por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

Infecções causadas por Candida tropicalis (C. tropicalis) são associados à elevada morbi-mortalidade, e foram consideradas como importantes causas de infecção de corrente sanguínea no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) de março de 1998 a março de 2001. Adicionalmente, são responsáveis pelo aumento do tempo e dos custos de hospitalização e necessidade de cuidados intensivos. Esse estudo tem como objetivo a caracterização molecular e perfil de sensibilidade de 61 isolados de C. tropicalis a partir de candidemias no HCFMUSP e Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP), através das técnicas de amplificação aleatória do DNA polimórfico (RAPD), eletroforese em campo pulsátil (PFGE), tipagem de sequências de múltiplos locus gênicos (MLST) e antifungigrama por microdiluição pelos métodos propostos, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) e European Committee on Antibiotic Susceptibility Testing (EUCAST). A análise filogenética por RAPD evidenciou que os iniciadores P1 e P2 mostraram maior capacidade de discriminação que P3. Na análise por PFGE com enzimas de restrição SfiI, SmaI, BssHII e NaeI, a enzima BssHII mostrou maior poder discriminatório. MLST contribuiu com 36 novas diploid sequence type (DSTs) e 23 novos alelos, de acordo com o banco de dados oficial do MLST (http://pubmlst.org/ctropicalis/), representando o primeiro estudo que caracterizaram isolados sequenciais na América do Sul. Entre os isolados sequenciais de um mesmo paciente, as microvariações foram mais frequentes no fragmento de gene XYR1 em 8 pacientes e macrovariações ocorreram em quatro pacientes com mais de um isolado, destacando-se três que apresentaram diferença nos seis alelos estudados. A análise comparativa entre os métodos evidenciou diferenças entre os isolados múltiplos dos pacientes 3, 7 e 11, considerados diferentes pelos três métodos. O poder discriminatório foi de 83,47% para RAPD, 82,18% para PFGE e 97,4 % para MLST. Os resultados do antifungigrana mostraram concordância entre os métodos CLSI e EUCAST de 73,8% para o fluconazol, 67,2% para o itraconazol e 80,3% para o voriconazol. Do total de 61 isolados estudados, 3 isolados de diferentes pacientes foram resistentes ao fluconazol, com MIC de 64 g/mL. O fenômeno de trailing foi observado em 50% das amostras testadas frente ao fluconazol, 23% ao voriconazol e 21,3% ao itraconazol. O uso de pH 5,0 para re-análise do CLSI frente ao fluconazol revelou-se como uma ferramenta útil para esclarecer o perfil de sensibilidade de isolados que apresentaram o fenômeno de trailing. Não houve correlação entre perfil genético gerado pelas técnicas de caracterização molecular estudadas e o perfil fenotípico através do teste de sensibilidade aos antifúngicos / Infections caused by Candida tropicalis (C. tropicalis) have been characterized as important causes of candidemia at the Hospital of the Medical school, University of São Paulo (HCFMUSP) from March 1998 to March 2001 and are associated with high morbidity and mortality. Additionally, they have been related to higher hospitalization costs because of longer hospitalization times and intensive care needs. This study aims to analyze the molecular typing and antifungal susceptibility profile of 61 isolates of C. tropicalis from 41 patients with candidemia in HCFMUSP and University of Campinas (UNICAMP), through Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), Multilocus Sequence Typing (MLST) and broth microdilution antifungal susceptibility methodologies proposed by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) and European Committee on Antibiotic Susceptibility Testing (EUCAST). Phylogenetic analysis showed higher discriminatory power index of P1 and P2 primers than P3 by RAPD analysis. PFGE was performed with restriction enzymes SfiI, SmaI, NaeI and BssHII) and the enzyme BssHII presented the best performance. MLST analyses revealed 36 new diploid sequence type (DSTs) and 23 new alleles according to the C. tropicalis MLST database (http://pubmlst.org/ctropicalis/), representing the first study to characterize the sequential isolates of C. tropicalis candidemia in South America. Microvariation in a single gene was found in the sequential isolates from 8 patients. The main polymorphisms occurred in the alleles of the XYR1 