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Perfil de expressão gênica da via de sinalização dos receptores do tipo Toll em células mononucleares do sangue periférico humanas tolerantes ao LPS / Gene expression profile of Toll-like Receptor signaling pathway in LPS-tolerant human peripheral blood mononuclear cellsMendes, Marialice Erdelyi [UNIFESP] 30 June 2010 (has links) (PDF)
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Publico-141.pdf: 1535996 bytes, checksum: af74b773a6305b7327f17191a30e524c (MD5) / Pré-exposição a pequenas doses de LPS induz resistência a uma dose letal de LPS, um fenômeno conhecido como tolerância à endotoxina. A pré-exposição ao LPS modula o padrão de resposta celular, conforme ilustrado pela expressão gênica e síntese protéica alteradas de citocinas inflamatórias. No entanto, os mecanismos envolvidos neste processo ainda são parcialmente descritos. Interessante, as células tolerantes ao LPS assemelham-se àquelas obtidas de pacientes sépticos. Métodos: Tolerância ao LPS foi induzida em células mononucleares do sangue periférico humanas pela incubação destas com 1 ng/mL de LPS durante 48 horas. Após este período, as células foram desafiadas com 100 ng/mL de LPS por 2, 6 e 24 horas. Em cada um destes momentos, foi avaliada a expressão de 84 genes relacionados à via dos receptores do tipo Toll, por PCR array. Resultados: O pré-tratamento com LPS não modulou a expressão de CD14 e TLR4 na superfície de monócitos, demonstrando que a tolerância não ocorreu devido à modulações dos receptores do LPS. Um gene foi considerado tolerizável quando o pré-tratamento com LPS reverteu o efeito causado na expressão gênica pelo desafio com LPS; enquanto um gene foi considerado não tolerizável quando o pré-tratamento com LPS não reverteu o efeito do desafio com LPS. As cascatas no NF-κB, JNK, ERK e TRIF estavam bloqueadas ou atenuadas em células tolerantes, enquanto a expressão dos genes relacionados à cascata da p38 estava aumentada. Conclusão: Esses resultados demonstram uma regulação distinta entre as cascatas da via de sinalização dos TLRs durante a tolerância. Além disso, este achado pode explicar a regulação diferenciada entre alguns mediadores inflamatórios, como por exemplo a regulação positiva de IL-10 e COX2 e regulação negativa de TNF-α e IL-12, fato este também explicado pela influência de regulações epigenéticas. A tolerância pode resultar em repressão ou indução de expressão gênica, sendo tal efeito dependente de regulação positiva ou negativa induzida pelo desafio com LPS. / Pre-exposure to low doses of LPS induces resistance to a lethal challenge, a phenomenon known as endotoxin tolerance. In this study, tolerance was induced in human PBMC by culturing cells with 1 ng/mL LPS for 48 h. Cells were subsequently challenged with 100 ng/mL LPS for 2, 6 and 24 h, and the expression of 84 genes encoding proteins involved in the TLR signaling pathway was evaluated at each time point by PCR array. LPS pretreatment did not modulate the expression of TLR4 and CD14 on the surface of monocytes. A gene was defined as tolerized when LPS pretreatment reversed the effect of LPS challenge on the expression of the gene or as non-tolerized when LPS pretreatment did not reverse the effects of LPS challenge. We observed impaired or attenuated signal transduction through the NF-κB, JNK, ERK and TRIF pathways, whereas expression of p38 pathway-related genes was preserved in LPStolerant cells. These results show a distinct regulation of the TLR pathway cascades during tolerance; this may account for the differential gene expression of some inflammatory mediators, such as up-regulation of IL-10 and COX2 as well as down-regulation of TNF-α and IL-12. Depending on the effect of LPSinduced gene up-regulation or down-regulation, tolerance, as a reversion of such LPS effects, may result in repression or induction of gene expression. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Agricultores familiares produtores de mamona no Ceará: nível tecnológico e seus determinantesGonçalves, Marcos Falcão January 2011 (has links)
GONÇALVES, Marcos Falcão. Agricultores familiares produtores de mamona no Ceará: nível tecnológico e seus determinantes. 2011. 125 f.: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciência Agrárias, Departamento de Economia Agrícola, Programa de Pós-Graduação em Economia Rural, Fortaleza-CE, 2011 / Submitted by Kepler Barroso (keplercavalcante@hotmail.com) on 2013-10-21T19:20:54Z
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Previous issue date: 2011 / The depletion of fossil fuels has led them to search for alternative sources of energy. In this
context the Brazilian government launched the National Program of Biodiesel Production and
Use _ PNPB, taking advantage of natural conditions conductive to the production of ethanol,
based on the principle of inclusion of family farming. In line with the federal program, the
Government of Ceará also launched its incentive program, initially selected as castor oilseed
primary, which makes us think about the real ability to integrate these farmers, as well as the
level of technology used by them. The objective of this work is to identify the technological
level of producers of castor farmers in Ceará and its determinants. For the preparation of this
study used primary data obtained through the application of questionnaires to 100 farmers and
50 castor farmers who do not cultivate this culture. The questionnaires were administered in
five municipalities with the highest concentration of soybean fields, from the December/2009
January/2010. The results show that 80% of producers are part of the working age population,
while 97% are male and acquire their income in agriculture. Concerning the technological
level, using the Logit model to identify the determinants for adoption, it was found that the
producers of castor evaluated using an average of 59% of recommended technologies, are
classified in pattern II. It is noteworthy that the origin of seed plants by the number of pits and
the consortium of crops were the predominant technology for achieving this result. As
determinants of technology adoption, age and years of study were the most significant
variables. Thus, it is concluded that they needed guidance and support given to producers of castor to improve productivity and profitability of the crop. / O esgotamento dos combustíveis fósseis tem levado à busca de fontes alternativas de energia.
