Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T12:59:57Z No. of bitstreams: 1 texto comṕleto.pdf: 141484 bytes, checksum: ca1bc3d59113b37b3518e0aaf5c17ace (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T12:59:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto comṕleto.pdf: 141484 bytes, checksum: ca1bc3d59113b37b3518e0aaf5c17ace (MD5) Previous issue date: 2004-08-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As micorrizas são associações consideradas obrigatórias para as orquídeas que ocorrem em ecossistemas naturais, pois este grupo de plantas depende dos fungos tanto para a germinação quanto para o seu estabelecimento. O conhecimento da biodiversidade dos fungos que realizam a associação micorrízica com espécies de orquídeas brasileiras pode ser de grande importância para futuros programas de reintrodução, conservação e manejo dessa espécie vegetal. Assim, este trabalho teve por objetivo caracterizar morfológica e molecularmente alguns isolados fúngicos, do grupo rizoctonióides, de orquídeas neotropicais das regiões do Quadrilátero Ferrífero e Zona da Mata no Estado de Minas Gerais. As características morfológicas se mostraram suficientes para a classificação de isolados em nível de gênero, os quais foram classificados como pertencentes aos gêneros Ceratorhiza e Epulorhiza. A caracterização morfológica permitiu a construção de um fenograma mas não definir suas afinidades filogenéticas. Nove isolados tiveram o espaçador interno transcrito do rRNA seqüenciado, confirmando as suas identificações como pertencentes aos gêneros Ceratorhiza e Epulorhiza. Suas afinidades em relação a outros isolados com seqüências depositadas no GeneBank foram estimadas por meio de métodos filogenéticos. Os resultados demonstram grande diversidade genética destes fungos no Brasil, uma vez que os diferentes isolados obtidos neste trabalho agruparam-se a diferentes clados descritos em estudos com fungos rizoctonióides de outras regiões do mundo. Não pode ser determinada nenhuma relação de especificidade entre os isolados fúngicos e as plantas hospedeiras. / Mycorrhizal association can be considered obligates to orchids in natural ecossystems, since this group of plant depends on the fungi to both germination and stablishment in natural conditions. The biodiversity of orquids mycorrhizal fungi is the great importance to future programs of reintroduction, conservation and management of this plant species. So, the objective of this work was to characterize mycorrhizal fungi, belonging to rizoctoniods groups, morphological and mollecularlly, isolated from neotropical orquids from Quadrilátero Ferrífero and Zona da Mata of Minas Gerais State, Brazil. Morphological characterisitics were sufficient to classify the isolates to Genus level, which were classified as belonging to Ceratorhiza and Epulorhiza. Using morphological characteristics it was possible to build a phenogram but not to define phylogenetics afinities. Nine isolates was sequenced using ITS of rRNA, confirming their identity as Ceratorhiza and Epulorhiza. The affinities to another isolates, which have the sequences deposited in GeneBank, were estimated by phylogenetic methods and showed high diversity of these group of the fungus in Brazil, since different isolates used in this work agrouped to distint clade compared to that described in another regions of the world. It was not possible to determine any specificity relationship between isolates of the fungi and host plants.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T14:33:21Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 21140 bytes, checksum: f257be804d9a30cfb29d742fcc325158 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T14:33:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 21140 bytes, checksum: f257be804d9a30cfb29d742fcc325158 (MD5) Previous issue date: 2005-01-14 / O objetivo deste trabalho foi caracterizar a formação de basidiósporos de Pisolithus sp., bem como os eventos de meiose, mitose pós-meiótica e o acúmulo de reservas lipídicas durante o desenvolvimento dos basidiocarpos fúngicos. Os estudos foram conduzidos em corpos de frutificação frescos, coletados sob florestas de Eucalyptus spp., na Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG. Os eventos envolvidos na formação dos basidiósporos foram analisados utilizando-se técnicas de microscopia ótica, microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de varredura e cromatografia gasosa. Pisolithus sp. produz oito esporos por basídio, envolvidos em matriz gelatinosa, no interior dos peridíolos constituintes do basidioma. Os esporos apresentam de 6 a 8 μm de diâmetro, são globosos, equinatos, com espículas embotadas. Previamente à formação dos basidiósporos, as células das hifas constituintes do peridíolo diferenciam-se em basídios clavados com 12 a 18 μm de comprimento e 6 a 8 μm de diâmetro. Os basidiocarpos apresentam abundante quantidade de lipídeos totais distribuídos nos basídios e nos esporos. A análise da composição de ácidos graxos revelou a presença de 17 compostos com cadeias de 14 a 20 carbonos, na maioria insaturados, contendo uma ou duas insaturações. A composição e o conteúdo em ácidos graxos variou de acordo com o estádio de desenvolvimento dos peridíolos. Nos basidiósporos livres, os ácidos graxos predominantes foram 16:0, 16:1w5c, 18:1w9c e a mistura 18:2w6,9c/18:0ante, sugerindo que o ácido oléico seja o principal ácido graxo constituinte das reservas lipídicas dos basidiósporos. Na formação do diplóide, a cariogamia pode ocorrer tanto no basídio quanto nas células das hifas sub- basidiais ou sub-apicais, seguindo-se os eventos característicos da divisão meiótica. Após a formação da tétrade meiótica nos basídios, há a ocorrência de uma rodada de divisão nuclear mitótica, resultando na produção de oito núcleos na célula basidial. Os núcleos formados migram para dentro dos basidiósporos de forma assincrônica. Durante os eventos de migração, os núcleos haplóides adquirem a forma de fuso, sugerindo a participação de microtúbulos no transporte dessas organelas. Este estudo constitui o primeiro relato dos processos de divisão e migração nuclear em Pisolithus durante a formação dos basidiósporos e da presença e distribuição de ácidos graxos no basidiocarpo desse fungo. O conhecimento das etapas de formação dos basidiósporos e das características das reservas de carbono presentes