by Tong Hung Man Joanna. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 1997. / Includes bibliographical references (leaves 150-172). / Abstract --- p.i / Acknowledgments --- p.iii / Chapter Chapter 1 --- Introduction --- p.1 / Chapter Chapter 2 --- Literature Review --- p.5 / Chapter 1. --- Overview of renal cell carcinoma --- p.6 / Chapter 1.1 --- Epidemiology --- p.6 / Chapter 1.2 --- Etiology --- p.6 / Chapter 1.3 --- Clinical features --- p.7 / Chapter 1.4 --- Pathology --- p.9 / Chapter 2. --- The biological cell cycle --- p.15 / Chapter 2.1 --- Cell Cycle --- p.15 / Chapter 2.2 --- Cell cycle control --- p.18 / Chapter 3. --- Overview of DNA ploidy and the relationship with the biological behavior of renal cell carcinoma --- p.18 / Chapter 3.1 --- Overview of DNA ploidy --- p.18 / Chapter 3.2 --- Intratumoral heterogeneity --- p.20 / Chapter 3.3 --- Controversial prognostic value of DNA ploidy analysis in RCC --- p.21 / Chapter 3.4 --- Assessment of DNA ploidy --- p.23 / Chapter 4. --- Cell proliferation and its assessment by immunohistochemical methods --- p.34 / Chapter 4.1 --- Proliferation activity and tumor growth --- p.34 / Chapter 4.2 --- Basic principles of immunohistochemistry (IHC) --- p.34 / Chapter 4.3 --- "Ki 67, a cell proliferation marker" --- p.39 / Chapter 4.4 --- "p27kipl, a cell cycle arrest marker" --- p.41 / Chapter Chapter 3 --- Aims of the study --- p.44 / Chapter Chapter 4 --- Materials and Methods --- p.46 / Chapter 1. --- Tissue samples --- p.47 / Chapter 1.1 --- Sample retrieval --- p.47 / Chapter 1.2 --- Tissue processing --- p.47 / Chapter 1.3 --- Preparation of tissue sections --- p.47 / Chapter 2. --- Methods for quantitative DNA analysis --- p.49 / Chapter 2.1 --- Instrumentation --- p.49 / Chapter 2.2 --- Procedures for quantitative DNA analysis --- p.50 / Chapter 3. --- Immunohistochemical (IHC) studies of proliferation activity of RCC --- p.59 / Chapter 3.1 --- Antibodies used --- p.59 / Chapter 3.2 --- Other reagents --- p.60 / Chapter 3.3 --- Unmasking of antigens --- p.62 / Chapter 3.4 --- ABC method for monoclonal antibodies with a avidin/biotin blocking --- p.62 / Chapter 3.5 --- Interpretation and scoring of immunostaining --- p.64 / Chapter 4. --- Clinical data retrieval --- p.64 / Chapter 5. --- Statistical analysis --- p.65 / Chapter Chapter 5 --- Results --- p.66 / Chapter 1. --- Clinical information --- p.67 / Chapter 2. --- Pathological features --- p.67 / Chapter 2.1 --- Histological subtypes --- p.67 / Chapter 2.2 --- Nuclear grading --- p.68 / Chapter 2.3 --- Clinical stage --- p.68 / Chapter 3. --- DNA ploidy analysis --- p.76 / Chapter 3.1 --- By flow cytometry --- p.76 / Chapter 3.2 --- By static image cytometry using cytospin preparations --- p.82 / Chapter 3.3 --- By static image cytometry using tissue sections --- p.87 / Chapter 4. --- Immunohistochemistry --- p.92 / Chapter 4.1 --- Ki 67 (MIB-1) --- p.92 / Chapter 4.2 --- p27kipl --- p.96 / Chapter 5. --- Statistical analysis --- p.101 / Chapter 5.1 --- DNA ploidy analysis --- p.101 / Chapter 5.2 --- Ki 67 (MIB-1) --- p.108 / Chapter 5.3 --- p27kipl --- p.110 / Chapter 5.4 --- Nuclear grade and nuclear area --- p.112 / Chapter 5.5 --- Stage --- p.115 / Chapter 5.6 --- Survival analysis --- p.117 / Chapter Chapter 6 --- Discussion --- p.118 / Chapter 1. --- DNA ploidy analysis --- p.119 / Chapter 1.1 --- Flow cytometry --- p.119 / Chapter 1.2 --- Image analysis using cytospin preparations --- p.123 / Chapter 1.3 --- Image analysis using tissue sections --- p.126 / Chapter 1.4 --- Intratumoral heterogeneity --- p.130 / Chapter 1.5 --- Comparison of the results from three methods --- p.131 / Chapter 1.6 --- The potential significance of the DNA ploidy status --- p.137 / Chapter 2. --- Proliferation activity of RCC --- p.139 / Chapter 2.1 --- Ki 67 --- p.139 / Chapter 2.2 --- p27kipl --- p.140 / Chapter 3. --- Nuclear grade --- p.142 / Chapter 4. --- Stage --- p.143 / Chapter Chapter 7 --- Conclusion --- p.144 / Chapter Chapter 8 --- Further studies --- p.147 / References --- p.149

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-06-22T15:03:16Z No. of bitstreams: 1 vitorrafafelregiani_dissert.pdf: 1149352 bytes, checksum: 542e5f6273639354b00db640f941c027 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T15:03:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitorrafafelregiani_dissert.pdf: 1149352 bytes, checksum: 542e5f6273639354b00db640f941c027 (MD5) Previous issue date: 2015-08-25 / Introduction: DNA methylation plays an important role in regulating gene expression. During tumorigenesis, the hypermethylation of CpG-rich islands in promoter regions (Cytosine phosphodiester Guanine) is a mechanism that can inactivate tumor suppressor genes and contribute to the development of cancer. Objective: This study aimed to evaluate the methylation of promoter regions of tumor suppressor genes RASSF1A (Ras association domain family member 1) and MGMT (O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) in squamous cell carcinoma of the head and neck. Methods: The methylation analysis of promoter regions of RASSF1A and MGMT genes was performed using the High Resolution Melting (HRM) in 42 and 37 tumor tissue samples, respectively. Samples of