Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Instituto de Física, Instituto de Química, Faculdade Unb Planaltina, Programa de Pós-Graduação em Ensino de Ciências, Mestrado Profissional em Ensino de Ciências, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-05T12:10:29Z No. of bitstreams: 1 2012_KarllaVieiraDoCarmo.pdf: 2069839 bytes, checksum: cf7b94fbe35ebdb837efd2c3491cf57c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-05T12:32:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_KarllaVieiraDoCarmo.pdf: 2069839 bytes, checksum: cf7b94fbe35ebdb837efd2c3491cf57c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-05T12:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_KarllaVieiraDoCarmo.pdf: 2069839 bytes, checksum: cf7b94fbe35ebdb837efd2c3491cf57c (MD5) / Uma das limitações nos currículos de ciências está em priorizar o processo de ensino pautado nos seus produtos ao invés de valorizar o entendimento dos processos que norteiam o fazer científico. Considerar as habilidades e procedimentos da investigação científica na prática pedagógica não é uma proposta nova, mas continua sendo negligenciada. Por compreender que essa abordagem é necessária no desenvolvimento de um pensamento reflexivo, esta pesquisa teve como objetivo obter as percepções de um grupo de licenciandos em Ciências Biológicas (n=6) acerca de três habilidades e procedimentos da investigação científica (observação, registro e inferência) a partir de uma sequência didática. Durante a sequência utilizou-se algumas atividades em Biologia Celular em Molecular. Optou-se pela abordagem qualitativa para a análise dos dados e, por meio dos resultados constatou-se que os alunos refletiram sobre tais habilidades e procedimentos, mostrando crescente refinamento em suas percepções. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / One of the limitations science education curricula face relates to a kind of a methodology that stresses the teaching of scientific products instead of the skills and processes that originated them. The teaching of those skills and processes is not a new educational endeavor, however, it is still neglected. To be successful in such approach there is a need to the develop students’ reflexive thought. The aim of this study was to investigate the perceptions of a group of pre-service biology teachers (n=6) about the scientific processes of observation, observation record, and inference developed during a teaching unit. Some cell and molecular activities were part of the unit. The data was analyzed using qualitative methods. The findings show that the students were not only able to reflect about the three processes and skills, but demonstrated greater improvement in their perceptions.

Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós- Graduação em Educação em Ciências: Química da Vida e Saúde, Instituto de Educação, 2011. / Submitted by EDUARDO PENA (edupenaa@hotmail.com) on 2012-10-26T01:02:06Z No. of bitstreams: 1 O LIVRO DIDÁTICO DE BIOLOGIA E A TEMÁTICA CITOLOGIA.pdf: 1531992 bytes, checksum: 20a745db700fb35357237ba01995979a (MD5) / Approved for entry into archive by Bruna Vieira(bruninha_vieira@ibest.com.br) on 2013-06-19T14:57:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 O LIVRO DIDÁTICO DE BIOLOGIA E A TEMÁTICA CITOLOGIA.pdf: 1531992 bytes, checksum: 20a745db700fb35357237ba01995979a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-19T14:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 O LIVRO DIDÁTICO DE BIOLOGIA E A TEMÁTICA CITOLOGIA.pdf: 1531992 bytes, checksum: 20a745db700fb35357237ba01995979a (MD5) Previous issue date: 2011 / O presente trabalho objetivou analisar como o tema Citologia é abordado em livros didáticos de Biologia, fornecidos pelo Programa Nacional do Livro para o Ensino Médio 2009 (PNLEM 2009). Para isso, foi elaborado um roteiro que conteve aspectos gerais e específicos, sendo os aspectos gerais relacionados à estrutura básica do livro, como a presença de figuras, tabelas e quadros comparativos, bem como a presença de leituras complementares. Já os específicos estão relacionados ao conteúdo, quais temas foram sugeridos como leituras complementares, a abordagem do tema e também a análise dos conceitos discutidos. A escolha por este objeto de estudo é devido ao mesmo ser utilizado amplamente por profissionais da área de educação, seja ela Pública ou Privada, e também pelos estudantes como referência para trabalhos escolares. Além disso, este recurso é fornecido gratuitamente aos professores e estudantes da rede Pública de Ensino, desde que as suas escolas estejam devidamente cadastradas para o recebimento dos mesmos. Com esse estudo, percebeu-se que em alguns livros as figuras utilizadas não são mencionadas ao longo do corpo textual, há a presença de leituras complementares em todos os livros analisados, bem como sugestões de experimentação. Porém, também foram encontrados alguns erros conceituais e constatados a utilização de muitos termos técnicos que, embora próprio desta área do saber, algumas vezes estes termos não foram explicados nos livros. / This work has set as a goal to analize how the issue of cytology is approached on textbooks of biology, provided by the Book's National Program for the High School 2009 (PNLEM 2009). For this, it was prepared a guide with general and specific aspects. The general aspects were related to the basic structure of the book, such as the presence of images, tables, comparative tables and supplementary readings. On the other hand, the specific aspects are related to the content, which issues were suggested as supplementary readings, the approach of the issue and also the analysis of the concepts discussed. The reason to choose this theme is due to the same is also widely used by education professionals, from the public or private schools, and also by students, as a reference. Besides, this feature is provided free to teachers and students of public schools, since their schools are properly registered to receive them. With this work, it was noticed that in some books the images used are not mentioned in the text's body, there are supplementary readings in all books analyzed and trial suggestions. However, it was also noticed some misconceptions and found the use of many technical terms that, even though from this area of knowledge, sometimes these terms were not explained on the books.

