Orientador: Érika Veruska Paiva Ortolan / Banca: Bonifácio Katsumori Takegawa / Banca: José Roberto de Souza Baratella / Resumo: Com a finalidade de avaliar a repercussão no prognóstico e na morbidade dos pacientes com TCG em função da adesão do cirurgião ao protocolo cirúrgico, foram analisados retrospectivamente, com ênfase nos aspectos cirúrgicos, 64 pacientes de 0 a 18 anos completos, durante o período de junho de 1996 a janeiro de 2009 em dois centros de referência para o tratamento do paciente oncológico pediátrico: Hospital Amaral Carvalho de Jaú e o Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Os dados coletados eram referentes a variáveis qualitativas e, desse modo, foram obtidas frequências e porcentagens para cada variável. As associações entre as variáveis de interesse foram feitas obtendo-se tabelas de contingência e testes qui-quadrado ou exato de Fisher. Em todos os testes foi adotado o nível de significância de 5%. Dos 64 pacientes estudados, 22 do Hospital Amaral Carvalho e 42 do Hospital das Clínicas - UNESP, com relação ao local primário, houve predomínio do ovário, seguido de testículo, sacrococcígeo, retroperitoneal, mediastino, orofaringe e útero. O tipo histológico predominante foi o teratoma puro, e o estadio I foi o mais freqüente. Quarenta e quatro pacientes foram classificados como baixo risco, e todos os 64 pacientes receberam tratamento cirúrgico, sendo em 44 deles exclusivo. A cirurgia pediátrica foi quem mais encaminhou casos operados dos serviços de origem, enquanto a ginecologia foi a especialidade que mais operou nas instituições de estudo. Quinze casos foram encaminhados com algum tipo de cirurgia e 49 encaminhados sem cirurgia. A quantidade de casos encaminhados sem cirurgia prévia foi estatisticamente significante quando comparado aos casos encaminhados com algum tipo de cirurgia. Dos 15 pacientes encaminhados com algum tipo de cirurgia, 10 seguiram o protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In order to assess the impact on prognosis and morbidity of patients with GCT according to the surgeon's accession to the surgical protocol were analyzed retrospectively, with emphasis on surgery, 64 patients 0-18 years of age, during the period of June 1996 to January 2009 in two hospitals for the treatment of pediatric cancer patients: Hospital Amaral Carvalho de Jau and the Hospital of the Medical School of Botucatu (UNESP). Data were collected regarding the qualitative variables, and thus, frequencies and percentages were obtained for each variable. The associations between the variables of interest were made by obtaining contingency tables and chisquare or Fisher exact test. In all tests, we adopted the significance level of 5%. Of the 64 patients studied, 22 of 42 Amaral Carvalho Hospital and the Hospital das Clinicas - UNESP, with respect to the primary site, there was a predominance of the ovary, followed by testis, sacrococcygeal, retroperitoneal, mediastinal, oropharynx and uterus. The predominant histological type was pure teratoma, and the stage I was the most frequent. Forty-four patients were classified as low risk, and all 64 patients received surgical treatment in 44 of them being unique. The pediatric surgery was the most referred cases operated source of services, while gynecology was the specialty that most institutions operated in the study. Fifteen cases were referred to some type of surgery and 49 conveyed without surgery. The number of cases referred without previous surgery was statistically significant when compared to cases presenting with some type of surgery. Of the 15 patients referred with type of surgery, 10 followed the protocol and not 5, while the 49 patients referred without surgery, 24 were operated on following the protocol and not 25. Although there was no statistically significant differences... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Maria Terezinha Siqueira Bombonato / Banca: Rita Luiza Peruquetti / Banca: Irani Quagio Grassiotto / Banca: Fernanda Antunes Alves da Costa / Resumo: Este trabalho descreveu o tubo digestivo de tambaqui (Colossoma macropomum), por meio de estudos anatômicos, histológicos, histoquímicos e ultraestruturais. Fragmentos de esôfago, estômago e intestino foram destinados para rotinas morfológicas e histoquímicas de mucossubstâncias. Esta espécie apresentou esôfago curto, estômago sifonal em U com pregas longitudinais espessas e intestino com pregas circulares relacionadas ao aumento do tempo de retenção do alimento. Cecos pilóricos também foram observados no intestino, associados à digestão e aumento da superfície de absorção. O esôfago apresentou epitélio estratificado pavimentoso, composto por células epiteliais com microssaliências digitiformes na superfície e células caliciformes com citoplasma repleto de grânulos de secreção, composto por mucossubstâncias neutras e ácidas. O estômago foi dividido em regiões cárdica e fúndica glandulares e região pilórica aglandular com presença de esfíncter pilórico. O epitélio de revestimento gástrico apresentou-se simples colunar com mucossubstâncias apicais que protegem a mucosa. O intestino apresentou epitélio simples colunar composto principalmente por enterócitos com microvilosidades apicais e células caliciformes que aumentaram em número na direção aboral. As células caliciformes mostraram grânulos de secreção, importantes para proteção, lubrificação e transformação do alimento em quimo. Ainda, observou-se células "rodlet" no epitélio intestinal associadas ao sistema imune de teleósteos. Os resultados apresentados possibilitaram correlacionar as características morfofuncionais do tubo digestivo de C. macropomum com outras espécies de diferentes hábitos alimentares, contribuindo para o desenvolvimento de estudos nutricionais, essenciais para a melhoria da piscicultura nacional / Abstract: The digestive tube of Colossoma macropomum, popularly known as tambaqui, was described by anatomic, histologic, histochemical and ultrastructural studies. Fragments of the esophagus, stomach and intestines were used for morphological and histochemical routine assays in mucosubstances. The C. macropomum has a short esophagus, a U-shaped syphon stomach with thick longitudinal folds and an intestine with circular folds related to an increase in time retention of food. Pyloric caeca were also reported in the intestine, associated with digestion and increase of the absorption surface. The esophagus showed a stratified epithelium composed of epithelial cells with fingerprint-like microridges on the cellular surface and goblet cells with cytoplasm filled with secretion granules composed of neutral and acid mucosubstances. The stomach was divided into the glandular cardic and fundic regions and aglandular pyloric region with pyloric sphincter. The lining gastric epithelium was simple columnar with apical mucosubstances that protects the mucosa. The intestine has a simple columnar epithelium mainly composed of enterocytes with apical microvillis and goblet cells that increased in number in the aboral direction. Goblet cells had secretion granules for protection, lubrication and transformation of food in chyme. Rodlet cells were also reported in the intestinal epithelium associated with the immune system of teleosts. The results correlated the morphofunctional characteristics of the digestive tube of C. macropomum with other species with different feeding habits, contributing to the development of nutritional studies for the improvement of Brazilian fish culture / Doutor

Orientador: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Maria Terezinha Siqueira Bombonato / Banca: Rita Luiza Peruquetti / Banca: Maíra Aparecida Stefanini / Banca: Luciene Patrici Papa / Resumo: Este trabalho descreveu o tubo digestivo Leporinus elongatus, L. macrocephalus e L. obtusidens, por meio de estudos anatômicos, histológicos, histoquímicos e ultraestruturais. Fragmentos de esôfago, estômago e intestino foram destinados para rotinas morfológicas, histoquímicas de mucossubstâncias e citoquímica para detecção de fosfatase alcalina. A estrutura do tubo digestivo das três espécies estudadas estava composta por esôfago curto, estômago cecal em formato de Y e intestino enovelado com pregas circulares relacionadas ao aumento do tempo de passagem do alimento. Cecos pilóricos foram observados no intestino anterior, associados à digestão e aumento da superfície de absorção. O esôfago apresentou epitélio estratificado pavimentoso, composto por células epiteliais e células caliciformes. As células epiteliais voltadas para o lúmen esofágico apresentaram microssaliências digitiformes na membrana plasmática apical, associadas a proteção e ancoragem de mucossubstâncias. As células caliciformes apresentaram citoplasma repleto de grânulos de secreção com eletrondensidades diferentes. Os grânulos foram compostos por mucossubstâncias neutras e ácidas em diferentes intensidades dependendo da região do órgão observada e da espécie estudada. Em L. macrocephalus foram encontrados