Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-16T16:03:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Talita Souza.pdf: 1684863 bytes, checksum: 361f3f43c52173bf714ce36b5d4bdbc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T16:03:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Talita Souza.pdf: 1684863 bytes, checksum: 361f3f43c52173bf714ce36b5d4bdbc2 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / CAPES / Os agrotóxicos foram utilizados primeiramente na saúde pública, a fim de combater vetores que causam doenças. Posteriormente seu uso tornou-se intensivo na agricultura, com intenção de melhorar a produção e a aparência dos produtos. Atualmente o Brasil é o maior consumidor de defensivos agrícolas do mundo, e isto é um fato preocupante, visto que a exposição a esses agentes tóxicos pode trazer sérios riscos à saúde humana e meio ambiente. A Cipermetrina (Cp) e Metomil (Mt) são agrotóxicos largamente utilizados na agricultura brasileira. Conquanto a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) tenha estabelecido a Ingestão Diária Aceitável (IDA) de ambos isoladamente, é sabido que o consumidor está exposto a misturas de praguicidas por meio de sua dieta. No entanto, a maioria das pesquisas estudam os efeitos dos agrotóxicos isoladamente, sendo limitado o número de trabalhos que analisam as combinações desses compostos. Diante disso, avaliamos o potencial genotóxico, pelo ensaio cometa, e mutagênico, pelo teste do micronúcleo, de misturas de formulações comerciais de Mt e Cp em doses baixas. Setenta camundongos foram distribuídos em sete grupos. O grupo controle negativo (CN) recebeu água destilada (veículo de diluição). O controle positivo (CP) recebeu ciclofosfamida (20 mg/kg). Três grupos receberam misturas: A (0,05mg Mt + 0,0625 mg Cp), B (0,005mg Mt + 0,0125mg Cp) e C (0,0005mg Mt + 0,00125mg Cp). O grupo D recebeu apenas Mt (0,05mg) e o E apenas Cp (0,0625 mg). Os resultados de cada grupo foram comparados entre si pelo teste de Kruskal-Wallis com análise a posteriori, usando a estratégia de testes t par-a-par com correção de Bonferroni (p< 0,05). Todas as misturas apresentaram efeito genotóxico e apenas a mistura na maior concentração (A) foi mutagênica. Quando isolados, apenas a Cp apresentou atividade genotóxica significativa; entretanto, a média do dano de E foi menor que a encontrada nas três misturas estudadas. Desta forma, conclui-se que os efeitos do Mt e Cp são potencializados quando estes estão associados, mesmo em doses baixas, podendo causar danos à saúde. / Pesticides were firstly used in public health in order to tackle disease vectors. Afterwards,in order to improve agricultural production and products good appearance,their use in crops became intensive. Currently, Brazil is the largest consumer of pesticides in the world; the exposure to these toxic agents can pose serious risks to human health and to the environment. Cypermethrin (Cp) and Methomyl (Mt) are pesticides widely used in Brazilian agriculture. While the National Health Surveillance Agency (ANVISA) has established their Acceptable Daily Intake (ADI), consumers are exposed to mixtures of pesticides through food. Nonetheless, most of studies consider the effects of isolated pesticides, when few studies analyze the combinations of compounds. Here, we evaluated the genotoxic and mutagenic effects of low doses of Mt and Cp mixtures obtained from commercial formulations. To do that, seventy mice, divided in seven groups,were used to perform comet assay and micronucleus test. The negative control group received distilled water (dilution vehicle of pesticides),while positive control group received cyclophosphamide (20 mg / kg). Three groups received mixtures of Mt and Cp: A (0.05 mg Mt + 0.0625 mg Cp), B (0.005 mg Mt + 0,0125mg Cp) and C (0,0005mg Mt + 0,00125mg Cp). The D group received only Mt (0.05 mg) and E group received only Cp (0.0625 mg). Kruskal-Wallis test was performed for statistical analysis; subsequently, a multiple comparison was performedusing t tests and Bonferroni correction (α = 0.05). All mixtures presented genotoxic effect and only the mixture at the highest concentration (A) has presented mutagenic effect. The mixtures presented higher genotoxic and mutagenic effects than isolated pesticides at same concentrations (p < 0,05); only Cp showed significant genotoxic activity. Thus, the effects of Mt and Cp are enhanced when they are associated, even at low doses. Results presented here suggest that mixtures of Mt and Cp have different effects in health than that shown by then whenisolated. Therefore, the relationship pesticides-health must be investigated with basis in real exposure patterns.