Orientador: Neusa Taroda Ranga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T14:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dutilh_JulieHenrietteAntoinette_D.pdf: 9519030 bytes, checksum: 4402c83c1fdde67b05a206c5f84158e5 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Apesar de Hippeastrum ser o nome oficial para as espécies americanas, há uma falta de consenso sobre o epíteto correto do gênero. Deste modo muitas espécies foram descritas como Amaryllis e a combinação para Hippeastrum não foi feita. As diferentes espécies do subgênero Omphalissa apresentam formas intermediárias que às vezes tornam dificil a identificação dos indivíduos. Foram investigadas populações simpátricas de quatro espécies em Atibaia, SP, quanto à variabilidade intra e interpopulacional da morfologia externa, ambiente natural, fenologia e cromossomos. Os dados obtidos foram comparados com os de várias descrições de espécies semelhantes, com indivíduos vivos de populações de outras regiões e com material herborizado. As espécies mostraram diferenças ecológicas, de época de florescimento, e do posicionamento das estruturas florais, modificando o comportamento does) polinizador( es), e também diferenças na morfologia do bulbo e sua profundidade no solo, e diferenças na morfologia das folhas. Foi constatado que a continuidade morfológica entre as espécies pode estar sendo reforçada pela facilidade de hibridação, com a presença aparente de híbridos e introgressão nas populações naturais, que, apesar disto, mantém-se como entidades distintas em Atibaia. As diferenças entre as espécies devem estar sendo mantidas por diferenças fenológicas, de morfologia floral e de ambiente ocupado. Algumas populações de outras localidades mostraram combinações de caracteres intermediários entre as espécies encontradas em Atibaia, tornando os limites específicos, quando se analisa várias populações, menos evidente. A variabilidade resultante da hibridação pode ter facilitado a ocupação de novos ambientes, o que explicaria a diversidade de ambientes ocupados. A constância de um cariótipo básico semelhante para muitas espécies, apesar da variabilidade intrapopulacional, também facilita a hibridação e a manutenção da capacidade de trocas gênicas. Os dados obtidos mostraram a importância da observação das características das estruturas vegetativas, do ambiente e fenológicas, para a separação das espécies. A análise estatística das medidas tomadas em inflorescências confirmaram uma certa continuidade morfológica mas também a significância do agrupamento em espécies distintas, dos indivíduos de Atibaia. Deste modo para se fazer uma classificação ou identificação mais correta, deve ser levado em conta um conjunto de caracteres e não características isoladas / Abstract: Although Hippeastrum is the official name for the New World species, Amaryllis has been much favoured by the majority of taxonomists who worked with the group. So many of the species have been described as Amaryllis, and their combination in Hippeastrum has not yet been published. In the subgenus Omohalissa there are several species which are sometimes difficult to distinguish because of intermediate forms. Four different species of subgenus Omphalissa, growing simpatrically near the town of Atibaia, Brazil, were morphologically analysed. The species showed several intermediate forms which made it difficult, in some cases, to identify them. Statistical treatment of measures taken from several parts of the inflorescence showed that a continuity exists but that there is a significant distinction between the species. Observation of other characteristics indicated that vegetative, ecological and phenological data are very important for the characterisation and distinction of a species and the identification of an individual. The morphological continuity between the species may be explained and reinforced by the easy hybridisation between most species of the genus and the existence of these hybrids and introgression in natural populations. Variability resulting from hybridisation ma:r also help explain the diversity of environments occupied by the species. Similarity of the basic karyotype between the species, even though there is a reasonable variation in the populations, may favour the crossings and gene exchanges / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Mary Anne Heidi Dolder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taboga_SebastiaoRoberto_M.pdf: 15013802 bytes, checksum: b60f1a57a50d1feb49f1b12b7690ab2c (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar morfológica, citoquímica e ultra-estruturalmente oprocesso de maturação dos espermatozóides de Hyla Ranki. Para tal utilizou-se técnicas histológicas e citoquímicas de cortes em parafina e técnicas de cortes semi e ultra finos dos testículos incluídos em Epon. A análise dos resultados revelou que durante a espermiogênese de Hyla ranki, as espermatogônias primárias originam, através de mitoses, espermatocistos cujas células