Orientadora: Profa. Dra. Ana Carolina Santos de Souza Galvão / Nanoparticulas derivadas de oxidos metalicos, em suas formas livres ou associadas a moleculas organicas ou drogas antineoplasicas, tem sido empregadas no diagnostico e tratamento do cancer. Neste cenario, destaca-se o uso de oxidos nanoestruturados derivados de zinco. Recentes estudos demonstraram a capacidade de nanoparticulas de ZnO, individualmente ou em associacao a agentes quimioterapicos, de sensibilizacao de celulas tumorais resistentes a multiplas drogas (fenotipo MDR), que possuem em sua membrana proteinas de efluxo que impedem o acumulo destas drogas no interior das celulas. A falta de seletividade e dificuldade de internalizacao pelas celulas de alguns compostos utilizados no tratamento de cancer, sao considerados os maiores empecilhos para o tratamento quimioterapico, tornando a modificacao da superficie de materiais nanoestruturados com atividade antitumoral, atraves da funcionalizacao, forma de aumentar a incorporacao e consequente atividade citotoxica destes compostos em celulas tumorais. Neste trabalho, as nanoparticulas foram funcionalizadas com L-glutamina, devido a grande importancia deste aminoacido no metabolismo de celulas cancerigenas e ao fato destas apresentarem maior captacao desse aminoacido que celulas nao tumorais. A citotoxicidade de nanoparticulas funcionalizadas com L-glutamina ou nao funcionalizadas foi avaliada em celulas de leucemia mieloide cronica K562 e sua versao com fenotipo MDR Lucena-1. A atividade citotoxica de ZnO foi comprovada pelos ensaios de exclusao de Trypan Blue e reducao de MTT, com IC50 de 20 evalencia de dupla marcacao nas celulas K562 tratadas com as nanoparticulas ZnO e ZnO_Gln, enquanto que para Lucena-1 observou-se porcentagens semelhantes de celulas duplamente marcadas e marcadas apenas com Anexina V. Para avaliar se ha influencia de especies reativas de oxigenio (EROs), geradas peLucena-1. Atraves das analises das possiveis vias de morte celular via analise de Western Blotting, estudando principalmente as proteinas e os eventos envolvidos no processo de morte celular programada (Bcl2, Bad, Bid, Caspase-3 e PARP) e autofagia (Beclin-1 e P62), observou-se que mais de uma via de morte foi ativada nas celulas tratadas com as nanoparticulas, o que corrobora com o descrito em literatura, considerando autofagia e apoptose sao as principais vias de morte ativadas pela acao citotoxica das nanoparticulas de ZnO. Outro evento observado foi a alteracao da atividade da proteina PgPieloide cronica K562 e a linhagem com fenotipo MDR Lucena-1 e a utilizacao deste aminoacido na funcionalizacao de nanomateriais pode ser uma importante ferramenta a ser explorada. / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2015. / Nanoparticles derived from metal oxides, in their free forms or associated with organic molecules or antineoplastic drugs, have been employed in the diagnosis and treatment of cancer. In this scenario, we highlight the use of zinc-based nanostructured oxides. Recent studies demonstrated the ability of ZnO nanoparticles, alone or in combination with chemotherapeutic agents, sensitization of tumor cells multidrug resistant (MDR phenotype), which have on their membrane efflux proteins that prevent the accumulation of these drugs within cells. The lack of selectivity, and difficulty internalization by cells of some compounds used in the treatment of cancer, are considered the major obstacles to chemotherapy, making the nanostructured surface modification of materials having anti-tumor activity through the functionalization way to increase the cytotoxic activity and subsequent incorporation of these compounds in tumor cells. In this work, the nanoparticles were functionalized with L-glutamine, due to the great importance of this amino acid in cancer cell metabolism and the fact that these have higher uptake of this amino acid to non-tumor cells. The cytotoxicity of nanoparticles functionalized with L-glutamine functionalized or not was evaluated in chronic myelogenous leukemia cells K562 and its version with MDR phenotype-Lucena 1. The cytotoxic activity of ZnO was confirmed by Trypan Blue exclusion and MTT reduction assays, with IC50 of 20 d K562 with ZnO nanoparticles and ZnO_Gln, while for Lucena-1 was observed similar percentages of doubly labeled cells and marked only with Annexin V. To assess whether there is influence of reactive oxygen species (ROS) generated by nanoparticles of ZnO and ZnO_Gln in their cytotoxic activity in ceC promoted protection against the cytotoxicity of nanoparticles even in higher concentrations of nanoparticles (30 ug / ml) in both the lines cell. In the potentiation of cell death caused by ZnO nanoparticles in cell lines studied, functionalization with L-glutamine promoted greater incorporation o562 cells treated with pure functionalized nanoparticles and in relation to the control compared to cells of Lucena-1 strain. Through analysis of the possible ways of cell death via Western blot analysis, the proteins and particularly studying the events involved in programmed cell death (Bcl2, Bad, Bid, caspase-3 and PARP) and autophagy (beclin-1 and P62), there was more than one death pathway was activated in cells treated with nanoparticles, which corroborates with what is described in literature, considering autophagy and apoptosis are the main routes of death activated cytotoxic action ofytotoxic effect of ZnO in the chronic myelogenous leukemia line K562 and the line Lucena MDR-1 phenotype and use this amino acid in the functionalization of nanomaterials can be an important tool to be exploited.

