Estudos realizados no Laboratório de Drosophila da UFRGS tem caracterizado linhagens de Drosophila willistoni quanto à presença de Elementos Transponíveis (TEs) e à existência do fenômeno de Disgenesia Híbrida nesta espécie. Como conseqüência destes estudos, o presente trabalho se propôs a ampliar o conhecimento sobre o papel destes elementos na geração de variabilidade nesta espécie e abordou os TEs P, hobo, gypsy e 412, anteriormente identificados no genoma de D. willistoni, quanto à sua atividade transcricional. Em nosso trabalho, verificamos a presença de transcritos de P, gypsy e 412 em adultos, sugerindo uma regulação pós-transcricional destes elementos, como já sugerido para o elemento P, considerando que as linhagens utilizadas não se caracterizam pela hipermutabilidade. Devido à descrição prévia da Síndrome da Disgenesia do Híbrido na prole do cruzamento entre as linhagens 17A2 e Wip de D. willistoni, foi estabelecido o padrão de expressão do elemento P durante o desenvolvimento embrionário das duas linhagens. O padrão de expressão embrionário em D. melanogaster também foi estabelecido, para fins comparativos, uma vez que se aceita a ocorrência de um evento de transferência horizontal de P de D. willistoni para D. melanogaster. A similaridade entre os padrões de expressão nas duas espécies, sugere que o elemento P é regulado pelo seu próprio promotor e que não é dependente de promotores de genes vizinhos aos seus sítios de inserção. Foi estabelecida a presença de transcritos potenciais da transposase e de um repressor da transposição de P nos embriões analisados. Além do transcrito correspondente ao repressor, que é gerado por processamento alternativo do transcrito da transposase, obteve-se indícios da presença de transcritos antisenso do próprio elemento nos embriões, sugerindo a regulação por interferência de RNA (RNAi) neste estágio do desenvolvimento de Drosophila. Diferenças transcricionais do elemento P entre D. willistoni e D. melanogaster, estão relacionadas ao número de transcritos deletados de P que são expressos em maior número em D. melanogaster do que em D. willistoni, corroborando a idéia da invasão recente do genoma da primeira por este elemento. A expressão dos TEs descrita neste trabalho relata a regulação complexa destes elementos, evidenciando a importância da continuidade deste estudo. / Studies accomplished in the Laboratory of Drosophila of UFRGS have been characterizing strains of Drosophila willistoni in respect to the presence of Transposable Elements (TEs) and to the occurrence of the Hybrid Dysgenesis phenomenon in this species. As a consequence of these studies, the present work aimed to broaden the knowledge about the role of these elements in the genesis of variability in this species, by approaching the transcriptional expression of P, hobo, gypsy and 412 TEs, already described in the D. willistoni genome. In our work, we verified the presence of P, gypsy, and 412 transcripts in adults, suggesting post-transcriptional regulation, like already described for P element in D. melanogaster, considering that the strains studied were not characterized by hypermutability. Due to the previous description of the Hybrid Dysgenesis Syndrome in the offspring resulting of crosses between 17A2 and Wip D. willistoni strains, their P element expression pattern during the embryonic development was established. The embryonic P element expression pattern in D. melanogaster was also established, for comparative purpose, since the occurrence of a horizontal transfer event of this element from D. willistoni to D. melanogaster is accepted. The similarity among these expression patterns in both species suggests that P element is regulated by its own promoter and that it’s not dependent of the insertion sites neighboring genes promoters. The presence of putative P element transcripts of transposase and of the transposase repressor was established in the analyzed embryos. Besides the transposase repressor transcript, that is result of an alternative splicing of the transposase transcript, it was obtained indication of the presence of antisense transcripts of P element in the embryos, suggesting the regulation by RNA interference (RNAi) in this stage of development of Drosophila. Transcriptional differences of the P element between D. willistoni and D. melanogaster, are related to the number of deleted transcripts of P that are expressed in larger number in D. melanogaster than in D. willistoni, corroborating the idea of the recent invasion of the genome of the first species by this element. The expression of TEs described in this work suggests a complex regulation of these elements, evidencing the importance of the continuity of this study.

Estudos realizados no Laboratório de Drosophila da UFRGS tem caracterizado linhagens de Drosophila willistoni quanto à presença de Elementos Transponíveis (TEs) e à existência do fenômeno de Disgenesia Híbrida nesta espécie. Como conseqüência destes estudos, o presente trabalho se propôs a ampliar o conhecimento sobre o papel destes elementos na geração de variabilidade nesta espécie e abordou os TEs P, hobo, gypsy e 412, anteriormente identificados no genoma de D. willistoni, quanto à sua atividade transcricional. Em nosso trabalho, verificamos a presença de transcritos de P, gypsy e 412 em adultos, sugerindo uma regulação pós-transcricional destes elementos, como já sugerido para o elemento P, considerando que as linhagens utilizadas não se caracterizam pela hipermutabilidade. Devido à descrição prévia da Síndrome da Disgenesia do Híbrido na prole do cruzamento entre as linhagens 17A2 e Wip de D. willistoni, foi estabelecido o padrão de expressão do elemento P durante o desenvolvimento embrionário das duas linhagens. O padrão de expressão embrionário em D. melanogaster também foi estabelecido, para fins comparativos, uma vez que se aceita a ocorrência de um evento de transferência horizontal de P de D. willistoni para D. melanogaster. A similaridade entre os padrões de expressão nas duas espécies, sugere que o elemento P é regulado pelo seu próprio promotor e que não é dependente de promotores de genes vizinhos aos seus sítios de inserção. Foi estabelecida a presença de transcritos potenciais da transposase e de um