nesses propágulos permitirá o desenvolvimento de estratégias que visem elucidar os fatores que influenciam o processo de germinação dos basidiósporos de Pisolithus sp., viabilizando a utilização desses esporos como inoculantes, em viveiros florestais, e na pesquisa genética focalizada na associação ectomicorrízica. / The objective of this work was to characterize the formation of Pisolithus sp. basidiospores as well as the events of meiosis, post-meiotic mitosis, and the accumulation of lipid reserves during the development of the fungal basidiocarps. This study was conducted in fresh fruit bodies collected under Eucalyptus spp. forests at Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG. The events involved in the development of the basidiospores were analyzed using light microscopy, fluorescent microscopy, scanning electron microscopy, and gas chromatography. Pisolithus sp. produces eight spores per basidium imbibed in a gelatinous matrix inside the peridioles constituting the basidiome. The spores are, approximately, 6 to 8 μm in diameter, globose, echinate, with blunt spines. Previously to the formation of the basidiospores, hyphal cells forming the peridioles differentiate into clavate basidia with 12 to 18 μm in length, and 6 to 8 μm in width. The basidiocarps present abundant quantities of total lipids distributed in hyphae, basidia, and basidiospores. Composition analyses of fatty acids revealed the presence of 17 compounds with 14 to 20 carbon atoms, mostly insaturated, containing one or two insaturations. The composition and content of fatty acids varied according to the developmental stage of the peridioles. Inside free basidiospores, the predominant fatty acids were 16:0, 16:1w5c,18:1w9c, and the mixture 18:2w6,9c/18:0ante, suggesting that oleic acid is the main fatty acid making up the lipid reserves of the spores. ixDuring diploid formation, karyogamy can take place either in the basidia as well as in subbasidial or subapical hyphal cells, followed by the typical events of meiotic division. After the formation of the meiotic tetrad in the basidia, one round of mitotic nuclear division occurs, resulting in the production of eight nuclei per basidial cell. The newly-formed nuclei migrate into basidiospores asynchronously. During the migration events, the haploid nuclei acquire a fusiforme shape, suggesting the participation of microtubules in the nuclear transport into spores. This work is the first report on the nuclear division and migration in Pisolithus during the formation of basidiospores and on the presence and distribution of fatty acids in the basidiomata of this fungus. A thorough understanding of the main stages of basidiospore formation and of the main characteristics of the carbon reserves present within these spores will allow the development of strategies aiming at the elucidation of the factors that influence the germination of Pisolithus sp. basidiospores. This will ultimately make possible the use of these spores as inoculants in forest nurseries and in the genetic research focused on the ectomycorrhizal association.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T18:42:49Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 22408 bytes, checksum: e3f5068222be03351cd7ba5bce93b7f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T18:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 22408 bytes, checksum: e3f5068222be03351cd7ba5bce93b7f8 (MD5) Previous issue date: 2005-12-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho, elementos transponíveis da Classe I e da Classe II foram caracterizados no genoma do fungo Crinipellis perniciosa, agente causal da enfermidade conhecida como vassoura-de-bruxa no cacaueiro. C. perniciosa apresenta uma alta variabilidade genética e elementos transponíveis têm sido relatados como um dos principais agentes responsáveis pela alta plasticidade e adaptabilidade apresentada por fungos fitopatogênicos. Buscas preliminares feitas no banco de dados do Projeto Genoma da Vassoura-de-Bruxa revelaram a presença de uma seqüência de DNA com similaridade a transcriptase reversa de elementos da Classe I pertencente ao grupo gypsy/Ty3. Esta seqüência foi amplificada em diferentes isolados de C. perniciosa que pertencem aos biótipos C, S e L e distintas regiões geográficas. Seqüenciamento de fragmentos amplificados revelaram a ocorrência de vários eventos de transição G:C para A:T, indicando a existência de um possível mecanismo de silenciamento tipo RIP. Análises de hibridização mostraram a presença de um alto número de cópias da região que codifica a transcriptase reversa e diferentes perfis de hibridização nos isolados dos biótipos C, S e L, indicando que os elementos que contém estas seqüências podem ter um importante papel na variabilidade de C. perniciosa. O fragmento de DNA contendo a seqüência de transcriptase reversa foi utilizado para o isolamento de fagos recombinantes em um banco genômico de C. perniciosa. Retrotransposons do grupo gypsy/Ty3, denominados CpSaci1 e CpSaci2, foram caracterizados a partir de uma nova seqüência presente no banco de dados do Projeto Genoma da Vassoura-de- Bruxa e de um dos fagos recombinantes obtidos. CpSaci1 possui 6.856 pares de bases (pb) e contém longas repetições terminais (LTRs) diretas de 423 pb que não apresentam regiões normalmente encontradas em LTRs de retrotransposons. Duas seqüências de leitura aberta (ORFs) foramidentificadas codificando peptídeos similares à GAG e à poliproteína POL contendo os domínios protease, transcriptase reversa, RNase H e integrase. A seqüência de DNA de CpSaci2, que foi parcialmente caracterizada, possui cerca de 82% de identidade com CpSaci1. Estas duas cópias apresentam inserções de bases e códons de parada na região estrutural indicando que se tratam de cópias inativas. Entretanto, análises por RT-PCR revelaram a presença de transcritos CpSaci normalmente expressos em C. perniciosa cultivado em meio mínimo, e que, sob condições de estresse nutricional, apresentaram uma maior expressão. CpSaci está presente em alto número de cópias no genoma dos biótipos C, S e L de C. perniciosa, sendo que isolados do biótipo C originados do estado da Bahia apresentam dois perfis de hibridização, e alguns fragmentos de DNA em comum com isolados da região amazônica. Por possuir alto número de cópias e ser ativo, o retrotransposon CpSaci provavelmente está relacionado