tissue adjacent to the tumor or peripheral blood were used as controls. Results: For the RASSF1A gene, 50% (21 of 42) of tumor tissue samples analyzed were methylated, whereas for MGMT of 37 tumor tissue samples analyzed, 17 (46%) showed methylation. Statistical analysis between pairs of tumor samples and controls (tissue adjacent to the site of tumor and peripheral blood) showed significant differences in the presence of methylation for the RASSF1A gene (P = 0.027, Chi-square test) and the MGMT gene (P = 0.002, Chi-square test). The evaluation of the presence of methylation between tumor tissue and surrounding tissue showed no significant difference for RASSF1A genes (P = 1.0) and MGMT (P = 0.38). For the subset of tumor tissue and peripheral blood statistic was significant for RASSF1A (P = 0.005) and MGMT (P = 0.002) genes. Analysis of the presence of methylation in tumors relative to non-tumor tissues (tissues adjacent to tumor or peripheral blood) in different anatomical sites of primary occurrence showed that in oral cavity and pharynx no statistically significant difference for the RASSF1A gene (P = 0.233) relative to non-tumor samples; MGMT gene statistical results were significant (P = 0.033). In the larynx, the statistical results were significant for the RASSF1A gene (P = 0.04) compared to non-tumor samples, while for the MGMT gene, the result was not statistically significant (P = 0.998). The presence of the methylation of the MGMT gene in both genes simultaneously, RASSF1A and MGMT, were associated with the category N (P = 0.045 and P = 0.035, respectively). For the RASSF1A gene was not observed this association (P = 0.093). The analysis by multiple logistic regression of the influence of epidemiological factors (gender and age), risk factors (smoking and drinking) and clinical parameters of the tumor for the presence of methylation showed no significant association for these variables. Conclusions: The prevalence presence of methylation in the promoter region of RASSF1A and MGMT genes in tumor tissue of the pairs of samples (tumor and non-tumor tissue) suggests the involvement of these genes in the process of squamous cells carcinoma of the head and neck, in particular of the MGMT gene in tumors of the oral cavity and pharynx and RASSF1A gene in larynx tumors. No was observed association between methylation of RASSF1A and MGMT genes and age, gender, the tobacco and alcohol consumption and clinical tumor parameters. / Introdução: A metilação do DNA desempenha um papel importante na regulação da expressão gênica. Durante a tumorigênese, a hipermetilação em regiões promotoras ricas em ilhas CpG (Cytosine phosphodiester Guanine) é um mecanismo que pode inativar genes supressores de tumor e contribuir para o desenvolvimento do câncer. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a metilação das regiões promotoras dos genes supressores de tumor RASSF1A (Ras association domain family member 1) e MGMT (O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) em carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Casuística e Métodos: A análise de metilação das regiões promotoras dos genes RASSF1A e MGMT foi realizada pela técnica High Resolution Melting (HRM) em 42 e 37 amostras de tecidos tumorais, respectivamente. Amostras de tecido adjacente ao tumor ou de sangue periférico foram utilizadas como controle. Resultados: Para o gene RASSF1A, 50% (21 de 42) das amostras de tecidos tumorais analisadas foram metiladas, enquanto para o MGMT, das 37 amostras de tecidos tumorais analisadas, 17 (46%) apresentaram metilação. A análise estatística entre os pares de amostras tumorais e controles (tecido adjacente ao tumor e sangue periférico) mostrou diferença significante quanto à presença de metilação para o gene RASSF1A (P=0,027, teste de Qui-quadrado) e para o gene MGMT (P=0,002, teste de Qui-quadrado). A avaliação da presença de metilação entre subgrupos de tecido tumoral e tecido adjacente não mostrou diferença significante para os genes RASSF1A (P=1,0) e MGMT (P=0,38). Para o subgrupo de tecido tumoral e sangue periférico o resultado estatístico foi significante para os genes RASSF1A (P=0,005) e MGMT (P=0,002). A análise da presença de metilação nos tumores em relação aos tecidos não tumorais (tecidos adjacentes ou sangue periférico) nos diferentes sítios anatômicos de ocorrência primária mostrou que, em cavidade oral e faringe não houve diferença estatística significante para o gene RASSF1A (P=0,233) em relação às amostras não tumorais; para gene MGMT o resultado estatístico foi significante (P=0,033). Em laringe, o resultado estatístico foi significante para o gene RASSF1A (P=0,04) em relação às amostras não tumorais, enquanto para o gene MGMT, o resultado estatístico não foi significante (P=0,998). A presença de metilação no gene MGMT bem como em ambos os genes concomitantemente, RASSF1A e MGMT, foi associada com a categoria N (P=0,045 e P=0,035, respectivamente). Para o gene RASSF1A não foi observada tal associação (P=0,093). A análise por meio da regressão logística múltipla da influência dos fatores epidemiológicos (gênero e idade), dos fatores de risco (tabagismo e etilismo) e parâmetros clínicos do tumor quanto à presença de metilação não mostrou associação significante para essas variáveis. Conclusões: A presença de metilação nas regiões promotoras dos genes RASSF1A e MGMT apenas no tecido tumoral da maioria dos pares de amostras (tecido tumoral e não tumoral) sugere o envolvimento desses genes no processo neoplásico de cabeça e pescoço, em especial do gene MGMT em tumores da cavidade oral e faringe e do gene RASSF1A na laringe. Não há associação entre metilação dos genes RASSF1A e MGMT e a idade, o gênero, os hábitos tabagista e etilista e os parâmetros clínicos do tumor.