Orientador : Bernardo Beiguelman / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T08:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_AntoniaPaulaMarquesde_M.pdf: 4012231 bytes, checksum: be9ab3bdeb500bb8ce25c36626ecdc69 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: No presente trabalho foi realizada a análise citogenética e o conjunto de testes para a detecção de erros metabólicos hereditários em 66 oligofrênicos que não manifestavam a síndrome de Down, a maioria dos quais com deficiência mental leve ou moderada (75,9%) e com pelo menos sete sinais clínicos comumente associados a aberrações cromossômicas, matriculados na Associação de Pais e Amigos dos Excepcionais de Araras,SP ou encaminhados ao ambulatórIo de Genética do Hospital de Clínicas da UNICAMP para elucidação diagnóstica. A proporção de pacientes com constituição cromossômica anômala foi alta (13,6%). Em 6 casos (9,1%), 2 eram portadores de cromossomos acessórios de origem não determinada e 4 apresentavam cromossomopatias estruturais, afetando os cromossomos 9, 15 e 18. Nos outros 3 casos (4,5%) foram diagnosticadas alterações dos cromossomos sexuais (45, X/46, X, i(Xq); 47,XXY; 48,XXXY). O sítio frágil do cromossomo X foi detectado em 3 (25%) dos 12 pacientes nos quais tal anomalia foi investigada (4,5% do total da amostra). Com relação à pesquisa dos erros inatos do metabolismo, apenas em relação a um caso (1,5%) tem-se a hipótese diagnóstica de mucopolissacaridose tipo VII, ainda não confirmada através de ensaio enzimático. Em outros 3 casos (3,0 %) foram feitos os diagnósticos das síndromes de Russel-Silver, Noooan e oro-facio-digital tipo III, respectivamente. Observou-se um predomínio de indivíduos do sexo masculino (razão de sexo=1,54) que, entretanto, não chegou a ser sIgnificativo, provavelmente devido ao tamanho amostral. Também não se observou diferença significativa com relação à distribuição dos pacientes segundo o QI (x2=2,06, 3g.I.;p>O,57) ou segundo a faixa etária (x2 =4,52; 4g.1. ;p>0,30). Contudo, foi observada uma correlação negativa significativa (r=-0,37) entre o QI e o número de sinais dismórficos. Além disso, o valor médio do QI entre os oligofrênicos portadores de anomalias cromossômicas e sítio frágil do cromossomo X (X=38,08; s(x)=17,97; n=12) é significativamente menor do que o obtido entre aqueles com cariótipo normal (X=51,04; s(x)=13,86; n=42) (t=2, 67:52g.1. :p<O,O5).A média do número de sinais dismórficos entre os deficientes mentais com aberrações cromossômicas e sítio frágil do cromossomo X (X=12,75:s(x)=3,57:n=12) não diferiu significativamente do valor obtido entre os pacientes com cariótipo normal. Além disso, a distribuição dos sinais dismórficos entre os indivíduos com ou sem anomalias do cariótipo, não mostrou desvios significativos. O interrogatório anamnéstico permitiu a constatação das seguintes condições associadas à deficiência mental baixo peso ao nascer (25%), prematuridade (11,5%), abortos ou natimortos (26,2%) cianose ao nascimento (28,8% de casos positivos e 37,9% de casos duvidosos), parto domiciliar (9,2%), recorrência familial de retardamento mental (53,3%). A idade materna média por ocasião do nascimento dos oIigofrênicos foi X=27,76; s(x)=7,22; n=63, não sendo observadas diferenças significativas quando tal variável era analisada de acordo com a presença ou a ausência de anomalias do cariótipo e o coeficiente médio de endocruzamento foi de 0,0028. A análise dos resultados permitiu as seguintes conclusões: 1. A etiologia genética da deficiência mental foi constatadas em 16 pacientes (24,2%), distribuídos da seguinte forma: aberrações cromossômicas (13,6%), sítio frágil do cromossomo X (4,5%), erros inatos do metabolismo (1,5%), síndromes monogênicas nas quais o efeito primário do gene é desconhecido (3,0%), quadro sindrômico de etiologia e aspectos genéticos não definidos (1,5%). 2. A frequência de sinais dismórficos detectados entre os oligofrênicos portadores de anomalias cromossômicas não difere significamente daquela apresentada pelos indivíduos com cariótipo normal. 3. O QI tende a diminuir à medida que aumenta o número de sinais dismórficos, o que está de acordo com a suposição de que, caso algum fator causal tenha atuado durante a embriogênese, afetando diversos campos de desenvolvimento e justificando uma exuberância nos referidos sinais, esse mesmo fator deve ter concorrido para afetar os mecanismos neurofisiológicos relacionados à determinação da inteligência. 