germinativas entram em meiose e, após alongamento celular, organizam-se em feixes, ocorrendo a substituição de proteínas nucleares à medida que estas células se alongam. Tal substituição leva a uma alta compactação cromatínica na forma final dos espermatozóides. O acrossomo se forma a partir da fusão de vesículas golgianas originando uma ampla vesícula acrossômica que se reduzirá consideravelmente à medida que a espermátide se alonga. As caudas apresentam estruturas acessórias constituídas de proteínas básicas, as quais assumem a forma de bastão axial separado por uma membrana ondulante do filamento marginal que está adjacente ao axonema na altura do 89 par de micrDtúbulos deste. Os processos citoplasmáticos que envolvem amaturação dos espermatozóides no interior dos testículos estão intimamente ligados à atividade das células de Sertoli, as quais são observadas desde a forma mais imatura das espermatogônias até entremeando com seu citoplasma, os amplos feixes de espermatozóides. Embora as características morfológicas ecitoquímicas de espermatozóides tenham sido utilizadas " como caráter" sistemático de exclusão para dis_riminação de espécies, como Hyla ranki e outras de seu grupo, que apresentam posicionamento filogenético duvidoso, nossos achados são altamente sugestivos de que não devam ser assim considerados, mas em realidade um caráter adicional / Abstract: The present study was undertaken to determine morphologically, cytochemically and ultrastructurally the maturation process of spermatozoa Of Hyla rank. Histological and cytochemical.techniques where used with sections of material included in paraffin, as .well as observation of semi-thin and ultra-thin sections of testicles included 1n epan. Analysis of the results shawed that primary spermatogonia,through mitosis, originate spermatocysts were the germinative cells enter meiosis. As the resulting cells elangate, they organize themselves into sheths. Nuclear prateins are substituted as this elangatian praceeds and the substitution permits a strang crhamatin campactation in mature spermatazoa. The acrasame is ariginated.b_ fusian of Galgi vesicles a large acrasamal vesicle, which is considerably campacted as the spermatid elangates. The sperm tail presents an accessory structure consisting of basic prateins, in the shape of an . axial rad and cannected to the marginal filament and axaneme by an undulating membrane. The marginal filament, also made up of basic protein, follows the axoneme next to the 8th doublet of microtubules. The cytoplasmic processes involved in sperm maturation are intimately related with the activity of Sertoli cells1 which are observed from the earliest stage of spermatogonia until the formation of sperm sheathsl wyre the Sertoli cel1s surrounds each of sperm heads in the sheath. Slthough the morphological and cytochemical characterlstics of spermato2oa have been used as excluding systematic features to separate species, in the case of Hyla ranki and others of this group which have doubtful hylogenetical positions, our studysuggests that sperm chat-acterist ics should not be considered alone but rather together with other features of systematicvalue / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

O trabalho descreve um método para isolamento de núcleos morfologicamente intacto e fisiologicamente ativos, além da caracterização parcial do DNA de Acanthamoeba castellanii (linhagem Neff). O DNA celular total de trofozoitos contém quatro famílias com diferentes velocidades de renaturação. A fração com renaturação mais lenta (DNA \"único\"), corresponde ao DNA nuclear (86% do genoma) e apresenta características cinéticas compatíveis com uma complexidade de sequência igual a 1,46x1011 daltons. O DNA reiterado (14% do genoma), compreende três famílias de sequências de nucleotídeos, denominadas \"rápidas\", \"intermediária\" e \"lenta\", com complexidade cinética respectivamente igual a 1,5x106; 2,1x10<SUP.7 e 2,6x108 daltons, presentes em aproximadamente 3x103, 3x102 e 50 cópias. As famílias de DNA reiterado têm localização predominantemente citoplasmática, sendo que as famílias \"intermediárias\" e \"lentas\" fazem parte do genoma mitocondrial. O comportamento cinético heterogêneo do DNA mitocondrial e sua complexidade assemelham-se aos dados existentes para outros microrganismos eucariotos. A constatação de uma espécie de DNA extramitocondrial pode ser relacionada com a descrição anterior de corpúsculos citoplasmáticos contendo DNA ou com a extrusão de cromatina para o citoplasma, verificada no início do encistamento. O DNA de trofozoitos também foi caracterizado quanto ao padrão de sedimentação em gradientes de densidade, desnaturação térmica e composição de bases. O DNA celular total apresenta dois componentes em gradientes de CsCl, caracterizados por densidade de flutuação iguais a 1,717 g/cm3 (Componente maior) e 1,692 g/cm3 (componente menor). O perfil de fusão do DNA mitocondrial sugere heterogeneidade de composição de bases. / Abstract not available.