Orientadora: Profa. Dra. Marcela Sorelli Carneiro Ramos / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. / A isquemia e reperfusão renal, além de causar danos nos rins, promove a instalação de quadro inflamatório sistêmico estérilatravés da liberação defatores na corrente sanguínea, que podem atingir os mais diversos órgãos, como por exemplo o coração,levando a uma série de complicações fisiológicas e morfológicas, o que caracteriza a síndrome cardiorrenal do tipo 4. A resposta iniciada por receptores do tipo Toll-like,culminana síntese de pró-IL-1?, queé clivada em IL-1?pelo inflamassoma, formado por Caspase-1, NLRP3 e ASC-1.A IL-1?se liga ao receptor IL-1R, e pode intensificar a resposta inflamatória, levando ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Diante do exposto, o presente estudoobjetivou elucidar se a via de síntese ou a via ativada pelaIL-1??estaria envolvida em alterações funcionais e morfológicas no tecido cardíaco. Para tanto, camundongos machos C57BL/6J foram submetidos a isquemia e reperfusão renal (I/R),através da oclusão do pedículo renal esquerdo durante 60 minutos, seguido por reperfusão durante 8, 12 ou 15 dias. Foi administrado o antagonista comercial (Kineret)do receptor de IL-1,foram utilizadoscamundongos TLR2-/-, TLR4-/-, Casp-1-/-, NLRP3-/-, IL-1R-/-e animais tratados com clodronato (para depleção de macrófagos). A I/Rfoi capaz de induzir o desenvolvimento de hipertrofia cardíaca(HC)a partir do décimo segundo dia de reperfusão, acompanhada por alterações eletrofisiológicas (prolongamento do intervalo QT/QTc) e elevaçãonos níveis de IL-1?no soroa partir do oitavo dia de reperfusão. A ausência dos receptores TLR2 ou TLR4 foi suficiente para prevenir a HC. Interessantemente, na ausência de NLRP3ainda observou-se a HC e na ausência deCasp-1, a HC induzida foimais acentuada do que nos animais WT. Jáa interrupção da via de sinalizaçãode IL-1?foi capaz de prevenir a HC.Os resultados obtidos indicam queas vias de síntese e ativada pelaIL-1?estão envolvidasno desenvolvimento de HC em animais submetidosa I/R renal, o mesmo, no entanto não pode ser dito dos componentes NLRP3 e casp-1 do inflamassoma. Em relação as alterações eletrofisiológicas, tantoobloqueio da via de IL-1??quanto a retirada de proteínas chave na constituição do inflamossoma são capazesde prevenir alterações eletrofisiológicas provenientes da inflamação sistêmica. / Renal ischemia promotesnot only damage to the kidneys, but also a sterilesystemic inflammatorystate. Within inflammation, several inflammatory factors are released on the blood stream, reaching other organs, once they reach the heart, they can induce a stress response, leading to morphologic and physiologic changes. Such occurrence characterize type IV cardiorenal syndrome. The cardiac response may occur through activation of Toll-like receptors, resulting in synthesis of an inactive form of IL-1?and this cytokine is activated via NLRP3 inflammasome,composed by NLRP3, Caspase-1 and ASC proteins. IL-1?is activated upon assembling ofNLRP3, which may in turn intensify inflammatory response by binding to its receptor (IL-1R), leading to development of cardiovascular diseases. Therefore, the aim of thisproject was to evaluate whether IL-1?synthesis or activation pathway was involved withheart morphometric and electrophysiological alterationsinduced by I/R.Hence, we used the model of unilateral 60 minutes renal ischemia, followed by reperfusion of 8,12 or 12 days(I/R). Thus,C57bl6 male mice were treated with IL-1R commercial antagonist (Kineret), additionally, we used C57bl6TLR2-/-, TLR4-/-, Casp-1-/-, NLRP3-/-and IL-1R-/-and WT clodronate (macrophage depletion agent) treated mice. WT mice developed prolongation in QT interval after 8 days of reperfusion along with a peak of circulating IL-1?, followed by development of cardiac hypertrophy, starting at day 12. TLR2 and TLR4 absence prevented cardiac hypertrophy. Interestingly, both Kineret or clodronate treatment prevented QT prolongation, the same was observed either on knockout mice to NLRP3 inflammasome components (NLRP3 and Casp-1) or IL-1R.On the other hand, cardiac hypertrophy was more pronounced in Casp-1-/-and was not prevented on NLRP3-/-mice. Data presented here indicate that IL-1?is essential to cardiac electrophysiological alterations. Moreover, molecular pathways involved in synthesis andactivated by IL-1?participate of development of CH induced by I/R.

