Fissura de lábio com ou sem fissura de palato não-sindrômica (FL/P NS) é uma malformação craniofacial frequente, com modelo de herança multifatorial, onde fatores de risco genéticos e ambientais atuam na manifestação da doença. Variações nos níveis de expressão gênica têm sido apontadas como um importante mecanismo de susceptibilidade a doenças complexas, e variantes no DNA que regulam esses níveis de expressão (eQTL) têm sido combinadas a estudos de associação para auxiliar no entendimento da etiologia de algumas doenças. No presente trabalho, integramos eQTLs e estudo de associação para 1) verificar se variantes já associadas com FL/P NS possuem um papel regulatório em células-tronco de músculo orbicular do lábio (OOMMSC, um tecido afetado em FL/P NS), e 2) verificar se eQTLs mapeados em OOMMSC teriam associação com a mesma. Para o primeiro objetivo, verificamos a correlação entre os genótipos das variantes rs642961 e rs590223 e os níveis de expressão de IRF6, e também entre rs987525 e os níveis de expressão de MYC. Não encontramos correlação para nenhuma das três variantes testadas. É possível que essas variantes possuam um papel funcional em algum momento específico da embriogênese, ou mesmo que não tenhamos detectado essa correlação devido ao número amostral analisado (N=46). Para o segundo objetivo, realizamos um estudo de associação do tipo caso-controle dos eQTLs rs5011163, rs1505443, rs4793213, rs4793229 e rs1242500. Não encontramos associação entre nenhuma das cinco variantes e FL/P NS. Uma possível explicação para a associação negativa seria a significância marginal dessas variantes como eQTLs em OOMMSC. Além disso, estudos com baixo poder, como o mapeamento de eQTLs em OOMMSC realizado em outro projeto pelo nosso grupo, geralmente detectam os eQTLs de maior efeito, sendo esses frequentemente compartilhados entre tecidos, e, assim, podem não ter relevância para a doença em si. Outros eQTLs de OOMMSC, selecionados por critérios diferentes do presente estudo, estão sendo testados para associação com FL/P NS, o que nos permitirá avaliar a relevância dessa abordagem para detectar variantes de susceptibilidade a FL/P NS / Nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate (NSCL/P) is a frequent craniofacial malformation, with a multifactorial model of inheritance, in which genetic and environmental risk factors act in disease manifestation. Variation of gene expression has been pointed as an important susceptibility mechanism to complex diseases, and DNA variants that regulate expression levels (eQTLs) have been combined with association studies to help elucidate the etiology of some diseases. In the present work, we integrate eQTL and association studies to 1) verify if variants associated with NSCL/P have a regulatory role in orbicularis oris muscle mesenchymal stem cells (OOMMSC, a tissue affected by NSCL/P); and 2) verify if eQTLs mapped in OOMMSC are associated with the disease. For the first goal, we verified the correlation of the rs642961 and rs590223 genotype variants with IRF6 expression levels, and also between the rs987525 genotype and MYC expression levels. We did not find correlation for any of the three variants tested. Possibly, these variants have a functional role in specific moments of embryogenesis, or sample size (N=46) was insufficient to detect correlation. For the second goal, we did a case-control association study for eQTLs rs5011163, rs1505443, rs4793213, rs4793229 and rs1242500. We did not find association between these variants and NSCL/P. The negative association could be explained by the marginal significance of these variants as eQTLs in OOMMSC. Besides, low-power studies, as the OOMMSC eQTL mapping performed in another project by our group, usually detect eQTLs of larger effect, which are frequently shared among tissues; therefore, they may not be relevant for the disease itself. Other eQTLs, selected under different criteria, are currently being tested for association with NSCL/P, which will enable us to evaluate the relevance of this approach to detect susceptibility variants for NSCL/P