com a geração de variabilidade genética em C. perniciosa. Além do retrotransposon CpSaci, elementos transponíveis da Classe II também foram caracterizados. As cópias denominadas Boto1 e Boto2 foram obtidas a partir do banco de dados do Projeto Genoma da Vassoura-de-Bruxa e a partir de um fago recombinante isolado de um banco genômico de C. perniciosa, respectivamente. Boto1 é flanqueado por uma duplicação de 3 pb (TAA) e possui duas ORFs, uma que codifica uma transposase e outra que codifica uma proteína com baixa similaridade a um regulador da transcrição de plantas. As regiões estruturais que codificam as transposases de Boto1 e Boto2 são interrompidas por um intron de 53 pb com alto conteúdo A+T. As transposases de Boto1 e Boto2 são altamente similares à transposases de elementos PIF-like. Estas transposases são relacionadas à transposases de seqüências de inserção do grupo IS5 de bactérias e fazem parte de uma nova família de transposons da Classe II denominada PIF/IS5. A superfamília PIF/IS5 é raramente encontrada em fungos, e como análises filogenéticas indicam que as transposases Boto-like formam um ramo evolutivo independente, estas seqüências parecem ter sido transferidas horizontalmente para o genoma de C. perniciosa. Transcritos Boto- like foram amplificados por RT-PCR em C. perniciosa normalmente cultivado em meio de cultura, mas não foram ativados por estresse nutricional. Este é o primeiro relato de elementos da superfamília PIF/IS5 em um fungo fitopatogênico. / In this work, Class 1 (RNA) and Class 2 (DNA) transposable elements were characterized in the genome of Crinipellis perniciosa, the causal agent of the witches’ broom disease of cocoa. C. perniciosa presents a high genetic variability and transposable elements have been reported as the main agents responsible for the high plasticity and adaptability presented by phytopathogenic fungi. Once the genome of this fungus has been sequenced, preliminary searches in the database of the witches’ broom genome project revealed the presence of a DNA sequence with similarity to the reverse transcriptase of gypsy/Ty3-like retrotransposons. This sequence was amplified in different C. perniciosa isolates that belong to the C-, S-, and L-biotypes and to different geographical areas. The sequencing of the amplified fragments revealed the occurrence of several G:C to A:T transitions, indicating the existence of a possible RIP-like silencing mechanism. Southern analyses showed a high copy number of the reverse transcriptase gene with different profiles among the C-, S- and L- biotypes, indicating that the elements that contain these sequences may have an important role in C. perniciosa genetic variability. The DNA fragment containing the reverse transcriptase gene sequence was used to isolate different recombinant phages from a C. perniciosa genomic library. Gypsy/Ty3-like retrotransposons, named CpSaci1 and CpSaci2, were characterized from a new sequence present in the sequencing project database and from one recombinant phage. CpSaci1 contains 6.856 bp and long direct terminal repeats (LTRs) of 423 bp that do not present regions usually found in LTRs. Two open reading frame (ORFs) were identified and they code proteins with similarity to GAG and to a POL polyprotein showing protease, reverse transcriptase, RNase H, and integrase domains. Partially characterized DNA sequence of CpSaci2 possesses about xi82% of identity to CpSaci1. The copies CpSaci1 and CpSaci2 present punctual base insertions and stop codons in the structural region indicating that they are inactive copies. However, RT-PCR analyses revealed the presence of CpSaci- like transcripts expressed in C. perniciosa, presenting a higher expression under nutritional stress conditions. CpSaci is present in high copy number in the genome of the C-, S- and L-biotypes. The C-biotype isolates from Bahia state, Brazil, present two hybridization profiles and some DNA fragments similar to those of the isolates from the Amazon region. Once CpSaci presents a high copy number and activity, it is probably related to the generation of genetic variability in C. perniciosa. Besides the CpSaci retrotransposon, a Class II transposable element was also characterized. Two copies, named Boto1 and Boto2, were obtained from the genome sequencing database and from a recombinant phage obtained from a C. perniciosa genomic library, respectively. Boto1 is flanked by a 3 bp duplication (TAA) and possesses two ORFs, one that codes a transposase and another that codes a protein with low similarity to a plant transcription regulator. The structural regions that code the transposases of Boto1 and Boto2 are interrupted by a 53 bp intron with high A+T content. The aminoacid sequence of Boto1 and Boto2 transposases are highly similar to plant PIF-like transposases. These transposases are related to those of bacterial insertion sequences of the group IS5 and they are members of a new superfamily of Class II transposons named PIF/IS5. Once this superfamily is rarely found in fungi and phylogenetic analyses indicate that Boto1 and Boto2 transposases present an independent evolutionary branch, it seems that these sequences were horizontally transferred to C. perniciosa genome. Although Boto-like transcripts were amplified in C. perniciosa normally cultivated in culture medium, they were not activated by nutritional stress. This is the first report of elements of the PIF/IS5 superfamily in a phytopathogenic fungus.