Antecedents: Les malalties al·lèrgiques s'han associat a un desequilibri immunològic consistent en un predomini de la resposta Th2 sobre la Th1. Determinades molècules expressades en la superfície de las cèl·lules presentadores de l'antigen (CPA) són fonamentals per a l'activació dels limfòcits T (LT) i també per induir la derivació cap la producció d'un tipus determinat de citocines Th1 o Th2. Es possible que els pacients al·lèrgics presentin alteracions en l'expressió de aquestes molècules i que la immunoteràpia (IT) reverteixi aquesta alteració. Objectiu: Avaluar l'expressió intracel·lular d'IL-4, IL-10 i IFN-g en LT d'individus sans i pacients al·lèrgics. Investigar l'expressió de CD23 i CD86 (B7.2) en limfòcits B (LB) i monòcits (M). Relacionar aquesta expressió amb l'aplicació d'IT i amb l'efecte clínic sobre la sensibilització a l'al·lergen, la simptomatologia clínica i l'ús de medicació.Mètodes: Estudi prospectiu, obert, aleatoritzat amb grup control. Pacients: 10 individus sans i 28 pacients asmàtics, al·lèrgics a Dermatophagoides pteronyssinus (D pteronyssinus), 16 tractats amb IT i 12 sense IT. Mètodes: Seguiment de proves cutànies i de provocació conjuntival a D pteronyssinus. Control de la puntuació de símptomes i de l'ús de medicació. Determinació mitjançant citometria de flux, en cultius de cèl·lules mononucleades de sang perifèrica estimulats amb PMA i ionomicina o estimulats amb D pteronyssinus i sotmesos a re-estimulació, del percentatge de LT que expressaven IL-4, IL-10 i IFN-g. Determinació de l'activació limfocitària (segons l'expressió de CD69). Estudi de la proliferació limfocitària enfront el D pteronyssinus. Avaluació del percentatge de LB (CD20+) i de M (CD14+) que expressaven CD23 o CD86. En els individus al·lèrgics es va realitzar un control clínic i dels estudis "in vitro" a l'inici del estudi (T1), als 6 mesos (T2) i als 12 mesos (T3).Resultats: Els malalts al·lèrgics presentaven respecte als individus sans un major percentatge de M que expressaven CD23 (p=0,022) i una capacitat d'activació de les cèl·lules T (CD69) disminuïda (p<0,001). A l'inici de l'estudi, no es van trobar diferències en les característiques clíniques ni immunològiques entre el grup aleatoritzat a rebre IT o no. La IT es va associar a una disminució significativa de la puntuació de símptomes, de l'ús de medicació, de la sensibilitat cutània i conjuntival. A T2 i T3, els pacients tractats amb IT mostraven un menor percentatge de M que expressaven CD23 (T2: p=0,019 i T3: p=0,024) i un major percentatge de LB que expressaven CD86 (T3: p=0,06), respecte al grup sense IT. En l'anàlisi intragrup del pacients amb IT es va evidenciar un augment del percentatge de LB que expressaven CD23 a T2 i T3 comparat amb T1 (T1: p=0,024; T3 p=0,024). La IT es va associar a un increment del percentatge de LT CD69+ (T3: p=0,05). No es van evidenciar canvis en l'expressió de citocines en els cultius estimulats de forma inespecífica, mentre que en els cultius amb D pteronyssinus s'observava una tendència a augmentar el percentatge d'expressió d'IFN-g en LT durant la IT, i a un augment del percentatge de LT que expressaven IL-10 a T2. Va disminuir la proliferació limfocitària front a D pteronyssinus (T3: p=0,026). La milloria clínica es va associar a una reducció de l'expressió de CD23 en M, a un augment de l'activació de LT i a una pèrdua de la resposta proliferativa front l'al·lergen.Conclusions: L'expressió de molècules que poden participar en senyals de coestimulació durant la presentació antigènica és diferent en pacients al·lèrgics i individus sans. La IT indueix canvis en l'expressió d'aquestes molècules i pot influenciar el tipus de resposta immunològica front l'al·lergen. / Introduction: Allergic diseases are associated with a disturbance in the immune balance with a predominance of a Th2 over a Th1 response. Certain molecules, expressed on the surface of antigen presenting cells (APC) are crucial for T cell activation and also play a role on the induction Th1 or Th2 cytokine production. It is possible that allergic patients may have an alteration on the expression of these molecules and specific immunotherapy (SIT) might revert this situation.Objectives: To evaluate intracellular IL-4, IL-10 and IFN-g expression in T cells of healthy and allergic subjects. To evaluate the expression of CD23 and CD86 (B7.2) on B cells and monocytes (M). To correlate this expression with the administration of SIT and with the clinical effect on the sensitivity to the allergen, the clinical symptoms and with the use of medication.Methods: Prospective, open, controlled, randomized study. Subjects: 10 healthy controls and 28 asthmatic patients, allergic to Dermatophagoides pteronyssinus (D pteronyssinus), 16 randomized to receive SIT and 12 without SIT. Methods: Follow up of skin prick tests and conjunctival challenge to D pteronyssinus. Control of symptom and medication scores. Determination by flow cytometry, in peripheral blood