O estudo visou elucidar o desenvolvimento embrionário e fetal de pacas (Agouti paca) e demarcação dos sítios germinativos nos embriões em diferentes estágios. Foram utilizados sete espécimes de Agouti paca, sendo dois embriões e três fetos doados do pacário mantido pela UNESP - Jaboticabal e, dois doados do acervo da FMVZ-USP. Os fetos 1 e 2 apresentaram imaturidade facial acentuada, olhos recobertos por uma lente proeminente e lóbulos das orelhas; os fetos 3 e 4, mostravam-se com orelhas bem desenvolvidas, membros torácicos e pélvicos em grau equalitário de desenvolvimento, como vibrissas ao redor das bordas nasais e olhos também protegidos; no feto 5, haviam pêlos distribuídos por todo o corpo, membros torácicos e pélvicos com garras, vibrissas na face, olhos proeminentes e orelhas bem desenvolvidas. O embrião 1, apresentou a vesícula óptica com pigmentação da retina, o quarto ventrículo encefálico e curvatura cervical acentuada e broto dos membros em desenvolvimento; o embrião 2, possuiu divisão dos arcos branquiais e neuróporo cranial aberto; presença da área cardíaca e fígado; vesícula óptica sem pigmentação da retina, abertura do tubo neural na região do quarto ventrículo encefálico, rombencéfalo e mesencéfalo em desenvolvimento. Na microscopia de luz, visualizamos a medula espinhal, abertura do 4º ventrículo encefálico, presença das vesículas encefálicas (prosencéfalo, mesencéfalo e rombencéfalo), coluna vertebral, hipófise, cavidades oral e nasal, olho, átrio e ventrículo cardíacos, pulmão e diafragma, além das cristas metanéfrica e mesonéfrica, fígado, intestino e pedículo umbilical. Nas reações de imunohistoquímicas para OCT-4 não houve marcação expressiva em órgãos tais como pulmão, intestino e somitos, o coração apresentou uma leve positividade à reação, enquanto que nas cristas meso e metanéfrica e fígado obtiveram uma marcação expressiva, sendo mais acentuada no último. Nos testes com vimentina todos os órgãos mostraram-se imunopositivos em diferentes áreas; e em se tratando da reação a testes com actina apenas a região de somitos não obteve marcação positiva. Concluímos que o período embrionário/fetal da paca não pode ser comparado com o modelo clássico de roedor; sua embriogênese pode ser comparada à de ratos, Guinea pig, coelhos e humanos. A imunolocalização positiva de OCT-4 apresenta diferenças de acordo com a idade gestacional, devido às mudanças embriológicas dos tecidos. A imunolocalização positiva de OCT-4 apresenta diferenças de acordo com a idade gestacional, devido às mudanças embriológicas dos tecidos. A vimentina como marcador de mesênquima se expressou positivamente em todos os órgãos do embrião de paca. A actina como imunomarcador de músculo liso foi expressiva nas áreas contendo musculatura. / The study aimed elucidates the development of embryonic and fetal of pacas (Agouti paca) and demarcation of the germ sites in embryos at different stages. Seven specimens were used; two embryos and three fetuses from UNESP- Jaboticabal and other two fetuses were from FMVZ-USP collection. The fetuses 1 and 2 showed immaturity facial sharp, eyes covered by a lens and prominent lobes of the ears, the fetuses 3 and 4, showed up with well-developed ears, members thoracic and pelvic in equal level of development, vibrisses around the nasal edges and eye also protected;. The fetus 5 had hairs distributed throughout the body, members thoracic and pelvic with claws, vibrisses on the face, prominent eyes and ears well developed. The embryo 1, presented the optic vesicle with pigmentation of the retina, the fourth encephalic ventricle and cervical curvature and button members in development. The embryo 2, had split the branchial arches and open neuropore cranial; heart and liver were identified, optical vesicle without pigmentation of the retina, the neural tube was opening in the region of the fourth encephalic ventricle, rombencephalon and mesencephalon were in development. Light microscopy, shows the spinal cord, 4 th encephalic ventricle, resence of encephalic vesicles (prosencephalon, mesencephalon and rombencephalon), vertebral column, pituitary gland, oral and nasal cavities, eye, atrium and ventricle heart, lung and diaphragm, as well the metanephron and mesonephron, liver, intestine and mbilical pedicle. The immunohistochemical reactions for OCT-4 were non expressive in organs such as lung, intestine and somites; heart presented a discrete positive reaction, while kidneys and liver obtained an expressive expression, more pronounced in the last one. Vimentina\'s tests showed that all organs stained in different areas, and the reaction whit the actin was negative just in the region of somites. We conclude that the period embryonic/fetal of paca can not be compared with the classical model of rodents; its embryogenesis can be compared with the rats, Guinea pig, rabbits and humans ones. The positive immunolocalization of OCT-4 presents differences according to the gestational age, due to changes embryological tissue. The vimentine as a mesenchyme marker is expressed positively in all organs of the embryo of paca. The actin as immunomarker of smooth muscle was expressive in areas containing muscles.

