rearranjo das fibras de colágeno. Após o parto há a reaproximação dos ossos pubianos onde as fibras tornam-se novamente compactadas, o que demostrou que as mudanças na histoarquitetura da sínfise pubiana estão relacionadas à adequação desta articulação a diferentes situações fisiológicas. No animal virgem, e até o início da separação dos ossos pubianos, o arranjo do colágeno está diretamente relacionado à resistir as forças de compressão, na articulação. Durante o afastamento dos ossos as fibras que compõem o ligamento mostram um padrão estrutural aparentemente adaptado a resistir forças de tensão. O relaxamento do ligamento se faz necessário para tomar possível a passagem do feto, sem contudo modificar a função das fibras de colágeno em resistir as forças de tensão. Com a reaproximação dos ossos a reorganização das fibras de colágeno se faz necessária para restabelecer a sínfise pubiana / Abstract: The spreading apart or relaxation of the pubic joint depends on the growth of a ligament in pregnant rodents, and offers a unique system for the study of the hOl1l1onal regulation of connective tissue. The two pubic articular surfaces begin to separate on the 12th day of pregnancy, and the gap widens an average of 1 mm per day until parturition. After labor, the gap rapid1y closes by the 5th day post-partmn, but does not retum to the virgin condition. The development and involution of the pubic ligament involve an increased biosynthesis of extracellular matrix components such as collagen proteoglycans, and a new balance between synthesis and degradation. In order to evaluate and compare the collagen fibers and fibrils assembly and their possible modifications in the virgin, pregnant and post-partum mouse pubic symphysis, we perfol1l1ed a histochemicaL ultrastructural and morphometric study. The collagen network in virgin and twelve days pregnant murine symphysis showed two distinct distribution and organization: a central fibrocartilaginous region with a random meshwork of thin fibrils collagen that on 12th day of pregnancy they were oriented parallel in direction to the mechanical stretching of joint spreading; b) the peripheral region surrounded by sheaths, continuous with the periosteum, showed thick wavy fibers preferentially oriented. The ligament architecture on the 15th day of pregnancy doesn't show regional differences and was assembled by bimodal thick collagen fibrils. After 17th day of pregnancy the collagen meshwork becomes progressively loosen which result in the relaxation of the symphysis, preparing for the parturition. In the post-partmn, the gap quickly diminished and on 5th day post-partmn, the loose three dimensional collagen arrangement transfol1l1s in dense connective tissue. Therefore the histoarchitecture changes observed in the pubic symphysis during pregnancy can be attributed to the changes of collagen fibers assemblies and their rearrangement in this region preparing to the parturition. In virgin the collagen assembly is proper to resist the compression forces acting on the pubic joint, which becomes gradually relaxed due to the looseness of collagen meshwork of the ligamento This facilitates the opening for delivery but sustains the tissue integrity of the symphysis. Afier parturition the reconstitution and reorientation of the collagen fibers suggest the support for the traction fimction just to restore the pubic joint / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-24T09:31:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Contado_JoseLuis_D.pdf: 5265713 bytes, checksum: d8b1e9c15dba1c02f381597ff13b0f09 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Frutooligossacarídeos, ou Neosugar, são oligômeros de sacarose, constituídos de uma molécula de glicose unida com 2, 3 ou 4 unidades de frutose por ligação ß-2,1, resultando em estruturas designadas como 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4), respectivamente. Sabe-se que os frutooligossacarídeos existem naturalmente em muitos tipos de plantas. Podem também ser obtidos a partir de sacarose através da transfrutosilação catalisada pela enzima ß-frutofuranosidase (E.C.3.2.1.26) de microrganismos. Frutooligossacarídeos têm-se tomado de grande interesse por estimular o crescimento de bifidobactérias benéficas do trato digestivo, diminuir o teor do colesterol total e lipídeos no soro sanguíneo, reduzir a constipação intestinal, e em geral melhorar a saúde humana. Neosugar é uma mistura de frutooligossacarídeos, 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e 1f-frutofuranosil nistose (GF4) e é comercialmente produzido a partir de sacarose usando a ß-frutofuranosidase obtida de A. niger. O objetivo deste trabalho foi induzir um mutante de Aspergillus niger, utilizando o reagente N-Metil N' -Nitro N-Nitrosoguanidina (M.N.N.G.) e raios ultravioleta (UV), que produzisse uma ß-frutofuranosidase com maior atividade de transfrutosilação para produção de frutooligossacarídeos do que a linhagem parental e comparar as características das duas enzimas. Uma linhagem mutante (nº 12) de A. niger, obtida pelo tratamento com M.N.N.G.-UV, foi selecionada por apresentar mais que o dobro da atividade ß-frutofuranosidase que a linhagem parental. Esta linhagem mutante produziu menos conídea em PDA e mostrou-se morfologicamente diferente apresentando colônias bege. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,8 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 39,2 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 4,26 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,5-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,47 M e 1,02 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2, e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos a 55°C. A ß-frutofuranosidase extracelular da linhagem mutante foi purificada cerca de 15,4 vezes em relação a enzima bruta sendo obtido 31,7 % de rendimento. A enzima purificada apresentou atividade específica de 1,66 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de atividade na faixa de 5,0-6,0 e 50-55°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável na faixa de pH 5,0 a 6,0 e a temperaturas inferiores a 55°C. Os valores de Km e Vmáx da ß-frutofuranosidase para sacarose foram 0,37 M e 1,12 µmol/ml/min, respectivamente. A atividade enzimática foi inibida com 1 mM de N-bromosuccinimida, ß-mercaptoetanol, HgCl2 e I2. e com 10 mM de AgNO3, após 30 minutos à 55°C.O maior rendimento de