A Crotoxina, o principal componente do veneno de Crotalus durissus terrificus, vem sendo estudada desde 1938. É um complexo polipeptídico natural com grande potencial farmacológico especialmente por seu efeito antitumoral, propriedade que tem despertado o interesse para o diagnóstico e o tratamento do câncer. Entretanto, pouco se sabe sobre seu mecanismo de ação e os sítios com os quais interage em células tumorais. O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais freqüente no mundo e o mais comum entre as mulheres. Cerca de 30 a 60% dos tumores mamários apresentam expressão aumentada de receptores do fator de crescimento epidérmico (EGFR), uma proteína transmembrana que desencadeia a proliferação celular. A partir de dados da literatura mostrando que o efeito antitumoral da Crotoxina é mais potente em células que superexpressam EGFR, estabeleceu-se o objetivo deste trabalho: avaliar os efeitos citotóxicos desse polipeptídeo sobre os tumores de origem mamária MCF-7 (carcinoma humano) e Ehrlich (carcinoma murino ascítico) e realizar um estudo de interação molecular da Crotoxina com células de tumor de Ehrlich. Inicialmente, a Crotoxina foi radiomarcada com iodo-125 (125I-Crotoxina) e iodo-131 (131I-Crotoxina). Ensaios de saturação e competição foram realizados para caracterizar a interação da Crotoxina in vitro, enquanto que a interação in vivo foi avaliada através da biodistribuição e obtenção de imagens em tomografia por emissão de fóton único (SPECT) do composto radiomarcado em camundongos portadores de tumor de Ehrlich. Os resultados evidenciaram que o polipeptídeo apresentou um potente efeito citotóxico sobre as células de tumor de Ehrlich, com valor de DL50 in vitro (concentração do composto que produziu 50% de morte celular) próximo de 1 micromolar, mas não apresentou efeito significativo sobre a linhagem MCF-7. Alterações morfológicas nas células de tumor de Ehrlich tratadas com Crotoxina sugerem indução de morte celular programada. A interação da 125I-Crotoxina com as células de Ehrlich foi saturável com cerca de 70% de especificidade, com Kd= 24,98 nmol/L e Bmax= 16570 sítios/célula para sítios de baixa afinidade e com Kd= 0,06 nmol/L e Bmax=210 sítios/célula para sítios de alta afinidade. O polipeptídeo radiomarcado apresentou menor especificidade (cerca de 37%) para a linhagem MCF-7. O EGF competiu com 20% dos sítios específicos da 125I-Crotoxina indicando que Crotoxina e EGF compartilham parcialmente sítios específicos em células de Ehrlich. Através do estudo de biodistribuição, observou-se que houve captação significativa de 125I-Crotoxina no tumor (razão tumor/músculo esquelético de 18,55) no período de 3 horas após administração deste composto. As imagens SPECT também evidenciaram captação diferenciada pelo tumor, mostrando interação in vivo da 131I-Crotoxina com células de tumor de Ehrlich. O conjunto dos resultados sugere que Crotoxina apresenta potente efeito antitumoral sobre células de Ehrlich e que este efeito é devido pelo menos parcialmente à interação específica com sítios de alta e baixa afinidade. Os sítios de baixa afinidade se correlacionam com o EGFR e os de alta afinidade ainda necessitam de mais investigação para melhor caracterização. Estes resultados corroboram o potencial da Crotoxina como ferramenta para radiodiagnóstico capaz de diferenciar células tumorais. / Crotoxin, the main component of Crotalus durissus terrificus snake venom, has been studied since 1938. It is a natural polypeptidic complex with pharmacological potential because of its antitumoral properties wich has attracted great interest for diagnosis and therapy of oncological deseases. However, Crotoxin mechanism of action and sites of specific interaction on tumor cells are still misunderstood. Breast cancer is the second most frequent type in the world and the most common cancer in women. About 30 to 60% of mammary tumors overexpress epidermal growth factor receptor (EGFR), a transmembrane protein related to cell proliferation. Since literature has reported that Crotoxin antitumoral effect is more potent on cells with EGFR overexpression the objectives of this work were to evaluate Crotoxin cytotoxic effects on mammary tumor cells human breast carcinoma (MCF-7) and Ehrlich tumor cells (murine ascitics carcinoma), and to investigate the specific molecular interaction of Crotoxin on Ehrlich tumor cells. Inititally, Crotoxin was radiolabelled with iodine-125 (125I-Crotoxin) and iodine-131 (131I-Crotoxin). Saturation and competition assay were carried out to characterize Crotoxin in vitro interaction; Crotoxin biodistribution studies and single-photon emission computed tomography (SPECT) of mice bearing Ehrlich tumor have been evaluated to describe in vivo interaction. Our results showed that Crotoxin presented cytotoxic effect against Ehrlich with DL50 in vitro (concentration of compound which is lethal for 50% of cells) of about one micromolar, but did not present significative effect against MCF-7. Morphological alterations characteristic of apoptosis suggests programmed cell death. 