4. A simples detecção de uma série de mal formações minor, não é suficiente, por vezes, para estabelecer um vínculo com algum fator etiológico específico. É preciso estabelecer a importância real dessas características através de uma análise formal baseada em critérios mais exatos e não subjetivos ou intuitivos. Desse modo, o número de sinais com real valor clínico pode até ser inferior a sete, mas também pode representar anomalias do desenvolvimento associadas a deficiência mental. Sendo assim, seria fundamental, para que possam ser obtidas inclusões definitivas, a aplicação da metodologia aqui utilizada também em amostras de oligofrênicos portadores de menos que sete sinais clínicos associados a aberrações cromossômicas e a comparação final dos resultados obtidos nas diferentes amostras. 5. A incidência dos casos de síndrome do cromossomo X frágil pode ser considerada elevada, o que fala a favor da necessidade de sua pesquisa sistemática nos estudos sobre o retardamento mental idiopático. 6. A presença de diversos fatores patogênicos do ambiente relaciona-se à ocorrência do retardamento mental na maior parte dos casos que constituiram a presente amostra, incluindo alguns portadores de anomalias dos cromossomos sexuais, as quais não costumam estar associadas a um comprometimento intelectual tão grave quanto o que foi constatado em tais pacientes. 7.O coeficiente de endocruzamento mais elevado do que o observado na população normal, reforça a hipótese formulada por Sena & Beiguelman (1985) de que entre os deficientes mentais portadores de sete ou mais sinais clínicoS associados a cromossomopatias, a etiologia genética da deficiência mental deve ter papel relevante. 8. A análise dos dados anamnésticos relacionados à de terminação da deficiência mental reforçam as constatações de outros autores de que grande parte dos fatores patogênicos do ambiente estão vinculados a condições sócio-econômicas e culturais desfavoráveis, as quais foram predominantes na amostra estudada. 9. Apenas em um caso foi feito o diagnóstico de um erro metabólico hereditário, o qual ainda não foi confirmado através de ensaio enzimático. Tal fato pode ser atribuído ao tamanho amostral insuficiente. Por outro lado, apesar de o conjunto de testes para a detectação de erros inatos do metabolismo representar um recurso diagnóstico de grande valia para a investigação inicial de tais entidades nosológicas, é fundamental a aquisição e a incorporação de outros exames tais como a cromatografia e a eletroforese, nas pesquisas sobre as etiologias da deficiência mental / Abstract: In this survey was performed a cytogenetic ,maIysis and a screening for inborn errors of metabolism among 66 mentally retarded patients without Down 's syndrome and that were selected on the basis of at least seven clinical signs known to be associated with chromosomal aberrations. The degree of mental handicap was predominantly mild or moderate (75,9%). There was a high frequence of chromosomal abnormalities (13,6%). Six patients (9,1%) were found to have autosome aberrations and three others (4,5%) had sex chromosome abnormalities. A fragile x screening was performed in 12 patients and was found to be positive in 3(4,5%). In only one patient the screening for inborn errors of metabolism detected an alteration that was sugested the mucopolysaccharidosis type VII, but it wasn't confirmed yet by enzymatic assay. Other diagnosis, in three cases, were Russel-Silver syndrome, oro-facio-digital syndrome and Noonan syndrome. Clinical and cytogenetic details and family studies are reported. / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

Orientador : Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T20:24:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Recco-Pimentel_ShirleiMaria_D.pdf: 2434016 bytes, checksum: 82d1489e982ef730dadf0f0829df382e (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Núcleos das três regiões das glândulas salivares larvais do sciarideo Bradysia spatitergum, em três fases do desenvolvimento pós-embrionário, foram analisadas por métodos cariométricos e citoquímicos.Os resultados indicaram que os métodos cariométricos de determinação de áreas e volumes nucleares não permitiram detectar aumentos em proteínas nucleares não-histônicas relacionados à atividade fisiológica característica de cada região glandular,ao longo do desenvolvimento. Por outro lado, houve diminuição nos tamanhos nucleares em pré-pupas, o que provavelmente encontra-se relacionado ao fenômeno de histólise glandular. Dados obtidos por citofotometria de varredura em preparados corados com "naphthol