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T11:54:47Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19644 bytes, checksum: 54f0c36ee9445a27674f067adaa45848 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T11:54:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19644 bytes, checksum: 54f0c36ee9445a27674f067adaa45848 (MD5) Previous issue date: 2005-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O crescimento de 14 isolados de Escherichia coli, Yersinia enterocolitica e Salmonella spp., obtidos de carnes, carcaças e fezes suínas, foi avaliado em diferentes condições de cultivo. Treze isolados (92,8%) não cresceram na presença de 0,5% de ácido lático e de 10% de cloreto de sódio em meio Infusão Cérebro e Coração (BHI). As concentrações de 3,5% e, mais acentuadamente, 5% de cloreto de sódio reduziram o crescimento de todos os isolados nesse mesmo meio. A adição de até 0,02% de nitrito de sódio não afetou o crescimento dos isolados em BHI. O crescimento das estirpes E. coli CS5 e Salmonella sp. CCS1 e CCS2 em homogenato de carne suína foi menor na presença de 3,5% de cloreto de sódio. Os isolados E. coli CS3, Y. enterocolitica CS6 e Salmonella sp. CCS1 mostraram redução no crescimento com a adição de 0,015% de nitrito de sódio ao homogenato. Quando 3,5% de cloreto de sódio e 0,015% de nitrito de sódio foram adicionados ao homogenato, os isolados E. coli CS1 e Salmonella sp. FS3, FS7 e CCS3 foram inibidos. O crescimento dos demais isolados não foi afetado pela adição desses sais. A sobrevivência de seis isolados de Salmonella spp. inoculados em carne suína mantida a -15 °C por 20 semanas também foi avaliada. Após o período de estocagem, constatou-se redução média de 1,4 ciclo logarítmico na população. Salmonella sp. CCS4 apresentou a menor redução, aproximadamente 1,16 ciclo logarítmico. Salmonella sp. FS10 perdeu mais que 99% de culturabilidade, após incubação em solução salina com 0,85% e 3,5% de cloreto de sódio a 4 °C por 30 dias. A susceptibilidade dos isolados a dez antimicrobianos foi investigada. Os quatorze isolados apresentaram resistência à tetraciclina. Sete isolados (50%) foram resistentes a pelo menos dois antimicrobianos. Seis isolados (42,8%) exibiram resistência a três antimicrobianos: um isolado de E. coli, proveniente de carne suína (E. coli CS4) e cinco de Salmonella spp., sendo um obtido de fezes suínas (Salmonella sp. FS7) e os demais de carcaças suínas (Salmonella sp. CCS1, CCS2, CCS3 e CCS4). A multirresistência foi observada para os antimicrobianos tetraciclina, sulfametoxazol/trimetoprim, cloranfenicol e ácido nalidíxico. As concentrações mínimas inibitórias (CMI) do promotor de crescimento olaquindox foram determinadas para cada isolado e variaram de 15 a 60 μg/mL. Os maiores valores de CMI foram de 60 μg/mL para Y. enterocolitica CS6 e 50 μg/mL para Salmonella sp. FS7 e CCS3. / The growth of fourteen isolates of Escherichia coli, Yersinia enterocolitica and Salmonella spp. isolated from pork, swine carcasses and feces was evaluated at different conditions. In the presence of lactic acid 0,5 % and sodium chloride 10 % in brain heart infusion medium (BHI) 13 isolates (92,8 %) did not grow. Sodium chloride 3,5 % and 5 % concentration, more strongly, inhibited the growth of all isolates in the same medium. Addition of up to 0,02% of sodium nitrite did not affect the growth of isolates in BHI. The growth of E. coli CS5, Salmonella sp. CCS1 and CCS2 in pork homogenate was inhibited in the presence of sodium chloride 3,5%. Sodium nitrite 0,015% in pork homogenate inhibited the growth of the isolates E. coli CS3, Y. enterocolitica CS6 and Salmonella sp. CCS1. When both sodium chloride 3,5% and sodium nitrite 0,015% were added to the growth medium E. coli CS1, Salmonella sp. FS3, FS7 and CCS3 were inhibited. The growth of other isolates was not affected by addition of those salts to homogenate. The survival of six isolates of Salmonella spp in pork maintained at - 15°C for 20 weeks was also evaluated. After the storage period, the average reduction in population was 1,4 log 10 CFU ml -1 . Salmonella sp. CCS4 presented the smallest reduction, approximately 1,16 log 10 CFU ml -1 . Salmonella sp. FS10 lost more than 99% of its culturability after incubation in NaCl saline solution 0,85% and 3,5% at 4 °C for 30 days. The susceptibility of the isolates xto ten antimicrobials was investigated. Fourteen isolates were resistant to the antimicrobial tetracycline. Seven isolates (50%) were resistant to at least two antimicrobials. Six isolates (42,8%) exhibited resistance to three antimicrobials: one isolate of E. coli from pork (E. coli CS4) and five of Salmonella spp., one obtained from swine feces (Salmonella sp. FS7) and the others from swine carcasses (Salmonella sp. CCS1, CCS2, CCS3 and CCS4). The multidrug-resistance was observed for the antimicrobials tetracycline, sulfametoxazol/trimetoprim, chloranfenicol and nalidixic acid. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the growth promoter olaquindox was determined for each isolate and varied from 15 to 60 μg.ml -1 . The highest value of MIC was 60 μg ml -1 for Y. enterocolitica CS6 and 50 μg ml -1 for Salmonella sp. FS7 and CCS3.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T12:02:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1276596 bytes, checksum: e320e36eac8ecfc4d887e0c9f618329e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T12:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1276596 bytes, checksum: e320e36eac8ecfc4d887e0c9f618329e (MD5) Previous issue date: 2005-04-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Por meio de um mecanismo denominado quorum sensing, diversas bactérias podem comunicar-se umas com as outras e coordenar a expressão gênica de acordo com a densidade populacional de forma semelhante aos organismos multicelulares. Este trabalho teve como objetivo investigar a produção de moléculas sinalizadoras de quorum, conhecidas como homoserinas lactonas aciladas (AHLs), por bactérias psicrotróficas proteolíticas isoladas de leite cru refrigerado. Verificou-se também se a atividade proteolítica de Pseudomonas fluorescens 07A é dependente da densidade populacional. Foram avaliados 53 isolados psicrotróficos proteolíticos e sete estirpes ATCC quanto à produção de AHL em meio sólido utilizando as bactérias Agrobacterium tumefaciens A136, Chromobacterium violaceum CV026 e Escherichia coli pSB403 como sistemas monitores ou sensores da presença de AHL. A produção de moléculas sinalizadoras foi freqüente entre os isolados psicrotróficos proteolíticos, constatando-se que, aproximadamente, 89 % das estirpes avaliadas foram produtoras de AHL. A extração de moléculas autoindutoras foi realizada em dois isolados, Serratia liquefaciens 016 e P. fluorescens 07A e, a presença de AHL nos extratos foi confirmada pelas estirpes monitoras C. violaceum CV026 e A. tumefaciens KYC55, respectivamente. A produção de AHL pelo isolado P. fluorescens 07A foi determinada em meio de cultivo à base de triptona suplementado com 0,25 % de cálcio (TYEP + CaCl 2 0,25 %) e em meio de constituição mínima (MMS), utilizando a estirpe monitora A. tumefaciens KYC55. Em meio TYEP + CaCl 2 0,25 % a produção de AHL(s) alcançou o máximo ao final da fase logarítmica, quando a população de P. fluorescens 