Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-06-02T17:56:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) CAMILALEMES.pdf: 923174 bytes, checksum: 5ba7bab406fd4bbb2402df5b8f62e01c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T17:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) CAMILALEMES.pdf: 923174 bytes, checksum: 5ba7bab406fd4bbb2402df5b8f62e01c (MD5) Previous issue date: 2015-02-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Among the Flowering Plants, orchids stand out for its diversity and size of your family. Human action, through the degradation of natural environments, has led many orchid species to extinction. For this reason, in vitro culture has been used as a tool for propagation, since it allows the germination and development of such plants in relatively less time to that observed in nature. Thus, the development of multiplication and development of plants grown in vitro protocols has become an important tool. This work was developed with the goal of developing an in vitro propagation protocol and acclimatization of Miltonia flavescens Lindl. Four experiments were performed in the in vitro culture laboratory and Jardinocultura area of the Faculty of Agricultural Sciences (FCA) of the Federal University of Grande Dourados (UFGD), in which were evaluated the germination and early development of protocorms in different media crops; the initial growth of plants grown in different media cultures supplemented with sucrose concentrations; the root growth in medium supplemented with different concentrations of auxin and cytokinin and acclimatization of plants under different light spectra. Germination at 30 days after sowing, and the initial development of protocorms, 180 days after sowing, were higher in cultivated seeds in MS and MS ½ medium. The initial growth of plants, 180 days after planting, was higher in plants grown on MS ½ medium supplemented with 25 g L-1 sucrose. The root growth was greater in plants grown for 180 days, MS ½ medium with hormonal favor of auxin. At 30 days after pre acclimatization under white fluorescent light (20.0 μmol m-2 s-1), there was 100% survival of plants, and after 180 days these plants exhibited the majority of the growth air ratio. Based on the results, establishes the M. flavescens cultivation protocol for propagation of the specie, both in reintroduction programs and for marketing. / Dentre as Angiospermas, as orquídeas destacam-se pela sua heterogeneidade e tamanho de sua família. A ação humana, através da degradação de ambientes naturais, tem levado muitas espécies de orquídeas à extinção. Por este motivo, o cultivo in vitro tem sido utilizado como ferramenta na propagação, uma vez que possibilita a germinação e o desenvolvimento destas plantas em tempo relativamente menor ao observado na natureza. Desta forma, a elaboração de protocolos de multiplicação e desenvolvimento de plantas cultivadas in vitro tem se tornado ferramenta importante. Assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de elaborar um protocolo de propagação in vitro e aclimatização de Miltonia flavescens Lindl. Foram realizados quatro experimentos no Laboratório de cultivo in vitro e na área de Jardinocultura da Faculdade de Ciências Agrárias (FCA) da Universidade Federal da Grande Dourados (UFGD), nos quais avaliou-se a germinação e o crescimento inicial de protocormos em diferentes meios de cultivos; o crescimento inicial de plantas cultivadas em diferentes meios de cultivos suplementados com concentrações de sacarose; o crescimento do sistema radicular em meio suplementado com diferentes concentrações de auxina e citocininas e aclimatização de plantas sob diferentes espectros luminosos. A germinação, aos 30 dias após a semeadura, e o crescimento inicial de protocormos, aos 180 dias após a semeadura, foram maiores em sementes cultivadas nos meios MS e MS ½. O crescimento inicial das plantas, 180 dias após o plantio, foi maior em plantas cultivadas em meio MS ½ suplementado com 25 g L-1 de sacarose. O crescimento do sistema radicular foi maior nas plantas cultivadas por 180 dias, em meio MS ½ com balanço hormonal favorável à auxina. Aos 30 dias após a pré aclimatização, sob luz fluorescente branca (20,0 μmol m-2 s-1), observou-se 100% de sobrevivência das plantas, e após 180 dias, estas plantas apresentaram a maior relação de crescimento da parte aérea. Com base nos resultados obtidos, estabelece-se o protocolo de cultivo de M. flavescens para fins de propagação da espécie, tanto em programas de reintrodução quanto para sua comercialização.

Phytochromes (PHYs) and plant hormones have been emerging as important regulators of fleshy fruit physiology and quality traits; however, the relevance of PHY-hormonal signaling crosstalk in controlling fruit development and metabolism remains elusive. This Thesis assesses the role of PHYs and their interplay with auxins, cytokinins and ethylene during the regulation of tomato (Solanum lycopersicum) fruit development and ripening, with a focus on the control of the plastid biogenesis, sugar metabolism and carotenoid accumulation. In Chapter I, we present evidence that the deficiency in PHY chromophore phytochromobilin (PΦB) biosynthesis, which leads to a global deficiency in functional PHYs, represses fruit chloroplast biogenesis in immature fruits and inhibits fruit sugar accumulation by transcriptionally downregulating sink- and starch biosynthesis-related enzymes. Genetic and physiological evidence suggested the involvement of both auxins and cytokinins as mediators of the negative impact of PΦB deficiency on fruit sink strength and chloroplast formation. During the ripening phase, PΦB deficiency was shown to delay the rise in climacteric ethylene production, affecting the ripening initiation rather than its progression. PHY-hormonal signaling crosstalk was shown to be active not only in the more externally positioned fruit tissues (i.e., pericarp) but also in the most inner fruit regions (i.e., columella). We, therefore, concluded that the global deficiency in functional PHY drastically affects fruit sugar metabolism, chloroplast formation as well as the timing of ripening via an intricate interplay involving phytochromes, auxins, cytokinins and ethylene. In Chapter II, we employed fruit-specific RNAi-mediated silencing of PHY genes to shed light on the specific role played by fruit-localized PHYs and their downstream signaling cascades on tomato fruit physiology and quality traits. Data revealed that fruit-localized SlPHYB2 negatively regulates chlorophyll accumulation in immature fruits whereas SlPHYA positively influences the plastid division machinery. Both SlPHYA and SlPHYB2 were shown to play overlapping, yet distinct, roles in controlling fruit starch metabolism and carotenoid biosynthesis. Our data implicated cytokinin signaling-related proteins as mediators of the SlPHYA-dependent regulation of plastid division machinery, and specific AUXIN RESPONSE FACTORs as intermediates in the PHY-mediated regulation of fruit sugar and carotenoid metabolisms. We concluded that fruit-localized SlPHYA- and SlPHYB2-mediated light perception regulate fruit plastid biogenesis as well as sugar and carotenoid metabolisms via