Orientador: Guilherme Targino Valente / Resumo: A crescente demanda por combustíveis fósseis e as instabilidades econômicas relacionadas à sua utilização despertam o interesse no desenvolvimento de biocombustíveis tais como o bioetanol. O processo de produção mais comum do bioetanol é a tecnologia de primeira geração, no qual o organismo mais amplamente utilizado é a levedura Saccharomyces cerevisiae. No entanto, a alta concentração de etanol gera toxicidade para S. cerevisiae e constitui um dos fatores limitantes na produção deste bioetanol. Assim, a produção de linhagens mais resistentes a esse estressor constitui um ponto chave no desenvolvimento dos processos biotecnológicos relacionados ao bioetanol. Nesse contexto, análises sistêmicas são pouco empregadas para o entendimento do fenômeno de tolerância ao etanol, deixando a busca por genes candidatos algo bastante laborioso e custoso. Assim, as diferenças entre linhagens pouco tolerantes (LT) e altamente tolerantes (HT) ao etanol (EtOH) foram analisadas por meio de ferramentas de bioinformática como a biologia de sistemas e a análises de transcriptomas. Os resultados mostraram que as linhagens HT e LT utilizam inicialmente um sistema de resposta à estresse comum, mas que devido as mudanças na estrutura das redes metabólicas, regulatórias e de interação proteína-proteína de cada linhagem, mecanismos de resposta ao estresse por etanol distintos são ativados em cada grupo. As linhagens LT mantém a homeostase da célula com o ciclo celular ativo, efetuando o ajuste dos meta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The increasing demand and economic instabilities related to the use of fossil fuels raised interest in the development of biofuels such as bioethanol. The most common bioethanol production process is from the first generation technology, in which the most widely used organism is the yeast Saccharomyces cerevisiae. However, the high concentration of ethanol generates toxicity to S. cerevisiae and this is one of the limiting factors in the bioethanol production. Thus, the production of more resistant strains to this stressor is crucial to the development of biotechnological processes related to bioethanol. The systems analyzes are poorly explored to understand the ethanol tolerance phenomenon, leading the search for candidate genes labor intensive and expensive. Thus, the differences between low tolerant (LT) and high tolerant (HT) strains to ethanol (EtOH) were analyzed using bioinformatics tools like systems biology and transcriptome analysis. The results showed that HT and LT strains initially used a common stress response system but due to changes in the network structure of metabolic, regulatory, and protein-protein interactions of each strain, different mechanisms of stress response are activated in each group. LT strains maintain the cellular homeostasis activating cell cycle, and adjusting metabolisms, despite activation of transposable elements and disruption of important anti-oxidant agents production, allowing the occurrence of DNA damage. HT strains disrupt the cell... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

The Diabetes Mellitus (DM) is a group of metabolic diseases, with hiperglycemia resulting from defects in insulin secretion (type 1 DM) and / or action (type 2 DM), promoting the elevation of blood glucose levels, which can damage target organs (eyes, kidneys, nerves, heart). In the kidney presents as diabetic nephropathy (DN), characterized by increased levels of urinary albumin excretion (UAE), which could progress to end stage kidney disease. The renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS) is an important mediator of the pathophysiological changes of DN. The pharmacological blockade of this system has been shown as a combined treatment of DN, decreasing urinary albumin excretion. The aim of this study was to evaluate the effects of triple RAAS blockade on kidney structure and function, as well as albuminuria in diabetic Wistar rats with DN in development. Induction of diabetes in rats was performed with intravenous administration of alloxan (50mg/kg) diluted in 0.9% saline and glycemia observed 24h after the induction of diabetes; animals with blood glucose greater than 200 mg/dL were considered diabetic and were divide into 5 groups: I) control group - no treatment (CG); II) experimental group 1 - treated with enalapril (EN) (angiotensin converting enzyme inhibitor - ACEI), III) experimental group 2 - treated with losartan (LO) (angiotensin receptor blocker - ARB), IV) experimental group 3 - treated with aliskiren (AL) (direct renin inhibitor - DRI); V) experimental group 4 - treated with triple blockade ACEIARB- DRI (EN+LO+AL). After 90 days of treatment, animals were placed in metabolic cages to collect 24-hour urine and thereafter for determination of blood, proteinuria, and glomerular filtration rate by creatinine clearance. Then, the animals were anesthetized and had their kidneys removed for histological and immunohistochemical studies (&#945;-SMA and PCNA). After induction, all animals that became diabetic, remained with high glycemic levels