Nesse contexto, o Governo brasileiro lançou o Programa Nacional de Produção e Uso de
Biodiesel – PNPB, aproveitando-se das condições naturais propícias à produção desse
biocombustível, tendo como princípio a inserção da agricultura familiar. Em consonância com
o programa federal, o Governo do Ceará também lançou seu programa de incentivo, elegendo
inicialmente a mamona como oleaginosa principal, o que leva à reflexão sobre a capacidade
de integração desses agricultores, bem como o nível tecnológico por eles utilizado. Assim, o
objetivo deste trabalho é identificar o nível tecnológico dos agricultores familiares produtores
de mamona no Estado do Ceará e seus fatores determinantes. Para a elaboração do presente
estudo foram utilizados dados primários, obtidos mediante aplicação de questionários junto a
100 produtores de mamona e 50 agricultores familiares que não cultivam a mamona. Os
questionários foram aplicados em cinco municípios com maior concentração do cultivo dessa
oleaginosa, no período de dezembro/2009 a janeiro/2010. Os resultados demonstram que 80%
dos produtores fazem parte da População em Idade Ativa, sendo que 97% são do sexo
masculino e adquirem sua renda na agropecuária. Em relação ao nível tecnológico, utilizandose
o modelo Logit para identificar os fatores determinantes para sua adoção, verificou-se que
os produtores de mamona avaliados utilizam, em média, 59% das tecnologias recomendadas,
sendo classificados no padrão II. Destaca-se que a origem das sementes, o número de plantas
por covas e o consórcio de culturas foram as tecnologias preponderantes para o alcance desse
resultado. Como determinantes para a adoção tecnológica, idade e anos de estudo foram as
variáveis mais significativas. Dessa forma, conclui-se que se fazem necessários orientação e
acompanhamento dos produtores de mamona para melhorar a produtividade e a rentabilidade
da cultura.
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Impacto econômico e social da crise financeira internacional na cadeia produtiva da uva de mesa: o caso do submédio São FranciscoFreitas, Isabela Kristina Ferreira de January 2011 (has links)
FREITAS, Isabela Kristina Ferreira de. Impacto econômico e social da crise financeira internacional na cadeia produtiva da uva de mesa: o caso do submédio São Francisco. 2010. 115f. : Dissertação (mestrado)Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Economia Agrícola, Programa de Pós-Graduação em Economia Rural, Fortaleza-Ce, 2010 / Submitted by Evilanny da Silva (eawusikagl@hotmail.com) on 2013-11-04T12:40:59Z
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Previous issue date: 2011 / This study aims to analyze the economic and social impact of the recent financial crisis in the supply chain in the table grape in the region of São Francisco. To this end, we used estimates of change in agricultural employment and income, as well as calculations of variation in trade margins. The results showed that there was a significant drop in average agricultural income per hectare of small grape producers. As for the medium and large producers was a negative but not significant, this variable. With respect to agricultural employment per hectare was found that it remained constant in the properties of small grape producers and that there is a negative but not significant, the properties of medium and large producers. However it was found that the effects of the crisis began in the region analyzed, from the marketing of production which minimized the effect of the crisis on employment in the period. In relation to mark-up showed that there was a positive change between the years 2007 and 2008, from 1.17% at the margin of the producer of grapes which caused a negative change in the same proportion in the total marketing margin of fruit. However, detailed analysis of the overall marketing shows that there was an increase of 15.68% at the edge of the retail marketing and a reduction of 13.04% on marketing margin wholesale, which shows that the crisis brought a negative impact on the wholesale sector. Thus, it follows then that the recent financial crisis has brought negative effects on the productive chain of grapes in the cities of Petrolina and Juazeiro-Ba, reflected mainly the reduction of agricultural income of small farmers and reducing mark-up of the wholesale sector. / Este trabalho tem por objetivo analisar o impacto econômico e social da recente crise financeira internacional na cadeia produtiva na uva de mesa na região do Submédio São Francisco. Para tanto, utilizaram-se cálculos de variação no emprego e renda agrícola, assim como cálculos de variação nas margens de comercialização. Os resultados apontaram que houve uma queda significativa na média da renda agrícola por hectare dos pequenos produtores de uva. Já para os médios e grandes produtores ocorreu um impacto negativo, porém não significativo, nessa variável. No que diz respeito ao emprego agrícola por hectare constatou-se que o mesmo permaneceu constante nas propriedades dos pequenos produtores