mononuclear cell cultures stimulated with PMA and ionomicine or with D pteronyssinus followed by restimulation, of the percentage of T cells expressing IL-4, IL-10 and IFN-g. Determination of T cell activation (by CD69 expression). D pteronyssinus induced T cell proliferation assays. Evaluation of the percentage of B cell (CD20+) and M (CD14+) expressing CD23 or CD86. Clinical and "in vitro" controls were performed on the allergic patients at the beginning of the study (T1), at 6 months (T2) and at 12 months (T3).Results: Allergic patients compared with healthy controls showed a higher percentage of M expressing CD23 (p=0,022) and a reduced activation of T cells (CD69+) (p<0,001). At the beginning of the study the group of patients randomized to receive SIT and the group without SIT showed no differences with respect to their clinical and immunological characteristics. Administration of SIT was associated with a significant reduction of symptom and medication scores, cutaneous and conjunctival sensitivity to D pteronyssinus. At T2 and T3, patients receiving SIT showed a lower percentage of M expressing CD23 (T2: p=0,019 and T3: p=0,024) and a higher percentage of B cells expressing CD86 (T3: p=0,06), compared with the group without SIT. In the intragrup analysis of the patients receiving SIT there was an increase of the percentage of B cells expressing CD23 at T2 and T3 compared with T1 (T1: p=0,024; T3 p=0,024). SIT was associated with an increase in the expression of CD69 on T cells (T3: p=0,05). There were no changes on the expression of intracellular cytokines in the non-specifically stimulated cell cultures, while in allergen stimulated cultures there was an tendency to increase IFN-g expression during SIT, and to an increase at T2 of IL-10 expression. There was also a decrease of D pteronyssinus induced lymphocyte proliferation (T3: p=0,026). Clinical improvement was also associated with a decrease of M expressing CD23, an increase of T cell activation and a reduction of D pteronyssinus induced lymphocyte proliferationConclusions: Expression of molecules, which can participate in costimulatory signalling during antigen presentation, is different in allergic patients compared with healthy individuals. SIT induces changes on the expression of such molecules and may influence the immune response to allergens.

Pendent

El factor de la necrosis tumoral, TNF-alfa, es una citocina pleiotrópica implicada en un amplio espectro de respuestas inflamatorias y del sistema inmune. El efecto biológico del TNF-alfa&#61472;está mediado por dos receptores de membrana, el receptor 1 de TNF, TNFR1 y el receptor 2 de TNF, TNFR2. Estos dos receptores se pueden presentar como receptores solubles formados a partir del procesamiento proteolítico de la región extracelular del receptor de membrana. Se han descrito concentraciones elevadas de receptor soluble de TNFR2 en el suero de múltiples patologías inflamatorias. En este trabajo, describimos por primera vez una isoforma de RNAm de TNFR2 humano, producida por splicing alternativo, a la que le faltan los exones 7 y 8 que codifican la mayor parte de la región citoplasmática y parte del domininio intracitoplasmático de la proteina. El splicing alternativo de los dos exones produjo un cambio en la pauta de lectura, lo que llevó a la aparición de un nuevo codón de parada tras 6 nuevos aminoácidos. Se obtenía de este modo, un cDNA que codificaba una proteína de TNFR2 formada por la misma región extracelular y los mismos 5 primeros aminoácidos del dominio transmembrana, que el TNFR2 nativo, seguidos de 6 nuevos aminoácidos como único extremo carboxilo terminal. El estudio de la expresión de la proteína en células tranfectadas con el cDNA de esta isoforma, mostró la naturaleza soluble de esta proteína. La proteína poseía un peso molecular de aproximadamente 42 KDa. En un ensayo de citotoxicidad inducida por TNF-alfa, se mostró que esta isoforma podía bloquear la apoptosis inducida por TNF-alfa&#61484; lo que sugiere su función reguladora de la acción del TNF como antagonista de su función biológica. Se desarrolló un ELISA que cuantifica el receptor soluble generado por splicing alternativo. Y se determinaron las concentraciones de receptor soluble producido por splicing alternativo en el suero de individuos sanos y en pacientes de diferentes patologías inflamatorias. Nuestros datos muestran que el receptor soluble producido por splicing alternativo está presente en el suero de individuos sanos a bajas concentraciones y a concentraciones elevadas en sujetos con sepsis y artritis reumatoide. Se determinó que existe una asociación negativa entre el receptor soluble producido por splicing alternativo y varios componentes del síndrome metabólico y también con la resistencia a la insulina.Por otro lado, se observó que los pacientes de artritis reumatoide con valores muy elevados de isoforma, presentaban, probablemente una mejor respuesta a la terapia con anticuerpos anti-TNF-alfa.