throughout the treatment period. Histology showed on CG glomerular collagen deposition and tubulointerstitial, tubular dilation, space capsule expansion and inflammatory infiltration; those changes were attenuated by treatments with EN, LO, AL and EN+LO+AL. The treatments reduced the expression of &#945;-SMA glomerular (EN p<0.01; LO p<0.01; AL p<0.05, EN+LO+AL p<0.01) and tubulointerstitial (EN p<0.05, AL p<0.01, EN+LO+AL p<0.05) compared to CG. There were no significant differences in the number of PCNA glomeruli positive cells and in the analysis of plasma concentrations of sodium, potassium and urea between groups. However, EN and LO preserved a largest number of proliferating tubulointerstitial cells. Rats treated with AL (p<0.05) and EN+LO+AL (p<0.05) had a higher glomerular filtration rate (GFR) when compared to CG, EN and LO. AL and EN+LO+AL significantly reduced proteinuria in these animals when compared to CG (p<0.01). The treatment with EN+LO+AL reduced the expression of &#945;-SMA glomerular and tubulointerstitial, preserved a greater number glomeruli, GRF and UAE. However, administration of AL resulted in similar data. / O Diabete Melito (DM) corresponde a um grupo de doenças metabólicas, com hiperglicemia resultante de defeitos na secreção (DM1) e/ou ação (DM2) da insulina, promovendo a elevação das taxas glicêmicas, que pode lesionar órgãos-alvo (olhos, rins, nervos ou coração). Nos rins manifesta-se como a nefropatia diabética (ND), caracterizada pelos níveis aumentados de excreção urinária de albumina (EUA), que poderá evoluir até a insuficiência renal crônica terminal, dialítica. O sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona (SRAA) é um importante mediador das alterações fisiopatológicas da ND. O bloqueio farmacológico deste sistema tem-se mostrado como um aliado ao tratamento da ND, diminuindo a EUA. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do bloqueio triplo do SRAA na estrutura e função renais, bem como na proteinúria, de ratos Wistar diabéticos com ND em desenvolvimento. A indução do diabetes nos ratos foi feita com a administração intravenosa de aloxano (50mg/Kg) diluída em solução salina 0,9% e a glicemia verificada 12h, 24h e 48h após a indução do diabetes, animais com glicemia acima de 200mg/dL foram considerados diabéticos e divididos em 5 grupos: I) grupo controle sem qualquer tratamento (CO); II) grupo experimental 1 tratados com enalapril (EN) (iECA); III) grupo experimental 2 tratados com losartan (LO) (BRA); IV) grupo experimental 3 tratados com alisquireno (AL) (IR); V) grupo experimental 4 tratados com iECA-BRA-IR (EN+LO+AL). Após 90 dias de tratamento, os animais foram colocados em gaiolas metabólicas para coleta de urina 24 horas e, posteriormente, de sangue para determinação da proteinúria e taxa de filtração glomerular, através do clearance de creatinina. Em seguida, os animais foram anestesiados e tiveram seus rins retirados para estudos histológicos e imunohistoquímicos. Os animais de todos os grupos se apresentaram hiperglicêmicos após a indução e as glicemias se mantiveram elevadas durante todo o tempo de tratamento. A histologia mostrou no CO a deposição de colágeno glomerular e tubulointersticial, dilatação tubular, expansão do espaço capsular e presença de infiltrado inflamatório, alterações que foram atenuadas pelos tratamentos com EN, LO, AL e EN+LO+AL. Os tratamentos reduziram a expressão de &#945;-SMA glomerular (EN p<0,01; LO p<0,01; AL p<0,05; EN+LO+AL p<0,01) e tubulointersticial (EN p<0,05; AL p<0,01; EN+LO+AL p<0,05) quando comparados ao CO. Não houve diferenças significativas no número de células PCNA glomerulares positivas e nas análises das concentrações plasmáticas de sódio, potássio e uréia entre os grupos; entretanto, EN e LO preservaram o maior número de células em proliferação tubulointersticial. Os ratos tratados com AL (p<0,05) e EN+LO+AL (p<0,05) tiveram uma maior taxa de filtração glomerular, quando comparados ao CO, EN e LO. AL e EN+LO+AL reduziram significativamente a proteinúria desses animais, quando comparados ao CO (p<0,01). O tratamento com EN+LO+AL reduziu a expressão de &#945;-SMA glomerular e tubulointersticial, além de preservar um maior número de glomérulos, função renal e EUA, comuns nos quadros de ND. No entanto, a administração de AL resultou em dados semelhantes. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas

Orientador: Marileda Boanfim Carvalho / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Marcia Mery Kogika / Banca: Fábio Nelson Gava / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: O objetivo do presente estudo foi padronizar a metodologia de citologia de lavado vesical preparado pelo método de citocentrifugação, avaliar o padrão das células epiteliais de transição em cães e aplicabilidade clínica da citopatologia esfoliativa como método complementar de diagnóstico de doenças vesicais em cães. O estudo foi realizado em duas fases. A primeira incluiu 34 pacientes sem anormalidade ou doença vesical (cães adultos, machos e fêmeas), para padronização da metodologia e caracterização da celularidade normal. Na segunda fase foram avaliados 95 pacientes (cães adultos, machos e fêmeas), com ou sem sinais do trato urinário inferior. Em ambas as fases os cães foram avaliados por meio de exames de rotina, com destaque para sedimentoscopia de urina, urocultura e exame ultrassonográfico da bexiga, além da citologia de lavado vesical preparada pelo método de citocentrifugação (colorações de Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modificado e Gram - somente na segunda fase). Os resultados obtidos indicaram que a técnica empregada no estudo para recuperação celular realizada com barbotagens de três ciclos utilizando 1mL/kg de solução salina, se mostrou eficaz para avaliação de células uroteliais de cães sadios. Com o segundo estudo, que incluiu pacientes com doença vesical, concluiu-se que o conjunto de avaliações para o diagnóstico de doença vesical empregado são complementares e as contribuições de cada exame variam de acordo com o tipo de enfermidade a ser diagnosticada. A ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to standardize the methodology for cytology bladder washing prepared by cytospin method to evaluate the pattern of epithelial transition cells in dogs and the clinical applicability of exfoliative cytology as a complementary method for of bladder diseases diagnosis in dogs. The study was conducted in two phases. The first one included 34 patients without bladder abnormality or disease (adult dogs, male and female), for standardization of the methodology and characterization of the typical cellularity. In the second phase it was evaluated a group of 95 patients (adult dogs, male and female), with or without lower urinary tract signs. In both phases the dogs were evaluated by routine tests, especially sediment of urine, urine culture and ultrasound bladder examination, as well as cytology of bladder washing prepared by cytospin (stains of Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modified and Gram - only in the second phase). The results indicated that the technique used in the study for cell recovery, performed with three barbotage cycles using 1 mL/kg of saline, was effective for urothelial cells evaluation from healthy dogs. In the second study, which included patients with bladder disease, it is concluded that the employed set of evaluations for bladder disease diagnosis are complementary and the contributions of each test vary with the type of disease to be diagnosed. The cytology of bladder washing showed was as relevant as the sediment, considering the sensitivity and specificity to detect healthy and sick patients, but with the advantages of giving refinement to enable diagnosis or the diagnosis not completed by previous tests / Doutor

La definició clàssica de la mort apoptòtica estableix la presència d’una morfologia nuclear apoptòtica de tipus II (condensació de la cromatina i fragmentació del nucli) i la degradació oligonucleosomal de l’ADN o LMW (low molecular weight). Les cèl·lules derivades de neuroblastoma humà SH-SY5Y presenten aquest fenotip de mort després de ser sotmeses a un estímul citotòxic com, per exemple, l’estaurosporina. En aquest treball demostrem que les cèl·lules SH-SY5Y pateixen un procés de mort cel·lular de forma homogènia amb un fenotip nuclear no apoptòtic després de ser tractades amb l’alcaloide pertanyent a la família de les benzofenantridines, queleritrina. Aquest fenotip nuclear no apoptòtic també és observat en altres línies cel·lulars derivades de neuroblastoma humà després de ser tractades amb queleritrina. A més, establim que aquest alcaloide tampoc és capaç d’induir la degradació oligonucleosomal de l’ADN, inclús quan s’estan assolint percentatges de mort més elevats que en el tractament amb estaurosporina. Per altra banda, demostrem que la manifestació del fenotip nuclear no apoptòtic succeeix de forma primerenca i depenent de l’activació anticipada de les caspases, en un procés de mort cel·lular que es desencadena ràpidament. En aquest context, l’increment d’expressió dels nivells de CAD, la principal endonucleasa responsable de la degradació apoptòtica de l’ADN i de la morfologia nuclear de tipus II, no restableix el fenotip apoptòtic en les cèl·lules tractades amb queleritrina. A més, demostrem que les cèl·lules SH-SY5Y manifesten el fenotip de mort no apoptòtic induït per l’alcaloide malgrat CAD es trobi a la fracció cromatínica. Per altra banda, establim que el procés de mort cel·lular induït per queleritrina coincideix amb la manifestació de les propietats intercalants d’aquest alcaloide sobre l’ADN. En aquest aspecte, mostrem que altres agents d’unió a l’ADN, a l’igual que queleritrina, impedeixen la manifestació del fenotip apoptòtic provocat per estaurosporina. A més, trobem que els agents d’unió a l’ADN pertanyents a la mateixa família que queleritrina (benzofenantridines), com la sanguinarina, també indueixen l’activació prematura de les caspases. Per altra banda, el procés de mort desencadenat per queleritrina s’evita quan diferents antioxidants tiòlics s’afegeixen al medi de cultiu. A més a més, aquest fet coincideix en què queleritrina provoca que un elevat percentatge de cèl·lules pateixin estrès oxidatiu de forma