Resumo:A disfunção mitocondrial está associada com a manifestação e com a origem de doenças e distúrbios metabólitos. Um novo paradigma complementa um dogma recente relacionado com esta função, onde moléculas presentes no meio extra ou intra-mitocondrial podem atuar como reguladores da resposta imunológica nata, decorrente de um estresse e/ou de uma infecção. O vírus da cinomose canina é responsável por um quadro de depleção quando se encontra em fase de produção viral, principalmente nas células imunocompetentes. Neste sentido, células mononucleares de sangue periférico canino (CMPC) foram coletadas de cães saudáveis, cultivadas e infectadas pela estirpe vacinal CDV (Onderstepoort). Após 24h post-infection (p.i.), as enzimas superóxido dismutase 1 (SOD1), proteína antioxidante 1 (AOP-1) e estresse térmico 70 (Hsp-70) foram detectadas pela reação de imunofluorescência. A expressão do mRNA dos respectivos genes foi realizada em CMPC CDV+ e CDV - após 24h de infecção com a reação em cadeia da ™ polimerase em tempo real. As sondas fluorescentes JC-1 e MitoTracker Green foram utilizadas para avaliar potencial de membrana e função mitocondrial, respectivamente. A estirpe vacinal induziu a perda da viabilidade em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p = 0,001) após 24 h. A permeabilidade da membrana mitocondrial (Δψ) detectada pelo uso da sonda MitoTracker™Green e JC-1 revelou um aumento da Δψ e da atividade mitocondrial no grupo CDV + (p = 0,0012) em comparação com as CMPC não infectadas. Em contraste, a expressão do mRNA dos genes AOP-1 e SOD1 foram considerados superiores, enquanto o Hsp-70 não apresentou diferença na sua expressão nos grupos CDV + e CDV-. As CMPC infectadas pelo CDV aumentaram a transcrição dos genes AOP-1 e SOD1, uma defesa antioxidante celular, concomitante com a redução de viabilidade...(resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:itochondrial dysfunction is associated with the manifestation and origin of diseases and disorders. The new paradigm complements the current mitochondrial dogma, whereby molecules present on or inside the mitochondria may act as immune regulators in response to stress or pathogens. Canine distemper virus infection (CDV) is responsible to immunosuppressive stage when the virus replicates among immune cells. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) superoxide dismutase (SOD1), antioxidant like protein 1 (AOP-1) and heat shock protein 70 (Hsp-70) enzymes were search in PBMC by immunofluorescence. The expression of mRNA of respective genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post-infection by real time polymerase chain reaction. Mitochondrial dysfunction was evaluated by the use of MitoTracker™Green and JC-1 probes at the same post-infection time. The vaccine strain induced loss of PBMC viability in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The mitochondrial membrane permeability (Δψ) searched by MitoTracker™ Green and JC-1 probes revealed an increase of Δψ in the CDV + group (p<0.0012) in comparison to uninfected PBMC. In contrast, the expression of mRNA of AOP-1 and SOD 1 were considered higher, whereas the Hsp-70 has no difference in its expression between CDV+ and CDV- groups. PBMC infected by CDV increased AOP-1 and SOD1 gene transcription, an antioxidant cell defense, concomitant to a reduce level of PBMC viability. The viral replication also seems to regulate mitochondrial function by modify the membrane potential. However, at this point, host cells have developed an defense producing mediators related to protect against oxidative insult. This is the first... / Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Banca: Roberto Gameiro Carvalho / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-21Bitstream added on 2015-04-09T12:48:05Z : No. of bitstreams: 1 000814238.pdf: 438890 bytes, checksum: f7cc8219db858e87f195b5d08dbb8b04 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / itochondrial dysfunction is associated with the manifestation and origin of diseases and disorders. The new paradigm complements the current mitochondrial dogma, whereby molecules present on or inside the mitochondria may act as immune regulators in response to stress or pathogens. Canine distemper virus infection (CDV) is responsible to immunosuppressive stage when the virus replicates among immune cells. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) superoxide dismutase (SOD1), antioxidant like protein 1 (AOP-1) and heat shock protein 70 (Hsp-70) enzymes were search in PBMC by immunofluorescence. The expression of mRNA of respective genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post-infection by real time polymerase chain reaction. Mitochondrial dysfunction was evaluated by the use of MitoTracker™Green and JC-1 probes at the same post-infection time. The vaccine strain induced loss of PBMC viability in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The mitochondrial membrane permeability (Δψ) searched by MitoTracker™ Green and JC-1 probes revealed an increase of Δψ in the CDV + group (p<0.0012) in comparison to uninfected PBMC. In contrast, the expression of mRNA of AOP-1 and SOD 1 were considered higher, whereas the Hsp-70 has no difference in its expression between CDV+ and CDV- groups. PBMC infected by CDV increased AOP-1 and SOD1 gene transcription, an antioxidant cell defense, concomitant to a reduce level of PBMC viability. The viral replication also seems to regulate mitochondrial function by modify the membrane potential. However, at this point, host cells have developed an defense producing mediators related to protect against oxidative insult. This is the first... / FAPESP: 2012/06897-0

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:24Z : No. of bitstreams: 1 000841001.pdf: 1406089 bytes, checksum: e9c405c8291ecd2e0a7fe04614316048 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O vírus da cinomose canina conhecido como CDV (canine distemper vírus), acomete animais de ordem carnívora sendo considerado uma das doenças canina mais difícil de diagnosticar clinicamente, podendo levando à morte cerca de 85% dos cães infectados. Atualmente, existem varias técnicas para o diagnóstico da cinomose canina entre eles se destacam os métodos ELISA, hibridização in sito, testes sorológicos, fluorescência e técnica de PCR, porém os mesmos podem apresentar resultados demorados, além de um elevado custo. Nos últimos anos, o desenvolvimento de biossensores vem se apresentando como uma alternativa para a detecção química e bioquímica de diversos compostos, mostrando grande potencial para sua aplicação no diagnóstico clínico. Dessa forma, desenvolvemos uma metodologia analítica para o diagnóstico rápido da cinomose canina em amostras reais, com alta carga viral, utilizando diferentes técnicas como ressonância plasmônica de superfície (SPR), ressonância plasmônica de superfície localizada (LSPR), espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) e colorimetria / The canine distemper virus known as CDV, affects animals carnivorous order and is considered one of canine diseases more difficult to diagnose clinically, and may leading to the death about 85% of infected dogs. Currently, there are several techniques for the diagnosis of canine distemper among them stands out the ELISA methods, in situ hybridization, serological tests, fluorescence and PCR technique, however they may present lengthy results and a high cost. In recent years, the development of biosensors has been presented as an alternative to chemical and biochemical detection of several compounds showing high potential for application in clinical diagnostics. Thus, we developed an analytical methodology for the rapid diagnosis of canine distemper virus in real samples, with high viral load, using different techniques such as surface plasmon resonance (SPR), located surface plasmon resonance (LSPR), electrochemical impedance spectroscopy (EIS) and colorimetry / FAPESP: 2012/15666-1

Orientador: Valber de Albuquerque Pedrosa / Banca: Ivana Cesarino / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Resumo: O vírus da cinomose canina conhecido como CDV (canine distemper vírus), acomete animais de ordem carnívora sendo considerado uma das doenças canina mais difícil de diagnosticar clinicamente, podendo levando à morte cerca de 85% dos cães infectados. Atualmente, existem varias técnicas para o diagnóstico da cinomose canina entre eles se destacam os métodos ELISA, hibridização in sito, testes sorológicos, fluorescência e técnica de PCR, porém os mesmos podem apresentar resultados demorados, além de um elevado custo. Nos últimos anos, o desenvolvimento de biossensores vem se apresentando como uma alternativa para a detecção química e bioquímica de diversos compostos, mostrando grande potencial para sua aplicação no diagnóstico clínico. Dessa forma, desenvolvemos uma metodologia analítica para o diagnóstico rápido da cinomose canina em amostras reais, com alta carga viral, utilizando diferentes técnicas como ressonância plasmônica de superfície (SPR), ressonância plasmônica de superfície localizada (LSPR), espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS) e colorimetria / Abstract: The canine distemper virus known as CDV, affects animals carnivorous order and is considered one of canine diseases more difficult to diagnose clinically, and may leading to the death about 85% of infected dogs. Currently, there are several