Com o objetivo de analisar a fauna de himenópteros parasitoides (Hymenoptera:Chalcididae) e de coleobrocas (Coleoptera: Cerambycidae) associados à cultura de T. grandis, foram utilizadas 5 armadilhas de Malaise instaladas no interior da floresta plantada. As coletas foram realizadas, semanalmente, de outubro de 2009 a setembro de 2010, em área de reflorestamento situado no município de Cáceres, MT. Foram analisados os índices faunísticos de frequência, constância, abundância e dominância e também diversidade de espécies. Foram coletados 414 parasitoides; pertencentes às famílias Chalcididae e distribuídos em 3 gêneros e 16 espécies e 715 espécies de coleobrocas, pertencentes à família Cerambycidae e distribuídos em 2 subfamílias, 18 tribos, 33 gêneros e 36 espécies. As espécies de parasitoides mais abundantes foram Brachymeria pandora e Ceyxia ventrispinosa. As espécies mais abundantes de coleobrocas foram Neoclytus pusillus, Achryson surinamum, Chlorida festiva, Coleoxestia atrata, Cosmoplatidius abare, Hexoplon uncinatum e Megacyllene acuta. / This research deals with the association of parasitoids (Hymenoptera: Chalcididae) with wood borers (Coleoptera: Cerambycidae) in a commercial forest of Tectona grandis located in Cáceres, State of Mato Grosso, Brazil. The insects were collected by using five Malaise traps in different sites of the forest, from October 2009 to September 2010. The following indexes were analyzed: frequency, constancy, abundance, dominance and species diversity. A total of 414 Chalcididae parasitoids and 715 Cerambycidae wood borers were collected. The most abundant parasitoid species were Brachymeria pandora and Ceyxia ventrispinosa while the most wood borers ones were Neoclytus pusillus, Achryson surinamum, Chlorida festiva, Coleoxestia atrata, Cosmoplatidius abare, Hexoplon uncinatum and Megacyllene acuta.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PatriciaAnders.pdf: 267735 bytes, checksum: ff715ff919969dde5ad2d1bb88ee588b (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 / Objective: to describe the process of decontamination of burs to assess the microbial contamination of burs after-processing that were available to the use to isolate and to identify the possible microorganisms Methods: This study was conducted in 110 private dental offices of the central area of Goiânia-Goiás during the period of March/2004 to August/2005 using a check-list measure of dry heat sterilizer temperature and microbial burs tests The burs were seeded in brain heart infusion broth incubated at 37ºC for 20 days and subcultured on specific agar to isolate microorganisms The isolates were identified by micro/macroscopic characteristics subcultured on specific agar biochemical/enzymatic test and automation technique (MicroScan ®) Results:A total of 110 burs were evaluated and 35 (31.8%) were contaminated Fungi were detected in 13 (30.2%) burs [Aspergillus sp (27.9%) and Micelia (2.3%)]; Gram-positive cocci (staphylococci) represented 13 (30.2%) isolates [2.3% Staphylococcus aureus and 27.9% (12) coagulase negative staphylococci] nine (20.9%) isolates were Gram-positive bacilli and eight (18,6%) fastidioso microorganisms Considering the obtained results some factors detected could be interfered in the burs sterilization ineficiency: enzymatic detergent inadequate use abrasive products use inadequate dry heat sterilization time and temperature multiple use burs kits and interruption the asseptical chain after sterilization Conclusion: The frequency of contaminated burs was high (31.8%) and it was detected failures in operational steps of burs processing and/or after sterilization / Objetivos: descrever o processo de descontaminação das brocas odontológicas; avaliar a esterilidade das brocas pós-processamento que estavam disponíveis ao uso; isolar e identificar os possíveis microrganismos contaminantes Métodos: Os dados foram coletados em 110 consultórios odontológicos particulares do Distrito Central de Goiânia (GO) no período de março/2004 a agosto/2005 por aplicação de um check-list aferição da temperatura quando da utilização de estufa e realização do teste de esterilidade da broca As brocas foram inoculadas em caldo infusão de cérebro e coração com técnica asséptica Os caldos de cultura foram incubados a 37ºC por até 20 dias e ao apresentarem turvação foram repicados em meios específicos para isolamento dos microrganismos Estes foram identificados de acordo com características micro/macroscópicas desenvolvimento em meios de cultura seletivos provas bioquímicas e técnicas automatizadas (MicroScan®) Resultados: De um total de 110 brocas analisadas 35 (31,8%) estavam contaminadas Os fungos filamentosos foram identificados em 13 (30,2%) brocas [Aspergillus sp (27,9%) e Micelia sp (2,3%)]; cocos Grampositivos (Staphylococcus sp) representaram 13 (30,2%) isolados [Staphylococcus aureus (2,3%) e estafilococos coagulase negativos ECN (27,9%)] nove (20,9%) foram bacilos Gram-positivos e oito (18,6%) microrganismos fastidiosos Considerando os resultados obtidos alguns fatores podem ter interferido na qualidade da esterilização das brocas: a não utilização ou inadequações no uso de detergentes enzimáticos; uso de produtos abrasivos; inadequação no tempo de exposição/temperatura das estufas; kits não individualizados para atendimento havendo manuseio excessivo dos artigos; rompimento da cadeia asséptica pós-esterilização Conclusões: A freqüência de brocas contaminadas foi elevada (31,8%) Nos consultórios onde detectou-se brocas contaminadas ocorreram falhas nas etapas operacionais do processamento e/ou pós-esterilização

A magnitude do problema de Diatraea saccharalis (Fabricius) tem aumentado nos últimos anos, principalmente nas culturas de cana-de-açúcar e milho no Brasil. Tradicionalmente, D. saccharalis tem sido controlado com agentes de controle biológico, principalmente na cultura da cana-de-açúcar. No entanto, a intervenção química tem sido necessária para o controle de D. saccharalis em ambas as culturas. Visando estabelecer estratégias proativas para o manejo da resistência de D. saccharalis a inseticidas e integrar as táticas de controle químico e biológico, objetivou-se nesse trabalho avaliar a toxicidade de alguns inseticidas (triflumuron, lambdacyhalothrin e fipronil) a D. saccharalis e ao parasitóide Cotesia flavipes (Cameron). A caracterização das linhas-básicas de suscetibilidade de D. saccharalis a esses inseticidas foi realizada com bioensaio de ingestão, mediante contaminação da superfície da dieta artificial com o inseticida, utilizando-se lagartas de 2º instar. Baseado nas curvas de concentração-mortalidade da população suscetível de referência, foram definidas as concentrações diagnósticas de 320 µg de triflumuron /mL de água [I.A.(ppm)], 32 µg de fipronil /mL de água, e 3,2 µg de lambdacyhalothrin/ mL de água, correspondentes à CL99, para o monitoramento da resistência Foram verificadas diferenças significativas na suscetibilidade a inseticidas em populações de D. saccharalis coletadas em diferentes regiões produtoras de milho no Brasil e uma no Paraguai. Para triflumuron, as sobrevivências variaram de 0,85 e 34,2%; para fipronil de 0,21 e 2,71%; e para lambda-cyhalothrin de 0,21 a 7,9%. A toxicidade desses inseticidas sobre C. flavipes foi avaliada mediante determinações de efeitos letal e subletal desses inseticidas sobre adultos do parasitóide. Inicialmente foram avaliadas as concentrações recomendadas de 0,08 mg de triflumuron/L de água e 0,075 mg de lambda-cyhalothrin/L de água, além de 10 e 50% da concentração recomendada, mediante bioensaio de contato residual em discos de folha de canade- açúcar de resíduos com 0, 24 e 48 h de idade. A maior toxicidade foi observada com lambdacyhalothrin (mortalidade de até 100%). Triflumuron causou mortalidade de mortalidade de no máximo 32%. Observou-se também uma redução da longevidade de C. flavipes em todas as concentrações e idade de resíduos para ambos inseticidas. Posteriormente, para avaliar os efeitos indiretos de inseticidas sobre C. flavipes, lagartas sobreviventes de D. saccharalis a CL25 de triflumuron, lambda-cyhalothrin e fipronil foram expostas a C. flavipes para parasitismo. A capacidade de parasitismo foi também avaliada para a geração F1 do parasitóide. Nenhum dos inseticidas afetou a emergência de adultos, a mortalidade de larvas e pupas, e a razão sexual do parasitóide. Por outro lado, lambda-cyhalothrin e fipronil afetaram negativamente a taxa instantânea de crescimento de C. flavipes. Portanto, as estratégias de uso destes inseticidas para o controle de D. saccharalis devem ser implementadas com cautela para preservar a vida útil desses importantes inseticidas em programas de manejo integrado de pragas. / The magnitude of Diatraea saccharalis (Fabricius) problem has increased in the past years, mainly in sugarcane and maize crops in Brazil. Traditionally, D. saccharalis has been controlled with biological control agents. However, chemical intervention has been necessary to control D. saccharalis in both crops. For establishing a proactive insecticide resistance management of D. saccharalis and integrating chemical and biological control tactics, the major objective of this work was to evaluate the toxicity of some insecticides (triflumuron, lambdacyhalothrin e fipronil) to D. saccharalis and to the parasitoid Cotesia flavipes (Cameron). The baseline susceptibility of D. saccharalis to these insecticides was characterized with diet surface treatment bioassay by using 2nd instar larvae. Based on concentration-mortality response of the susceptible reference population, diagnostic concentrations of 320 µg of triflumuron/mL of water [A.I. (ppm)], 32 µg of fipronil/mL of water, and 3.2 µg de lambda-cyhalothrin/mL of water, corresponding to LC99, were defined for monitoring resistance. Significant differences in susceptibilities to insecticides were found in populations of D. saccharalis collected from major maize-production regions and one population from Paraguay. For triflumuron, the survivorship varied from 0.8 to 34.2%; for fipronil, from 0.2 to 2.7%; and for lambda-cyhalothrin, from 0.2 to 7.9%. The toxicity of these insecticides to C. flavipes was evaluated by determining the lethal and sublethal effects of the insecticides to the adults of this parasitoid. Initially, commercial rates of 0.08 mg triflumuron/ L of water and 0.075 mg lambda-cyhalothrin / L of water, and 10% and 50% of commercial rates, were evaluated with residual contact bioassay by using sugarcane leaf disks of 0, 24 and 48 h-old residues. The highest toxicity was detected to lambda-cyhalothrin (mortality up to 100%). Triflumuron caused mortality up to 32%. Reduction in the longevity of C. flavipes was detected in all concentrations and residue ages of both insecticides. Then, to evaluate the indirect effect of the insecticides, D. saccharalis larvae that survived at LC25 of triflumuron, lambda-cyhalothrin and fipronil were exposed to C. flavipes. The parasitism capacity of F1 generation of the parasitoid was also evaluated. None of the insecticide affected the adult emergence, pupal and larval mortality, and sexual ratio of the parasitoid. On the other hand, lambda-cyhalothrin e fipronil negatively affect the instantaneous rate of growth of C. flavipes. Therefore, the strategies of the use of these insecticides for controlling D. saccharalis should be carefully designed to preserve their lifetime in integrated pest management programs.