yellow S" a pH 2,7, indicaram que quantidades consideráveis de proteínas nucleares não-histônicas permanecem após tratamento por NaCl 3M nas três regiões das glândulas, nas três fases do desenvolvimento, proteínas estas portadoras de resíduos de lisina e de grupamentos hidrofóbicos. As variaçoes no conteúdo de proteínas nucleares não histônicas remanescentes ao tratamento com NaCl 3M,nas amostras ou entre elas, e o fato de se comportarem diferentemente frente ao tratamento por TCA, devem estar relacionados aos tipos e quantidades de proteínas estruturais e/ou reguladoras presentes nos núcleos, bem como ao tipo sua interação com o DNA ou com complexos DNA-histonas, de acordo com a atividade fisiológica de cada região,em cada fase pode estar relacionado / Abstract: Nuclei of the three salivary gland regions of the sciarid Bradysia spatitergum, under three phases of the post-embryonary development were analyzed by karyometric and cytochemical methods. The results indicated that the karyometric methods for determination of the nuclear areas and volumes did not allow the detection of increases in nuclear non-histone proteins in relation to physiological activity of each glandular region during development. On the other hand, there was a decrease in nuclear size in pre-pupal stages, which probably is related to glandular histolytic process. Data obtained after scanning cytophotometry of preparations stained with naphthol yellow S a pH 2,7, indicated that significant amounts of non-histone nuclear proteins remained in S1, S2 and S3 glandular regions in the three developmental phases, after 3M NaCl treatment. These proteins contained lysine residues and hydrophobic groups. The variation of non-histone nuclear protein content which remains after 3M NaCl treatment occurring in or between the samples and the fact that they behaved differently to TCA treatment, must be related to the different types and quantities of structural and/or regulatory proteins present in the nucleus. The type of interaction with the DNA or with DNA-histone complexes, as a function of the physiological activity in each glandular region under different developmental phase may also be involved. / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador : Benedicto de Campos Vidal / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T20:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pimentel_EdsonRosa_D.pdf: 8633645 bytes, checksum: 5daaeeebe7c497b60c7b6d3b1cf9cd04 (MD5) Previous issue date: 1983 / Resumo: Neste trabalho foram considerados alguns aspectos estruturais da fração rica em histona 'H IND. 5' (FR'H IND. 5') bem como a sua participação na estrutura da cromatina. Para isto foram empregados núcleos de eritrócitos de frango, dos quais se extraiu FR'H IND. 5' . Os métodos, tais como os processos extrativos, espectrofotometria de absorção, fluorometria, complexação com corantes, estudos de anisotropia e eleytroforese, permitiram determinar algumas características intrínsecas da FR'H IND. ', bem como diferenças em relação a histona 'H IND. 1' de timo de bezerro. Com a mesma finalidade, foram feitas observações ao microscópio de polarização do material nuclear tratado com NaCl 0,7M, e corado com azul de toluidina e sirius red. Ao microscópio eletrônico foram observados tanto complexos FR'H IND. 5'-DNA como material nuclear em NaCl 0,7M. As extrações levadas a efeito usando ácido perclórico 5%, NaCl 0,7M e NaCl 0,15M-HCl pH 1,85, mostraram que este último apresenta uma maior preferência para extrair FR'H IND. 5' do que os demais. As curvas espectrais de absorção de FR'H IND. 5' e de 'H IND. 1' de timo em meios ácidos e alcalino, não mostraram diferenças nos seus perfis. No entanto, foi relevante o fato de que estas histonas quando desnaturadas em meio básico apresentaram hipercromasia em relação às nativas, ocorrendo o inverso quando em meio ácido... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This thesis deals with structural aspects of an 'H IND. 5' histone rich fraction ('H IND. 5'RF), as well as its importance in the chromatin structure. 'H IND. 5'RF was extracted from chicken erythrocyte nuclei. Some intrinsic characteristics of 'H IND. 5'RF a few differenciating qualities in relation to the 'H IND. 1' histone of the calf thymus were determined by the following methods: an extractive process; absorption espectrophotometry; fluorometry; dye binding as measured by anisotropy and electrophoresis. These were complemented by observations, carried out with the polarization microscope, of chromatin treated with 0,7 NaCl, and stained with toluidine blue or sirius red. 