histoplasmose é uma doença granulomatosa crônica, cujo agente etiológico é o fungo dimórfico Histoplasma capsulatum. A infecção ocorre pela inalação de conídios ou pequenos fragmentos de micélio que alcançam os alvéolos, onde se transformam em leveduras que é responsável pela patogenia da doença. A imunidade celular do hospedeiro determina o grau das manifestações clínicas na histoplasmose, sendo a interação entre células T e macrófagos, fundamental para o controle da infecção e erradicação do H. capsulatum. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou a participação de leucotrienos nos mecanismos de defesa do hospedeiro durante a histoplasmose. Neste trabalho descrevemos o papel das prostaglandinas, demonstramos que este mediador lipídico contribui para a patogênese da doença, pois sua inibição, com celecoxibe, resultou na sobrevivência de até 80% dos animais infectados com o inóculo letal de H. capsulatum, em contraste com 100% de mortalidade dos animais somente infectados. Além disso, a inibição das prostaglandinas resultou na diminuição (i) da síntese de citocinas pró-inflamatórias e da resposta imune celular e (ii) do recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o espaço bronco-alveolar. Por outro lado, resultou no aumento (iii) de células TCD4+ no pulmão, (iv) na síntese de óxido nítrico por células do parênquima pulmonar, (v) na fagocitose de leveduras de H. capsulatum por macrófagos alveolares e (vi) da síntese de LTB4. Nossos resultados sugerem que prostaglandinas têm papel importante na patogênese na infecção por H. capsulatum, modulando a resposta imune do hospedeiro. / The Histoplasmosis is a chronic granulomatosas disease whose etiologic agent is pathogenic dimorphic fungus Histoplasma capsulatum. Infection occurs mainly by fungal inhalation that reaches the alveoli, where if transforms into leavenings that are responsible for pathogenic diseases. The cellular immunity of the host determines the degree of the clinical manifestations in histoplasmosis, being the interaction between cells T and macrophages, basic for the control of the infection and eradication of the H. capsulatum. Recently, our group of research demonstrated the participation of leukotrienes in the mechanisms of defense of the host during the Histoplasmosis. Beyond this important lipid mediator who participates in the immune reply against H. capsulatum. In this work, we describe another involved mediator, the prostaglandin. In the present work, we demonstrate that the prostaglandins contribute for pathogenic of the disease, being that during its inhibition with celecoxib it resulted in the survival of up to 80% of the infection-mice with inoculum lethal of H. capsulatum, in contrast with 100% of mortality infection-mice. Moreover, the inhibition of prostaglandins resulted in the reduction (i) of the synthesis of pro-inflammatory cytokines and the cellular immune response and (ii) in the migration of neutrophils and macrophages. For other hand, increased (iii) of cells TCD4+ in the lung, (iv) of the nitric oxide synthesis, (v) of phagocytosis of yeast of H. capsulatum for alveolar macrophages and (vi) of the synthesis of LTB4. Our results suggest that prostaglandins have important role in pathogenic in the infection for H. capsulatum, modulating the host immune response.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Acute synovitis and capsulitis are common articular problems and can contribute to the development of a degenerative process due to the release of enzymes and inflammatory mediators. The indicated treatment for synovitis and capsulitis is based on anti-inflammatory drugs. An experimental synovitis model was used in ponies to evaluate the effect of parecoxib, a selective ciclo-oxygenase 2 anti-inflammatory drug. Cardiac (FC) and respiratory frequency (FR) and rectal temperature (T) were determined. The ponies also had their stride length (CP), carpal joint angle at rest (AR), angle of maximum flexion (AFM), joint circumference (CA), carpal effusion degree (GE) and lameness degree (GC) evaluated. The analysis of the synovial fluid included cytology, protein, mucin precipitation quality and viscosity. After synovitis induction with Freund s complete adjuvant, three ponies were treated with 0,55mg/kg/day IV parecoxib, and three received sterile 0,9% saline solution (IV) for five days. Clinical and synovial fluid parameters were evaluated before synovitis induction, immediately before treatment and 12, 24, 48, 96 and 120 hours after the first treatment. Induced synovitis findings were similar to natural occurring ones. Repeated artrocentesis increased protein in the synovial fluid, but did not modify the other evaluated