125I-Crotoxin interaction with Ehrlich tumor cells was saturable with approximately 70% specificity, and presented Kd=24.98 nmol/L and Bmax=16,570 sites/cell for low affinity binding sites and Kd=0.06 nmol/L e Bmax=210 sites/cell high affinity binding sites; moreover, the radiolabeled polypeptide interaction showed low specificity toward to MCF-7 (37%). EGF reduced 20% of 125I-Crotoxin specific binding, so specific binding sites of Crotoxin on Ehrlich tumor cells partially overlap to EGFR. Crotoxin biodistribution studies showed significant uptake in the tumor paw (tumor/skeletal muscle ratio= 18.55), three hours after administration. SPECT imaging also showed tumor uptake confirming in vivo interaction with Ehrlich tumor cells. Crotoxin had an antitumoral effect on Ehrlich tumor cells and this action is due, at least partially, to the specific interaction with low and high affinity binding sites. Low affinity binding sites correlate EGFR and high affinity binding sites still need identification. These results confirm Crotoxin as a template for radiopharmaceutical design for cancer diagnosis and as a tool for cancer studies, increasing its biotechnological potential.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Para a otimização das doses de pacientes em tomografia computadorizada (TC), a legislação brasileira estabeleceu os níveis de referência em radiodiagnóstico (NRD) apenas em termos da Dose Média em Cortes Múltiplos (MSAD) em um paciente adulto típico como um parâmetro de controle de qualidade dos tomógrafos. A verificação da conformidade aos NRD pode ser feita por meio da medida da distribuição de dose resultante da varredura de TC. Uma análise da qualidade das varreduras por TC da região metropolitana de Belo Horizonte faz-se necessária através da realização de testes pertinentes descritos no Guia da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). A proposta deste trabalho foi investigar, em varredura de tórax, a variação da dose em TC. Para a medição do perfil de dose e o cálculo da MSAD, foram utilizados dosímetros termoluminescentes do tipo bastão de fluoreto de lítio e filmes radiocrômicos distribuídos em cilindros posicionados nas regiões periférica e central de um objeto simulador de polimetilmetacrilato. Através de procedimentos que são adotados internacionalmente, o Índice de Dose da Tomografia Computadorizada (CTDI) foi avaliado com a câmara de ionização tipo lápis, modelo 10X5-3CT. Os resultados de MSAD obtidos com as três diferentes técnicas dosimétricas foram comparados. Os dados obtidos permitem observar a variação do perfil de dose no interior do objeto simulador, sendo que a região periférica apresenta valores de dose maiores que a região central. A variação longitudinal pode ser observada e a dose máxima foi registrada na região da periferia do objeto simulador, no ponto central do eixo longitudinal. Os valores de MSAD calculados estão abaixo do nível de referência em radiodiagnóstico de 25 mGy estabelecido pela legislação brasileira para o abdômen. Os resultados contribuem para disseminar e otimizar o procedimento adequado da dosimetria e dos testes de controle de qualidade em TC, assim como efetuar uma análise crítica dos NRD. / For the optimization of the patient dose in computed tomography (CT), the Brazilian legislation only established the diagnostic reference levels (DRLs) in terms of Multiple Scan Average Dose (MSAD) in a typical adult as a parameter of quality control of CT scanners. Conformity to DRLs can be verified by measuring the dose distribution in CT scans in addition to the MSAD determination. An analysis of the quality of CT scans of the metropolitan region of Belo Horizonte is necessary by conducting pertinent tests that are presented in the National Agency of Sanitary Vigilance (ANVISA) Guide. The purpose of this study was to investigate, in chest scans, the variation of dose in CT. The dose profile and the MSAD were determined with lithium fluoride termoluminescent dosimeters (TLD-100 Rod) and radiochromic films distributed in cylinders positioned in peripheral and central regions of a phantom of polymethylmethacrylate. The Computed Tomography Dose Index (CTDI) was evaluated with a pencil ionization chamber model 10X5-3CT according to internationally adopted procedures. The MSAD results obtained with the three dosimetric techniques were compared. The obtained data allowed to observe the variation of the dose profile inside the phantom. The peripheral region showed higher dose values than the central region. The longitudinal variation can be observed and the maximum dose was recorded at the edges of the phantom, at the midpoint of the longitudinal axis. The MSAD results were in according to the DRL of 25 mGy established by Brazilian legislation for the abdomen. The results contribute to disseminate the proper procedure and to optimize the dosimetry and the tests of quality control in CT, as well as make a critical analysis of the DRLs.