Orientadora: Profa. Dra. Márcia Aparecida Sperança / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, São Bernardo do Campo, 2018. / A leishmaniose compreende um grupo de doenças zoonóticas causadas por protozoários da família Trypanosoma e do gênero Leishmania, sendo transmitida por vetores flebotomíneos. O género Leishmania compreende 30 espécies, incluindo 20 espécies capazes de causar doença em humanos, com diferentes manifestações clínicas, que vão desde lesões assintomáticas, cutânea e mucocutânea, até a forma visceral grave, que é letal se não tratada. No continente americano, a leishmaniose visceral (LV) é causada por Leishmania infantum chagasi e o Brasil concentra 90% dos casos registrados na América Latina. O diagnóstico da LV na América apresenta dificuldades devido a reações cruzadas com outras tripanossomíases endêmicas. Além disso, os sinais clínicos e as alterações hematológias da LV são encontrados em outras doenças infecciosas e em alterações malignas hematológicas. Com o intuito de buscar ferramentas e estratégias para o diagnóstico diferencial da LV, neste trabalho foram desenvolvidos métodos de isolamento e detecção molecular de L. infantum chagasi, além da busca por características demográficas específicas e avaliação do diagnóstico diferencial da LV em aspirados de medula óssea de pacientes com sintomas de doença hematológica da região de Marília-SP, no período de 2010 a 2017. O método de isolamento de L. infantum chagasi foi realizado a partir de amostras de medula óssea e sangue periférico de indivíduos sintomáticos. O diagnóstico molecular por reação em cadeia da polimerase, convencional, foi desenvolvido utilizando como alvo o gene de cópia única que codifica a enzima quitinase de L. infantum, o qual permite o diagnóstico específico e direto a partir de diferentes amostras clínicas. Os testes apresentaram elevada especificidade e mostraram sensibilidade aumentada quando comparados com métodos utilizados rotineiramente nos serviços de saúde. Os resultados da análise demográfica e do diagnóstico diferencial a partir de aspirados de medula óssea de pacientes com suspeita de doenças hematológicas indicaram que 19,4% apresentaram LV, e que a população com maior risco possui menos de 20 anos. O estudo realizado demonstra que a investigação de LV em pacientes com alterações hematológicas é fundamental não só para identificar casos de LV, mas também para tratar corretamente os casos de doenças infecciosas e hematológicas associadas. / Leishmaniasis covers a group of zoonotic diseases caused by protozoa parasites of the Trypanosoma Family and the genus Leishmania, being transmitted by phlebotomine insect vectors. The genus Leishmania comprises 30 species, including 20 species capable of causing disease in humans, with different clinical manifestations, ranging from asymptomatic, cutaneous and mucocutaneous lesions, to severe visceral form, which is lethal if untreated. In the American continent, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum chagasi and Brazil accounts for 90% of the Latin America registered cases. The diagnosis of VL in America presents difficulties due to cross-reactions with other endemic trypanosomiasis. In addition, clinical signs and VL hematological alterations are found in other infectious diseases and hematological malignancies. In order to search for tools and strategies for the differential VL diagnosis, in this work we have developed methods of isolation and molecular detection of L. infantum chagasi, as well as the search for specific demographic characteristics and evaluation of the differential diagnosis of VL in bone marrow biopsies of patients with symptoms of haematological diseases in the region of Marília-SP, from 2010 to 2017. The method of