botões gustativos na região anterior do esôfago, importantes para o paladar e seleção do alimento. O estômago foi dividido em regiões cárdica e fúndica glandulares e região pilórica aglandular com presença de esfíncter pilórico. O epitélio de revestimento gástrico apresentou-se simples colunar com mucossubstâncias apicais neutras relacionadas a proteção da mucosa contra os sucos gástricos. O intestino apresentou epitélio simples colunar composto principalmente por enterócitos com microvilosidades apicais que diminuíram em altura na direção posterior, e células caliciformes que aumentaram em número na... / Abstract: This work described the digestive tube of Leporinus elongatus, L. macrocephalus and L. obtusidens by anatomic, hislogical, histochemical and ultrastructural studies. Fragments of esophagus, stomach, and intestine were destined to morphological, histochemical and cytochemistry routines. The structure of the digestive tube of the three species studied were composed by short esophagus, Y-shaped caecal stomach and coiled intestine with circular folds related to an increase in time of food passage. Pyloric caeca were observed in the anterior intestine associated with digestion and a increase of absorption surface. The esophagus presented a stratified squamous epithelium, composed by ephitelial cells and goblet cells. The epithelial cells turned to the esophageal lumen presented fingerprint-like microridges in the apical plasmatic membrane associated to the protection and Anchorage of mucosubstances. The goblet cells presented cytoplasm filled with secretion granules showing different eletrodensities. The granules were composed of neutral and acidic mucosubstances in different instensities dependind of the organ region observed and specie studed. In L. macrocephalus were found taste buds in the anterior region of esophagus, important for taste and food selection. The stomach was divided in glandular cardic and fundic regions and aglandular pyloric region with the presence of pyloric sphincter. The gastric lining epithelium was identified as columnar simple with neutral apical mucosubstances related to musoca protection against gastric acids. The instestine presented simple columnar epithelium composed mainly for enterocytes with apical microridges that decreased in height in the posterior direction and goblet cells that increased in number toward the rectum. The enzyme alkaline phosphatase was observed in the brush border with higher intensity in the anterior intestine. The goblet cells showed neutral and acidic secretion granules important ... / Doutor

Orientador: Henrique Ferreira / Banca: Patricia Pasquali Parise Maltempi / Banca: Mauricio Bacci Junior / Banca: José Belasque Júnior / Banca: Helvécio Della Coletta Filho / Resumo: A citricultura é uma das atividades mais importantes do setor agrícolabrasileiro. A incidência de doenças como o cancro cítrico afetasobremaneira a produtividade dos pomares. Seu agente etiológico, a bactériaXanthomonas citri subsp. citri (Xac) é capaz de infectar todas as espéciescultivadas, não havendo cura para plantas afetadas. O controle eficaz para o cancro cítrico constitui a eliminação de plantas infectadas em programas rigorosos para conter a propagação da bactéria. No entanto, o relaxamento recente nas políticas de combate ao cancro cítrico em áreas como o estado de São Paulo - Brasil está contribuindo para uma maior incidência da doença. Neste aspecto, o conhecimento da biologia deste patógeno de plantas é de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias de controle da doença. No presente trabalho,estudamosa função da ORF XAC1226, que apresenta homologia com o gene minCde E. coli. Nesta ultima, minCcodifica para uma proteína inibidora da polimerização de FtsZ e com função de seleção de sítio de montagem do anel de divisão celular. MinCxac demonstrou ter uma função semelhanteque seus homólogos em Escherichia coli e Bacillus subtilis.Para fazer a caracterização funcional de minC de Xac fizemos sua deleção, que resultou nos fenótipos de filamentação e minicélula, que são encontrados em E. colie B. subtilise notamos que o mutante Xac minC apresenta ramificações que podem estar relacionadas a um posicionamento errôneo do septo. Posteriormente investigamos o padrão de localização sub-celular de GFP-MinC em Xac e percebemos um padrão de acúmulo da proteína num dos polos e um tempo depois esse acúmulo oscilava para o polo oposto demonstrado o mesmo padrão de oscilação como é observado em E. coli. Em