gene. Macrovariation was detected in isolates from four patients, where 3 patients presented polimorphisms in six gene fragments. The comparative analysis revealed differences among sequential isolates from patients 3, 7 and 11, considered by three different methods. The discriminatory power was 83.47% for RAPD, 82.18% for PFGE and 97.4% for MLST. The agreement between the CLSI and EUCAST methods was 73.8% to fluconazole susceptibility, 67.2% to itraconazole and 80.3% to voriconazole. Of the 61 isolates tested, 3 isolates from different patients were resistant to fluconazole, MIC of 64 mg/mL. The trailing phenomenon was observed in 50% to fluconazole, 23% to voriconazole and 21.3% to itraconazole. Among the isolates studied, the use of pH 5.0 facilitated the determination of minimum inhibitory concentrations (MICs) for the re-analysis of fluconazole by CLSI, proving to be an important tool for the trailing phenomenon. No correlation was observed between genetic profile generated by the techniques of molecular characterization and phenotypic profile determined by susceptibility tests to antifungal drugs

Les lipases/acyltransférases présentent des propriétés intermédiaires entre les lipases et les acyltransférases. Capables de se comporter comme des hydrolases, elles catalysent cependant la réaction de transfert d'acyle préférentiellement à l'hydrolyse même en milieu aqueux à forte activité thermodynamique de l'eau en présence de divers nucléophiles. La recherche de nouvelles lipases/acyltransférases, soit sécrétées par des levures sauvages, soit identifiées parmi les séquences protéiques disponibles dans des bases de données, nous a permis d'identifier deux nouvelles enzymes de ce type : CvisL2 de Candida viswanathii et CtroL4a de C. tropicalis. Cette dernière, produite par expression hétérologue, a été plus particulièrement étudiée en comparaison avec les deux lipases/acyltransférases déjà connues, CpLIP2 de C. parapsilosis et CaLIP4 de C. albicans, ainsi qu'avec des enzymes plus éloignées (AflaL0a d'Aspergilus flavus, isolée dans ce travail, et CaLA de C. antarctica, qui présentent respectivement 35 % et 31 % d'identité avec CpLIP2). Le caractère spécifique des acyltransférases semble relié à leur degré d'homologie et à leurs relations phylogénétiques. En effet, les trois lipases/acyltransférases étudiées appartiennent à un sous-groupe phylogénétique distinct composé de diverses autres protéines actuellement non-caractérisées présentant plus de 57 % d'identité avec CpLIP2. En plus de leur activité acyltransférase plus ou moins prononcée, ces nouveaux biocatalyseurs diffèrent par leur spécificité de substrat, leur stabilité en présence de fortes concentrations en alcool ou leur activité à basse température, élargissant ainsi le spectre des applications potentielles des lipases et lipases/acyltransférases. / Lipases/acyltransferases have intermediate properties between lipases and acyltransferases. Although being active hydrolases, they catalyze acyltransfer reactions preferentially to hydrolysis even in an aqueous medium with a high thermodynamic activity of water in the presence of various nucleophiles. Searching for new lipases/acyltransferases, either secreted by wild yeast strains or identified in protein sequences databases, allowed us to identify two new enzymes of this type: CvisL2 from Candida viswanathii and CtroL4a from C. tropicalis. The latter, produced by heterologous expression, has been more particularly studied and compared with the two already known, closely related, lipases/acyltransferases, CpLIP2 from C. parapsilosis and CaLIP4 from C. albicans, and with two more distantly related lipases (a new lipase AflaL0a from Aspergillus flavus and CaLA from C. antarctica, with 35 % and 31 % identity with CpLIP2, respectively). The specific catalytic behavior of the acyltransferases seems to be associated with sequence homology and phylogenetic relationships. Indeed, the three lipases/acyltransferases studied are part of a phylogenetic subgroup composed of various proteins (identity with CpLIP2 higher than 57 %), currently not characterized. Besides their acyltransfer activity, these new biocatalysts differ in properties such as their substrate selectivity, their stability in the presence of high alcohol concentration or their activity at low temperature, opening the way to new applications.