repressor da transposição de P nos embriões analisados. Além do transcrito correspondente ao repressor, que é gerado por processamento alternativo do transcrito da transposase, obteve-se indícios da presença de transcritos antisenso do próprio elemento nos embriões, sugerindo a regulação por interferência de RNA (RNAi) neste estágio do desenvolvimento de Drosophila. Diferenças transcricionais do elemento P entre D. willistoni e D. melanogaster, estão relacionadas ao número de transcritos deletados de P que são expressos em maior número em D. melanogaster do que em D. willistoni, corroborando a idéia da invasão recente do genoma da primeira por este elemento. A expressão dos TEs descrita neste trabalho relata a regulação complexa destes elementos, evidenciando a importância da continuidade deste estudo. / Studies accomplished in the Laboratory of Drosophila of UFRGS have been characterizing strains of Drosophila willistoni in respect to the presence of Transposable Elements (TEs) and to the occurrence of the Hybrid Dysgenesis phenomenon in this species. As a consequence of these studies, the present work aimed to broaden the knowledge about the role of these elements in the genesis of variability in this species, by approaching the transcriptional expression of P, hobo, gypsy and 412 TEs, already described in the D. willistoni genome. In our work, we verified the presence of P, gypsy, and 412 transcripts in adults, suggesting post-transcriptional regulation, like already described for P element in D. melanogaster, considering that the strains studied were not characterized by hypermutability. Due to the previous description of the Hybrid Dysgenesis Syndrome in the offspring resulting of crosses between 17A2 and Wip D. willistoni strains, their P element expression pattern during the embryonic development was established. The embryonic P element expression pattern in D. melanogaster was also established, for comparative purpose, since the occurrence of a horizontal transfer event of this element from D. willistoni to D. melanogaster is accepted. The similarity among these expression patterns in both species suggests that P element is regulated by its own promoter and that it’s not dependent of the insertion sites neighboring genes promoters. The presence of putative P element transcripts of transposase and of the transposase repressor was established in the analyzed embryos. Besides the transposase repressor transcript, that is result of an alternative splicing of the transposase transcript, it was obtained indication of the presence of antisense transcripts of P element in the embryos, suggesting the regulation by RNA interference (RNAi) in this stage of development of Drosophila. Transcriptional differences of the P element between D. willistoni and D. melanogaster, are related to the number of deleted transcripts of P that are expressed in larger number in D. melanogaster than in D. willistoni, corroborating the idea of the recent invasion of the genome of the first species by this element. The expression of TEs described in this work suggests a complex regulation of these elements, evidencing the importance of the continuity of this study.

Estudos realizados no Laboratório de Drosophila da UFRGS tem caracterizado linhagens de Drosophila willistoni quanto à presença de Elementos Transponíveis (TEs) e à existência do fenômeno de Disgenesia Híbrida nesta espécie. Como conseqüência destes estudos, o presente trabalho se propôs a ampliar o conhecimento sobre o papel destes elementos na geração de variabilidade nesta espécie e abordou os TEs P, hobo, gypsy e 412, anteriormente identificados no genoma de D. willistoni, quanto à sua atividade transcricional. Em nosso trabalho, verificamos a presença de transcritos de P, gypsy e 412 em adultos, sugerindo uma regulação pós-transcricional destes elementos, como já sugerido para o elemento P, considerando que as linhagens utilizadas não se caracterizam pela hipermutabilidade. Devido à descrição prévia da Síndrome da Disgenesia do Híbrido na prole do cruzamento entre as linhagens 17A2 e Wip de D. willistoni, foi estabelecido o padrão de expressão do elemento P durante o desenvolvimento embrionário das duas linhagens. O padrão de expressão embrionário em D. melanogaster também foi estabelecido, para fins comparativos, uma vez que se aceita a ocorrência de um evento de transferência horizontal de P de D. willistoni para D. melanogaster. A similaridade entre os padrões de expressão nas duas espécies, sugere que o elemento P é regulado pelo seu próprio promotor e que não é dependente de promotores de genes vizinhos aos seus sítios de inserção. Foi estabelecida a presença de transcritos potenciais da transposase e de um repressor da transposição de P nos embriões analisados. Além do transcrito correspondente ao repressor, que é gerado por processamento alternativo do transcrito da transposase, obteve-se indícios da presença de transcritos antisenso do próprio elemento nos embriões, sugerindo a regulação por interferência de RNA (RNAi) neste estágio do desenvolvimento de Drosophila. Diferenças transcricionais do elemento P entre D. willistoni e D. melanogaster, estão relacionadas ao número de transcritos deletados de P que são expressos em maior número em D. melanogaster do que em D. willistoni, corroborando a idéia da invasão recente do genoma da primeira por este elemento. A expressão dos TEs descrita neste trabalho relata a regulação complexa destes elementos, evidenciando a importância da continuidade deste estudo. / Studies accomplished in the Laboratory of Drosophila of UFRGS have been characterizing strains of Drosophila willistoni in respect to the presence of Transposable Elements (TEs) and to the occurrence of the Hybrid Dysgenesis phenomenon in this species. As a consequence of these studies, the present work aimed to broaden the knowledge about the role of these elements in the genesis of variability in this species, by approaching the transcriptional expression of P, hobo, gypsy and 412 TEs, already described in the D. willistoni genome. In our work, we verified the presence of P, gypsy, and 412 transcripts in adults, suggesting post-transcriptional regulation, like already described for P element in D. melanogaster, considering