seguida verificamos se Xac minC perdia a capacidade de infectar os hospedeiros e inoculamos em folhas de laranja pera. (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citriculture is one of the most important activities of Brazilian agriculturalsector. The incidence of diseases such as citrus canker affectsdrastically the orchards productivity. Its etiologic agent, the bacteriumXanthomonas citri subsp. citri (Xac) is able to infect all citric cultivars, withoutany treatment to the diseased plants.Effective control for citrus canker is the elimination of infected plants in rigorous programs to contain the spread of the bacteria. However, the recent relaxation in the policies against the fight of citrus canker in areas such as the state of São Paulo - Brazil is contributing to the further spread of the disease. The knowledge of the biology of this pathogen and also the mechanisms involved in plant-pathogen interactions are great worth in supporting the development of new strategies to deal with this disease.In this aspect, the knowledge of the biology of the plant pathogen is of great importance for the development of new strategies of control of the disease. In this paper, we study the function of ORF XAC1226, which has homology to the minC gene of E. coli. minC encodes an inhibitor protein of FtsZ polymerization and the cell division ring mounting site selection function. MinCxac shown to have a similar function as their counterparts in Escherichia coli and Bacillus subtilis. To make the functional characterization of Xac's MinC we made a deletion which resulted in phenotypes of minicell and filamentation, which are found in E. coli and B. subtilis and we noticed that the mutant Xac minC has branches that may be related to a wrong position of the septum. Subsequently we investigated the pattern of sub-cellular GFP-MinC in Xac and noticed a protein accumulation pattern in one of the poles and a while after this protein oscillated to the opposite pole showing the same pattern of oscillation as observed in E. coli. Then we check if Xac minC lost (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Resumo: A Doença de Chagas (DC), cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), tornou-se nos últimos anos um grave problema de saúde pública, mesmo em países não-endêmicos. Um importante desafio para os pesquisadores da doença de Chagas é estabelecer os eventos que levam alguns pacientes a desenvolver a doença crônica assintomática, ou forma indeterminada, enquanto outros evoluem para uma doença severa, com lesões em tecidos cardíacos ou gastrointestinais. Alguns estudos têm sugerido que a ausência de sintomas clínicos em indivíduos com a forma crônica indeterminada está associada a um controle eficaz da resposta imune efetora contra o parasita, que evita uma resposta inflamatória excessiva, o que resultaria em lesão tecidual. Não existem estudos com o objetivo de confirmar este mecanismo em pacientes com a forma digestiva da DC, especialmente em relação ao controle modulador de mecanismos efetores envolvendo células Th17, por células Treg. No presente estudo, nós avaliamos em pacientes com a forma digestiva da DC e em pacientes com a forma indeterminada ou assintomática a taxa de ativação Th17/Treg, através da avaliação da freqüência de células Th17 e Treg por citometria de fluxo; da expressão do mRNA para Rorγt e Foxp3, fatores de transcrição envolvidos na diferenciação dessas células, respectivamente; bem como os níveis de IL-17a e IL-10 em sobrenadantes de cultura de células mononucleares de sangue periférico (PBMC's). Foi demonstrado no presente estudo, q... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease (CD) whose etiological agent is the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi) in recent years became a serious problem of public health even in nonendemic countries. One important challenge for the researchers of Chagas disease is to establish the events that lead some patients to develop asymptomatic or indeterminate chronic disease, while others undergo severe disease with lesions in cardiac or gastrointestinal tissues. Some studies have suggested that absence of clinical symptoms in individuals with the indeterminate chronic form is associated to a fine control of effector immune responses against the parasite that avoid a perpetuated inflammatory process which results in tissue injury. There are no studies aiming to confirm this mechanism in patients with digestive form of the disease, particularly