coordinated changes in key components of both auxin and cytokinin signaling cascades. Altogether, this study brings important insights into the combined action of PHYs and hormones in the control of fruit plastid biogenesis and highlights that the interplay between PHY-hormonal signaling cascades influences essential features of tomato fruit quality, such as the sugar and carotenoid accumulation / Fitocromos (PHYs) e fitormônios têm sido caracterizados como importantes reguladores da fisiologia e qualidade de frutos carnosos; todavia, a importância de interações entre a sinalização hormonal e dos PHYs no controle do desenvolvimento e metabolismo de frutos ainda permanece pouco elucidada. Este trabalho de Tese avaliou o papel dos PHYs e das suas interações com as auxinas, as citocininas e o etileno sobre a regulação do desenvolvimento e amadurecimento de frutos de tomateiro (Solanum lycopersicum), particularmente no que tange ao controle da biogênese plastidial e metabolismos de açúcares e de carotenoides. No Capítulo I são apresentadas evidências de que a deficiência na produção de fitocromobilina (PΦB), a qual resulta numa deficiência global in PHYs funcionais, impacta negativamente a biogênese de cloroplastos em frutos imaturos e inibe o acúmulo de açúcares por meio da repressão transcricional de enzimas relacionadas a biossíntese de amido e força de dreno nos frutos. Evidências genéticas e fisiológicas indicaram o envolvimento tanto das auxinas quanto das citocininas como mediadoras do impacto negativo da deficiência de PΦB sobre a força de dreno dos frutos bem como na formação de cloroplastos. Durante a fase de amadurecimento, a deficiência em PΦB atrasou a produção climatérica de etileno, afetando o início do amadurecimento mas não a sua progressão. As interações entre PHYs e hormônios mostraram-se ativas não apenas nos tecidos posicionados mais externamente (i.e., pericarpo) mas também nas regiões mais internas do fruto (i.e., columela). Conclui-se, portanto, que a deficiência global em PHYs funcionais afeta drasticamente o metabolismo de açucares, formação de cloroplastos, bem como o tempo de amadurecimento através de uma interação complexa envolvendo fitocromos, auxinas, citocininas e etileno. No Capítulo II utilizamos o silenciamento fruto-específico de PHYs a fim de desvendar de que forma a fisiologia e parâmetros de qualidade do tomate seriam regulados por PHYs presentes no próprio fruto. Os dados obtidos revelaram que moléculas de SlPHYB2 presentes no próprio fruto regulam negativamente o acúmulo de clorofilas nos frutos imaturos, já as de SlPHYA influenciam positivamente a maquinaria de divisão plastidial, e tanto SlPHYA quanto SlPHYB2 desempenham papel sobrepostos, porém distintos, no controle do metabolismo de amido e acúmulo de carotenoides em frutos de tomateiro. Evidências sugerem que proteínas relacionadas à sinalização de citocininas atuariam como mediadoras do impacto de SlPHYA sobre a maquinaria de divisão plastidial, e que AUXIN RESPONSE FACTORs específicos seriam intermediários no controle dos PHYs sobre os metabolismos de açúcares e carotenoides. Conclui-se, dessa forma, que a percepção de luz mediada por moléculas de SlPHYA e SlPHYB2 presentes no próprio fruto regulam a biogênese plastidial e os metabolismos de açúcares e carotenoides por meio de alterações coordenadas em componentes chaves das cascatas de sinalização de auxinas e citocininas. Quando combinados, os dados obtidos neste estudo apresentam novidades importantes sobre a ação conjunta de PHYs e fitormônios no controle da biogênese plastidial e demonstram que a interação entre esses sinalizadores influencia características essenciais da qualidade de frutos de tomateiro, tais como o acúmulo de açúcares e de carotenoides

Os microRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs endógenos não codantes de 21-24 nucleotídeos (nt) que regulam a expressão gênica de genes-alvos. Eles estão envolvidos em diversos aspectos de desenvolvimento da planta, tanto na parte aérea, quanto no sistema radicular. Entre os miRNAs, o miRNA156 (miR156) regula a família de fatores de transcrição SQUAMOSA Promoter-Binding Protein-Like (SPL) afetando diferentes processos do desenvolvimento vegetal. Estudos recentes mostram que a via gênica miR156/SPL apresenta efeito positivo tanto no aumento da formação de raízes laterais, quanto no aumento de regeneração de brotos in vitro a partir de folhas e hipocótilos em Arabidopsis thaliana. Devido ao fato de que a origem da formação de raiz lateral e a regeneração in vitro de brotos a partir de raiz principal compartilham semelhanças anatômicas e moleculares, avaliou-se no presente estudo se a via miR156/SPL, da mesma forma que a partir de explantes aéreos, também é capaz de influenciar na regeneração de brotos in vitro a partir de explantes radiculares. Para tanto foram comparados taxa de regeneração, padrão de distribuição de auxina e citocinina, análises histológicas e histoquímicas das estruturas regeneradas em plantas com via miR156/SPL alterada, incluindo planta mutante hyl1, na qual a produção desse miRNA é severamente reduzida. Além disso, foi avaliado o padrão de expressão do miR156 e específicos genes SPL durante a regeneração de brotos in vitro a partir da raiz principal de Arabidopsis thaliana. No presente trabalho observou-se que a alteração da via gênica miR156/SPL é capaz de modular a capacidade de regeneração de brotos in vitro a partir de raiz principal de Arabidopsis thaliana e a distribuição de auxina e citocinina presente nas células e tecidos envolvidos no processo de regeneração. Plantas superexpressando o miR156 apresentaram redução no número de brotos regenerados, além de ter o plastochron reduzido quando comparado com plantas controle. Adicionalmente, plantas contento o gene SPL9 resistente à clivagem pelo miR156 (rSPL9) apresentaram severa redução na quantidade de brotos, além de terem o plastochron alongado. Interessantemente, plantas mutantes hyl1-2 e plantas rSPL10 não apresentaram regeneração de brotos ao longo da raiz principal, mas sim intensa formação de raízes laterais e protuberâncias, respectivamente, tendo essa última apresentado indícios de diferenciação celular precoce. Tomados em conjunto os dados sugerem que o miR156 apresenta importante papel no controle do processo de regeneração de brotos in vitro. Entretanto, esse efeito é mais complexo em regeneração in vitro a partir de raízes do que a partir de cotilédones ou hipocótilos. / MicroRNAs (miRNAs) are endogenous small non-coding RNAs of 21-24 nucleotides (nt) in length that regulate target gene expression. They are involved in many aspects of plant development, both in the shoot and in the root systems. Among miRNAs, miRNA156 (miR156) regulates SQUAMOSA Promoter Binding-Like (SPL) transcription factor family affecting different plant development processes. Recent studies have shown that the miR156/SPL pathway has a positive effect both in the increase of lateral root formation and regeneration of shoots from leaves and hypocotyls in Arabidopsis thaliana. Because the origin of lateral root formation and in vitro shoot regeneration from primary root share similar anatomical and molecular features, in the present study