L. infantum chagasi isolation was performed from samples of bone marrow and peripheral blood of symptomatic individuals. Conventional polymerase chain reaction (PCR) was developed using the single copy gene encoding the chitinase enzyme of L. infantum, which allows specific and direct diagnosis from different clinical samples. Both diagnostic tests showed high specificity and increased sensitivity when compared with routinely used methods in health services. The results of the demographic analysis and the differential diagnosis from bone marrow biopsy of patients with supposed hematological diseases indicated that 19.4% had VL, and that the population with the highest risk is less than 20 years old. The present study demonstrates that the investigation of VL in patients with hematological alterations is fundamental not only to identify cases of VL but also to correctly treat cases of VL associated infectious and hematological diseases.

Orientadora: Profa. Dra. Giselle Cerchiaro / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, Santo André, 2018. / Em doencas neurodegenerativas amiloidais o estresse oxidativo tem um papel importante juntamente com a proteina ¿À-amiloide (A¿À), associada a formacao de placas senis na Doenca de Alzheimer. Tais condicoes demonstraram desbalanco de metais, como cobre e zinco, tanto na concentracao celular e quanto nos processos antioxidantes. A Cu,Zn-Superoxido Dismutase (SOD1), em condicoes neurodegenerativas, pode demonstrar alteracoes estruturais e funcionais, tendo menor afinidade pelo cobre e pelo zinco. Diante destas condicoes, o objetivo principal desta tese foi em condicoes oxidativa (H2O2) e neurodegenerativa (A¿À1-42) avaliar os danos a biomoleculas, concentracao metais e a influencia da enzima SOD1 em linhagens de celulas neuronais (NSC-34 e mHippoE2). Diferentes respostas quanto a sensibilidade das linhagens neuronais foi observada durante as condicoes oxidativas e neurodegenerativa. Quanto os danos ao DNA a linhagem NSC-34 demonstrou maior sensibilidade a condicao oxidativa, com aumento de danos ao DNA, lesoes oxidativas em bases nitrogenadas que indicaram a presenca de lesoes tipo 8-oxo-G, corroborando com anormalidades nucleares e inibicao do processo de divisao celular. Nesta mesma linhagem quantidades aumentadas de Cu foram observadas, juntamente com a presenca da enzima SOD1 a nivel citoplasmatico e nuclear na condicao oxidativa (H2O2), alem de resultados significantes para danos permanentes ao DNA (anormalidades nucleares e quebras cromossomicas). A linhagem mHippoE2 apresentou aumentos significativos mediante a condicao oxidativa e neurodegenerativa, como oxidacao de proteinas e lipidios, demonstrando tambem alteracoes morfologicas citoplasmaticas. O tratamento com A¿À1-42 demonstrou aumento de danos ao DNA, lesoes oxidativas 8-oxo-G e tambem em bases purinicas. Podemos observar nesta mesma linhagem a forte influencia do Zn na condicao neurodegenerativa, atividade da SOD1 em ambas condicoes e tambem danos permanentes ao DNA mediante condicao neurodegenerativa. Dentre os resultados obtidos salientamos a relevancia dos achados na condicao neurodegenerativa ocasionada pelo peptideo A¿À1-42 nos ensaios para avaliacao genotoxica e mutagenica. Tal condicao demonstrou a presenca de danos importantes a bases nitrogenadas, tanto purinicas quando pirimidinicas, apontando tambem para possiveis efeitos mutagenicos detectados pelos eventos de quebras cromossomicas associados as anormalidades nucleares, bem como a presenca da enzima SOD1 no nucleo das celulas. / In neurodegenerative diseases, oxidative stress plays an important role associated with â-amyloid protein (Aâ), associated with the formation of amyloid plaques in Alzheimer's Disease (AD). In AD condition it has been demonstrated an imbalance of essential metals, such as copper and zinc, their cellular concentration and antioxidant processes alterations. The antioxidant enzyme Cu, Zn-Superoxide Dismutase (SOD1), under neurodegenerative conditions has structural and functional changes, such as lower affinity for copper and zinc. According to these