anticipada mitjançant la detecció d’espècies reactives de l’oxigen (ROS). Per últim, l’addició de determinades concentracions de DTT (dithiothreitol), un antioxidant tiòlic, retarda l’activació de caspases i recupera la morfologia apoptòtica de tipus II en cèl·lules tractades amb queleritrina. En aquestes condicions, en canvi, no s’observa cap signe de degradació oligonucleosomal de l’ADN. Aquest fet coincideix en què les propietats intercalants de queleritrina sobre l’ADN encara es mantenen. Tot plegat, el conjunt dels resultats obtinguts en aquest treball estableix que els processos d’estrès oxidatiu i les propietats d’unió a l’ADN són determinants en la manifestació de diferents fenotips de mort. Així, una producció prematura de ROS podria associar-se amb una activació anticipada de les caspases, fet que seria contraproduent per la consecució d’un fenotip apoptòtic canònic en la cèl·lula destinada a morir. Per altra banda, les propietats intercalants sobre l’ADN d’una determinada molècula, per exemple, un quimioteràpic, estaria desafavorint l’acció enzimàtica de CAD sobre la cromatina respecte a la fragmentació en doble cadena de l’ADN per generar fragments oligonucleosomals, però no la capacitat d’aquesta per facilitar la compactació i fragmentació del nucli durant l’estímul citotòxic. En conclusió, el procés de mort cel·lular induït per queleritrina esdevé una eina de manifesta rellevància que ens permet l’exploració de nous procesos de mort cel·lular i, per tant, l’estudi de mecanismes moleculars que puguin estar implicats en l’evasió de la mort apoptòtica canònica. / The classic definition of apoptotic cell death ascertains the presence of type II apoptotic nuclear morphology (chromatin condensation and fragmentation of the nucleus) and oligonucleosomal DNA degradation or LMW (low molecular weight). Cells derived from human neuroblastoma SH-SY5Y have this cell death phenotype upon a cytotoxic stimulus as for example estaurosporine. In the present study, we demonstrate that the SH-SY5Y cells undergo a process of cell death in a homogeneous way with a nuclear non-apoptotic phenotype after the challenge with a benzophenanthridine alkaloid, chelerythrine. This nuclear non-apoptotic phenotype is also shown in other cell lines derived from human neuroblastoma upon the chelerythrine treatment. In addition, we establish that this alkaloid is not able to induce the oligonucleosomal DNA degradation, even when the cell death percentages reached are higher than the values obtained with treatment of estaurosporine. On the other hand, we show that the non-apoptotic nuclear phenotype appears early. It depends on anticipatory activation of caspases in a cell death process which triggers quickly. In this context, the increase of CAD levels expression, the main endonuclease responsible for DNA apoptotic degradation and nuclear morphology of type II, does not restore the apoptotic phenotype after the treatment with chelerythrine. Moreover, we demonstrate that the SH-SY5Y cells show the non-apoptotic cell death phenotype induced by the alkaloid although CAD is located in the chromatin-enriched fraction. Besides this, we ascertain that the cell death induced by chelerythrine is concomitant with the presence of DNA intercalating properties from this alkaloid. In this sense, we show that other DNA binding agents, just like chelerythrine, avoid the apoptotic phenotype induced by estaurosporine. Furthermore, we find that the DNA binding agents belonging to the same family that chelerithrine (benzophenanthridine), such as sanguinarine, also induce a premature activation of caspases. On the other hand, the presence of different thiolic antioxidants in the culture media prevents the cell death process triggered by chelerythrine. Moreover, this fact coincides with a high percentage of cells undergoes an early oxidative stress through detection of reactive oxygen species (ROS). Finally, the addition to the culture media of certain DTT (dithiothreitol) concentrations, a thiolic antioxidant, delays the caspases activation and restores the apoptotic morphology of type II, after the treatment with chelerythrine. Altogether, the results obtained from this work ascertain that the oxidative stress processes and DNA binding properties are crucial to the induction of different cell death phenotypes. Thus, an early ROS production relates to a premature activation of caspases, which would be counter-productive to achieve a canonical apoptotic phenotype in cells destined to die. Furthermore, the DNA intercalating properties from one particular compound, such as chemotherapeutic agent, would disadvantage the CAD enzymatic action of double-strand DNA fragments on chromatin degradation to generate the oligonucleosomals fragments. However, the DNA intercalating properties would not be able to avoid the compaction and fragmentation of the nucleus during cytotoxic stimulus. In conclusion, the cell death process induced by chelerythrine becomes an important tool that allows us to explore new processes of cell death and, therefore, to study the molecular pathways involved in evasion to the canonical apoptotic death.