A dose na paciente é uma consideração importante em mamografia e sua medida possibilita avaliar o risco para a paciente, associado à realização desse exame. Para o cálculo da Dose Glandular Média (DGM) que é definida como sendo a dose média absorvida no tecido glandular no interior de uma mama comprimida no exame de mamografia, esta é a grandeza que melhor caracteriza o risco carcinogênico induzido pela radiação ionizante.Valores da DGM podem ser obtidos por métodos que se baseiam na medida do kerma incidente (Ki), associado a fatores de conversão tabelados que dependem da camada semiredutoras, da composição glandular da mama e da espessura da mama comprimida.Visando estes aspectos foi desenvolvido um objeto teste com bolinhas de chumbo ou seja radiopacas inseridos no mesmo, que colocado no momento da irradiação acima da bandeja de compressão, juntamente com espessuras conhecidas de simuladores de mama, após a exposição e processamento da imagem possibilitou a medida da distância entre os pontos na imagem radiológica. Foram desenvolvidos retas de calibrações para que através destas retas possamos chegar ao valor real da espessura do simulador, que representa uma mama comprimida. A metodologia desenvolvida mostrou que através das retas de calibrações podemos chegar aos valores de espessuras conhecidas, portanto chegarmos ao valor de espessura da mama comprimida. / The dose in the patient is an important consideration in mammography and its measure enables evaluating the risk to patients, associated with this examination. For calculating the Average Glandular Dose (AGD) which is defined as the average absorbed dose in the glandular tissue within a compressed breast in a mammogram, this is the greatness that best characterizes the carcinogenic risk of radiation-induced ionizante.The DGM can be obtained by methods based on the measurement of the incident kerma (Ki) associated with the tabulated conversion factors that depend on the half-value layer of the composition of the glandular breast and breast thickness compressed. Aiming these aspects has baen developed a test object with radiopaque objects included in this test object placed upon irradiation above the tray compression, along with known thicknesses of simulators breast after exposure and image processing allowed the measurement of the distance between points in the radiological image. Calibration curve was developed that through these lines can reach the actual value of the thickness of the simulator, which represents a compressed breast. The methodology has shown that through the straight calibration can reach values of thicknesses known, so we get the amount of compressed breast thickness.

A radioterapia de feixe de intensidade modulada (IMRT) no seu modo dinâmico é uma forma de radioterapia tri-dimensional (3D), na qual modula-se um feixe de forma a obter-se a irradiação com campos que possuem perfil variável. Os campos são gerados por um sistema de otimização matemático e transformado em seqüências de movimento ou abertura de lâminas dos colimadores terciários de múltiplas folhas (MLC) ou feixe colimado helicoidal, reproduzindo a fluência de radiação adequada. No processo o operador atribui valores limitantes de dose ao alvo e aos órgãos de risco circunvizinhos para que o sistema de planejamento inverso realize a otimização possível. Após a aprovação do plano de tratamento o mesmo deve ser conferido, através de um controle de qualidade (CQ), onde são verificadas as doses que deverão ser administradas ao paciente, comprovando-se as doses obtidas e aprovadas no plano do sistema de planejamento (SPC). Para este controle os mesmos feixes e campos são medidos em termos de dose absorvida e perfis, através de dosimetria na qual comprova-se que não há erro físico ou dosimétrico no plano que irá tratar o paciente com diferença aceitável de até 5%, também utilizada como tolerância para a aprovação dos 460 casos avaliados nesta tese. Foram apresentados as metodologias para a aceitação no primeiro serviço a utilizá-la no Brasil e os testes de controle de qualidade de dois serviços de radioterapia, desde agosto de 2001 à maio de 2006 e no outro serviço de outubro de 2007 a maio de 2008, com controle de qualidade que permitiram os respectivos tratamentos clínicos com dados de 4 anos, ou seja, 460 casos com 3935 campos de tratamento verificados individualmente por dosimetria. Isto possibilitou o aperfeiçoamento da metodologia e garantia da qualidade nos tratamentos de IMRT dinâmico destes pacientes. / The intensity modulated radiation therapy (IMRT) is a type of radiation therapy using dynamic sliding window which modulated the beamlets of each field which are thus obtained as a variable profile. The multiple fields are obtained by mathematic optimization in special treatment planning system. In this way, the resulted field is generated by leaf sequencing using the multi-leaf collimator (MLC) or helicoidally beam. The optimization is an interactive process with operator and planning system where the dose prescription to target and dose limit for organ of risk are inserted to obtain the acceptable beam fluence and this process is named as inverse planning. The planning approved by physician should checked by means of dosimetry in order to assure the correct dose delivery; this action is the main task of a quality control (QC) program. The QC is performed by measurements of total absorbed dose and profile for each field planned for the patient. The acceptance level is 5% for total dose and was used for all 460 cases and 3935 fields analyzed between August 2001 to May 2006 at Albert Einstein Hospital and October 2007 to May 2008 at the Centro Infantil Dr. Boldrini. This work performs an analysis of the QC of treatments plans for all patients treated with IMRT. During four years the methodologies were frequently improved and upgradated for each tumor site and could thus be assured for the required quality of all treatments with dynamic IMRT.