por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / BactÃrias e fungos sÃo encontrados juntos em uma infinidade de ambientes e, particularmente, na forma de biofilme, onde as espÃcies aderentes interagem atravÃs de diversos mecanismos de sinalizaÃÃo. Na cavidade oral, espÃcies de Candida coexistem com inÃmeras espÃcies bacterianas, e evidÃncias sugerem que bactÃrias podem modular a formaÃÃo de biofilme, bem como induzir a formaÃÃo de hifas e pseudo-hifas. Assim, caracterizar tais interaÃÃes à essencial para o entendimento da patogÃnese das doenÃas e, possivelmente, a descoberta de novas estratÃgias terapÃuticas. Nesse sentido, o objetivo principal deste trabalho foi avaliar, in vitro, os mecanismos envolvidos na interaÃÃo entre as bactÃrias Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus parasanguinis e a levedura Candida tropicalis. No estudo foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares presentes no sobrenadante de C. tropicalis (SCT) sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis. TambÃm foi avaliado o efeito dos metabÃlitos extracelulares de S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) e S. parasanguinis (SSP) sobre o crescimento planctÃnico, formaÃÃo de biofilme e capacidade de filamentaÃÃo de C. tropicalis, utilizando apenas o sobrenadante da cultura de cada um dos estreptococos em diferentes concentraÃÃes (100, 50 e 25%). AlÃm disso, foi analisado o efeito dos metabÃlitos extracelulares dos estreptococos sobre o biofilme prÃ-formado (6h) de C. tropicalis. Para verificar o efeito dos metabÃlitos extracelulares foram utilizados dois mÃtodos: o mÃtodo turbidimÃtrico que se baseia na leitura da densidade Ãptica (OD) das suspensÃes celulares e a coloraÃÃo cristal violeta (CV) que permite a quantificaÃÃo indireta da formaÃÃo de biofilme atravÃs da coloraÃÃo com cristal violeta. Em seguida, foram examinadas as caracterÃsticas dos biofilmes, formados por 24 horas, atravÃs da anÃlise por microscopia Ãptica comum. Os resultados referentes ao biofilme foram submetidos ao ANOVA com pÃs-teste Bonferroni, com diferenÃa estatÃstica de p<0,01. Nossos resultados sugerem que substÃncias solÃveis produzidas por S. oralis, S. sanguinis e S. parasanguinis induzem a formaÃÃo de hifas de C. tropicalis sem interferir no crescimento planctÃnico. AlÃm de diminuir drasticamente o desenvolvimento do biofilme dessa levedura quando em contato com SSS e SSP. Tal fato reforÃa a ideia de que existe grande heterogeneidade dentro de biofilmes polimicrobianos, especialmente entre leveduras e bactÃrias. E que o resultado dessa interaÃÃo depende das condiÃÃes as quais estes micro-organismos serÃo submetidos. / Bacteria and fungi are found together in a multitude of environments, and particularly in the form of biofilm adherent species which interact through various signaling mechanisms. In the oral cavity, Candida species coexist with numerous bacterial species, and evidence suggests that bacteria can modulate biofilm formation as well as induce the formation of hyphae. Thus, to characterize such interactions are essential to the understanding of pathogenesis of diseases and possibly the discovery of new therapeutic strategies. In this sense, the main objective of this study was to evaluate, in vitro, the mechanisms involved in the interaction between bacteria Streptococcus oralis, Streptococcus sanguinis, and Streptococcus parasanguinis yeast Candida tropicalis. In the study the effect of extracellular metabolites present in the supernatant of C. tropicalis (SCT) on the pre-formed biofilm (6H) S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis was analyzed. The effect of extracellular metabolites of S. oralis (SSO), S. sanguinis (SSS) and S. parasanguinis (SSP) on planktonic growth and biofilm formation capacity filamentation of C. tropicalis was also evaluated using only the supernatant culturing each of streptococci in different concentrations (100, 50 and 25%). Furthermore, the effect of extracellular metabolites of streptococci on the pre-formed biofilm (6h) of C. tropicalis were analyzed. To verify the effect of extracellular metabolites two methods were used: The turbidimetric method based on the reading of the optical density (OD) of cell suspension and coloring crystal violet (CV) which permits indirect quantification of the biofilm formation by staining with crystal violet. Then were examined characteristics of biofilms formed by 24 hours, through the analysis simple optical microscope. The results for the biofilm were subjected to ANOVA with Bonferroni post-test, with a statistical difference of p<0.01.Our results suggest that soluble substances produced by S. oralis, S. sanguinis and S. parasanguinis induce the formation of hyphae of C. tropicalis without interfering with planktonic growth.In addition to dramatically decrease biofilm development of oral yeast when in contact with SSP and SSS. This reinforces the idea that there is great heterogeneity within polymicrobial biofilms, especially between yeasts and bacteria. And the result of this interaction depends on the conditions which these micro-organisms will be subjected.