de uva e que houve um impacto negativo, mas não significativo, nas propriedades dos médios e grandes produtores. Todavia verificou-se que os reflexos da crise iniciaram-se na região analisada, a partir da comercialização da produção o que minimizou o efeito da crise sobre o emprego no período analisado. Já em relação às margens de comercialização observou-se que houve uma variação positiva, entre os anos de 2007 e 2008, de 1,17% na margem do produtor de uva o que implicou numa variação negativa na mesma proporção na margem total de comercialização dessa fruta. No entanto, a análise detalhada da margem total de comercialização mostra que houve um aumento de 15,68% na margem de comercialização do varejo e uma redução de 13,04% na margem de comercialização do atacado, o que evidencia que a crise trouxe um impacto negativo para o setor atacadista. Dessa forma, conclui-se então que a recente crise financeira internacional trouxe efeitos negativos para a cadeia produtiva da uva de mesa, nos municípios de Petrolina-Pe e Juazeiro-Ba, refletidos, principalmente, pela redução da renda agrícola dos pequenos produtores e redução da margem de comercialização do setor atacadista.
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Identificação molecular de cepas clínicas e ambientais de Burkholderia pseudomallei, oriundas do estado do Ceará : análise baseada nas regiões 16S e 16S-23S do DNA ribossômico nuclear / Molecular identification of clinical and strains environmental Burkholderia pseudomallei, from the State of Ceará : based on analysis regions 16S and 16S-23S ribosomal DNA nuclearCouto, Manuela Soares January 2009 (has links)
COUTO, Manuela Soares. Identificação molecular de cepas clínicas e ambientais de Burkholderia pseudomallei, oriundas do Estado do Ceará : análise baseada nas regiões 16S e 16S-23S do DNA ribossômico nuclear. 2099.0107 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-05T14:02:29Z
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Previous issue date: 2009 / Melioidosis is a potentially fatal disease caused by the bacterium Burkholderia pseudomallei, considered emerging in Brazil since the first cases were reported in 2003, on State of Ceará. This study aimed to perform the molecular identification of 31 isolates of B. pseudomallei (26 clinical and 5 environmental) maintained in the culture collection of CEMM (Specialized Center for Medical Mycology), based on sequences 16S and 16S-23S rRNA. The DNA of these samples was extracted with the kit Wizard ® Genomic DNA Purification (Promega), quantified by spectrophotometry and stored at 4°C. The amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA specific to B. pseudomallei was performed by PCR reaction with primers Bp1 and Bp4. The sequencing of 16S and 16S-23S rRNA was performed by using of the kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). The phylogenetic tree of 16S rRNA and the sequence identity matrix and sequence difference count matrix based on the 16S-23S rRNA were generated by the program MEGA4, version 4.1. The results confirmed the identification of 15 strains of B. pseudomallei (5 clinical and 10 environmental), which represents 48.4% of the isolates analyzed in this study. The phylogenetic tree based on 16S rRNA shows that the clinical and environmental isolates of B. pseudomallei of State of Ceará are evolutionarily clustered with the strains B. pseudomallei MSHR346 (Australia), B. pseudomallei 1106a (Thailand), B. pseudomallei K96243 (Thailand), B. pseudomallei 1710b (Thailand) and B. pseudomallei 668 (Australia). Using the same extraction kit was possible to extract DNA from B. pseudomallei directly from clinical specimen (bronchoalveolar lavage), confirming a new case of melioidosis in Ubajara/CE. In this study, the use of PCR for amplification of a fragment of 302 bp of 16S-23S rRNA identified correctly B. pseudomallei, and to confirm the discrimination between B. pseudomallei and B. mallei, the sequencing of the 16S and 16S-23S rRNA genes was performed. The technique of PCR coupled with sequencing of 16S and 16S-23S rRNA resulted in a high sensitivity and specificity of detection of B. pseudomallei in this study. / A melioidose é uma doença potencialmente fatal causada pela bactéria Burkholderia pseudomallei, sendo considerada emergente no Brasil desde que os primeiros casos foram reportados em 2003, no Estado do Ceará. Este estudo pretendeu realizar a identificação molecular de 31 isolados de B. pseudomallei (cinco clínicos e 26 ambientais) mantidos na coleção de culturas do CEMM (Centro Especializado em Micologia Médica), com base nas sequências 16S e 16S-23S DNAr. O DNA destas amostras foi extraído com o kit Wizard® Genomic DNA Purification (Promega), quantificado por espectrofotometria e armazenado a 4ºC. A amplificação de um fragmento de 302 pb da região espaçadora 16S-23S DNAr específico para B. pseudomallei foi realizada por meio de reação de PCR com os primers Bp1 e Bp4. O sequenciamento das regiões 16S e 16S-23S DNAr foi realizado pelo método