was evaluated whether the miR156/SPL pathway, in the same manner that from aerial explants, is also able to influence the in vitro shoot regeneration from root explants. For this, it was compared regeneration rates, distribution pattern of auxin and cytokinin, histological and histochemical analyses of the structures regenerated in plants in with the miR156/SPL pathway is modified, including the mutant hyl1-1, in which the biosynthesis of this miRNA is severely reduced. Besides that, it was evaluated the expression pattern of miR156 and specific SPL target genes during in vitro shoot regeneration from primary roots of Arabidopsis it was observed that the alteration on the miR156/SPL pathway is capable to modulate in vitro shoot regeneration from the primary root of Arabidopsis and the distribution of auxin and cytokinin at the tissues and cells involved in the regeneration process. Plants overexpressing the miR156a have shown reduction in the number of regenerated shoots, and displayed a reduction in plastochron when compared with wild type plants. Additionally, plants expressing cleavage-resistant form of SPL9 (rSPL9) presented severe reduction in the amount of shoots, and extended plastochron. Interestingly, mutant hyl1-2 and plants rSPL10 did not show any shoot regeneration along the root, but high formation of lateral roots and protuberances, respectively, having rSPL10 presented evidence of precocious cell differentiation. Taken together, these data suggest that de miR156 and SPLs have an important role in the control the in vitro shoot regeneration process. However, its effect is somehow more complex in roots than in cotyledons or hypocotyls.

Orientador: Sarita Leonel / Banca: Elma Machado Ataíde / Banca: Elizabeth Orika Ono / Banca: Aloisio Costa Sampaio / Banca: Marlon Jocimar Rodrigues da Silva / Resumo: O manejo da goiabeira com o raleio manual de frutos garante a produção de frutos com melhor qualidade e maior valorização de mercado. Contudo, o alto custo de execução desta técnica e a diminuição da disponibilidade de mão de obra no campo sugerem a busca de alternativas rentáveis para viabilizar o agronegócio da produção de goiabas. Dentre as alternativas disponíveis, o raleio químico tem sido considerado como o mais promissor, pois é uma operação rápida que pode ser realizada em época mais oportuna, garantindo a produção de frutos de boa qualidade. Frente ao exposto, objetivou-se com este trabalho avaliar a produção, a qualidade de goiabas e a viabilidade econômica do raleio químico de frutos, em goiabeira 'Paluma'. Para tal, o ethephon e a benziladenina foram aplicados em frutos de goiabeira cv. 'Paluma' com diâmetro médio de 18 mm, nas concentrações de 0, 150, 300 e 450 mg L-1 i.a., utilizando-se quatro repetições e duas plantas por parcela experimental. O delineamento experimental foi em blocos casualizados em arranjo fatorial 2x4. Os efeitos dos tratamentos foram avaliados por meio da determinação da porcentagem de frutos raleados; número de frutos ramo-1; massa fresca, produção, eficiência produtiva e classificação comercial da goiaba; comprimento, diâmetro e formato dos frutos; espessura do mesocarpo e do endocarpo; rendimento do mesocarpo e do endocarpo; teor de sólidos solúveis; acidez titulável; índice de maturação; pH; teores de açúcares; ácido ascórbico; atividad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The management of guava plants with manual fruit thinning guarantees the production of fruits with better quality and greater market value. However, the high cost of implementing this technique and the decrease in the availability of labor in the field suggest the search for profitable alternatives to enable agribusiness of guava production. Among the available alternatives, chemical thinning has been considered the most promising, since it is a quick operation that can be carried out in a timelier manner, guaranteeing the production of good quality fruits. In light of the above, this study aimed to evaluate the production, fruit quality and economic viability of the chemical slurry of fruits in 'Paluma' guava. For this, ethephon and benzyladenine were applied to 'Paluma' guava fruits with an average size of 18 mm at concentrations of 0, 150, 300 and 450 mg L-1 i.a., using four replicates and two plants per plot experimental. The experimental design was in randomized blocks in a 2x4 factorial arrangement. The effects of the treatments were evaluated by means of the determination of the percentage of thinned fruits; number of branch-1 fruits; fresh mass, production, productive efficiency and commercial classification of fruits; length, diameter and shape of fruits; thickness of mesocarp and endocarp; yield of mesocarp and endocarp; soluble solids content; titratable acidity; maturation index; pH; sugar content; Ascorbic acid; antioxidant activity; total polyphenols; flavonoids and pigments of fruits. The cost of production was determined by the following parameters: gross revenue, operating profit, profitability index, equilibrium price and equilibrium productivity. The use of benzyladenine and ethephon promoted a higher percentage of chemical thinning at the concentration of 450 mg L-1. However, it is worth noting the use of ethephon, since the use of this plant regulator allows the highest number of fruits to be obtained in class A ... / Doutor

Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em cacaueiro (Theobroma cacao). Os sintomas da doença compreendem perda de dominância apical, inchamento e excesso de brotações em ramos novos, reversão de meristemas florais em vegetativos, partenocarpia e lesões necróticas em frutos, sugerindo a ocorrência de alterações hormonais no hospedeiro. A disponibilidade de isolados do biótipo-S capazes de infectar o tomateiro, permitiu a utilização da cultivar miniatura \'Micro-Tom\' (MT) como um modelo para estudo da interação Moniliophthora perniciosa x Solanum lycopersicum. Além de provocar sintomas característicos no MT, a disponibilidade de mutantes e linhas transgênicas introgredidos em MT, com alterações que afetam o metabolismo e sensibilidade hormonal, permitem investigar o papel dos hormônios vegetais no desenvolvimento dos sintomas. Inicialmente, foi avaliada a agressividade de três isolados do biótipo-S no MT, sendo que um isolado de Tiradentes apresentou maior agressividade, com maior incidência dos sintomas, maior engrossamento do caule, redução na altura das plantas, aumento no número de lóculos nos frutos e redução na biomassa radicular. Mutantes com alterações na percepção para auxina (diageotropica e entire) e uma linha transgênica expressando uma citocinina oxidase de Arabidopsis (35S::AtCKX2) diferiram para o engrossamento do caule e distribuição do número de lóculos nos frutos em relação ao MT. A linha transgênica 35S::AtCKX2 diferiu significativamente de MT com menor incidência de infecção. O engrossamento do caule associa-se ao aumento na área do córtex e, principalmente do xilema e floema. A aplicação exógena de citocinina sintética benzil-adenina (BA) e da auxina sintética ácido naftaleno acético (ANA) em MT evocam sintomas similares aos de plantas infectadas com M. perniciosa. Linhas transgênicas repórter de sinalização