Los macrófagos son células fagocíticas pertenecientes al sistema inmunitario que participan tanto en la respuesta innata como en la adaptativa. En presencia de M-CSF, su estímulo mitogénico específico, proliferan, mientras que el tratamiento con estímulos activadores como el IFN-&#947; o el LPS hace que detengan su proliferación, se activen y pasen así a ejercer sus funciones específicas. En este contexto, existen dos tipos de citocinas con capacidad de activar al macrófago, las llamadas citocinas de tipo Th1 y las de tipo Th2. Las citocinas de tipo Th1 como el IFN-&#947; inducen en los macrófagos un patrón de activación llamado "clásico" cuya finalidad es provocar una respuesta de tipo proinflamatoria que acabará por eliminar la presencia de agentes patógenos. Por el contrario, las citocinas de tipo Th2 como la IL-4 inducen una activación "alternativa" en los macrófagos, cuya finalidad es la de llevar a cabo la reparación y remodelación tisular tras la respuesta proinflamatoria. En este estudio hemos observado, por primera vez, que la activación alternativa del macrófago cumple también la dicotomía proliferación/activación observada bajo estímulos clásicos e inhibe la proliferación del macrófago en el umbral entre las fases G1 y S del ciclo celular. En este sentido, hemos visto que tanto el IFN-&#947; como la IL-4 inducen un alargamiento en el tiempo de la cinética de activación de la MAPK ERK-1/2, encargada de regular la proliferación del macrófago en respuesta al M-CSF. Esta MAPK es regulada por la fosfatasa MKP-,1 quien se encarga de defosforilarla. Así, en presencia del M-CSF, MKP-1 se induce para regular a ERK-1/2 mientras que el IFN-&#947; y la IL-4 bloquean su expresión de forma dependiente de STAT. La inhibición directa de MKP-1 mediante tecnología de RNA de interferencia induce también un alargamiento de la actividad de ERK-1/2 y, en consecuencia, una parada de la proliferación, corroborando así los resultados obtenidos previamente. También hemos analizado el estado de activación de los complejos cdk2/cicE, encargados de la progresión del ciclo celular entre las fases G1 y S. Hemos visto que, mientras que el M-CSF induce la expresión de la ciclina E y, en consecuencia, la activación del complejo cdk2/cicE, tanto el IFN-&#947; como la IL-4 inhiben a ambos, explicando así el mecanismo utilizado por estas citocinas para mantener la parada en G1. Este bloqueo de la actividad cdk2/cicE es llevado a cabo gracias a la acción del inhibidor de cdk p21Waf1. Sin embargo, aunque ambas citocinas inducen la expresión de esta proteína, utilizando células knockout para p21Waf1 hemos demostrado que sólo la parada inducida por la IL-4 es dependiente de esta proteína, lo cual sugiere que el IFN-&#947; y la IL-4 utilizan vías de señalización distintas para ejercer funciones celulares similares. Por otro lado, hemos analizado también la implicación de la vía de las MAPK en la activación alternativa del macrófago. En este aspecto hemos demostrado que, aunque la expresión de los principales genes responsables de dicha activación es dependiente de STAT6, la acción de JNK1 ejerce un efecto sinérgico sobre su inducción, ya que la inhibición de esta quinasa resulta en una disminución de la expresión de dichos genes. El mecanismo mediante el cual JNK1 ejerce esta función no está aún del todo claro. Sin embargo, los resultados obtenidos mediante ensayos de inmunoprecipitacion de cromatina sugieren que JNK1 podría estar fosforilando a determinados cofactores en las zonas promotoras de algunos genes, colaborando así con la actividad del factor de transcripción STAT6. / Macrophages play a crucial role as regulators of immune response. They are originated from bone marrow stem cells and, in response of growth factors and particularly to macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), they proliferate and differentiate. We have previously observed that activation of extracellularly regulated kinase (ERK) 1/2 is required for macrophage proliferation in response to growth factors. A short and early pattern of ERK activity correlated with the proliferative response. In contrast, slightly prolonged patterns of activity of these kinases were induced by signals that lead to macrophage activation and