da terminação da cadeia pelo didesoxinucleotídeo, usando-se o kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). A árvore filogenética da região 16S DNAr e as matrizes sequência identidade e contagem de diferenças baseadas na região 16S-23S DNAr foram geradas pelo programa MEGA4, versão 4.1. Os resultados confirmaram a identificação de 15 cepas de B. pseudomallei (cinco clínicas e dez ambientais), o que corresponde a 48.4% dos isolados em estudo. A árvore filogenética baseada na região 16S DNAr demonstra que os isolados clínicos e ambientais de B. pseudomallei do Estado do Ceará são evolutivamente agrupados com as cepas B. pseudomallei MSHR346 (Austrália), B. pseudomallei 1106a (Tailândia), B. pseudomallei K96243 (Tailândia), B. pseudomallei 1710b (Tailândia) e B. pseudomallei 668 (Austrália). Com a utilização do mesmo kit de extração também foi possível extrair DNA de B. pseudomallei diretamente de espécime clínico (lavado brônquico), confirmando um novo caso de melioidose no Município de Ubajara/CE. Em nosso estudo, o uso da PCR para a amplificação de um fragmento de 302 pb da região 16S-23S DNAr identificou corretamente B. pseudomallei, sendo que para confirmar a discriminação entre B. pseudomallei e B. mallei, o sequenciamento das regiões 16S e 16S-23S DNAr foi realizado. A técnica de PCR aliada ao sequenciamento das regiões 16S e 16S-23S do DNA ribossômico nuclear resultaram em uma elevada sensibilidade e especificidade de detecção de B. pseudomallei neste estudo.
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Desenvolvimento e validação da detecção molecular da infecção por schistosoma mansoni em lotes de moluscos vetores para identificação de focos de transmissão / Development and validation of molecular approaches of infection by Shistosoma mansoni in vector snails to be used on identifying the transmission focusGomes, Ana Lisa do Vale January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / A identificação de moluscos infectados pelo Schistosoma mansoni é de grande interesse para a saúde pública, pois representa focos de transmissão da esquistossomose. As limitações da técnica padrão-ouro para o diagnóstico de infecções pré-patentes e em larga escala faz com que os métodos moleculares sejam vistos como possíveis alternativas através da detecção de DNA do S. mansoni em lotes de moluscos vetores. A detecção de seqüências específicas de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) tem confirmado ser de extremo valor para a análise genética e diagnóstico de várias doenças patogênicas infecciosas. O principal objetivo desse trabalho é desenvolver e validar a detecção molecular da infecção por S. mansoni em lotes de moluscos vetores para a identificação de focos de transmissão. Os iniciadores foram desenhados para detectar especificamente DNA de S. mansnoni e amplificam gene na subunidade pequena do rRNA. Neste trabalho foi desenvolvido PCR quantitativa em tempo real (qPCR) e validada juntamente com ensaios de PCR, nested PCR (NPCR) e nested PCR em único tubo (STNPCR). Quando comparados as duas metodologias relacionadas ao padrão-ouro e abordagens moleculares os resultados confirmaram que a NPCR, STNPCR e a qPCR são significantemente mais sensíveis (p 0.05) que a PCR e que a técnica padrão-ouro. Significante relação foi observada entre os resultados da qPCR e a liberação de cercarias. As ferramentas moleculares desenvolvidas neste trabalho, se utilizadas em lotes de moluscos, podem ser consideradas alternativas e/ou complementares à técnica convencional para identificar focos de transmissão da esquistossomose
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Caracterização da transmissão da Leishmaniose Tegumentar Americana no município de Ilhéus, Zona da Mata do Estado da Bahia / Characterization of transmission of American cutaneous leishmaniasis in Ilhéus, Zona da Mata of the State of BahiaCarvalho, Sílvia Maria santos January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana é endêmica em todos os estados do Brasil. De acordo com os registros da Secretaria de Saúde municipal, Ilhéus, localizado no sul da Bahia, é endêmico para a doença. Esse estudo objetivou caracterizar a transmissão da enfermidade nesse município. Foi realizado um estudo retrospectivo entre os anos 2000 e 2006, proporcionando a realização de busca ativa de casos humanos em áreas rural e urbana (Santo Antonio e Teotônio Vilela), com um inquérito populacional em 147 e 77 indivíduos, respectivamente. Foram capturados e identificados 6.439 flebotomíneos com armadilhas CDC, mil deles separados em pools de 20 insetos e submetidos à Reação em Cadeia da Polimerase. Ademais, 1.528 fêmeas capturadas com armadilhas de Castro foram dissecadas. Foram atendidos 131 pacientes suspeitos da doença no Centro de Atenção Especializada III, entre Agosto/2007 e Setembro/2009, e avaliados clínica, epidemiológica, parasitológica, molecular e imunologicamente. Dos residentes na área urbana 79,4 por cento visitaram, ao menos uma vez, a área rural. Foram identificadas 18 espécies de flebótomos, predominando Lutzomyia whitmani (52,49 por cento) e L. fischeri (29,98 por cento) na área rural, e L. cortelezzii (05 exemplares) na urbana. Não houve infecção natural à dissecção; e nenhum pool foi positivo à PCR. Mas, dos 84 hamsters inoculados com material humano, 03 amostras de esfregaços hepáticos apresentaram amastigotas; e 02 foram detectáveis por PCR para o subgênero Viannia. Não houve evidência de transmissão urbana, sugerindo uma origem rural dos casos, onde L. whitmani e L. fischeri possivelmente são vetores, tendo L. (V) braziliensis como agente etiológico nesse ciclo de transmissão. Recomenda-se intensificação na vigilância quanto à notificação de casos e atenção às características epidemiológicas locais