O objetivo desse estudo foi investigar a participação de integrina &alpha;1&beta;1 e microRNAs (miRs) no potencial osteogênico de superfícies de titânio (Ti) com nanotopografia. Discos de Ti previamente polidos foram tratados quimicamente com H2SO4/H2O2 para obtenção de nanotopografia, que foi observada por microscopia eletrônica de varredura. Para o estudo da participação da integrina &alpha;1&beta;1, células-tronco mesenquimais (CTMs) de ratos foram cultivadas em condições osteogênicas e não osteogênicas sobre superfícies de Ti com nanotopografia e sem tratamento químico (controle). O resultados mostraram que a nanotopografia de Ti aumentou a proliferação celular, a atividade de fosfatase alcalina (Alp) e regulou positivamente a expressão gênica de marcadores da diferenciação osteoblástica em CTMs cultivadas tanto em condições osteogênicas quanto em condições não osteogênicas. Além disso, uma maior expressão gênica para as integrinas &alpha;1 e &beta;1 foi observada em culturas crescidas sobre nanotopografia em condições não osteogênicas em relação ao Ti controle. O uso de obtustatina, um inibidor de integrina &alpha;1&beta;1, reduziu os efeitos da nanotopografia sobre os marcadores osteoblásticos, indicando a participação da via de sinalização dessa integrina nos efeitos da nanotopografia sobre CTMs. Para investigar a participação de miRs no efeito osseoindutor da nanotopografia de Ti, foram utilizadas CTMs humanas e células préosteoblásticas de camundongos da linhagem MC3T3-E1. A análise em larga escala da expressão de miRs revelou que 60 miRs foram regulados positivamente (no mínimo, 2x maior), enquanto 58 miRs foram regulados negativamente (no mínimo, 2x menor) em CTMs crescidas sobre a nanotopografia. Três desses miRs, miR-4448, -4708 e -4773, cuja expressão foi significativamente reduzida pela nanotopografia de Ti (no mínimo, 5x menor), afetaram a diferenciação osteoblástica de CTMs. Esses miRs atuam diretamente sobre SMAD1 e SMAD4, proteínas transdutoras da sinalização da proteína óssea morfogenética 2 (Bmp-2), conhecida por sua capacidade osseoindutora. Além disso, verificou-se que a sobreexpressão de miR-4448, -4708 e -4773 em células pré-osteoblásticas MC3T3-E1 inibiu a expressão gênica e proteica de SMAD1 e SMAD4 e, consequentemente, a expressão gênica de marcadores ósseos. Esses dados sugerem a influência do circuito miR-SMAD-Bmp-2 sobre o efeito osseoindutor da nanotopografia. Conjuntamente, os achados do presente estudo mostraram que o efeito da nanotopografia de Ti sobre a diferenciação osteoblástica resulta de um mecanismo regulatório complexo, do qual fazem parte as vias de sinalização da integrina &alpha;1&beta;1 e da Bmp-2, com a participação de miRs. Esses resultados podem representar um avanço para o desenvolvimento de novas modificações de superfície, com o objetivo de acelerar e/ou melhorar o processo de osseointegração. / The aim of this study was to investigate the role of the &alpha;1&beta;1 integrin and microRNAs (miRs) on the osteogenic potential of titanium (Ti) with nanotopography. Polished Ti discs were chemically treated with H2SO4/H2O2 to generate nanotopography, which was observed under scanning electron microscopy. For the study related to the &alpha;1&beta;1 integrin, rat mesenchymal stem cells (MSCs) were cultured under osteogenic and non-osteogenic conditions on Ti with nanotopography and non-treated Ti discs (control). Nanotopography increased cell proliferation and alkaline phosphatase (Alp) activity and upregulated the gene expression of bone markers in cells cultured under osteogenic and non-osteogenic conditions. Furthermore, the gene expression of &alpha;1 and &beta;1 integrins was higher in cells cultured on nanotopography under non-osteogenic conditions compared with control. Obtustatin, an inhibitor of &alpha;1&beta;1 integrin, reduced the higher gene expression of the bone markers induced by nanotopography. These results indicate that &alpha;1&beta;1 integrin signaling pathway determines the osteoinductive effect of nanotopography on MSCs. The role of miRs in the osteogenic potential of Ti with nanotopography was evaluated using human MSCs and MC3T3-E1 mouse pre-osteoblastic cells. The miR sequencing analysis revealed that 60 miRs were upregulated (> 2 fold), while 58 miRs were downregulated (< 2 fold) in MSCs grown on nanotopography. Three miRs, miR-4448, -4708 and -4773, which were significantly downregulated (< 5 fold) by nanotopography, affected the osteoblast differentiation of MSCs. These miRs directly target SMAD1 and SMAD4, both key transducers of the bone morphogenetic protein 2 (Bmp-2) osteogenic signal, which were upregulated by nanotopography. Overexpression of miR-4448 - 4708 and 4773 in MC3T3-E1 cells noticeably inhibited gene and protein expression of SMAD1 and SMAD4 and by targeting them, these miRs repressed gene expression of key bone markers. These results suggest that a miR-SMAD-Bmp-2 circuit acts in the Ti nanotopography-mediated osteoblast differentiation. Taken together, our data showed that the osteoblast differentiation induced by Ti with nanotopography is governed by a complex regulatory network involving a crosstalk between &alpha;1&beta;1 integrin and Bmp-2 signaling pathways with participation of miRs.