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A radiaÃÃo ionizante à considerada um fator de risco para o desenvolvimento de diversos tipos de neoplasias pelos danos causados à molÃcula de DNA, sendo de extrema importÃncia, portanto, o monitoramento de populaÃÃes humanas expostas a ela. O municÃpio de Monte Alegre no estado do Parà apresenta uma das maiores Ãreas de mineraÃÃo do urÃnio do mundo, que se estende aos municÃpios vizinhos de Prainha e Alenquer. Este trabalho teve como objetivos a avaliaÃÃo do potencial genotÃxico do urÃnio presente em rochas nas residÃncias de indivÃduos dos municÃpios de Monte Alegre, Prainha e Alenquer atravÃs do ensaio do cometa alcalino em linfÃcitos perifÃricos e a determinaÃÃo das freqÃÃncias de polimorfismos nos genes de reparo do DNA XRCC1 e XRCC3 e no gene de metabolizaÃÃo GSTM1 atravÃs de seqÃenciamento direto de DNA. Na anÃlise do cometa alcalino, nÃo houve diferenÃa estatisticamente significante entre os Ãndices de Dano (IDs) das populaÃÃes de Monte Alegre (ID = 32,01  1,57), Prainha (ID = 45,80  1,12) e Alenquer (ID = 44,30  0,62) e o do controle negativo (ID = 42,00  5,75) (p > 0,05). AtravÃs do seqÃenciamento direto de DNA, observou-se a presenÃa de polimorfismos nos genes XRCC1 e XRCC3 em regiÃes de Ãntrons e de Ãxons. No gene XRCC1, as freqÃÃncias alÃlicas variantes para o polimorfismo Arg194Trp nas populaÃÃes de Monte Alegre, Prainha e Alenquer foram 12%, 13% e 7% e, para Arg399Gln, 28%, 30% e 32%, respectivamente. No gene XRCC3, as freqÃÃncias do alelo variante do polimorfismo Thr241Met encontradas nas populaÃÃes de Monte Alegre, Prainha e Alenquer foram, respectivamente, 28%, 13% e 33%. Em relaÃÃo ao gene GSTM1, as freqÃÃncias obtidas de ausÃncia do gene apresentaram os valores de 36%, 31% e 40%, respectivamente Ãs populaÃÃes de Monte Alegre, Prainha e Alenquer. No geral, todas as freqÃÃncias alÃlicas nos Ãxons dos genes XRCC1 e XRCC3 e de ausÃncia do gene GSTM1 foram estatisticamente semelhantes entre os trÃs municÃpios e se mostraram em concordÃncia com freqÃÃncias obtidas em outros estudos com populaÃÃes brasileiras. Conclui-se que, dentre as populaÃÃes estudadas, nÃo houve aumento da incidÃncia de dano ao DNA pela exposiÃÃo ao urÃnio, o que pode se explicar pela baixa radiaÃÃo nessas localidades. AlÃm disso, as freqÃÃncias alÃlicas dos polimorfismos encontrados nos genes de reparo XRCC1 e XRCC3, assim como as de ausÃncia do gene de metabolizaÃÃo GSTM1 nÃo diferiram das encontradas em populaÃÃes de outras regiÃes do Brasil. Desse modo, nas regiÃes estudadas, possivelmente nÃo existe tendÃncia ao desenvolvimento de cÃncer induzido pela exposiÃÃo ao urÃnio. / Radiation is considered a risk factor for the development of several types of cancers caused by damage into the DNA molecule and is of extreme importance, therefore, the monitoring of human populations exposed to it. The municipality of Monte Alegre in the state of Parà in Brazil has one of the largest uranium mining areas of the world, which extends to the neighboring municipalities of Prainha and Alenquer. This work assessed the genotoxic potential of exposure to uranium in rocks found in dwellings in individuals from the municipalities of Monte Alegre, Prainha and Alenquer through the alkaline comet assay in peripheral blood lymphocytes and the determination of the frequencies of polymorphisms in DNA repair genes XRCC1 and XRCC3 and in carcinogen-metabolism gene GSTM1 through direct DNA sequencing. The analysis of the alkaline comet assay indicated that there was no statistically significant difference between the Damage Indexes (DIs) of Monte Alegre (DI = 32.01  1.57), Prainha (DI = 45.80  1.12) and Alenquer (DI = 44.30  0.62) and of the negative control (DI = 42.00  5.75) (p > 0.05). Through direct DNA sequencing, there were polymorphisms in XRCC1 and XRCC3 genes in regions of introns and exons. In XRCC1 gene, the variant allele frequencies for Arg194Trp polymorphism in Monte Alegre, Prainha and Alenquer populations were 12%, 13% and 7%, and for Arg399Gln, 28%, 30% and 32% respectively. In XRCC3 gene, the frequencies of the variant allele of Thr241Met polymorphism found in Monte Alegre, Prainha and Alenquer populations were, respectively, 28%, 13% and 33%. For GSTM1 gene, the frequencies obtained for the absence of this gene were 36%, 31% and 40%, respectively to Monte Alegre, Prainha and Alenquer populations. In general, the absence frequencies of GSTM1 gene and of allelic frequencies in XRCC1 and XRCC3 exons were statistically similar among the three municipalities and were in agreement with frequencies obtained in other studies with Brazilian populations. As a conclusion, among the populations studied, there was no increased incidence of DNA damage by exposure to uranium, which can be explained by the low radiation in these locations and that the allelic frequencies of polymorphisms found in the DNA repair genes XRCC1 and XRCC3, and the absence frequencies of GSTM1 gene did not differ from those in populations from other regions of Brazil. Thus, in the studied area, possibly there is no tendency to the development of cancer induced by exposure to uranium.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-17T19:53:49Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dornelles Assunção - 2016.pdf: 3136058 bytes, checksum: 7f229c7eb77bd6f11757f0eea88a5af2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-18T12:54:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dornelles Assunção - 2016.pdf: 3136058 bytes, checksum: 7f229c7eb77bd6f11757f0eea88a5af2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T12:54:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dornelles Assunção - 2016.pdf: 3136058 bytes, checksum: 7f229c7eb77bd6f11757f0eea88a5af2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The evaluation of DNA damage was carried out with the comet assay from blood samples of three bat species sampled at municipal parks of Goiania and Cerrado remnants, located in rural areas of the municipalities of Bela Vista and Urutaí, Goias state. The species sampled in the urban area