por citocinina (ARR5::GUS) ou auxina (DR5::GUS) indicaram sinalização diferencial por citocinina a 24 h e 36 h após inoculação (HAI) e 48 HAI por auxina. A infecção por M. perniciosa aumentou os níveis de ácido jasmônico, ácido salicílico (AS) e auxina em MT entre 5 d a 30 DAI, com maior incremento aos 5 DAI, enquanto que o nível de ácido abscísico aumentou aos 20 d e 30 DAI, e AS foi o único detectado em micélio dicariótico do biótipo-S. Genes de biossíntese de citocinina (IPT), ativação (LOG), degradação (CKX) e resposta à citocinina (ARRs e CRF) e auxina (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) foram induzidos em MT inoculado de 12 h a 5 DAI, mas com maior acúmulo de transcritos aos 30 DAI. M. perniciosa induziu maior expressão desses genes citados e de biossíntese auxina, nos momentos iniciais da interação (12 h a 5 DAI) em 35S::AtCKX2 do que no MT. O efeito da infecção em aumentar o número de lóculos nos frutos parece ser independente ou downstream a mutação fasciated, Mouse ears e ovate. A mutação Lanceolate parece ter um papel na redução do efeito da infecção em aumentar o número de lóculos. Os resultados obtidos sugerem que a infecção pelo M. perniciosa em MT altere os níveis/sinalização dos hormônios vegetais, principalmente auxina e citocinina, provocando o engrossamento do caule (aumento no xilema, floema e córtex), redução no crescimento e na biomassa radicular e aumento no número de lóculos nos frutos / Moniliophthora pernicisa is the causal agent of witches\' broom disease in cocoa (Theobroma cacao). The disease symptoms comprise loss of apical dominance, thickening and proliferation of axillary shoots, shift from inflorescence into vegetative meristem, parthernocarpy and necrotic lesions on fruits, suggesting a host hormonal imbalance. The availability of an isolated of S-biotype M. perniciosa, which colonizes tomato, enabled the utilization of the miniature tomato (Solanum lycopersicum) cultivar \'Micro-Tom\' (MT) as a suitable model to study the pathosystem M. perniciosa x S. lycopersicum. In addition to the characteristic symptoms of the infection in MT, the availability of mutants and transgenic lines introgessed into MT, with changes in plant metabolism and hormonal sensitivity, enable the investigation of the role of plant hormones in the development of symptoms. Initially, we evaluated the aggressiveness of three S-biotype M. perniciosa isolates. The isolate \'Tiradentes\' showed greater aggressiveness infecting MT, with higher plant infection incidence, greater stem thickening, reduction in plant height, increase in fruit locule number and reduction in root dry weight. Mutants with altered auxin perception (diageotropica e entire) and the transgenic line expressing a cytokinin oxidase gene of arabidopsis (35S::AtCKX2) differed in stem thickening and fruit locule number distribution, as compared to MT. The transgenic line 35S::AtCKX2 differed significantly from MT, showing lower incidence of infection. The thickening of the stem may be related with an increase in area of the cortex, especially xylem and phloem. The exogenous application of synthetic cytokinin benzyl adenine (BA) and auxin naphthalene acetic acid (NAA) in MT induces similar symptoms to plants infected with M. perniciosa. Cytokinin (ARR5::GUS) and auxin (DR5::GUS) signaling reporter transgenic lines revealed differential cytokinin signaling 24 h e 36 h hours after inoculation (HAI) and differential auxin signaling in 48 HAI. Infection of MT by M. perniciosa increased the content of JA, SA and auxin during the development of symptoms from 5 d to 30 DAI, with greater increase at an early stage of symptoms development (5 days after inoculation - DAI), whereas abcisic acid content increased in 20 and 30 DAI, and only AS was detected in dicariotic mycelium of the S-biotype M. perniciosa. Cytokinin biosynthesis (IPT), activating (LOG), and breakdown (CKX) genes and response to cytokynin genes (ARRs e CRF) and auxin (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) were induced in MT infected in 12 h a 5 DAI, with greater accumulation of transcripts in 30 DAI. M. perniciosa induced higher levels of IPT, LOG, CKX, ARRs, and CRF genes and auxin biosynthesis genes at an ealry stage of infection (12 h a 5 DAI) in 35S::AtCKX2, as compared to MT. The effect of the infection on increasing fruit locule number seems to be independent or downstream fasciated, Mouse ears and ovate mutation. Lanceolate mutation seems to play a role in reducing M. perniciosa ability of increasing fruit locule number. The results suggest infection of MT by S-biotpye M. perniciosa alters levels/signaling of the hormones, especially auxin and cytokinin, inducing stem thickening (increasing xylem, phloem and cortex), reduction in plant height, root dry weight and increase in fruit locule number

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:58:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005-Cleiton Mateus Sousa.pdf: 885284 bytes, checksum: 42cf8890c05e973310a56f9182c0e1e0 (MD5) Previous issue date: 2005-01-20 / Gerberas are cut flowers with large color diversity and good durability. The use of growth regulators on in vitro propagation is related to the capacity to induce proliferation of sprouts and differentiation of roots. However, citokinins in excess can induce the formation of abnormal plant, with reduced acclimatization potential. The mineral and organic composition of media culture plays an important role during the process. The objective of this dissertation was to adjust protocols for in vitro propagation of Gerbera jamesonii. The following aspects were evaluated: (i) the effect of the inflorescence developmental stage on the performance of in vitro culture initiated from chapters (ii) gerbera varieties (iii) growth regulator balance and (iv) the effect of salt concentration of MS medium on the proliferation of in vitro sprouting and rooting and acclimatization of three varieties of gerbera. For variety Phanter, the regeneration of explants prepared from inflorescences depended on its stage of development. Explants prepared from young chapters showed better results. The concentration and source of citokinin, and the concentration of salts in MS medium influenced the proliferation of sprouts in explants of variety Ornela. BAP was more efficient than kinetin on proliferation of sprouts. Concentrations above 2.0 mg.L-1 of BAP induced the formation of plants with undesirable characteristics during in vitro multiplication, while this was not observed in the presence of the same kinetin in larger concentration (4.0 mg.L-1). The combinations of 0.5 mg.L-1 BAP with the different levels of IBA showed the best results for multiplication and production of sprouts, with potential for acclimatizing variety Ornela. The presence of BAP inhibited the differentiation of roots, while the same was not observed in largest concentration of kinetin. The concentration of salts below 50% limited the proliferation of sprouts in variety Ornela. The varieties Capuccino, Mirage and Ornela, when maintained in the same balance of BAP and IBA, showed divergences in results for number of sprouts; when acclimatized, they presented high survival