conditions, the main objective of this thesis was to investigate how the oxidative (H2O2) and neurodegenerative (Aâ1-42) conditions cause biomolecules damage, metal alteration and SOD1 location in neuronal cell lines (NSC-34 and mHippoE2). Different responses in neuronal cell lines were observed during the conditions evaluated. For DNA damage, the NSC-34 cells demonstrated greater sensitivity to the oxidative condition, with increased DNA damage, oxidative lesions on nitrogenized bases indicating the presence of 8-oxo-G type lesions. In this same cell line we observed an increase of Cu amount, together with the presence of the SOD1 enzyme at the cytoplasmic and nuclear level in the oxidative condition (H2O2). The mHippoE2 cell line presented increased protein oxidation through the oxidative and neurodegenerative condition. Treatment with Aâ1-42 demonstrated increased DNA damage in this cell, 8-oxo-G oxidative lesions and also purine bases. We observed, in this same cell line, the strong influence of Zn on the neurodegenerative condition, SOD1 activity in both conditions and it was observed permanent damages to DNA in the neurodegenerative condition. Among the results, we highlight the relevance of the findings in the neurodegenerative condition caused by the Aâ1-42 peptide in the genotoxic and mutagenic evaluation trials. This condition demonstrated the presence of important damages to nitrogenated bases, both purine and pyrimidine, also pointing to possible mutagenic effects detected by the events of chromosomal breaks associated with nuclear abnormalities, as well as the translocation of the SOD1 enzyme to nuclei.

Orientador: Prof. Dr. Sergio Daishi Sasaki / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, São Bernardo do Campo, 2018. / A doença pulmonar obstrutiva crônica é uma doença caracterizada por progressiva limitação do fluxo aéreo e suas principais manifestações são a bronquite crônica e o enfisema pulmonar. O quadro é geralmente irreversível e engloba uma série de processos que incluem a resposta inflamatória anormal dos pulmões com participação ativa de macrófagos, neutrófilos e linfócitos, a falha na reparação de células anormais, a apoptose precoce e a destruição da matriz extracelular ocasionada pelo desequilíbrio entre proteases e antiproteases, sendo esse desequilíbrio apontado como um dos principais mecanismos que levam à instalação da doença. O tabagismo é a principal causa atribuída ao seu aparecimento, seguida por fatores genéticos e ambientais. Algumas enzimas estão relacionadas ao processo de patogênese da DPOC como a elastase de neutrófilos humana e as metaloproteinases 9 e 12. Em trabalhos anteriores o uso do inibidor de serinoproteases rBmTI-A, inibidor do tipo Kunitz-BPTI, resultou na prevenção do enfisema pulmonar por meio do controle da resposta inflamatória comumente observada, além de redução da atividade proteolítica presente no lavado broncoalveolar. Nesse trabalho, o objetivo inicial foi dar prosseguimento à pesquisa com rBmTI-A, com a caracterização da expressão gênica diferencial no modelo de enfisema animal utilizando camundongos, indução realizada com a administração de elastase pancreática porcina (PPE); para isso foi utilizado o ensaio de micro arranjo de DNA (Microarray). Os ensaios de Microarray resultaram na identificação de genes que respondem ao tratamento nos animais induzidos ao enfisema e que receberam o tratamento com rBmTI-A, dentre estes genes estão: genes do sistema imune e inflamação, genes da contração muscular, genes da tradução em mitocôndria e genes de outras funções celulares. Na segunda parte do trabalho, o inibidor de serinoproteases rBmTI-6-D1, inibidor Kunitz-BPTI, foi aplicado no modelo de enfisema pulmonar em camundongos, resultados obtidos previamente já haviam mostrado que rBmTI-6 também apresenta a capacidade de prevenir o desenvolvimento do enfisema induzido por PPE, neste trabalho mostramos que o tratamento utilizando rBmTI-6-D1 evita a perda do recolhimento elástico dos pulmões dos animais induzidos ao enfisema, bem como também evita a degradação alveolar, e o aumento do