were Artibeus lituratus, Artibeus planirostris and Platyrrhinus lineatus. In non-urban areas, only Artibeus planirostris was sampled. These frugivorous species are abundant and well adapted to different environments, including urban and agricultural areas. The remaining vegetation of the urban environment was very impacted and it was included in the most urbanized area of the city, with heavy traffic of vehicles, large concentration of buildings and high population density. Sampling in non-urban environments were held in Cerrado fragments in a rural area surrounded by pasture and agricultural activities. Thus, the DNA damage found in the urban environment bats were compared to verify whether there was significant variation among the parks, between species and if weight influenced the variation of the DNA damage. The DNA damage obtained for A. planirostris allowed to compare the urban and non-urban environment to identify in which of the environments this species presented higher DNA damages. The results showed that in the nonurban environment, the DNA damage was higher than in the urban environment being statistically significant. Moreover, in the urban environment, the increased DNA damage was associated with a reduction in area of the parks. In general, in the urban environment, the DNA damage may be linked indirectly to the edge effect and other environmental stressors, while in non-urban environment, higher levels of DNA damage may be related to pesticides used in the agricultural activities. / A avaliação do dano ao DNA em morcegos foi realizada com o ensaio cometa, a partir de amostras sanguíneas coletadas de 3 espécies capturadas em parques municipais de Goiânia e remanescentes de Cerrado situados na zona rural dos municípios de Bela Vista e Urutaí, ambos no Estado de Goiás. As espécies amostradas na área urbana de Goiânia foram Artibeus lituratus, Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus. Nas áreas não urbanas, apenas Artibeus planirostris foi amostrado. Estas espécies frugívoras são abundantes e bem adaptadas a diversos ambientes, incluindo o meio urbano e regiões destinadas a agricultura. Os fragmentos vegetais remanescentes amostrados no ambiente urbano estão bastante impactados e inseridos na região mais urbanizada da cidade, com tráfego intenso de veículos, grande concentração de edifícios e densidade populacional elevada. As amostragens em ambiente não urbano foram realizadas em fragmentos de Cerrado na área rural, cercados por pastagem e atividades agrícolas. Dessa forma, foi comparado o dano encontrado no DNA dos morcegos para verificar se no ambiente urbano o dano varia significativamente entre os locais, entre as espécies e se o peso teria influência nessa variação. O dano ao DNA da espécie A. planirostris foi comparado entre os ambientes urbano e não urbano, para identificar em qual dos ambientes havia maiores índices de dano. Os resultados demonstraram que no ambiente não urbano, o dano ao DNA foi mais elevado que no ambiente urbano, sendo estatisticamente significativo. Além disso, no ambiente urbano, o aumento no dano ao DNA está relacionado à redução na área dos parques. Dessa forma, no ambiente urbano, o dano ao DNA parece estar associado ao efeito de borda e outros fatores estressores típicos desse ambiente, enquanto no ambiente não urbano, os valores mais elevados de dano ao DNA podem estar relacionados aos agrotóxicos e pesticidas utilizados nas atividades agrícolas.

O consumo de frutas e verduras está relacionado com a promoção da saúde porque tem sido associado com a redução do risco de desenvolvimento de doenças crônicas como, por exemplo, câncer e doenças degenerativas e cardiovasculares. Dessa forma, o estudo dos efeitos biológicos desses alimentos tem ganhado atenção nos últimos anos. O piquiá (Caryocar villosum) é um fruto nativo da Amazônia e é rico em compostos antioxidantes como os compostos fenólicos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos genotóxicos e antigenotóxicos in vivo da polpa liofilizada do piquiá e também de seu extrato etanólico. Além disso, os compostos fitoquímicos presentes na polpa e no seu extrato foram quimicamente determinados. Ratos Wistar foram tratados por gavagem, durante 14 dias consecutivos, com três diferentes doses da polpa do piquiá (75, 150 ou 300 mg/kg p.c.) ou com seu extrato etanólico (75 mg/kg p.c.). No 14° dia, os animais receberam solução salina (NaCl 0,9%, i.p.) ou doxorrubicina (DXR, 15 mg/kg p.c., i.p.) e após 24 horas foram eutanasiados. A medula óssea e o sangue periférico foram usados no teste do micronúcleo (MN), e o fígado, rins e coração foram utilizados nos ensaios do cometa, nas análises bioquímicas das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e glutationa reduzida (GSH) e na avaliação da expressão de mRNA dos genes epóxido hidrolase (Ephx2) e proteína tumoral p53 (Tp53). A polpa do piquiá não apresentou efeito genotóxico nem mutagênico em nenhuma das doses avaliadas, demonstrou atividade antigenotóxica e ainda reduziu os níveis de TBARS induzidos pela DXR no coração. Efeitos opostos foram encontrados para o extrato etanólico da polpa do piquiá, por apresentar genotoxicidade, mas não mutagenicidade, e indução de TBARS no coração. Os níveis de mRNA do gene Ephx2 no rim e coração foram aumentados após o tratamento com a maior dose da polpa do piquiá, entretanto, no rim a menor dose diminuiu a