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-10-25T16:54:50Z No. of bitstreams: 1 NathaliaTunissiolli_dissert.pdf: 12888654 bytes, checksum: 328d8640cfc58ce2cf35d21fabb3bc91 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-25T16:54:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NathaliaTunissiolli_dissert.pdf: 12888654 bytes, checksum: 328d8640cfc58ce2cf35d21fabb3bc91 (MD5) Previous issue date: 2017-09-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Hepatocellular Carcinoma (HCC) is the primary liver cancer with high incidence and mortality rates due to its late diagnosis. Its development results from the interaction between environmental and genetic factors. Thus, the objective of this study was to evaluate clinical, epidemiological and histopathological parameters of CHC patients submitted to liver transplant surgery from 2010 to 2016 at a University Reference Center. Materials and methods: It is a retrospective, descriptive and cross-sectional study. We evaluated all HCC patients submitted to liver transplantation from 2010 to 2016 from a University Reference Center in the Northwest of São Paulo. The variables analyzed were: age, gender, ethnicity, smoking, hepatitis B virus (HBV) infection, hepatitis C virus (HCV), cirrhosis, alcoholic liver disease (ALD), diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), genetic disease, alpha-fetoprotein (AFP), survival and relapse rate. Results: Of the 60 patients included in this study, 48 (80%) were men with a mean age of 58.3± 10.6 years. Cirrhosis was present in 100% of cases. The etiologies identified for the development of hepatopathy were 56.6% HCV, 20% of which were associated with alcohol, 20% of HBV, 1.66% of patients with hemochromatosis, 50.9% of ALD and 25% of NAFLD. In addition, AFP levels were measured in 42 patients, with 88.09% presenting levels below 20 ng/mL and 7.14% having levels >150 ng/mL. Regarding the histological classification of Edmondson-Steiner, 58.5% of the patients were classified as grade ≤ II and 41.5% grade ≥ III. Conclusion: Predominant male patients, with a mean age of 58.3 years. In relation to the histological classification of Edmondson-Steiner the degree ≤ II is the most frequent. Cirrhosis was prevalent in the studied patients. HCV, ALD and NAFLD were the most common etiological agents found in the study. The high prevalence of NAFLD in the pre-transplanted underestimated sample is due to the fact that all patients present cirrhosis, masking the NAFLD signals. / O Carcinoma Hepatocelular (CHC) é o câncer primário do fígado com altas taxas de incidência e mortalidade devido ao seu diagnóstico tardio. Seu desenvolvimento resulta da interação entre fatores ambientais e genéticos. Assim o objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros clínicos, epidemiológicos e histopatológicos de pacientes com CHC submetidos à cirurgia de transplante hepático no período de 2010 a 2016 em um Centro Universitário de Referência. Metodologia: Trata-se de um estudo retrospectivo, descritivo e transversal. Foram avaliados todos os pacientes com CHC submetidos ao transplante hepático no período de 2010 a 2016 de um Centro Universitário de Referência do Noroeste Paulista. As variáveis analisadas foram: idade, gênero, etilismo, tabagismo, infecção pelo vírus da hepatite B (VHB), vírus da hepatite C (VHC), cirrose, doença hepática alcoólica (DHA), diabetes, doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA), portador de doença genética, dosagem de alfafetoproteína (AFP), sobrevida e índice de recidiva. Resultados: De 60 pacientes incluídos neste estudo, 48 (80%) eram homens com média de idade de 58,3 ± 10,6 anos. A cirrose estava presente em 100% dos casos. As etiologias identificadas para o desenvolvimento da hepatopatia foram 56,6% VHC das quais 20% o vírus estava associada ao álcool, 20% o VHB, 1,66% portador de doença genética, hemocromatose; 50,9% de DHA e 25% de DHGNA. Além disso, os níveis de AFP foram dosados em 42 pacientes, 88,09% apresentaram níveis inferiores a 20 ng/mL e 7,14% obtiveram níveis >150 ng/mL. Em relação à classificação histológica de Edmondson-Steiner 58,5% dos pacientes foram classificados grau ≤ II e 41,5% grau ≥ III. Conclusão: Predominaram-se pacientes do gênero masculino, com média de idade de 58,3 anos. Em relação à classificação histológica de Edmondson-Steiner o grau ≤ II é o mais frequente. A cirrose foi prevalente nos pacientes estudados. VHC, DHA e DHGNA foram os agentes etiológicos mais comuns encontrados no estudo. A alta prevalência de DHGNA na amostra estudada com diagnóstico subestimado pré-transplante, se deve ao fato de todos os pacientes apresentarem cirrose, mascarando os sinais de DHGNA.