that the strains studied were not characterized by hypermutability. Due to the previous description of the Hybrid Dysgenesis Syndrome in the offspring resulting of crosses between 17A2 and Wip D. willistoni strains, their P element expression pattern during the embryonic development was established. The embryonic P element expression pattern in D. melanogaster was also established, for comparative purpose, since the occurrence of a horizontal transfer event of this element from D. willistoni to D. melanogaster is accepted. The similarity among these expression patterns in both species suggests that P element is regulated by its own promoter and that it’s not dependent of the insertion sites neighboring genes promoters. The presence of putative P element transcripts of transposase and of the transposase repressor was established in the analyzed embryos. Besides the transposase repressor transcript, that is result of an alternative splicing of the transposase transcript, it was obtained indication of the presence of antisense transcripts of P element in the embryos, suggesting the regulation by RNA interference (RNAi) in this stage of development of Drosophila. Transcriptional differences of the P element between D. willistoni and D. melanogaster, are related to the number of deleted transcripts of P that are expressed in larger number in D. melanogaster than in D. willistoni, corroborating the idea of the recent invasion of the genome of the first species by this element. The expression of TEs described in this work suggests a complex regulation of these elements, evidencing the importance of the continuity of this study.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

INTRODUÇÃO: O hipotireoidismo congênito (HC) é uma doença, de acometimento neonatal, caracterizada por diminuição nos níveis de hormônios tireoidianos. As causas mais comuns de HC primário permanente são as alterações no desenvolvimento da glândula tireóide (disgenesia) e os defeitos de síntese dos hormônios tireóideos (disormonogênese). A determinação da etiologia do HC tem papel importante na determinação da gravidade da doença, evolução e tratamento. Essa investigação é feita através de exames como ultrassonografia e cintilografia (CINT) da tireóide. Além disso, com o conhecimento do genoma humano, diversas mutações foram descritas, sendo a investigação molecular importante para a determinação da etiologia da doença. OBJETIVOS: 1. Determinar o diagnóstico etiológico dos pacientes com HC a partir de dosagens hormonais, tireoglobulina e exames de imagem; 2. Estabelecer a importância do uso da ultrassonografia com Doppler colorido (USDC) no diagnóstico etiológico; 3. Estabelecer a importância do uso do teste do perclorato de sódio intravenoso (PSIV) no diagnóstico diferencial de HC por disormonogênese; 4. Estudar os genes PAX8 e receptor do TSH (TSHR) em pacientes com HC causado por disgenesia tireoidiana MÉTODOS: Avaliamos 40 pacientes acompanhados na APAE - São Caetano com diagnóstico de HC primário e permanente acima de 3 anos de idade. Os pacientes realizaram dosagens de T3, T4, T4 livre, TSH, tireoglobulina (TG) e anticorpo anti-TG pelo método imunofluorimétrico, além de USDC e CINT. Os pacientes com suspeita de disormonogênese foram submetidos ao teste PSIV e avaliação com otorrinolaringologista e audiometria tonal, se necessário. Os pacientes que apresentavam disgenesia tireoidiana tiveram o DNA extraído a partir de leucócitos periféricos para o estudo dos genes PAX8 e TSHR através de PCR e sequenciamento automático. RESULTADOS: Avaliamos 28 pacientes do sexo feminino e 12 do sexo masculino, após suspensão do tratamento com levotiroxina por 4 semanas. A idade média foi de 6,5 anos. O TSH médio foi 129,9 UI/mL (normal: 0,7-6,0). Os valores de T3, T4 e T4 livre variaram de 14 217 ng/dL (normal: 105-269), <1,6 15,8 g/dL (normal: 1,5-15) e < 0,3 2,7 ng/dL (normal: 0,7-1,5), respectivamente. A TG variou de <1 287 ng/dL (normal: 1,7-35). A USDC mostrou 21 pacientes com tireóide tópica (53%), 8 pacientes com tireóide ectópica (20%) e 11 pacientes com atireose (27%). Na CINT, o mapeamento identificou tireóide tópica em 20 pacientes (51%), tireóide ectópica em 13 pacientes (32%), e atireose em 7 pacientes (17%). A captação mostrou-se aumentada em 2 horas em 10 pacientes. O teste PSIV foi realizado em 9 pacientes com bócio ou glândula de tamanho normal ao USDC, cuja captação foi aumentada. Apenas um paciente apresentou vômito ao início do teste. Seis pacientes apresentaram teste positivo, considerando uma queda maior que 20%. Nenhum desses pacientes apresentava surdez neurossensorial. Encontramos discrepância entre USDC e CINT em 9 pacientes, principalmente nos casos de ectopia. A dosagem de TG auxiliou na confirmação de atireose. Os níveis mais altos de TG encontrados foram nos casos de disormonogênese causados por defeito na organificação. Assim, determinamos o diagnóstico de ectopia em 32,5% dos pacientes, hipoplasia em 20%, defeito na organificação (defeito de TPO ou THOX2) em 17,5%, atireose em 15%, defeito na TG em 7,5% e 3 casos a esclarecer (7,5%). Vinte e sete pacientes foram diagnosticados como portadores de disgenesia tireoidiana e não apresentaram mutações nos genes PAX8 e TSHR. CONCLUSÃO: Estabelecemos o diagnóstico etiológico em 37 dos 40 pacientes estudados. A USDC mostrou-se importante no diagnóstico etiológico do HC, especialmente associada à dosagem de TG. O teste PSIV mostrou-se seguro no diagnóstico diferencial do HC por disormonogênese. Não identificamos nenhuma mutação nos genes PAX8 e TSHR nos casos estudados de disgenesia / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH) is a disease at neonatal period characterized by low thyroid hormones levels. Most common causes of primary CH are alterations at thyroid gland development (dysgenesis) and thyroid hormone synthesis defects (dyshormonogenesis). The establishment of CH etiology has important role to define the severity, evolution and treatment of the disease. This investigation is based on thyroid ultrasound and radiouptake and radionuclide imaging (RAIU). With human genome knowledge, several mutations were described, becoming molecular investigation so important to etiology definition. OBJECTIVES: 1. Establish the etiologic diagnosis of CH patients using hormonal measurements, thyroglobulin and imaging exams. 