transcrição desse gene induzida pela DXR. No fígado as doses de 75 e 300 mg/kg p.c. diminuíram os níveis de mRNA do gene Ephx2 induzidos pela DXR. A dose de 300 mg/kg p.c. da polpa diminuiu a expressão de mRNA do gene Tp53 nos grupos da associação piquiá + DXR no fígado, rim e coração. O extrato etanólico da polpa do piquiá modulou a expressão de mRNA do gene Ephx2 apenas no fígado, aumentando os níveis desse transcrito, enquanto que no coração houve diminuição da transcrição do gene Tp53. Foi encontrada uma diferença de composição fitoquímica entre a polpa liofilizada e seu extrato etanólico. O extrato apresentou 1,4x mais compostos fenólicos e 3x menos carotenoides quando comparado com a polpa. Além disso, o ácido gálico foi o composto fenólico predominante na polpa, enquanto que no extrato o fenol mais abundante foi o ácido elágico. A diferença dos efeitos biológicos entre a polpa liofilizada do piquiá e seu extrato etanólico pode ser devido à alteração da composição fitoquímica. / Fruit and vegetables intake has been related to the promotion of health because it has been associated to reduced risk of chronic diseases development such as cancer, and cardiovascular and degenerative diseases. Thus, the study of the biological effects of these foods has increased in recent years. Piquiá (Caryocar villosum) is a fruit native of the Amazon and it is rich in antioxidant compounds such as phenolic compounds. Therefore, the aim of this study was to evaluate the in vivo genotoxicity and antigenotoxicity effects of the piquiá lyophilized pulp fruit and its ethanolic extract. Moreover, the phytochemical characterization of pulp and extract was determined. Wistar rats were treated by gavage, for 14 days, with three doses of piquiá pulp (75, 150 or 300 mg/kg b.w.) or with its ethanolic extract (75 mg/kg b.w.). On 14th day, the animals received saline (0.9% i.p.) or doxorubicin (DXR, 15 mg/kg b.w.) and after 24 hours they were euthanized. Bone marrow and peripheral blood were used in micronucleus (MN) test, and the liver, kidney and heart were used in comet assay, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), reduced gluthatione (GSH), and in the evaluation of mRNA expression of epoxide hydrolase (Ephx2) and tumor protein p53 (Tp53) genes. The piquiá pulp was not genotoxic nor mutagenic, demonstrated antigenotoxic effects and reduced the TBARS levels induced by DXR in heart. The ethanolic extract had opposite effects, whereas it was genotoxic, but not mutagenic, and increased the TBARS levels in heart. Ephx2 mRNA levels in kidney and heart were increased after treatment with the higher dose of piquiá pulp, however, in kidney the lowest dose decreased the transcription of this gene induced by DXR. In liver, the 75 and 300 mg/kg b.w. doses of piquiá pulp decreased the Ephx2 mRNA levels induced by DXR. The piquiá pulp 300 mg/kg + DXR group, presented lower levels of Tp53 mRNA in liver, kidney and heart. The ethanolic extract of piquiá pulp modulated the mRNA Ephx2 expression only in the liver, increasing the levels of this transcript, while in the heart decreased the transcription of Tp53 gene. There was a difference on phytochemical composition between the pulp and its ethanolic extract. The extract presented 1.4-fold more phenolic compounds and 3-fold less carotenoids than piquiá pulp. Furthermore, gallic acid was the predominant phenol in the pulp, whereas in the ethanolic extract the most abundant phenol was the ellagic acid. The difference in the biological effects between piquiá pulp and is ethanolic extract may be due the change of the phytochemical composition.

O melanoma cutâneo maligno é uma lesão neoplásica originada nos melanócitos epidérmicos, sendo altamente invasiva e agressiva, com elevada taxa de mortalidade, cuja incidência vem aumentando nos últimos anos. O tratamento do melanoma é cirúrgico e os pacientes com metástase podem receber quimioterapia com cisplatina que ao formarem adutos com o DNA alteram o processo de replicação da célula cancerosa. Sugere-se que os sistemas de reparo do DNA tenham um papel importante na etiologia do melanoma (reparo deficiente) e no tratamento do mesmo (eficiente eliminação dos adutos). A identificação prévia da resposta dos pacientes com melanoma ao tratamento com cisplatina pode ser um indicador biológico importante na clínica oncológica. O presente trabalho teve como objetivo, a partir de linfócitos de sangue periférico de pacientes com melanoma e de controles, avaliar o dano no DNA antes e após a adição, in vitro, de cisplatina (10?M, 100?M e 250?M), além de estimar a capacidade de reparo do DNA, após a retirada da droga (1h, 2,5h e 5h). Foram utilizados os testes do micronúcleo (MN - dano basal) e do Cometa (dano basal, ação da cisplatina e reparo do DNA). A análise citogenética foi possível em 20 pacientes com melanoma (10 homens e 10 mulheres, média de 50,6 ± 5,9 anos) e 19 controles (9 homens e 10 mulheres, média de 49,9 ± 5,5 anos) que também responderam a um questionário sobre hábitos e tipos de exposição a fatores de risco ao melanoma. A frequência do dano basal pelo teste do MN e do Cometa em linfócitos de pacientes (MN = 1,2 ± 1,2 e Cometa = 59,3 ± 62,5) foi praticamente o dobro da observada nos controles (MN = 0,6 ± 1,0 e Cometa = 35,3 ± 18,6) embora a diferença entre os grupos, em ambos os testes, não tenha sido considerada estatisticamente significante (p=0,23 e p=0,85, respectivamente). O tratamento in vitro com cisplatina, em comparação com o dano basal, aumentou a frequência de Cometas nas três concentrações estudadas (10?M, 100?M e 250?M) tanto para os pacientes (65,50 ± 50,06, 72,74 ± 50,89 e 77,26 ± 44,16) quanto para os controles (66,53 ± 49,85, 66,53 ± 26,33 e 81,74 ± 43,12) diferença esta considerada significante somente para o grupo controle, nas três concentrações avaliadas (p=0,0175, p=0,0002, e p=0,0002, respectivamente). Quanto aos diferentes tempos de reparo (1h, 2,5h e 5h), após a retirada de cisplatina nas diferentes concentrações estudadas, verificou-se aumento na frequência média de Cometas tanto para os pacientes com melanoma (93,88 ± 33,7, 101,75 ± 35,7 e 99,31 ± 32,30) quanto para os controles (92,45 ± 38,4, 100,82± 38,8 e 100,81± 31,7), diferença que foi estatisticamente significante quando comparada ao dano basal observado nos pacientes (p<0,001) e nos controles (p<0,001). Resultados semelhantes foram observados quando comparados em conjunto os escores dos tempos de reparo com o escore obtido após tratamento com cisplatina nos pacientes (71,09 ± 48,2; p<=0,005) e nos controles (71,59 ± 40,5; p<=0,005). Os resultados obtidos parecem indicar um padrão de resposta semelhante em relação à cisplatina e ao reparo do DNA nos dois grupos de indivíduos avaliados. O período de incubação das células, após a retirada da cisplatina, bem como o número de indivíduos avaliados podem ter influenciado nos resultados obtidos. Por outro lado, a resposta observada nos linfócitos in vitro, pode não ser representativa do efeito in vivo da célula tumoral. Entretanto, a identificação de marcadores de resposta a tratamentos com quimioterápicos, a partir de linfócitos de sangue periférico pode ser uma estratégia de pesquisa importante na prática clínica, inclusive para o melanoma. / Cutaneous melanoma is a malignant tumor originated from epidermal melanocytes, highly invasive and aggressive, with high mortality, and incidence that has been increasing over the years. The treatment for melanoma is surgery and patients with metastasis may receive chemotherapy with cisplatin, that results in DNA adducts that alters the replication process in cancer cells. It is suggested that the DNA repair systems have an important role in the etiology of melanoma (risk due to deficient repair) and treatment efficiency (removal of DNA adducts can decrease the treatment results). The prior identification of the response of melanoma patients to treatment with cisplatin may be an important biological marker in clinical oncology. The aim of this study was to assess, in peripheral blood lymphocytes from melanoma patients and controls, the DNA damage before and after the addition of cisplatin (10?M, 100?M and 250?M), in vitro, and estimate the capacity of DNA repair after drug removal (1h, 2.5h and 5h). The micronucleus test (MN - basal DNA damage) and the Comet assay (basal DNA damage, action of cisplatin and DNA repair) were used for the evaluation. Cytogenetic analysis was performed in 20 melanoma patients (10 men and 10 women, average age 50.6 ± 5.9 years old) and 19 controls (9 men and 10 women, average age 49.9 ± 5.5 years old) who also answered a questionnaire on habits and types of exposure to risk factors for melanoma. The frequency of basal DNA damage by the MN test and the Comet assay in lymphocytes from patients (MN = 1.2 ± 1.2 and Comet = 59.3 ± 62.5) was nearly twice the observed in controls (MN = 0, 6 ± 1.0 and Comet = 35.3 ± 18.6), although the difference between the groups in both tests was not considered statistically significant (p = 0.23 and p = 0.85, respectively). The in vitro treatment with cisplatin, compared with the basal DNA damage, increased the frequency of Comets in the three studied concentrations (10?M, 100?M and 250?M) for patients (65.50 ± 50.06, 72.74 ± 50.89 and 77.26 ± 44.16) and for the controls (66.53 ± 49.85, 66.53 ± 26.33 and 81.74 ± 43.12) and the difference was statistically significant only for the control group, for all cisplatin concentrations (p = 0.0175, p = 0.0002 and p = 0.0002, respectively). Considering the different repair times (1h, 2.5h and 5h), after removal of cisplatin at different concentrations, there was an increase in the mean frequency of Comets for both melanoma patients (93.88 ± 33.7, 101.75 ± 35.7 and 99.31 ± 32.30) and for the controls (92.45 ± 38.4, 100.82 ± 38.8 and 100.81 ± 31.7), and the difference was statistically significant when the repair Comet score was compared to the basal DNA damage observed in patients (p <0.001) and controls (p <0.001). Similar results were observed when the Comet scores of repair times were compared to the Comet scores obtained after treatment with cisplatin in patients (71.09 ± 48.2, p <= 0.005) and controls (71.59 ± 40.5, p <= 0.005). The results seem to indicate a similar pattern of response to cisplatin and DNA repair in both groups of subjects evaluated. The period of incubation of the cells after cisplatin removal and the number of individuals studied may have influenced the results. The lymphocytes\' response, in vitro, to cisplatin may not be representative of the in vivo effect of tumor cell. However, the identification of markers of response to treatment with chemotherapy from peripheral blood lymphocytes may be an important research strategy in clinical practice, including melanoma.

Devido às características especiais as nanopartículas (10-9m) estão sendo utilizadas em uma ampla gama de produtos, porém é conhecido que a utilização dessas partículas podem causar efeitos biológicos adversos, aumentando a preocupação em relação à saúde e ao meio ambiente. Recentemente, as nanopartículas de prata (AgNPs) têm sido alvo de estudos genotóxicos e citotóxicos, sendo que ainda não existe um consenso acerca da relação entre tamanho e toxicidade dessas partículas. Assim, este trabalho avaliou a citotoxicidade e a genotoxicidade das AgNPs de 10 e 100 nm nas linhagens celulares CHO-K1 e CHO-XRS5, por meio do Ensaios de Viabilidade Celular, Sobrevivência Clonogênica, Teste do Micronúcleo, o Ensaio Cometa e Cinética do Ciclo Celular por Citometria de Fluxo. Em todos os ensaios, as células foram expostas por 24 h à diferentes concentrações de AgNPs (0,025 a 5,0 g/ml) e, as células não tratadas foram utilizadas como controle negativo. A concentração de 5,0 g/ml foi citotóxica nos ensaios de Viabilidade Celular e Sobrevivência Clonogênica, sendo excluída dos ensaios de genotoxicidade. De maneira geral, as células CHO-XRS5 apresentaram menor viabilidade e maior quantidade de danos no DNA do que as células CHO-K1. As AgNPs de 10 nm causaram maiores níveis de danos no DNA em ambas as linhagens e um aumento de células em subG1 logo após o tratamento na linhagem CHO-K1. Entretanto, no tempos 24 e 72 h após o tratamento foi verificada a maior toxicidade (células em subG1) das AgNPs de 100 nm quando comparadas com suas homólogas menores (10 nm). Assim, foi observado que as AgNPs de 10 nm apresentam efeito tóxico a curto prazo similar ou maior do que a mesma concentração de partículas de 100 nm. No entanto, os efeitos genotóxicos e citotóxicos de longo prazo das AgNPs de 100 nm foram maiores do que os da partículas de 10 nm para ambas as linhagens celulares, comprovando que a exposição às AgNPs maiores (100 nm) pode causar mais efeitos biológicos adversos do que suas homólogas menores (10 nm). / Due to their particular characteristics, nanoparticles (10-9m) are being used in a range of products. However, these particles can cause adverse biological effects and because of that, there is a great concern about the health and environmental risks related to the use of these particles. Recently, silver nanoparticles (AgNPs) have been used in a variety of cytotoxicity and genotoxicity studies, but there are still controversies regarding the association between the size and the toxicity of these particles. Thus, in this study, we aimed to evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of AgNPS (10 and 100 nm) in two different cell lines, CHO-K1 and CHO-XRS5, by performing Cell Viability assay (XTT), Clonogenic assay, Micronucleus test, Comet assay, as well as by investigating the Cell Cycle kinetics using the flow cytometry. For all the different assays, the cell cultures were exposed for 24 hours to different concentrations of AgNPs (0.025 to 5.0 g/ml) and the untreated cells were used as the negative controls. Since results from the Viability and Clonogenic assays indicated that the concentration of 5.0 g/ml was cytotoxic for both cell lines, this concentration was not included in the genotoxic assays. Our results indicated that the CHO-XRS5 cells presented a lower viability and higher levels of DNA damage compared to the CHO-K1 cells. The 10 nm-AgNPs induced greater levels of DNA damage than the 100 nm-particles in both cell lines and the former also led to a subG1 arrest soon after the treatment only in the CHO-K1 cell line. In contrast, results from all the other assays indicated that greater levels of toxicity were induced by the 100 nm-AgNPs when compared to the 10 nm-particles, both 24 and 72 h after the treatment. Thus, at the same concentration, the short-term effects of the 10 nm-AgNPs were equal to or more toxic than those of the 100 nm-particles. Nevertheless, both long-term genotoxicity and cytotoxicity induced by the 100 nm-AgNPs were greater than those induced by the 10 nm-particles for both cell lines, which suggests that the exposure to greater size particles (100 nm) can cause more adverse biological effects than the exposure to the smaller particles(10 nm).

Orientador: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Coorientador: Cintya Aparecida Christofolletti / Banca: José Augusto de Oliveira David / Banca: Paula Suares Rocha / Resumo: A vinhaça, um dos principais resíduos gerados na transformação da cana-de-açúcar em etanol, possui potencial poluidor, frente ao alto volume subproduzido e por suas características físicoquímicas. A contaminação de lagos e rios, por infiltração de resíduos dispostos no solo, como a vinhaça e fertilizantes, por exemplo, merece destaque. Com o intuito de amenizar tais efeitos, o tratamento prévio desses resíduos constitui uma alternativa viável para diminuir os impactos ao meio ambiente. Portanto, este estudo teve por objetivo verificar a efetividade na redução da toxicidade da vinhaça de cana-de-açúcar por meio da correção de seu pH para um valor neutro (7,0), pela adição de cal (CaO), avaliando o seu potencial tóxico em peixes (Oreochromis niloticus). As análises foram realizadas por meio do ensaio do cometa e teste do micronúcleo para avaliação do potencial genotóxico, e análise histopatológica das brânquias, órgão de contato direto com o meio aquático. Após exposição das tilápias às diluições de vinhaça quimicamente tratada com cal, houve mortalidade de 30% dos peixes na diluição de 10%; em ensaios anteriores com vinhaça não tratada, a mortalidade na mesma diluição foi de 100%. O pH neutro (7,0) não permaneceu estável ao longo do bioensaio. Em relação ao ensaio do cometa, foram obtidos valores de escore de danos e cometas classe 3 com diferenças significativas em relação ao controle negativo para todas as diluições, com exceção da diluição de 1%. Não houve diferenças significativas entre os valores de micronúcleo e anormalidades nucleares entre as diluições e o controle negativo; comparando esses resultados com os de ensaios anteriores com diluições de vinhaça não tratada, foi observada uma diminuição da quantidade de micronúcleos. Por meio de analise histopatológica de brânquias, foi observado um aumento nas células clorídricas, principalmente na diluição de 5% / Abstract: The vinasse, a major waste generated in the processing of sugarcane into etanol, has a polluter potential in front off the volume generated and its physiochemical features. Contamination of lakes and rivers by infiltration of waste disposed in the soil, such as vinasse and fertilizers, deserves atention. In order to mitigate these effects, the pretreatment of this waste is a viable alternative to reduce the environmental impacts. Despite many studies about vinasse, only a few investigates their toxic potential. Therefore, this study aimed to verify the effectiveness in reducing sugarcane vinasse toxicity by pH correction to a neutral value (7.0), by adding lime (CaO), assessing their potential toxicity in fish (Oreochromis niloticus). Analyses were performed using the comet assay and micronucleus test to assess the genotoxic potential, and histopathological analysis of gills, organ that has direct contact with water. After exposure of tilapia to vinasse dilutions chemically treated with lime, 30% of fish in the dilution of 10% died; in earlier bioassays with untreated vinasse, at the same dilution the mortality was 100%. The neutral pH (7.0) has not remained stable during the bioassay. Regarding the comet assay, score damage and class 3 comets had significant differences when compared to the negative control for all dilutions, except for the dilution of 1%. There were no significant differences on the values of micronuclei and nuclear abnormalities between dilutions and negative control; comparing these results with those obtained in previous bioassays, with untreated vinasse dilutions, a decrease was observed in the number of micronuclei. For histopathologic analysis in gills, a slight increase was observed in clorídricas cells number, especially in the dilution of 5%, possibly in response to the presence of zinc in the vinasse samples. Diferents types of histologic changes were observed. The epithelial detachment, the epithelium ... / Mestre

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / A pneumoconiose é uma das mais recorrentes doenças pulmonares ocupacionais em todo mundo, estando a asbestose, uma das doenças relacionadas ao asbesto, em crescente número. O asbesto corresponde a um conjunto heterogêneo de fibras natural minerais, muito utilizado desde a antiguidade, e seus efeitos nocivos sobre a saúde humana constatados em diversos países. A inalação destas fibras causa o desenvolvimento de fibrose intersticial pulmonar intensa, envolvendo reação inflamatória, produção de colágeno e formação de granuloma. Além disso, também, está associada com a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) no trato respiratório inferior, resultando em estresse oxidativo. A produção elevada e contínua de ERO ou sua inadequada remoção pode suprimir o sistema de defesa antioxidante e ocasionar danos em moléculas celulares importantes, como proteínas e DNA, que futuramente podem resultar em câncer. Esteestudo teve como objetivo avaliar alterações de parâmetros enzimáticos do estresse oxidativo e os danos genotóxicos decorrentes de exposição ao asbesto, em trabalhadores expostos e não-expostos, sendo os trabalhadores expostos, advindos de empresas que utilizam asbesto nos seus processos produtivos, localizadas na cidade do Rio de Janeiro, e os trabalhadores não expostos compostos de técnicos laboratoriais do Laboratório de Toxicologias do CESTEH / ENSP / FIOCRUZ. Para tanto, foram realizados exames físicos, radiográficos de tórax, espirometria e entrevista, com a finalidade de avaliar o grau de acometimento dos indivíduos e a evolução clínica dos sintomas. O teste de Ensaio Cometa e a determinação das atividades das enzimas Catalase (CAT) e Glutationa S-Transferase (GST) foram utilizados na avaliação dos danos genotóxicos e dos parâmetros enzimáticos do estresse oxidativo. Sendo assim, trabalhadores expostos apresentaram 79,8 por cento de alterações de função pulmonar e broncodilatação e 32,7 por cento foram diagnosticados com asbestose. A população exposta ao amianto apresentou diferença bastante significativa dos resultados de ensaio cometa (p<0,000) e da atividade da GST (p<0,01), em comparação com a população não exposta. Estes resultados demonstram a relação entre a exposição ao asbesto e alterações enzimáticas do estresse oxidativo e danos no DNA, caracterizando um risco para as populações expostas ao amianto e contribuindo com evidências toxicológicas na luta do banimento do asbesto no Brasil. / The pneumoconiosis is one of the most recurrent occupational lung disease worldwide, with asbestosis, a disease related to asbestos, in increasing numbers. The asbestos is a heterogeneous set of natural mineral fibers, widely used since antiquity, and its harmful effects on human health were found in many countries. The inhalation of these fibers causes the development of interstitial pulmonary fibrosis intense, involving inflammation, production of collagen and formation of granuloma. It is also associated with the formation of reactive oxygen species (ROS) in the lower respiratory tract, resulting in oxidative stress. The high and continuous production of ROS or their improper removal can remove the antioxidant defense system and cause damage to important cellular molecules such as proteins and DNA, which in future may result in cancer. This study aimed to evaluate changes in enzymatic parameters of oxidative stress and genotoxic damage caused by exposure to asbestos in exposed workers and non-exposed, and the exposed workers are from companies that use asbestos in their production processes, located in the city of Rio de Janeiro, and the workers not exposed to compound laboratory technicians of the Laboratory of Toxicology of CESTEH / ENSP / FIOCRUZ. Therefore, we performed physical examinations, chest radiography, spirometry and interview, in order to evaluate the degree of involvement of individuals and the clinical evolution of the symptoms. The Comet test and the determination of the activities of enzymes Catalase (CAT) and Glutathione S-Transferase (GST) were used to assess the genotoxic damage and enzymatic parameters of oxidative stress. Thus, workers exposed showed 79.8% of changes in lung function and bronchodilation and 32.7% were diagnosed with asbestosis. The population exposed to asbestos showed significant difference of the results of comet assay (p <0.000) and GST activity (p <0.01), comparing with the non exposed population. These results demonstrate the relationship between exposure to asbestos and enzymatic changes of oxidative stress and DNA damage, showing a risk for people exposed to asbestos and contributing with toxicological evidences into the fight against the use of asbestos in Brazil.

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos são tóxicos e/ou genotóxicos para diversos organismos marinhos e a toxicidade de muitos deles aumenta consideravelmente quando expostos à radiação ultravioleta artificial ou natural. O presente estudo visou avaliar a fototoxicidade do antraceno sobre a mortalidade e o dano ao DNA, segundo o ensaio cometa, de juvenis de pampos da espécie Trachinotus carolinus. Os peixes foram previamente expostos ao antraceno por 24 horas no escuro nas concentrações de 8, 16 e 32µg/L. e então transferidos para a água limpa e expostos à luz de lâmpadas fluorescentes ou à radiação ultravioleta B artificial (RUVB-35µW/cm2). Grupos controle (água e solvente) foram submetidos às mesmas condições experimentais. As exposições na ausência da radiação ultravioleta foram realizadas por períodos cumulativos de 10, 20 e 30h (5h/dia). Para as exposições à RUVB foram utilizados períodos desde 2 até 10h. Na ausência de radiação ultravioleta o antraceno não revelou ser tóxico, mas sua genotoxicidade, medida como danos ao DNA, apresenta resposta dose-dependente. A RUVB é letal para pampos. A exposição ao antraceno seguida de 2h de incidência de RUVB acelera a morte dos peixes em relação à mortalidade dos animais não contaminados. Este resultado revelou a fototoxicidade do antraceno para a espécie. O ensaio cometa pode ser considerado uma ferramenta sensível e útil para avaliar o efeito genotóxico de HPAs em peixes marinhos costeiros. / Polycyclic aromatic hydrocarbons are toxic and/or genotoxic to a variety of marine organisms and under solar or artificial ultraviolet radiation acute toxicity of many of them can be substantially enhanced. The aim of the present study was to examine the effect of the phototoxicity of anthracene on the mortality and damage to the DNA, assessed by the comet assay, of juveniles of Florida pompanos, Trachinotus carolinus. The fish were pre-contaminated in the dark by three concentrations of 8, 16 and 32 µg/L of anthracene for 24 hours then transferred to clean seawater to be exposed to fluorescent light or to artificial ultraviolet B radiation (UVB - 35µW/cm2). Control groups (water and ethanol) were carried out in the same experimental conditions. The exposures to fluorescent light were carried out in cumulative periods of 10, 20 and 30 hours (5h/day). The exposures to UVB were conducted during periods of 2 to 10 hours. In the absence of ultraviolet radiation, the anthracene did not prove to be toxic, but its genotoxicity, evaluated as damage caused to the DNA, proved to be dose dependent. The UVB is lethal to Florida pompanos. The exposure of fish to the anthracene following UVB exposure for 2 hours resulted in earlier and higher mortality when compared to uncontaminated fish. These results indicated that anthracene is phototoxic to the pompanos. The comet assay can be considered a sensitive tool to evaluate the genotoxic effect of PAHs in coastal marine fish.

O Ensaio Cometa (Eletroforese em Gel de Célula Única) foi aplicado ao estudo do potencial genotóxico da &#946;-naftoflavona (BNF) em exposição in vivo a eritrócitos de robalos, Centropomus parallelus. Condições específicas para o ensaio cometa de células de sangue de robalos foram estabelecidas com base em informações obtidas em literatura; e através de experimentos com exposição in vitro a diferentes concentrações de peróxido de hidrogênio, e com desenrolamento e eletroforese em diferentes alcalinidades e voltagens. Para avaliar o potencial genotóxico da BNF, os peixes foram expostos a 1ppm e 5ppm de BNF por 24, 48 e 72 horas. Controles foram mantidos em água do mar e em água do mar com DMSO, utilizado com solvente. Células de sangue foram coletadas, submetidas a ensaio cometa em versão alcalina de pH>13 e coradas por prata. Os cometas foram analisados por métodos visuais, incluindo Índice de Danos, Porcentagem de Danos e Freqüência de Danos, e através do sistema de análise de imagem ScionImage. Exposições in vitro de eritrócitos a H2O2 resultaram em relação dose-resposta em pH 12,6 e pH>13, indicando aplicabilidade do ensaio a células de sangue de robalos. Exposições in vivo a BNF indicaram tendência a maior Índice de Danos em grupos expostos comparados a controles, porém não ocorreu diferença significativa estatisticamente. A grande amplitude de variação dos dados, em controles e nos demais grupos experimentais, dificultou sua análise e interpretação. / Single Cell Gel Electrophoresis or Comet Assay was applied to study the genotoxic potential of exposure in vivo to &#946;-naphthoflavone (BNF) on erythrocytes of fat snook, Centropomus parallelus. Specific conditions for the comet assay on fat snook blood cells were established based on information obtained from literature together with results of experiments in which slides were exposed in vitro to different concentrations of hydrogen peroxide, submitted to unwinding and electrophoresis at different alkalinity and different voltages. To assess the genotoxic potential of BNF, fish were exposed in vivo to 1ppm and 5ppm of BNF for 24, 48 and 72 hours. Controls were exposed to sea water only and sea water plus DMSO, used as carrier. Blood cells were collected, submitted to alkaline version of comet assay at pH>13 and silver stained. Comets were analyzed by visual methods including Damage Index, Percentage of Damage and Frequency of Damage, and by ScionImage image analysis system. In vitro expositions of erythrocytes to H2O2 resulted in dose-response relationship, at pH 12,6 and pH>13, indicating applicability of the assay to blood cells of fat snook. In vivo exposure to BNF showed a slight tendency towards a higher Damage Index, though not statistically significant, in exposed groups as compared to controls. Wide amplitude of variations of data, in the controls as well as in other experimental groups, made their analysis and interpretation difficult.