in relation to the modulatory control by Treg cells of effector mechanisms involving Th17. Here, we studied in patients with the digestive form of CD and in those with the indeterminate or asymptomatic form of the disease, the ratio Th17/Treg activation by evaluating the frequency of Th17 and Tregs cells by flow cytometry, mRNA expression for Rorγt and Foxp3, the transcription factors involved in the differentiation of these cells respectively as well as the levels of IL-17a and IL-10 in peripheral blood mononuclear cells culture supernatants. We showed that in patients with digestive form of the disease there is an imbalance in the ratio Th17/Treg cells activation ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Coorientador: Daniel Galera Bernabé / Banca: Fábio de Abreu Alves / Banca: Éder Ricardo Biasoli / Resumo: O papilomavírus humano (HPV) vem sendo associado ao carcinoma espinocelular (CEC) de orofaringe, como um possível fator etiológico. As oncoproteínas virais E6 e E7 são capazes de inibir a produção de citocinas do padrão Th1 e iniciar a produção de citocinas do padrão Th2, prejudicando a resposta celular frente à infecção. O propósito deste trabalho é avaliar o efeito das oncoproteínas virais E6 e E7 do HPV-16 sobre a resposta de células T (CD4 e CD8) de pacientes com e sem CEC de cabeça e pescoço. Foram recrutados para o estudo 20 indivíduos, sendo 10 pacientes com diagnóstico de CEC de cabeça e pescoço e 10 indivíduos sem câncer. Para avaliar a proliferação celular e liberação de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 e IL-10) das células T CD4 e CD8 frente ao estímulo com os peptídeos sintéticos dos genes E6 e E7 do HPV-16, a técnica ELISA foi utilizada. O mapeamento do DNA do HPV-16 foi realizado em amostras de plasma e saliva pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o peptídeo E7 do HPV-16 inibiu a produção das citocinas pelas células T CD4 e CD8 derivadas dos indivíduos sem câncer (6/10) e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (5/10) (p<0,05). A proteína Concanavaliana A induziu a proliferação das células T CD4 e CD8 dos indivíduos sem câncer e pacientes com CEC de cabeça e pescoço (p<0,05). As respostas celulares quanto à atividade proliferativa e a produção de citocinas dos pacientes com CEC de cabeça e pescoço foram semelhantes às respostas dos indivíduos sem câncer / Abstract: The human papillomavirus (HPV) has been associated with squamous cell carcinoma (SCC) of the oropharynx, as a possible etiologic factor. The viral oncoproteins, E6 and E7 are able to inhibit the production of Th1 cytokines and initiate the production of Th2 cytokines, damaging the cellular response to infection. The purpose of this study is to evaluate the effect of viral oncoproteins E6 and E7 of HPV-16 on the response of T cells (CD4+ and CD8+) in patients with or without SCC of the head and neck. It was recruited for the study, 20 individuals, 10 patients with SCC of the head and neck and 10 individuals without cancer. To assess cell proliferation and cytokine release (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-10) of CD4 and CD8 stimulation against synthetic peptides of the HPV-16 E6 and E7 genes, ELISA technique was used. The mapping of the HPV-16 DNA was performed in plasma and saliva samples by real time PCR. The results showed that the HPV-16 E7 peptide inhibited the production of cytokines by CD4 and CD8 T cells derived from subjects without cancer (6/10) and patients with SCC of the head and neck (5/10) (p <0, 05). The concavaline A protein induced proliferation of CD4 and CD8 T cells from individuals without cancer and patients with SCC of the head and neck (p <0.05). Cellular responses as to proliferative activity and cytokine production in patients with SCC of the head and neck were similar to the responses of individuals without cancer / Mestre