Candida tropicalis yeast and bacteria Comamonas testosteroni have been considered to be able to metabolize phenol and utilize it as the only source of carbon and energy. In our laboratory we investigated the cytoplasmic enzymes responsible for the first and second step of phenol degradation, NADPH-dependent phenol hydroxylase of both C. tropicalis and C. testosteroni and catechol 1,2-dioxygenase of C. tropicalis. The aim of our study was to isolate and partially characterize those enzymes. Phenol hydroxylase purification consisted of preparation of cytosol from C. tropicalis yeast by fraction centrifugation, chromatography and re-chromatography on a column of DEAE Sepharose, fractionation by precipitation of the enzyme with polyethylene glycol 6000 and gel permeation chromatography on a column of Sephacryl S-300. Extracellular phenol hydroxylase of C. testosteroni was purified by fraction precipitation with polyethylene glycol 6000 and by gel permeation chromatography on 4B Sepharose and Sephacryl S-300. Catechol 1,2-dioxygenase was purified using the procedure consisting of: chromatography and re- chromatography on a column of DEAE Sepharose, lyophilization of the enzyme and gel permeation chromatography on a column of Sephadex G-100. The enzyme activity was determined by two methods: use of HPLC...

FREITAS, M. F. M. Produção de lipases por leveduras isoladas do bagaço de caju utilizando fontes alternativas de Carbono e Nitrogênio. 2017. 103 f. Tese (Doutorado em Engenharia Química)-Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-21T19:19:47Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales.pdf: 1907549 bytes, checksum: 22fee806e690e6f63b1598b0a1542349 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Prezada Fátima: Vc realizou muitas alterações sugeridas, mas faltam ainda algumas para vc corrigir. Por esse motivo, sugerimos consultar o modelo de template, para ajudá-la nesta tarefa, disponível em: http://www.biblioteca.ufc.br/educacao-de-usuarios/templates/ Vamos agora as correções sempre de acordo com o template: 1. Na capa, na parte inferior da folha coloque a informação da cidade e o ano em negrito. 3. Na ficha Catalográfica, o seu nome deve estar de acordo com a folha de rosto e capa. Voce suprimiu o ultimo nome. Sendo assim a entrada: Sales, Maria de Fátima Matos de Freitas (Não de Freitas) No corpo da ficha coloque seu nome completo por extenso. 4. Retire os hifens de separação na LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS. 7. No sumário na seção terciária (3 dígitos) a partir do 4.2.1 os numerais não estão em itálico. Favor colocar em toda a lista. A palavra CONCLUSÃO Por ser seção primária deve ser toda maiúscula. Retire o numeral 7 da palavra REFERÊNCIAS 8. Na lista de referencias, A palavra que deve ser usada é REFERÊNCIAS (sem o numeral 7), em negrito e centralizada na folha. 9. Na lista de REFERENCIAS, dê uma revisada em toda a lista para colocar o espaço depois do ponto de abreviação (v. n. p. ) nos artigos de revistas. Ex; v.2, n. 3, 2012. Coloque espaço após v. 2, n. 3, 2012 Reenvie novo arquivo para a secretaria com as correções que enviaremos o nada consta por e-mail. Att. Marlene mmarlene@ufc.br 3366-9620 on 2017-11-22T11:23:36Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-24T19:13:19Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales.pdf: 1891030 bytes, checksum: b360634c75b70dda334f156745c6be57 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Alteração de Maria de Fátima Matos de Freitas Sales Prezada Fátima: Vc realizou muitas alterações sugeridas, mas faltam ainda algumas para vc corrigir. Por esse motivo, sugerimos consultar o modelo de template, para ajudá-la nesta tarefa, disponível em: http://www.biblioteca.ufc.br/educacao-de-usuarios/templates/ Vamos agora as correções sempre de acordo com o template: 3. Verifiquei que houve alteração no seu nome em relação ao arquivo passado, portanto vc tem que alterar em todas as folhas em que é citada. Faltou alterar na folha de aprovação, pois seu nome ainda permanece com SALES. Na ficha então deve ficar: Freitas, Maria de Fátima Matos de (Não de Freitas). No corpo da ficha coloque seu nome completo por extenso. 