2. Establish the importance of color Doppler ultrasound (CDUS) in etiologic diagnosis. 3. Establish the importance of intravenous perchlorate sodium test in differential diagnosis of CH due to dyshormonogenesis. 4. Study PAX8 and TSH receptor (TSHR) genes in patients with CH due to thyroid dysgenesis. METHODS: We evaluated forty patients followed-up at APAE - São Caetano with primary and permanent CH diagnosis above 3 years-old. Patients performed T3, T4, free T4, TSH, thyroglobulin (TG) and anti-TG antibody using immunofluorimetric assays, besides thyroid CDUS and RAIU. Patients with thyroid dysgenesis had their DNA extracted from peripheral leukocytes to study PAX8 and TSHR genes using PCR and automatic sequencing. Patients with dyshormonogenesis suspected were submitted to intravenous perchlorate sodium test and otorhinolaryngologist and tonal audiometric evaluation, if necessary. RESULTS: We evaluated 28 female and 12 male after levothyroxine treatment off for 4 weeks. Mean age of studied patients was 6.5 years-old. Mean TSH was 129.9 UI/mL (normal: 0.7-6.0). T3, T4 and freeT4 ranged from 14 217 ng/dL (normal 105-269) , <1.6 15.8 g/dL (normal: 1.5- 15) and < 0.3 2.7 ng/dL (normal: 0.7-1.5) respectively. TG level ranged from < 1 287 ng/dL (normal 1.7-35). CDUS showed normally located thyroid in 21 patients (53%), ectopy in 8 patients (20%), and athyrosis in 11 patients (27%). At RAIU, thyroid scan identified normal located gland in 20 patients (51%), ectopy in 13 patients (32%) e athyrosis in 7 patients (17%). Two-hours uptake was elevated in ten patients. Intravenous perchlorate sodium test was performed in 9 patients with goiter or normal volume at CDUS, with normal or elevated uptake. Only one patient presented vomit. Six patients had positive test, considering more than 20% of decline. None from these patients had neurosensorial deafness. We found discrepancy between CDUS and RAIU in 9 patients, especially in ectopic cases. Thyroglobulin measurement helped to confirm athyrosis. Highest TG levels were found in dyshormonogenesis patients due to organification defects. Therefore we determined etiologic diagnosis of ectopic gland in 32,5% of patients, hypoplasia in 20%, organification defect (TPO or THOX2 defects) in 17,5%, athyrosis in 15%, thyroglobulin defect in 7,5% and three cases were undefined (7,5%). Twenty seven patients were diagnosed with thyroid dysgenesis and had no mutation in PAX8 and TSHR genes. CONCLUSION: We established the etiologic diagnosis in 37 from 40 patients here studied. CDUS was useful on etiologic diagnosis of CH, especially associated to thyroglobulin level. Intravenous perchlorate sodium test was safe and efficient in CH differential diagnosis of dyshormonogenesis. We identified no mutation in PAX8 and TSHR genes in dysgenesis cases

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-13T11:47:34Z No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-13T11:55:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T11:55:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) Previous issue date: 2016 / CNPq / FAPESB / Fundação Gonçalo Moniz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: Hipotireoidismo Congênito (HC), é uma das doenças metabólicas mais comuns na infância com incidência de 1:3.000 a 1:4.000 recém-nascidos. Um grupo de doenças relacionadas às alterações no desenvolvimento da tireoide, denominadas disgenesias tireoidianas (DT), responsabiliza-se por aproximadamente 85% de todos os casos de HC, sendo sua patogênese pouco conhecida. OBJETIVOS: Geral: Caracterização clínica e genética de pacientes com HC diagnosticados com disgenesia tireoidiana. Específicos: 1. Caracterizar clínica dos indivíduos com HC em acompanhamento na APAE/Salvador (Associação de Pais e Amigos dos Excepcionais); 2. Avaliar a existência de associação entre malformações tireoidianas e malformações cardiacos; 3. Pesquisar polimorfismos e mutações nos genes candidatos: PAX8, TSH-R, NKX2.5 e HES1, em pacientes diagnosticados com disgenesia tireoidiana; 4. Pesquisar o gene TSH-R numa coorte de pacientes com HC diagnosticados no programa de triagem neonatal da França. METODOLOGIA: Até o ano de 2016, 1.188 crianças foram diagnosticadas com HC e 773 estão em acompanhamento. Duzentos e dezoito crianças confirmadas com HC foram caracterizadas clinicamente através de testes de função da tireoide (TT4 e TSH), ultrassonografia e cintilografia, seguidas de dosagem de tireoglobulina. Toda a região codificantes dos genes PAX8, TSH-R, NKX2.5 e HES1 incluindo íntrons e éxons foram amplificados a partir do DNA genômico através da PCR (Reação em cadeia da Polimerase) utilizando-se técnicas padrão seguida de Sequenciamento direto. RESULTADOS: Sessenta e três pacientes foram diagnosticados com DT e 155 com glândula tópica normal. Hipoplasia representou 33,4% dos casos de DT, agenesia 19%, ectopia 27% e hemiagenesia 20,6%. Altos concentrações de TSH no teste do pezinho foram detectados no grupo das agenesias seguido das hipoplasias. Na análise genética/molecular, 31 (49,2%) dos pacientes foram identificados com o polimorfismo p.D727E em heterozigose e 4 (6,4%) em homozigose, no gene TSH-R; 4/63 pacientes tiveram o polimorfismo p.P52T em heterozigose; 14/63 apresentaram a variante polimórfica p.N181N e 2/63 apresentaram a substituição sinônima conhecida p.L645L, todos no gene TSH-R. o polimorfismo p.Glu21 foi encontrado em 54% dos pacientes e p.Gln181 encontrado em 1 paciente no gene NKX2.5. Nenhuma alteração foi encontrada no gene HES1, bem como em PAX8. CONCLUSÕES: Este é o primeiro estudo realizado na população de HC no Estado da Bahia. Análises clínicas revelaram um padrão distinto entre os subgrupos da DT quando comparados com glândula normal; 6 polimorfismos já descritos foram encontrados em dois genes candidatos. Nenhuma mutação patogênica foi encontrada. A descrição fenotípica é essencial para a correta avaliação genética e os mecanismos nela implicados, além de utilizados para predição da gravidade do HC. A identificação de novos genes ou eventos moleculares que controlam a função tireoidiana pós-natal seria de grande utilidade no esclarecimento das DT. Palavras-chave: / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH), is the most common metabolic diseases in childhood with incidence of 1: 3000-1: 4000 newborns. A group of diseases related to alterations in the development of the thyroid, called thyroid dysgenesis (TD), is responsible for approximated 85% of all HC cases, and the majority has unknown pathogenesis. OBJECTIVES: General: clinical and genetic characterization of CH patients diagnosed with TD. Specific: 1. CH clinical characterization in individuals followed at APAE/Salvador; 2. evaluating the association between thyroid abnormalities and other abnormalities or syndromes; 3. search polymorphisms and mutations in known candidate genes for TD: PAX8, TSH-R, NKX2.5 and HES1; 4. XX METHODS: Until the year 2016, 1.188 children were diagnosed for CH and 773 were actually follow in APAE-Salvador. A continuous series of 218 children with confirmed HC were characterized clinically through thyroid function tests (TT4 and TSH), thyroid ultrasound and scintigraphy, followed by serum thyroglobulin measurement. The entire coding region of the candidate genes (PAX8, TSH-R, NKX2.5 and HES1), including exon/intron boundaries, was amplified from genomic DNA by polymerase chain reaction (PCR) using standard techniques, followed by direct sequencing. Results: Sixty-three patients were diagnosed with DT and 155 with in situ thyroid gland (ISTG). Hypoplasia represented 33,4% of all cases of DT, agenesis (19%), ectopy (27%) and hemiagenesis (20,6%). The higher screening TSH levels was in the agenetic group followed by hypoplasia. In the genetic/molecular analysis, 31 (49,2%) patients were identified with a polymorphism of TSH-R gene (p.D727E); 4/63 patients had a heterozygous p.P52T; 14/63 patients showed p.N187N polymorphic variants of the gene; and 2/63 patients presented a known p.L645L synonimous substitution. The polymorphism p.Glu21was found in 54% of patients, and p.Gln181 found in only one patient in the NKX2.5 gene. None alteration was detected in HES1 gene. CONCLUSIONS: This is the first CH population-based study in State of Bahia, Brazil. Clinical analysis revealed distinct hormonal patterns in DT subgroup when compared with ISTG, with only 6 known polymorphisms identified in few cases of TD in TSH-R, PAX8, NKX2.5 and HES1 genes. No mutation was found in a candidate genes studied. A detailed description of phenotype might be essential to target the correct genetic and mechanism implicated, and useful to predict CH severity. The identification of additional genes or molecular events controlling early postnatal thyroid function would be helpful.

INTRODUÇÃO: O hipotireoidismo congênito (HC) é uma doença, de acometimento neonatal, caracterizada por diminuição nos níveis de hormônios tireoidianos. As causas mais comuns de HC primário permanente são as alterações no desenvolvimento da glândula tireóide (disgenesia) e os defeitos de síntese dos hormônios tireóideos (disormonogênese). A determinação da etiologia do HC tem papel importante na determinação da gravidade da doença, evolução e tratamento. Essa investigação é feita através de exames como ultrassonografia e cintilografia (CINT) da tireóide. Além disso, com o conhecimento do genoma humano, diversas mutações foram descritas, sendo a investigação molecular importante para a determinação da etiologia da doença. OBJETIVOS: 1. Determinar o diagnóstico etiológico dos pacientes com HC a partir de dosagens hormonais, tireoglobulina e exames de imagem; 2. Estabelecer a importância do uso da ultrassonografia com Doppler colorido (USDC) no diagnóstico etiológico; 3. Estabelecer a importância do uso do teste do perclorato de sódio intravenoso (PSIV) no diagnóstico diferencial de HC por disormonogênese; 4. Estudar os genes PAX8 e receptor do TSH (TSHR) em pacientes com HC causado por disgenesia tireoidiana MÉTODOS: Avaliamos 40 pacientes acompanhados na APAE - São Caetano com diagnóstico de HC primário e permanente acima de 3 anos de idade. Os pacientes realizaram dosagens de T3, T4, T4 livre, TSH, tireoglobulina (TG) e anticorpo anti-TG pelo método imunofluorimétrico, além de USDC e CINT. Os pacientes com suspeita de disormonogênese foram submetidos ao teste PSIV e avaliação com otorrinolaringologista e audiometria tonal, se necessário. Os pacientes que apresentavam disgenesia tireoidiana tiveram o DNA extraído a partir de leucócitos periféricos para o estudo dos genes PAX8 e TSHR através de PCR e sequenciamento automático. RESULTADOS: Avaliamos 28 pacientes do sexo feminino e 12 do sexo masculino, após suspensão do tratamento com levotiroxina por 4 semanas. A idade média foi de 6,5 anos. O TSH médio foi 129,9 UI/mL (normal: 0,7-6,0). Os valores de T3, T4 e T4 livre variaram de 14 217 ng/dL (normal: 105-269), <1,6 15,8 g/dL (normal: 1,5-15) e < 0,3 2,7 ng/dL (normal: 0,7-1,5), respectivamente. A TG variou de <1 287 ng/dL (normal: 1,7-35). A USDC mostrou 21 pacientes com tireóide tópica (53%), 8 pacientes com tireóide ectópica (20%) e 11 pacientes com atireose (27%). Na CINT, o mapeamento identificou tireóide tópica em 20 pacientes (51%), tireóide ectópica em 13 pacientes (32%), e atireose em 7 pacientes (17%). A captação mostrou-se aumentada em 2 horas em 10 pacientes. O teste PSIV foi realizado em 9 pacientes com bócio ou glândula de tamanho normal ao USDC, cuja captação foi aumentada. Apenas um paciente apresentou vômito ao início do teste. Seis pacientes apresentaram teste positivo, considerando uma queda maior que 20%. Nenhum desses pacientes apresentava surdez neurossensorial. Encontramos discrepância entre USDC e CINT em 9 pacientes, principalmente nos casos de ectopia. A dosagem de TG auxiliou na confirmação de atireose. Os níveis mais altos de TG encontrados foram nos casos de disormonogênese causados por defeito na organificação. Assim, determinamos o diagnóstico de ectopia em 32,5% dos pacientes, hipoplasia em 20%, defeito na organificação (defeito de TPO ou THOX2) em 17,5%, atireose em 15%, defeito na TG em 7,5% e 3 casos a esclarecer (7,5%). Vinte e sete pacientes foram diagnosticados como portadores de disgenesia tireoidiana e não apresentaram mutações nos genes PAX8 e TSHR. CONCLUSÃO: Estabelecemos o diagnóstico etiológico em 37 dos 40 pacientes estudados. A USDC mostrou-se