07A foi da ordem de 10 9 UFC mL -1 . Esta mesma população resultou em uma concentração de AHL(s) cerca de três vezes menor no MMS. Os resultados indicaram que a produção de AHL pode estar sob controle de autoindução. O crescimento e a atividade proteolítica do isolado 07A foram avaliados em seis meios de cultivo. Não foi observada diferença no crescimento do isolado nos diferentes meios, exceto no MMS, onde a estirpe cresceu de forma mais lenta. Entretanto, a produção de proteases foi maior em meio TYEP + CaCl 2 0,25 % e em leite desnatado reconstituído (LDR 12 %). A detecção da atividade proteolítica só foi possível quando a cultura atingiu concentração populacional elevada em todos os meios avaliados, excetuando-se no meio MMS, quando a atividade proteolítica foi detectada em uma densidade populacional 10 vezes menor. Nos meios a base de triptona o pH aumentou para valores próximos a 8,5. Meios contendo íons Ca +2 apresentaram grande fluorescência ao final do período de incubação, indicando maior produção do sideróforo pioverdina. A adição de duas AHLs sintéticas não afetou o crescimento e a atividade proteolítica da estirpe P. fluorescens 07A em meio TYEP + CaCl 2 0,25 %. Quando comparada ao controle, a atividade proteolítica específica de P. fluorescens 07A não foi afetada significativamente, ao nível de 5% de probabilidade, pela suplementação do meio TYEP + CaCl 2 0,25 % com extrato de AHL obtido da própria estirpe. O quorum sensing pode não estar regulando a atividade proteolítica em P. fluorescens 07A. / In a process called quorum sensing, a range of bacterial cells communicate and coordinate the expression of multiple phenotypes according to cell density. This work aimed to evaluate the production of signaling molecules known as N-acyl homoserine lactone (AHL) by psychrotrophic proteolytic bacteria isolated from raw milk as well as to verify if the proteolytic activity of Pseudomonas fluorescens 07A is under the control of quorum sensing. Fifty three psychrotrophic isolates and seven ATCC cultures were screened for the production of AHL in agar systems using the monitor strains Agrobacterium tumefaciens A136, Chromobacterium violaceum CV026 and Escherichia coli pSB403. It was verified that almost 89 % of the psychrotrophic isolates tested elicited a positive response in at least one of the monitor strains of AHL. Signaling molecules were extracted from Serratia liquefaciens 016 and P. fluorescens 07A and the presence of AHL was detected with the monitor strains C. violaceum CV026 and A. tumefaciens KYC55, respectively. The production of AHL by the strain 07A was evaluated in a complex medium (TYEP + CaCl 2 0,25 %) and a defined medium (MMS). A. tumefaciens KYC55 was used to quantify AHL in this assay. In TYEP + CaCl 2 0,25 % the AHL concentration reached a maximum value at the end of xvthe stationary phase, when the population of P. fluorescens 07A was 10 9 CFU mL -1 . When MMS medium was used, a similar cell population was achieved, but the AHL concentration was three fold lower. The results indicated that AHL production by P. fluorescens 07A could be regulated by autoinduction. The growth and proteolytic activity of the P. fluorescens 07A were monitored in six different media. It was not observed difference in the specific growth rate of the strain in the media tested, except in MMS, where it grew slower. On the other hand, the protease activity was higher in the complex medium (TYEP + CaCl 2 0,25 %) and reconstituted skimmed milk (LDR 12 %). Proteolytic activity was only detected when the culture reached high population densities (10 8 UFC mL -1 ) in all media evaluated. In MMS, proteolytic activity was detected at lower population densities (10 7 UFC ml -1 ). An increase in pH values was observed during cultivation in media containing tryptone. The emission of fluorescence was intensified in media containing calcium. The addition of two synthetic AHLs did not affect the growth rates and the proteolytic activity of the strain 07A in TYEP + CaCl 2 0,25 %. Furthermore, the addition of AHL extracted from the culture did not increase the specific proteolytic activity in TYEP + CaCl 2 0,25 %. These results indicate that quorum sensing may not have a direct role in the regulation of protease production in P. fluorescens 07A.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T12:26:10Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 18256 bytes, checksum: ec60d71ddac70af12d876c9945806d90 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T12:26:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 18256 bytes, checksum: ec60d71ddac70af12d876c9945806d90 (MD5) Previous issue date: 2005-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho foram realizadas a clonagem e a caracterização parcial de um fragmento de 7,1Kb contendo o gene que codifica a nitrato redutase no fungo basidiomiceto Crinipellis perniciosa. A análise da seqüência parcial desse fragmento revelou a organização em cluster do gene nia com o gene que codifica a nitrito redutase e permitiu uma comparação filogenética com seqüências homólogas em outros fungos filamentosos. Foi realizada, também, a análise parcial comparativa das seqüências putativas das proteínas homólogas ao regulador geral positivo AREA, ao regulador específico NIRA e ao transportador de nitrato CRNA, depositadas no banco de dados do projeto genoma de C. perniciosa. O alinhamento das seqüências revelou maior proximidade genética de C. perniciosa ao fungo basidiomiceto Hebeloma cylindrosporum. A caracterização do gene nia em dez isolados de C. perniciosa de distintos biótipos e regiões geográficas por PCR-RFLP e hibridização revelou polimorfismo para os isolados do biótipo-S e biótipo-L. Não foi possível agrupar os isolados por hospedeiro ou região geográfica a partir da comparação das seqüências do gene que codifica a nitrato redutase, porém, os dados evidenciaram variabilidade genômica intraespecífica nessa espécie. A transformação da linhagem mutante niaD- de Penicillium griseoroseum, PG63, com o plasmídeo contendo o fragmento de 7,1 Kb resultou no isolamento de poucos transformantes. A complementação da mutação em P. griseoroseum, com o gene heterólogo do basidiomiceto C. perniciosa demonstrou que o gene niaCP é expresso e funcional, sugerindo estar sujeito a um controle de regulação similar ao do gene niaD desse organismo. A análise da regulação