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Análise da sustentabilidade da cadeia produtiva do melão: O caso do agropolo baixo Jaguaribe - CearáSoares, Rogério Barbosa January 2009 (has links)
SOARES, Rogério Barbosa. Análise da sustentabilidade da cadeia produtiva do melão: O caso do agropolo baixo Jaguaribe-CE. 2009. 291 f.: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará. Mestrado Acadêmico em Economia Rural (MAER). Centro de Ciências Agrárias. Fortaleza-CE. 2009 / Submitted by Francisco Helder Macêdo Rangel (fhelder@ufc.br) on 2014-09-26T16:20:31Z
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Previous issue date: 2009 / From a case study this work analyzes how sustainable the productive chain of the cautaloups in the region of the agropolo Lower Jaguaribe/Ceará is, under the optics of the systemic analysis with approach in reginal and local development. The productive chain approach allows a holistic vision of the system, making it possible to understand the potentialities and inefficiencies. The methodology used in this work accepts as valid the hypothesis of the consumer sovereignty, according to which the product quality is defined by the point of view of the market. This approach shows the inherent factors of the competitiveness by means of the market structure and the logistic of transports and theprocess of technological modernization inside of the productive chain as well as the actions the State and Federal Government, based on the demands of the final customer. An important trend observed in this industry is that larger cantaloups producers keep the technological and commercaial leadership by reosganizing the productive chain of cantaloups by means of outsouorcing. As the agro-industry mounts this structure, more favorable conditions are created to keep the stability of the production of cantaloups. Thus, great part of the coordenation of the productin and commercialization is directly or indirectly related to the problem of the associated secular adequacy to the after-harvest infrastructure. Therefore, the variations in the stability of offer and in the costs of its preservation are decisively important for the organization of the transactions. / Com o objetivo de analisar a sustentabilidade do crescimento da cadeia produtiva do melão na região do Agropolo Baixo Jaguaribe – Ceará, responsável por 99,5% da produção de melão no Estado, realizou-se este estudo de caso. A abordagem metodológica utilizada foi a análise sistêmica, abrangendo desde o setor de insumos até o consumidor. Para tal, foram utilizados dados primários obtidos por meio de entrevistas com os principais atores e o uso de dados secundários e pesquisa bibliográfica. Os resultados indicaram que a organização da cadeia produtiva do melão no Agropolo do Baixo Jaguaribe, de 1990 a 2007, passou de uma estrutura mais voltada ao mercado interno para uma estrutura que vem a cada ano aumentando sua participação no mercado internacional. Como resultados, constatou-se, quanto a sustentabilidade econômica do melão produzido na região do Agropolo Baixo Jaguaribe que é uma cultura economicamente viável, mas que apresenta uma concentração de sua comercialização no mercado europeu, principalmente do melão “amarelo”, responsável por cerca de 50% das exportações, contudo naquele mercado, há uma clara preferência dos consumidores por melões nobres, fato que deixa uma alerta para o risco de o melão produzido nesta região ter sua participação reduzida neste importante mercado internacional. Quanto à sustentabilidade social verificou-se que na estrutura desta cadeia a maioria dos atores, principalmente os pequenos produtores, estão organizados em torno das médias e grandes empresas produtoras, mantendo uma relação de dependência quanto à infraestrutura de pós-colheita, logística de captação e distribuição e comercialização para permanecerem no mercado. Por fim, verificou-se que ações governamentais como: isenção do ICMS na comercialização no mercado interno e externo, “Produção Integrada de Melão”, Monitoramento da “Área livre de mosca das curcubitáceas”, “Manejo Integrado de Pragas do melão” tornaram a cadeia produtiva do melão no Agropolo Baixo Jaguaribe mais competitiva e sustentável nos âmbitos econômicos, ambiental, social e político.