importante no diagnóstico etiológico do HC, especialmente associada à dosagem de TG. O teste PSIV mostrou-se seguro no diagnóstico diferencial do HC por disormonogênese. Não identificamos nenhuma mutação nos genes PAX8 e TSHR nos casos estudados de disgenesia / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH) is a disease at neonatal period characterized by low thyroid hormones levels. Most common causes of primary CH are alterations at thyroid gland development (dysgenesis) and thyroid hormone synthesis defects (dyshormonogenesis). The establishment of CH etiology has important role to define the severity, evolution and treatment of the disease. This investigation is based on thyroid ultrasound and radiouptake and radionuclide imaging (RAIU). With human genome knowledge, several mutations were described, becoming molecular investigation so important to etiology definition. OBJECTIVES: 1. Establish the etiologic diagnosis of CH patients using hormonal measurements, thyroglobulin and imaging exams. 2. Establish the importance of color Doppler ultrasound (CDUS) in etiologic diagnosis. 3. Establish the importance of intravenous perchlorate sodium test in differential diagnosis of CH due to dyshormonogenesis. 4. Study PAX8 and TSH receptor (TSHR) genes in patients with CH due to thyroid dysgenesis. METHODS: We evaluated forty patients followed-up at APAE - São Caetano with primary and permanent CH diagnosis above 3 years-old. Patients performed T3, T4, free T4, TSH, thyroglobulin (TG) and anti-TG antibody using immunofluorimetric assays, besides thyroid CDUS and RAIU. Patients with thyroid dysgenesis had their DNA extracted from peripheral leukocytes to study PAX8 and TSHR genes using PCR and automatic sequencing. Patients with dyshormonogenesis suspected were submitted to intravenous perchlorate sodium test and otorhinolaryngologist and tonal audiometric evaluation, if necessary. RESULTS: We evaluated 28 female and 12 male after levothyroxine treatment off for 4 weeks. Mean age of studied patients was 6.5 years-old. Mean TSH was 129.9 UI/mL (normal: 0.7-6.0). T3, T4 and freeT4 ranged from 14 217 ng/dL (normal 105-269) , <1.6 15.8 g/dL (normal: 1.5- 15) and < 0.3 2.7 ng/dL (normal: 0.7-1.5) respectively. TG level ranged from < 1 287 ng/dL (normal 1.7-35). CDUS showed normally located thyroid in 21 patients (53%), ectopy in 8 patients (20%), and athyrosis in 11 patients (27%). At RAIU, thyroid scan identified normal located gland in 20 patients (51%), ectopy in 13 patients (32%) e athyrosis in 7 patients (17%). Two-hours uptake was elevated in ten patients. Intravenous perchlorate sodium test was performed in 9 patients with goiter or normal volume at CDUS, with normal or elevated uptake. Only one patient presented vomit. Six patients had positive test, considering more than 20% of decline. None from these patients had neurosensorial deafness. We found discrepancy between CDUS and RAIU in 9 patients, especially in ectopic cases. Thyroglobulin measurement helped to confirm athyrosis. Highest TG levels were found in dyshormonogenesis patients due to organification defects. Therefore we determined etiologic diagnosis of ectopic gland in 32,5% of patients, hypoplasia in 20%, organification defect (TPO or THOX2 defects) in 17,5%, athyrosis in 15%, thyroglobulin defect in 7,5% and three cases were undefined (7,5%). Twenty seven patients were diagnosed with thyroid dysgenesis and had no mutation in PAX8 and TSHR genes. CONCLUSION: We established the etiologic diagnosis in 37 from 40 patients here studied. CDUS was useful on etiologic diagnosis of CH, especially associated to thyroglobulin level. Intravenous perchlorate sodium test was safe and efficient in CH differential diagnosis of dyshormonogenesis. We identified no mutation in PAX8 and TSHR genes in dysgenesis cases

Orientadores: Fatima Bottcher-Luiz, Maria Yolanda Makuch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:12:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_EsequielLaco_D.pdf: 974475 bytes, checksum: 3034498be25000cc6e7617f4f7097099 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O presente estudo teve como objetivos estudar as características psicológicas e as vivências em portadoras de distúrbios de diferenciação sexual, caracterizados por um fenótipo feminino e o cariótipo 46,XY. Foram selecionadas oito participantes, com idade entre 22 e 44 anos, que apresentavam amenorréia e esterilidade primárias, comprometimento dos caracteres sexuais secundários e diagnóstico de disgenesia gonadal pura 46,XY ou síndrome de insensibilidade androgênica completa. Os dados foram coletados através de entrevistas semidirigidas e aplicação do teste projetivo Rorschach. Seguindo as premissas do método clínico-qualitativo, observou-se que as pacientes tiveram uma infância sem intercorrências significativas até o início da adolescência, quando a ausência de menstruação e de outros sinais característicos desta etapa do desenvolvimento revelaram as diferenças em relação às demais meninas. Após o estabelecimento do diagnóstico e tratamento, passaram por período sofrido de questionamento sobre a dimensão e o significado das síndromes, uma vez que o tratamento não revertia suas manifestações, especialmente quanto à infertilidade. Como agravante, observou-se insegurança quanto à percepção de intercorrências pelos parceiros e dificuldades com a imagem corporal após a cirurgia profilática das gônadas e uso da terapia hormonal. Estas mulheres foram seriamente abaladas pelo diagnóstico, gerando negação e/ou incompreensão deste, mas sempre se perceberam como femininas, tanto na entrevista como no teste Rorschach. A análise conjunta dos dados apontou claramente para a necessidade de formação de grupos de apoio que não contemplem apenas a infertilidade, mas também o esclarecimento sobre os aspectos peculiares destas síndromes genéticas e suas manifestações na vida adulta / Abstract: The present study was aimed at assessing the psychological characteristics and experiences of individuals with sex differentiation disorders, represented by phenotypic females with a 46,XY karyotype. Eight participants were selected, ages ranging from 22 to 44 years, who presented primary amenorrhea and sterility, lack of development of secondary