parameters of the healthy joints. Synovial fluid parameters were not affected by parecoxib treatment. Protein amount and total leukocyte count increased and remained high up to 120 hours of the beginning of treatment, and the viscosity and mucin precipitation quality decreased in synovitis induced joints. The intra-articular injection of Freund s complete adjuvant induced a moderate to serious synovitis. Significant increases in T, FC, GC and GE and reduction of AFM and CP occurred in the synovitis control group. Treated ponies showed GC reduction, maintenance of the AFM, CP, T and FC and attenuation of GE. Although the used dosage of parecoxib had no effect on evaluated synovial fluid parameters, analgesic, antipyretic and anti-inflammatory effects were observed. / Sinovite e capsulite agudas são problemas comuns em algumas articulações e podem resultar em um processo degenerativo pela liberação de enzimas e mediadores inflamatórios. O tratamento recomendado nestes casos são os antiinflamatórios não esteroidais (AINEs). Com o objetivo de avaliar o efeito do parecoxib, um AINE seletivo para cicloxigenase 2 injetável, foi usado um modelo experimental de sinovite em pôneis. No exame clínico geral foi determinada a freqüência cardíaca (FC) e respiratória (FR) e a temperatura retal (T). No exame clínico específico foram avaliados o comprimento do passo (CP), ângulo do membro em repouso (AR), ângulo de flexão máxima (AFM), circunferência articular (CA), grau de efusão carpal (GE) e grau de claudicação (GC). A análise do líquido sinovial foi realizada através da citologia, concentração de proteína, qualidade do precipitado da mucina e viscosidade. Cinco dias após indução da sinovite com adjuvante completo de Freund, três pôneis foram tratados com 0,55mg/kg/dia de parecoxib (IV) e três receberam solução fisiológica estéril 0,9% (IV) por cinco dias. A avaliação dos parâmetros clínicos gerais e específicos, e das características celulares e bioquímicas do fluido sinovial foi realizada antes da indução de sinovite, imediatamente antes do tratamento e 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas após início do tratamento. A sinovite induzida neste experimento foi semelhante a uma sinovite naturalmente ocorrida. A artrocentese repetida, apesar de contribuir para o aumento da proteína no fluido sinovial, não modificou significativamente os outros parâmetros avaliados das articulações sadias. O tratamento com parecoxib não influenciou significativamente os parâmetros do líquido sinvovial, pois a quantidade de proteína e de leucócitos totais aumentou, e a qualidade da viscosidade e da precipitação da mucina diminuiu com a indução da sinovite, permanecendo sem alteração até 120 horas após o início do tratamento. A injeção intra-articular com adjuvante completo de Freund, induziu uma sinovite de intensidade moderada a grave. Ocorreram aumentos significativos na T, FC, GC e GE e diminuição do AFM e CP no grupo controle. Já os pôneis tratados com parecoxib apresentaram diminuição do GC, manutenção do AFM, CP, T e FC e atenuação do GE articular. Portanto, embora o parecoxib, na dose utilizada, não tenha apresentado efeito sobre os parâmetros do líquido sinovial das articulações com sinovite, sua ação antipirética, antiinflamatória e analgésica foi documentada.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-11Bitstream added on 2014-06-13T20:11:27Z : No. of bitstreams: 1 cesar_jrf_me_jabo.pdf: 550352 bytes, checksum: 1d6db13e1ea88e0f7e6d7733821abce1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tendo em vista a relação da cicloxigenase-2 com a progressão do câncer, objetivou-se neste trabalho avaliar a expressão da atividade desta enzima com a imunorreatividade de macrófagos no diagnóstico e prognóstico de mastocitoma canino. Para a realização deste estudo foram selecionadas 24 amostras de mastocitomas e 5 amostras de tecido cutâneo sem alterações patológicas (grupo controle). Os espécimes foram divididos em grupos: GO ¬ grupo controle (n=5), G1 -mastocitomas grau I (n=8) , G2 - mastocitomas grau 11 (n=8), G3 - mastocitomas grau 11I (n=8). A avaliação da expressão da COX-2 e macrófagos foi conduzida por imunoistoquímica, utilizando-se o complexo avidina-biotina (ABC). Os resultados mostraram que os dois anticorpos imunorreagiram com tecidos caninos normais ou neoplásicos. A expressão da COX-2 mostrou marcação crescente, conforme a agressividade do tumor e houve significância (P<O,05) entre os grupos GO e G1; GO e G2; GO e G3; G1 e G3. A imunomarcação de macrófagos foi decrescente em relação à gradação histológica e-houve significância (P<O,05) entre os grupos GO e G1; GO e G2; GO e G3; G1 e G3; G2 e G3. Assim como a expressão