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Coccidioides posadasii de origem clínica e ambiental : um estudo da diversidade genética / Coccidioides posadasii, clinical and environmental strains: study of genetic diversityLima, Rita Amanda Chaves de January 2010 (has links)
LIMA, Rita Amanda Chaves de. Coccidioides posadasii de origem clínica e ambiental : um estudo da diversidade genética. 2010. 91 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-18T13:26:44Z
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Previous issue date: 2010 / Coccidiodomycosis is a systemic infection, predominantly pulmonary, caused by the geophilic and dimorphic fungi, Coccidioides immitis and Coccidioides posadasii. In Brazil, coccidioidomycosis is associated with semi-arid areas in the Northeastern region of this country, which is considered one of the endemic areas of this disease in South America. These pathogens are morphologically indistinguishable species, but they exhibit molecular differences. Different molecular techniques have been described for the characterization of these species. The nuclear ribosomal DNA (rDNA) from Coccidioides spp. has been described as an important molecular marker for the identification, taxonomy and phylogeny. Currently, there are still shortages of maps for epidemiological approaches in order to direct the correlation between populations of Coccidioides spp. and the outbreaks of coccidiomycosis. Given the above, this study aimed at performing the molecular identification of 18 clinical and environmental isolates of C. posadasii, from Northeastern Brazil, maintained in the fungal collection of the Specialized Medical Mycology Center (CEMM), through PCR, as well as, to analyze the genetic diversity of these isolates by sequencing of 18S-28S regions of nuclear rDNA. The identification of the isolates was performed through PCR, using specific primers Coi9-1F and Coi9-R. The sequencing of the 18S-28S rDNA regions was performed through the method of chain termination by dideoxynucleotides, using the kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). The results confirmed the identification of all strains included in this study as belonging to the species C. posadasii. The phylogenetic tree based on 18S-28S rDNA region of C. posadasii from CEMM and Coccidioides spp. from Genbank. reveals the formation of a unique cluster encompassing the following strains CEMM 05-2-063, CEMM 05-2-064, CEMM 05-2-066 and CEMM 05-2-065, in a properly sustained branch, which apparently seems to group these isolates according to their geographical origin. The strains of C. posadasii showed lower genetic divergence in the ITS1 and ITS2 regions, when compared to strains of C. immitis. Analyses did not detect differences between strains of clinical origin and those of environmental origin. Further studies involving the analysis of fast evolving markers, such as microsatellites, can provide evidences to determine whether the groups found in this study are derived from a lineage of clonal reproduction. / A coccidioidomicose é uma infecção sistêmica, predominantemente pulmonar, causada pelos fungos dimórficos e geofílicos, Coccidioides immitis e Coccidioides posadasii. No Brasil, a coccidioidomicose está associada a locais situados na zona semi-árida da região Nordeste, considerada uma das áreas endêmicas da doença na América do Sul. Estes patógenos consistem em espécies morfologicamente indistinguíveis, mas que exibem diferenças moleculares peculiares. O DNA ribossômico nuclear (rDNA) de Coccidioides spp. tem sido apontado como importante marcador molecular utilizado na identificação, taxonomia e filogenia. Atualmente, ainda há escassez de mapas de abordagens epidemiológicas para direcionar a correlação entre as populações de Coccidioides spp. com os surtos de coccidioidomicose. Diante do exposto, este estudo teve por objetivo, realizar a identificação molecular de 18 isolados clínicos e ambientais de C. posadasii, oriundos do Nordeste brasileiro, mantidos na Micoteca do Centro Especializado em Micologia Médica (CEMM), através da técnica de PCR, bem como, analisar a diversidade genética destes isolados por meio do seqüenciamento das regiões 18S-28S do rDNA nuclear. A identificação dos isolados foi realizada por PCR utilizando os primers específicos Coi9-1F e Coi9-R. O sequenciamento das regiões 18S-28S rDNA foi realizado pelo método da terminação da cadeia pelo didesoxinucleotídeo, usando-se o kit DYEnamicTM ET terminators cycle sequencing (GE Healthcare). Os resultados confirmaram a identificação de todas as cepas incluídas neste estudo, como pertencentes à espécie C. posadasii. A árvore filogenética, baseada na região 18S-28S rDNA de C. posadasii do CEMM, juntamente com sequências de Coccidioides spp. depositadas no Genbank. revela a formação de um cluster exclusivo englobando as cepas CEMM 05-2-063, CEMM 05-2-064, CEMM 05-2-065 e CEMM 05-2-066, em um ramo adequadamente sustentado, que aparentemente parece agrupar estes isolados segundo sua origem geográfica. As cepas de C. posadasii apresentaram menor índice de divergência genética nas regiões ITS1 e ITS2, quando comparadas às cepas de C. immitis A análise não detectou diferenças entre as cepas de origem clínica e as de origem ambiental. Estudos posteriores envolvendo a análise de marcadores de evolução mais rápida, os microssatélites, podem fornecer evidências para determinar se os agrupamentos encontrados neste estudo são resultantes de uma linhagem de reprodução clonal.