O objetivo deste estudo clínico aleatório, boca dividida e duplo cego foi avaliar por meio de mensurações radiográficas lineares, o tratamento de defeitos infra-ósseos de 2 ou 3 paredes com retalho de espessura total reposto (RET) associado ou não à proteína derivada da matriz do esmalte (PME) após 24 meses. Foram avaliados 10 pacientes com periodontite crônica apresentando 2 ou mais defeitos infra-ósseos, totalizando 43 defeitos. As tomadas radiográficas foram realizadas antes do procedimento cirúrgico e após 24 meses. Foram confeccionados registros oclusais individualizados para padronização das radiografias. As películas radiográficas foram digitalizadas (500dpi/8bits) em um escaner (SprintScan 35 Plus scanner-Polaroid). O software AxioVision (version 3.0-Carl Zeiss) foi utilizado para mensurar as distâncias da junção esmalte-cemento (JEC) à crista óssea alveolar (CO), JEC ao fundo do defeito (FD) e o ângulo do defeito infra-ósseo. Uma escala milimétrica foi adquirida através da calibração de uma tela radiográfica de 1x1mm. Um examinador cego e calibrado realizou todas as mensurações radiográficas. A análise estatística utilizou nível de significância p=0,05. Após 24 meses, foi observada uma significante perda da crista óssea (JEC-CO) para PME (1,01mm; p=0,049), mas não para RET (0,14mm; p=0,622), no entanto, sem diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p=0,37). A redução da profundidade do defeito ósseo (JEC-FD) foi significante para RET (0,70mm; p=0,005), mas não para PME (-0,04mm; p=0,86), sem diferenças detectadas entre os grupos (p=0,87). Ambos PME (0,69; p=0,82) e RET (5,71; p=0,24) demonstraram um aumento nas medidas do ângulo do defeito, mas sem diferenças após 24 meses ou entre os grupos (p=0,35). Nesta amostra, a análise por meio de medidas radiográficas lineares computadorizadas não foi capaz de demonstrar superioridade do tratamento de defeitos infra-ósseos de 2 e 3 paredes com a aplicação da PME em comparação ao RET após 24 meses. / The aim of this randomized, double-blind, split-mouth clinical trial was evaluate, using linear radiographic measurements, infra-bony defects treated with enamel matrix protein (EMP) or repositioned flap (RF), after 24 months. Ten healthy patients with chronic periodontitis presenting 2 or more defects were selected, totalizing 43 defects. Radiographic data were collected just before surgery and after 24 months. An individualized film holder was used to take standardized radiographs. Images were digitized (500dpi/8bits) with the SprintScan 35 Plus scanner (Polaroid). The AxioVision (version 3.0) software (Carl Zeiss) was used to measure the distances from the cemento-enamel junction (CEJ) to the alveolar crest (AC), CEJ to the bottom of the defect (BD) and infra-bony defect angle. A milimetric scale was achieved after calibration with a 1x1mm grid. A blind calibrated examiner performed all radiographic measurements. Statistical analysis used a level of significance of p=0,05. After 24 months, a significant crestal bone loss (CEJ-AC) was observed for EMP (1,01mm; p=0,049) but not for RF (0,14mm; p=0,622), however, no differences were detected between groups (p=0,37). Reduction of the bone defect depth (CEJBD) was significant for RF (0,70mm; p=0,005) but not for EMP (-0,04mm; p=0,86), while no differences were detected between them (p=0,87). Both EMP (0,69; p=0,82) and RF (5,71; p=0,24) showed an improvement in defect angle measurements but no significant differences were observed after 24 months or between them (p=0,35). In this sample, the linear radiographic analysis was not able to demonstrate the superiority of EMP treated infra-bony defects when compared to RF alone after 24 months.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-06-20T21:04:05Z No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T21:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Toxoplasma gondii, which causes toxoplasmosis, is an intracellular protozoan that has several transmission routes, among them the transfusion. Objective: To investigate by serological and molecular methods the T. gondii infection in blood donors to assess the risk of transmission via transfusion. Methods: We selected 750 individuals able to donate blood. These individuals were submitted to an interview about their lifestyle habits and a collection of peripheral blood. The immunosorbent assay (ELISA) was used to investigate the presence of anti-T. gondii IgM and IgG classes, and the Nested PCR and qQPCR, the parasitaemia. Positive samples in the molecular methods were submitted for genotyping by the Multilocus Nested PCR RFLP method. Donors with positive molecular result and no positive serology were recalled to investigate seroconversion by ELISA and Indirect Immunofluorescence (IIF). In addition, recipients of blood components with molecular suspected parasitemia were screened. Of these, aliquots were separated from peripheral blood prior to transfusion and after transfusion (± 20 days), which were also analyzed by serological methods (ELISA and IIF) and molecular (PCR, qPCR Mulitplex nested PCR and RFLP). Results: Three hundred and fifty-seven (47.6%) donors had positive result and 393 (52.4%) showed no positive result for the presence of anti-T. gondii IgG class. Twenty-seven (3,6%) showed positive result for IgM and 723 (96.4%) non-reactive. The variables associated with infection by T. gondii were: advanced age (P < 0.0001), consumption of raw milk (P = 0.001), consumption of raw and underare beef and pork meat (P = 0.003), to reside in the countryside (P = 0.004), frequent presence of mechanical vectors in the residence (cockroach, mouse and fly P = 0.02; mice, P = 0.03), lower education (1st grade incomplete, P <0.0001 and 1st grade complete, P = 0.002) and low family income (P = 0.002). No sample was positive by qPCR, but 40 (11%) were positive by Nested PCR and positive serology. However, these samples did not show amplification when undergoing to genotyping. The four cases screened did not show positive results to molecular analysis and no recalled donor presented seroconversion. Conclusion: We concluded that the studied population of blood donors is exposed to various risk factors associated with infection by T. gondii, and it is likely that the high frequency of anti-T. gondii IgG class found in this study is related to this exposure. The results show that there is no molecular evidence of parasitaemia in the studied donors, thus the risk of transmission of this infection via blood transfusion is low or zero in this region. In addition, the failure of genotyping and the non-occurrence of seroconversion of reanalyzed donors suggest that the positivity found in some samples analyzed by Nested PCR, were related to false-positive results. / Introdução: Toxoplasma gondii, causador da toxoplasmose, é um protozoário intracelular que apresenta várias vias de transmissão, dentre elas a transfusional. Objetivo: Investigar por métodos sorológicos e moleculares, a infecção por T. gondii em doadores de sangue para avaliar o risco de transmissão via transfusional. Casuística e métodos: Foram selecionados 750 indivíduos aptos à doação de sangue. Estes indivíduos foram submetidos a uma entrevista sobre seus hábitos de vida e a uma coleta de sangue periférico. Com o ensaio imunoenzimático (ELISA) foi investigada a presença de anticorpos anti-T. gondii das classes IgM e IgG, e por Nested PCR e qPCR a parasitemia. As amostras positivas nos métodos moleculares foram submetidas à genotipagem pelo método Multilocus Nested PCR RFLP. Os doadores com resultados moleculares positivos e sorologias não reagentes foram reconvocados para investigar a soroconversão por ELISA e imunofluorescência indireta (IFI). Além destes, os receptores dos hemocomponentes com suspeita molecular de parasitemia foram rastreados. Destes, foram separadas alíquotas de sangue periférico, antes da transfusão e após a transfusão (±20 dias), as quais também foram analisadas pelos métodos sorológicos (ELISA e IFI) e moleculares (Nested PCR, qPCR e Mulitplex Nested PCR RFLP). Resultados: Trezentos e cinquenta e sete (47,6%) doadores apresentaram resultado reagente e 393 (52,4%) apresentaram resultado não reagente para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG. Vinte e sete (3,6%) apresentaram resultado reagente para IgM e 723 (96,4%) não reagente. As variáveis associadas a infecção por T. gondii foram: média de idade avançada (P < 0,0001), consumo de leite cru (P = 0,001), consumo de carne crua e mal passada de bovino e suíno (P = 0,003), residir na zona rural (P = 0,004), presença frequente de vetores mecânicos na residência (barata, rato e mosca P = 0,02; ratos, P = 0,03), menor grau de escolaridade (1º grau incompleto, P < 0,0001 e 1º grau completo, P = 0,002) e a baixa renda familiar (P = 0,002). Nenhuma amostra foi positiva pela qPCR, mas 40 (11%) apresentaram resultado positivo pela Nested PCR e sorologia reagente. Entretanto, estas amostras ao serem submetidas a genotipagem, não apresentaram amplificações. Os quatro casos rastreados também não apresentaram resultados positivos nas análises moleculares e nenhum doador reconvocado apresentou soroconversão. Conclusão: Concluímos que a população de doadores de sangue estudada está exposta a vários fatores de riscos associados a infecção por T. gondii e, é provável que a elevada frequência de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG encontrada neste trabalho esteja relacionada a esta exposição. Os resultados demonstram que não há evidências moleculares de parasitemia nos doadores estudados, portanto o risco de transmissão desta infecção via transfusional é baixo ou nulo para esta região. Além disto, o insucesso da genotipagem e a não ocorrência de soroconversão dos doadores reanalisados sugerem que a positividade, encontrada em algumas amostras analisadas por Nested PCR, tratavam-se de resultados falso-positivos.