7. No sumário na seção terciária (3 dígitos) a partir do 4.2.1 os numerais não estão todos em itálico. Favor colocar em toda a lista. Faltou vc colocar em itálico: 5.9.1 Efeito da temperatura e pH na atividade da enzima produzida. 5.9.2 Eletroforese. 5.9.3 Processo de purificação 9. Na lista de REFERENCIAS, dê uma revisada em toda a lista para colocar o espaço depois do ponto de abreviação (v. n. p. ) nos artigos de revistas. Ex; v.2, n. 3, 2012. Coloque espaço após v. 2, n. 3, p. 513-523, 2012 . Vc ainda não corrigiu o espaçamento solicitado em toda a lista. Reenvie novo arquivo para a secretaria com as correções que enviaremos o nada consta por e-mail. Att. Marlene mmarlene@ufc.br 3366-9620 on 2017-11-27T13:25:15Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-30T11:40:13Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfsales(1).pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Danilo, Favor renomear o arquivo para: 2017_tese_mfmfreitas Depois me envie novamente. Marlene on 2017-11-30T12:52:03Z (GMT) / Submitted by pgeq ufc (pgeq@ufc.br) on 2017-11-30T12:58:25Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2017-11-30T14:20:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-30T14:20:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_mfmfreitas.pdf: 1894579 bytes, checksum: 225db412b0fb510a23717698c92cd485 (MD5) Previous issue date: 2017-06-13 / Lipolytic enzymes can catalyse a wide variety of reactions and are highly specific. For biotechnology, the need arises for the search for new microrganisms for this production. The objective of this work was to evaluate lipase production by two yeasts isolated from cashew bagasse, Candida tropicalis URM 7057 and Meyerozyma caribbica LABIOTEC 4 and to compare it with C. rugosa yeast NRRL Y-95. Synthetic culture media were initially tested for production of the enzyme. Synthetic medium C (containing glucose, KH2PO4, yeast extract, MgSO4 .7H2O, peptone and oleic acid) showed the best intracellular activity results (282 ± 14 in 48 h of cultive). Then, alternative medium culture was formulated with residues, in addition to ammonium sulfate and peptone, and evaluated the production of the enzymes of interest. Medium culture 01 contained molasses, medium culture 02, corn steep liquor (CSL), medium culture 03, olive mill wastewater (OMW) and medium culture 04, all of them. Medium 04 was better because it allowed the production of larger amounts of lipase, probably because it had a higher amount of nutrients for yeast. An experimental design was conducted to verify the influence of the concentrations of residues on lipase production. Corn steep liquor (CSL) had a positive effect on this production, providing extracellular lipase activity of 587 ± 5 U/L, in 24 h of cultive. The use of stirred tank bioreactors favored the production of lipases, since the activities of the lipase produced by C. rugosa in bioreactor were higher than those produced in flasks (600 U/L in bioreactor and 400 U/L in flasks, after 48 h of cultive) and for yeast C. tropicalis the enzymatic activity also presented in a larger quantity (close to 500 U/L, compared to 400 U/L in flasks). Biomass growth of yeast biomass C. tropicalis, in flasks and in bioreactor, was similar up to 48 h. The enzyme produced by C. rugosa has a molar mass close to 60 KDa, with an optimum pH of 7.0 and an optimum temperature of 40 °C. The partial biochemical characterization of the lipase produced by C. tropicalis showed that it presents an optimum temperature of 60 °C for the intracellular extract and 70 °C for the extracellular extract, optimum pH equal to 7.0. After adsorption of the enzyme in octyl-agarose, it was possible