'H IND. 5'RF-DNA complexes and nuclear material in 0,7M NaCl were studied with the electron microscope. Extraction were made using 5% perchloric acid, 0,7M NaCl and 0,15M NaCl at pH 1,85. This last solution was shown to extract 'H IND. 5'RF preferencially. No differences were detected in the spectral absorption profiles of 'H IND. 5'RF and calf thymus 'H IND. 1' in acid or in alkaline medium. Its is remarkable, however, that the histones, when denatured in a basic medium, were hyperchromic in relation to these some proteins in their native state. In acid medium, the opposite occurred. Fluorescence spectral curves of 'H IND. 5' RF and calf thymus 'H IND. 1' solutions indicated a more intense fluorescence for 'H IND. 5'RF than for 'H IND. 1'. The fluorescence of denatured 'H IND. 5'RF was markedly diminished in relation to that in the native condition. No important difference was noted in their spectral absorption profiles... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O alcoolismo é uma doença multifatorial que consiste numa interação de influências genéticas e ambientais, sendo um dos principais causadores de danos à saúde. Deste modo, é muito importante a realização de estudos que envolvam a investigação de danos provocados ao material genético pelo consumo excessivo de bebidas alcoólicas bem como daqueles que investiguem a susceptibilidade individual às doenças causadas pelo alcoolismo. As aberrações cromossômicas e os polimorfismos para enzimas de metabolização de xenobióticos são importantes instrumentos para estes estudos. Neste trabalho foram investigados o possível efeito clastogênico do álcool e também a possível associação entre a ocorrência dos genótipos nulos GSTM1 e GSTT1 e dos polimorfismos CYP1A1-MspI, CYP2D6-BstN1 e CYP2E1-PstI com o desenvolvimento de cirrose e pancreatite, além da freqüência da mutação TaqA1 do gene DRD2 em alcoolistas. Os indivíduos analisados foram alcoolistas com consumo diário de álcool >60g. Para a análise de AC foram analisados 26 alcoolistas e 22 indivíduos controles. Para o estudo dos polimorfismos genéticos a amostra compreendeu 124 alcoolistas crônicos e 124 controles. Os alcoolistas não-fumantes apresentaram um valor de IM maior do que os controles não-fumantes (p = 0,03). As freqüências de ACs nos alcoolistas não foram diferentes das do grupo controle. Não foram encontradas associações de risco entre os genótipos nulos dos genes GSTM1 e GSTT1, e os genótipos mutantes de CYP2D6 e CYP2E1, e o desenvolvimento de cirrose e pancreatite. O genótipo homozigoto mutante m2/m2 do gene CYP1A1 apresentou um risco significativo para o desenvolvimento de cirrose e pancratite em alcoolistas. Não foram encontradas freqüências significativas na ocorrência do alelo A1 do gene DRD2 em alcoolistas. / Alcoholism is a disease consisted of an interaction of genetic and environmental factors, being responsible for serious damage to human health. This way, studies that investigate damage caused by heavy consumption of alcohol as well those that investigate individual susceptibility originated by alcoholism are very important to our society. Chromosomal aberrations (CAs) and polymorphisms to xenobiotic metabolizing enzymes are important tools to these studies. In this work we investigated the possible clastogenic effect of alcohol and the possible association between the occurrence of null genotypes for GSTM1 and GSTT1 enzymes and polymorphisms CYP1A1-MspI, CYP2D6-BstN1 and CYP2E1-PstI with the development of cirrhosis and pancreatitis. Furthermore, we investigate the possible association of TaqA1 polymorphism for DRD2 neurotransmitter in alcoholic. Our sample consisted of alcoholic classified as heavy consumers (>60g alcohol/day). For CA assay we have analysed 26 alcoholic and 22 healthy individuals as control group. For the polymorphism study, 124 alcoholic and 124 healthy individuals were genotyped using PCR and RFLP techniques. Non-smokers alcoholics showed higher mitotic index than nonsmokers controls (p=0,03). Acs frequencies in alcoholics were similar to controls. No risk associations were found between null genotypes for GSTM1 and GSTT1 genes and mutant genotypes for CYP2D6 and CYP2E1 genes and the occurrence of cirrhosis or pancreatic disease. Homozygous mutant for CYP1A1 gene (m2/m2) presented significant risk to development of cirrhosis or pancreatic disease in alcoholic. No significant frequencies were found in the occurrence of A1 allele in alcoholic.