A sífilis é uma doença infecciosa, cujo agente etiológico é o Treponema pallidum. Pode ser transmitida sexualmente ou verticalmente, via placenta. Seus estágios variam entre sífilis primária, sífilis secundária, sífilis latente e sífilis congênita. Dentre os diagnósticos mais eficazes, encontram-se os testes sorológicos, porém os falsos positivos e falsos negativos no estágio primário levam à procura de uma forma mais eficaz de se determinar, precocemente, a doença. Além disso, por várias razões, nem sempre o profissional clínico suspeita das lesões presentes na mucosa oral, cogitando de outras hipóteses diagnósticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar imuno-histoquimicamente e histoquimicamente lesões bucais biopsiadas cujo aspecto histológico levou à suspeita de sífilis, buscando identificar os microorganismos, bem como correlacionar o quadro sorológico quando positivo. Para o estudo foram incluídas 34 lesões suspeitas de sífilis, que foram submetidas à reação imuno-histoquímica com o anticorpo anti-treponema e técnica histoquímica de coloração pela prata. Dos 34 casos avaliados 13 foram positivos para o anticorpo anti-treponema, todos posteriormente diagnosticados como sífilis secundária, com positividade sorológica, exceto por um caso em que a sorologia não foi realizada. Quando se comparou os métodos de diagnóstico, a técnica de coloração por prata obteve sensibilidade de 46,15% e a de imuno-histoquímica foi de 92,3%. Os aspectos histológicos variaram em um grande número de achados, dentre eles: intensa exocitose, infiltrado inflamatório predominantemente plasmocitário (justaepitelial e perivascular), áreas de ulceração, epitélio paraqueratinizado, edema, espongiose e hiperplasia epitelial. A marcação imuno-histoquímica dos treponemas foi, principalmente, epitelial (61,5%) e esse método se mostrou um meio de diagnóstico rápido, simples e eficiente no diagnóstico de lesões orais de Sífilis. / Syphilis is an infectious disease, whose etiologic agent is Treponema pallidum. It can be transmitted sexually or vertically via the placenta. Its stages include primary syphilis, secondary syphilis, latent syphilis and congenital syphilis. Among the diagnoses most effective are the serological tests, but false positives and false negatives in the primary stage lead to demand for a more effective way to determine the disease earlier. In addition, for various reasons, not always the professional clinical suspicion of lesions present in the oral mucosa, thinking in other possible diagnoses. The objective of this study was to identify microorganisms and set the best way forward to a diagnostic framework confirmed positive serology. The results for syphilis lesions in the oral mucosa corresponded to 13 cases, all of secondary iinjuries,with positive serology for syphilis and in only one of them serology had not been held. In a comparison of diagnostic methods, the technique of silver staining achieved sensitivity of 46.15% and immunohistochemistry was 92.3%. The histological features varied in a large number of findings, including: intense exocytosis, inflammatory infiltrate, predominantly plasmacytic (banda-like and infiltrate perivascular), areas of ulceration, parakeratinized epithelium, edema, spongiosis and epithelial hyperplasia. The immunohistochemical staining of treponemes was mainly epithelial (61.5%) and this method was a rapid, simple and efficient means in the diagnosis of oral lesions of syphilis.

A raiva é uma encefalomielite aguda causada por um vírus da ordem Mononegavirales, família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus e espécie Rabies virus (RABV). É um vírus RNA de fita simples, senso negativo que acomete todas as espécies de mamíferos. Seu diagnóstico é obtido de modo definitivo por técnicas laboratoriais. A imunofluorescência direta (IFD) é uma prova de triagem rápida, considerada padrão ouro pela OMS e OIE, pois possui alta sensibilidade e especificidade diagnóstica. Esta técnica utiliza como teste confirmatório o isolamento viral em camundongos (IVC) ou em cultura de células (IVCC). Uma vez que o RABV não infecta todas as estruturas do sistema nervoso central (SNC) de modo uniforme, a detecção deste agente pode ter resultados variáveis. Algumas situações exigem o desenvolvimento e implantação de metodologias alternativas, tais como transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) e imunohistoquímica (IHQ), que possuem vantagens e apresentaram resultados bastante promissores. Para tanto, foram utilizadas amostras de SNC[tálamo, córtex, hipocampo, cerebelo, tronco encefálico (bulbo, ponte e mesencéfalo) e medula cervical]de 127 bovinos provenientes da Seção de Diagnóstico da Raiva do Instituto Pasteur, durante o período de março de 2015 a abril de 2016. As diferentes regiões do SNC dos animais foram identificadas e alíquotas foram separadas para a realização das técnicas de identificação viral, totalizando 689 fragmentos. A presença viral foi observada pela IFD e confirmada tanto pelo IVC quanto pelo IVCC. A distribuição do vírus pelas diferentes porções do SNC foi observada pelas técnicas de IFD, IHQ e RT-PCR para detecção do gene N em 40 animais que foram considerados positivos. Os 40 bovinos positivos na IFD confirmaram sua positividade na IHQ e IVC, apresentando concordância de 100% dos resultados. Entretanto houve diferença em relação aos resultados dos isolamentos virais, uma vez que, dos 38 animais positivos que foram submetidosaambas as técnicas, três foram negativos para a presença do RABV no IVCC, indicando uma concordância de 92,1%, (3538) quando comparado ao IVC. Em relação às técnicas moleculares houve diferenças, a RT-PCR apresentou positividade de 100% (4040), enquanto que a RT-qPCR observou-se que 97,5% (39/40) dos bovinos foram positivos. Na IFD, de modo geral, não houve disparidade entre os fragmentos em relação à positividade, porém ocorreu diferença quando se analisou a intensidade de fluorescência entre os fragmentos. Quando comparadas, a IHQ e a IFD apresentaram resultados semelhantes, embora a IHQ tenha apresentado positividade em 100% fragmentos (209209) e a IFD em 99,51% dos fragmentos (205206). Conclui-se, pelos resultados obtidos, diferenças na intensidade