rates. Difficulties on in vitro gerbera propagation were mostly found on the regeneration phase and on the formation of sprouts in explants prepared from chapters. For the other phases, no major difficulties were detected. / As g?rberas s?o flores de corte que apresentam diversidade na colora??o e boa durabilidade. O uso de fitorreguladores na propaga??o de plantas in vitro esta relacionado com a capacidade de induzir a prolifera??o de brotos e a diferencia??o de ra?zes. No entanto, citocininas em excesso podem induzir a forma??o de pl?ntulas anormais e com baixo potencial para serem aclimatadas. Al?m disso, a composi??o mineral e org?nica do meio de cultura apresenta importante papel durante o processo. O objetivo deste trabalho foi ajustar protocolos para a propaga??o massal in vitro de variedades de Gerbera jamesonii. Avaliou-se: o efeito do est?dio de desenvolvimento de infloresc?ncias na implanta??o de culturas in vitro a partir de cap?tulos; variedades; balan?os de fitorreguladores; concentra??o dos sais do meio MS na prolifera??o de brotos e enraizamento in vitro e a aclimatiza??o de tr?s variedades de g?rbera. A regenera??o de explantes preparados a partir de infloresc?ncias depende do est?dio de desenvolvimento das mesmas. Explantes preparados a partir de cap?tulos jovens apresentaram melhores resultados. A prolifera??o de brotos em explantes de g?rbera, variedade Ornela foi influenciada tanto pela concentra??o quanto pela fonte de citocinina, assim como pela concentra??o dos sais do meio MS. A mol?cula BAP mostrou ser mais eficiente que kinetina para induzir a prolifera??o de brotos. BAP acima de 2,0 mg.L-1 induziu a forma??o de plantas com caracter?sticas indesej?veis durante a multiplica??o in vitro, enquanto isto n?o foi observado mesmo na maior concentra??o de kinetina (4,0 mg.L-1). As combina??es de 0,5 mg.L-1 de BAP com os diferentes n?veis de AIB (0; 0,05 e 0,5 mg.L-1) apresentaram os melhores resultados para a multiplica??o e produ??o de brotos in vitro com potencial para serem aclimatados da variedade Ornela. Somente o BAP inibiu a diferencia??o de ra?zes. A concentra??o dos sais abaixo de 50% limitou a prolifera??o de brotos na variedade Ornela. As variedades Capuccino Mirage e Ornela, quando mantidas no mesmo balan?o de BAP e AIB apresentaram resultados divergentes quanto ? prolifera??o de brotos, e na aclimatiza??o apresentaram alta taxa de sobreviv?ncia. Na propaga??o in vitro de g?rbera, somente na fase de implanta??o das culturas in vitro que verificou-se dificuldade de regenera??o e na forma??o de brotos em explantes preparados a partir de cap?tulos. Nas demais fases, as variedades estudadas apresentaram facilidade e resultados bastante promissores.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Celestina_A_Klahold.pdf: 398778 bytes, checksum: 232e5d7155574fb19e80293436725f73 (MD5) Previous issue date: 2005-05-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Soybeans is a crop of prominence in the national grain production. The production growth and the increasing in the productivity capacity of soybeans are connected to the scientific and technological advances in the productive sector. One of theses advances is the biostimulants uses. Thus this paper aimed to verify the effect of the biostumulant Stimulate® applied via seed and the leaves pulverization and the combination of these two ways in the development and yield of the soybeans. The experiment was performed in vases with a plastic cover umbrella kind, with sides open up to 2,5 m of height in the region called Linha São Domingos a region in Toledo Municipality, Paraná. Randomized block experimental design was used with four blocks with the treatments obtained through the combination of different biostimulant doses applied, via leaves and seeds. During the experiment four plant collections were done per treatment: 15 DAE (days after emergence) (stage V3), 58 DAE (stage R2), 73 DAE (stage R3) and 129 DAE (stage R9). Through the results it was possible to conclude that the applications of Stimulate® via seed did not promote the alterations in the evaluated variables at the 15 and 58 DAE in the soybeans crop. At the 73 DAE the application of the biostimulant Stimulate® via seed, via leaves and in the combination of the two ways resulted in positive effects on the dry mass of the flowers, dry mass of the root, ratio root/shoot and the number of leaves. The application of the biostimulant promoted increments to the numbers of beans, grains and the production per plant, highliting the treatments 3 (0,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,150 mL L-1 (APF)), 5 (3,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,0 mL L-1 (APF)), 8 (3,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,225 mL L-1 (APF)) and 10 (5,0 mL Kg-1 (AS) + 0,075 mL L-1 (APF)). The increasing in the number of grains and the beans per plant resulting of the application of the biostimulant led to a lower mass of 100 grains, probably because of the partition of the photoassimilates among the physiological sink. / A soja é uma cultura que se destaca pela produção nacional de grãos. O crescimento da produção e o aumento da capacidade produtiva da soja estão aliados aos avanços científicos e tecnológicos no setor produtivo. Um destes avanços é o uso dos bioestimulantes. Desta forma este trabalho teve como objetivos verificar o efeito do biestimulante Stimulate®, aplicado via semente e pulverização foliar e combinação destas duas formas no desenvolvimento e produtividade da soja. O experimento foi realizado em uma propriedade agrícola da linha São Domingos, município de Toledo-PR. Este foi conduzido em vasos, sob cobertura plástica do tipo guarda chuva , com as laterais abertas até 2,5m de altura Utilizou-se delineamento experimental de blocos casualizados, com quatro blocos, sendo os tratamentos obtidos através da combinação da aplicação de diferentes doses do bioestimulate, via semente (0, 3 e 5mL 0,5Kg sementes-1) e via foliar (0,0; 0,075; 0,150 e 0,225 mL L-1). Durante o experimento foram realizadas quatro coletas de plantas por tratamento: aos 15 DAE (dias após emergência) (V3), 58 DAE (R2), 73 DAE (R3) e 129 DAE (R9). Através dos resultados, pode-se concluir que as aplicações de Stimulate® via semente não promoveram alterações nas variáveis avaliadas aos 15 e 58 DAE para a cultura da soja. Aos 73 DAE, a aplicação do bioestimulante Stimulate® via semente, via foliar e nas duas formas combinadas, resultaram efeitos positivos sobre a massa seca de flores, massa seca da raiz, razão raiz/parte aérea e número de flores. A aplicação de bioestimulante proporcionou incrementos quanto ao número de vagens, número de grãos e produção por planta, podendo-se destacar os tratamentos 3 (0,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,150 mL L-1 (APF)), 5 (3,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,0 mL L-1 (APF)), 8 (3,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,225 mL L-1 (APF)) e 10 (5,0 mL 0,5 Kg-1 (AS) + 0,075 mL L-1 (APF)). O aumento no número de grãos e vagens por planta resultante da aplicação de bioestimulante resultou em menor massa de 100 grãos, devida provavelmente à partição de fotoassimilados entre os drenos fisiológicos.