frutooligossacarídeos (54,41%) em relação aos açúcares totais foi obtido utilizando-se ß-frutofuranosidase e 30% substrato sacarose em tampão citrato-fosfato pH 5,5 após 6 horas de incubação a 55°C. A concentração de substrato e o tempo de incubação são importantes para obter a proporção de GF2/GF3/GF4 desejada / Abstract: Fructooligosaccharides (or Neosugar) are sucrose oligomers, which are composed of glucose attached via a ß-(2-1) linkage to 2, 3 or 4 fructose units. The resulting structures are designated as l-kestose (GF2), nystose (GF3) and lf-fructofuranosylnystose (GF4), respectively. It is known that fructooligosaccharides exist naturally in many kinds of plants. They can also be prepared from sucrose through the transfructosylating action of enzyme ß-fructofuranosidase (E.C. 3.2.1.26) obtained from microorganisms. Fructooligosaccharides have become of major interest due to their growth stimulation of beneficial bifidobacteria in the digestive tract, decrease of total cholesterol and lipid in the serum, relief of constipation, and general improvement of human health. Neosugar is a mixture of the fructooligosaccharides, l-kestose (GF2), nystose (GF3) and 1f-fructofuranosylnystose (GF4), and is commercially produced from sucrose using the enzyme ß-frutofuranosidase enzyme obtained from A. niger ATCC 20611. The objective of this work was to induce a mutant of Aspergillus niger, using M-Methyl N'-Nitro N-Nitrosoguanidine (M.N.N.G.) and ultraviolet ligth (UV) producing higher ß-fructofuranosidase activity for the production of fructooligosaccharides than the parent strain and to study the characteristics of the enzyme. A mutant strain(nº 12) of A. niger, obtained by treatment with M.N.N.G.-UV, was selected, producing 100% more ß-fructofuranosidase than the parent strain. The mutant produced less conidia on PDA and was morphologically different: brownish white colonies. The extracellular ß-fructofuranosidase of the mutant strain was purified about 15.8-fold (40.2% yield) with respect to the crude enzyme preparation, showing a specific activity of 4.26 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.5-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°C. The Km and Vmáx values of the ß-fructofuranosidase for sucrose were 0.47 M and 1.02 µmol/ml/min., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. The extracellular ß-fructofuranosidase parent strain was purified about 15.4-fold (38.6 % yield) with respect to the crude enzyme preparation showing a specific activity of 1.66 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.0-6.0 and 50-55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55°e. The enzyme was stable from pH 5.0 to 6.0 and at temperatures below 55 °e. The Km and Vmax values of the ß -fructofuranosidase for sucrose were 0.37 M and 1.12 µmol/ml/min.., respectively. The activity of the enzyme was inhibited by 1 mM by N-bromosuccinimide, ß-mercaptoethanol, HgCl2 and I2, and by 10 mM AgNO3 after 30 minutes at 55°C. Maximum conversion yeld from sacarose to fructo-oligosaccharides (54.41%) was obtained when added ß-frutofuranosidase in 30% sucrose, at 55°C and pH 5,5, for 6 hrs incubation. The production efficienceis of GF2/GF3/GF4 depending on sucrose concentration and the reaction time / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Wesley Rodrigues Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T09:16:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves-Costa_C.P._M.pdf: 8122020 bytes, checksum: ea2b2c3cbee5ebc6fe978a7eaca37ad6 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Quatis consumiram frutos de 53 espécies no Parque das Mangabeiras, BH, MG. As características dos frutos, número de sementes e composição de espécies encontradas nas fezes foram descritos. O efeito do consumo dos frutos foi determinado para sete das espécies, sendo que em nenhum dos casos as sementes foram invíabilizadas. A remoção da casca foi importante para o aumento do sucesso de germinação de Myrcia guayavaefolia. Após defecadas as sementes desta espécie e de Lithraea molleoides foram removidas pela ação das chuvas e no caso da última espécie também por insetos. O estabelecimento das plantas em diferentes densidades intra-específicas não influenciou no desenvolvimento (medido pelo peso seco) nem na mortalidade das plântulas das espécies testadas. A única exceção foi L molleoides, onde a porcentagem de mortalidade foi positivamente correlacionada a densidade de plântulas. A manutenção da viabilidade das sementes após a passagem pelo tubo digestivo, a diversidade de espécies utilizadas, a grande quantidade de sementes ingeridas e sua germinação e estabelecimento após defecadas, apontam os quatis como eficientes dispersores de sementes. Estes animais utilizam diferentes formações vegetais, percorrendo longas distâncias diariamente e deslocando-se entre fragmentos vizinhos, de forma que devem ser importantes para garantir o fluxo gênico entre fragmentos, além de contribuírem para a regeneração florestal / Abstract: Coatis consumed fruits from 53 species in Parque das Mangabeiras, Belo Horizonte, MG. Fruits characteristics, number of seeds and species composition observed in feces were described in this study. The effect of fruit consumption was determined for seven species and for none of them seeds became unviable. The pericarp removal, after the seed ingestion, was important to increase the success of germination of Myrcia guajavaefolia. After the defecation, seeds of this species and of Lithraea molleoides were removed by rain and, for the last species, also by insect action. The establishment of plants in different intraspecific densities did not influenced the development (measured by dry weight) neither the mortality of the plants species tested. The only exception was L. mOlleoides, in which the mortality percentage was positively correlated with plants density. The maintenance of seeds viability after the passage through the digestive tract, the diversity of used species, the great amount of ingested seeds and its germination and establishment after have been defecated, suggest that coatis are efficient dispersers of seeds. These animals uses different habitats, walking great distances every day and using adjacent forest fragments. They could be important to warrant the genetic flow between fragments and contribute to forest regeneration / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ciências Biológicas