A localização da podoplanina e da ezrina nas células malignas sugere uma ligação dessas proteínas nos processos de migração e invasão tumoral, ativadas mediante a fosforilação de Rho-A. O objetivo desse estudo foi avaliar a distribuição e a correlação da podoplanina, da ezrina e da Rho-A em 91 carcinomas espinocelulares de lábio inferior, e verificar a associação dessas proteínas com as variáveis clínicas e patológicas, com a evolução e com o prognóstico dos pacientes. Os pacientes foram analisados quanto ao gênero, idade, tabagismo, etilismo, classificação pelo sistema TNM, tratamento, ocorrência de recidivas locorregionais, segundo tumor primário, além da presença de embolização vascular, infiltração perineural, muscular, glandular e comprometimento linfonodal histopatológico. Analisou-se também as expressões imuno-histoquímicas de podoplanina, ezrina e Rho-A no front de invasão tumoral e o índice de malignidade tumoral. A associação entre a podoplanina, a ezrina e a Rho-A com as variáveis clínico-patológicas e a correlação entre as proteínas foram analisadas pelos testes do qui-quadrado e de Spearman, respectivamente. A análise da sobrevivência global em 5 e 10 anos foi feita pelo estimador produto-limite Kaplan-Meier e a comparação da curva de sobrevivência pelo teste log-rank. Os resultados demonstraram uma forte expressão de podoplanina, de ezrina e de Rho-A no front de invasão dos carcinomas espinocelulares de lábio inferior. Houve uma associação significativa entre a expressão citoplasmática de podoplanina com o etilismo (p=0,024), com a recidiva locorregional (p=0,028) e com comprometimento linfonodal histopatológico (p=0,010), porém não foi detectada nenhuma associação significativa entre a ezrina e a Rho-A com as variáveis clínicas e microscópicas analisadas. Uma correlação positiva e estatisticamente significativa entre a expressão de podoplanina membranosa (p=0,000 e r =0,384) e citoplasmática (p=0,000 e r=0,344) com a expressão de ezrina, e da podoplanina membranosa com a expressão de Rho-A (p=0,006 e r=0,282) foi detectada. Nenhuma das três proteínas se mostrou fator de prognóstico significativo para os pacientes com câncer de lábio. Concluímos que a forte expressão membranosa de podoplanina nos carcinomas espinocelulares de lábio inferior pode ajudar a identificar pacientes com menor risco de recidiva locorregional. Além disso, a correlação entre as expressões da podoplanina, da ezrina e da Rho-A pelas células neoplásicas sugere uma participação conjunta destas proteínas nos processos de movimentação celular e invasão tumoral do câncer de lábio. / Immunolocalization of podoplanin and ezrin suggests a connection between these proteins in migration and tumoral invasion process, activated through Rho-A phosphorylation. The aim of this study was to evaluate the distribution and the correlation of podoplanin, ezrin and Rho-A in 91 squamous cells carcinomas of the lower lip and to verify its association with clinical and pathological features, evolution and prognostic of the patients. Patients were analyzed concerning gender, age, tobacco, alcohol, TNM classification, local and regional recurrences, second primary tumor, perineural, muscle and glandular infiltration, and histopahological lymph node metastasis. The association of podoplanin, ezrin and Rho-A expressions at tumoral invasion front and histological risk assessment of tumors were verified by chi-square test. The association between podoplanin, ezrin and Rho-A expressions with clinical and pathological variables, and the correlation of these variables were analyzed by chi-square and Spearman test, respectively. Overall survival in 5 and 10 years was calculated by Kaplan Meier method and overall curves were compared by log rank test. The results showed strong expression of podoplanin, ezrin and Rho-A at tumoral invasion front of squamous cell carcinomas of the lower lip. A significant association of strong cytoplasmic podoplanin expression and alcoholism (p=0,024), local recurrences (p=0,028) and lymph node metastasis (p=0,010) was found, although ezrin and Rho-A expressions were not associated with clinical and microscopic features analyzed. A statistically significant correlation between membranous (p=0,000 e r =0,384) and cytoplasmic (p=0,000 e r=0,344) podoplanin expressions and ezrin, and membranous podoplanin and Rho-A (p=0,006 e r=0,282) was observed. None of the proteins analyzed can be considered as prognostic factor for lip cancer. We can conclude that strong membranous podoplanin expression in squamous cell carcinoma of the lower lip can help to identify patients with lower risk of local and regional recurrences. Furthermore, the correlation of podopolanin, ezrin and Rho-A expressions suggest a cooperative participation in cell movement and tumoral invasion.

Mutação 249Ser no TP53 no Carcinoma Hepatocelular (CHC), frequente em países da África e Ásia, é uma evidência molecular de exposição à aflatoxina. O objetivo deste estudo é analisar a freqüência de 249Ser em 74 amostras de CHC no Brasil. A mutação foi analisada por RFLP e sequenciamento. A presença de vírus da hepatite B (VHB) foi analisada por PCR em tempo real. 249Ser foi encontrada em 13/74 (28%) e VHB em 13/74 (16%). A mutação foi encontrada em maior freqüência em tumores indiferenciados (OR = 2,415, IC = 1,001 - 5,824). O tamanho médio de tumores com 249Ser foi de 9,4 cm contra 5,5 cm de amostras sem a mutação (p=0,012). Não foi encontrada relação entre VHB e 249Ser. Os resultados indicam que 249Ser é um fator importante na carcinogênese do CHC no Brasil sendo associada à uma forma maior e menos diferenciada de tumor. / TP53 249Ser mutation has been proved a molecular evidence for aflatoxin-related Hepatocellular Carcinoma (HCC) and is frequent in Africa and Asia. The aim of our study was to analyze the frequency of 249Ser mutation in HCC from Brazil. We studied 74 samples of paraffin embedded HCC. 249Ser mutation was analyzed by RFLP and sequencing. Presence of HBV DNA was determined by Real-Time PCR. 249Ser was found in 21/74 (28%) samples while HBV DNA was found in 13/74 (16%). Poorly differentiated HCC was more likely to have 249Ser mutation (OR = 2.415, IC = 1.001 - 5.824). The mean tumor size of 249Ser HCC was 9.4 cm versus 5.5cm on wild type (p=0.012). HBV DNA was not related with 249Ser. Results indicate that 249Ser is an important factor of HCC carcinogenesis in Brazil and is associated with large and poorly differentiated tumors.