Resumo:Cães infectados com Leishmania infantum, apresentam uma redução do número de linfócitos T. PD-1(programmed cell death 1) um novo membro da família B7-CD28, é expresso por células do sistema imune e sua ligação a PD-L1 (CD274) ou PD-L2 (CD273) induz à desativação dos linfócitos T ou à apoptose. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão de PD-1 e seus ligantes bem como sua função na indução de apoptose de linfócitos T, secreção de TNF-α e IL-4, óxido nítrico e na carga parasitária em cães com leishmaniose visceral. Observamos que na leishmaniose visceral canina PD-1 e seus ligantes participam na indução da apoptose celular de linfócitos T, estão regulando a produção de óxido nítrico, TNF-α, IL-4, além da carga parasitária. Esse estudo ajuda a esclarecer o mecanismo da resposta imunológica e drogas imunoterapeuticas como anticorpos monoclonais bloqueadores que podem influenciar na LVC / Abstract:Dogs infected with Leishmania infantum showed a reduction in the number of lymphocytes T. PD-1 (Programmed cell death 1) a new member of the B7-CD28 family, it is expressed by cells of the immune system and its binding to PD-L1 (CD274) or PD-L2 (CD273) induces deactivation of T cells or apoptosis. This study aimed to evaluate the PD-1 expression and its ligands as well as their role in T lymphocyte induction of apoptosis, TNF-α and IL-4 secretion, nitric oxide production and parasite load in dogs with visceral leishmaniasis. We observed that in canine visceral leishmaniasis PD-1 and its ligands involved in induction of apoptosis of T lymphocytes, are regulating the nitric oxide production, TNF-α, IL-4, as well as the parasitic load. This study helps to clarify the mechanism of immune response and immunotherapeutic drugs such as blocking monoclonal antibodies that can influence the LVC / Orientador:Valéria Marçal Felix de Lima / Banca:Alexandra Ivo de Medeiros / Banca:Caris Maroni Nunes / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-04Bitstream added on 2014-06-13T19:25:43Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ef_me_bauru.pdf: 5543085 bytes, checksum: 90e82da3ce30b958035782b939b534c5 (MD5) / Hoje existe uma necessidade de novos polímeros com propriedades ajustadas para utilização em camadas ativas de céluas solares, uma vez que os materiais mais utilizados ainda não são eficientes, nem suficientemente estáveis, de modo que possam substituir os dispositivos de silício. O poli(3-hexiltiofeno) (P3HT), é um polímero amplamente utilizado em dispositivos fotovoltaicos, e muito importante em células solares. Tem sido relatado modificações na posição 4 das suas unidades monoméricas que levaram a novos polímeros com propriedades diferentes daquele sem modificações. O trabalho que será apresentado visou estudar as propriedades estruturais e ópticas do P3HT e possíveis alterações ocorridas devido às modificações realizadas na posição 4 de suas unidades monoméricas. Tal estudo utilizou ferramentas de cálculo de estrutura eletrônica de materiais, com os métodos PM6 e DFT. Concluímos que o P3HT em solução e no estado sólido não é plantar. Com o nosso modelo para o P3HT, através da conjunção dos métodos ZINDO-S/CIS, obtivemos um pico de absorção óptica teórico em clorofórmio de aproximadamente 385 nm, sendo este em boa concordância com o valor experimental. Em relação às substituições químicas, estudamos teoricamente 15 derivados de P3HT e os cálculos indicaram que é possível obter compostos com uma diminuiçao significativa do gap com estabilidade e solubilidade similares à do P3HT, principalmente com a ligação do átomos de oxigênio ou grupos orgânicos conjugados ao anel tiofênico / Today there is a need new polymers with properties adjusted for use in active layers of solar cells since the most employed materials still are not efficient nor stable enough so that they can replace the silicon devides. The poly(3-hexylthioplene) (P3HT), is a polymer widely used in photovoltaic devices, and very important in solar cells. It has been reported modifications at position 4 of its monomeric units that led to new polymers with different properties than the pristine one. The work that will be presented aimed to study the structural and optical properties of P3HT and possible changes due to chemical substitutions made in position 4 of the monomer units. This study used tools calculating the electronic structure materials, with PM6 and DFT methods. We conclude that the P3HT, in solution and in the solid state, is not planar. With our model for the P3HT, through the combinations of the ZINDO-S/CIS methods, we obtained a theoretical optical absorption peak in chloroform of about 385 nm, in good agreement with the experimental value. In relation to the chemical substitutions, we studied 15 derivatives of P3HT and the calculations indicated that it is possible to obtain compunds with a significant decrease in the gap with stability and solubility similar to that of P3HT, especially with the binding of oxygen atoms or conjugated organic groups to the thiophenic ring

A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.

A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.