de macrófagos, a sobrevida dos animais foi decrescente em relação ao grau de malignidade do tumor e inversamente proporcional a marcação de COX-2. / Considering the relationship between cyclooxygenase-2 (COX-2) with the cancer evolution, this study aimed to assessment the expression of this enzyme with the immunoreactive of macrophage in the diagnosis and prognostic of canine mast cell tumor. Twenty four mast cell tumors samples were selected for the accomplishment of this study and tive samples of normal skin tissue (control group - GO). The samples were divided in groups: GO ¬ control group (n=5), G1 - mastocytoma grade I (n=8), G2 - mastocytoma grade 11 (n=8), G3 - mastocytoma grade 11I (n=8). The evaluation of the COX-2 and macrophage expression was achieved by immunohistochemistry, by means of complex avidine-biotine (ABC). The COX-2 expression increased, as the tumor grade progression; moreover. it had relevancy (P<O,05) among the groups: GO and G1, GO and G2, GO and G3, G1 and G3. The macrophage immunoreactive was decreased in relation of histological grade and it had a relevancy (P<O,05) among the groups: GO and G1, GO and G2. GO and G3. G1 and G3, G2 and G3. As macrophage expression, animal survival was decreased in relation of the histological grade of tumor and proportional reversed COX-2 expression.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:30:45Z : No. of bitstreams: 1 costa_ss_me_jabo.pdf: 431915 bytes, checksum: 2bb4d7b793f721ee888c11f23b760d49 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo apresenta uma análise comparativa da taxa de proliferação celular e da expressão da enzima cicloxigenase-2 na pele de cães saudáveis e acometidos por ceratose actínica e carcinoma de células escamosas cutâneo (CCE). O objetivo foi avaliar o prognóstico destes cães utilizando-se a imunorreatividade a COX-2 e o índice de proliferação celular. Foram analisados 20 amostras de pele de cães, sendo 10 casos de ceratose actínica (G1) e 10 de CCE cutâneo (G2). Os dados epidemiológicos e as características clínicas e histopatológicas foram estudados. A taxa de proliferação celular foi avaliada por meio de índice mitótico (IM) e imunomarcação para MIB-1. A expressão da enzima cicloxigenase foi pesquisada por exame imunoistoquímico. Os cães da raça Pit Bull foram os mais acometidos em G1 e G2 e a média de idade foi 4,3 (±0,8) anos e 5,6 (±1,7) anos, respectivamente. Os valores médios do índice mitótico foram 0,4; 4,6 (±3,6) e 4,9 (±2,6) em G0, G1 e G2, respectivamente. Não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0. Houve imunomarcação para COX-2 em G1 e G2, a média dos escores foi 8,16 (±3,51) e 8,56 (±1,03), respectivamente. Não houve imunomarcação nas amostras de G0 e não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0 (p>0,05). A média da porcentagem de células imunomarcadas para Ki-67 em G0, G1 e G2 foi 0,4; 15,77 (± 8,81) e 17,71 (± 12,21), respectivamente. Não houve diferença entre G1 e G2, mas sim destes em relação ao G0 (p>0,05). A ceratose actínica se comportou como o CCE cutâneo, revelando não ser uma lesão pré-neoplásica, mas sim o estágio inicial da neoplasia propriamente dita. / This research presents a comparative analysis of cell proliferation index and cyclooxigenase-2 expression in skin of healthy and with actinic keratosis and cutaneous squamous cell carcinoma (SCC) dogs. The goal was to evaluate the prognosis of these dogs by COX-2 immunorreactivity and cell proliferation index. Skin sections from 20 dogs were evaluated, which 10 were actinic keratosis (G1) and 10 cutaneous SCC (G2). Epidemiological information, clinical and histopathological aspects were evaluated. Cell proliferation index hás been stimated by mitotic index (MI) and MIB-1 staining. Cyclooxigenase-2 expression has been analyzed by immunohistochemistry study. Pit Bull dogs were the main affected in G1 and G2 and the mean age was 4,3 (±0,8) years old and 5,6 (±1,7) years old, relatively. MI mean values were 0,4; 4,6 (±3,6) and 4,9 (±2,6) in G0, G1 and G2, relatively. There was no statistical difference between G1 and G2, but it did with G0. There was positive staining for COX-2 in G1 and G2, the score mean value was 8,16 (±3,51) and 8,56 (±1,03), relatively. There was no positive staining in G0 samples and neither statistical difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). The positive cells for Ki-67 mean percentage in G0, G1 and G2 was 0,4; 15,77 (± 8,81) and 17,71 (± 12,21), relatively. There was no difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). Actinic keratosis behavior was similar to cutaneous SSC, demonstrating that it is not a pre-neoplastic disease, but, in fact, the initial of neoplasm.

histoplasmose é uma doença granulomatosa crônica, cujo agente etiológico é o fungo dimórfico Histoplasma capsulatum. A infecção ocorre pela inalação de conídios ou pequenos fragmentos de micélio que alcançam os alvéolos, onde se transformam em leveduras que é responsável pela patogenia da doença. A imunidade celular do hospedeiro determina o grau das manifestações clínicas na histoplasmose, sendo a interação entre células T e macrófagos, fundamental para o controle da infecção e erradicação do H. capsulatum. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou a participação de leucotrienos nos mecanismos de defesa do hospedeiro durante a histoplasmose. Neste trabalho descrevemos o papel das prostaglandinas, demonstramos que este mediador lipídico contribui para a patogênese da doença, pois sua inibição, com celecoxibe, resultou na sobrevivência de até 80% dos animais infectados com o inóculo letal de H. capsulatum, em contraste com 100% de mortalidade dos animais somente infectados. Além disso, a inibição das prostaglandinas resultou na diminuição (i) da síntese de citocinas pró-inflamatórias e da resposta imune celular e (ii) do recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o espaço bronco-alveolar. Por outro lado, resultou no aumento (iii) de células TCD4+ no pulmão, (iv) na síntese de óxido nítrico por células do parênquima pulmonar, (v) na fagocitose de leveduras de H. capsulatum por macrófagos alveolares e (vi) da síntese de LTB4. Nossos resultados sugerem que prostaglandinas têm papel importante na patogênese na infecção por H. capsulatum, modulando a resposta imune do hospedeiro. / The Histoplasmosis is a chronic granulomatosas disease whose etiologic agent is pathogenic dimorphic fungus Histoplasma capsulatum. Infection occurs mainly by fungal inhalation that reaches the alveoli, where if transforms into leavenings that are responsible for pathogenic diseases. The cellular immunity of the host determines the degree of the clinical manifestations in histoplasmosis, being the interaction between cells T and macrophages, basic for the control of the infection and eradication of the H. capsulatum. Recently, our group of research demonstrated the participation of leukotrienes in the mechanisms of defense of the host during the Histoplasmosis. Beyond this important lipid mediator who participates in the immune reply against H. capsulatum. In this work, we describe another involved mediator, the prostaglandin. In the present work, we demonstrate that the prostaglandins contribute for pathogenic of the disease, being that during its inhibition with celecoxib it resulted in the survival of up to 80% of the infection-mice with inoculum lethal of H. capsulatum, in contrast with 100% of mortality infection-mice. Moreover, the inhibition of prostaglandins resulted in the reduction (i) of the synthesis of pro-inflammatory cytokines and the cellular immune response and (ii) in the migration of neutrophils and macrophages. For other hand, increased (iii) of cells TCD4+ in the lung, (iv) of the nitric oxide synthesis, (v) of phagocytosis of yeast of H. capsulatum for alveolar macrophages and (vi) of the synthesis of LTB4. Our results suggest that prostaglandins have important role in pathogenic in the infection for H. capsulatum, modulating the host immune response.

Muitas substâncias das espécies de Lychnophorinae (Asteraceae) são relatadas como inibidoras da síntese de mediadores da cascata do processo inflamatório. Nesse processo, duas enzimas são essenciais e atuam no metabolismo do ácido araquidônico, formado em processos inflamatórios: ciclooxigenase (COX) e lipoxigenase (LOX). A análise de impressões digitais metabólicas é um método capaz de fornecer informações sobre o objeto de estudo através da utilização de ferramentas estatísticas, além de possibilitar a correlação desses dados com outros utilizando métodos in silico. O objetivo deste estudo foi analisar 26 espécies da subtribo Lychnophorinae quanto à atividade inibitória in vitro das vias COX- e LOX-dependentes e identificar as substâncias responsáveis por essa atividade através de análises in silico de correlação entre bioatividade e impressão digital metabólica. As impressões digitais metabólicas dos extratos hidrometanólicos das espécies de Lychnophorinae foram obtidas utilizando UHPLC-UV-(DAD)-MS (OrbitrapTM). Os ensaios de triagem de inibição das vias COX-1 e 5-LOX-dependentes revelaram que 20 espécies possuem atividade inibitória dupla para ambas as vias com valores de IC50 menores que 100 ?g.mL-1. Dentre essas, 11 espécies apresentaram valores de IC50 menores que 40 ?g.mL-1, e cinco apresentaram valores de IC50 menores que 10 ?g.mL-1. Utilizando-se as impressões digitais metabólicas e os resultados de inibição enzimática foram realizadas análises estatísticas multivariadas supervisionadas e não supervisionadas (PCA, PLS e OPLS) visando à identificação de substâncias discriminantes (ativas). Através das análises de correlação, obtiveram-se as prováveis substâncias que detém o potencial inibitório. As cinco substâncias com maior potencial discriminante foram identificadas por técnicas de desreplicação e são: a lactona sesquiterpênica (4,5-diidro-15-desoxigoyazensolido), dois flavonóides glicosilados (3-O-(acetil-hexosídeo)-quercetina e 7-O-(cumaroil-hexosídeo)-apigenina), e um hidroxinerolidol. Assim, este estudo revelou o ótimo potencial inibidor das enzimas COX-1 e 5-LOX dos extratos hidrometanólicos das espécies de Lychnophorinae. Além disso, indicou as substâncias mais discriminantes responsáveis por essa atividade, sendo as substâncias acima mencionadas as propostas como as principais responsáveis pela atividade inibidora das enzimas COX e LOX / Several compounds from Lychnophorinae species (Asteraceae) are reported as inhibitors of cascade mediators that elicits the inflammatory process. During this process, two enzymes are essential in the metabolism of the arachidonic acid: cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase (LOX). The analysis of metabolic fingerprinting is a method that provides information about the object of study by using statistical tools, and enables the correlation of these data with others using in silico methods. This work therefore aimed to analyze 26 species of the Lychnophorinae subtribe for in vitro inhibition of COX-1 and 5-LOX and (to) identify the bioactive compounds responsible for this activity by in silico correlation analysis between bioactivity and metabolic fingerprint. The metabolomic analysis was carried out using UHPLC-DAD-ESI-Orbitrap and a metabolic fingerprint for each extract was obtained. The in vitro inhibition screening assays of COX-1 and 5-LOX revealed that 20 extracts presented dual inhibitory activity on both enzymes with IC50 values lower than 100 ?g.mL-1. Among them, 11 species showed IC50 values lower than 40 ?g.mL-1 and five lower than 10 ?g.mL-1. In order to identify discriminant substances (active), supervised and non-supervised multivariate statistical analysis (PCA, PLS e OPLS) were performed using the metabolic fingerprints and the results of enzyme inhibition. Through correlation analysis, it was possible to locate the substances most likely to be responsible for the pharmacological activity in both enzymes simultaneously; among them, five were chosen as the most likely. The substances were identified by dereplication as: a sesquiterpene lactone (4,5-dihydro-15-desoxygoyazensolide), two flavonoids (3-O-(acetil-hexoside)-quercetin and 7-O-(cumaroil-hexoside)-apigenine), and a hidroxynerolidol. In summary, in this work it was possible to reveal crude extracts with outstanding inhibitory potential of both, COX-1 and 5-LOX, enzymes as well as to propose the most probable compounds responsible for this action, and the compounds mentioned above were proposed as the main responsible for the inhibitory activity.

Objetivo: No atual trabalho propomo-nos a avaliar morfometricamente possíveis alterações na reparação óssea alveolar pós-exodontia de ratos tratados com Meloxicam, um anti-inflamatório inibidor preferencial da cicloxigenase 2 (COX-2) e correlacionar com a expressão temporal da COX-2 e do fator de transcrição 2 com domínio Runt (Runx-2) associada com a diferenciação de células da linhagem osteoblástica. Material e Métodos: A exodontia do incisivo superior direito foi realizada em 120 ratos Wistar, divididos em grupo controle (n = 60) - animais tratados com injeção intraperitoneal de 0,1 ml de solução salina 0,9% diariamente e grupo tratado (n = 60) animais tratados com injeção de Meloxicam na dose de 3mg/kg de massa corporal, diariamente, ambos durante 7 dias. O volume total do alvéolo (VtA) e do tecido ósseo (VtO), o número de células imunomarcadas/mm² (Nm) para COX-2 e Runx-2 e a expressão protéica por Western blotting (WB) da COX-2 e RUNX-2 foram avaliados nos períodos 3, 7, 10, 14, 21 e 30 dias póscirurgias. Resultados: No grupo tratado o VtA manteve-se constante até os 21 dias, enquanto que no controle foi 0,272 vezes menor em relação aos 3 dias decorrente da maior atividade osteoclástica. Porém, aos 14 dias, no grupo tratado o VtO foi 0,337 vezes menor em relação ao controle decorrente da inibição parcial da transmigração de células inflamatórias responsáveis pela degradação do coágulo e da angiogênese, ocasionando um retardo na formação dos tecidos de granulação/conjuntivo, na diferenciação das células osteoblásticas e na formação/remodelação do tecido ósseo, e consequentemente no reparo ósseo alveolar. A imunomarcação para COX-2 foi observada em diversos tipos celulares, como fibroblastos, células endoteliais, células inflamatórias, osteoblastos e osteócitos. O Nm para COX-2 não apresentou diferenças estatísticas significantes entre os grupos no intervalo de 3 e 21 dias pós-cirurgia, enquanto que, a expressão protéica pelo WB foi em média 0,232 vezes menor no grupo tratado em relação ao controle. Por outro lado, a imunomarcação para Runx-2 foi mais expressiva em osteoblastos e osteócitos e raramente em fibroblastos. O Nm para Runx-2 no grupo tratado durante todo período experimental foi em média 0,256 vezes menor em relação ao controle, sendo o mesmo observado para a expressão protéica pelo WB. Conclusão: Dentro dos limites da atual pesquisa, a aplicação do Meloxicam por um curto período de tempo atrasa temporariamente o processo inicial de reparo ósseo alveolar diminuindo a expressão das proteínas COX-2 e RUNX-2. / Objective: To evaluate morphometrically possible changes in post-extraction alveolar bone healing in rats treated with Meloxicam, a selective anti-inflammatory inhibitor of cyclooxygenase (COX-2) and to correlate it with the temporal expression of COX-2 and transcription factor 2 with Runt domain (Runx-2) associated with differentiation of osteoblastic lineage cells. Material and Methods: The extraction of the right upper incisor was made in 120 male Wistar rats, divided into control group (n=60) - animals treated with an intraperitoneal injection of 0,1 ml of 0,9% NaCl solution daily for 7 days and the treated group (n=60) - animals treated with injection of 3mg/kg of body weight of Meloxicam 0.9% NaCl solution daily for 7 days. The total alveolar volume (VtA), total bone tissue volume (VtO), number of immunohistochemically positive cells/mm² (Nm) for COX-2 and RUNX-2 and the Western blotting (WB) COX-2 and RUNX-2 protein expressions were evaluated after 3, 7, 10, 14, 21 and 30 days after the surgeries. Results: In the treated group the VtA remained constant until the 21st day, while in the control group at the same day the value was 0,272 times lower compared to the 3 days period, due to the higher osteoclastic activity. However, at 14 days the VtO was 0,337 times lower in the treated group compared to the control due to the partial inhibition of the transmigration of inflammatory cells responsible for the degradation of the clot and angiogenesis, causing a delay in the formation of granulation/connective tissues, differentiation of osteoblastic cells and in bone tissue formation/remodeling, and consequently in the alveolar bone repair. The immunostaining for COX-2 was observed in various cell types, such as fibroblasts, endothelial cells, inflammatory cells, osteoblasts and osteocytes. The Nm for COX-2 showed no statistical differences between groups from the 3rd to the 21st day, while the WB protein expression was on average 0,232 times lower in the treated group compared to the control. On the other hand, the immunostaining for Runx-2 was more expressive in osteoblasts and osteocytes and rarely in fibroblasts. The Nm for Runx-2 on the treated group was, during the whole experimental period, on average 0,256 times smaller than in the control. The same difference was observed in the protein expression by WB. Conclusion: Within the limits of the present study, its was concluded that the application of Meloxicam daily for 7 days causes a temporary delay in the alveolar bone repair decreasing the expression of proteins COX-2 and RUNX-2.

The anti-inflammatories no esteroidais (AINEs) they are the drugs of larger prescription all over the world, for humans and for animals. They combat the inflammation, the pain, the temperature increase, could also inhibit the aggregation plaques. They act inhibiting the production of the acid araquidônico and ciclooxigenases (COXs) decreasing like this, the prostaglandins production. They become separated in inhibitors no selective for COX-1 and 2, being those the most traditional; and in selective inhibitors for COX-2, considered more modern drugs. AINEs no selective they reduce the production of all of PGs, constituent or not. Already the selective ones just inhibit harmful PGs, that you/they act in the inflammatory reaction, preserving PGs that maintains, for instance, the protection to the stomach and the renal perfusão. In that study the hepatic function of Rattus norvegicus was evaluated after the use of AINE no selective, cetoprofeno and of selective AINE, valdecoxib. The doses administered to the animals were calculated according to the scaling allometric. The allometric is a method that allows to extrapolate dosage indications of more common species and known for species where studies farmacokinects of the drug was not accomplished in subject, taking into account, among other, the corporal size, the metabolism and the basal tax. After the use of AINEs, the animals were appraised for biochemical methods of alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) and alkaline fosfatase (FA), and also, for macroscopic and microscopic evaluation of the liver and right kidney, in different times, after you finish them administrations of the drugs, according to the group which the animal belonged. Among other observations it can be told, that the cetoprofeno, can cause the death of mice, according to the allometric already in the second day of administration of the drug; and that the AINE valdecoxib, doesn't produce macroscopic and microscopic alterations worthy of note, in organs as the liver and kidney of Rattus norvegicus / Os antiinflamatórios não esteroidais (AINEs) são as drogas de maior prescrição em todo o mundo, tanto para humanos como para animais. Combatem a inflamação, a dor, a hipertermia, podendo também inibir a agregação plaquetária. Atuam inibindo a produção do ácido araquidônico e ciclooxigenases (COXs) diminuindo assim, a produção de prostaglandinas. Dividem-se em inibidores não seletivos para COX-1 e 2, sendo esses os mais tradicionais; e em inibidores seletivos para COX-2, considerados drogas mais modernas. AINEs não seletivos diminuem a produção de todas as PGs, constitutivas ou não. Já os seletivos inibem apenas as PGs deletérias, que atuam na reação inflamatória, preservando PGs que mantém, por exemplo, a proteção ao estômago e a perfusão renal. Nesse estudo avaliou-se a função hepática de Rattus norvegicus após a utilização do AINE não seletivo, cetoprofeno e do AINE seletivo, valdecoxib. As doses administradas aos animais foram calculadas segundo a escala alométrica. A alometria é um método que permite extrapolar indicações posológicas de espécies mais comuns e conhecidas para espécies onde não foram realizados estudos farmacocinéticos da droga em questão, levando em conta, entre outros, o tamanho corporal, o metabolismo e a taxa basal. Após a utilização dos AINEs, os animais foram avaliados por métodos bioquímicos de alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e fosfatase alcalina (FA), e também, por avaliação macroscópica e microscópica do fígado e rim direito, em diferentes tempos, após as ultimas administrações das drogas, conforme o grupo a qual o animal pertencia. Entre outras observações pode-se relatar, que o cetoprofeno, pode causar a morte de ratos, segundo a alometria já no segundo dia de administração da droga; e que o AINE valdecoxib, não produz alterações macroscópicas e microscópicas dignas de nota, em órgãos como o fígado e rim de Rattus norvegicus

Objetivo: No atual trabalho propomo-nos a avaliar morfometricamente possíveis alterações na reparação óssea alveolar pós-exodontia de ratos tratados com Meloxicam, um anti-inflamatório inibidor preferencial da cicloxigenase 2 (COX-2) e correlacionar com a expressão temporal da COX-2 e do fator de transcrição 2 com domínio Runt (Runx-2) associada com a diferenciação de células da linhagem osteoblástica. Material e Métodos: A exodontia do incisivo superior direito foi realizada em 120 ratos Wistar, divididos em grupo controle (n = 60) - animais tratados com injeção intraperitoneal de 0,1 ml de solução salina 0,9% diariamente e grupo tratado (n = 60) animais tratados com injeção de Meloxicam na dose de 3mg/kg de massa corporal, diariamente, ambos durante 7 dias. O volume total do alvéolo (VtA) e do tecido ósseo (VtO), o número de células imunomarcadas/mm² (Nm) para COX-2 e Runx-2 e a expressão protéica por Western blotting (WB) da COX-2 e RUNX-2 foram avaliados nos períodos 3, 7, 10, 14, 21 e 30 dias póscirurgias. Resultados: No grupo tratado o VtA manteve-se constante até os 21 dias, enquanto que no controle foi 0,272 vezes menor em relação aos 3 dias decorrente da maior atividade osteoclástica. Porém, aos 14 dias, no grupo tratado o VtO foi 0,337 vezes menor em relação ao controle decorrente da inibição parcial da transmigração de células inflamatórias responsáveis pela degradação do coágulo e da angiogênese, ocasionando um retardo na formação dos tecidos de granulação/conjuntivo, na diferenciação das células osteoblásticas e na formação/remodelação do tecido ósseo, e consequentemente no reparo ósseo alveolar. A imunomarcação para COX-2 foi observada em diversos tipos celulares, como fibroblastos, células endoteliais, células inflamatórias, osteoblastos e osteócitos. O Nm para COX-2 não apresentou diferenças estatísticas significantes entre os grupos no intervalo de 3 e 21 dias pós-cirurgia, enquanto que, a expressão protéica pelo WB foi em média 0,232 vezes menor no grupo tratado em relação ao controle. Por outro lado, a imunomarcação para Runx-2 foi mais expressiva em osteoblastos e osteócitos e raramente em fibroblastos. O Nm para Runx-2 no grupo tratado durante todo período experimental foi em média 0,256 vezes menor em relação ao controle, sendo o mesmo observado para a expressão protéica pelo WB. Conclusão: Dentro dos limites da atual pesquisa, a aplicação do Meloxicam por um curto período de tempo atrasa temporariamente o processo inicial de reparo ósseo alveolar diminuindo a expressão das proteínas COX-2 e RUNX-2. / Objective: To evaluate morphometrically possible changes in post-extraction alveolar bone healing in rats treated with Meloxicam, a selective anti-inflammatory inhibitor of cyclooxygenase (COX-2) and to correlate it with the temporal expression of COX-2 and transcription factor 2 with Runt domain (Runx-2) associated with differentiation of osteoblastic lineage cells. Material and Methods: The extraction of the right upper incisor was made in 120 male Wistar rats, divided into control group (n=60) - animals treated with an intraperitoneal injection of 0,1 ml of 0,9% NaCl solution daily for 7 days and the treated group (n=60) - animals treated with injection of 3mg/kg of body weight of Meloxicam 0.9% NaCl solution daily for 7 days. The total alveolar volume (VtA), total bone tissue volume (VtO), number of immunohistochemically positive cells/mm² (Nm) for COX-2 and RUNX-2 and the Western blotting (WB) COX-2 and RUNX-2 protein expressions were evaluated after 3, 7, 10, 14, 21 and 30 days after the surgeries. Results: In the treated group the VtA remained constant until the 21st day, while in the control group at the same day the value was 0,272 times lower compared to the 3 days period, due to the higher osteoclastic activity. However, at 14 days the VtO was 0,337 times lower in the treated group compared to the control due to the partial inhibition of the transmigration of inflammatory cells responsible for the degradation of the clot and angiogenesis, causing a delay in the formation of granulation/connective tissues, differentiation of osteoblastic cells and in bone tissue formation/remodeling, and consequently in the alveolar bone repair. The immunostaining for COX-2 was observed in various cell types, such as fibroblasts, endothelial cells, inflammatory cells, osteoblasts and osteocytes. The Nm for COX-2 showed no statistical differences between groups from the 3rd to the 21st day, while the WB protein expression was on average 0,232 times lower in the treated group compared to the control. On the other hand, the immunostaining for Runx-2 was more expressive in osteoblasts and osteocytes and rarely in fibroblasts. The Nm for Runx-2 on the treated group was, during the whole experimental period, on average 0,256 times smaller than in the control. The same difference was observed in the protein expression by WB. Conclusion: Within the limits of the present study, its was concluded that the application of Meloxicam daily for 7 days causes a temporary delay in the alveolar bone repair decreasing the expression of proteins COX-2 and RUNX-2.

Muitas substâncias das espécies de Lychnophorinae (Asteraceae) são relatadas como inibidoras da síntese de mediadores da cascata do processo inflamatório. Nesse processo, duas enzimas são essenciais e atuam no metabolismo do ácido araquidônico, formado em processos inflamatórios: ciclooxigenase (COX) e lipoxigenase (LOX). A análise de impressões digitais metabólicas é um método capaz de fornecer informações sobre o objeto de estudo através da utilização de ferramentas estatísticas, além de possibilitar a correlação desses dados com outros utilizando métodos in silico. O objetivo deste estudo foi analisar 26 espécies da subtribo Lychnophorinae quanto à atividade inibitória in vitro das vias COX- e LOX-dependentes e identificar as substâncias responsáveis por essa atividade através de análises in silico de correlação entre bioatividade e impressão digital metabólica. As impressões digitais metabólicas dos extratos hidrometanólicos das espécies de Lychnophorinae foram obtidas utilizando UHPLC-UV-(DAD)-MS (OrbitrapTM). Os ensaios de triagem de inibição das vias COX-1 e 5-LOX-dependentes revelaram que 20 espécies possuem atividade inibitória dupla para ambas as vias com valores de IC50 menores que 100 ?g.mL-1. Dentre essas, 11 espécies apresentaram valores de IC50 menores que 40 ?g.mL-1, e cinco apresentaram valores de IC50 menores que 10 ?g.mL-1. Utilizando-se as impressões digitais metabólicas e os resultados de inibição enzimática foram realizadas análises estatísticas multivariadas supervisionadas e não supervisionadas (PCA, PLS e OPLS) visando à identificação de substâncias discriminantes (ativas). Através das análises de correlação, obtiveram-se as prováveis substâncias que detém o potencial inibitório. As cinco substâncias com maior potencial discriminante foram identificadas por técnicas de desreplicação e são: a lactona sesquiterpênica (4,5-diidro-15-desoxigoyazensolido), dois flavonóides glicosilados (3-O-(acetil-hexosídeo)-quercetina e 7-O-(cumaroil-hexosídeo)-apigenina), e um hidroxinerolidol. Assim, este estudo revelou o ótimo potencial inibidor das enzimas COX-1 e 5-LOX dos extratos hidrometanólicos das espécies de Lychnophorinae. Além disso, indicou as substâncias mais discriminantes responsáveis por essa atividade, sendo as substâncias acima mencionadas as propostas como as principais responsáveis pela atividade inibidora das enzimas COX e LOX / Several compounds from Lychnophorinae species (Asteraceae) are reported as inhibitors of cascade mediators that elicits the inflammatory process. During this process, two enzymes are essential in the metabolism of the arachidonic acid: cyclooxygenase (COX) and lipoxygenase (LOX). The analysis of metabolic fingerprinting is a method that provides information about the object of study by using statistical tools, and enables the correlation of these data with others using in silico methods. This work therefore aimed to analyze 26 species of the Lychnophorinae subtribe for in vitro inhibition of COX-1 and 5-LOX and (to) identify the bioactive compounds responsible for this activity by in silico correlation analysis between bioactivity and metabolic fingerprint. The metabolomic analysis was carried out using UHPLC-DAD-ESI-Orbitrap and a metabolic fingerprint for each extract was obtained. The in vitro inhibition screening assays of COX-1 and 5-LOX revealed that 20 extracts presented dual inhibitory activity on both enzymes with IC50 values lower than 100 ?g.mL-1. Among them, 11 species showed IC50 values lower than 40 ?g.mL-1 and five lower than 10 ?g.mL-1. In order to identify discriminant substances (active), supervised and non-supervised multivariate statistical analysis (PCA, PLS e OPLS) were performed using the metabolic fingerprints and the results of enzyme inhibition. Through correlation analysis, it was possible to locate the substances most likely to be responsible for the pharmacological activity in both enzymes simultaneously; among them, five were chosen as the most likely. The substances were identified by dereplication as: a sesquiterpene lactone (4,5-dihydro-15-desoxygoyazensolide), two flavonoids (3-O-(acetil-hexoside)-quercetin and 7-O-(cumaroil-hexoside)-apigenine), and a hidroxynerolidol. In summary, in this work it was possible to reveal crude extracts with outstanding inhibitory potential of both, COX-1 and 5-LOX, enzymes as well as to propose the most probable compounds responsible for this action, and the compounds mentioned above were proposed as the main responsible for the inhibitory activity.