A radiação ultravioleta ao atingir os seres humanos em grande quantidade e durante uma longa exposição pode provocar danos específicos ao DNA, sendo causa de várias lesões como o carcinoma epidermoide de lábio e a queilite actínica, que é considerada uma lesão precedente ao aparecimento da primeira. Entre os danos causados pela radiação UV está a alteração genética do TP53, provocando anomalias na proteína por ele codificada. A produção da proteína p53 somente é recrutada em situações de estresse como: radiação ionizante, hipoxia ou ativação de oncogenes, nas quais sua função é regular o ciclo celular e ativar vias de apoptose. Contudo, sabe-se que no processo de carcinogênese não somente as alterações não reparadas do DNA são responsáveis pelo aparecimento de uma lesão. Outro fator de extrema importância nesse processo são os mecanismos de apoptose, entre os quais estão as vias do Bcl2 e do Fas. A queilite actínica normalmente é classificada segundo seus graus de displasia, o que para alguns sugeriria os passos percorridos por essa lesão até o carcinoma epidermoide de lábio já que esta lesão possui um potencial de malignização. Os resultados deste trabalho demonstraram que não há diferença estatística na expressão gênica e imuno-histoquímica de p53 entre os diversos graus de displasia. Demonstraram ainda que as vias de apoptose de Bcl2 e Fas estavam ocorrendo normalmente. Sugere-se então que não há comprovação de que ocorra uma progressão para a malignização passando por todos os graus de displasia da queilite actínica tendo, todos a mesma possibilidade de se transformarem em um carcinoma epidermoide de lábio. / The long exposition of the human tissues to the ultraviolet radiation causes DNA damages and consequently several lesions might appear. Among them, lip squamous cell carcinoma and actinic cheilitis which is considered to be a condition that precedes squamous cell carcinomas. The TP53 mutation is a well-known effect of UV radiation, leading to the synthesis of an anomalous protein. The p53 production is only recruit in stress conditions like: ionizing radiation, hypoxia or oncogene activation, where it plays a role in cell cycle regulation and apoptosis activation. Apoptosis is also a fundamental mechanism associated to carcinogenesis. Bcl2 e Fas pathways are central in the regulation of this process. It is usual to classify the epithelial dysplasia degree in actinic cheilitis as a prognosticator. This type of classification suggests a one way path towards malignization. Our results have shown that there is no statistical difference in TP53 status and p53 expression among the different degrees of actinic cheilitis epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma. Based on the findings, there is no prove that the malignant transformation occurs as the epithelial dysplasia progresses. Therefore, should be considered that any degree has the same probability to become a lip squamous cell carcinoma

Resumo: O líquen plano (LP) é caracterizado como uma doença crônica de cunho autoimune que apresenta prevalência estimada de 2% na população em geral. Há grande controvérsia quanto à classificação da Organização Mundial de Saúde de que este seria uma desordem potencialmente maligna. O presente trabalho tem como proposição avaliar a expressão das proteínas p53, MDM2 e SUMO-1 em lesões de LP bucal e comparar a expressão destas proteínas com a observada em displasia epitelial (DE) bucal e carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. A amostra por interesse foi constituída por cinco grupos de lesões em mucosa jugal. O primeiro grupo foi constituído por amostras de mucosa com aspecto clínico de normalidade (MN), o segundo por hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI), o terceiro por LP, o quarto por DE e o quinto grupo por CCE. Estas amostras teciduais foram submetidas a exame histoquímico pela técnica da hematoxilina-eosina e exame imunoistoquímico para anticorpo anti-p53, anti-MDM2 e anti-SUMO-1. Os dados foram tabulados e tratados pelos testes de Kolmogorov-Smirnov e exato de Fisher. Os resultados do presente estudo mostraram que não houve diferença estatisticamente significante da expressão de p53 quando comparado LP com DE (p=0.2042) e com CCE (p=0.0656), esta diferença estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.00001) e a MN (p=0.0007). A diferença na expressão da MDM2 não foi estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=1.0) e com CCE (p=0.9972), mas não estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.0005) e a MN (p=0.0052). Em relação à proteína SUMO-1, houve diferença estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=0.0492) e com CCE (p=0.0001), na comparação de LP com HFI (p=1.0) e com MN (p=0.8302) não houve diferença estatisticamente significante. Conclui-se pela necessidade de estudos para esclarecer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lichen planus (LP) is a chronic autoimmune disease with an estimated prevalence of 2% in the general population. Controversy exists regarding the World Health Organization classification of LP as a potentially malignant disease. The objective of this study was to investigate the expression of proteins p53, MDM2 and SUMO-1 in oral LP lesions and to compare the expression of these proteins between LP and oral epithelial dysplasia (OED) and oral squamous cell carcinoma (OSCC). The sample consisted of the following five groups of cheek mucosa lesions was studied: normal oral mucosa (NM), inflammatory fibrous hyperplasia (IFH), LP, OED, and OSCC. The tissue samples were stained with hematoxylineosin for histochemical analysis and submitted to immunohistochemistry using anti-p53, anti-MDM2 and anti-SUMO-1 antibodies. The results were analyzed by the Kolmogorov-Smirnov test and Fisher's exact test. No significant difference in the expression of p53 was observed between LP and OED (p=0.2042) or OSCC (p=0.0656). However, there was a significant difference when LP lesions were compared to IFH (p=0.00001) and NM (p=0.0007). Expression of MDM2 differed significantly between LP and IFH (p=0.0005) and NM (p=0.0052), but not between LP and OED (p=1.0) or OSCC (p=0.9972). A significant difference in the expression of SUMO-1 was observed between LP lesions and OED (p=0.0492) and OSCC (p=0.0001), but not between LP and IFH (p=1.0) or NM (p=0.8302). Further studies are needed to determine the role of inflammation as a possible malignant transformation in cases of LP. / Orientador: Janete Dias Almeida / Coorientador: Fabio Daumas Nunes / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Mestre

Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Marília Trierveiler Martins / Banca: Janete Dias Almeida / Resumo: A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal do vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O principal fator etiológico envolvido nestas doenças é a exposição excessiva ou em longo prazo à radiação ultravioleta (UV) do sol. Além dos danos diretos aos tecidos do lábio, a radiação UV induz mastócitos (MCs) a liberarem substâncias que participam do processo de imunossupressão permitindo o desenvolvimento neoplásico. Estas células também são associadas a um pior prognóstico e favorecimento a metástase de diversas neoplasias. O objetivo deste trabalho foi analisar a densidade de MCs a fim de melhorar o entendimento da patogenia da QA e o possível mecanismo de sua progressão para o CE. Estudou-se 66 casos de QA, com diferentes graus de atipia epitelial, 57 de CE e 28 casos de mucosa de lábio com lesão benigna não relacionada à exposição solar (grupo controle), diagnosticados clínica e histologicamente, no Departamento de Biociências e Diagnóstico Bucal da FOSJC-UNESP. A amostra foi corada histoquimicamente com hematoxilina-eosina e azul de toluidina e imunoistoquimicamente com anticorpo anti-triptase. Em todos os casos a contagem de MCs foi realizada em microscópio de luz, com aumento final de 400x, em três campos com área de 0,04 mm2 cada. A densidade de MCs no CE, QA e grupo controle foi de 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 ( triptase) e 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 ( azul de toluidina) cells/mm2 , respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-wallis, Wilcoxon e Dunn, adotando-se nível de significância de 5%. Houve diferença estatisticamente significante na densidade de MCs entre os três grupos estudados (p=0,0001). Concluiu-se que os MCs participam das alterações que ocorrem na matriz extra-celular da QA, o que pode ser um indício do favorecimento à malignização da QA para CE. / Abstract: Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion of lip vermillion with malignant potential to squamous cell carcinoma (SCC). The main etiology involved in this disease is excessive or long exposure to ultraviolet radiation (UV) of sunlight. UV radiation damages lip tissues, furthermore it is able to activate mast cells (MCs) that participate of immunossupression process, contributing to tumour development. These cells are associated with a worst prognosis and contribute to tumour metastasis. The aim of this study was perform an assessment of MCs density which can improve the knowledge of AC pathogenesis and the possible mechanism of its progression to SCC. Sixty six cases of AC with different levels of epithelial atypia, fifty seven cases of SCC and twenty eight cases of lip mucosa with benign lesion non related to sunlight exposure (Control group) were studied in Department of Biosciences and Oral Diagnosis of São Paulo State University/UNESP. Samples were stained by histochemistry with hematoxylin/eosin, toluidine blue and, by immunohistochemistry with antitryptase. Quantitative analysis was done in all cases by light microscopy (magnification x400), in three fields with 0,04 mm2 each one. Mast cell density in SCC, AC and control group was 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 cells/mm2 (triptase) and 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 cells/mm2 (toluidine blue), respectively. Data was analyzed by Kruskal-wallis, Wilcoxon and Dunn's tests, p-values of < 0,05. There was statistically significant difference in mast cell density between the experimental and control groups (p=0,0001). This study concluded that mast cells contribute to changes in extracelular matrix in AC and may be used as indicators for disease progression in lip carcinogenesis. / Mestre

INTRODUÇÃO: O grau histológico é um dos principais fatores prognósticos em câncer de mama. Entretanto, os carcinomas pouco diferenciados ainda constituem um grupo bastante heterogêneo de tumores, pois podem corresponder a qualquer um dos subgrupos segundo a classificação genética: basal-símile, HER2, luminal ou mama-normal. OBJETIVOS: Neste estudo nós analisamos a freqüência dos perfis imunoistoquímicos básicos quanto à expressão de receptores de estrógeno e progesterona e HER2 em carcinomas de mama com menos de 10% de formação tubular e suas relações com fatores prognósticos clássicos e com a expressão de p63, c- Kit, EGFR, VEGF-A e citoqueratinas basais e luminais. MATERIAL E MÉTODOS: Este estudo retrospectivo incluiu 134 carcinomas de mama selecionados dos arquivos da Divisão de Patologia Cirúrgica da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, de 2000 a 2003. Os tumores foram revistos e classificados quanto à expressão imunoistoquímica de receptor de estrogênio, receptor de progesterona e HER2 nos perfis luminal (receptores hormonais positivos), HER2 (HER2 positivo e receptores hormonais negativos) e triplo-negativo. O subgrupo luminal foi subdividido quanto à expressão ou não de HER2. O exame imunoistoquímico para p63, citoqueratinas basais 5, 14 e 17,VEGF-A, EGFR, c-Kit e citoqueratinas luminais 8/18 foram feitos em bloco construídos pela técnica de arranjo em matriz de amostras teciduais. As variáveis prognósticas clássicas: idade da paciente, tamanho do tumor, estado linfonodal, grau nuclear, necrose tumoral, contagem mitótica e embolização vascular linfática, foram comparadas nos diferentes subgrupos. RESULTADOS: Os carcinomas mamários invasivos pouco diferenciados confirmaram sua heterogeneidade. O subtipo luminal foi o mais freqüente (73 casos), seguido pelo subtipo triplonegativo (39 casos) e do subtipo HER2 (22 casos). O subgrupo triplonegativo apresentou a maior proporção de tumores maiores que 2,0 cm , maior freqüência de necrose e a maior taxa de expressão de citoqueratinas basais. Este subgrupo juntamente com o subgrupo HER2 expressaram maiores índices de proliferação celular. O subgrupo HER2 mostrou maior número de casos associados à presença de componente in situ e maior freqüência de detecções de embolização vascular linfática. O subgrupo luminal apresentou o maior número de casos com expressão de citoqueratinas luminais 8/18 e o menor número de tumores maiores que 2,0 cm. Quanto à expressão de citoqueratinas basais, 81 casos não as expressaram e 53 expressaram pelo menos uma delas, a maioria destes casos pertencentes ao subgrupo triplo-negativo. O fenótipo triplo-negativo esteve intimamente relacionado à expressão de citoqueratinas basais. Dentre todas as variáveis estudadas, o único fator preditivo independente associado ao perfil triplo-negativo foi a expressão de citoqueratinas basais (p<0.0001) e o único fator preditivo independente associado à expressão de citoqueratinas basais foi a presença do fenótipo triplo-negativo (p<0,0001). O subgrupo basal-símile (tumores triplo-negativo com expressão de pelo menos uma citoqueratina basal) mostrou a maior freqüência de tumores > 2,0 cm e conjuntamente com o subgrupo triplo-negativo não basal-símile, a maior freqüência de tumores com presença de necrose e com alta contagem mitótica. A comparação entre os carcinomas HER2(+) quanto à expressão de receptores hormonais mostrou maiores indicadores de atividade proliferativa no grupo de receptores hormonais (-). Por outro lado, tumores positivos para os receptores de estrógeno e/ou progesterona com o sem expressão HER2 não mostraram qualquer diferença. CONCLUSÕES: O subgrupo de tumores com receptores hormonais positivos foi o mais freqüente e com características morfológicas e imunoistoquímicas mais favoráveis que os outros subgrupos, independente da expressão de HER2, sugerindo que carcinomas de mama pouco diferenciados com expressão de pelo menos um dos receptores hormonais correspondem ao subtipo luminal B genético. Os carcinomas pouco diferenciados com imunofenótipo triplonegativo e HER2(+) são similares quanto às características morfológicas associadas à doença com potencial agressivo. No entanto, a expressão das citoqueratinas basais diferenciam os dois subgrupos, e pode sugerir o fenótipo basal-símile e o padrão de doença associado a este fenótipo. Nosso estudo mostrou que entre os carcinomas de mama pouco diferenciados de mama, o painel imunoistoquímico clássico (receptores hormonais e HER2) associado à expressão de pelo menos uma das citoqueratinas basais permitem a identificação dos distintos subtipos, equivalentes aos vistos na classificação genética / INTRODUCTION: Histological grade is one of the main prognostic factors for breast cancer. However, poorly differentiated carcinomas still make up a quite heterogeneous group of tumors since they can belong to any of the subgroups according to genetic classification: basal-like, HER2, luminal or normal breast. OBJECTIVES: In this study we have analyzed the frequency of the basic immunohistochemical profiles as for the expression of estrogen and progesterone receptors and HER2 in breast cancer with less than 10% of tubular formation, and their relation with classic prognostic factors, expression of p63, c-Kit, EGFR, VEGF-A, basal and luminal cytokeratins. MATERIAL AND METHODS: This retrospective study included 134 breast carcinomas dated between 2000 and 2003, selected from the files from the Division of Surgical Pathology, University of São Paulo Medical School. All slides were revised and classified according to immunohistochemical expression of estrogen receptor, progesterone receptors and HER2 in luminal (positive hormonal receptors), HER2 (positive HER2 and negative hormonal receptors) and triple-negative. The luminal subgroup was further divided according to expression or absence of HER2. Immunohistochemical marking for p63, cytokeratins 5, 14 and 17 and 8/18, VEGF-A, EGFR, c-Kit was done through tissue microarray. The classical prognostic variables: age, tumor size, lymph node state, nuclear grade, tumor necrosis, mitotic count and lymphatic vascular embolization were compared among the different subgroups. RESULTS: The poorly differentiated invasive breast carcinomas confirmed their heterogeneity. The luminal subtype was the most frequent (73 cases), followed by the triple-negative (39 cases) and HER2 (22 cases). The triple-negative subgroup presented the highest proportion of tumors bigger than 2.0 cm, necrosis and higher basal cytokeratin rate expression. This subgroup as well as HER2 subgroup expressed higher cellular proliferation scores. The HER2 subgroup presented the highest number of cases associated with in situ component and higher frequency of lymphatic vascular embolization detection. The luminal subgroup presented the highest expression of luminal cytokeratins 8/18 and the least number of tumors larger than 2.0 cm. As for basal cytokeratin expression, 81 cases did not present any cytokeratin at all and 53 at least one, most of them belonging to the triple-negative subgroup. The triple-negative phenotype was intimately related to the expression of basal cytokeratins. Among all the variables studied, the only independent predictive factor associated with triple-negative profile was the presence of basal cytokeratin (p<0.0001), and the only independent predictive factor associated with basal cytokeratin expression was the presence of triple-negative phenotype (p<0.0001). The basal like subgroup (triple-negative tumors with the expression of at least one basal cytokeratin) showed the highest frequency of tumors larger than 2.0 cm, and together with the non-basal like, the highest frequency of tumors with necrosis and high mitotic count. The comparison between HER2 (+) carcinomas as far as hormonal receptors, showed higher proliferative activity in the group of negative hormonal receptors. On the other hand, tumors positive for estrogen