techniques for the diagnosis of canine distemper among them stands out the ELISA methods, in situ hybridization, serological tests, fluorescence and PCR technique, however they may present lengthy results and a high cost. In recent years, the development of biosensors has been presented as an alternative to chemical and biochemical detection of several compounds showing high potential for application in clinical diagnostics. Thus, we developed an analytical methodology for the rapid diagnosis of canine distemper virus in real samples, with high viral load, using different techniques such as surface plasmon resonance (SPR), located surface plasmon resonance (LSPR), electrochemical impedance spectroscopy (EIS) and colorimetry / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-22Bitstream added on 2014-06-13T20:35:29Z : No. of bitstreams: 1 bregano_lc_me_araca.pdf: 540539 bytes, checksum: 5989de4e2cf1d4911bd4e7adb7afaa77 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No presente estudo foram avaliados 30 cerebelos de cães naturalmente infectados pelo vírus da cinomose canina, confirmados por meio da reação RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) com segmentação do gene do nucleocapsídeo viral, e por análise microscópica das lesões teciduais após a coloração Hematoxilina-Eosina e coloração de Shorr. A distribuição das subpopulações de linfócitos T foi evidenciada pela técnica de imunoistoquímica, empregando-se anticorpos monoclonais CD3+, CD8+ e CD4+. Da mesma forma, a detecção da expressão das metaloproteinases (MMP) -2 e -9 também foi conduzida pela técnica de imunoistoquímica e os resultados foram associados aos encontrados na imunofenotipagem. Foi possível evidenciar marcação mais expressiva de MMP-2 (86,67% de intensidade moderada a intensa) e uma alta proporção de linfócitos T CD4+ e CD8+. Nesse sentido, pode-se concluir que o vírus da cinomose canina se dispersa no sistema nervoso central, alterando a integridade estrutural da barreira hematoencefálica, provavelmente pela ação da MMP-2; e os infiltrados inflamatórios perivasculares presentes são constituídos predominantemente por subpopulações de linfócitos T CD4+ e CD8+ / The present study evaluated 30 cerebella of dogs naturally infected with canine distemper virus, confirmed by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) to target the viral nucleocapsid gene, and by microscopic examination of tissue lesions after hematoxylin-eosin and Shorr staining. The distribution of subpopulations of T lymphocytes was demonstrated by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against CD3 +, CD8 + and CD4 +. Similarly, detection of the expression of matrix metalloproteinases (MMP) -2 and -9 was also conducted by immunohistochemistry and the results were related to those found in immunophenotyping. The results revealing more expressive marking of MMP-2 (86.67% moderate to severe) and a high proportion of CD4 + and CD8 +. In conclusion, it can be infer that canine distemper virus is spread in the central nervous system, altering the structural integrity of the blood-brain barrier, probably by the action of MMP-2. Moreover, perivascular inflammatory infiltrates consisted predominantly of T lymphocyte subpopulations CD4 + and CD8 +

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-11Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 roncatti_ftlb_me_araca.pdf: 389281 bytes, checksum: a97475a27c32aac594bae9073a20134e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Morte celular programada (MCP) ou apoptose é um fenômeno correspondente a resposta do hospedeiro a uma infecção viral, envolvida na morte e/ou sobrevivência da célula infectada. O vírus da cinomose, canine distemper virus (CDV) é capaz de induzir a apoptose em células linfoides circulantes, tecidos linfóides e cerebelo de cães naturalmente infectados. O CDV também afeta as células Vero e linhagens de células de tumor cervical modulando várias etapas da MCP. Além disso, a fase de imunossupressão, estabelecida a partir da infecção pelo CDV, nem sempre está associada à detecção de partículas virais nas células infectadas. No presente estudo, células mononucleares de sangue periférico de cães (CMSP) foram coletadas, cultivadas e infectadas com a estirpe vacinal de CDV (Onderstepoort) e após 24 h da infecção os eventos iniciais da apoptose foram evidenciados pela marcação e quantificação das proteínas anexina v™ e ApoTrace™. A expressão do RNA mensageiro relacionado ao gene Bax, BCl-2, caspase-3, 8 e 9 e survivin foi realizada em culturas de CMPC infectadas e não infectadas após 24h pela reação de cadeia de polimerase em tempo real. A infecção viral foi responsável pela perda da viabilidade CMPC com expressão