to identify, by zymogram analysis and by electrophoresis, bands close to those obtained for C. rugosa commercial lipase (60 KDa, 45 KDa and 22 KDa). / As enzimas lipolíticas são capazes de catalisar uma grande variedade de reações e são altamente específicas. Para a biotecnologia surge a necessidade da busca de novos micro-organismos para essa produção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a produção de lipases por duas leveduras isoladas do bagaço de caju, Candida tropicalis URM 7057 e Meyerozyma caribbica LABIOTEC 4 e comparar pela levedura C. rugosa NRRL Y-95. Inicialmente foram testados meios de cultura sintéticos para a produção da enzima. O meio sintético C (contendo glicose, KH2PO4, extrato de levedura, MgSO4.7H2O, peptona e ácido oleico) foi o que apresentou melhor resultados de atividade intracelular (282 ± 14 U/L em 48 horas de cultivo). Em seguida, 4 meios de cultura alternativos foram formulados com resíduos, além de sulfato de amônia e peptona, e avaliados na produção da enzima de interesse. O meio 01 continha melaço, o meio 02, milhocina (CSL - corn steep liquor), o meio 03, águas residuais da produção do azeite (olive mill wastewater - OMW) e o meio 04, todos eles. O meio 04 se mostrou melhor por permitir a produção de maiores quantidades da enzima lipolítica, provavelmente por apresentar uma quantidade maior de nutrientes para levedura. Um planejamento fatorial fracionado foi conduzido para se verificar a influência das concentrações dos resíduos na produção da lipase. A milhocina apresentou efeito positivo nessa produção, propiciando atividade extracelular de lipase de 587 ± 5 U/L, em 24 horas de cultivo. O uso de biorreator tipo tanque agitado favoreceu a produção de lipases, visto que as atividades da lipase produzida por C. rugosa em biorreator foram maiores que as produzidas em frascos (600 U/L em biorreator e 400 U/L em frascos, após 48 horas de cultivo), e para levedura C. tropicalis a atividade enzimática também se apresentou em quantidade maior (próximo a 500 U/L, comparado a 400 U/L em frascos). O crescimento da biomassa da levedura C. tropicalis em frascos e em biorreator foi similar até 48 horas. A enzima produzida por C. rugosa tem massa molar próxima a 60 KDa, com pH ótimo em torno de 7,0 e temperatura ótima de 40 °C. A caracterização bioquímica parcial da lipase produzida por C. tropicalis mostrou que ela apresenta temperatura ótima de 60 ºC para o extrato intracelular e 70 °C para o extracelular, pH ótimo igual a 7.0. Após adsorção da enzima em octil-agarose, foi possível identificar, por análise de zimograma e por eletroforese, bandas próximas às obtidas para a lipase de C. rugosa comercial (60 KDa, 45 KDa e 22 KDa).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-28Bitstream added on 2014-06-13T19:44:49Z : No. of bitstreams: 1 dovigo_ln_dr_arafo.pdf: 3524091 bytes, checksum: bd9c194e1468a342205c6be45f7e5d62 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Esta investigação teve como objetivo avaliar: 1. a viabilidade de utilização da curcumina como agente fotossensibilizador (PS) em Terapia Fotodinâmica (PDT) para inativação de uma cepa padrão de Candida albicans e seu efeito tóxico sobre culturas celulares de macrófagos; 2. a efetividade da PDT mediada pela curcumina para inativação de suspensões planctônicas e biofilmes formados por diferentes isolados clínicos de C. albicans, Candida tropicalis e Candida glabrata; 3. a fotoinativação de C. albicans, presente em candidose induzida em camundongos, por meio da utilização de diferentes concentrações de curcumina. No primeiro estudo, suspensões planctônicas de C. albicans (ATCC 90028) foram expostas a nove concentrações de curcumina (0,005; 0,01; 0,05; 0,1; 0,5; 1, 5, 10 e 20μM) e oito doses de luz (1,32; 2,64; 3,96; 5,28; 6,60; 13,20 e 26,4J/cm2). O efeito de diferentes tempos de pré-irradiação (PIT), a possível captação de curcumina pelas células fúngicas e participação do oxigênio singlete na fotoinativação também foram avaliados. Adicionalmente, a PDT mediada pela curcumina foi avaliada em biofilmes formados pela cepa de referência de C. albicans e sobre culturas celulares de macrófagos. Além disso, as características ópticas da solução de curcumina foram investigadas em função da dose de luz utilizada. Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e Kruskal-Wallis (α= 5%). As suspensões planctônicas de C. albicans foram completamente inativadas com a utilização de 20μM de curcumina e 5,28J/cm2. Além disso, foi observada redução significativa na viabilidade celular dos biofilmes de C. albicans. O efeito fotodinâmico foi acentuado pela presença da curcumina durante a iluminação... / The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of a reference strain of Candida albicans and its citotoxic effects against a macrofage cell line; 2. the effectiveness of PDT mediated by curcumin to inactivate clinical isolates of C. albicans, Candida tropicalis and Candida glabrata, both in planktonic and biofilm phases; 3. the photoinactivation of C. albicans in a murine model of oral candidiasis using different curcumin concentrations. In the first study, suspensions of C. albicans were treated with nine curcumin concentrations (0.005; 0.01; 0.05; 0.1; 0.5; 1, 5, 10 and 20μM) and exposed to LED light at different fluences (1.32; 2.64; 3.96; 5.28; 6.60; 13.20 and 26.4J/cm2). The effect of the pre-irradiation time (PIT) on PDT effectiveness, the uptake of curcumin by C. albicans cells and the possible involvement of singlet oxygen in the photodynamic action was also evaluated. In addition, curcumin-mediated PDT was assessed against biofilms. Similar protocols were tested on a macrophage cell line and the effect was evaluated by MTT and SEM analysis. The optical properties of curcumin were investigated as a function of illumination fluence. Data were analyzed with Analysis of Variance (ANOVA), and Kruskal-Wallis test (α= 5%). The results showed a statistically significant reduction in C. albicans viability after PDT (p<0.05), for both planktonic and biofilm cultures. Photodynamic effect was greatly increased with the presence of curcumin in the surrounding media and the PIT of 20 minutes improved PDT effectiveness. Although PDT was phototoxic to macrophages, the therapy was more effective in inactivating the yeast cell than the defense cell. The spectral changes showed a high photobleaching rate of curcumin. In the second study, planktonic... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T22:57:38Z No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-27T22:44:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T22:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DianaLuziaZuzaAlves_DISSERT.pdf: 2035213 bytes, checksum: 1604df1e90593ddd103ab0202e591e9e (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / V?rios estudos t?m sido desenvolvidos com rela??o aos riscos ? sa?de humana associados ao uso recreativo de praias contaminadas com esgotos dom?sticos. Esses res?duos cont?m v?rios micro-organismos, incluindo Candida tropicalis, agente etiol?gico tanto de infec??es superficiais quanto sist?micas, al?m de indicador de contamina??o fecal do meio ambiente. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar isolados de C. tropicalis oriundos da areia da Praia de Ponta Negra, Natal, Rio Grande do Norte, Brasil, quanto a express?o de fatores de virul?ncia in vitro, a adapta??o ao estresse osm?tico e a susceptibilidade ?s f?rmacos antif?ngicos. Foram analisados 62 isolados ambientais de C. tropicalis, observando-se grande varia??o entre os mesmos para os diversos fatores de virul?ncia avaliados. Em geral, os isolados ambientais foram mais aderentes a c?lulas epiteliais bucais humanas (CEBH) do que a cepa de refer?ncia de C. tropicalis ATCC13803, al?m de serem altamente produtoras de biofilme. Em rela??o ? morfog?nese, a maioria dos isolados