ORientador : Ottilio Guernelli / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-17T12:59:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_MariaAliceAltenburgde_M.pdf: 7353056 bytes, checksum: c45a5316b7db1f893b3102706accf40e (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: Com o crescente interesse em utilizar o colostro humano na dieta de recém-nascidos internados nas Unidades de Tratamento Intensivo dos hospitais e maternidades, surge a necessidade de se empregar métodos adequados para a preservação do mesmo em Bancos de Leite.Estudou-se algumas alternativas de coleta, processamento tecnológico e estocagem do colostro de parturientes internadas em duas maternidades da cidade de Campinas. Avaliou-se microbiológica e imunologicamente as diferenças encontradas, quando se levou em consideração a classe sócio-econômica da doadora, as técnicas de processamento tecnológico (congelação, pasteurização e liofilização) e a estocagem no congelador (-10ºC ? 2ºC, -l8ºC ? 2ºC e ¿40ºC ? 2ºC) durante 1, 2, 3, 4, 8 e 12 semanas. Durante a coleta do c01ostro por métodos artificiais,o volume obtido variou significativamente segundo o período de lactação, a patologia da mama após o parto, tipo de parto e número de partos das doadoras. Outras variáveis tais como a idade, doenças durante a gravidez, complicações após o parto e uso de drogas (cordicóides e antibióticos) pareceram não interferir no volume coletado.O volume, a concentração de proteínas totais e os níveis de imunoglobulinas não diferiram significativamente quando se considerou a categoria social da doadora. A maior ou menor contaminação microbiológica das amos-tras de colostro fresco foi atribuída aos métodos de esterilização da bomba ordenhadeira e o local de coleta, demonstrando a importância da coleta ser realizada sob rigorosa assepsia. O colostro das doadoras de ambas as maternidades, apresentaram níveis mais altos de IgA contrastando com as concentrações baixas de IgG e IgM. A congelação e a liofilização inibiram a proliferação dos microorganismos presentes nas amostras frescas, reduzindo variavelmente os níveis de IgA, IgM e lisozima. O colostro se manteve estocado no congelador até 12 semanas, a temperaturas abaixo de ¿10ºC sem que houvesse perdas significativas de imunoglobulinas, podendo manter a qualidade microbiológica original e até melhorá-la. A pasteurização (62,5ºC, durante 30 minutos) mostrou--se um método eficaz na diminuição da contaminação microbiana, causando algum decréscimo na concentração de IgA e reduzindo de maneira acentuada os níveis de IgM e lisozima / Abstract: With the increasing interest in the application of human colostrums for the care of newly-born infants in the "Units of Intense Treatment" of Hospitals and Maternities, there is evident the need of applying proper technology for its preservation, for the Milk-Banks. Ways of collecting, technology of preservation and storage of colostrum obtained from delivering-mothers of two hospitals in Campinas were studied. An evaluation of the microbiological and immunological characteristics was made in accordance with the social-economical status of the mother, the technology of processing (freezing,freezedrying, pasteurization) and storage under controlled, temperatures (-10ºC + 2ºC; -18ºC + 2ºC; -40ºC, +2ºC) for I up to 12 weeks. Based upon artificial methods of collecting colostrum, the obtained volume varies significantly with the period of lactation, the pathology of the mammary gland post-partum, type of deliverance and frequency of deliverance of the mother. -Variables such as age, diseases during pregnancy, complications after delivery, use of drugs such as corticoids, and antibiotics seem not to interfere with the collected volume. Volume, protein content and levels of immunoglobulins were shown not to differ significantly when the social status of the donor was considered. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: João Alberto Negrão / Coorientador: Maria Regina Barbieri de Carvalho / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Maria da Graça Pinheiro / Resumo: O sistema imunológico de bezerros consolida-se com a ingestão do colostro, alimento rico em imunoglobulinas que são proteínas responsáveis por transferir imunidade aos bezerros. A eficiência dessa transferência é influenciada por uma série de fatores, dentre eles a integridade das imunoglobulinas a serem absorvidas. No colostro estão naturalmente presentes os inibidores de tripsina, capazes de preservar as imunoglobulinas da ação de enzimas proteolíticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos inibidores de tripsina da soja na transmissão da imunidade passiva de bezerras da raça Holandesa, por meio da análise das concentrações de imunoglobulina G (IgG) e proteína total (PT) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) sérica. Foram utilizadas 18 bezerras recém-nascidas alimentadas com colostro (T1), colostro adicionado de inibidor de tripsina purificado Sigma tipo I-S (50 mg) (T2) e provenientes da fração albumina da soja 1,08 g (T3). As amostras de sangue foram colhidas por venopunção da veia jugular com 1, 12, 24, 36 e 48 h após o nascimento, sendo a primeira colheita realizada antes do fornecimento do colostro. O colostro apresentou teor de gordura de 3,2 a 7,2 %, de proteína total de 14,10 a 19,52 %, representada por 7,84 a 9,44 % pelas proteínas do soro (PS). A atividade dos