do gene nia de C. perniciosa por RT-PCR foi feita a partir de RNA total extraído de micélio cultivado em diferentes fontes de nitrogênio. O transcrito detectado na presença de nitrato como indutor e ausência de fontes de nitrogênio prontamente metabolizáveis sugere uma via de regulação específica e geral. A transcrição do gene niaCP foi ativada também no micélio cultivado no meio acrescido do fruto de cacau liofilizado e moído. Estes resultados sugerem uma provável importância da enzima nitrato redutase para C. perniciosa durante o seu desenvolvimento no hospedeiro. / In this study cloning and partial characterization of a 7.1Kb fragment containing the gene that encodes nitrate reductase in the basidiomycete fungus Crinipellis perniciosa were performed. The analysis of the partial sequence of this fragment revealed a cluster organization of nia gene with the gene encoding nitrite reductase and allowed a phylogenetic comparison among homologous sequences of other filamentous fungi. A partial comparative analysis was done for putative sequences of proteins homologous to the positive general regulator AREA, the specific regulator NIRA and the nitrate transporter CRNA deposited in the data bank of the genome project of C. perniciosa. Sequences alignment revealed a closer genetic proximity of C. perniciosa to Hebeloma cylindrosporum. The characterization of nia gene in ten isolates of C. perniciosa from different biotypes and geographic regions of C. perniciosa by PCR-RFLP and hybridization revealed a polimorfism for isolates of the biotype S and biotype L. It was not possible to group the isolates by host or geographic region through nitrate reductase gene sequences, but these data evidenced an intraspecific genomic variability in this species. The transformation of niaD- mutant of Penicillium griseoroseum, PG63, with the plasmid containing the xi7.1Kb fragment resulted in the isolation of few transformants. The complementation of the mutation in P. griseoroseum with the heterologous gene of the basidiomycete C. perniciosa showed that niaCP gene is expressed and functional, which suggests that it is under a regulation control similar to the one of niaD gene of this organism. The analysis of the regulation of nia gene in C. perniciosa by RT-PCR was performed from total RNA extracted from cultivated mycelium in different nitrogen sources. The transcript detected in the presence of nitrate as inductor and in the absence of nitrogen sources readily metabolized suggests a specific and general regulation pathway. The transcription of niaCP gene was also activated in the mycelium cultivated in the medium added with lyofilized and triturated cacao fruit. These results suggest a probable importance of the nitrate reductase enzyme for C. perniciosa during its development in the host.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-19T13:31:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 374341 bytes, checksum: 3a803e02d833c5ebb271e242c66f17ea (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T13:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 374341 bytes, checksum: 3a803e02d833c5ebb271e242c66f17ea (MD5) Previous issue date: 2000-07-14 / A maioria dos alimentos que compõem a ração dos animais em uma propriedade agrícola deve ser desintegrada, picada ou moída, utilizando-se equipamentos próprios, entre eles os denominados DPM (Desintegrador/Picador/Moedor). O objetivo deste trabalho consistiu então na avaliação comparativa do desempenho de cinco marcas comerciais deste tipo de equipamento. Avaliaram-se a demanda de potência, a capacidade de processamento, o consumo específico de energia, a distribuição granulométrica do produto moído pelo DPM e o nível de ruído no posto de trabalho. Durante os testes, também foram observados aspectos relacionados à segurança operacional, ergonomia, vazamentos e contaminação do ambiente com pó do produto em suspensão. Para avaliar o desempenho de cada moedor, o consumo específico foi calculado com cinco velocidades angulares distintas, e com quadro diferentes taxas de processamento. Foram determinados os consumos específicos das quatro peneiras (0,8; 3; 5; e 10 mm) que acompanham os equipamentos. Foram observados uma baixa capacidade de processamento e alto consumo específico de energia para peneira 0,8 mm, recomendada para a produção de fubá, sendo sugerida sua substituição pela de 3 mm, que apresenta distribuição granulométria semelhante à encontrada no fubá comercializado no mercado local. A máquina 4 apresentou o menor consumo específico de energia para peneira 3 mm e as peneiras de 5 e 10 mm não apresentaram diferenças significativas entre si. O nível de ruído medido durante os ensaios em todas as máquinas esteve bem acima do limite de 85 dB(A), recomendado pelo Ministério do Trabalho. As máquinas avaliadas não tinham dispositivos de proteção e paras as correias de acionamento e a bica de alimentação. / Most components of animal ration in a farm must be disintegrated, chopped or crushed, with adequate equipment, among them the ones designated DPM (disintegrator/chopper/grinder). The objective of this work was to compore the performance of five corn grinders. It was evaluate the power demand, processing capacity, specific energy consumption, granulometric distribution of the product output by the machine and noise at work place. During the tests, aspects related to operational safety, ergonomics, leaks and environmental contamination by the product dust in suspension were also observed. The specific consumption was measured in five different angular speeds and with four different processing rates. The specific consumption of four sieves (0.8; 3; 5 and 10 mm) were determined. It was observed a low processing capacity and a high specific consumption of energy for sieve 0.8 mm, recommended for corn flour production, suggesting its replacement to for the 3 mm sieve, which presents a similar granulometric distribution to the one found in the local market commercialized flour. Machine 4 presented the smallest energy specific consumption for sieve 3mm, and sieves 5 and 10 mm were not different to each other. The level of measured noise during the assays in all machines was well above the limit of 85 dB(A), recommended by the Ministrv of Labour. The tested machines did not present protection devices for the driving belts and for the feeding spout. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-19T13:57:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 417650 bytes, checksum: a56f647190c27b52b1c4108251c045df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T13:57:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 417650 bytes, checksum: a56f647190c27b52b1c4108251c045df (MD5) Previous issue date: 2000-08-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho foi desenvolvido no Projeto Jaíba, localizado no norte de Minas Gerais, e teve por objetivo avaliar as glebas dos colonos (A, B, C3, D e F) do Projeto Jaíba utilizando alguns parâmetros propostos por Bos, como razão global do consumo (RGC), razão de aplicação em nível de parcela (RAC), sustentabilidade da área irrigada (SAI), profundidade relativa do lençol freático (PRLF), salinidade (CER), fração de operação e manutenção (FOM) e relação entre produção e suprimento de água (RPSA). Parte dos dados utilizados foi fornecidas pelo Distrito de Irrigação de Jaíba (DIJ), pela PLENA e pela EPAMIG, sendo outros coletados no campo. Os valores da evapotranspiração da cultura (Etpc) e a precipitação efetiva (Pe) foram estimados pelo SISDA. Os resultados permitiram as seguintes conclusões: pelos parâmetros analisados do indicador de balanço hídrico (RGC e RAC), o perímetro teve bom desempenho; pelos parâmetros analisados do indicador de sustentabilidade ambiental e drenagem (PRLF, CER e SAI), o perímetro apresentou baixo desempenho com relação à sustentabilidade da área irrigada e bom desempenho quanto à condutividade elétrica relativa e à profundidade relativa do lençol freático; e pelos parâmetros analisados dos indicadores econômico e social (FOM e RPSA), o perímetro pode ser considerado de baixo desempenho em relação à produção e ao suprimento de água. / The present work was developed at the Jaíba Project, located in the north of Minas Gerais, with the objective of evaluating the plots (A, B, C3, D and F) of the Projeto Jaíba colonists using some parameters proposed by Bos, such as global ratio of consumption (GRC), ratio of application at plot level (ARP), sustainability of the irrigated area (SIA), relative depth of ground water (RDGW), salinity (CER), operation and maintenance fraction (OMF) and relationship between production and water supply (RPWS). Part of the data used was provided by the District of Irrigation of Jaíba (DIJ), by PLENA and by EPAMIG, being other collected in the field. Values of crop evapotranspiration (Etpc) and effective precipitation (EP) were estimated by SISDA. The results allowed the following conclusions: through the analyzed parameters of the water balance indicator (GRC and ARP), the perimeter had good performance; through the analyzed parameters of the environmental sustainability and drainage indicator (RDGW, CER and SIA), the perimeter showed low performance with relation to the sustainability of the irrigated area and good performance with relation to the relative electric conductivity and the relative depth of the ground water; and through the analyzed parameters of the economic and social indicators (OMF and RPWS), the perimeter can be considered of low performance in relation to production and water supply. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-19T16:55:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 294564 bytes, checksum: 24375f59f75272d51953543f8d9241df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T16:55:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 294564 bytes, checksum: 24375f59f75272d51953543f8d9241df (MD5) Previous issue date: 2000-09-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Com o objetivo de analisar os fatores que determinam a produtividade da pecuária de corte, fase de engorda, com ênfase nos aspectos gerenciais no município de Rondonópolis-MT, foram coletados dados que foram subdivididos em estratos segundo o Índice de Venda, como medida de produtividade da pecuária da região. A metodologia utilizada baseou-se na Teoria da Firma, que aborda a função de produção. Para determinar o gerenciamento das propriedades foi criado um Índice de Administração, mediante o julgamento das variáveis avaliadas por profissionais da área de pecuária de corte. Os dados foram obtidos no município de Rondonópolis por meio de entrevista direta com os pecuaristas. Os resultados são apresentados na forma tabular, com vistas em ressaltar as características do sistema produtivo da pecuária de corte. Entre os estratos não ocorreu diferença significativa em % de braquiária em relação à área total, vermífugo fornecido para os animais, valor em máquinas e equipamentos utilizados no processo produtivo e área total das propriedades. Com relação à estimação da função de produção da pecuária de corte, o Índice de Administração mostrou ser importante fator na determinação da produtividade. Em se tratando da correlação parcial entre as variáveis Índice de Venda e Índice de Administração, constatou-se que esta é alta e independente de outras variáveis. Conclui-se que a eficência gerencial é condição que deve ser buscada para o aumento da produtividade da pecuária de corte no município de Rondonópolis. / The objective of this thesis was to analyze the productivity factors of cattle cuts and the fattening phase with emphasis on the managerial aspects in the municipal of Rondonópolis-MT. Data was collected and subdivided according to the sales index, which was used as the source of cattle productivity in the region. The methodology used was based on the Firm Theory. It borders the product function. An Administrative Index was created to determine the production of the properties of the variables evaluated cattle breeders in the region. The data was collected in the Rondonópolis municipal with personal interviews with the breeders. The results were presented in a table format. The table s objective was to point out the productivity characteristics of cattle cuts. It demonstrated that there were not significant differences between the percent of braquiaria per total area, vermifugo supplied for the animals, values in machines, equipment used in production and the total area of the properties. The Administrative Index product function of cattle cuts to be an important factor in determining productivity. The variables of the Administrative Index were highly independent of the Sales Index. In conclusion, the managerial efficiency is highly connected to the cattle productivity increase in the Rondonópolis municipal. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T17:29:08Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2966639 bytes, checksum: c31ff6cf14105be76170257a34c6a638 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T17:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2966639 bytes, checksum: c31ff6cf14105be76170257a34c6a638 (MD5) Previous issue date: 1999-10-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho teve como objetivo caracterizar física, química, mineralógica e micromorfologicamente os solos localizados na região de Sousa - PB, enfatizando a identificação de minerais com potencial de salinização nas frações areia, silte e argila. Adicionalmente, foi avaliada a relação homem/solo, destacando-se as diferentes formas de manejo e os atributos adotados pelos pequenos agricultores na diferenciação dos ambientes. Para isso, foram selecionados e amostrados perfis de solo das classes: Aluviais, Bruno Não-Cálcico, Solonetz-Solodizado e Vertissolos. A maioria dos solos estudados apresenta severas restrições físicas à agricultura, como: alta pegajosidade e plasticidade, elevada densidade aparente, estrutura prismática ou colunar, pedregosidade superficial e susceptibilidade a erosão. Além do sódio, o magnésio aparece como cátion de grande importância na dispersão, sendo responsáveis pela elevada percentagem de argila dispersa, principalmente nos Vertissolos. Em função dos fatores de formação, os solos apresentaram alta soma de base (SB), alta capacidade de troca catiônica (CTC), baixo conteúdo de carbono orgânico (CO), pH de ligeiramente ácido a básico e alto Ki. São baixos os teores de Fe 2 O 3 obtidos pelo ataque sulfúrico para todos os solos. A relação Feo/Fed mais elevada em relação a solos mais intemperizados, no País, sugere a participação expressiva de óxidos de pior cristalinidade. O valor de 3,03% de Fe extraível por DCB no material de origem dos Vertissolos indica ataque ao ferro presente no mineral 2:1 e mesmo à hematita. É provável que esta, presente no solo, seja herdada do material de origem e que seja bastante resistente à transformação em goethita nas condições em que estes solos foram formados. A mineralogia cálcio-sódica das frações areia grossa, areia fina e silte pode ser a principal responsável pelos altos teores de cálcio, magnésio e sódio dos solos estudados. Foi verificada a presença marcante de vermiculita/esmectita e ilita na fração argila de todos os solos estudados. Observou-se ainda a presença de feldspatos (microclinio) e quartzo para Vertissolos, Bruno Não-Cálcico e Solonetz-Solodizado, contribuindo, nos dois primeiros, para maiores valores de K 2 O pelo ataque sulfúrico. A cor “achocolatada” é provavelmente resultante da presença da hematita, dos óxidos de ferro amorfos e da matéria orgânica, estabilizada pela presença de argilominerais 2:1 e altos teores de cálcio e magnésio. O fracionamento da matéria orgânica após tratamento com HCl 0,1 mol L -1 resultou em aumento de 300 e 340% das frações ácidos húmicos e fúlvicos, respectivamente, e redução de 60% na fração humina, o que sugere a participação de humatos e fulvatos de cálcio e de magnésio na estabilização da matéria orgânica. A melhor correlação do magnésio com a relação FAHT1/FAHT2 (ácido húmico sem pré-tratamento/ácido húmico com pré-tratamento), comparada com o cálcio, sugere sua maior participação na estabilização da matéria orgânica, na forma de humatos de magnésio. Os critérios adotados pelos pequenos agricultores para separar a região estudada em diferentes ambientes correlacionaram-se com as diferentes classes de solos predominantes na área. Além disso, seus relatos mostram que as características de altas plasticidade e pegajosidade dos Vertissolos conferem uma forma bastante peculiar de “manejo primitivo” em época chuvosa, que é a abertura de covas e o plantio de culturas, como algodão e milho, com o calcanhar e a capina feita com o uso exclusivo das mãos. / The present work aimed to characterize the chemistry, physics, mineralogy and micromorphology of soils of the Sousa depression region of Paraiba, emphasizing the identification of minerals with high salinization potential, in the sand, silt and clay fractions. In addition, there was evaluated the soil-human relationship, identifying the agriculturalists criteria for stratifying the environment. For this purpose, soil classes of Alluvial, Non-calcic Brown, Solodized Solonetz and Vertisols were selected. The majority of soils studied showed severe constraints to agricultural use, such as: high plasticity and stickyness, high density, prismatic to columnar structure, surface stoniness and erosion susceptibility. Besides sodium, magnesium showed to be associated with the dispersion phenomenon, causing elevated dispersible clays, notably in the vertisols. Due to their formation, all soils have high exchangeable base sum, high CEC, low carbon content, slightly acid alkaline pHs and high Ki ratio. The Fe 2 O 3 xicontents obtained by the sulfuric acid are low for all soils. The high Feo/Fe- DBD relationship sugests a dominance of low-crystaline Fe-oxides compared with soils from elsowhere in Brazil. The amount of 3% of Fe-CBD in the vertisols parent material is related to the presence of Fe-oxide in the pellitic sediment, being supposedly very resistant to further transformation int goethite. The presence of Ca/Na plagioclases is associated with high amounts of Ca and Na in these soil. There was observed a marked presence of vermiculite/smectite and illite in the clay fraction of all soils studied, as well as quartz and feldspar in the vertisols, Non-calcic brown and Solodized-Solonetz. This contributed to high K 2 O contents in the two former soils. The cocoa-like color of the vertisols is due to hematite associated with 2:1 clays. The OM fractionation resulted in 300/340% increase of HA and FA fractions respectively, and reduction of 60% in the HU. The results suggests the Ca/Mg fulvates and humates participation in the OM stabilization. The field criteria adopted by local farmers allowed them to easily separate their environment into identifiable units, which correspond to the dominant soil classes. Oral communications revealed the importance of soil plasticity and stickness of vertisols, opening the trenches for seeding/planting by feet, with hand weeding.