exibiu fen?tipo rugoso em meio Spider (34 isolados, 54,8%). Na avalia??o da atividade enzim?tica, a maioria dos isolados teve maior produ??o de proteinase do que a cepa de refer?ncia de C. tropicalis ATCC13803. Adicionalmente, 35 isolados (56,4%) tiveram alta atividade hem?litica (?ndice de hem?lise > 55). Com rela??o ? resist?ncia de C. tropicalis ao estresse osm?tico, 85,4% dos isolados foram resistentes em meio contendo 15% de cloreto de s?dio, o que corrobora com a alta capacidade de sobreviv?ncia descrita para essa levedura no ambiente mar?timo. Finalmente, no que diz respeito ? sensibilidade aos antif?ngicos foi observada elevada resist?ncia aos az?licos testados (fluconazol, voriconazol e itraconazol), com ocorr?ncia do fen?meno ?Low-high? e de efeito semelhante ao crescimento paradoxal que ocorre para as equinocandinas. As cepas resistentes aos tr?s az?licos testados foram 15 (24,2%). Para a anfotericina B tamb?m ocorreu resist?ncia (14 isolados, 22,6%), ao passo que para as equinocandinas todas as cepas foram sens?veis. Portanto, nossos resultados demonstram que isolados de C. tropicalis oriundos da areia de praia do nordeste brasileiro podem expressar plenamente atributos de virul?ncia e apresentam alta capacidade de persist?ncia no ambiente costeiro, al?m de serem significativamente resistentes aos antif?ngicos mais empregados na pr?tica cl?nica atual. Isso constitui potencial risco ? sa?de dos frequentadores desse ambiente, especialmente indiv?duos imunocomprometidos e em extremos et?rios. / Several studies have been developed regarding health risks associated with the recreational use of beaches contaminated with domestic sewage. These wastes contain various microorganisms, including Candida tropicalis, etiologic agent of both superficial infections such as systemic, as well as indicator of fecal contamination for the environment. In this context, the objective of this study was to characterize C. tropicalis isolates from the sandy beach of Ponta Negra, Natal, Rio Grande do Norte, Brazil, regarding the expression of in vitro virulence factors, adaptation to osmotic stress and susceptibility to antifungal drugs. We analyzed 62 environmental isolates of C. tropicalis and observed a great variation between them for the various virulence factors evaluated. In general, environmental isolates were more adherent to CEBH than C. tropicalis ATCC13803 reference strain, besides the fact they were also highly biofilm producers. In relation to morphogenesis, most isolates presented wrinkled phenotype in Spider medium (34 isolates, 54.8 %). When assessing enzyme activity, most isolates had higher proteinase production than C. tropicalis ATCC13803 reference strain. In addition, 35 isolates (56.4 %) had high hemolytic activity (hemolysis index > 55). With regard to C. tropicalis resistance to osmotic stress, 85.4% of the isolates were able to grow in a liquid medium containing 15% sodium chloride, corroborating to high survival capacity described for this yeast at marine environment. Finally, with regard to sensitivity to antifungal drugs, it was observed high resistance to the azoles tested, with the occurrence of the "Low-high" phenomenon and similar effect to the paradoxical growth which occurs to the echinocandins. For the three azoles tested we verified that 15 strains were resistant (24.2 %). Some strains were also resistant to amphotericin B (14 isolates, 22.6 %), while all of them were sensitive for the echinocandins tested. Therefore, our results demonstrate that C. tropicalis isolated from the sand of northeast of Brazil can fully express virulence attributes and showed a high persistence capacity on the coastal environment, in addition of being significantly resistant to most applied antifungals in current clinical practice. This constitutes a potential health risk to visitors of this environment, especially immunocompromised individuals and those with extreme age range.