and/or progesterone receptors with or without HER2 expression did not present any difference. CONCLUSIONS: The tumor subgroup with positive hormonal receptors was the most frequent and with more favorable morphological and imunohistochemical characteristics than the other subgroups, independent of HER2 expression, suggesting poorly differentiated breast carcinomas with the expression of at least one of the hormonal receptors correspond to luminal B genetic subgroup. The poorly differentiated carcinomas with triple-negative and HER2(+) immunophenotype are similar in relation to morphological characteristics associated to the disease with aggressive potential. However, the expression of basal cytokeratins differs the two subgroups and can suggest the basal-like phenotype and the disease evolution associated with it. Our study showed that among poorly differentiated breast carcinomas, the classic immunohistochemical panel (hormonal receptors and HER2) associated with the expression of at least one of the basal cytokeratins, allow the identification of the specific subtypes, similar to the ones seen in genetic classification

O carcinoma basocelular (CBC) é uma neoplasia cutânea maligna de baixo potencial metastatizante, originada das células da camada basal da epiderme. Sua importância clínico-epidemiológica pode ser constatada pelo fato de constituir a neoplasia maligna mais comum na espécie humana, cujo principal fator etiológico é a exposição à radiação ultravioleta. Apesar da baixa incidência de metástases, a neoplasia pode adotar um comportamento localmente agressivo, com comprometimento de estruturas profundas e de forte apelo estético, como ocorre na região periocular. Uma das complicações advindas de sua infiltração neste sítio anatômico consiste na invasão de tecidos orbitários cujo tratamento é a exenteração, conduta mutiladora que consiste na retirada do globo ocular e das partes moles da órbita acometida. O objetivo deste estudo foi avaliar os casos de CBC com invasão orbitária que foram submetidos à exenteração no Hospital de Clínicas de Ribeirão Preto, no período de 1992 a 2012, para a possível identificação de fatores clínicos e morfológicos que possam predizer uma evolução desfavorável da neoplasia. Foi realizada uma coleta de dados clínicos, epidemiológicos e histopatológicos dos casos submetidos à exenteração a partir dos prontuários médicos dos pacientes. As lâminas referentes aos exames anátomo-patológicos foram revistas e foi realizado estudo imuno-histoquimico para os marcadores p53, bcl-2, actina de músculo liso e metaloproteinase-1. O grupo controle foi composto por pacientes com diagnóstico da neoplasia em topografia periocular, sem sinais de invasão orbitária. Para os casos com invasão orbitária o número de casos positivos marcados para p53 (0,21) e para actina de músculo liso (0,21) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) e MMP-1 (0,58) (p= 0,0331). Entretanto, o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) foi significantemente maior que o número de casos marcados por MMP-1 (0,58) (p=0,0126). Para os tumores sem invasão orbitária, o número de casos positivos para p53 (0,31) e actina (0,31) foi significantemente menor que o número de casos positivos para bcl-2 (0,63) eMMP-1 (0,50) (p=0,0273). Os resultados indicam que a invasão orbitaria por carcinoma basocelular palpebral ocorre com maior frequência no sexo masculino, em pacientes com longa história clínica de múltiplas lesões e submetidos a múltiplos procedimentos. Além disso, os marcadores estudados aparentemente não podem predizer um comportamento mais agressivo do tumor. / Basal cell carcinoma (BCC) is a malignant skin cancer of low metastasizing potential originated from the basal cells of the epidermis. Its clinical and epidemiological importance is evidenced by the fact that it is the most common malignancy in humans and it has as the main etiological factor the exposure to ultraviolet radiation. Despite the low incidence of metastases, the cancer can adopt a locally aggressive behavior with involvement of deep structures and it can have a strong aesthetic appeal, as in the periocular region. One of the complications arising from its infiltration in this anatomical site consists of orbital tissue invasion whose treatment is exenteration, a mutilating procedure consisting of the removal of the eyeball and the soft tissue of the affected orbit. The aim of this study was to evaluate the cases of BCC with orbital invasion that underwent exenteration at the Clinics Hospital of Ribeirão Preto Medical School, University of Sao Paulo, from 1992 through 2012, for possible identification of clinical and morphological factors that can predict an unfavorable evolution of the tumor. The clinical data were obtained from the patients\' charts and we have reviewed all the slides from exenteration specimens and performed immunohistochemical studies with p53, bcl-2, smooth muscle actin and metalloproteinase-1(MMP-1). The control group consisted of age-matched patients with eyelid basal cell carcinomas without orbital invasion. For cases with orbital invasion the number of positive cases labeled for p53 (0.21) and actin (0.21) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP -1 (0.58) (p = 0.0331). However, the number of positive cases for bcl-2 (0.63) was significantly greater than the proportion of positive cases for MMP-1 (0.58) (p = 0.0126). For cases without orbital invasion the number of positive cases for p53 (0.31) and actin (0.31) was significantly lower than the number of positive cases for bcl-2 (0.63) and MMP-1 (0.50) (p = 0.0273), even though the number of positive cases marked for MMP-1 (0.50) was not significantly different from number of positive cases for bcl-2 (0.63) (p = 0.059). The results indicate that orbital invasion of basal cell carcinoma of the eyelid was more frequent in male sex and that the patients have usually a long history of multiple lesions and were submitted to several procedures. In addition, our results suggest these markers can not predict an aggressive behavior for basal cell carcinomas of the periocular region.