sexual characteristics and diagnosed with a 46,XY Pure Gonadal Dysgenesis or Complete Androgen Insensitivity Syndrome. Data was collected by using semi-structured interviews and by applying the Rorschach projective test. Based on the assumptions of the clinical qualitative method, it was observed that the patients described an uneventful childhood until the beginning of adolescence, when absence of menstruation and other signs characteristic of this developmental stage revealed the differences between these patients and other girls. After the diagnosis and treatment were established, the patients experienced a painful period of doubts about the magnitude and meaning of these syndromes, since treatment did not reverse their manifestations, especially regarding infertility. To further aggravate the situation, these patients demonstrated a sense of insecurity about their partners¿ perception of complications as well as difficulties with their body image after undergoing prophylactic gonadectomy and use of hormone therapy. These women were deeply upset by the diagnosis, which generated feelings of negation and/or incomprehension, although they had always perceived themselves as being feminine, both in the interview and in the Rorschach test. Taken together, data analysis clearly showed the need to form support groups not only to consider infertility, but also to explain the peculiar aspects of these genetic syndromes and their manifestations in adult life / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Orientadores: Iscia Lopes Cendes, Fernando Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T04:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_IaraLedaBrandaodeAlmeida_D.pdf: 3297703 bytes, checksum: 096b3def04c67702819b060d5587c421 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Polimicrogiria (PMG) é uma malformação comum do desenvolvimento cortical caracterizada por um número excessivo de pequenos giros e laminação anormal, dando à superfície cortical uma aparência irregular e grosseira. A gravidade das manifestações clínicas se correlaciona com a extensão do envolvimento cortical. As lesões bilaterais ou unilaterais extensas indicam um pior prognóstico. Uma das síndromes de polimicrogiria mais bem descritas clinicamente é a polimicrogiria perisylviana bilateral congênita (PPBC). Distúrbios de linguagem em crianças, epilepsia sintomática focal e disfunção cognitiva podem estar associados a PMG perisylviana. Embora o substrato patológico deste distúrbio não seja conhecido, existem indicativos de que a anormalidade cortical caracterizada como PMG contribui de forma variável nos diferentes níveis de desorganização da linguagem avaliados do ponto de vista fonológico, lexical, morfossintático e discursivo. Recentemente, o locus Xq28 foi mapeado para a forma de PMG perisylviana bilateral e o gene GPR56 foi identificado para a PMG fronto-parietal bilateral no cromossomo 16q12.2-21 . Além disso, uma série de genes candidatos têm sido implicados na etiologia das diferentes formas de PMG. Nesta tese apresentamos estudo clínico e molecular de 32 pacientes com PMG. Recorrência familiar foi observada em 18 destes indivíduos, pertencentes a 5 famílias não relacionadas. Os pacientes foram avaliados por detalhado exame neurológico, submetidos a testes neuropsicológicos e avaliação de linguagem. Todos eles realizaram exames de ressonância magnética com análise de reconstrução multiplanar e curvilinear. Análise de hibridização ¿In situ¿ por fluorescência (FISH) para pesquisa de deleção no 22q11.2 foi negativa em todos os pacientes avaliados. Em estudos subsequentes, a procura por mutações no gene EMX2 revelou que este gene não está mutado nos pacientes com PMG. Três famílias, não relacionadas, apresentando recorrência para a polimicrogiria perisylviana bilateral foram selecionadas e genotipadas para 13 marcadores localizados na região Xq27.3-q28. A análise de ligação apresentou Lod score de 2 pontos para o marcador DXS1227 (LOD score 3.01). A análise de múltiplos pontos delimitou uma região candidata, distante 12cM entre os marcadores DXS1227 a DXS8043. Portanto, nossos resultados delimitam uma nova região candidata para a polymicrogyria perisylviana bilateral familiar / Abstract: Polymicrogyria (PMG) is a malformation of cortical development characterized by an excessive number of small gyri and abnormal cortical lamination, giving the cortical surface an irregular and gross appearance. The severity of clinical manifestations correlates with the extent of cortical involvement. Bilateral or large unilateral lesions indicate a poor prognosis. The congenital bilateral perisylvian polymicrogyria syndrome (CBPS) is one of the well-recognized clinical polymicrogyria syndromes. Developmental language disorder in children, focal symptomatic epilepsy and cognitive deficits, can be associated with perisylvian polymicrogyria. Clinical manifestations will depend on the location and extent of the PMG. Although the pathological substrate of this disorder remains unknown, there are indications that the cortical abnormality known as PMG may contribute to language impairment in different levels, such as phonologic, lexical, morphosyntactic and semantic. Recently, a genetic locus for one form of bilateral perisylvian PMG was mapped to Xq28 and the gene GPR56 was identified for bilateral frontoparietal polymicrogyria on chromosome 16q12.2-21. In addition, a number of other candidate genes have been implicated in this disorder. In this thesis, we report a clinical and molecular study of 32 patients with PMG. Familial recurrence was observed in 18 of them, belonging from 5 unrelated families. Patients and their families were evaluated by detailed clinical and neurological examinations and also assessed by neuropsychological tests and language evaluation. All patients included in this study were submitted to high resolution MRI scans by performing multiplanar and curvilinear reformatting. FISH analyses for 22q11.2 were negative to all patients. In subsequent studies, we did not identify mutations in EMX2 gene in patients with PMG. Three unrelated families with recurrence of bilateral perisylvian polymicrogyria were selected and genotyped for 13 markers, which were localized in the Xq273-q28 