O seqüenciamento em larga-escala e a aplicação da tecnologia de seqüências expressas (ESTs) permitiram a identificação de milhares de seqüências genômicas de vários organismos. Através de projetos como o de obtenção de ESTs de cana-de-açúcar (SUCEST – Sugarcane EST Project), a tecnologia de macro e microarranjos de DNA pôde ser aplicada para o monitoramento da expressão gênica. O primeiro passo deste trabalho foi otimizar a técnica de macroarranjos utilizando-se colônias bacterianas. Os arranjos foram construídos com o auxílio do robô Q-Bot. Células bacterianas contendo clones de cDNA de cana-de-açúcar foram arranjadas em duplicata em membranas de náilon e crescidas por 6 e 12 horas. Como resultado, concluiu-se que é possível estudar a expressão gênica em larga-escala usando macroarranjos de colônias bacterianas crescidas por 6 horas. Na segunda parte, o objetivo foi identificar genes de defesa em duas variedades de cana-de-açúcar (Saccharum sp.), em resposta ao herbívoro Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). A cana-de-açúcar é de grande importância para a agricultura brasileira e para a economia geral de muitos países em desenvolvimento. Estas plantas são atacadas por D. saccharalis, a mais importante praga desta cultura, causando significativas perdas econômicas. Como é sabido, as plantas desenvolveram complexas estratégias para se protegerem do ataque de insetos-praga. As variedades SP80-3280 (susceptível) e SP81-3250 (tolerante) de cana-de-açúcar foram expostas à D. saccharalis. Plantas submetidas à lagarta e plantas controle foram coletadas em 0.5, 6, 12 e 24 horas de experimento. As análises permitiram a identificação de genes diferencialmente expressos em resposta à lagarta nas duas variedades. Foram analisados o tempo, dinâmica e regulação da expressão de 3.840 clones do SUCEST, os quais foram crescidos na membrana de náilon por 6 horas. Estes ESTs foram agrupados em dezesseis classes: metabolismo de aminoácidos, crescimento/desenvolvimento, metabolismo de proteínas, metabolismo de RNA, metabolismo secundário, resposta à diferentes condições de estresse, transporte, bioenergética, transdução de sinal, dinâmica celular, metabolismo de DNA, metabolismo de lipídios, elementos móveis, metabolismo de nitrogênio, sulfato e fosfato, metabolismo de nucleotídeos e função não determinada (ND). Estes resultados ajudam elucidar as estratégias de defesa desenvolvidas pela cana-de-açúcar para evitar os danos causados por esta praga. Neste estudo, os dados do macroarray revelaram 580 ESTs com expressão aumentada, oriundos das duas variedades. Estes resultados são importantes não somente porque este é o primeiro estudo em larga-escala da expressão gênica de uma monocotiledônea em resposta ao ataque de herbívoros, mas também porque permite a comparação dos perfis de expressão entre genótipos susceptível e tolerante de cana-de-açúcar. Este estudo abre possibilidades para a engenharia genética de plantas de cana-de-açúcar inseto-resistentes e também para o uso destes genes como marcadores moleculares em programas de melhoramento assistido. / Large-scale sequencing and the application of expressed sequence tag (EST) technology has led to the identification of hundreds of thousands of genomic sequences from various organisms. Through projects like the Sugarcane Expressed Sequence Tag (SUCEST), DNA arrays technology could be applied in monitoring gene expression. The first step of this work was to optimize the macroarray technique with bacterial colonies. Arrays were robotically constructed (Q-Bot). Bacterial cells carrying sugarcane cDNA clones were arrayed in duplicate onto nylon membrane and grown for 6 and 12 hours. As a result, we conclude that is possible to study the gene expression in large-scale using macroarray through bacterial colony that grown for 6 hours. The second part of this work was to study how different two sugarcane varieties (Saccharum sp.) are in response resistance against Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). Sugarcane is of great importance for Brazilian’s agriculture and for the general economy of many tropical developing countries. These plants are attacked by D. saccharalis, the most important insect pest of sugarcane, causing significant economic losses. As it is well known, plants have evolved complex defense strategies to protect them in opposition to attack by insects. The varieties SP80-3280 (susceptible) and SP81-3250 (tolerant) were exposed to D. saccharalis. Plants materials from plants with the borer and control plants (without the borer) were collected at 0.5, 6, 12 and 24 hours time points. The analysis revealed genes differentially expressed in response to sugarcane borer in both varieties. We analyzed the timing, dynamics, and regulation of the expression of 3,840 SUCEST clones, which were grown on a nylon membrane for 6 h. These ESTs was grouped into 16 broad categories: amino-acid metabolism, plant grow and development, protein metabolism, RNA metabolism, secondary metabolism, stress response, transport, bioenergetics, signal transduction, cellular dynamics, DNA metabolism, lipid, fatty-acid metabolism, mobile genetic elements, nitrogen, sulphur and phosphate metabolism, nucleotide metabolism, and the group matched to unable to classify, which no indication of the function of the gene product are known. These results help to elucidate the defense strategies developed by sugarcane in order to prevent against insect damage. In this study, macroarray analyses revealed 580 ESTs with increased expression, from both varieties. These results are important not only because this is the first large-scale gene expression study of a monocot in response to insect attack, but also because it allows the comparison of the gene expression pattern between susceptible and tolerant genotypes. This study opens possibilities for genetically-engineering of insect-resistant sugarcane and for using these genes as molecular markers in conventional breeding programs.

El presente documento detalla la variación de las condiciones de trabajo que se obtiene al modificar la geometría de las vías de agua de las brocas de perforación diamantinas, las cuales son utilizadas como herramientas de corte durante los procesos de perforación. En la primera etapa de la investigación, el análisis de la problemática se realiza mediante simulaciones numéricas, siendo el alcance la comparación de las características fluido-dinámicas del flujo de enfriamiento tanto de las brocas con vías de agua estándar (radiales), como de las brocas con las vías de agua modificada (con un ángulo de inclinación). Posteriormente, con el objetivo de probar el desempeño de las brocas y el desgaste que se presenta en cada geometría, se realizaron ensayos experimentales (ensayos de perforación) en las instalaciones de la empresa Boyles Bros Diamantina. En esta etapa, es importante mencionar que la empresa dispuso de una máquina de perforación y de un área de sus instalaciones para el desarrollo de las pruebas experimentales. Finalmente, según los resultados obtenidos, se logra verificar que la modificación de la geometría de vías de agua influye en el desempeño de la broca de perforación de manera positiva. En el caso de la simulación numérica se observa un desarrollo del fluido más eficiente, con vectores de velocidad de mayor magnitud y con zonas de intensidad de turbulencia más uniformes, lo cual se traduce en una mejor capacidad de enfriamiento de la broca de perforación. En cuanto a los resultados de los ensayos experimentales, se observó una reducción aproximada del desgaste de la corona de 54 % durante los primeros 25 metros de perforación, así como un menor desgaste del casquillo de acero producto de una mejor evacuación de detritos (conglomerado de partículas rocosas y partículas de la matriz de la broca). Estos resultados demuestran que el diseño propuesto de vías de agua inclinadas es una alternativa viable con grandes beneficios, pues proporciona una mayor eficiencia en la capacidad de enfriamiento, y reduce tanto el calentamiento de la broca como la ductilidad de la matriz metálica, lo que en consecuencia permite disminuir las posibilidades de desgaste prematuro de la matriz y del casquillo de acero, lográndose mayores metrajes de perforación.

Wolbachia é uma -Proteobacteria transmitida transovarianamente, comum a diversas espécies de insetos. Este simbionte é conhecido pela habilidade em explorar os sistemas reprodutivos de seus hospedeiros, induzindo alterações no modo de reprodução dos mesmos, como a indução de incompatibilidade citoplasmática, telitoquia, feminização e morte de machos, favorecendo, assim, sua própria disseminação na população hospedeira. Em Hymenoptera e outros insetos haplodiplóides, machos haplóides são produzidos a partir de ovos não-fecundados; porém, quando infectados por linhagem de Wolbachia indutora de telitoquia, produzem apenas fêmeas. Os parasitoides de ovos do gênero Trichogramma são muito utilizados no controle biológico aplicado e são comumente associados a Wolbachia. No Brasil, Trichogramma galloi Zucchi, 1988 (Hymenoptera: Trichogrammatidae) se destaca como o principal parasitoide de ovos de Diatraea saccharalis (Fabr., 1794) (Lepidoptera: Crambidae), sendo inúmeras as iniciativas para a sua utilização em programas de controle biológico aplicado desta praga. Dada a importância destes inimigos naturais no combate aos insetos-praga e aos efeitos na reprodução e aptidão biológica induzidos pela associação com Wolbachia, este estudo investigou a interação Wolbachia T. galloi (Hymenoptera: Trichogrammatidae) que, até o momento, era desconhecida. A ocorrência de Wolbachia associada a T. galloi foi avaliada em amostragens de duas populações naturais deste inimigo natural, Iracemápolis e Lençóis Paulista. Posturas coletadas de ambas populações indicaram a ocorrência de 15% e 33% de fêmeas infectadas por Wolbachia, respectivamente, em Iracemápolis e Lençóis Paulista. A emergência de machos em ambas populações indica para o fato de que a infecção não estava fixada na população. Isolinhagens irmãs de T. galloi da população de Lençóis Paulista, contendo (W+) ou não (W-) Wolbachia, foram estabelecidas em laboratório após tratamento com antibiótico para se verificar a relação existente nesta associação. A relação de simbiose estabelecida foi verificada após avaliação de inúmeros parâmetros biológicos e da resistência das isolinhagens ao estresse térmico. A análise comparativa indicou que a eliminação de Wolbachia influenciou a longevidade de adultos e o número de parasitoides depositados por ovo do hospedeiro, mas não foi observado efeito na fecundidade ou razão sexual. Fêmeas W+ e fêmeas W- reduziram a longevidade com o aumento da exposição ao choque térmico, mas, fêmeas W+ foram menos longevas do que W-. A fecundidade também foi afetada pela exposição prolongada (6 h), independente da infecção. / Wolbachia is a common a-proteobacterium in insects, wich is transmitted transovarially. This symbiont is known for its ability to explore the reproductive system of their hosts through severa 1 alterations that lead to cytoplasmic incompatibility, thelytoky, feminization and death of males, to favour its own spread in the host population. In Hymenoptera and other haplodiploid insects, males are produced ITom non- fertilized eggs, but when infected by a strain of Wolbachia that induces thelytoky, only females will be produced. Trichograrnrna are eggs parasitoids that are widely used in augmentative biological control and are commonly associated with Wolbachia. In Brazil, Trichograrnrna galloi Zucchi, 1988 (Hymenoptera: Trichogrammatidae) stands out as the main parasitoid of eggs of Diatraea saccharalis (Fabr., 1794) (Lepidoptera: Crambidae), and a number of initiatives for their use in applied biological control programs of this pest. The importance of T galloi as a natural enemy of D. saccharalis and the alterations Wolbachia may induce on the reproduction and fitness of their hosts, require for studies on the association Wolbachia - T galloi. The association of Wolbachia with T galloi was evaluated in two samples of natural populations of D. saccharalis, one ITom Iracemápolis and another ITom Lençóis Paulista. Egg masses collected ITom both populations indicated the occurrence of 15% and 33% oi females infected by Wolbachia, respectively, ITom Iracemápolis and Lençóis Paulista. However, the emergence of males ITom both populations indicated the infection was not fixed. Wolbachia-infected (W) or Wolbachia-cured (W) sister lines of T galloi were produced ITom specimens ITom the population of Lençóis Paulista to carry further on this association. Comparative biological studies and the sensitivity to short-term heat stress between W and W. sister lines was assessed to check for the effects of Wolbachia on T galloi. Biological comparative analysis indicated that the elimination of Wolbachia enhanced adult longevity and the number of parasitoids developing per host egg, but no effect on life time fecundity or sex ratio was observed. W and W. females had a decreased longevity as the exposure to the heat shock increased, but W females lived much shorter than the W. ones. Females fecundity was also affected by the prolonged (6 h) exposure to a high temperature, regardless their infection status

Os inibidores inibidores de serino proteinases do tipo Bowman-Birk (BBI) possuem dois sítios ativos e são encontrados em plantas das famílias Fabaceae e Poaceae. Neste trabalho foi apresentada a estrutura primária e o padrão de expressão de 14 seqüências expressas (EST, expressed sequence tags) de BBI putativos encontradas no banco de dados do "Projeto Transcriptoma da Cana-de-açúcar" (SUCEST). Estas quatorze seqüências foram utilizadas em conjunto com outras 87 seqüências de BBI previamente descritas e depositadas no banco de dados "GenBank" para a construção de árvores filogenéticas da família BBI. A análise filogenética mostrou que os BBI de monocotiledôneas e dicotiledôneas podem ser claramente separados em diferentes grupos e a topologia das árvores filogenéticas sugere um padrão evolutivo diferente das famílias de BBI em plantas. Os inibidores de dicotiledôneas são bem conservados e acumularam diferenças sutis durante a evolução. Em contrapartida, os inibidores de monocotiledôneas são altamente variáveis, indicando a ocorrência de um processo evolutivo interessante, baseado em eventos de duplicação intragênica e mutação. Dois inibidores de serino proteinases, um de tripsina e outro de quimotripsina, derivados do gene que codifica o inibidor Bowman-Birk de soja, foram expressos na superfície do fago filamentoso M13 e utilizados para a construção de bibliotecas de variantes. Para tal foram feitas mutações em quatro aminoácidos do sítio ativo destes inibidores e duas bibliotecas de expressão na superfície de fagos filamentosos foram construídas. Posteriormente, estas bibliotecas foram utilizadas para a seleção de variantes que melhor interagiam com a tripsina bovina e de Diatraea saccharalis e com as enzimas digestivas presentes no extrato intestinal desta praga. Os variantes selecionados foram seqüenciados, analisados e caracterizados. Os resultados mostraram que a técnica de expressão na superfície de fagos filamentosos foi eficiente para selecionar novos inibidores. Além disto, com as mutações realizadas, foi possível transformar a alça de inibição de quimotripsina em uma alça de inibição de tripsina. / The Bowman-Birk inhibitors (BBIs) are double headed inhibitors of serine proteinase found in plants from Fabaceae and Poaceae families. We describe the primary structure and the gene expression profile of 14 putative BBIs from the sugarcane expressed sequence tag (SUCEST) database and show how we used these newly discovered sequences together with 87 previously described BBI sequences from the "GenBank" database to construct phylogenetic trees for the BBI family. Phylogenetic analysis revealed that BBI-type inhibitors from monocotyledonous and dicotyledonous plants could be clearly separated into different groups, while the overall topology of the BBI tree suggests a different pattern of evolution for BBI families in flowering plants. We also found that BBI proteinase inhibitors from dicotyledonous plants were well conserved, accumulating only slight differences during their evolution. In addition, we found that BBIs from monocotyledonous plants were highly variable, indicating an interesting process of evolution based on internal gene duplications and mutation events. Two serine-type proteinase inhibitors, a trypsin and a chymotrypsin, both derived from the soybean Bowman-Birk inhibitor, were expressed on the surface of a filamentous phage. Site mutations were made in four positions of the reactive sites of these inhibitors and two phage-display libraries were constructed. Later, these libraries were used to select better ligands to the bovine and Diatraea saccharalis trypsin and to the midgut enzymes of this insect pest. The selected variants were sequenced, analyzed and characterized. The results showed that the phage-display technique is efficient to select new proteinase inhibitors. Furthermore, it was possible to modify the chymotrypsin loop into a trypsin loop using the library constructed by the insertion of a degenerated primer.

A partir de 2017 ficará proibida a queima nos canaviais, tornando obrigatória a colheita sem queima prévia. Esta nova tendência de colheita irá resultar em mudanças nas relações tróficas presentes no canavial. A broca da cana (Diatraea saccharalis) é considerada uma pragachave da cultura e é responsável por uma perda significante de produtividade. O controle biológico da broca é feito através da liberação do parasitóide Cotesia flavipes. Este método de controle aplicado está sujeito a interrupções que comprometem seu sucesso. A broca tem nos dermápteros um agente predador, de ocorrência natural nos canaviais. Muito pouco se sabe sobre estes insetos. Informações sobre os aspectos bioecológicos destes predadores são fundamentais para a sua avaliação como potenciais agentes alternativos de controle da broca da cana, fortalecendo os programas de controle biológico adotados nos canaviais atualmente. Esta pesquisa tem como objetivo avaliar alguns aspectos biológicos e analisar aspectos comportamentais de dermápteros presentes em canaviais da região de Piracicaba. Foram identificadas quatro espécies de tesourinhas: Euborellia janeirensis, Euborellia peregrina, Cosmiella brasiliensis e Doru luteipes. Devido ao baixo número de fêmeas de C. brasiliensis as variáveis: número de posturas, ovos por postura, período embrionário, período de cuidado maternal e porcentagem de eclosão desta espécie, não integraram a análise estatística. Todas as espécies apresentaram dimorfismo sexual nos cercos e cuidado maternal com ovos e ninfas. Em relação a duração do período de cuidado maternal, E. peregrina e E. janeirensis obtiveram os maiores valores, 24,83 e 24,81 respectivamente. D. luteipes diferiu estatisticamente exibindo cuidado maternal por 14,6 dias. Não houve diferença estatística entre as espécies E. janeirensis e E. peregrina quanto o período embrionário (12,06 e 11,83 dias), porém D. luteipes diferiu estatisticamente apresentando duração de apenas 7 dias. Não houve diferença estatística entre as três espécies no que diz respeito a porcentagem de eclosão, sendo que o maior valor foi registrado para E. janeirensis (77,4%), seguida de D. luteipes (76,48%) e E. peregrina (69,65%). Quando comparadas as médias do número de ovos por postura, as três espécies diferem estatisticamente sendo o maior valor registrado em E. janeirensis (46,33) seguido por E. peregrina (34,16) e D. luteipes (27,60). A duração das fases ninfal e adulta foram analisadas para as quatro espécies. A maior duração de fase ninfal foi registrada em E. janeirensis (51,95 dias) e em E. peregrina (50,70 dias). C. brasiliensis diferiu estatisticamente das duas espécies do gênero Euborellia, apresentando duração de 33,65 dias. A menor duração foi registrada em D. luteipes (24,10 dias), diferindo estatisticamente de todas as espécies. A duração da fase adulta foi maior em D. luteipes (219,65 dias), E. peregrina (212,5 dias) e E. janeirensis (210,30 dias). Apenas C. brasiliensis diferiu estatisticamente (183,50 dias). As espécies do gênero Euborellia se mostraram mais agressivas durante o período de cuidado maternal. Estudos sobre as diferentes espécies de dermápteros encontradas em canaviais são fundamentais para que este grupo de insetos nativos possa ser utilizado em programas de controle biológico, fortalecendo o manejo integrado de pragas em canaviais. / From 2017 on, the burning of sugarcane crops will be prohibited, and the green harvested cane model will be adopted throughout the country. This new trend will certainly change most of the trophic relations occurring in the system. The sugarcane borer (Diatraea saccharalis), a key pest, is responsible for a significant yield loss. Biological control programs based on the parasitoid Cotesia flavipes, adopted in most Brazilian sugarcane crops are subject to interruptions that compromise its success. Thus, to avoid the use of chemical pesticides, new biological alternatives to control the pest must be investigated. Dermaptera is a control agent of the sugarcane borer that occurs naturally. This study aims at characterizing behavioural traits and biological aspects of dermapterans occurring in sugarcane systems. Four species of Dermaptera were identified: Euborellia janeirensis, Euborellia peregrina, Cosmiella brasiliensis and Doru luteipes. Due to the low number of C.brasiliensis females collected, only the duration of their immature and adult stages were incorporated to the statistic analysis. All species presented sexual dimorphism and exhibited maternal care with eggs and nymphs. The maternal care duration was longer for E. peregrina (24.83 days) and E. janeirensis (24.81 days). D. luteipes differed statistically with 14.6 days. E. janeirensis and E. peregrina had similar values for incubation period (12.06 e 11.83 days respectively) but D. luteipes differed statistically with an average duration of 7 days. No statistical difference regarding the hatch percentage was found among the three species, E. janeirensis had the highest rate (77.4%), followed by D. luteipes (76.48%) and E. peregrina (69.65%). The three species differed statistically when comparing the average number of eggs laid, E. janeirensis reached the highest average (46.33). E. peregrina laid an average of 34.16 eggs and D. luteipes 27.60 eggs. E. janeirensis and E. peregrina had similar immature stage durations (51.95 and 50.70 days). C. brasiliensis differed statistically from the former species with 33.65 days. The shortest immature stage was recorded for D. luteipes (24.10 days), differing from all the others. The adult stage had a similar average duration for D. luteipes (219.65 days), E. peregrina (212.5 days) and E. janeirensis (210.3 days). C. brasiliensis differed from all the others with 183.5 days. Species from the Euborellia genus were more aggressive during the maternal care phase when compared to D. luteipes and C. brasiliensis. Studies on the different species of dermapterans occurring naturally in green sugarcane systems, are a clear need to evaluate the possibility of using these insects as alternative predators in biological control programs adopted in brazilian sugarcane yields, reinforcing integrated pest management programs in the country.

A broca da cana-de-açúcar, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) é naturalmente infectada por diversos patógenos, sendo os mais importantes Metarhizium anisopliae (Metsch.) (Ascomycota: Clavicipitaceae), Beauveria bassiana (Bals.) (Ascomycota: Cordycipitaceae) e vírus da granulose. Esses microrganismos podem co-infectar um mesmo indivíduo em condições de campo, mas os resultados das interações desses patógenos não são conhecidos. O presente trabalho objetivou determinar a virulência desses patógenos aplicados de forma isolada e em infecções mistas na fase larval de D. saccharalis em condições de laboratório sobre dieta artificial e em plantas de milho. A maioria das combinações resultou em efeito aditivo na mortalidade dos insetos (M. anisopliae + B. bassiana, M. anisopliae + DsGV e M. anisopliae + B. bassiana + DsGV), entretanto ficou evidenciado antagonismo entre B. bassiana e o granulovírus. Todos os cadáveres oriundos das aplicações associadas apresentaram sintomas de apenas um dos patógenos envolvidos na infecção. A produção de conídios de uma espécie de fungo nos cadáveres submetidos à co-infecção foi semelhante à produção de conídios da mesma espécie na infecção isolada. Na infecção mista, os dois fungos se desenvolveram na hemolinfa do hospedeiro, entretanto em um estágio tardio do processo infectivo ocorreu a exclusão de um dos patógenos. A infecção por B. bassiana diminuiu drasticamente a densidade de hemócitos circulantes na hemolinfa das lagartas, efeito não observado para M. anisopliae. Duas populações de laboratório de D. saccharalis, uma oriunda de Piracicaba-SP e outra de Araras-SP, foram testadas quanto à suscetibilidade aos fungos M. anisopliae e B. bassiana. A população de insetos de Piracicaba foi menos suscetível em 2009 do que a mesma população em 2008 e também em relação à população de Araras. Dessa forma, foi realizado um bioensaio comparando a suscetibilidade de insetos das duas populações e da progênie (F1) dos cruzamentos diretos entre elas, criadas nas mesmas condições bióticas e abióticas, para determinar se a suscetibilidade diferencial estaria relacionada a fatores genéticos. Não foram observadas diferenças significativas na suscetibilidade das duas populações e dos cruzamentos aos fungos. A suscetibilidade diferencial observada nos dois primeiros bioensaios provavelmente esteja relacionada às variações no sistema de criação, em componentes nutricionais e antimicrobianos da dieta e não a variações entre as populações dos hospedeiros. / The sugarcane borer, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) is naturally infected by various pathogens, the most important are Metarhizium anisopliae (Metsch) (Ascomycota: Clavicipitaceae), Beauveria bassiana (Bals.) (Ascomycota: Cordycipitaceae) and granulovirus. These microorganisms may coinfect the same host under field conditions, but the result of these pathogens interactions is not known. This study investigated the virulence of these pathogens applied separately and together on larvae of D. saccharalis in the laboratory on artificial diet and on corn plants. Most combinations resulted in additive effect on insect mortalities (M. anisopliae + B. bassiana, M. anisopliae + DsGV and M. anisopliae + B. bassiana + DsGV), however it became apparent antagonism between B. bassiana and the granulovírus. In all cadavers resulted from mixed applications, only one pathogen sporulated or externalized their symptoms in the host. Production of conidia of one fungal species on the cadavers subjected to co-infection was similar to the production of conidia of the same species in a single infection. In mixed infection, the two fungi have developed in the hemolymph of the host, and the exclusion of one pathogen occurred at a later stage of the infective process. Infection with B. bassiana has drastically reduced the density of circulating hemocytes in the hemolymph of the larvae, which was not observed for M. anisopliae. Two laboratory populations of D. saccharalis, one coming from Piracicaba-SP and other from Araras-SP, were tested for susceptibility to M. anisopliae and B. bassiana. The insect population from Piracicaba was less susceptible to application of fungi in 2009 compared to the same population in 2008 and compared to the Araras population. Therefore, a bioassay was performed comparing the susceptibility of the two populations and the progeny (F1) of direct crossings between them, using insects reared in the same conditions. This assay was performed to determine if the differential susceptibility would be related to genetic factors. No significant differences were observed in the susceptibility of insect populations and crossings to both fungi. The differential susceptibility observed in the first two assays was probably related to variations in the rearing system and nutritional and antimicrobial components in the diet and not due to variations among host populations.

A broca gigante, Telchin licus, conhecida no Brasil desde 1927, na região Nordeste do Brasil, é considerada uma das principais pragas da cana-de-açúcar. Em 2007 foi registrada pela primeira vez no Estado de São Paulo, onde se concentram 60% das lavouras de cana-de-açúcar do país. Considerando-se que até o momento não existem métodos adequados para seu manejo e controle, o objetivo desta pesquisa foi caracterizar o comportamento reprodutivo de T. licus como base para o seu controle dentro de um contexto de Manejo Integrado das Pragas da cana-deaçúcar. Estes estudos servirão de suporte para o isolamento e identificação do feromônio sexual de T. licus, o qual poderá ser utilizado para o manejo e/ou controle desta praga. A presente pesquisa foi desenvolvida no Departamento de Entomologia e Acarologia da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ-USP), em Piracicaba SP, e em um canavial localizado em Iracemápolis SP. A partir de uma criação de T. licus em dieta artificial, verificou-se que há sincronia na emergência de machos e fêmeas de T. licus e que as fêmeas desta espécie colocam a maior parte dos ovos nas horas mais quentes do dia, entre 12:00 e 16:00h. Para o estudo do comportamento de corte desta espécie foi necessário um telado, pois verificou-se que os insetos necessitam de espaço para movimentação, a qual, inicia-se em torno das 11h da manhã e perdura até 15h; os acasalamentos ocorrem com fêmeas novas, entre 13:00 e 15:00h e duram em média 2h; fora deste intervalo de tempo os insetos permanecem em repouso. Para a verificação da existência ou não de um feromônio sexual mediando o acasalamento da espécie foi feito um ensaio no campo, no qual foi instalada uma estrutura que simula o voo da fêmea no interior da plantação de cana-de-açúcar para verificação da atração de machos selvagens. Os tratamentos foram: (a) fêmea de T. licus viva; (b) inseto estilizado com abdome feito com massa de moldar e asas verdadeiras de fêmeas de T. licus coladas com cola quente e (c) inseto estilizado com septo de borracha, impregnado com extrato de 30 glândulas de fêmeas de T. licus, acoplado no final do abdome. O número de insetos selvagens que se aproximaram e que perseguiram os diferentes tratamentos não diferiu entre si pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade. Contudo, houve diferença marginalmente significante (P < 0,0772) no número médio de vezes em que o mesmo macho perseguiu a fêmea viva (5,1) e o inseto estilizado (0,1). Este resultado indica que somente a atração visual não foi suficiente para estimular os machos selvagens a manterem a perseguição ao inseto estilizado. Considerandose que o número médio de vezes que os machos perseguiram o inseto estilizado com o septo de borracha (1,9) não diferiu estatisticamente do tratamento fêmea viva (5,1), sugere-se que a espécie tenha um feromônio mediando o acasalamento; entretanto, outros fatores além da comunicação química estão envolvidos neste comportamento, como a atração visual, a movimentação do inseto e a presença da luz solar. / The giant sugarcane borer, Telchin licus (Drury) known in Brazil since 1927, in the Brazilian Northeast, is considered one of the main sugarcane pests. In July 2007, this pest was recorded for the first time in the state of São Paulo, where 60% of the Brazilian sugarcane culture is concentrated. Considering that to date there are no appropriate methods for its management and control, the goal of this research was to characterize T. licus reproductive behavior as a basis to control it in a context of integrated pest management of sugarcane. These studies will support the isolation and identification of the sexual pheromone of T. licus, which may be used for the management and/or control of this pest. This research was developed at the Entomology and Acarology Department of the Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ-USP) in Piracicaba, Brazil, and a sugarcane farm located in Iracemápolis, Brazil. Rearing T. licus on an artificial diet, we found that there is synchrony in the emergence of T.licus males and females and that the females of this species oviposit most of the eggs in the hottest hours of the day, between midday and 4:00 p.m. To study the courtship of this species a greenhouse was necessary because the insects need space to move. The activity of adults begins around 11:00 a.m. and ends at 3:00 p.m. Matings occur with young females between 1:00 p.m. and 3:00 p.m. with an average duration of 2 hours. Outside this time interval the insects remain at rest. To verify the existence of a sex pheromone mediating T. licus mating a field test was made where a structure that simulates the flight of the female was installed inside the sugarcane field to check the attraction of wild males. The treatments were: (a) a live T. licus female, (b) a stylized insect with abdomen made with mass and wings taken from T. licus females and glued with hot glue and (c) a stylized insect with rubber septum impregnated with the extract of 30 glands of T. licus females attached to the end of the abdomen. The number of wild insects approaching and chasing these treatments did not differ by the Duncan test at 5% probability, however there was a marginally significant difference (P < 0.0772) on the average number of times that the same insect chased the live female (5.1) and the stylized insect (0.1). This results indicates that visual attraction alone was not enough to stimulate free males to maintain the chase to the stylized insect. Considering that the average number of times the free males chased the stylized insect with rubber septum (1.9) did not differ statistically from the live female treatment (5.1) we suggest that the species has a pheromone mediating mating. However, factors other than chemical communication are involved in this behavior, such as visual cues, the movement of the insect and the presence of sunlight.