Este projeto teve como objetivos específicos , em uma amostra selecionada: (1) Identificar alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (2) Determinar a freqüência de alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (3) investigar a contribuição de alterações cromossômicas envolvendo a região dos telômeros para síndromes de malformações congênitas múltiplas e retardo mental de etiologia desconhecida e, (4) Caracterizar do ponto de vista molecular as regiões envolvidas em alterações cromossômicas subteloméricas, A seleção da amostra foi feita primeiramente através de um levantamento das fichas clínicas (com dados genéticos e de dismorfologia) de pacientes com um padrão de anomalias maiores e menores e atraso de desenvolvimento, que apresentavam um cariótipo de bandas com resultado normal. Foram excluídos da amostra aqueles pacientes que possuiam cariótipo com resultado alterado. Todos os pacientes já haviam sido submetidos a um exame clínico. Os critérios utilizados para incluir os pacientes na amostra foram atraso de desenvolvimento de grau leve a moderado e um padrão de pelo menos 5 características dismórficas distintas. Além disto, a maioria dos pacientes apresentava um retardo de crescimento pré e/ou pós-natal, e muitos apresentavam malformações maiores de órgãos. Entretanto, a presença de um ou ambos destes critérios não foi requerido como um achado obrigatório. Finalmente, foram incluídos neste estudo 102 pacientes. O estudo a que se propôs este projeto foi complementar as investigações citogenéticas normalmente realizadas em pacientes com quadro clínico indicativo de cromossomopatias. Todas as informações referentes a qualquer tipo de abordagem citogenética foram esclarecidas previamente. O material necessário para as investigações citogenéticas foi obtido à partir de 5 ml de punção venosa de sangue periférico com seringa heparinizada e 5 ml de punção venosa de sangue periférico com EDTA para extração e análise de DNA. As culturas de linfócitos foram realizadas segundo modificação da técnica de Moorhead et al. (1960). Após a obtenção de cromossomos metafásicos utilizamos o método de hibridização in situ por fluorescência (FISH) com 41 sondas de DNA específicas para as regiões subteloméricas. Encontramos 5 alterações cromossõmicas, sendo que duas destas foram consideradas variantes familiares sem influência no fenótipo. As alterações significantes incluem 1 deleção de novo (1p) e 2 duplicações de novo {8p e 9p). Concluímos que, dependendo do critério de seleção, a investigação de pacientes com retardo mental não explicado e um padrão de anomalias menores mostra rearranjos submicroscópicos desbalanceados que explicariam 3-8% do fenótipo; que a porcentagem de alterações cromossõmicas será maior se investigarmos famílias com mais de um membro afetado;e, que o exame pelo método de FISH é mais adequado do que a análise molecular por marcadores devido a sua capacidade de detectar duplicações e deleções. Os benefícios envolvidos na participação dos pacientes neste estudo estão relacionados com a possibilidade de um aconselhamento genético pelo qual os pacientes e/ou familiares com uma alteração cromossômica serão informados das conseqüências desta alteração. O aconselhamento genético, baseado no diagnóstico citogenético, procurará auxiliar os indivíduos afetados ou Indivíduos em risco a entenderem a natureza da doença genética, sua transmissão e as opções possíveis para eles no manejo da doença e no planejamento familiar.