Made available in DSpace on 2016-03-22T17:27:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dalnei Veiga Pereira.pdf: 2083362 bytes, checksum: 9020aaf7535122f841add770d7b06a68 (MD5) Previous issue date: 2014-02-22 / Objetivo: Identificar as características clínicas dos pacientes transplantados na instituição e avaliar os resultados obtidos com a infusão de células-tronco hematopoiéticas do sangue periférico (CTHSP), a mortalidade relacionada ao transplante (MRT) e a sobrevida global (SG). Métodos: Através da revisão e avaliação retrospectiva dos prontuários dos 120 pacientes submetidos a transplante autogênico no período de dezembro de 1996 a dezembro de 2011. Resultados: Foram tratados 120 pacientes com infusões de CTHSP, sendo 78,3% adultos, com mediana de idade de 47 anos e predomínio do sexo masculino. Os diagnósticos foram 35,8% para Linfoma de Hodgkin (LH), 32,5% para Mieloma Múltiplo (MM), 16,7% para Linfoma não Hodgkin (LNH), 10,8% para outras neoplasias como Tumor de Wilms, Câncer de Mama, Neuroblastoma, Sarcoma de Ewing, Tumor de Testículo, Meduloblastoma, Macroglobulinemia, Amiloidose e Tumor de SNC e 4,2% para Leucemia Mielóide Aguda (LMA). A média do número de células nucleadas totais infundidas foi de 8,9x108/kg e a de células CD34+ foi de 4,1x106/kg. A média de tempo para recuperação de neutrófilos foi de 11,2 dias e para plaquetas de 12 dias. Foi encontrada uma correlação entre a quantidade de células CD34+ infundidas e a recuperação de neutrófilos e plaquetas. Para o grupo em geral a MRT encontrada foi de 5% e a probabilidade de SG em cinco anos de 55,1%.Conclusão:Os resultados obtidos com os transplantes autogênicos em nossa instituição são semelhantes aos descritos na literatura, sendo este procedimento uma alternativa terapêutica para pacientes com recaída de doença ou refratários ao tratamento

As células-tronco são definidas como células capazes de auto-renovação e diferenciação em células especializadas. Dentre as células-tronco adultas, as mesenquimais ocupam uma posição de destaque. São células multipotentes que podem originar células de origem mesodérmica, como osteoblastos, adipócitos e condrócitos. Além disso, vários estudos demonstraram que essas células também podem se diferenciar em células de origem extra-mesenquimal, como neurônios e hepatócitos, fenômeno este denominado plasticidade. Aspectos moleculares envolvidos com a plasticidade das células-tronco adultas, bem como durante o processo de comprometimento e diferenciação em células especializadas não estão completamente elucidados. Considera-se que as células-tronco expressam, embora em baixos níveis, uma gama diversa de genes relacionados aos diferentes destinos de diferenciação. Durante a diferenciação o repertório de genes expressos seria reduzido, acompanhado do aumento nos níveis de expressão de uma coleção menor de genes que orientariam a especialização celular. Para o presente estudo adotamos essa hipótese e elaboramos um sistema-modelo experimental no qual células-tronco mesenquimais de medula óssea humana foram induzidas in vitro à diferenciação em osteoblastos. As células-tronco mesenquimais foram obtidas de três doadores saudáveis de medula óssea e induzidas quimicamente à diferenciação em osteoblastos (meio -MEM acrescido de dexametasona, ácido ascórbico e - glicerofosfato) durante 24 h, 48 h, 7 dias e 21 dias. O RNA total foi extraído das culturas de células indiferenciadas (0h) e durante o processo de diferenciação (24 h, 48 h, 7 d e 21 d). Todo o processo de diferenciação foi monitorado com ensaios bioquímicos e por imunocitoquímica. Para avaliar a expressão gênica das célulastronco e durante o processo de diferenciação utilizamos a tecnologia dos cDNA microarrays. Os dados foram analisados com auxílio de programas de bioinformática especializados. Um banco público de dados de expressão gênica (GNF Symatlas) também foi consultado, o que nos auxiliou na interpretação dos dados. Sondas de cDNA fluorescentes (Cy3) oriundas das amostras de RNA foram hibridizadas com os cDNA microarrays (4.500 seqüências alvo). Um pool de cDNAs irrelevantes marcados com Cy5 foi usada como referência na hibridização. A expressão gênica diferencial durante a diferenciação foi