growth arrest. IFN-&#947; is the main endogenous Th1 type macrophage activator and IL-4 is the main Th2 type one. While M-CSF withdrawal arrested the cell cycle at early G1, treatment of macrophages with IFN-&#947; or IL-4 stopped the cell cycle later, at the G1/S boundary. IFN-&#947; and IL-4 induced the expression of the Cdk inhibitor p21Waf1. Using knockout mice and siRNA experiments, we found that p21Waf1 is required for IL-4- but not for IFN-&#947;-dependent inhibition of proliferation. Moreover, both IFN-&#947; and IL-4 elongate the activity pattern of the MAPK ERK-1/2 through the inhibition of the phosphatase MKP-1, which in fact results in a decrease of proliferation. Moreover, inhibition of MKP-1 expression using siRNA technology or synthetic inhibitors also led to elongated ERK activity and significant blockage of M-CSF-dependent proliferation. On the other hand, we have also analyzed the relationship between IL-4 and the MAPK pathway on the context of the alternative activation of macrophages. The IL-4 signaling pathway involves activation of STAT-6. However, IL-4 has also the capability to activate members of the MAPK family. In primary bone marrow-derived macrophages, we have observed strong activation of JNK-1 at early time points of IL-4 stimulation, whereas weak activation of ERK-1/2 and p38 were detected at a more delayed stage. By using selective inhibitors and knockout models, we have explored the contributions of MAPK activation to the macrophage response to IL-4. Our findings indicate that JNK-1 regulate IL-4-mediated expression of genes typically involved in alternative activation such as arginase 1.

La neumonía adquirida en la comunidad (NAC) continúa siendo en la actualidad una enfermedad potencialmente grave, que con frecuencia presenta una evolución desfavorable, a pesar del tratamiento antibiótico adecuado. La hipótesis de la tesis plantea que es posible monitorizar la respuesta inflamatoria que tiene lugar durante la NAC y, que dicha respuesta, puede ser influenciada por los antibióticos utilizados en su tratamiento, así como modulada mediante una terapia adyuvante con corticoides. Con la intención de demostrar esta hipótesis, se desarrollaron dos estudios prospectivos y un ensayo randomizado. En el primer estudio, se incluyeron consecutivamente 38 pacientes que ingresaron con NAC con extensa afectación radiológica e insuficiencia respiratoria. En todos ellos, se realizó una determinación seriada de citocinas (TNF-alfa, IL-1beta, IL-6, IL-8 e IL-10) en el momento del ingreso y en los días 1, 2, 3, 5 y 7 de tratamiento. En el segundo estudio, se incluyeron consecutivamente 52 pacientes con neumonía neumocócica. En este estudio, se comparó la respuesta inflamatoria en los pacientes tratados con beta-lactámicos con aquellos que recibieron terapia combinada: beta-lactámicos más fluoroquinolona. En todos los pacientes, se realizó una determinación seriada de citocinas en sangre. Finalmente, se llevó a cabo un ensayo randomizado, doble ciego, metilprenisolona vs placebo, en el que se incluyeron 56 pacientes con NAC con extensa afectación radiológica e insuficiencia respiratoria. Todos los pacientes recibieron tratamiento con ceftriaxona y levofloxacino, y de manera randomizada y doble ciego, se administró un bolus de metilprednisolona o placebo, 30 minutos antes del inicio del antibiótico seguido de una pauta descendente de nueve días de duración. Los resultados de la tesis sugieren que es posible detectar la presencia de las citocinas estudiadas en sangre venosa. Sin embargo, sólo las citocinas IL-6, IL-8 e IL-10 fueron detectadas en todos los pacientes con neumonía en el momento del ingreso, con un rápido descenso a las 48 horas que coincidió con la defervescencia clínica. Respecto a la relación entre respuesta inflamatoria y pronóstico de la neumonía, las concentraciones iniciales de citocinas fueron superiores y se mantuvieron más tiempo elevadas en los pacientes que evolucionaron desfavorablemente. Entre los objetivos de la tesis se incluía estudiar el impacto del tratamiento antibiótico sobre la respuesta inflamatoria en la neumonía neumocócica. Los resultados de la tesis muestran que la terapia combinada (beta-lactámico y fluoroquinolona) produjo un descenso