Este projeto teve como objetivos específicos , em uma amostra selecionada: (1) Identificar alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (2) Determinar a freqüência de alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (3) investigar a contribuição de alterações cromossômicas envolvendo a região dos telômeros para síndromes de malformações congênitas múltiplas e retardo mental de etiologia desconhecida e, (4) Caracterizar do ponto de vista molecular as regiões envolvidas em alterações cromossômicas subteloméricas, A seleção da amostra foi feita primeiramente através de um levantamento das fichas clínicas (com dados genéticos e de dismorfologia) de pacientes com um padrão de anomalias maiores e menores e atraso de desenvolvimento, que apresentavam um cariótipo de bandas com resultado normal. Foram excluídos da amostra aqueles pacientes que possuiam cariótipo com resultado alterado. Todos os pacientes já haviam sido submetidos a um exame clínico. Os critérios utilizados para incluir os pacientes na amostra foram atraso de desenvolvimento de grau leve a moderado e um padrão de pelo menos 5 características dismórficas distintas. Além disto, a maioria dos pacientes apresentava um retardo de crescimento pré e/ou pós-natal, e muitos apresentavam malformações maiores de órgãos. Entretanto, a presença de um ou ambos destes critérios não foi requerido como um achado obrigatório. Finalmente, foram incluídos neste estudo 102 pacientes. O estudo a que se propôs este projeto foi complementar as investigações citogenéticas normalmente realizadas em pacientes com quadro clínico indicativo de cromossomopatias. Todas as informações referentes a qualquer tipo de abordagem citogenética foram esclarecidas previamente. O material necessário para as investigações citogenéticas foi obtido à partir de 5 ml de punção venosa de sangue periférico com seringa heparinizada e 5 ml de punção venosa de sangue periférico com EDTA para extração e análise de DNA. As culturas de linfócitos foram realizadas segundo modificação da técnica de Moorhead et al. (1960). Após a obtenção de cromossomos metafásicos utilizamos o método de hibridização in situ por fluorescência (FISH) com 41 sondas de DNA específicas para as regiões subteloméricas. Encontramos 5 alterações cromossõmicas, sendo que duas destas foram consideradas variantes familiares sem influência no fenótipo. As alterações significantes incluem 1 deleção de novo (1p) e 2 duplicações de novo {8p e 9p). Concluímos que, dependendo do critério de seleção, a investigação de pacientes com retardo mental não explicado e um padrão de anomalias menores mostra rearranjos submicroscópicos desbalanceados que explicariam 3-8% do fenótipo; que a porcentagem de alterações cromossõmicas será maior se investigarmos famílias com mais de um membro afetado;e, que o exame pelo método de FISH é mais adequado do que a análise molecular por marcadores devido a sua capacidade de detectar duplicações e deleções. Os benefícios envolvidos na participação dos pacientes neste estudo estão relacionados com a possibilidade de um aconselhamento genético pelo qual os pacientes e/ou familiares com uma alteração cromossômica serão informados das conseqüências desta alteração. O aconselhamento genético, baseado no diagnóstico citogenético, procurará auxiliar os indivíduos afetados ou Indivíduos em risco a entenderem a natureza da doença genética, sua transmissão e as opções possíveis para eles no manejo da doença e no planejamento familiar.

Este projeto teve como objetivos específicos , em uma amostra selecionada: (1) Identificar alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (2) Determinar a freqüência de alterações cromossômicas que envolvem a região dos telômeros; (3) investigar a contribuição de alterações cromossômicas envolvendo a região dos telômeros para síndromes de malformações congênitas múltiplas e retardo mental de etiologia desconhecida e, (4) Caracterizar do ponto de vista molecular as regiões envolvidas em alterações cromossômicas subteloméricas, A seleção da amostra foi feita primeiramente através de um levantamento das fichas clínicas (com dados genéticos e de dismorfologia) de pacientes com um padrão de anomalias maiores e menores e atraso de desenvolvimento, que apresentavam um cariótipo de bandas com resultado normal. Foram excluídos da amostra aqueles pacientes que possuiam cariótipo com resultado alterado. Todos os pacientes já haviam sido submetidos a um exame clínico. Os critérios utilizados para incluir os pacientes na amostra foram atraso de desenvolvimento de grau leve a moderado e um padrão de pelo menos 5 características dismórficas distintas. Além disto, a maioria dos pacientes apresentava um retardo de crescimento pré e/ou pós-natal, e muitos apresentavam malformações maiores de órgãos. Entretanto, a presença de um ou ambos destes critérios não foi requerido como um achado obrigatório. Finalmente, foram incluídos neste estudo 102 pacientes. O estudo a que se propôs este projeto foi complementar as investigações citogenéticas normalmente realizadas em pacientes com quadro clínico indicativo de cromossomopatias. Todas as informações referentes a qualquer tipo de abordagem citogenética foram esclarecidas previamente. O material necessário para as investigações citogenéticas foi obtido à partir de 5 ml de punção venosa de sangue periférico com seringa heparinizada e 5 ml de punção venosa de sangue periférico com EDTA para extração e análise de DNA. As culturas de linfócitos foram realizadas segundo modificação da técnica de Moorhead et al. (1960). Após a obtenção de cromossomos metafásicos utilizamos o método de hibridização in situ por fluorescência (FISH) com 41 sondas de DNA específicas para as regiões subteloméricas. Encontramos 5 alterações cromossõmicas, sendo que duas destas foram consideradas variantes familiares sem influência no fenótipo. As alterações significantes incluem 1 deleção de novo (1p) e 2 duplicações de novo {8p e 9p). Concluímos que, dependendo do critério de seleção, a investigação de pacientes com retardo mental não explicado e um padrão de anomalias menores mostra rearranjos submicroscópicos desbalanceados que explicariam 3-8% do fenótipo; que a porcentagem de alterações cromossõmicas será maior se investigarmos famílias com mais de um membro afetado;e, que o exame pelo método de FISH é mais adequado do que a análise molecular por marcadores devido a sua capacidade de detectar duplicações e deleções. Os benefícios envolvidos na participação dos pacientes neste estudo estão relacionados com a possibilidade de um aconselhamento genético pelo qual os pacientes e/ou familiares com uma alteração cromossômica serão informados das conseqüências desta alteração. O aconselhamento genético, baseado no diagnóstico citogenético, procurará auxiliar os indivíduos afetados ou Indivíduos em risco a entenderem a natureza da doença genética, sua transmissão e as opções possíveis para eles no manejo da doença e no planejamento familiar.