analisada pelo método SAM (significance analysis of microarrays) (FDR < 5%). Os genes diferencialmente expressos foram classificados segundo sua representação tecidual de acordo com os valores de expressão obtidos do banco de dados GNF Symatlas. Além disso, foi avaliada por RT-PCR semiquantitativa, a expressão de genes relacionados à osteogênese (ALPL, osteocalcina, COL1A1, RUNX2 e osteopontina), e um marcador de adipócitos, PPARG. Observamos que as células-tronco mesenquimais no seu estado tronco expressam, em níveis similares, genes característicos das linhagens osteo e adipocítica. Entretanto, ao longo do comprometimento com a linhagem osteoblástica o número de genes modulados (reprimidos e induzidos) é crescente. Revelamos que nas fases iniciais da diferenciação osteoblástica in vitro os genes que representam células-tronco adultas foram reprimidos. Entretanto, com o avanço do comprometimento com a linhagem osteoblástica observamos que certos genes foram induzidos como, por exemplo, BMP1, SMAD7, IGFBP4, ITGA5, FN1, BGN, CDH8, GDF10 e SCARB2, todos relacionados à osteogênese. Nossos resultados são importantes para um melhor entendimento das bases genético-moleculares associadas ao potencial plástico e de diferenciação das células-tronco mesenquimais. / Stem cells (SC) are defined by their property of self-renewal and differentiation into specialized cells. The adult mesenchymal stem cells (MSC) correspond to a special type of them. MSC are multipotent and can differentiate into several cell types of mesodermal origin, including osteoblasts, adipocytes and condroblasts. Also, their capacity to differentiate into extra-mesenchymal cells, such as neurons and hepatocytes, was demonstrated and this phenomenon was termed plasticity. Nevertheless, the molecular basis of adult SC plasticity, as well during their commitment and differentiation into specialized cells isnt completely elucidated. It was hypothesized that SC express, although at low levels, many genes related to the differentiation cues that they could assume. According to this hypothesis, the repertory of genes is reduced during differentiation, at the same time that upregulating the expression of specialized genes, which characterize the future tissue. In this study, we adopted this hypothesis and to test it we used an in vitro osteogenic differentiation model-system. Mesenchymal stem cells were obtained from bone marrow of three healthy donors and induced to differentiate into osteoblasts in -MEM media supplemented with dexametasone, ascorbic acid and betaglycerol phosphate during 24 h, 48 h, 7 and 21 days. The differentiation process was monitored by biochemical and immunocytochemistry assays. The total RNA was obtained from undifferentiated (0 h) and differentiated cells. To evaluate gene expression during the differentiation, we used the cDNA microarray technology. Fluorescent Cy3 cDNA probes originated from SC RNA samples were hybridized with a cDNA microarray containing 4,500 target sequences. A pool of irrelevant cDNA was labeled with Cy5 and used as reference. The differential gene expression during differentiation was analyzed by SAM (Significance Analysis of Microarrays) method (FDR < 5%). The public gene expression database (GNF Symatlas) was used to annotate the tissue representation of the modulated genes. The expression of some specific genes related to osteogenesis (ALPL, osteocalcin, COL1A1, RUNX2 e osteopontin) and an adipocyte marker (PPARG) was evaluated by semiquantitative RT-PCR. It was observed that MSC in their stem state express, at similar levels, representative genes of the osteo and adipocyte lineages. However, during the osteoblastic differentiation process the number of modulated genes (repressed or induced) increased. It was observed that at early in vitro osteoblastic differentiation, adult SC characteristics genes were downregulated. Conversely, the osteoblastic commitment of these cells displayed upregulation of specific genes related to bone formation (BMP1, SMAD7, IGFBP4, ITGA5, FN1, BGN, CDH8, GDF10 and SCARB2). These results are important to provide a better understanding of the genetic and molecular basis of the plasticity and commitment phenomenon of adult MSC.

As células-tronco (CT) são células que apresentam propriedades de auto-renovação, capazes de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tipos de tecidos, por isso têm sido vistas como uma alternativa terapêutica para o tratamento de muitas doenças cujo tratamento convencional não é eficiente. Além disso, por sua plasticidade, as CT podem ser usadas para produzir modelos in vitro para o estudo de doenças, o que tem sido particularmente interessante para doenças que acometem o sistema nervoso. As células-tronco humanas de dente decíduo esfoliado (Stem cell from Human Esfoliated Deciduous teeth, SHED) são descritas em alguns trabalhos como capazes de se diferenciarem em células neuronais através da transdiferenciação direta, um processo simples que possibilita a diferenciação de um tipo celular em outro por meio da utilização de agentes químicos. No entanto, a diferenciação de SHED em neurônios é contestada como sendo um artefato de cultura devido ação citotóxica destes agentes. Com base nesta premissa, o objetivo deste trabalho foi realizar protocolos para a produção de neurônios a partir das SHED utilizando modificações de métodos descritos na literatura e utilizados na diferenciação neuronal. Durante um dos protocolos utilizados, foi possível verificar a morfologia de células semelhantes à neurônio, porém após alguns dias de manutenção, as células voltavam ao formato fusiforme original. Com este trabalho podemos afirmar que, de acordo com os resultados obtidos, as SHED não geram neurônios funcionais / Stem cells (SC) are cells that present self-renewal properties, capable of generating cells types and reconstitute several tissue types. For this reason, they have been seen as a therapeutic alternative to the treatment of many diseases which conventional treatment is not efficient. Besides, because of its plasticity, SC may be used to produce in vitro models in order to study diseases, what is interesting to diseases that affect the nervous system. Human SC from SHED (Stem cell from Human Exfoliated Deciduous teeth, SHED) are described in some papers as being capable of self-differentiation in neuronal cells through the direct transdifferentiation, a simple process that makes possible the differentiation of a cell type in another through the use of chemical agents. Nevertheless, SHED differentiation is refuted as being a artifact of culture due to cytotoxic action of these agents. Based on this premise, the aim of this study was to carry out protocols in order to produce neurons from SHED, using modifications and methods of neuronal differentiation described in the literature and used in the neuronal differentiation. During one of the protocols used, it was possible to verify the morphology of the cells as neuron-like, however, after some days of maintenance, they turn back to their original fusiform format. In this study, we can state, according to the obtained results, that SHED do not generate functional neurons

A doença renal crônica (DRC) é uma afecção frequente em cães idosos, de alta morbidade e mortalidade, sendo definida como uma injúria renal morfo-funcional irreversível, de um ou ambos os rins, que está intrinsecamente associada à degeneração celular. Seu tratamento é paliativo, sendo que nos estágios mais avançados, o animal pode necessitar de hemodiálise ou transplante renal, prática dificultada e muitas vezes inviável na medicina veterinária. As células-tronco mesenquimais derivadas do tecido amniótico caracterizam-se por ser uma população de células de alta plasticidade e de grande potencial imunomodulador, sendo capazes de se diferenciar e produzir diferentes tipos celulares necessários num processo de reparação. Os avanços nos estudos das células-tronco podem tornar a terapia celular uma forma viável de tratamento alternativo ou adjuvante dessa doença, uma vez que estas poderiam restaurar a funcionalidade e manter a integridade do rim. O objetivo deste estudo foi avaliar se o tratamento experimental com células-tronco mesenquimais derivadas do âmnio (CTMAs) canino podem reduzir ou estabilizar a taxa de progressão e o quadro clínico da DRC em cães. Para tanto, células-tronco provenientes da membrana amniótica foram cultivadas até a segunda passagem (P2) e criopreservadas para posterior aplicação. Onze cães domésticos, machos e/ou fêmeas, acometidos pela DRC adquirida em graus II ou III segundo classificação da IRIS e sem outra afecção adjacente receberam duas aplicações de CTMAs nos dias D0 e D30, por via endovenosa. Para avaliar a progressão ou estabilização do quadro clínico foram colhidas amostras de sangue total, soro sanguíneo e urina para exames de hemograma, bioquímica sérica e urinaria e urinálise em quatro momentos: D0, D7, D30 e D60. A análise estatística foi realizada através da aplicação do teste ANOVA, para comparação de médias nas diferentes fases de tratamento, seguida pelo teste de Tukey, para comparação das médias entre os grupos. Do ponto de vista clínico, dois animais apresentaram melhora e se mantiveram estáveis durante todo o período de acompanhamento, dois animais apresentaram melhora nos primeiros 30 dias, apresentando novamente sintomatologia da doença após esse período e os demais apresentaram melhora nos primeiros sete dias de tratamento, havendo uma piora geral do quadro após esse período. Contudo, os exames laboratoriais em todos os casos não revelaram uma melhora significativa com o tratamento. Aparentemente, a utilização de células-tronco de origem amniótica não influencia de forma relevante na melhora da doença devido à extensa lesão renal que cães apresentam. / Chronic kidney disease (CKD) is a common condition in older dogs with high morbidity and mortality and is defined as an irreversible morpho-functional renal injury of one or both kidneys, which is intrinsically associated with cell degeneration. Its treatment is palliative, and in the more advanced stages, the animal may need dialysis or kidney transplantation, a practice that is difficult and often not feasible in veterinary medicine. The mesenchymal stem cells derived from amniotic tissue characterized by being a population of high plasticity and high cell immunomodulatory potential, being able to differentiate and produce different cell types required in a repair process. Advances in stem cell studies may make cell therapy a viable alternative or adjunctive treatment for this disease, since it could restore functionality and maintain kidney integrity. The objective of this study was to evaluate if the experimental treatment with the canine amnio- derived mesenchymal stem cells (AMSCs) can reduce or stabilize the rate of progression, and clinical condition of CKD in dogs. For this purpose, stem cells from the amniotic membrane were grown until the second pass (P2) and cryopreserved for later use. Eleven domestic male and / or female dogs, affected by the CKD acquired in grades II or III according to IRIS classification and without another adjacent disease, received two applications on days D0 and D30 intravenously. To evaluate the progression or stabilization of the clinical condition, whole blood, blood serum and urine samples were collected for hemogram, serum and urinary biochemistry and urinalysis at four moments: D0, D7, D30 and D60. Statistical analysis was performed using the ANOVA test, to compare means in the different treatment phases, followed by the Tukey test, to compare the means between the groups. From a clinical point of view, two animals showed improvement and remained stable throughout the follow-up period, two animals showed improvement in the first 30 days, showing again symptoms of the disease after this period and the other showed improvement in the first seven days of treatment, with a general worsening of the condition after this period. However, laboratory tests in all cases showed no significant improvement with treatment. Apparently, the use of stem cells of amniotic origin does not influence in a relevant way the improvement of the pathology due the extensive kidney lesion presented by dogs.

A terapia celular é uma ferramenta que tem se mostrado eficiente para o tratamento de várias patologias veterinárias em estudos experimentais e clínicos, incluindo a estimulação osteogênica para o tratamento de não união e reparo de fraturas distais de rádio e ulna em cães. Muitas são as vantagens da utilização de células-tronco, ela é um tipo diferenciado de célula com alta capacidade de proliferação, auto renovação, produção de diferentes linhagens celulares e regeneração de tecidos, estando presente em embriões, células de cordão umbilical e medula óssea.O objetivo deste trabalho foi a avaliação clínica e radiográfica de pacientes com fraturas distais de rádio e ulna após cirurgia e tratamento com células-tronco de medula óssea de fetos caninos diretamente no foco da fratura. As avaliações radiográficas mostraram cicatrização óssea a partir de 45 dias pós-cirurgia nos dois grupos estudados, somente com cirurgia convencional e implantes e também no grupo da cirurgia convencional com implantes associada à terapia com células-tronco de medula óssea. Mostrando assim, que a terapia celular pode ser uma ferramenta favorável para auxiliar na consolidação óssea de fraturas distais de rádio e ulna. Paralelamente, realizamos um estudo com coelhos da Nova Zelândia para avaliar radiograficamente e histologicamente o uso de um scaffold esponja de colágeno com células tronco de medula óssea em modelo de fratura similar ao encontrado em cães realizado neste presente estudo, e observamos que um scaffold com células no local da fratura pode auxiliar de forma significativa na consolidação óssea. / Cell therapy has been an effective tool for the treatment of several animal diseases in experimental and clinical studies, including osteogenic stimulation for the treatment of non-union and repair fractures of distal radius and ulna in dogs. There are many advantages of using stem cells since this differentiated cell type has high proliferation capacity, self renewal, production of different cell lines and tissue regeneration, being present in embryos, cells from umbilical cord and bone marrow. The aim of this study was to perform a clinical and radiographic evaluation of dogs with distal radius and ulna fractures after surgery and treatment with stem cells from canine fetuses bone marrow directly into the fracture. Radiographic evaluations showed bone regeneration from 45 days post-surgery in both groups, only with conventional surgery and implant and also in the conventional surgery group with implants associated with stem cells from bone marrow therapy. Thus, cell therapy can be a favorable tool to assist in bone healing of distal fractures of radius and ulna. In parallel, we conducted a study with New Zealand rabbits for radiologically and histologically evaluate the use of a scaffold - collagen sponge with bone marrow stem cells - similar to that found in the fracture model in dogs performed in the present study, and we observed that an scaffold with cells on fracture site can help significantly in bone healing.