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Estudo epidemiológico molecular da hanseníase em Fortaleza, Ceará / Molecular epidemiological study of leprosy in Fortaleza, CearáLima, Luana Nepomuceno Gondim Costa January 2014 (has links)
LIMA, Luana Nepomuceno Gondim Costa. Estudo Epidemiológico Molecular da Hanseníase em Fortaleza, Ceará. 2014. 95 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-30T11:15:20Z
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Previous issue date: 2014 / The study of detection of M. leprae DNA in nasal secretions from patients and healthy subjects in addition to the methodologies for genotyping of M. leprae has complemented the leprosy’s epidemiology. This study evaluated the positivity of M. leprae DNA in nasal secretion (NS) of leprosy patients and healthy individuals; and genetic variability among strains of M. leprae, studying the relationship with clinical and epidemiological factors. NS samples were collected from 185 patients (group C), 136 individuals without leprosy (Co) attending the National Reference Center for Sanitary Dermatology Dona Libânia in Fortaleza, Ceará and 121 students from the Faculty Christus in Fortaleza (GE group). Skin biopsies (SB) were collected from 38 individuals in group C. All samples NS were subjected to DNA extraction and amplification of RLEP region by nested PCR. To assess the genetic diversity of M. leprae among individuals, 48 strains of SN positive patients RLEP system were analyzed using the four loci of variable number tandem repeats (VNTRs): AC8b, AC9, and AC8a GT9. To study the variability of the strain in the same individual were compared BP and SN samples of 38 positive patients RLEP system using the fifteen loci VNTRs: AT17, GGT5, GTA9, AC8b, AC8a, AT15, AC9, 21-3, GAA21, TA18, 6-7, 27-5, TA10, 23-3, 12-5. 69.2% of the cases, 66.9% of Co and 28.1% of group GE were positive RLEP. The fact that the individual is male, belonging to socioeconomic class D/E and every year-old age increases the chance in 6,266, 3,083 and 1,046, respectively, be it positive PCR. In the analysis of geographical distribution of individuals positive RLEP, the Co was the group of intersection between C and GE groups and the group C, the smear-positive and positive RLEP were more clustered than smear-positive and negative RLEP. The AC8b, AC9, and AC8a GTA9 loci showed allelic diversity considered moderately discriminating. There was a formation of four groups with strains of identical genotypes. The most common genotypes were AC8b: 8, AC9: 7, AC8a: 8, GTA9: 10 and AC8b: 7, AC9: 8, AC8a: 9, GTA9: 9. Strains of unique genotypes were detected in patients aged greater and in patients in whom there was more time between symptoms and diagnosis. The existence of different strains circulating in the city under study and different subpopulations of bacilli between BP and SN samples of the same individual was observed. / O estudo da detecção de DNA do M. leprae em secreção nasal de indivíduos e as metodologias de genotipagem do M. leprae têm complementado a epidemiologia da hanseníase. Este estudo avaliou a positividade de DNA de M. leprae na secreção nasal (SN) de pacientes com hanseníase e de indivíduos sadios; e a variabilidade genética entre cepas de M. leprae, estudando a relação com fatores clínico-epidemiológicos. Foram coletadas amostras de SN de 185 pacientes (grupo C), de 136 indivíduos sem hanseníase (grupo Co) que frequentavam o Centro de Referência Nacional em Dermatologia Sanitária Dona Libânia em Fortaleza, Ceará e 121 alunos da Faculdade Christus em Fortaleza (grupo GE). Foram coletadas biópsias de pele (BP) de 38 indivíduos do grupo C. Todas as amostras de SN foram submetidas à amplificação da região RLEP por meio de PCR NESTED. Para avaliação da diversidade genética do M. leprae entre indivíduos, foram analisadas cepas de SN de 48 pacientes positivos do sistema RLEP, utilizando os quatro loci de repetições em tandem de número variável (VNTRs): AC8b, AC9, AC8a e GT9. Para o estudo da variabilidade da cepa no mesmo indivíduo foram comparadas amostras de BP e SN de 38 pacientes positivos do sistema RLEP, utilizando os quinze loci de VNTRs: AT17, GGT5, GTA9, AC8b, AC8a, AT15, AC9, 21-3, GAA21, TA18, 6-7, 27-5, TA10, 23-3, 12-5. Foram