inibidores de tripsina variou de 0,766 a 0,945 mg de tripsina inibida.mL-1. Não houve influencia dos tratamentos (p>0,05%) para os parâmetros analisados, porém houve efeito (p<0,05%) do período de amostragem, com aumento nas concentrações de IgG, GGT e PT a partir da 0h com respectivos valores médios de 0,68 g.dL-1; 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1, com pico de absorção às 24 h: 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 e 7,54 g.dL-1, respectivamente, indicando transmissão adequada de imunidade passiva. A adição dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The calves' immune system is consolidated by the ingestion of colostrum, which is rich in immunoglobulin, the proteins that are responsible for transfering the immunity to the calves. This transferring efficacy is influenced by a series of facts, among them the immunoglobulin's integrity to be absorbed. Trypsin inhibitors are naturally present on the colostrum and they are able to preserve the immunoglobulin from the proteoclastic enzyme actions. The aim of this work was to evaluate the potentiality of soya Trypsin inhibitor on the passive immunity of the Holstein female calves, by evaluating the concentration of immunoglobulin G (IgG) and total protein (PT) as well as Gammaglutamil transferase (GGT) activity in serum. Eighteen newborn female calves were taken and they were fed with colostrums (T1), colostrums with purified trypsin inhibitor I-S Sigma (50mg), (T2) and colostrums with soya albumin fraction 1.08 g (T3). Blood samples were collected by jugular veined punch within 1, 12, 24, 36 and 48 hours after they were born, the first collection was done before the colostrums was given. Colostrums have presented 3.2% to 7.2 % of fat contents; 14, 10% to 19, 52 % of total protein represented by 7, 84% to 9, 44 % of serum protein (PS). Trypsin inhibitor activities have varied from 0,766 mg to 0,945 mg of inhibited trypsin mL-1. There was no influence of the treatments (p>0,05%) for the analyzed parameters, however, there was (p<0,05%) a significant effect for the period of collection, with an increase on IgG, GGT and, PT concentrations from 0h with the respective medium values of 0,68g.dL- 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1. The absorption pick was at 24 h: with 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 and 7,54 g.dL-1 means, respectively for IgG, GGT and PT, indicating an adequate transmission of passive immunity. The addition of soya Trypsin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro bovino na imunidade inata, desenvolvimento da microbiota intestinal e ocorrência de diarreias em bezerras Holandesas recém-nascidas. Para isso, 20 bezerras Holandesas foram acompanhadas nos seguintes momentos: antes da mamada do colostro (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) e 28 (D28) dias após nascimento e foram distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L) de vacas doadoras. Capítulo 1 O objetivo deste capítulo foi avaliar a presença e influência dos leucócitos do colostro na colonização do trato gastrintestinal. Para isso, amostras de colostro foram semeadas em TSA e MacConkey para CBT e CCT; e amostras de fezes em agar sangue, MacConkey e Salmonella-Shiguella. Bezerras apresentaram maior frequência de diarreia no D14 (COL+=78%; COL-=60%). O grupo COL- apresentou maior CBT e CCT/mL (3,93x106 ufc/mL e 3,01x105 ufc/mL) em relação ao COL+ (0,94x106 ufc/mL e 0,78x105ufc/mL). Sobre as espécies bacterianas isoladas, as que foram mais frequentes no COL+ foram Proteus mirabilis (29,91%), Escherichia coli (28,04%), Citrobacter freundii (5,61%) e Staphylococcus spp (5,61%), no COL- foram Escherichia coli (28,70%), Proteus mirabilis (27,78%), Klebsiella pneumoniae (11,32%) e Morganella morganii (5,66%). O momento com maior isolamento em ambos os grupos foi o D2 (COL+ = 26 cepas; COL- = 27 cepas), período em que iniciou a diarreia nas bezerras. Não foi possível detectar diferenças entre as frequências de microrganismos entre os grupos COL+ e COL-. A administração de colostro COL+ e COL- não influenciou na proporção de bactérias aeróbias presentes nas fezes e na ocorrência de diarreia das bezerras durante o período neonatal. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro na resposta imune inata em bezerras Holandesas. Os animais foram submetidos ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização das provas laboratoriais. As concentrações de cortisol sérico e haptoglobina não apresentaram diferenças estatísticas, enquanto a concentração de ferro foi diferente entre os grupos no D7. No leucograma não foi detectada diferença para os leucócitos totais e neutrófilos absolutos, mas houve tendência entre os grupos no D7 para os valores de neutrófilos relativos. O marcador CH138+CD62L+ não apresentou diferença entre os grupos, apesar da maior expressão ter sido detectada no COL-. A expressão de CH138+CD62L- foi maior no COL+ no D14. A fagocitose e produção de H2O2 pelos neutrófilos sanguíneos apresentou perfil semelhante em relação ao S. aureus e E. coli entre os grupos, apesar do COL- apresentar maior intensidade de fagocitose do D7 ao D14. Houve tendência para o aumento da proporção de granulócitos liberando H2O2 basal no D14 para o COL-, entretanto o COL + apresentou tendência para maior intensidade da fagocitose no D21. A proporção de granulócitos (%), estimulados com S. aureus, liberando