O alcoolismo é uma doença multifatorial que consiste numa interação de influências genéticas e ambientais, sendo um dos principais causadores de danos à saúde. Deste modo, é muito importante a realização de estudos que envolvam a investigação de danos provocados ao material genético pelo consumo excessivo de bebidas alcoólicas bem como daqueles que investiguem a susceptibilidade individual às doenças causadas pelo alcoolismo. As aberrações cromossômicas e os polimorfismos para enzimas de metabolização de xenobióticos são importantes instrumentos para estes estudos. Neste trabalho foram investigados o possível efeito clastogênico do álcool e também a possível associação entre a ocorrência dos genótipos nulos GSTM1 e GSTT1 e dos polimorfismos CYP1A1-MspI, CYP2D6-BstN1 e CYP2E1-PstI com o desenvolvimento de cirrose e pancreatite, além da freqüência da mutação TaqA1 do gene DRD2 em alcoolistas. Os indivíduos analisados foram alcoolistas com consumo diário de álcool >60g. Para a análise de AC foram analisados 26 alcoolistas e 22 indivíduos controles. Para o estudo dos polimorfismos genéticos a amostra compreendeu 124 alcoolistas crônicos e 124 controles. Os alcoolistas não-fumantes apresentaram um valor de IM maior do que os controles não-fumantes (p = 0,03). As freqüências de ACs nos alcoolistas não foram diferentes das do grupo controle. Não foram encontradas associações de risco entre os genótipos nulos dos genes GSTM1 e GSTT1, e os genótipos mutantes de CYP2D6 e CYP2E1, e o desenvolvimento de cirrose e pancreatite. O genótipo homozigoto mutante m2/m2 do gene CYP1A1 apresentou um risco significativo para o desenvolvimento de cirrose e pancratite em alcoolistas. Não foram encontradas freqüências significativas na ocorrência do alelo A1 do gene DRD2 em alcoolistas. / Alcoholism is a disease consisted of an interaction of genetic and environmental factors, being responsible for serious damage to human health. This way, studies that investigate damage caused by heavy consumption of alcohol as well those that investigate individual susceptibility originated by alcoholism are very important to our society. Chromosomal aberrations (CAs) and polymorphisms to xenobiotic metabolizing enzymes are important tools to these studies. In this work we investigated the possible clastogenic effect of alcohol and the possible association between the occurrence of null genotypes for GSTM1 and GSTT1 enzymes and polymorphisms CYP1A1-MspI, CYP2D6-BstN1 and CYP2E1-PstI with the development of cirrhosis and pancreatitis. Furthermore, we investigate the possible association of TaqA1 polymorphism for DRD2 neurotransmitter in alcoholic. Our sample consisted of alcoholic classified as heavy consumers (>60g alcohol/day). For CA assay we have analysed 26 alcoholic and 22 healthy individuals as control group. For the polymorphism study, 124 alcoholic and 124 healthy individuals were genotyped using PCR and RFLP techniques. Non-smokers alcoholics showed higher mitotic index than nonsmokers controls (p=0,03). Acs frequencies in alcoholics were similar to controls. No risk associations were found between null genotypes for GSTM1 and GSTT1 genes and mutant genotypes for CYP2D6 and CYP2E1 genes and the occurrence of cirrhosis or pancreatic disease. Homozygous mutant for CYP1A1 gene (m2/m2) presented significant risk to development of cirrhosis or pancreatic disease in alcoholic. No significant frequencies were found in the occurrence of A1 allele in alcoholic.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3103_1.pdf: 3373431 bytes, checksum: 722bde662388b2afebfa57b78933348f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Folatos são vitaminas do complexo B requeridas em processos biossintéticos e epigenéticos. Disfunções no seu metabolismo resultam em quebras cromossômicas, alterações na metilação do DNA e aneuploidia. Polimorfismos genéticos que alteram enzimas envolvidas neste metabolismo são considerados uma possível causa de não-disjunção cromossômica por hipometilação. A Síndrome de Turner (ST) é um importante modelo de investigação para os polimorfismos dos genes na rota do folato e a não-disjunção cromossômica somática devido a alta frequência de mosaicismo nestas pacientes. Neste trabalho, reportamos a prevalência das alterações cromossômicas e o seu potencial efeito fenotípico em pacientes com ST. Também investigamos uma possível associação entre os polimorfismos dos genes MTHFR, MS e TS, e o risco de não-disjunção somática na ST. Foram cariotipadas 110 pacientes, das quais 53 apresentaram alterações cromossômicas compatíveis com a ST. O cariótipo 45,X ocorreu em 56,6% dos casos. Clinicamente, as pacientes com ST apresentaram fenótipos distintos, entretanto estes distúrbios clínicos estavam de acordo com os relatos da literatura. A análise citogenética exerceu um importante papel no prognóstico e no direcionamento do tratamento adequado. As frequências dos alelos mutantes MTHFR 1298C, MS 2756G e repetição em tandem TS 2R não foram significativamente diferentes entre pacientes ST e controles. Contudo, no MTHFR 677T o alelo mutante apresentou-se mais frequente nos controles, reforçando assim a ausência de associação destas mutações com o risco da não-disjunção. A análise das frequências genotípicas mostrou que apenas o gene MS exibiu uma frequência maior do genótipo mutante recessivo GG nas portadoras da ST, porém esta diferença não foi associada a um aumento significativo no risco. No presente estudo não foi possível estabelecer uma associação entre os polimorfismos dos genes MTHFR, MS e TS, e o risco na não-disjunção somática na ST, demostrando que as mutações dos genes envolvidos na rota do folato podem não representar uma importante contribuição para os mecanismos de geração das aneuploidias

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8672_1.pdf: 5684115 bytes, checksum: 32cd11bfaad9311eee7efae7479152fb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A maioria das exposições humanas às radiações ionizantes envolve irradiação parcial do corpo humano. Com isso, o emprego da dosimetria citogenética, sem consideração desse aspecto, pode resultar na subestimação da dose absorvida pelo indivíduo. Neste contexto, essa pesquisa estudou parâmetros metodológicos da biodosimetria, tais como tempo de cultivo celular, tempo de adição de Colcemid e métodos de coloração citogenética, objetivando fornecer um planejamento de escolha metodológica que seja mais adequado ao tipo de irradiação (parcial ou de corpo inteiro). Para tanto, amostras de sangue de um doador saudável foram irradiadas com doses de 1,5; 3,0 e 4,0 Gy de raios-X. Os métodos de coloração, Giemsa, DAPI, bandeamento C e FISH, foram comparados em relação à eficácia na identificação de aberrações cromossômicas, a partir das amostras irradiadas com 1,5 e 3,0 Gy. A irradiação parcial do corpo foi simulada por meio da mistura de 70% da amostra de sangue irradiada com 4,0 Gy com 30% de sangue não irradiado. Os resultados obtidos nesta pesquisa indicaram que a comparação das freqüências de aberrações cromossômicas obtidas com tempo de cultura de 48 horas, com aquelas obtidas em culturas prolongadas de 72 horas, permite a distinção entre uma exposição parcial e de corpo inteiro, em função do atraso mitótico da população de linfócitos irradiados. Por outro lado, culturas com adição prévia de Colcemid e com duração de 72 horas, apesar de garantir que as células permaneçam em primeira divisão mitótica (M1), apresentaram cromossomos com elevada condensação. Em relação às técnicas de coloração, embora não tenham sido observadas diferenças significativas entre os resultados das estimativas de dose obtidas, contatou-se que o método de FISH e de bandeamento C são indicados para elucidação de imagens duvidosas