más rápido de las concentraciones de IL-6 a las 48 horas de tratamiento. Finalmente, el objetivo principal de la tesis fue demostrar que la asociación de corticoides como terapia adyuvante anti-inflamatoria en el tratamiento de la NAC podría ser beneficiosa. Los resultados de la tesis muestran que en pacientes con NAC que ingresaron con insuficiencia respiratoria y una extensa afectación radiológica, la administración de metilprednisolona en combinación con el tratamiento antibiótico se asoció a mejor evolución de varias variables clínicas como el cociente pO2/FiO2, la resolución radiológica y la escala del “time to resolution of morbidity” (TRM), así como a una reducción de la necesidad de ventilación mecánica. El efecto beneficioso de los corticoides sobre el curso clínico se reflejó asimismo en el comportamiento de los marcadores inflamatorios. Las concentraciones en sangre de IL-6 y proteína C reactiva fueron inferiores y disminuyeron más rápidamente en los pacientes tratados con metilprednisolona. / The community-acquired pneumonia (CAP) remains an important cause of disease worldwide. Despite advances in diagnostic methods and antibiotic treatment, the morbidity and mortality of NAC remain high. The hypothesis of the thesis suggests that it is possible to monitor the inflammatory response that occurs during the NAC and that this response may be influenced by antibiotics used to treat it, and modulated by adjuvant therapy with corticosteroids. In order to demonstrate this hypothesis, we developed two prospective studies and a randomized trial. In the first study, a total of 38 consecutive patients with CAP and with extensive radiographic involvement and respiratory failure were prospectively included. For all cases, serial determination of cytokines (TNF- alpha, IL-1beta, IL-6, IL-8 and IL-10) were obtained at the time of admission and on days 1, 2, 3, 5 and 7 of treatment. In the second study, 52 consecutive patients with pneumococcal pneumonia were prospectively included. Concentrations of circulating were determined for all patients. To asses the effects of treatment on the systemic expression of cytokine production, patients were divided into two groups: those initially treated only with beta-lactam (beta-lactam group) and those initially treated with combination therapy including beta-lactams plus fluoroquinolone (combination therapy group). Finally, we conducted a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, which included 56 patients admitted with CAP and with extensive radiographic involvement and respiratory failure. All patients were treated with ceftriaxone and levofloxacin, and were randomly assigned to treatment with corticosteroid therapy, administered in the form of a methyl-prednisolone bolus given prior to antibiotic treatment followed by a tapering of nine days. The results of the thesis suggest that all studied cytokine, except for IL-1beta, could be detected in venous blood. However, only the cytokines IL-6, IL-8 and IL-10 were detected in all patients with pneumonia on admission, with a significant decrease at 48 hours that correlate with the clinical defervescence. Regarding the relationship between inflammatory response and prognosis of pneumonia, the initial concentrations of cytokines were higher and remained elevated longer in patients who poor outcome. Finally, the main objective of the thesis was to demonstrate that the use of corticosteroids as an adjunct therapy for pneumonia could prevent an excessive inflammatory response, improving the prognosis of more severe episodes of CAP. The results of the tesis show that in patients with CAP admitted with respiratory failure and extensive radiographic involment, the administration of methyl-prednisolone in combination with antibiotic treatment was associated with better outcomes of several clinical variables as the ratio pO2/FiO2, radiological resolution and scale “time to resolution of morbidity” (TRM), and a reduced need for mechanical ventilation. The beneficial effect of corticosteroids on the clinical course was also reflected in the behavior of inflammatory markers. Blood concentrations of IL-6 and C- reactive protein were lower and quickly reduced in patients treated with methyl-prednisolone.