H2O2 foi maior no COL+ em D7, enquanto o estímulo com a E. coli não resultou em diferenças entre os grupos. A intensidade de fluorescência foi maior e gradual no COL+ quando as células foram estimuladas, porém não foram encontradas diferenças estatísticas. As células do colostro influenciaram no perfil sanitário apresentado pelas bezerras, observando-se maior intensidade de diarreias, menores teores de ferro sérico e anemias no grupo que recebeu colostro congelado. A migração dos granulócitos sanguíneos foi mais rápida e intensa no COL+ em relação ao COL-, após exposição natural aos patógenos causadores de diarreia. O índice de fagocitose (%) dos granulócitos apresentou semelhança entre os grupos, entretanto a intensidade da fluorescência foi mais intensa no COL-. Em contrapartida, o COL+ demonstrou maior habilidade em produzir H2O2 / The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum leukocytes in innate immunity, in the development of the intestinal microbiota and the occurrence of diarrhea in newborn Holstein calves. For this, 20 Holstein calves were followed in the following moments: before colostrum intake (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) and 28 (D28) days after birth. They were divided into two experimental groups: COL+ group, which received fresh colostrum (4L) from their mothers; and COL-group which received frozen and acellular colostrum (4L) of donor cows. Chapter 1 -The aim of this chapter was to evaluate the presence and influence of colostrum leukocytes in the colonization of the gastrointestinal tract. For this, colostrum samples were seeded in TSA and MacConkey for TPC and TCC; and stool samples on blood agar, MacConkey and Salmonella-Shiguella. Calves presented higher frequency of diarrhea in D14 (COL+ = 78%; COL- = 60%). The COL- group showed higher TPC and TCC/mL (3,93x106 cfu/mL and 3,01x105 cfu/mL) compared to COL+ (0,94x106 cfu/mL and 0,78x105 cfu/mL). Regarding the isolated bacterial species, those that were more frequent in the COL+ were Proteus mirabilis (29.91%), Escherichia coli (28.04%), Citrobacter freundii (5.61%) and Staphylococcus spp (5.61%); in the COL-were Escherichia coli (28.70%), Proteus mirabilis (27.78%), Klebsiella pneumoniae (11.32%) and Morganella morganii (5.66%). The moment with more insolation in both groups was the D2 (COL+ = 26 strains; COL- = 27 strains), period in which started the diarrhea in calves. It was not possible to detect differences between the frequencies of microorganisms between the COL+ and COL- groups. The COL+ and COL- colostrum management did not influence the proportion of aerobic bacteria present in feces and the occurrence of diarrhea in calves during the neonatal period. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of colostrum leukocytes in the innate immune response in Holstein calves. The animals were submitted to clinical examination, followed by blood samples collection to perform laboratory tests. The serum cortisol and haptoglobin concentrations did not show statistical differences while the iron concentration was different between groups at D7. The leukogram did not show difference to total leukocytes and absolute neutrophils, but there was a trend between groups at D7 for relative values of neutrophils. The CH138+CD62L+ marker showed no difference between groups, despite an increased expression was detected in COL-. The expression of CH138+CD62L- was greater in COL+ at D14. The phagocytosis and production of H2O2 by blood neutrophils showed similar profile in relation to S. aureus and E. coli between groups, although COL- presented greater phagocytosis intensity from D7 to D14. There was a trend for the increase of granulocyte proportion, releasing basal H2O2 at D14 for COL-, however COL+ presented trend to a higher intensity of phagocytosis at D21. The proportion of granulocytes (%) stimulated with S. aureus releasing H2O2 was greater in COL+ at D7, while stimulation with E. coli resulted in no differences between the groups. The fluorescence intensity was higher and gradual in COL+ when cells were stimulated; however, it was not detected statistical differences. The colostrum cells influenced in the health profile presented by the calves, with a higher intensity of diarrhea, lower levels of serum iron and anemia in the group that received frozen colostrum. The migration of blood granulocytes was faster and more intense in COL+ in relation to COL- after natural exposure to pathogens that cause diarrhea. The phagocytosis rate (%) of granulocytes showed similarity between groups, although the fluorescence intensity of COL- was more intense. In contrast, the COL+ demonstrated greater ability in producing H2O2

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro bovino na imunidade inata, desenvolvimento da microbiota intestinal e ocorrência de diarreias em bezerras Holandesas recém-nascidas. Para isso, 20 bezerras Holandesas foram acompanhadas nos seguintes momentos: antes da mamada do colostro (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) e 28 (D28) dias após nascimento e foram distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L) de vacas doadoras. Capítulo 1 O objetivo deste capítulo foi avaliar a presença e influência dos leucócitos do colostro na colonização do trato gastrintestinal. Para isso, amostras de colostro foram semeadas em TSA e MacConkey para CBT e CCT; e amostras de fezes em agar sangue, MacConkey e Salmonella-Shiguella. Bezerras apresentaram maior frequência de diarreia no D14 (COL+=78%; COL-=60%). O grupo COL- apresentou maior CBT e CCT/mL (3,93x106 ufc/mL e 3,01x105 ufc/mL) em relação ao COL+ (0,94x106 ufc/mL e 0,78x105ufc/mL). Sobre as espécies bacterianas isoladas, as que foram mais frequentes no COL+ foram Proteus mirabilis (29,91%), Escherichia coli (28,04%), Citrobacter freundii (5,61%) e Staphylococcus spp (5,61%), no COL- foram Escherichia coli (28,70%), Proteus mirabilis (27,78%), Klebsiella pneumoniae (11,32%) e Morganella morganii (5,66%). O momento com maior isolamento em ambos os grupos foi o D2 (COL+ = 26 cepas; COL- = 27 cepas), período em que iniciou a diarreia nas bezerras. Não foi possível detectar diferenças entre as frequências de microrganismos entre os grupos COL+ e COL-. A administração de colostro COL+ e COL- não influenciou na proporção de bactérias aeróbias presentes nas fezes e na ocorrência de diarreia das bezerras durante o período neonatal. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro na resposta imune inata em bezerras Holandesas. Os animais foram submetidos ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização das provas laboratoriais. As concentrações de cortisol sérico e haptoglobina não apresentaram diferenças estatísticas, enquanto a concentração de ferro foi diferente entre os grupos no D7. No leucograma não foi detectada diferença para os leucócitos totais e neutrófilos absolutos, mas houve tendência entre os grupos no D7 para os valores de neutrófilos relativos. O marcador CH138+CD62L+ não apresentou diferença entre os grupos, apesar da maior expressão ter sido detectada no COL-. A expressão de CH138+CD62L- foi maior no COL+ no D14. A fagocitose e produção de H2O2 pelos neutrófilos sanguíneos apresentou perfil semelhante em relação ao S. aureus e E. coli entre os grupos, apesar do COL- apresentar maior intensidade de fagocitose do D7 ao D14. Houve tendência para o aumento da proporção de granulócitos liberando H2O2 basal no D14 para o COL-, entretanto o COL + apresentou tendência para maior intensidade da fagocitose no D21. A proporção de granulócitos (%), estimulados com S. aureus, liberando H2O2 foi maior no COL+ em D7, enquanto o estímulo com a E. coli não resultou em diferenças entre os grupos. A intensidade de fluorescência foi maior e gradual no COL+ quando as células foram estimuladas, porém não foram encontradas diferenças estatísticas. As células do colostro influenciaram no perfil sanitário apresentado pelas bezerras, observando-se maior intensidade de diarreias, menores teores de ferro sérico e anemias no grupo que recebeu colostro congelado. A migração dos granulócitos sanguíneos foi mais rápida e intensa no COL+ em relação ao COL-, após exposição natural aos patógenos causadores de diarreia. O índice de fagocitose (%) dos granulócitos apresentou semelhança entre os grupos, entretanto a intensidade da fluorescência foi mais intensa no COL-. Em contrapartida, o COL+ demonstrou maior habilidade em produzir H2O2 / The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum leukocytes in innate immunity, in the development of the intestinal microbiota and the occurrence of diarrhea in newborn Holstein calves. For this, 20 Holstein calves were followed in the following moments: before colostrum intake (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) and 28 (D28) days after birth. They were divided into two experimental groups: COL+ group, which received fresh colostrum (4L) from their mothers; and COL-group which received frozen and acellular colostrum (4L) of donor cows. Chapter 1 -The aim of this chapter was to evaluate the presence and influence of colostrum leukocytes in the colonization of the gastrointestinal tract. For this, colostrum samples were seeded in TSA and MacConkey for TPC and TCC; and stool samples on blood agar, MacConkey and Salmonella-Shiguella. Calves presented higher frequency of diarrhea in D14 (COL+ = 78%; COL- = 60%). The COL- group showed higher TPC and TCC/mL (3,93x106 cfu/mL and 3,01x105 cfu/mL) compared to COL+ (0,94x106 cfu/mL and 0,78x105 cfu/mL). Regarding the isolated bacterial species, those that were more frequent in the COL+ were Proteus mirabilis (29.91%), Escherichia coli (28.04%), Citrobacter freundii (5.61%) and Staphylococcus spp (5.61%); in the COL-were Escherichia coli (28.70%), Proteus mirabilis (27.78%), Klebsiella pneumoniae (11.32%) and Morganella morganii (5.66%). The moment with more insolation in both groups was the D2 (COL+ = 26 strains; COL- = 27 strains), period in which started the diarrhea in calves. It was not possible to detect differences between the frequencies of microorganisms between the COL+ and COL- groups. The COL+ and COL- colostrum management did not influence the proportion of aerobic bacteria present in feces and the occurrence of diarrhea in calves during the neonatal period. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of colostrum leukocytes in the innate immune response in Holstein calves. The animals were submitted to clinical examination, followed by blood samples collection to perform laboratory tests. The serum cortisol and haptoglobin concentrations did not show statistical differences while the iron concentration was different between groups at D7. The leukogram did not show difference to total leukocytes and absolute neutrophils, but there was a trend between groups at D7 for relative values of neutrophils. The CH138+CD62L+ marker showed no difference between groups, despite an increased expression was detected in COL-. The expression of CH138+CD62L- was greater in COL+ at D14. The phagocytosis and production of H2O2 by blood neutrophils showed similar profile in relation to S. aureus and E. coli between groups, although COL- presented greater phagocytosis intensity from D7 to D14. There was a trend for the increase of granulocyte proportion, releasing basal H2O2 at D14 for COL-, however COL+ presented trend to a higher intensity of phagocytosis at D21. The proportion of granulocytes (%) stimulated with S. aureus releasing H2O2 was greater in COL+ at D7, while stimulation with E. coli resulted in no differences between the groups. The fluorescence intensity was higher and gradual in COL+ when cells were stimulated; however, it was not detected statistical differences. The colostrum cells influenced in the health profile presented by the calves, with a higher intensity of diarrhea, lower levels of serum iron and anemia in the group that received frozen colostrum. The migration of blood granulocytes was faster and more intense in COL+ in relation to COL- after natural exposure to pathogens that cause diarrhea. The phagocytosis rate (%) of granulocytes showed similarity between groups, although the fluorescence intensity of COL- was more intense. In contrast, the COL+ demonstrated greater ability in producing H2O2

Existem fortes evidências de que a supressão da hipersensibilidade nos recém nascidos pode ser mediada pela transferência de anticorpos maternos, dependendo de sua concentração e especificidade, no entanto carece estudos sobre a eficácia em humanos. Realizamos este estudo a fim de caracterizar qualitativa e quantitativamente a transmissão de anticorpos direcionados ao principal alérgeno da poeira domiciliar (Der p) via placenta e colostro materno, assim como investigar o efeito da sensibilização materna ao Der p na transferência passiva destes anticorpos. Para tais objetivos, analisamos amostras de sangue materno, cordão umbilical e colostro de puérperas sensibilizadas. Demonstramos pela primeira vez que S-IgA anti-Der p pode ser transferida ao lactente em concentrações bastante variáveis e com alto índice de avidez, independente da sensibilização materna ao mesmo ácaro. Demonstramos também que o nível de IgG específica ao Der p é mais elevado em recém nascidos de mães sensibilizadas quando comparado aos de mães controle não sensibilizadas. Já a avidez específica da IgG anti-Der p foi muito semelhante entre as amostras pareadas de cordão umbilical e soro materno, assim como em amostras do grupo estudo e grupo controle. / It is known that the incidence of allergic disease has been rising very fast in the last decade and nowadays affects thousands of children worldwide. For this reason, it is of great interest that efficient strategies of prevention of atopy should be applied in the first years of life or even before birth. The are strong evidences that the suppression of hypersensitivity in newborn can be mediated by the transference of maternal antibodies, depending on their concentration and specificity, however still little is known about the mechanisms involving, in special in humans. We made this study aiming to characterize qualitatively and quantitatively the antibodies transmission directed to the main home dust allergen (Dermatophagoides pteronyssinus; Der p) through placental transference and maternal breastfeeding as well as to investigate the maternal sensitizing effect against to Der p in passive transference of these antibodies. For those objectives, we quantified by ELISA, IgG anti-Der p in paired samples of maternal blood and umbilical cord and anti-Der p S-IgA in colostrums of sensitized mother (n=13) and not sensitized (n=26); and we analyzed the functional activity of the same antibodies by avidity assays. The sensibility was determined in maternal sera by specific RAST (Cap System® Pharmacia). We show by the first time that anti-Der p S-IgA is transferred to the infant in very variable concentrations and with high levels of avidity, but is not dependent of maternal sensitization. We believe that breastfeeding is important, because it supplies S-IgA with the capacity to neutralize in a specific manner and block the entrance of Der p through mucosa, in infant of RAST+ mothers as well as of RAST-. We also demonstrate that total and specific to Der p IgG levels are more elevated in newborns of sensitized mothers when compared to of those of control mothers and non-sensitized indicating that the maternal sensitizing can influence the fetal immune response. In the other hand, the specific avidity of anti-Der p IgG was very similar between paired samples of umbilical cord and maternal sera, as well as in samples of study group and control group, suggesting thar the avidity index of IgG does not influence on placental transfer of specific antibodies. Once that the maternal antibody transference represent a important mechanism for immunomodulation of allergic response, we expect that a better understanding of the influence of maternal sensitivity on passive transfer of specific antibodies to babies will contribute with advances in the elaboration of adequate strategies of prevention of allergic sensitivity with more efficient therapeutic results.

Estudou-se quantitativamente e qualitativamente a citologia, os teores de imunoglobulinas, e a atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino contra a Escherichia coli enterotoxigênica (ECET), analisando-se a influência da opsonização prévia destas células. Para tal finalidade foram utilizadas 53 vacas da raça Holandesa, das quais realizou-se a colheita de um total 212 amostras de colostro obtidas antes da primeira e segunda ordenha. As amostras positivas (n=41) ao exame bacteriológico do leite foram excluídas desta pesquisa. Para a análise citológica quantitativa e qualitativa do colostro, foram utilizadas as técnicas de microscopia direta e citocentrifugação, respectivamente. As dosagens das imunoglobulinas (IgG, IgM e IgA) foram realizadas por meio da técnica de imunodifusão radial, utilizando-se Kits comerciais. Para a avaliação da atividade bactericida indireta dos fagócitos e verificação da influência da opsonização prévia da ECET, foram realizados os seguintes ensaios: utilizando somente suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares em meio de cultura (Grupo Controle - C); suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares adicionados a suspensão de ECET não opsonizada (Grupo NO); suspensão de fagócitos mononucleares e polimorfonucleares adicionados a suspensão de ECET previamente opsonizada com 10% de sobrenadante de colostro bovino delipidado (Grupo O). A atividade bactericida indireta dos fagócitos foi mensurada por meio da quantidade de nmoles de peróxido de hidrogênio liberado por estas células, nos ensaios C, NO e O. Após as avaliações dos resultados das determinações realizadas, conclui-se que: (1) o colostro bovino de segunda ordenha apresenta maior quantidade de células/mL, que aquele de primeira ordenha; (2) a predominância celular demonstrada com o uso das técnicas de microscopia direta e de citocentrifugação foi de células mononucleares; (3) colostro bovino de segunda ordenha possui maior quantidade de neutrófilos polimorfonucleares, quando comparada àquela da primeira ordenha, utilizando as técnicas de microscópica direta e de citocentrifugação, para a contagem dos tipos leucocitários; (4) os tipos celulares predominantes no colostro bovino de primeira e segunda ordenha foram macrófagos/células epiteliais, seguidos por linfócitos, neutrófilos e eosinófilos, respectivamente, utilizando a técnica de citocentrifugação para diferenciação celular; (5) o colostro bovino de primeira ordenha possui maiores teores de imunoglobulinas das classes G e M, que o da segunda ordenha, havendo predomínio da IgG, sobre a IgM e IgA independente da ordem de ordenha. (6) os fagócitos do colostro bovino de primeira ordenha apresentaram maior atividade celular avaliada pela liberação de peróxido de hidrogênio, que os da segunda ordenha; (7) a estimulação antigênica com ECET não foi suficiente para aumentar a atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino; (8) a opsonização da ECET com soro colostral não determinou diferenças significativas na atividade bactericida dos fagócitos do colostro bovino, mensurada pela quantidade de peróxido de hidrogênio liberado por estas células; (9) existe correlação positiva entre os teores de imunoglobulinas da classe M e a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado pelos fagócitos do colostro bovino; (10) o comportamento quantitativo observado para as imunoglobulinas e células do colostro bovino, considerando a ordem das ordenhas, sugere que os anticorpos teriam função prioritária na imunidade do neonato, enquanto o aumento de neutrófilos estaria voltado aparentemente para a proteção da glândula mamária. / Bovine collostrum citology, immunoglobulin content and bactericidal activity of phagocytes against enterotoxigenic Escherichia coli were studied qualitatively and quantitatively, analyzing the influence of previous opsonization of the bacterium. In order to achieve this aim, 53 Holstein cows were used to obtain 212 collostrum samples before the first and second milkings. Samples positive (n=41) in the bacteriological examination of milk were excluded from the trial. Direct microscopy and cytocentrifugation were used in the quantitative and qualitative cytological analysis of collostrum, respectively. Immunoglobulin (IgG, IgM and IgA) contents were determined by means of radial immunodiffusion using commercial kits. Indirect bactericidal activity of phagocytes and assessment of the influence of ETEC previous opsonization were carried out as follows: using only a suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes in culture medium (Control group - C); suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes added to a suspension of non-opsonized ETEC (NO group); suspension of mononuclear and polymorphonuclear phagocytes added to an ETEC suspension previously opsonized with 10% of supernatant of delipidated bovine collostrum (O group). Indirect bactericidal activity of phagocytes was measured by means of the amount of hydrogen peroxide nmoles released by these cells in assays C, NO and O. After results were evaluated, it was concluded that: (1) bovine collostrum obtained in the second milking showed more cells/mL than first milking collostrum; (2) the predominance of mononuclear cells was determined by both direct microscopy and cytocentrifugation; (3) bovine collostrum obtained in the second milking showed greater quantity of polymorphonuclear neutrophils than that of the first milking, as determined in cell type counts by direct microscopy and cytocentrifugation; (4) cell types predominating in bovine collostrum of the first and second milking were macrophages / epithelial cells, followed by lymphocytes, neutrophils and eosinophils, respectively, using cytocentrifugation for cell differentiation; (5) first milking bovine collostrum showed greater levels of immunoglobulins G and M than that of the second milking, with a predominance of IgG compared with IgM and IgA, no matter the milking order; (6) phagocytes in first milking collostrum showed greater cell activity than those in the second milking collostrum, as evaluated by hydrogen peroxide release; (7) antigenic stimulation of ETEC was not enough to increase bactericidal activity of phagocytes in bovine collostrum; (8) ETEC opsonization with collostral serum did not lead to significant differences in bactericidal activity of bovine collostrum phagocytes, as measured by the amount of hydrogen peroxide released by these cells; (9) there was a positive correlation between the contents of immunoglobulin M and the amount of hydrogen peroxide released by phagocytes in bovine collostrum; (10) quantitative behavior observed for immunoglobulins and cells of bovine collostrum considering the milking order, suggest that antibodies would have a essential function in neonate immunity, whereas the increase in neutrophils would apparently be linked to mammary gland protection.

Orientador: Iracema de Mattos Paranhos Calderon / Coorientador: Adenilda Cristina Honorio-França / Banca: Lígia Maria Suppo de Souza Rugolo / Banca: Patrícia Palmeiras / Banca: Solange Barros Carbonare / Banca: Silvana Andrea Molina Lima / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Paes de almeida Nogueira Pinto / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Diante da importância do colostro e leite de égua na alimentação e aquisição de imunidade de potros recém nascidos e na sua utilização na dieta humana, o objetivo do estudo foi avaliar a composição, propriedades físico-químicas, perfil microbiológico e contagem de células somáticas (CCS) do colostro e leite de éguas na fase inicial da lactação. As amostras foram coletadas de 36 éguas em sete momentos: M1= momento do parto, M2= 12 horas, M3= 24 horas, M4= 36 horas, M5= 48 horas, M6= onze dias e M7= 15 dias após o parto. Houve queda nos teores de proteína, gordura, sólidos totais e sólidos desengordurados, e aumento dos teores de lactose durante os momentos estudados. Também houve variação nos valores de pH, índice crioscópico e acidez durante os momentos, principalmente entre amostras de colostro e leite de transição. Houve isolamento microbiológico em 5,55% das amostras cultivadas, das quais 28,57% eram Streptococcus não hemolítico, 28,57% Streptococcus α hemolítico, 21,43% Streptococcus equi, 14,29% Micrococcus spp. e 7,14% Bacillus spp. Nenhum animal apresentou mastite clínica. Maiores valores de CCS foram encontrados no M1 e M2, com diminuição significativa no M3, com valores inferiores a 100.000 células somáticas/mL a partir deste momento. Perante os resultados podemos constatar alterações na composição, qualidade físico-química e celularidade durante os 15 primeiros dias de lactação. Onze amostras foram positivas ao California Mastitis Test, sendo observadas no M1 (36,36%), M2 (27,27%), M3 (18,19%), M5 (9,09%) e M7 (9,09%). Bactérias do gênero Streptococcus foram as mais frequentes isoladas. Entretanto, é necessário cautela na utilização de alguns métodos de diagnóstico de mastite, já que não há padronização dos mesmos para a espécie equina / Abstract: Given the importance of colostrum and milk of the mare on feeding and acquisition of immunity of newborn foals and their use in the human diet, the aim of the study was to evaluate the composition, physicochemical properties, microbiological profile and somatic cell count (SCC) of colostrum and milk of mares in early lactation. Samples were collected from 36 mares at seven moments: M1 = moment of partum, M2 = 12 hours, M3 = 24 hours, M4 = 36 hours, M5 = 48 hours, M6 = 11 days and M7 = 15 days post-partum. It was observed decreased levels of protein, fat, total solids and solids non-fat, and increased levels of lactose during the evaluated moments. There was also variation in pH, cryoscopic index and acidity during the moments, especially between samples of colostrum and transitional milk. The microbiological isolation occurred in 5.55% of the cultured samples, of which, 28.57% was non-hemolytic Streptococcus, 28.57% α-hemolytic Streptococcus, 21.43% Streptococcus equi, 14.29% Micrococcus spp. and 7.14% Bacillus spp. No animals showed clinical mastitis. Higher SCC values were found in M1 and M2, with a significant decrease in M3, with values less than 100,000 somatic cells / mL from this moment. Given these results, changes in the composition, physicochemical quality and cellularity during the first 15 days of lactation were observed. Eleven samples were positive on California Mastitis Test, being observed in M1 (36.36%), M2 (27.27%), M3 (18.19%), M5 (9.09%) and M7 (9.09%). Bacteria of the genera Streptococcus were the most frequently isolated. However, caution is needed in the use of some methods for diagnosis of mastitis, because there is no standardization in the equine species / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-16T10:22:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287467 bytes, checksum: 347509faadce208197eebdbfc17e054d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-16T10:22:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 287467 bytes, checksum: 347509faadce208197eebdbfc17e054d (MD5) Previous issue date: 2000-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Essa pesquisa foi conduzida em seis fazendas de criação de bovinos leiteiros mestiços holandês-zebu de diferentes graus de sangue, localizadas nas microrregiões de Ponte Nova e Viçosa, Minas Gerais. Os objetivos consistiram em conhecer os níveis de IgG, inibidores de tripsina e lactoferrina encontrados em colostros dos referidos animais. Para isso, as determinações de IgG e de lactoferrina foram feitas através de imunodifusão radial simples e, no caso dos inibidores de tripsina, foi empregada técnica colorimétrica, utilizando-se o substrato sintético D-L, BApNA. Os níveis médios de IgG (154,94 mg/ml) e de inibidores de tripsina (0,9577 mg de tripsina inibida/ml) não foram influenciados pelos diferentes grupos de graus de sangue e se apresentaram muito superiores aos relatados para raças taurinas puras. A grande amplitude verificada para o intervalo de confiança envolvendo níveis médios de IgG não tem implicações práticas, já que seu limite inferior de 134 mg/ml é bastante elevado. Por outro lado, em se tratando de lactoferrina, vacas com mais de 75% de grau de sangue holandês apresentaram concentrações médias mais altas que as pertencentes aos demais grupos de grau de sangue. Para essa última característica, os valores médios verificados em cada grupo (1 a 4) foram, respectivamente, 0,65 mg/ml, 0,82 mg/ml, 1,58 mg/ml e 0,96 mg/ml, mas a alta variabilidade encontrada não permitiu obter uma estimativa média representativa, segundo os diferentes grupos estabelecidos. Concluiu-se, então, que, na maioria das vezes, não se justifica o emprego de métodos artificiais de fornecimento do colostro em se tratando de animais mestiços holandês-zebu. Em tese, bastaria que se recorresse à mamada natural assistida, nas primeiras horas de vida, para assegurar que bezerros mestiços holandês-zebu venham a receber adequadas concentrações de anticorpos colostrais necessários à transferência de imunidade passiva. / Colostrum samples from 88 crossbred holstein-zebu (HZ) dairy cows were analyzed for immunoglobulin G (IgG), trypsin inhibitor (TI) and lactoferrin (LF) concentrations. The first and the last were determined by single radial immunodifusion and TI by colorimetric procedure with D,L-BApNA chromogenic subtract of trypsin. Mean colostral levels of IgG and TI were 145,97 mg/ml and 0,9577 mg of trypsin inhibited/ml, respectively. Both were not influenced by group of crossbred HZ. Additionally, it was observed that the large confidence interval of IgG mean was not important because its low limit (134 mg/ml) is so high. Lactoferrin concentrations were affect by crossbred groups and the means were 0,65 mg/ml, 0,82 mg/ml, 1,58 mg/ml and 0,96 mg/ml for each group of cows. Crossbred cows with >75% HZ showed higher LF concentrations, although a representative general mean could not be obtained due its high variability. Considering these results, mainly IgG concentrations, it was concluded that it is not necessary an artificial method of feeding colostrum to crossbred holstein-zebu calves. Probably, the assisted natural sucking as soon after birth as possible is sufficient to get passive immune transfer.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2013-07-16T04:03:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 288743.pdf: 1024753 bytes, checksum: 828b7269a1c75cc64d13553a2ae31536 (MD5) / O leite humano é comprovadamente a melhor forma de alimentar bebês nascidos pré-termo e a termo, pois fornece todos os nutrientes que garantem seu crescimento e desenvolvimento integral de sua saúde. Os ácidos graxos contidos no leite materno possuem papel fundamental no desenvolvimento do sistema neuropsicomotor, proteção da saúde e fonte energética do recém-nascido que o recebe como alimento e há evidências de que podem ser influenciados pela dieta materna. O objetivo deste trabalho foi determinar e comparar a composição em ácidos graxos do colostro e leite maduro, produzido por nutrizes de recém-nascidos pré-termo e a termo, da Maternidade do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina/UFSC, em Florianópolis, SC. Baseado na análise por cromatografia gasosa, o conteúdo médio de ácido alfa-linolênico (C18:3n3) encontrado foi de 0,92 e 0,74% no colostro e 0,70 e 0,86% no leite maduro nos grupos pré-termo e a termo, respectivamente. Foram determinados conteúdos baixos de EPA (ácido eicosapentaenóico - C22:5 n3) e DHA (ácido docosahexaenóico - C22:6 n3) em ambos os grupos. Para EPA, um conteúdo de 0,02% no colostro (grupos pré-termo e a termo) e 0,01% no leite maduro (grupos pré-termo e a termo). O conteúdo de DHA foi 0,10% e 0,09% no colostro dos grupos pré-termo e a termo, respectivamente, e 0,05 e 0,03% no leite maduro dos grupos pré-termo e a termo, respectivamente. Nos grupos pré-termo e a termo, foi observada uma redução significativa dos níveis de DHA do colostro para o leite maduro. A comparação entre os grupos pré-termo e a termo mostrou que o conteúdo de ácido elaídico (C18:1 n9t) foi significativamente mais elevado no leite maduro a termo. Os níveis de ácido elaídico foram significativamente mais elevados no colostro em comparação com o leite maduro no grupo pré-termo (de 1,45% para 1,02%) e sem diferença significativa no grupo a termo (de 1,41% para 1,67%). O conteúdo de ácido rumênico (C18:2 n9c11t - CLA) elevou significativamente com o amadurecimento do leite no grupo pré-termo (de 0,04% para 0,05%) e foi significativamente menor no colostro do grupo pré-termo em comparação com o colostro do grupo a termo (0,04% e 0,06%, respectivamente). Os resultados mostram que, de modo geral, as maiores diferenças observadas foram entre o colostro e leite maduro para ambos os grupos e não entre as mães pré-termo e a termo. A maior exceção foi para ácido linoléico (C18:2n6), que apresentou valores significativamente mais elevados no colostro e leite maduro do grupo pré-termo (20,09% e 20,77%, respectivamente) em relação ao colostro e leite maduro do grupo a termo (17,82% e 18,09%, respectivamente). Ações educativas são importantes para modificar a dieta materna durante os períodos de gestação e lactação a fim de promover um aumento de ácidos graxos como EPA, DHA e CLA e reduzir ácidos graxos trans a partir de gorduras parcialmente hidrogenadas ao bebê desde sua concepção até o período final de desmame.