RLEP positivo 69,2% dos casos, 66,9% do grupo Co e 28,1% do grupo GE. O fato de o indivíduo ser homem, pertencer à classe socioeconômica D/E e a cada ano de idade que envelhece, aumenta a chance em 6,266, 3,083 e 1,046, respectivamente, dele ser PCR positivo. Na análise de distribuição geográfica dos indivíduos RLEP positivos, o grupo Co foi o grupo de interseção entre os grupos C e GE e em relação ao grupo C, os com baciloscopia positiva e RLEP positivo estiveram mais agrupados do que os com baciloscopia positiva e RLEP negativo. Os loci AC8b, AC9, AC8a e GTA9 apresentaram uma diversidade alélica considerada moderadamente discriminante. Houve a formação de quatro grupos com cepas de genótipos idênticos. Os genótipos mais frequentes foram o AC8b: 8, AC9: 7, AC8a: 8, GTA9: 10 e o AC8b: 7, AC9: 8, AC8a: 9, GTA9: 9. As cepas de genótipos únicos foram detectadas em pacientes com idade menor e em pacientes nos quais ocorreu maior tempo entre sintomas e diagnóstico. Foi constatada a existência de diferentes cepas circulando no Município em estudo e diferenças de subpopulações do bacilo entre as amostras de BP e SN de um mesmo indivíduo.
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Avaliação da reação em cadeia da polimerase (PCR) e métodos convencionais no diagnóstico da micobacteriose extrapulmonar exceto renal / Evaluation of polymerase chain reaction (PCR) and conventional methods for diagnosis of extrapulmonary mycobacteriosis except renalFiévez, Aline Mireille da Cunha January 2005 (has links)
FIÉVEZ, Aline Mireille da Cunha. Avaliação da reação em cadeia da polimerase (PCR) e métodos convencionais no diagnóstico de micobacteriose extrapulmonar exceto renal. 2006. 100 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará, Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-20T12:48:33Z
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Previous issue date: 2005 / In order to focus on the importance of laboratorial diagnosis of extrapulmonary mycobacteria, except renal, we employed the polymerase chain reaction (PCR). Clinical samples (body fluids) were tested by PCR for the presence of Mycobacterium tuberculosis complex (MTB) and nontuberculous mycobacteria (MNTB). We compared the results obtained through the PCR with the ones obtained through conventional microbiological methods. The 114 clinical samples were obtained from internal patients or from or in ambulatorial attendance with clinical suspicion of extrapulmonary tuberculosis, except renal. The samples were collected from 2001 to 2003, and ceded to this research by the Laboratório de Microbiologia do Laboratório Central do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC-UFC), and by the Laboratório Central de Saúde Pública da Secretaria de Saúde do Estado do Ceará (LACEN-CE). The direct microscopy and culture were negative in all the samples. The molecular research, for the Mycobacterium genus was positive in 10 samples, and for the Mycobacterium tuberculosis complex was negative in all the samples. / Com o objetivo de enfatizar a importância do diagnóstico laboratorial de micobactérias em sítios extrapulmonares, exceto renal, utilizou-se neste trabalho a reação em cadeia da polimerase (PCR). Na PCR foram empregados iniciadores específicos para a detecção de micobactérias do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTB) e não pertencentes ao complexo Mycobacterium tuberculosis (MNTB). Foram comparados os resultados obtidos na PCR com os métodos microbiológicos convencionais. Foram analisadas 114 amostras clínicas (líquidos corporais) provenientes de pacientes internados ou em atendimento ambulatorial, com suspeita clínica de tuberculose extrapulmonar, exceto renal. As amostras foram coletadas no período de 2001 a 2003 e cedidas pelo Laboratório de Microbiologia do Laboratório Central do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC-UFC) e pelo Laboratório Central de Saúde Pública da Secretaria de Saúde do Estado do Ceará (LACEN-CE). A baciloscopia e a cultura foram negativas em todas as amostras. A pesquisa molecular para o gênero Mycobacterium foi positiva em dez amostras e, para o complexo Mycobacterium tuberculosis, foi negativa em todas as amostras.
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