L'obesitat és un estat inflamatori que porta a l'activació crònica de la resposta immune caracteritzada per la inducció de gens i mediadors proinflamatoris. L'objectiu principal d'aquesta tesi va ser estudiar els efectes antiinflamatoris de les procianidines i les possibles dianes moleculars modulades per aquests flavonoids. Degut al paper central del macròfag en la inducció de inflamació sistèmica, vam analitzar els efectes d'un extracte de procianidines en un model d'inflamació in vitro. Utilitzant models d'obesitat i síndrome metabòlic en rata, vam avaluar els efectes antiinflamatoris de les procianidines in vivo. Els resultats indiquen que les procianidines actuen com antiinflamatoris in vitro inhibint la resposta inflamatòria al macròfag i in vivo com agents preventius tant de la inflamació local com sistèmica, modulant els nivells de mediadors inflamatoris. Aquests resultats indiquen que les procianidines podrien ser candidats per la suplementació dietètica i components d'aliments funcionals per la prevenció de malalties amb component inflamatòria. / Once established that obesity is an inflammatory condition leading to chronic activation of the immune system response, the aim of this thesis was to characterize and understand if dietary procyanidins could modulate the low grade inflammatory response related to obesity and the Metabolic Syndrome. Due to the central role of macrophages in obesity induced low-grade inflammation, we analyzed procyanidin effects in an in vitro model of inflammation. By using rat models of obesity, we also assessed procyanidin anti-inflammatory effects in vivo. To sum up, our results showed that procyanidins act as anti-inflammatory agents both in vitro, by modulating the macrophage inflammatory response, and in vivo, by preventing both local and systemic inflammation through the modulation the inflammatory mediators. In conclusion, the use of procyandins will represent an additional nutritional approach that, in association with lifestyle interventions, would improve the obesity induced inflammation and as a consequence ameliorate the metabolic syndrome.

La apoptosis es un proceso de muerte celular programada que está involucrada en la selección del repertorio de linfocitos T y en el mantenimiento de la tolerancia inmunológica, ya que es el mecanismo por el que se eliminan las células que podrían dar lugar a respuestas autoinmunes. Existen evidencias de que la alteración en los mecanismos apoptóticos están implicados en la patogenia y la actividad de las enfermedades autoinmunes sistémicas, de las cuales, el lupus eritematoso sistémico (LES) es la más representativa. Se han identificado en el ser humano algunos genes que codifican oncoproteínas y citocinas cuya transcripción parece ser crucial en este proceso: unos pro-apoptóticos (fas, p53 y TNF-alfa) y otros anti-apoptóticos (bcl-2 y IL-10). Se sospecha que cambios en la expresión de los mismos podrían desempeñar algún papel en la patogenia del LES, al favorecer la proliferación de determinadas poblaciones celulares de efecto autorreactivo.Con los trabajos de la presente tesis doctoral nos propusimos: determinar la implicación de los oncogenes (bcl-2, fas y p53) y las citocinas (IL-10 y TNF-alfa) en la disregulación apoptótica que presentan los pacientes con LES; estudiar la interrelación existente entre ellos; y analizar la relación de las posibles disregulaciones de los elementos que participan en la apoptosis con la actividad de la enfermedad lúpica.Los resultados obtenidos muestran cómo los oncogenes fas, bcl-2 y p53, las citocinas IL-10 y TNF-alfa, y la fracción proteica soluble del Fas (sFas) tienen una notable importancia en la patogenia y la actividad de la enfermedad lúpìca. Las vías apoptóticas del Fas y p53 son independientes entre sí. Sin embargo, diversas citocinas (IL-10, TNF-alfa), oncoproteínas (Bcl-2) y fracciones proteicas solubles (sFas) pueden ser las encargadas de relacionarlas entre sí. La interferencia de estas vías apoptóticas produciría una eliminación deficiente de los linfocitos autorreactivos. Ello favorecería su supervivencia, lo que provocaría las alteraciones de disregulación inmunológica propias del LES.