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: Introdução: A medula óssea é o órgão responsável pela hematopoise, fenômeno que se relaciona com a diferenciação da célula tronco hemopoética (CTH) em eritrócitos, granulócitos, monócitos, linfócitos e plaquetas. É constituída pelo tecido hematopoiético, tecido gorduroso, matriz proteica e sinusoidais e está contida no interior dos ossos esponjosos, em contato com o tecido ósseo cortical e trabecular. Em 1978, Ray Schofield conceituou nicho como local especifico, dentro da medula óssea, onde a CTH se origina, assenta e prolifera. Atualmente sabe-se que o nicho é mais do que um simples compartimento morfológico, mas um sítio funcional e dinâmico, que se remodela e influencia a função da CTH e suas progenitoras, exercendo papel definitivo na CTH normal e neoplásica. Estudos demonstram que os nichos e seus componentes celulares e proteicos, influenciam e determinam a manutenção de CTH ativas e quiescentes, sendo determinante na manutenção, progressão e recaída de doenças da medula óssea. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar na medula óssea humana, acometida por doenças primárias, secundárias e reacionais, o comportamento da CTH, descrevendo localização e quantificação destas. Material e métodos: Para realização deste estudo, foram selecionados quatro grupos de doenças hematológicas, divididas em mieloma múltiplo (n= 10), leucemia linfóide crônica (n= 10), síndrome mielodisplásica (n= 10) e reacional (n= 10). Foi realiado um estudo imuno-histoquímico para avaliação da ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Bone marrow is the organ responsible for hematopoiesis, a phenomenon that is related to the differentiation of hemopoietic stem cell (HSC) into erythrocytes, granulocytes, monocytes, lymphocytes and platelets. It consists of hematopoietic tissue, fatty tissue, protein and sinusoidal matrix and is contained within the spongy bones, in contact with the cortical and trabecular bone tissue. In 1978, Ray Schofield conceptualized a niche as a specific site within the bone marrow, where the HSC originated, settled, and proliferated. It is now known that the niche is more than a simple morphological compartment, but a functional and dynamic site, which remodels and influences the function of HSC and its progenitors, playing a definitive role in normal and neoplastic HSC. Studies demonstrate that niches and their cellular and protein components influence and determine the maintenance of active and quiescent HSC, being determinant in the maintenance, progression and relapse of diseases of the bone marrow. Objective: The aim of this study was to evaluate the behavior of HSC in the human bone marrow, affected by primary, secondary and reactional diseases, describing their location and quantification. Materials and methods: Four groups of hematological diseases were selected, divided into multiple myeloma (n = 10), chronic lymphocytic leukemia (n = 10), myelodysplastic syndrome (n = 10) and reactional (n = 10). An immunohistochemical study was performed to evaluate the marki... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: Introdução: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) consiste em uma neoplasia hematopoiética maligna de células-tronco, caracterizada pela aquisição do gene de fusão BCR-ABL1 associado à translocação [t(9;22) (q34;q11)]. O início é insidioso com progressão lenta seguida por uma fase acelerada, que culmina na crise blástica. Os nichos da medula óssea estão relacionados com o microambiente tumoral, afetando a sobrevivência e a proliferação das células-tronco leucêmicas. Objetivos: Análise da quantidade e distribuição de células-tronco hematopoiéticas nos diferentes nichos na LMC em diferentes fases e correlação destes achados com a distribuição de galectina-3 nas fases acelerada e blástica. Material e métodos: Revisão clínico-morfológica de 20 pacientes na fase crônica da LMC, 1 paciente na fase acelerada e 1 paciente na crise blástica. Análise imunofenotípica (CD34, CD31, CD44, CD117 e galectina-3) em Tissue Microarrays para avaliação dos diferentes nichos e sua correlação com a matriz proteica. Resultados: Observou-se aumento na expressão de todos os marcadores na fase crônica quando comparados ao controle. Na fase acelerada há aumento na expressão de CD44 e galectina-3 quando comparado ao controle enquanto que na crise blástica há aumento na expressão de CD44 e CD117. Conclusão: A LMC constitui uma neoplasia mieloproliferativa em que o remodelamento dos nichos malignos favorece a manutenção das células-tronco leucêmicas. O presente estudo demonstrou elevação em todos os marcadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a malignant hematopoietic stem cell neoplasm, characterized by the acquisition of the translocation-associated BCR-ABL1 gene [t(9;22)(q34;q11)]. The onset is insidious with the slow progression followed by an accelerated phase, culminating in the blast crisis. The bone marrow niches are related to the tumor microenvironment, the survival and proliferation of the leukemic stem cells. Objectives: To analyze the amount and distribution of hematopoietic stem cells in different niches in CML in different phases and correlate these findings with the galectin-3 distribution in the accelerated and blastic phases. Material and methods: Clinical-morphological review of 20 patients in CML chronic phase, 1 patient in the accelerated phase and 1 patient in the blast crisis. Immunophenotypic analysis (CD34, CD31, CD44 and galectin-3) in Tissue Microarrays to evaluate the different niches and correlation with the protein matrix. Results: We observed the presence of all markers in the chronic phase when compared to the control. In the accelerated phase there is an increase in expression of CD44 and galectin-3, when compared to control while in blast crisis there is an increase in expression of CD44 and CD117. Conclusion: CML is a myeloproliferative neoplasm in which remodeling of malignant niches favors the maintenance of leukemic stem cells. The present study demonstrated an increase in expression of all immunohistochemical markers at differen... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre