Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-14Bitstream added on 2014-06-13T20:01:07Z : No. of bitstreams: 1 hoshina_mm_dr_rcla_parcial.pdf: 95969 bytes, checksum: bd8f20157807fecce44ec996a395a238 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-30T11:22:05Z: hoshina_mm_dr_rcla_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-30T11:23:03Z : No. of bitstreams: 1 000707745_20170110.pdf: 83058 bytes, checksum: 370d2f1eb7d2f5edf83a9b0796b23cb0 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-11T12:50:19Z: 000707745_20170110.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-11T12:50:58Z : No. of bitstreams: 1 000707745.pdf: 572819 bytes, checksum: 8ef2eced91a22e4d903e2673f8f4c09b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A exposição do homem às substâncias danosas, sejam estas substâncias de origem natural ou sintética, vem crescendo durante as últimas décadas. Esta exposição é capaz de induzir diversos efeitos deletérios nos organismos expostos, provocando diversas doenças e até mesmo a morte. Da mesma forma que aumenta a quantidade de substâncias promotoras de impactos ambientais, também crescem as pesquisas que buscam por novas substâncias que sejam capazes de proteger os organismos destes efeitos deletérios. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a atividade citotóxica, genotóxica e antigenotóxica, mutagênica e antimutagênica de venenos de Hymenoptera (especificamente da abelha Apis mellifera e da vespa Polybia paulista), em diferentes concentrações, utilizando para essa avaliação o sistema teste de HepG2. Foi utilizado o ensaio do MTT para se avaliar a citotoxicidade tanto do veneno de A. mellifera como de P. paulista. As concentrações consideradas não citotóxicas (1, 5 e 10μg/mL de veneno de vespa e 0,1, 0,05 e 0,01 μg/mL do veneno de abelha) foram utilizadas para se avaliar o potencial genotóxico (ensaio do cometa) e mutagênico (teste do micronúcleo). Estas concentrações não citotóxicas mostraram-se genotóxicas e mutagênicas para o sistema teste utilizado. Foram utilizadas outras concentrações, mais baixas que as utilizadas nos testes de genotoxicidade e mutagenicidade (1ng/mL, 100pg/mL e 10pg/mL de veneno de vespa e 10pg/mL, 1pg/mL e 0,1pg/mL para o veneno de abelha), para a realização dos testes de antigenotoxicidade e antimutagenicidade com células HepG2. As concentrações utilizadas nesses ensaios mostraram que ambos os venenos, ao invés de inibirem e/ou diminuirem o efeito genotóxico e mutagênico da substância metilmetano sulfonato, aumentaram ainda mais os danos causados por esta substância... / Human exposure to harmful substances, natural or synthetic, is increasing in the last decades. This exposure is able to induce several deleterious effects on the exposed organisms, causing several diseases and even death. As the amount of substances that promote environmental impacts increases, researches seeking for new substances that are able to protect the organisms against these deleterious effects have also increased. This study aimed to evaluate the cytotoxic, genotoxic and antigenotoxic, mutagenic and antimutagenic of Hymenoptera venoms (specifically of the bee Apis mellifera and the wasp Polybia paulista), in different concentrations, using for this evaluation the HepG2 test system. The MTT assay was used to assess the cytotoxicity the venom of A. mellifera and P. paulista. The concentrations considered non cytotoxic (1, 5 and 10μg/mL of the wasp venom and 0.1, 0.05 and 0.01 μg/mL of the bee venom) were used to evaluate the genotoxic (comet assay) and mutagenic potential (micronucleus test). These non cytotoxic concentrations were genotoxic for the test system used. Other concentrations were used, lower than the ones used in the genotoxicity and mutagenicity tests (1ng/mL, 100pg/mL and 10pg/mL of the wasp venom and 10pg/mL, 1pg/mL and 0,1pg/mL for the bee venom), in order to perform the antigenotoxicity and antimutagenicity tests with HepG2 cells. The concentrations used in these assays showed that both venoms, instead of inhibiting and/or decreasing the gentoxic and mutagenic effects of the substance methylmethane sulfonate, increased even more the damages caused by this substance. In order to verify which would be the compound responsible for the effects registered for the venoms, it was also evaluated the effect of phospholipase A2 (PLA2 from A. mellifera)... (Complete abstract click electronic access below)

O presente estudo teve como objetivo o estabelecimento de um método citogenotoxico, o ensaio cometa, adaptado às células meristemáticas provenientes de raízes de propágulos de mangue da espécie Rhizophora mangle para utilização em estudos sobre genotoxicidade em ambientes marinhos. Foram testados dois tipos de germinação de raízes, quatro diferentes soluções de extração de núcleos, duas soluções de lise e o não uso da lise, dois períodos de exposição à lise, dois períodos de relaxamento, dois períodos de eletroforese e a interação de duas condições de lise com dois diferentes tempos de relaxamento. A validação de método foi realizada através da exposição de núcleos a quatro diferentes concentrações de peróxido de hidrogênio. Os resultados mostraram que é possível a obtenção de cometas com núcleos extraídos de propágulos de Rhizophora mangle e que a validação de método apresenta uma relação concentração dependente entre o índice de dano de núcleos e a concentração do agente genotoxico testado. Os melhores parâmetros utilizados para obtenção de cometas através do método por nós adaptado são: PBS ou solução salina 12‰ como solução de extração, exposição à lise alcalina iônica por 60 minutos, 5 minutos de relaxamento e eletroforese em tampão pH>13, 0,8V/cm, 230mA por 20 minutos a 4ºC. / This study aimed to establish a citogenotoxic method, the comet assay, adapted to the meristematic cells from propagule roots of red mangrove, Rhizophora mangle, for use in studies of genotoxicity in marine environments. Experiments were carried out to test two ways of root germination, four different nuclei extraction solutions, two lysis solutions and without lysis, two periods of exposure to lysis, two periods of unwinding, two periods of electrophoresis and the interaction of two lysis conditions with two different times of unwinding. Experiments on validation of the method were performed by exposing the nuclei to four different concentrations of hydrogen peroxide. The results showed that it is possible to obtain comets with nuclei extracted from the root of propagules of Rhizophora mangle and the validation data showed a dose-dependent relationship between the damage index and the concentration of the genotoxic agent tested. The best parameters to obtain comets using the method adapted by us are: PBS or saline 12‰ as extraction solution, exposure to alkaline lysis for 60 minutes, 5 minutes of unwinding and electrophoresis in buffer pH> 13, 0,8V/cm, 230mA for 20 min at 4ºC.

Orientador: Flávia Cristina Rodrigues-Lisoni / Banca: Tiago Henrique / Banca: Ana Elizabete Silva / Resumo: O câncer de cérvice uterina é uma das principais neoplasias ginecológicas em todo o mundo, apresentando altas taxas de mortalidade. O seu tratamento inclui cirurgia, terapia por irradiação e quimioterapia, entretanto, estes métodos são altamente invasivos, podendo causar lesões estéticas irrecuperáveis, com um significativo comprometimento funcional. Em função disso, tratamentos fitoterápicos contra o câncer têm despertado interesse científico, e a Piper cubeba, utilizada no tratamento de diversas doenças e tumores em geral têm sido alvo de estudos devido às suas propriedades biológicas. Assim, o objetivo do trabalho foi investigar os efeitos das lignanas da Piper cubeba, além do extrato total das suas sementes em linhagens celulares tendo como controle positivo a podofilotoxina, observando seus efeitos e comparando o processo tumorigênico de cérvice uterina com células normais. As células tumorigênicas (SiHa e HeLa) e normais (HaCaT), tratadas com as lignanas, foram avaliadas nos ensaios de proliferação e citotoxicidade em tempos de 4, 24, 48 e 72 horas e concentrações de 10, 50 e 100 µg/ml, que permitiu a escolha de melhor tempo (24 horas) e concentração (100 µg/ml) para prosseguir com os ensaios de migração celular, genotoxicidade, apoptose e necrose celular e PCR quantitativa em tempo real. Observamos que as lignanas, com destaque especial para etilcubebina, hinoquinina e o extrato total da Piper cubeba atuaram sobre as linhagens HaCaT, HeLa e SiHa, influenciando... / Abstract: Cancer of the uterine cervix is one of the leading gynecological neoplasms worldwide, with high mortality rates. Its treatment includes surgery, irradiation therapy and chemotherapy, however, these methods are highly invasive and can cause irrecoverable esthetic lesions with significant functional impairment. In function of this, herbal treatments against cancer have aroused scientific interest, and Piper cubeba, used in the treatment of various diseases and tumors in general have been studied because of their biological properties. The objective of this work was to investigate the effects of Piper cubeba lignans, in addition to the total extract of their seeds in cell lines with positive control of podophyllotoxin, observing its effects and comparing the tumorigenic process of uterine cervix with normal cells. Tumorigenic (SiHa and HeLa) and normal (HaCaT) cells, treated with the lignans were evaluated in the proliferation and cytotoxicity assays at times of 4, 24, 48 and 72 hours and concentrations of 10, 50 and 100 μg/ml, which allowed the choice of better time (24 hours) and concentration (100 μg / ml) to proceed with the cell migration, genotoxicity, apoptosis and cell necrosis and real-time quantitative PCR assays. We observed that lignans, with special emphasis on ethylcubebine, hinokinin which proved to be the most bioactive; and Piper cubeba total extract, acting on the HaCaT, HeLa and SiHa lines, positively influencing the treatment of cervical cancer cell lines ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-08-13T18:01:36Z : No. of bitstreams: 1 000741724_20141201.pdf: 197926 bytes, checksum: ac91e5d8eb4d509b8ea2984eab3e732a (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-02T13:27:21Z: 000741724_20141201.pdf,Bitstream added on 2014-12-02T13:27:59Z : No. of bitstreams: 1 000741724.pdf: 972060 bytes, checksum: 9c1d21f7846078e519f3d9100e012d54 (MD5) / Nas últimas décadas, a incidência de indivíduos com sobrepeso ou obesos vem aumentando exponencialmente. Hoje, a obesidade é considerada pela Organização Mundial da Saúde como uma epidemia mundial, com graves consequências que podem levar à morte. A obesidade é uma desordem multifatorial que envolve fatores hereditários, ambiente e estilo de vida, e suas consequências não são apenas sociais ou psicológicas, mas estão principalmente relacionadas à presença de co-morbidades como a hipertensão arterial, diabetes tipo II, doenças cardiovasculares e vários tipos de câncer. Portanto, o controle da obesidade é um desafio para a manutenção da saúde humana, atraindo o interesse de inúmeros pesquisadores que buscam o entendimento dos mecanismos associados ao seu desenvolvimento, bem como novos métodos terapêuticos e de prevenção. Com base nessas premissas, o presente estudo objetivou avaliar a associação entre alterações genéticas e a obesidade, com especial foco para a presença de danos no DNA e para o perfil de expressão e polimorfismos gênicos. A casuística do estudo incluiu 300 mulheres cadastradas na lista de espera para a realização de cirurgia bariátrica e 300 mulheres saudáveis, eutróficas, pareadas por idade. O teste do cometa foi utilizado para avaliação de danos primários no DNA de células sanguíneas; os polimorfismos dos genes da grelina (GHRL)e leptina (LEP)e dos seus receptores (GHSR e LEPR), da interleucina 6(IL-6) e da serotonina (5-HT2C) foram analisados pela técnica de RT-PCR; o perfil de expressão gênica em linfócitos foi avaliado pela metodologia do DNA microarray e a expressão dos genes adiponectina (ADIPOQ) e leptina (LEP) em adipócitos foi avaliada pela técnica de qRT-PCR. Os resultados mostraram que a frequência dos polimorfismos dos genes GHRL(rs26802), GHRS(rs572169), LEP(rs7799039), LEPR(rs 1137101), IL-6 (rs1800796) e 5-HT2C ... / In the last decades, the incidence of overweight and obesity has increased worldwide. Nowadays, obesity is considered by the World Health Organization as a global epidemic with severe consequences that can lead to death. Obesity is a multifactorial disorder which involves different factors such as genetic, environment and life style, and its consequences are not only social or psychological, but are also related to the presence of comorbidities such as hyperthension, type 2 diabetes, heart diseases and many types of cancer. Therefore, obesity control has become a challenge for the human health maintenance, catching the attention of researchers that are trying to understand the mechanisms associated to its development, as well as therapeutical and preventive methods. Based on the information above, the present study aimed to evaluate the association between genetic alterations and obesity, with special focus on the presence of DNA damage, gene expression profiling and genetic polymorphisms. Our study included 300 morbid obese women registered for the bariatric surgery and 300 healthy eutrophic women, matched by age. The comet assay was used to assess primary DNA damage in blood cells; the genetic polymorphisms of ghrelin (GHRL), leptin (LEP) and their receptors (GHSR and LEPR), interleukin-6 (IL-6) and serotonin receptor (5-HT2C) were evaluated by the RT-PCR; gene expression profiling in lymphocytes was assessed by DNA microarrays; and adiponectin (ADIPOQ) and leptin (LEP) gene expression in adipocytes were evaluated by qRT-PCR. Our results showed that the frequencies of GHRL (rs26802), GHRS (rs572169), LEP (rs7799039), LEPR (rs 1137101), IL-6 (rs1800796) and 5-HT2C (rs 3813929) polymorphisms were not different between obese and control groups. However, obese presented higher levels of primary DNA damage (single and double strand breaks, alkali-labile sites and oxidative damage) than eutrophic women, indepedent on ...

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:55:42Z : No. of bitstreams: 1 000864394.pdf: 1398611 bytes, checksum: 1d53902014d0da0cad94053a5326233a (MD5)

Orientador: Edson Luis Maistro / Resumo: A Salix alba L. (SA), popularmente conhecida como Salgueiro Branco, é uma planta utilizada na medicina popular para o tratamento de inflamações crônicas e agudas, infecções, dores, febre, entre outros. A caracterização fitoquímica do extrato da casca desta planta revelou que seu principal componente é a salicina, com uma concentração de 4,94 mg/mL, um precursor do anti-inflamatório ácido acetilsalicílico. Considerando que existem poucos estudos que avaliam a ação tóxica e citotóxica do extrato da SA, o presente estudo foi elaborado visando investigar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico da SA em células mononucleares do sangue periférico humano e de hepatocarcinoma humano HepG2 in vitro, e em diferentes células de camundongos in vivo, utilizando alguns dos testes tradicionais na área de mutagênese, como o teste do MTT, o Ensaio do Cometa e o Teste do Micronúcleo, bem como a verificação de potencial citotoxicidade por meio de análises histológicas e histoquímicas. Os testes de viabilidade celular e citotoxicidade (azul de tripan e MTT) permitiram a escolha de 3 concentrações do extrato da SA para serem analisadas nos ensaios de genotoxicidade in vitro: 5, 50 e 100 µg/mL. Pelo ensaio cometa com as células mononucleares de sangue periférico, pôde-se observar que as concentrações de 50 e 100 µg/mL acarretaram um aumento estatisticamente significativo de danos no DNA, em comparação ao controle negativo. Já no teste do micronúcleo, as 3 concentrações avaliadas (5, 50 e 1... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salix alba L. (SA), popularly known as White Willow, is a plant used in folk medicine for the treatment of chronic and acute inflammations, infections, pains, fever, among others. The phytochemical characterization of the bark extract of this plant revealed that its main component is salicin, with a concentration of 4.94 mg/mL, a precursor of the antiinflammatory acetylsalicylic acid. Considering that there are few studies evaluating the toxic and cytotoxic action of SA extract, the present study was designed to investigate the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potential of SA bark wood extract in human peripheral blood mononuclear cells and human hepatoma cell line HepG2 in vitro and in different mouse cells in vivo using some of the traditional mutagenesis tests such as the MTT test, the Comet assay and the Micronucleus test, and cytotoxicity in the liver of mice also by histological and histochemical analysis. Cell viability and cytotoxicity tests (trypan blue and MTT) allowed the choice of 3 concentrations of the SA extract to be analyzed in the in vitro genotoxicity assays: 5, 50 and 100 μg/mL. By the comet assay with the peripheral blood mononuclear cells, it was observed that concentrations of 50 and 100 μg/ml resulted in a statistically significant increase in DNA damage, as compared to the negative control. In the micronucleus test, the 3 concentrations evaluated (5, 50 and 100 μg/mL) did not produce significant increases of micronucleated binucleate cells, as well ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Introdução: Toda a exposição à radiação ionizante envolve um benefício e um risco inerente. O tratamento com radioterapia utiliza feixes de alta energia que tem como finalidade destruir o tumor, atingindo também áreas adjacentes e podendo causar dano celular, não visível macroscopicamente. Objetivos: O objetivo principal deste projeto é avaliar o índice de dano em células nucleadas do sangue periférico de pacientes diagnosticadas com câncer de mama em tratamento com radioterapia, através das técnicas de micronúcleo e ensaio cometa. O objetivo específico é avaliar a percepção de risco e coerção de pacientes diagnosticadas com câncer de mama em relação ao seu tratamento com radioterapia. Métodos: A metodologia consiste em dois sub-estudos, um com delineamento longitudinal, do tipo estudo de casos incidentes, composto por pacientes com câncer de mama em tratamento no Serviço de Radioterapia. Foram realizadas quatro coletas de sangue em diferentes momentos para a realização das duas técnicas: (1) antes do início do tratamento, (2) na segunda semana, (3) no final e (4) aproximadamente um mês após o seu término. O segundo sub-estudo, com delineamento transversal, foi realizado no período antes do tratamento radioterápico. As pacientes que foram submetidas à radioterapia foram pareadas com outro grupo de participantes voluntárias que não têm diagnóstico de câncer e nem indicação de radioterapia. Cada sub-estudo foi formado por 18 indivíduos do sexo feminino, totalizando 36 sujeitos de pesquisa. Utilizando-se a técnica de micronúcleo, foram analisadas três tipos de alterações celulares: micronúcleo, buds e pontes nucleoplasmáticas. Durante a segunda coleta de sangue um questionário contendo a percepção de coerção e de risco foi aplicado às pacientes. Resultados: Em relação ao estudo longitudinal houve diferença significativa na alteração nuclear de micronúcleo entre as coletas realizadas antes e após um mês de tratamento com radioterapia. Em relação à alteração nuclear buds não houve diferença significativa e em relação à alteração nuclear pontes nucleoplasmáticas houve diferença significativa, mas não foi possível verificar entre quais momentos da coleta de sangue. Houve diferença significativa na técnica ensaio cometa comparando as coletas realizadas duas semanas após o início da radioterapia e no final da mesma. Em relação ao estudo transversal, os resultados da técnica de micronúcleo mostraram que não há diferença significativa entre as pacientes com câncer e sem câncer. A percepção de coerção obteve um valor médio de 0,79, com desvio padrão de 0,91. Quanto à percepção de risco em relação ao seu tratamento, as pacientes inferiram um risco médio de 5,4% e um desvio padrão de 11,9%. A maioria das pacientes, 84% da amostra, teve uma percepção de risco que não ultrapassou 10%. Conclusão: A radioterapia induziu danos celulares, ou seja, houve efeito biológico causado pelo tratamento com radioterapia evidenciado pela alteração nuclear de micronúcleo. A técnica ensaio cometa evidenciou, que o sistema de reparo foi eficiente, pois, o dano celular induzido na segunda semana de tratamento diminuiu no final do mesmo. Com base na avaliação das percepções de coerção e de risco, em relação à radioterapia, foi possível verificar que: a) A percepção de risco obteve valores baixos, sendo que na maioria da amostra o risco percebido foi igual a zero; b) A baixa percepção de coerção evidencia que as pacientes tiveram liberdade para optar pelo tratamento proposto pela equipe assistencial com reduzida pressão de fatores externos. / Background: Benefits and inherent risks are involved in any exposure to ionizing radiation. Treatment with radiation therapy uses high energy beams that aim to destroy the tumor, affecting also adjacent areas and potentially causing cell damage, in a macroscopic view. Objective: The main objective of this research was to evaluate the damage index in nucleated cells from peripheral blood of breast cancer patients receiving treatment with radiotherapy through the techniques micronucleus and comet assay. The specific objective is to evaluate the risk perception and coercion of patients diagnosed with breast cancer about their treatment with radiotherapy. Methods: The methodology consists of two sub-studies, the first one is a longitudinal study of incident cases, comprising patients with breast cancer undergoing treatment at the Radiotherapy Service. Four blood samples were taken at different times to the achievement of both techniques: (1) before starting treatment, (2) in the second week, (3) at the end and (4) a month after finished the treatment. The second sub-study, with cross-sectional design was carried out before radiotherapy. The patients who underwent radiotherapy were paired with another group of voluntary participants who have no diagnosis of cancer and are not using any radiation. Each sub-study consisted of 18 females, making 36 research subjects. Using the micronucleus assay, we analyzed three types of cellular changes: micronuclei, buds and nucleoplasmatic bridges. During the second blood collection a perception of coercion and risk perception questionnaire was applied to patients. Results: The longitudinal study showed a significant difference in the nuclear micronuclei changes between samples taken before and after a month of radiotherapy. Regarding amendment nuclear buds there was no significant difference and in relation to amendment nuclear nucleoplasmatic bridges there was a significant difference, but it was not possible to verify what time between blood collection. There were significant differences in the comet assay comparing the samples taken two weeks after the start of radiotherapy and at the end of treatment. Regarding the cross-sectional study, the micronucleus assay results showed no significant difference between patients with cancer and without cancer. The perception of coercion obtained an average value of 0.79 with a standard deviation of 0.91. Regarding the risk perception in relation to their treatment, patients inferred an average risk of 5.4% and a standard deviation of 11.9%. Most patients, 84% of the sample had a risk perception that did not exceed 10%. Conclusion: The radiation induced cell damage, there was biological effect caused by radiotherapy and evidenced by changes in nuclear micronuclei. The comet assay showed that the repair system was efficient, because cellular damage in the second week of treatment decreased at the end of it. Based on the assessment of the perceptions of coercion and risk in relation to radiotherapy, we found that: a) risk perception obtained low values, and in most of the sample perceived risk was zero, b) Low perception of coercion shows that the patients were free to choose the treatment proposed by the treatment team with a reduced pressure of external factors.

A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) é uma doença inflamatória com participação de macrófagos, neutrófilos e linfócitos CD8, associada a estímulos oxidantes diretamente nas estruturas pulmonares, causada mais comumente pelo tabagismo. Recentemente foi demonstrado que o teste de caminhada dos seis minutos (TC6) é capaz de aumentar a inflamação e gerar o aumento de espécies reativas de oxigênio. O presente estudo teve como objetivo avaliar os níveis de dano e reparo de DNA em portadores de DPOC, quando submetidos ao TC6. Para avaliar o dano de DNA, amostras de sangue periférico foram coletadas antes e imediatamente após o TC6. Para avaliar a capacidade de reparo, foi analisada uma amostra coletada 48 horas após o TC6. Todas as amostras foram processadas pela técnica do cometa. Vinte e sete pacientes portadores de DPOC foram avaliados, sendo 59% homens. A média de idade foi de 64,7 ± 8,4 anos. A média do VEF1 foi de 40,3% ± 18,4% do previsto, com relação média de VEF1/CVF de 52,5% ± 11,9%. Todos fumaram em média 36,7 ± 17,0 anos, uma média de 48,1 ± 37,5 maços/ano. As médias das variáveis obtidas no início e no final do TC6 foram: SpO2 (92,0 ± 4,5 vs. 91,4 ± 4,6), percepção da dispnéia pela escala de BORG (1,2 ± 1,0 vs. 2,4 ± 1,7) e a distância percorrida foi em média de 380,1± 84,4 m. As taxas médias de dano de DNA antes do TC6 (27,9 ± 19,2) e imediatamente após (29,6±29,6) não apresentaram diferenças significativas (p=0,904). A análise realizada 48 horas após o TC6 demonstrou uma redução não significativa deste dano (18,3 ± 13,0, p=0,099). Conclui-se neste estudo que o esforço físico realizado durante o TC6 não provoca aumento imediato nas taxas de dano de DNA, nem estimula os mecanismos de reparo do DNA em portadores de DPOC. / Chronic obstructive pulmonary disease is an inflammatory disease in which macrophages, neutrophils and CD8 T lymphocytes play an important role. It is associated with direct oxidant stimuli of lung structures, which are most frequently triggered by smoking. A recent study showed that the 6-minute walk test (6MWT) increases inflammation and reactive oxygen species. This study evaluated DNA damage and repair in patients with COPD that took the 6MWT. To evaluate DNA damage, peripheral blood samples were collected before and immediately after 6MWT. To evaluate repair, a sample was collected 48 hours after the 6MWT. All samples were prepared for the comet assay. Twenty-seven patients with COPD were evaluated; 59% were men and mean age was 64.7 ± 8.4. Mean FEV1 was 40.3% ± 18.4% of predicted value, and mean FEV1/FVC was 52.5% ± 11.9%. Mean values before and after 6MWT were: SpO2 = 92.0 ± 4.5 vs. 91.4 ± 4.6; Borg score for dyspnea = 1.2 ± 1.0 vs. 2.4 ± 1.7; and mean distance walked – 380.1 ± 84.4 m. Mean DNA damage values before (27.9 ± 19.2) and immediately after (29.6 ± 29.6) 6MWT were not significantly different (p = 0.904). The analysis performed 48 hours after 6MWT showed a nonsignificant reduction of damage (18.3 ± 13.0; p = 0.099). Conclusions The physical effort during 6MWT did not cause an immediate increase in DNA damage, and did not stimulate DNA repair mechanisms in patients with COPD.

MAIA FILHO, P. A. Genotoxicidade e mutagenicidade em pacientes com leucemia mieloide crônica tratados com inibidores de tirosino-quinase. 2017. 64 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-24T13:51:01Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_pamaiafilho.pdf: 1620056 bytes, checksum: b8fde4a5c189ab98dfc52d58490d9eb1 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-24T13:51:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_pamaiafilho.pdf: 1620056 bytes, checksum: b8fde4a5c189ab98dfc52d58490d9eb1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T13:51:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_pamaiafilho.pdf: 1620056 bytes, checksum: b8fde4a5c189ab98dfc52d58490d9eb1 (MD5) Previous issue date: 2017-02-15 / Chronic myelogenous leukemia (CML) is a myeloproliferative disease of hematopoietic stem cells, characterized by the presence of the Philadelphia (Ph) chromosome, originating from a reciprocal translocation between the long arms of chromosomes 9 and 22, forming the gene BCR-ABL, which encodes a BCR-ABL oncoprotein with constitutive tyrosine kinase activity. The clinical course of CML is often divided into three phases: chronic, accelerated, and blast. The treatment of choice for the chronic phase is the first-generation tyrosine kinase inhibitor (TKI), imatinib mesylate, and for refractory patients, second-generation TKIs (dasatinib or nilotinib) are used. Studies have shown that residual leukemia may persist even in the best responders to TKI, since therapy is not curative. In this context, the present study aimed to evaluate the genotoxicity and mutagenicity of TKI in patients with CML followed at the hematology clinic of the Walter Cantídio University Hospital (HUWC). It is a cross-sectional study with 44 patients with clinical and molecular diagnosis of CML. Patients were stratified into three groups: diagnosis (CML D) (n = 5), use of first generation TKI (CML) (n = 31) and use of second generation TKI (CML) (n = 8). The control group (CG) consisted of apparently healthy individuals. Genotoxicity and mutagenicity were analyzed by the comet assay and micronucleus test. Statistical analysis of the data was performed using the GraphPad Prism 6.0 program using the Kruskal-Wallis or ANOVA, Mann Whitney or T-student tests, depending on the normality of the data and the level of significance was 5% (p < 0.05). Patients with CML had a statistically higher ADN damage index (DI) compared to CG (p < 0.0001). When the patients were stratified, a progressive increase of the DNA ID was verified in the groups: CML D, CML G1 and CML G2, respectively, relative to GC (p < 0.05). Patients with CML had a statistically higher micronucleus index (NMI), nucleoplasmic bridge index (NPI) and nuclear bud index (NBI) compared to the CG (p < 0.05). By stratifying patients with CML, it was found that patients in the G1 and G2 CML groups had statistically higher NMI and NPI compared to CG (p <0.001). NMI was also elevated in the CML G2 group in relation to the patients in the CML D group (p <0.01). The nuclear bud index (NBI) did not present statistical difference in the analyzes performed after the stratification of the groups. The TKI revolutionized CML therapy, improving patient survival. However, these results point to the relevance of studies that evaluate the possible genotoxic and mutagenic effects of this therapy in the long term. The mechanisms involved should be elucidated for the purpose of improving treatment as well as assessing the clinical impact this harm may cause. / A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa das células-tronco hematopoéticas, caracterizada pela presença do cromossomo Philadelphia (Ph), originado a partir de uma translocação recíproca entre os braços longos dos cromossomos 9 e 22, formando o gene BCR-ABL, que codifica uma oncoproteína BCR-ABL com atividade tirosino-quinase constitutiva. O curso clínico da LMC é frequentemente dividido em três fases: crônica, acelerada e blástica. O tratamento de escolha para a fase crônica é o inibidor de tirosino-quinase (ITK) de primeira geração, mesilato de imatinibe, e para os pacientes refratários, utiliza-se os ITK de segunda geração (dasatinibe ou nilotinibe). Estudos têm demonstrado que a leucemia residual pode persistir mesmo nos melhores respondedores aos ITK, uma vez que a terapia não é curativa. Nesse contexto, o presente estudo objetivou avaliar a genotoxicidade e mutagenicidade dos ITK em pacientes com LMC acompanhados no ambulatório de hematologia do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC). Trata-se de um estudo transversal com 44 pacientes com diagnóstico clínico e molecular de LMC. Os pacientes foram estratificados em três grupos: ao diagnóstico (LMC D) (n=5), em uso de ITK de primeira geração (LMC G1) (n=31) e em uso de ITK de segunda geração (LMC G2) (n=8). O grupo controle (GC) foi composto por indivíduos aparentemente saudáveis. A genotoxicidade e mutagenicidade foram analisadas através do ensaio cometa e teste de micronúcleos. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa GraphPad Prism 6.0 utilizando-se os testes de Kruskal–Wallis ou ANOVA, Mann Whitney ou T-student, dependendo da normalidade dos dados e o nível de significância foi de 5% (p < 0,05). Pacientes com LMC apresentaram índice de dano (ID) no DNA estatisticamente mais elevado em comparação ao GC (p < 0,0001). Quando os pacientes foram estratificados, foi verificado um aumento progressivo do ID no DNA nos grupos: LMC D, LMC G1 e LMC G2, respectivamente, em relação ao GC (p < 0,05). Pacientes com LMC apresentaram índice de micronúcleos (IMN), índice de pontes nucleoplasmáticas (IPN) e índice de buds nucleares (IBN) estatisticamente mais elevados em comparação com o GC (p < 0,05). Ao se estratificar os pacientes com LMC, foi verificado que pacientes dos grupos LMC G1 e G2 apresentaram IMN e IPN estatisticamente mais elevados em comparação ao GC (p < 0,001). O IMN também foi elevado no grupo LMC G2 em relação aos pacientes do grupo LMC D (p < 0,01). O índice de bud nuclear (IBN) não apresentou diferença estatística nas análises realizadas após a estratificação dos grupos. Os ITK revolucionaram a terapia da LMC, melhorando a sobrevida dos pacientes. No entanto esses resultados alertam para a relevância de estudos que avaliem os possíveis efeitos genotóxicos e mutagênicos dessa terapia a longo prazo. Os mecanismos envolvidos devem ser elucidados com a finalidade de aprimorar o tratamento, bem como avaliar o impacto clínico que esse dano pode causar.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:14:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 118.pdf: 1479796 bytes, checksum: 7be776b745146d3167dcfef16b0d38d0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Os preservantes de madeira são todas e quaisquer sustâncias usadas para evitar o apodrecimento da madeira por microorganismos tornando-a resistente ao ataque e desenvolvimento de organismos xilófagos. Neste trabalho estudou-se como substâncias de interesse o pentaclorofenol e o cobre-8-quinolinolato, substâncias potencialmente tóxicas ao homem. Este trabalho visa avaliar a situação dos materiais de madeira em contato com alimentos em relação aos seus preservantes. Através do desenvolvimento de uma metodologia analítica capaz de determinar os preservantes de madeira e estimar a exposição do ser humano a essas substâncias e seus efeitos toxicológicos. Utilizamos o ensaio de migração para verificação da transferência destas substâncias contidas nas amostras para o solvente simulante, e a eletroforese capilar para determinação e quantificação das substâncias. Além do ensaio Cometa usado para verificar e identificar se substâncias estudadas tiveram atividade genotóxica, identificando possíveis carcinógenos humanos. Nos resultados pôde-se constatar a presença do pentaclorofenol e quantificá-lo nas amostras de palitos de picolé, mas não foi possível determinar a presença do cobre-8-quinolinolato nas amostras. Nos ensaios toxicológicos podemos verificar o efeito genotóxico somente para o cobre-8-quinolinolato, apresentando resultados estatisticamente significativos em relação ao controle, porém este mesmo efeito não pode ser observado para o pentaclorofenol. Com a realização deste projeto, mediante a identificação, determinação quantitativa e avaliação toxicológica das substâncias utilizadas como preservantes de madeira pode-se contribuir através de um estudo interdisciplinar, para atuação eficaz da vigilância sanitária no Brasil. / The wood preservatives are all substances used to avoid the rottenness of wood by microorganisms, turn it resistant to attack and development xylophagous microorganisms. In this work studied like substance of interest the pentachlorophenol and copper-8-quinolinolate, substances potentially toxic. This work aim to evaluate the situation of the wood materials in contact with foodstuff in relation at yours preservatives. It through development of an analytical methodology to be able determine the wood preservative and to estimate human being exposure these substances and your toxicology effects. We use the migration assay to check by transfer these substances contained in the sample to food through simulated solvent and capillary electrophoresis to determine and quantification of the substances. Moreover the Comet assay was used to check and identify genotoxic effect these substances, identifying possible humans carcinogens. The results could it see the presence of the pentachlorophenol and quantify it in the samples popsicle stick, it was not possible to determine the presence of the copper-8-quinolinolate in the samples. In the toxicology assay could check the genotoxic effect only to Copper-8-Quinolinolate, presenting results statistically significant in relation control however this same effect was not observed to pentachlorophenol. With the realization this project, by means of identification through capillary electrophoresis and toxicological evaluation of the PCP can be donating through of a interdisciplinary study for effective actions of the Sanitary Surveillance in the Brazil.