da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p < 0,001) após 24 h. Os valores elevados da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC encontrados estão em contraste com a maior expressão do mRNA do survivin e da BCl-2, considerados marcadores anti-apoptotic (p < 0,0002). Além disso, Bax, caspase 3, 8 e 9 foram expressos na mesma proporção nas CMPC infectado e não infectado, sem diferenças entre elas (p < 0,005). Em síntese, as células infectadas pelo CDV aumentaram a expressão de survivin e transcrição de gene BCL-2, um mediador de... / Programmed cell death or apoptosis is a central axis of the host response to virus infection involved in cell survival and death. In this respect, several responses are developed by host cells that may control virus replication and infection. On the other hand, viruses have developed strategies to counteract host responses. Canine distemper virus (CDV) has been described to induce apoptosis in lymphoid tissues, lymphoid cells and cerebellum of naturally infected dogs. It has been also described affecting Vero cells and cervical tumor derived cells line by modulating programmed cell death pathways. In addition, the immunosuppression stage established from CDV infection is not always associated to virus detection in damaged cells. Examining the host response at early stages of immunosuppression, especially the expression of activators and/or inhibitors of apoptosis processes can provide important understanding of how the immune responses to CDV are orchestrated. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) early events of apoptosis were detected by search for annexin V™ and ApoTrace™ markers. The expression of mRNA of Bax, BCl-2, caspase-3, 8 and 9 and also survivin genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post- infection by real time polymerase chain reaction. The vaccine strain induced loss of PBMC viability with expression of annexin™ V FITC and Apo-Trace™ FITC in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The initial of early apoptosis after 24h post- infection is in contrast with higher expression of mRNA of surviving and BCl-2, two major anti-apoptotic proteins (p < 0.0002...(Complete abstract click eletronic acces below)

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca: Vera Claudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Banca: Cristina Maria Rodrigues Monteiro / Resumo: Morte celular programada (MCP) ou apoptose é um fenômeno correspondente a resposta do hospedeiro a uma infecção viral, envolvida na morte e/ou sobrevivência da célula infectada. O vírus da cinomose, canine distemper virus (CDV) é capaz de induzir a apoptose em células linfoides circulantes, tecidos linfóides e cerebelo de cães naturalmente infectados. O CDV também afeta as células Vero e linhagens de células de tumor cervical modulando várias etapas da MCP. Além disso, a fase de imunossupressão, estabelecida a partir da infecção pelo CDV, nem sempre está associada à detecção de partículas virais nas células infectadas. No presente estudo, células mononucleares de sangue periférico de cães (CMSP) foram coletadas, cultivadas e infectadas com a estirpe vacinal de CDV (Onderstepoort) e após 24 h da infecção os eventos iniciais da apoptose foram evidenciados pela marcação e quantificação das proteínas anexina v™ e ApoTrace™. A expressão do RNA mensageiro relacionado ao gene Bax, BCl-2, caspase-3, 8 e 9 e survivin foi realizada em culturas de CMPC infectadas e não infectadas após 24h pela reação de cadeia de polimerase em tempo real. A infecção viral foi responsável pela perda da viabilidade CMPC com expressão da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC em mais de 80% das células infectadas em comparação ao grupo controle (p < 0,001) após 24 h. Os valores elevados da anexina™ V FITC e Apo-Trace ™ FITC encontrados estão em contraste com a maior expressão do mRNA do survivin e da BCl-2, considerados marcadores anti-apoptotic (p < 0,0002). Além disso, Bax, caspase 3, 8 e 9 foram expressos na mesma proporção nas CMPC infectado e não infectado, sem diferenças entre elas (p < 0,005). Em síntese, as células infectadas pelo CDV aumentaram a expressão de survivin e transcrição de gene BCL-2, um mediador de... (Resumo completo, clicar acesso eletronico abaixo) / Abstract:Programmed cell death or apoptosis is a central axis of the host response to virus infection involved in cell survival and death. In this respect, several responses are developed by host cells that may control virus replication and infection. On the other hand, viruses have developed strategies to counteract host responses. Canine distemper virus (CDV) has been described to induce apoptosis in lymphoid tissues, lymphoid cells and cerebellum of naturally infected dogs. It has been also described affecting Vero cells and cervical tumor derived cells line by modulating programmed cell death pathways. In addition, the immunosuppression stage established from CDV infection is not always associated to virus detection in damaged cells. Examining the host response at early stages of immunosuppression, especially the expression of activators and/or inhibitors of apoptosis processes can provide important understanding of how the immune responses to CDV are orchestrated. For this purpose, canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) collected from healthy dogs were cultured and infected by CDV vaccine strain (Onderstepoort) and after 24 h post-infection (p.i.) early events of apoptosis were detected by search for annexin V™ and ApoTrace™ markers. The expression of mRNA of Bax, BCl-2, caspase-3, 8 and 9 and also survivin genes was performed in infected and uninfected canine PBMC at 24 h post- infection by real time polymerase chain reaction. The vaccine strain induced loss of PBMC viability with expression of annexin™ V FITC and Apo-Trace™ FITC in more than 80% of infected cells in comparison to control group (p<0.001) at 24h post-infection. The initial of early apoptosis after 24h post- infection is in contrast with higher expression of mRNA of surviving and BCl-2, two major anti-apoptotic proteins (p < 0.0002...(Complete abstract click eletronic acces below) / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Rogério Tortelly / Resumo: Este estudo teve por objetivos testar a eficácia da ribavirina em cães acometidos de cinomose na fase neurológica; avaliar os efeitos colaterais da mesma através do monitoramento hematológico e provas bioquímicas; avaliar a resposta imunológica no sistema nervoso central dos cães através do exame de líquor; adaptar uma dose e via de administração adequada da ribavirina em cães e testar a eficácia do DMSO como permeante de membranas biológicas atuando como vetor da ribavirina. Foram utilizados 20 cães com sinais clínicos neurológica, divididos em dois grupos de tratamento, sendo que um grupo recebeu a ribavirina e outro a associação da ribavirina e o DMSO, sem distinção de sexo e raça, com idades até seis anos e tempo de evolução máximo de 10 dias. Todos os animais foram avaliados clinicamente e realizado o teste de imunofluorescência direta de sangue para inclusão no estudo. Os exames complementares foram realizados de forma rotineira, o líquor foi colhido antes e após o tratamento, as drogas foram administradas durante 15 dias consecutivos e realizada a avaliação clínica diária dos animais. Pelos resultados observamos que a ribavirina demonstrou atividade efetiva contra o vírus da cinomose, exercendo leves efeitos colaterais na medula óssea, sistema imune e sistema gastro-intestinal. No líquor observamos diminuição da produção de anticorpos e verificamos que o DMSO tornou a ação da ribavirina mais eficaz. / Abstract: This study aimed to test the ribavirin efficacy in dogs infected with canine distemper virus in neurological stage; to evaluate this collateral effects by hematological and biochemical evaluation; to evaluate the immunological response on dogs central nervous system (CNS) by cerebrospinal fluid (CSF) analysis; to adapt a dose and an adequate administration route of ribavirin in dogs and to test the efficacy of dimethylsulphoxide (DMSO) in increasing the permeability of biological membranes acting as ribavirin vector. Twenty dogs with neurological signs, divided in two treatment groups, without sex and breed distinction, till six years old and a maximum evolution time of 10 days were used. All animals were selected based on clinical sings and the blood direct fluorescent test (DFA). The hemogram, biochemical and urinalsis test were carried out. At the complementary tests, CSF was collected before and after the treatment, and ribavirin and its association with DMSO were administered during 15 days, consecutive, and the animal clinical evaluation was carried out daily. Based on the results, ribavirin demonstrated effective activity against canine distemper virus, besides its light collateral effects in bone marrow, immune and gastrointestinal systems. In CSF, the lowering of antibody production, and the positive effects of DMSO on ribavirin efficacy were observed. / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Coorientador: Wagner Luis Ferreira / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Resumo: No presente estudo foram avaliados 30 cerebelos de cães naturalmente infectados pelo vírus da cinomose canina, confirmados por meio da reação RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) com segmentação do gene do nucleocapsídeo viral, e por análise microscópica das lesões teciduais após a coloração Hematoxilina-Eosina e coloração de Shorr. A distribuição das subpopulações de linfócitos T foi evidenciada pela técnica de imunoistoquímica, empregando-se anticorpos monoclonais CD3+, CD8+ e CD4+. Da mesma forma, a detecção da expressão das metaloproteinases (MMP) -2 e -9 também foi conduzida pela técnica de imunoistoquímica e os resultados foram associados aos encontrados na imunofenotipagem. Foi possível evidenciar marcação mais expressiva de MMP-2 (86,67% de intensidade moderada a intensa) e uma alta proporção de linfócitos T CD4+ e CD8+. Nesse sentido, pode-se concluir que o vírus da cinomose canina se dispersa no sistema nervoso central, alterando a integridade estrutural da barreira hematoencefálica, provavelmente pela ação da MMP-2; e os infiltrados inflamatórios perivasculares presentes são constituídos predominantemente por subpopulações de linfócitos T CD4+ e CD8+ / Abstract: The present study evaluated 30 cerebella of dogs naturally infected with canine distemper virus, confirmed by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) to target the viral nucleocapsid gene, and by microscopic examination of tissue lesions after hematoxylin-eosin and Shorr staining. The distribution of subpopulations of T lymphocytes was demonstrated by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against CD3 +, CD8 + and CD4 +. Similarly, detection of the expression of matrix metalloproteinases (MMP) -2 and -9 was also conducted by immunohistochemistry and the results were related to those found in immunophenotyping. The results revealing more expressive marking of MMP-2 (86.67% moderate to severe) and a high proportion of CD4 + and CD8 +. In conclusion, it can be infer that canine distemper virus is spread in the central nervous system, altering the structural integrity of the blood-brain barrier, probably by the action of MMP-2. Moreover, perivascular inflammatory infiltrates consisted predominantly of T lymphocyte subpopulations CD4 + and CD8 + / Mestre

Orientador: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Coorientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Maria Angélica Dias / Resumo: A cinomose canina é uma importante afecção contagiosa, com elevada taxa de letalidade e comprometimento multissistêmico, incluindo o sistema nervoso central. A leucoencefalite desmielinizante é a principal alteração neuropatológica observada, sendo sua patogênese pouco conhecida. A quebra da barreira hematoencefálica (BHE) com penetração viral e infiltração leucocitária são aspectos cruciais no desenvolvimento da encefalite desmielinizante. Em seres humanos e animais com alterações semelhantes, as metaloproteinases da matriz (MMPs), principalmente 2 e 9, vem sendo apontadas como os agentes desestruturantes da integridade da BHE. Assim, buscou-se estabelecer o envolvimento das MMPs 2 e 9 na quebra da BHE de cães com cinomose em fase neurológica. O presente estudo teve como escopo principal determinar e quantificar tais enzimas, pela técnica de zimografia, no soro e no liquor de cães hígidos (Gcon, n=10) e cães com cinomose na fase neurológica (Gcin, n=10). Além disso, foram determinados os parâmetros físico-químicos do liquor para a obtenção de maiores informações acerca da integridade da BHE. A análise estatística multivariada exploratória mostrou padrões distintos segundo as variáveis estudadas, sendo estas comparadas entre os grupos com o teste t / Abstract: Canine distemper is an important contagious disease with high mortality rate and multisystem involvement including the central nervous system. The demyelinating leukoencephalitis is the main neuropathological alteration observed and its pathogenesis is not well known. The rupture of the blood brain barrier (BBB) with viral penetration and leukocyte infiltration are crucial for the development of demyelinating encephalitis. In humans and animals with similar disorders, matrix metalloproteinases (MMPs) especially 2 and 9 have been pointed as the agents that destabilize the integrity of the BBB. Thus, we sought to establish the involvement of MMPs 2 and 9 in BBB rupture of dogs with distemper at the neurological phase. The present study aimed to determine and quantify these enzymes by the technique of zymography in serum and cerebrospinal fluid of healthy dogs (Gcon, n=10) and dogs with distemper at neurological stage (Gcin, n=10). Furthermore, we determined the physicochemical parameters of liquor to obtain more information about the integrity of the BBB. Exploratory multivariate analysis showed distinct patterns according to the variants studied, which were compared between groups with t test / Mestre