O aumento no consumo mundial de soja demanda o uso de novas tecnologias em seu sistema de produção. Uma dessas tecnologias é a mudança de arquitetura da planta por meio da aplicação de reguladores de crescimento. Entretanto, esses produtos podem gerar danos à planta. Neste contexto, objetivou- se identificar os danos no metabolismo oxidativo em plantas de soja tratadas com reguladores de crescimento (hormônio e herbicidas em subdose) e verificar a presença de padrão de resposta entre variedades cultivadas do grupo de maturação (GM) 7.X (foram utilizadas as variedades cultivadas TEC 7849 IPRO [GM 7.0] e AS 3797 IPRO [GM 7.9] na primeira safra, e TEC 7849 IPRO e Brasmax Desafio RR [GM 7.4] na segunda safra). Os experimentos foram implantados na área da Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba (Coopadap) no período de outubro de 2016 a março de 2018. Os experimentos foram conduzidos em esquema fatorial, sendo que nas duas safras foram utilizados seis tratamentos (Controle, Citocinina, Lactofen, Imazetapir, 2,4-D e Clorimuron) com quatro repetições. As parcelas experimentais foram constituídas de cinco linhas de sete metros com espaçamento de 0,6 m entre linhas. As aplicações ocorreram no estádio de desenvolvimento V3 utilizando pulverizador costal propelido a CO2. Foram realizadas avaliações (i) bioquímicas (atividade das enzimas superóxido dismutase, catalase e peroxidase, bem como teor de peróxido de hidrogênio e peroxidação lipídica) aos sete dias após a aplicação dos tratamentos, (ii) fenométricas (massa de matéria seca de haste, folha e vagem, número de nós e ramificações, número de vagens - apenas no segundo ano de experimentação) no estádio de desenvolvimento R6, e (iii) componentes de produção (produtividade). Os dados foram submetidos a testes de normalidade (Shapiro-Wilk) e homogeneidade (Levene), à análise de variância (análise fatorial) e, quando significativa, ao teste de Tukey (nível de significância de 5%). Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que: (i) a aplicação dos tratamentos aumentou a produtividade (no tratamento com aplicação de Lactofen, principalmente); (ii) há ocorrência de dano fisiológico às plantas; entretanto, a intensidade pode variar com o material genético e as condições climáticas; e (iii) não há padrão de resposta entre as variedades cultivadas utilizadas. / The increase in world soybean consumption calls for the use of new technologies in its production system. One of these technologies is the change of architecture of the plant through the application of growth regulators. However, these products can cause damage to the plant. In this context, the objective was to identify oxidative metabolism damage in soybean plants treated with growth regulators (hormone and herbicides in subdose) and to verify the presence of a response pattern among cultivars of the maturation group (GM) 7.X (GM) the cultivars TEC 7849 IPRO [GM 7.0] and AS 3797 IPRO [GM 7.9] were used in the first harvest, and TEC 7849 IPRO and Brasmax Challenge RR [GM 7.4] in the second harvest. The experiments were carried out in the area of the Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba (Coopadap) from October 2016 to March 2018. The experiments were conducted in a factorial scheme, and in the two harvests six treatments were used (Control, Cytokinin, Lactofen, Imazethapyr, 2,4-D and Chlorimuron) with four replicates. The experimental plots consisted of five seven - meter rows with spacing of 0.6 m between rows. The applications occurred at the V3 development stage using CO2 propellant sprayer. Biochemical evaluations (activity of the enzymes superoxide dismutase, catalase and peroxidase, as well as hydrogen peroxide content and lipid peroxidation) were carried out seven days after the application of the treatments, (ii) phenometric (stem dry matter mass, leaf and pod, number of nodes and branches, number of pods - only in the second year of experimentation) at the R6 development stage, and (iii) production components (productivity). Data were submitted to normality tests (Shapiro-Wilk) and homogeneity (Levene), analysis of variance (factorial analysis) and, when significant, Tukey test (significance level 5%). Based on the results obtained, it was concluded that: (i) the application of the treatments increased the productivity (in the treatment with application of Lactofen, mainly); (ii) there is occurrence of physiological damage to plants; however, the intensity may vary with genetic material and climatic conditions; and (iii) there is no pattern of response among the cultivated varieties used.

Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em cacaueiro (Theobroma cacao). Os sintomas da doença compreendem perda de dominância apical, inchamento e excesso de brotações em ramos novos, reversão de meristemas florais em vegetativos, partenocarpia e lesões necróticas em frutos, sugerindo a ocorrência de alterações hormonais no hospedeiro. A disponibilidade de isolados do biótipo-S capazes de infectar o tomateiro, permitiu a utilização da cultivar miniatura \'Micro-Tom\' (MT) como um modelo para estudo da interação Moniliophthora perniciosa x Solanum lycopersicum. Além de provocar sintomas característicos no MT, a disponibilidade de mutantes e linhas transgênicas introgredidos em MT, com alterações que afetam o metabolismo e sensibilidade hormonal, permitem investigar o papel dos hormônios vegetais no desenvolvimento dos sintomas. Inicialmente, foi avaliada a agressividade de três isolados do biótipo-S no MT, sendo que um isolado de Tiradentes apresentou maior agressividade, com maior incidência dos sintomas, maior engrossamento do caule, redução na altura das plantas, aumento no número de lóculos nos frutos e redução na biomassa radicular. Mutantes com alterações na percepção para auxina (diageotropica e entire) e uma linha transgênica expressando uma citocinina oxidase de Arabidopsis (35S::AtCKX2) diferiram para o engrossamento do caule e distribuição do número de lóculos nos frutos em relação ao MT. A linha transgênica 35S::AtCKX2 diferiu significativamente de MT com menor incidência de infecção. O engrossamento do caule associa-se ao aumento na área do córtex e, principalmente do xilema e floema. A aplicação exógena de citocinina sintética benzil-adenina (BA) e da auxina sintética ácido naftaleno acético (ANA) em MT evocam sintomas similares aos de plantas infectadas com M. perniciosa. Linhas transgênicas repórter de sinalização por citocinina (ARR5::GUS) ou auxina (DR5::GUS) indicaram sinalização diferencial por citocinina a 24 h e 36 h após inoculação (HAI) e 48 HAI por auxina. A infecção por M. perniciosa aumentou os níveis de ácido jasmônico, ácido salicílico (AS) e auxina em MT entre 5 d a 30 DAI, com maior incremento aos 5 DAI, enquanto que o nível de ácido abscísico aumentou aos 20 d e 30 DAI, e AS foi o único detectado em micélio dicariótico do biótipo-S. Genes de biossíntese de citocinina (IPT), ativação (LOG), degradação (CKX) e resposta à citocinina (ARRs e CRF) e auxina (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) foram induzidos em MT inoculado de 12 h a 5 DAI, mas com maior acúmulo de transcritos aos 30 DAI. M. perniciosa induziu maior expressão desses genes citados e de biossíntese auxina, nos momentos iniciais da interação (12 h a 5 DAI) em 35S::AtCKX2 do que no MT. O efeito da infecção em aumentar o número de lóculos nos frutos parece ser independente ou downstream a mutação fasciated, Mouse ears e ovate. A mutação Lanceolate parece ter um papel na redução do efeito da infecção em aumentar o número de lóculos. Os resultados obtidos sugerem que a infecção pelo M. perniciosa em MT altere os níveis/sinalização dos hormônios vegetais, principalmente auxina e citocinina, provocando o engrossamento do caule (aumento no xilema, floema e córtex), redução no crescimento e na biomassa radicular e aumento no número de lóculos nos frutos / Moniliophthora pernicisa is the causal agent of witches\' broom disease in cocoa (Theobroma cacao). The disease symptoms comprise loss of apical dominance, thickening and proliferation of axillary shoots, shift from inflorescence into vegetative meristem, parthernocarpy and necrotic lesions on fruits, suggesting a host hormonal imbalance. The availability of an isolated of S-biotype M. perniciosa, which colonizes tomato, enabled the utilization of the miniature tomato (Solanum lycopersicum) cultivar \'Micro-Tom\' (MT) as a suitable model to study the pathosystem M. perniciosa x S. lycopersicum. In addition to the characteristic symptoms of the infection in MT, the availability of mutants and transgenic lines introgessed into MT, with changes in plant metabolism and hormonal sensitivity, enable the investigation of the role of plant hormones in the development of symptoms. Initially, we evaluated the aggressiveness of three S-biotype M. perniciosa isolates. The isolate \'Tiradentes\' showed greater aggressiveness infecting MT, with higher plant infection incidence, greater stem thickening, reduction in plant height, increase in fruit locule number and reduction in root dry weight. Mutants with altered auxin perception (diageotropica e entire) and the transgenic line expressing a cytokinin oxidase gene of arabidopsis (35S::AtCKX2) differed in stem thickening and fruit locule number distribution, as compared to MT. The transgenic line 35S::AtCKX2 differed significantly from MT, showing lower incidence of infection. The thickening of the stem may be related with an increase in area of the cortex, especially xylem and phloem. The exogenous application of synthetic cytokinin benzyl adenine (BA) and auxin naphthalene acetic acid (NAA) in MT induces similar symptoms to plants infected with M. perniciosa. Cytokinin (ARR5::GUS) and auxin (DR5::GUS) signaling reporter transgenic lines revealed differential cytokinin signaling 24 h e 36 h hours after inoculation (HAI) and differential auxin signaling in 48 HAI. Infection of MT by M. perniciosa increased the content of JA, SA and auxin during the development of symptoms from 5 d to 30 DAI, with greater increase at an early stage of symptoms development (5 days after inoculation - DAI), whereas abcisic acid content increased in 20 and 30 DAI, and only AS was detected in dicariotic mycelium of the S-biotype M. perniciosa. Cytokinin biosynthesis (IPT), activating (LOG), and breakdown (CKX) genes and response to cytokynin genes (ARRs e CRF) and auxin (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) were induced in MT infected in 12 h a 5 DAI, with greater accumulation of transcripts in 30 DAI. M. perniciosa induced higher levels of IPT, LOG, CKX, ARRs, and CRF genes and auxin biosynthesis genes at an ealry stage of infection (12 h a 5 DAI) in 35S::AtCKX2, as compared to MT. The effect of the infection on increasing fruit locule number seems to be independent or downstream fasciated, Mouse ears and ovate mutation. Lanceolate mutation seems to play a role in reducing M. perniciosa ability of increasing fruit locule number. The results suggest infection of MT by S-biotpye M. perniciosa alters levels/signaling of the hormones, especially auxin and cytokinin, inducing stem thickening (increasing xylem, phloem and cortex), reduction in plant height, root dry weight and increase in fruit locule number

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the in vitro germination and multiplication of grapia for plantlet production and conservation of selected genotypes. For in vitro establishment, three concentrations (0; 2.5 and 5.0%) of sodium hypochlorite (NaOCl) and seed immersion times of 5, 10 and 15 min were tested. Seeds were than inoculated in glass flasks with 5 mL of distilled water, sucrose (30 g L-1) and agar (7g L-1) medium. The evaluations were done at 30 days of cultivation for the percentage of germination and desinfestation, mean germination time (TMG) and germination speed index (IVG). Disinfected seeds were also inoculated in WPM (Wood Plant Medium) medium supplemented with 4, 5 or 6 g L-1 of agar combined with 10, 20 or 30 g L-1 of sucrose, and maintained under dark condition of the first seven days or light during the whole period of cultivation. The evaluations were done at 15 days for the percentage of germination, height of aerial part, number of leaves and internodes, total root length, TMG and IVG. Aseptic seedlings were transplanted to WPM, MS or ½ MS culture medium. After 15 days, they were evaluated for height of aerial part, total root length and number of internodes and leaves. The treatment of breaking seed dormancy associated with ethanol 70% promotes efficient desinfestation of grapia seeds, even without NaOCl immersion. Seeds maintained in dark showed the lowest TMG, the greatest IVG and the highest aerial part. The WPM medium supplemented with 4 g L-1 of agar and 10 g L-1 of sucrose is indicated for maintenance of grapia seedlings. For multiplication, segments of different positions (basal, medium and apical) were inoculated in WPM medium supplemented with 0; 2.2; 4.4; 6.6 or 8.8 μM of 6-benzylaminopurine (BAP). Nodal segments were inoculated in WPM medium supplemented with 0; 2.2; 4.4; 6.6 or 8.8 μM of BAP and 0 and 1.5 g L-1of activated charcoal. Nodal segments were also inoculated in WPM medium supplemented with 0; 2.3; 4.6; 6.9 and 9.2 μM of kinetin (KIN) and 0 and 1.5 g L-1of activated charcoal. The three experiments were evaluated at 30 days for the presence of callus, number and total length of sprouts, number of leaves, rooting percentage, and number and total length of roots. Microstumps were maintained in WPM medium with 0; 2.2; 4.4; 6.6 and 8.8 μM of BAP and 0 and 1.5 g L-1of activated charcoal. After 30 days, microstumps were subcultured in WPM medium with 1.5 g L-1 of activated charcoal. After 30 days of cultivation in BAP and subcultivated in activated charcoal, microstumps were evaluated for survival, percentage of sprouting, number and total length of sprouts and number of internodes and leaves. Basal segments showed the greatest number and length of sprouts. The WPM medium supplemented with 6.6 μM of BAP resulted in the greatest number of sprouts. The activated charcoal reduced callus formation and favored root formation. KIN didnot favor sprout formation. The WPM medium supplemented with 8.8 μM of BAP increases the number of sprouts and leaves in microstumps subcultivated in WPM medium with 1.5 g L-1 of activated charcoal. / O objetivo deste estudo foi avaliar a germinação e multiplicação in vitro de grápia, visando a produção de mudas e a conservação de genótipos selecionados. Para a desinfestação, as sementes passaram primeiramente pelo tratamento de quebra de dormência tegumentar com ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado por 20 min. Posteriormente foram avaliadas as concentrações de 0; 2,5 e 5,0% de hipoclorito de sódio (NaOCl) nos tempos de imersão de 5, 10 e 15 min. na desifestação das sementes. As sementes foram inoculadas em frascos de vidro contendo 5 mL de meio de cultura composto por água destilada, sacarose (30 g L-1) e ágar (7g L-1). Aos 30 dias foram avaliadas as porcentagens de germinação e desinfestação, o tempo médio de germinação (TMG) e o índice de velocidade de germinação (IVG). Sementes desinfestadas também foram inoculadas em meio de cultura WPM (Wood Plant Medium) suplementado com 4, 5 e 6 g L-1 de ágar, combinado com 10, 20 ou 30 g L-1 de sacarose e cultivadas no escuro durante os sete primeiros dias ou na luz durante todo o período. Aos 15 dias foram avaliadas a porcentagem de germinação, a altura da parte aérea (cm), o número de folhas e entrenós, o comprimento total das raízes (cm), o TMG e o IVG. As plântulas assépticas foram transplantadas para meio de cultura WPM, MS ou ½ MS. Aos 15 dias foram avaliadas quanto à altura da parte aérea (cm), o comprimento total das raízes (cm) e o número de segmentos nodais e de folhas. O tratamento de superação de dormência das sementes de grápia com (H2SO4) associado à pré-desinfestação com etanol 70% promoveram eficiente desinfestação das sementes, sem a necessidade do uso de NaOCl. Sementes mantidas no escuro apresentaram menor TMG, maior IVG e altura da parte aérea. O meio de cultura WPM suplementado com 4 g L-1 de ágar e 10 g L-1 de sacarose é indicado para a conservação in vitro das plântulas de grápia. Para a multiplicação, segmentos de diferentes posições da parte aérea da plântula (basal, mediana e apical) foram inoculados em meio de cultura WPM acrescido de 0; 2,2; 4,4; 6,6 ou 8,8 μM de 6-benzilaminopurina (BAP). Segmentos nodais foram inoculados em meio de cultura WPM suplementado com 0; 2,2; 4,4; 6,6 ou 8,8 μM de BAP e com 0 e 1,5 g L-1 de carvão ativado. Segmentos nodais também foram inoculados em meio de cultura WPM acrescido de 0; 2,3; 4,6; 6,9 e 9,2 μM de cinetina (KIN) e de 0 e 1,5 g L-1 de carvão ativado. Os três experimentos foram avaliados aos 30 dias quanto à presença de calo, o número e comprimento total dos brotos (cm), o número de folhas, a porcentagem de enraizamento e o número e comprimento total das raízes (cm). Microcepas foram mantidas em meio de cultura WPM com 0; 2,2; 4,4; 6,6 e 8,8 μM de BAP e 0 e 1,5 g L-1 de carvão ativado. Após 30 dias de cultivo as microcepas foram subcultivadas em meio de cultura WPM suplementado com 1,5 g L-1 de carvão ativado. Aos 30 dias de cultivo ou de subcultivo as microcepas foram avaliadas quanto à sobrevivência, a porcentagem de brotação, o número e comprimento total dos brotos (cm) e o número de segmentos nodais e de folhas. Segmentos basais apresentaram o maior número e comprimento dos brotos. A adição de 6,6 μM de BAP proporcionou o maior número de brotos. O carvão ativado reduziu a formação de calo e favoreceu o enraizamento. A KIN não favoreceu a formação de brotos. A adição de 8,8 μM de BAP ao meio WPM resulta no maior número de brotos em microcepas subcultivadas em meio WPM com 1,5 g L-1 de carvão ativado.