Tesi realitzada a l'Institut de Biologia Molecular de Barcelona (IBMB-CSIC) / Budding yeast (Saccharomyces cerevisiae) cells coordinate cell growth and cell cycle progression essentially during G1, where they must reach a critical cell size to traverse Start and enter the cell cycle. The most upstream activator of Start is Cln3, a G1 cyclin that together with the cyclin-dependent kinase Cdc28 triggers a transcriptional wave that drives cell cycle entry. The Cln3 cyclin is a low abundant and very unstable protein whose levels respond very rapidly to nutritional changes. However, Cln3 expression is not sharply regulated through the cell cycle and it is already present in early G1 cells. Notably, most Cln3 is retained bound to the ER in early G1 with the assistance of Whi3, an RNA-binding protein that binds the CLN3 mRNA, and it is released in late G1 by Ydj1, a J-chaperone that might transmit growth capacity information to the cell cycle machinery. However, little is known on the molecular mechanisms that retain the Cdc28-C1n3 complex in the cytoplasm and how do these mechanisms transmit information of cell size to coordinate cell proliferation with cell growth. As Cdc28 is important for proper retention of Cln3 at the ER, we hypothesized that mutations weakening interactions to unknown ER retention factors would cause premature release of the Cdc28-C1n3 complex and, hence, a smaller cell size. This thesis describes the isolation and characterization of a CDC28 quintuple mutant, which we refer to as CDC28wee, that causes premature entry into the cell cycle and a small cell size. Next we used isobaric tags for relative and absolute quantitation (iTRAQ) to identify direct interactors with lower affinities for mutant Cdc28wee, aiming at the identification of proteins with key regulatory roles in the retention mechanism. Among the identified proteins we found Sr13, a protein of unknown function, here renamed as Whi7. Here we show that Whi7 acts as an inhibitor of Start, associates to the ER and contributes to efficient retention of the Cln3 cyclin, thus preventing its unscheduled accumulation in the nucleus. Our results demonstrate that Whi7 acts in a positive feedback loop to release the G1 Cdk¬cyclin complex and trigger Start once a critical size has been reached, thus uncovering a key nonlinear mechanism at the earliest known events of cell cycle entry. In addition to Whi7 we also identified Whi8, renamed here as Whi8, which is an RNA-binding protein present in both stress granules (SGs) and P bodies (PBs) with unknown biological function. We have found that Whi8 interacts with Cdc28 in vivo, binds and colocalizes with the CLN3 mRNA, and interacts with Whi3 in an RNA-dependent manner. Whi8-deficient cells showed a smaller budding cell size while, on the other hand, overexpression of Whi8 increased the budding volume. Cells lacking Whi8 were not capable of accumulating the CLN3 mRNA in SGs under stress conditions, and Cln3 synthesis remained high under glucose and nitrogen starvation, two environmental stress conditions that dramatically decrease Cln3 levels in the cell. Whi8 accumulation in SGs depended on an intrinsically disordered domain (IDD) identified at C-terminus of Whi8 and specific PKA phophosites. Our results suggest that Whi8 acts under stress as a safeguard that limits the influx of newly synthesized Cln3 (and likely other proteins) into the cell cycle machinery, by trapping the CLN3 mRNA in mRNA granules. Thus, we have found a unique target for signaling pathways that directly links stress response and cell cycle entry.