da distribuição viral e na concentração de RNA viral nas diferentes porções do SNC (padrões de neuroinvasividade) em bovinos; fato este que poderia interferir nos resultados obtidos no diagnóstico de rotina da raiva. / Rabies is an acute encephalomyelitis caused by a virus belonging to the Mononegavirales order, Rhabdoviridae family, Lyssavirus genus and Rabies virus (RABV) species. It is a single-stranded RNA virus, negative sense that affects all species of mammals. The definitively diagnosis is obtained by laboratory techniques. Direct fluorescent antibody test (dFAT) is a rapid screening, considered the gold standard by WHO and OIE, as it has high diagnostic sensitivity and specificity. However, it´s recommended the mouse inoculation test (MIT) or rabies tissue culture infection test (RTCIT) as a confirmatory test. Once RABV does not infect all central nervous system (CNS) structures uniformly, the detection of this agent may have varying results Some situations require the development and implementation of alternative methods such as RT-PCR, RT-qPCR and immunohistochemistry (IHC), which have advantages and showed very promising results. Therefore, CNS structures [thalamus, cortex, hippocampus, cerebellum, brainstem (medulla, pons and midbrain) and cervical cord] from 127 cattle were selected from the Rabies Diagnostics Section of the Instituto Pasteur during the period March 2015 to April 2016. The different CNS structures were identified and aliquots were separated for carrying out the viral identification techniques, totalizing 689 structures. The viral presence was observed by dFAT and confirmed by both the MIT and the RTCIT. The distribution of the virus by different portions of the CNS was observed by dFAT, IHC and RT-PCR for detection of the N gene in 40 animals considered positive. The 40 positive cattle in the dFAT confirmed their positivity on IHC and MIT, with agreement of 100% of the results. However there was a difference from the viral isolation since the 38 positive animals tested in both techniques, three were negative for the presence of RABV in RTCIT indicating an agreement of 92.1% (35/38) when compared to MIT. The dFAT, in general, showed no disparity among the fragments relative to their positivity, however, a difference was observed when analyzing the fluorescence intensity between the fragments. When compared IHC and dFAT presented similar results, although the IHC has presented a 100% positivity in the fragments (209/209) and 99.51% in dFAT (205/206).Regarding the molecular techniques, RT-PCR showed positivity of 100% (40/40), meanwhile RT-qPCR showed 97,5% (39/40) among the positive animals studied. In conclusion, the results suggest that there is variability in the intensity of virus distribution and in the virus concentration in different parts of the CNS (neuroinvasiveness patterns) in cattle. This fact could affect the results obtained in the diagnosis of rabies routine.

A radioterapia de feixe de intensidade modulada (IMRT) no seu modo dinâmico é uma forma de radioterapia tri-dimensional (3D), na qual modula-se um feixe de forma a obter-se a irradiação com campos que possuem perfil variável. Os campos são gerados por um sistema de otimização matemático e transformado em seqüências de movimento ou abertura de lâminas dos colimadores terciários de múltiplas folhas (MLC) ou feixe colimado helicoidal, reproduzindo a fluência de radiação adequada. No processo o operador atribui valores limitantes de dose ao alvo e aos órgãos de risco circunvizinhos para que o sistema de planejamento inverso realize a otimização possível. Após a aprovação do plano de tratamento o mesmo deve ser conferido, através de um controle de qualidade (CQ), onde são verificadas as doses que deverão ser administradas ao paciente, comprovando-se as doses obtidas e aprovadas no plano do sistema de planejamento (SPC). Para este controle os mesmos feixes e campos são medidos em termos de dose absorvida e perfis, através de dosimetria na qual comprova-se que não há erro físico ou dosimétrico no plano que irá tratar o paciente com diferença aceitável de até 5%, também utilizada como tolerância para a aprovação dos 460 casos avaliados nesta tese. Foram apresentados as metodologias para a aceitação no primeiro serviço a utilizá-la no Brasil e os testes de controle de qualidade de dois serviços de radioterapia, desde agosto de 2001 à maio de 2006 e no outro serviço de outubro de 2007 a maio de 2008, com controle de qualidade que permitiram os respectivos tratamentos clínicos com dados de 4 anos, ou seja, 460 casos com 3935 campos de tratamento verificados individualmente por dosimetria. Isto possibilitou o aperfeiçoamento da metodologia e garantia da qualidade nos tratamentos de IMRT dinâmico destes pacientes. / The intensity modulated radiation therapy (IMRT) is a type of radiation therapy using dynamic sliding window which modulated the beamlets of each field which are thus obtained as a variable profile. The multiple fields are obtained by mathematic optimization in special treatment planning system. In this way, the resulted field is generated by leaf sequencing using the multi-leaf collimator (MLC) or helicoidally beam. The optimization is an interactive process with operator and planning system where the dose prescription to target and dose limit for organ of risk are inserted to obtain the acceptable beam fluence and this process is named as inverse planning. The planning approved by physician should checked by means of dosimetry in order to assure the correct dose delivery; this action is the main task of a quality control (QC) program. The QC is performed by measurements of total absorbed dose and profile for each field planned for the patient. The acceptance level is 5% for total dose and was used for all 460 cases and 3935 fields analyzed between August 2001 to May 2006 at Albert Einstein Hospital and October 2007 to May 2008 at the Centro Infantil Dr. Boldrini. This work performs an analysis of the QC of treatments plans for all patients treated with IMRT. During four years the methodologies were frequently improved and upgradated for each tumor site and could thus be assured for the required quality of all treatments with dynamic IMRT.