El concentrat de plasma assecat per polvorització (SDP) i el d’immunoglobulines (IC) són suplements dietètics que han estat àmpliament utilitzats en l’alimentació dels animals de granja i que han estat proposats com alternativa a l’ús dels antibiòtics com a promotors del creixement, especialment durant el període posterior al deslletament. Aquests suplements incrementen la taxa de creixement degut, en part, a que atenuen la resposta del sistema immunitari. Per exemple, s’ha pogut observar que la suplementació dietètica amb proteïnes plasmàtiques redueix la sobreestimulació immunitària en un model de malaltia inflamatòria intestinal. El sistema immunitari mucosal comú connecta els llocs inductors (en aquest cas la mucosa intestinal) amb els llocs efectors (com les mucoses naso- i broncoalveolar o la genito-urinària), que facilita el moviment de cèl•lules immunitàries entre teixits allunyats anatòmicament i permet que la dieta moduli la resposta associada a infeccions extraintestinals. Així doncs, ens hem plantejat si la suplementació dietètica amb proteïnes plasmàtiques podia modular la resposta immunitària en una inflamació pulmonar aguda. Primerament es va establir una pauta adequada per obtenir un model d’inflamació pulmonar robust i reproduïble. Seguidament s’han estudiat els efectes dels suplements SDP i IC sobre la resposta immunitària en aquest model d’inflamació, en ratolins acabats de deslletar. S’han analitzat cèl•lules i mediadors inflamatoris involucrats tant en la resposta innata, com en la resposta adaptativa. Finalment, també s’han estudiat els efectes dels pinsos experimentals sobre diferents elements que intervenen en la resolució de la resposta inflamatòria, com les cèl•lules reguladores i les citocines antiinflamatòries. L’administració de LPS produeix una migració de leucòcits i un alliberament massiu de citocines i quimiocines proinflamatòries, que recluten i activen monòcits i neutròfils a l’espai alveolar i al teixit pulmonar. A més estimula la immunitat adaptativa, en la que hi ha un increment considerable de limfòcits Th activats, així com una gran producció de citocines. Ambdues dietes disminueixen el reclutament de leucòcits, sobretot els neutròfils i els monòcits. Tot i que la resposta innata és més extensa, les dietes són més efectives sobre la resposta adaptativa, on redueixen les poblacions limfocitàries estimulades per l’LPS tant a pulmó com a sang. Els suplements també atenuen de forma notable l’efecte de l’LPS sobre l’expressió de citocines i quimiocines proinflamatòries a l’espai alveolar. Els efectes de l’SDP i l’IC estan mediats per canvis en l’expressió de citocines antiinflamatòries, ja que augmenten la concentració de IL-10 a pulmó i a jejú, i la del TGF-β a pulmó. Ambdues dietes redueixen el balanç entre els limfòcits Th activats i els limfòcits T reguladors, d’aquesta manera atenuen la magnitud de la resposta inflamatòria i augmenten la concentració de mediadors essencials per la reparació del teixit. Els resultats d’aquest estudi indiquen que els suplements amb proteïnes plasmàtiques poden limitar la resposta immunitària pulmonar i podrien ser útils en la prevenció i atenuació de les malalties inflamatòries extraintestinals. / The concentrated spray-dried plasma (SDP) and immunoglobulin (IC) are dietary supplements that have been widely used in the diet of farm animals and proposed as an alternative to the use of antibiotics as growth promoters, especially in the subsequent weaning period. These supplements increase the growth rate, in part because they attenuate the response of the immune system. The common mucosal immune system connects the inductive sites (in this case the intestinal mucosa) with the effector sites (as nasopharyngeal and bronchoalveolar mucosa or genito-urinary), which facilitates the movement of immune cells between anatomically distant tissues and allows the diet to modulate the associated response to intestinal infections. Consequently, the aim of the present thesis was to evaluate whether the dietary supplementation with plasma proteins could modulate the immune response in an acute lung inflammation. First, a suitable pattern was established in order to obtain a robust and reproducible inflammatory lung model. Next, the effects of SDP and IC supplementation on the immune response in this inflammation model were studied in newly weaned mice. Cells and inflammatory mediators, involved either in innate response as in adaptive response, have been analyzed. Finally, the effects of experimental feed on different elements involved in the resolution of the inflammatory response, such as regulatory cells and inflammatory cytokines, have also been assessed. Both diets decreased the recruitment of leukocytes. Although the innate response is more extensive, the diets are more effective on the adaptive response. The supplements also significantly attenuated the effect of LPS on the expression of pro-inflammatory cytokines and chemokines in the alveolar space. The effects of SDP and IC are mediated by changes in the expression of anti-inflammatory cytokines. Both diets reduced the balance between activated Th cells and regulatory T cells, in such a way that, the magnitude of the inflammatory response is attenuated and the concentration of essential mediators for tissue reparation is increased. In conclusion, the results of this study indicate that plasma protein supplementation is able to limit the pulmonary immune response and could be useful in the prevention and attenuation of the extraintestinal inflammatory diseases.