número de macrófagos e linfócitos nos lavados broncoalveolares dos animais que receberam tratamento em comparação com os que não receberam. Também foi demonstrado que rBmTI-6 evita o aumento de atividade proteolítica (calicreínas e elastase de neutrófilos) no lavado broncoalveolar de animais tratados com o inibidor e induzidos ao enfisema em comparação aos controles. Na terceira parte do trabalho, foram realizados ensaios em cultura de células A549 para investigar o potencial anti-inflamatório dos inibidores rBmTI-A, rBmTI-6-D1 e rBmTI-6-D2/3, a aplicação dos inibidores nestas células mostrou um aparente papel antiinflamatório por meio da diminuição da secreção das citocinas IL-6 e IL-8, no tratamento utilizando rBmTI-6-D1 e rBmTI-6-D2/3. Concluímos que os inibidores rBmTI-A e rBmTI-6 apresentam atividade que previne o desenvolvimento do enfisema induzido por PPE, devido às atividades antiproteases destes inibidores e por interferirem na resposta inflamatória. / Chronic obstructive pulmonary disease is characterized by progressive airflow limitation and its main manifestations are chronic bronchitis and pulmonary emphysema. It is generally irreversible and encompasses a series of processes that include the abnormal inflammatory response of the lungs with active involvement of macrophages, neutrophils and lymphocytes, failure to repair abnormal cells, early apoptosis, and destruction of the extracellular matrix caused by the imbalance between proteases and antiproteases, and this imbalance is one of the main mechanisms that lead to the establishment of the disease. Smoking is the main cause attributed to its onset, followed by genetic and environmental factors. Some enzymes are related to the pathogenesis of COPD such as human neutrophil elastase and metalloproteinases 9 and 12. In previous studies, the use of the serine proteinase inhibitor, rBmTI-A, a Kunitz- BPTI inhibitor type, resulted in the prevention of pulmonary emphysema by controlling of the inflammatory response commonly observed, as well as reducing the proteolytic activity present in bronchoalveolar lavage. In this work, the initial objective was to continue the research with rBmTI-A, with the characterization of differential gene expression in the emphysema model using mice, induced to emphysema by porcine pancreatic elastase (PPE) instillation; to reach this aim a microarray assay was performed. The microarray results in the identification of some genes which are affected by the treatment using rBmTI-A in animals that received PPE instillation previously. Among these genes were identified immune and inflammatory related genes, muscular contraction related genes, translation in mitochondria related genes and genes of other cellular functions. In the second part of this work, the serine proteinase inhibitor rBmTI-6-D1, other Kunitz-BPTI inhibitor type, was applied in the emphysema model using mice; previous results had shown that rBmTI-6 also presented the ability to avoid the emphysema development in the PPE instillation model. The present work we showed that the rBmTI-6-D1 treatment was sufficient to avoid the loss of elastic recoil, an effective decrease in alveolar enlargement and in the number of macrophages and lymphocytes in bronchoalveolar lavage fluid. Proteolytic analysis showed a significant increase in elastase activity in induced emphysema group that is controlled by rBmTI-6-D1. Kallikrein activity was decreased in the induced emphysema and inhibitor treated group when compared to induced emphysema group without treatment. In the third part of this work, assays using A549 cells were performed to investigate the anti-inflammatory potential of rBmTI-A, rBmTI- 6-D1 and rBmTI-6-D2/3 inhibitors. These inhibitors presented an apparent antiinflammatory role, due the reduced levels of IL-6 and IL-8 that were secreted by A549 cell when treated with rBmTI-6-D1 and rBmTI-6-D2/3. We concluded that rBmTI-A and rBmTI-6 inhibitors prevent the emphysema development induced by PPE, due the anti-proteinases activities of these inhibitors and by its interference in inflammatory response.