As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) são doenças clonais, que se originam em células hemopoéticas totipotentes, com distúrbio na proliferação e perda da maturação celular gerando hipercelularidade na medula óssea (MO) e citopenias no sangue periférico (SP). As SMD ocorrem predominantemente em pacientes mais vellhos e estão associadas com um alto risco de progressão para leucemia mielóide aguda (LMA). A etiologia das SMD é deconhecida na maioria dos casos (de novo), porém 10% das SMD estão associadas ao uso de agentes xenobioticos, como os agentes antineoplásicos e solventes orgânicos (SMD secundária). Os pacientes com SMD apresentam diferente evolução clínica, embora todos sejam incuráveis. Alguns pacientes podem viver por uma década com apenas uma anemia enquanto outros apresentam uma sobrevida curta devido à uma rápida evolução para LMA. Diferentes aspectos biológicos da doença têm sido usados para dividir os pacientes em grupos e auxiliado nas decisões clínicas a serem tomadas em cada caso. A maioria dessas classificações levam em conta os subtipos morfológicos (classificação FAB) e os dados citogenéticos do clone mielodisplásico. Anormalidades cromossômicas são importantes marcadores das SMD. A maioria dos pacientes com esta síndrome apresenta aberrações citogenéticas que podem auxiliar no diagnóstico das SMD. Entretanto, algumas dessas aberrações podem ser correlacionadas com um mau prognóstico, como a monossomia do 7 e a trissomia do 8. Essas aneuploidias têm sido investigadas por estudos citogenéticos convencionais (bandamento G) e moleculares (\"FISH\" - Hybridization in situ Fluorescente). No intuito de se comparar a eficiência de ambas as técnicas e de se definir a freqüência e o significado prognóstico da monossomia do 7 (-7) e trissomia do 8 (+8) em SMD, foram estudados 28 pacientes com SMD-p (17 homens e 11 mulheres) por citogenética convencional (banda G) e molecular (\"FISH\" em intérfase), previamente a tratamento quimioterápico. Para compararmos o estudo cariotípico por bandamento G com o de \"FISH\", 19 pacientes foram estudados e a -7 foi detectada por \"FISH\" em seis pacientes e somente um deles o foi pela citogenética convencional. Os pacientes com -7 apresentaram uma menor sobrevida e um maior risco de transformação leucêmica. Cinco dos seis pacientes com -7 foram previamente classificados (FAB) como subtipos de mau prognóstico. Dois pacientes apresentaram +8, detectada por ambas as técnicas. Não houve diferença na sobrevida destes pacientes. Nossos resultados demonstraram que o \"FISH\" é uma técnica mais eficiente para detectar anomalias cromossômicas numéricas (-7) com importância prognóstica, especialmente em amostras pobres em metáfases, uma vez que \"FISH\" pode ser realizado em núcleos interfásicos. / Myelodisplastic Syndromes (MDS) are clonal disordes of hematopoietic stem cells characterized by ineffective hematopoiesis leading to blood cytopenias. They predominate in elderly patients and are associated with a high risk of progression to acute myelogenous leukemia (AML). The etiology of MOS is unknown in most cases (de novo) but about 10% of MDS are secondary to the use of xenobiotics, such as antineoplastic agents and organic solvents (secondary MDS). Though incurable, MDS patients have different clinical courses. Some patients can live for a decade with anemia being the only complaint whilst others present a very short term survival due to a rapid development of a treatment-refractory AML. Scales taking in account different biological aspects of the disease have been used in order to allocate patients in discrete risk levels. This risk stratification might help clinical decisions in a patient-by-patient basis. Most of these scales take in account the morphological subtype (FAB classification) and the cytogenetic status of the myelodysplastic clone. Chromosome abnormalities are very important markers of MDS. Most patients with this syndrome present cytogenetic aberrations which can be helpful in the diagnosis of SMD. Moreover, some of these aberrations have been correlated to a poorer prognosis, such as monosomy 7 and trissomy 8. These aneuploidies have been investigated by conventional (G-Banding) and molecular cytogenetic studies (In Situ Hybridization - FISH). In order to compare the efficiency of both techniques and to define the frequency and significance of monosomy 7 and trisomy 8 in MDS in a single institution population, chromosome studies of 28 patients were performed in metaphases by G-banding and in interphases by FISH (&#945; satellite probes), before chemotherapy treatment. Chromosome studies by both techniques were obtained for 19 patients; monosomy 7 was detected by FISH in 6 patients; only one of these has been detected by conventional cytogenetics. Clinical follow-up of this monosomy 7 group patients disclosed short survival and increased risk for developing AML. Five out of the six patients with monosomy 7 were previously classified as the FAB subtypes of poor prognostic. 2 patients presented trisomy 8 in this series and were detected by both techniques. No difference in survival could be seen in these patients. Our results demonstrate that FISH is much more efficient to investigate chromosome numerical anomaly (at least monossomy 7) with prognostic relevance. This is specially true mainly when bone marrow samples lack metaphases since the studies can be performed in interphases cells.