region. Two-point linkage analysis presented a Lod score of 3.10 for the DXS1227 marker. Multipoint analysis indicated a candidate interval within a 12 cM region between markers DSX1227 and DXS8043. Therefore, our results point out to a new candidate region for bilateral perisylvian polymicrogyria / Doutorado / Neurociencias / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Andrea Trevas Maciel-Guerra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T22:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_AnneliseBarretode_M.pdf: 1757987 bytes, checksum: 457cb60680228e9be061cf287ce01cce (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Síndrome de Turner (ST) caracteriza-se pela presença de um cromossomo X e perda parcial ou total do segundo cromossomo sexual. Suas características mais comuns são baixa estatura e disgenesia gonadal. O diagnóstico precoce é fundamental para que as pacientes possam se beneficiar de diversas condutas específicas a serem tomadas quando necessário. Objetivo: analisar uma ampla casuística de pacientes com ST e a forma do encaminhamento de pacientes com essa suspeita clínica a um serviço de referência. Sujeitos: 425 pacientes do sexo feminino encaminhadas ao Grupo Interdisciplinar de Estudos da Determinação e Diferenciação do Sexo da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade de Campinas para investigação de ST, no período de janeiro de 1989 a outubro de 2006. Métodos: Foram analisados os seguintes dados obtidos dos prontuários clínicos: constituição cromossômica, idade, estatura (em escore z) e estadio puberal no momento do diagnóstico, origem do encaminhamento (interno ou externo ao HC) e especialidade do médico que encaminhou. Foi feita análise descritiva, comparação de pacientes com e sem ST e das pacientes com ST de acordo com a origem e a especialidade do médico, além de análise de correlação entre estatura e idade ao diagnóstico. Resultados: O diagnóstico de ST foi feito em 36,9% dos casos, com baixa freqüência de cariótipos 45,X e predominância de aberrações estruturais. A média de idade ao diagnóstico da ST foi 12,01 anos, o escore z da estatura -3,09 e havia atraso puberal em 71,4% das 63 pacientes com mais de 13 anos. Os médicos pediatras foram os que mais encaminharam pacientes com suspeita desta síndrome, e aquelas provenientes de serviços externos tiveram com maior freqüência diagnóstico confirmado de ST. Comparadas às demais, as pacientes com ST apresentavam maior déficit na estatura e maior freqüência de atraso puberal. Dentre os casos de ST, as encaminhadas do próprio HC tinham estatura mais baixa que as de origem externa, porém com idade e freqüência de atraso puberal semelhantes; as encaminhadas por pediatras eram mais jovens, porém com estatura e freqüência de atraso puberal semelhantes às daquelas encaminhadas por não pediatras. Foi encontrada correlação linear negativa significativa entre a idade ao diagnóstico e a estatura no total de pacientes com ST, porém a ausência dessa correlação nos casos encaminhados por não pediatras sugere que esse grupo de pacientes, de diagnóstico mais tardio, possa ter déficit estatural menos acentuado e atraso puberal nem sempre evidente Discussão: O presente trabalho mostrou alta freqüência de casos de ST em serviço de referência, porém com diagnóstico ainda tardio na maioria dos casos e independente de serem provenientes ou não de serviços terciários. É necessário, portanto, divulgar entre pediatras e não pediatras em todos os níveis de atenção os conhecimentos necessários ao encaminhamento e diagnóstico precoce da ST / Abstract: Turner syndrome (TS) is characterized by the presence of one X chromosome and partial or total lack of the second sex chromosome. Short stature and gonadal dysgenesis are the most frequent features. The early diagnosis is essential to allow appropriate management and institution of various therapeutic measures. Aim: To analyze a large sample of TS patients and to evaluate the referral of patients with clinical suspicion of this chromosome aberration. Subjects: 425 female patients referred to the Interdisciplinary Group of Disorders of sex development of the Faculty of medical sciences of the University of Campinas to investigate TS between January 1989 and October 2006. Methods: The following data were obtained from the medical records: chromosome constitution; age, height (zscore) and pubertal stage at diagnosis; origin of referral (from the University Hospital - UH - or outside services) and specialty of the physician who referred the patient. Descriptive analysis, followed by comparison between patients with and without TS and, among patients with TS, comparison according to origin and specialty of the physician. Correlation between age and height at diagnosis was also analyzed. Results: The diagnosis of TS was made in 36.9% of the cases, with low frequency of the 45,X karyotype and predominance of structural aberrations. Mean age of diagnosis was 12.01 years, height z score -3.09, and pubertal delay was found in 71.4% of the 63 patients aged more than 13 years. Pediatricians referred most patients, and the frequency of TS was higher among cases referred from outside services. When compared to the other patients of the sample, TS girls had shorter stature and higher frequency of pubertal delay. Among patients with TS, those referred from the UH had shorter stature but similar age and frequency of pubertal delay; those referred by pediatricians were younger, but stature and frequency of pubertal delay were similar to those referred by non-pediatricians. There was negative linear correlation between age and stature in the whole sample of girls with TS at diagnosis; however, absence of a similar correlation among girls referred by non-pediatricians suggests that in this group of patients, whose diagnosis was even more delayed, growth deficiency and puberty delay may be less evident. Discussion: The present work shows high frequency of TS in a reference service, but age at diagnosis is delayed in most cases, independent from its origin. Information about TS and the need for early diagnosis must be spread among pediatricians and non-pediatricians in all levels of health attention / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente