A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é a distrofia muscular mais comum e severa da infância, resultando em fraqueza e perda de massa muscular progressiva, que leva a múltiplas incapacidades e diminuição da sobrevivência. Os tratamentos disponíveis incluem corticoterapia e gerenciamento das funções ventilatória e motora com o objetivo de postergar os acometimentos provocados pela doença. Objetivo: Avaliar a função respiratória de crianças com DMD. Método: Foi realizado um estudo do tipo transversal, sendo coletados dados referentes a avaliações de função respiratória realizadas em 101 pacientes com DMD. Foram considerados elegíveis, todos os pacientes, do sexo masculino, que estavam em seguimento clínico pelo Ambulatório de DMD e com diagnóstico confirmado por método molecular ou por análise imunohistoquímica da distrofina na biópsia muscular e que tivessem passado por avaliação da função respiratória durante as visitas de seguimento clínico entre janeiro de 2012 e junho de 2013. Resultados: Os pacientes avaliados tinham em média 14,4 anos (dp=4,4 anos), 147cm de altura (dp=17,1), com mediana de peso de 45kg e capacidade vital forçada de 65,1 por cento (dp=24,6) em média em relação ao predito e aproximadamente 45 por cento dos avaliados possuiam entre 60 a 89 por cento de capacidade vital forçada em relação ao seu predito. Sobre as demais variáveis espirométricas, os valores mais altos foram obtidos na faixa etária de 13 e 15 anos, seguida de um declínio da função respiratória. Após os 18 anos de idade, todos os parâmetros foram menores do que 50 por cento em relação ao predito. Conclusão: a casuística estudada apresentou resultados de avaliação da função respiratória semelhantes aos de grandes centros de pesquisa e seguimento de pacientes com DMD em países desenvolvidos, demonstrando a boa qualidade do serviço oferecido aos pacientes. / Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is the most common and severe muscular dystrophy of childhood, resulting in weakness and progressive loss of muscle mass, which leads to multiple disabilities and decrease of the survival. The available treatments include corticosteroids and management of respiratory and motor functions in order to postpone the damages caused by the disease. Objective: To evaluate the respiratory function of children with DMD. Method: A cross-sectional study was made in order to collect data based on the evaluation of the respiratory function applied in 101 patients with DMD. It was considered eligible all the patients, males, who were being followed up by the clinical ambulatory DMD, with the diagnosis confirmed by molecular method or by the immunohistochemical analysis of dystrophin in muscle biopsy and for the once who had passed by an evaluation of the respiratory function during the visits between January 2012 and June 2013. Results : All patients had an average of 14.4 years ( SD = 4.4 years ) , height 147cm ( SD = 17.1 ) with a median weight of 45kg and forced vital capacity of 65.1 per cent (SD = 24.6) related to the predicted and approximately 45 per cent of the evaluated had 60 per cent to 89 per cent FVC related to its predicted. About the other spirometric variables, the highest values were obtained from the age of 13 to 15 years, followed by a decline in respiratory function. After the age of 18, all parameters were lower than 50 per cent compared to predicted. Conclusion: the population studied showed similar results of respiratory function assessment with major centers of research and follow-up of patients with DMD in developed countries, showing the good quality of the service offered to the patients

A fisioterapia motora vem sendo empregada como terapia de suporte para as distrofias musculares, porém, seu efeito no músculo distrófico e na função motora global precisa ser melhor compreendida para direcionar os tratamentos. Esta pesquisa objetiva elucidar o papel da fisioterapia motora na deposição de colágeno muscular, bem como em alguns parâmetros cinemáticos e dinâmicos da marcha do modelo Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD). Fragmentos do músculo bíceps femoralis foram coletados por biópsia de cinco animais GRMD de mesma idade para análises por microscopia de luz e imuno-histoquímica. A marcha dos animais foi registrada por câmeras de vídeo e as Forças de Reação do Solo (FRS) nos sentidos vertical (Fy), craniocaudal (Fx) e mediolateral (Fz) coletadas utilizando uma plataforma de força Kistler AG (9287A/100Hz) com os valores normalizados pelo peso corporal. Dois animais (tratados: TD) participaram do protocolo de fisioterapia que consistiu de atividade de marcha com velocidade controlada em área de 288 metros, 3 vezes/semana durante 12 semanas. Os animais controles (CD) mantiveram sua rotina de atividades diárias. A coleta I foi considerada como tempo zero (t0) com n=5 e o tempo após a fisioterapia (t1) como coleta II. As análises estatísticas consideraram p<.01. Foi realizada Imuno-histoquímica anti-colágenos tipo I, III (Calbiochem®) e IV (Bioreagents®). As características histopatológicas foram observadas no t0. Os CD apresentaram fibras hipercontraídas no t1, não observadas nos TD. Os colágenos do tipo I e III foram os mais presentes e aumentados. No t1, feixes espessos de colágeno do tipo I foram observados no endomísio dos TD, comparado ao t0. Os animais GRMD apresentaram velocidade lenta de marcha no t0 (0.64 m.s-1) com diminuição da mesma no t1 para os TD (0.45 m.s-1). No t1, os TD apresentaram diminuição da ADM do quadril (p<.0001), bem como do ombro (p<.05). O joelho e carpo dos animais foram as articulações com maiores ADM durante a marcha. Houve aumento da força vertical (Fy) dos membros torácicos e pélvicos dos TD e CD no t1 comparada ao t0. Os CD mostraram aumento do tempo de suporte dos membros torácicos no t1. A força propulsiva (Fx-) dos animais GRMD estava diminuída no t0, não mostrando sofrer influência da fisioterapia. A força medial (Fz+) do membro torácico dos TD mostrou aumento no t1 quando comparada aos CD p<.0001). Os animais tratados apresentam diminuição da flexibilidade e menor regeneração do tecido muscular em comparação aos animais não tratados. Funcionalmente, a fraqueza muscular dos animais distróficos reflete em uma marcha lenta, com característica de sobrecarga e dificuldade de avançar com o corpo. Além destas características, os TD apresentam menor amplitude de movimento articular proximal quando comparado ao t0. A fisioterapia motora aplicada acelera as alterações morfológicas no músculo distrófico sem interferir na progressão das disfunções de marcha no modelo canino da distrofia muscular. / Physiotherapy has been widely used as support treatment for muscular dystrophies. Its effect on dystrophic muscle and global function should be better understood to guide treatments. This study aims to understand the role of motor physical therapy on muscular collagen deposition and some kinematics and dynamical parameters of gait of the Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) model. Five GRMD dogs with the same age had fragments of biceps femoralis collected by biopsy for light microscopy and Immunohistochemistry analysis. Gait of the dogs were video recording for kinematics analysis and Ground Reaction Forces (GRF) in vertical (Fy), craniocaudal (Fx) and mediolateral (Fz) direction were collect using a Force Plate Kistler AG (9287A/100Hz) and normalized for body weight. Two animals (therapy dogs: TD) underwent a protocol which consisted of velocity controlled walking activity in an area of 288 meters total length, 3 times/week per 12 weeks. Control dogs (CD) maintained their daily routine. Zero time (t0) is considered at collect I (n=5) and time after therapy (t1) - collect II. Statistical analysis considered p<.01. Immunohistochemistry anticollagen types I, III (Calbiochem®) and IV (Bioreagents®) were performed. Histopathology features were observed at t0. CD presented hypercontracted fibers that were not observed on TD at t1. Collagen types I and III were the most increased ones. At t1, thicker tracts of collagen type I were observed at the endomysium of TD compared to t0. GRMD dogs presented slow velocity of gait (0.64 m.s-1) at t0 and there were a decrease of this velocity of TD at t1 (0.45 m.s-1). Hip ROM was decrease at t1 (p<.0001), as well as the shoulder ROM (p<.05) for TD. Stifle and Carpal ROM presented the highest active ROM during gait of dystrophic dogs. Fy of thoracic and pelvic limbs at t1 of TD and CD was higher than t0. CD presented increase of support time of thoracic limbs at t1 (49 to 53%). Propulsive force (Fx-) of GRMD dogs were decrease at t0, with no effect of physical therapy. Medial force (Fz+) of TD thoracic limbs were higher at t1 when compared to CD (p<.0001). TD presents less muscular flexibility and regeneration when compared to CD. Functionally, the muscular weakness of dystrophic dogs reflects a gait with slow velocity, overloaded and difficulty to goes forward. Moreover, TD presented lower range of motion of the proximal joints when compared to t0. The applied motor physical therapy accelerates the morphological alterations on dystrophic muscle without stop the gait disorders of the canine model of Duchenne muscular dystrophy.

Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é a forma mais severa das distrofias e considerando as dificuldades que caracterizam a doença, o objetivo deste trabalho é avaliar o tempo de movimento durante uma tarefa com diferentes níveis de dificuldade e verificar se a dificuldade na execução do movimento prevalece em realizar a tarefa quando a demanda for velocidade ou acurácia. Participaram 17 indivíduos com DMD (com média de idade de 15 ± 2,2) e 17 indivíduos com desenvolvimento típico (DT), pareados por sexo e idade. A tarefa que avalia a relação velocidade e acurácia de movimento, baseada na Lei de Fitts, consiste na realização de movimentos manuais direcionados a um alvo, em 3 índices de dificuldade (ID). O tempo de movimento foi obtido por meio da divisão entre segundos pré-estabelecidos para a tarefa (10) e o número de toques realizados no alvo. O software que simulou a tarefa foi \"Fitts Reciprocal Aiming Task v.1.0 (Horizontal)\". A MANOVA demonstrou diferenças estatisticamente significantes nos dados de dispersão do tempo de movimento entre o grupo DMD (r2: M= 0.70, SD=0.04) e o grupo DT (r2: M= 0.85, SD=0,04) [F(1.32)=5,93; p=0,021; ?2=0.16] e nos valores do intercepto [F(1,32)=5.16; p=0.030; ?2=0.14], com maior tempo de movimento no grupo DMD (M= 321 ms, SD= 73 ms) comparado ao grupo DT (M= 86 ms; SD= 73). A ANOVA indicou efeito para grupos entre os ID, exceto entre ID4 e ID6. Os indivíduos do grupo DMD apresentaram um tempo significativamente maior se comparado ao grupo DT apenas nos ID2 e ID4. No ID6, onde há maior exigência por acurácia, os grupos tiveram desempenho semelhante. Estes dados demonstram que o desempenho dos indivíduos com DMD é mais afetado quando a tarefa envolve velocidade / Duchenne muscular dystrophy (DMD) is the most severe form of all the dystrophies, and taking into account the motor difficulties that characterize the disease, the aim of this study was to evaluate movement time during a task at various levels of difficulty and verify whether the difficulty in task execution in movement had prevalence over the demand of speed or accuracy. The DMD group comprised of 17 individuals (mean age 15 years ± 2.2) who were age- and sex-controlled matched paired with 17 individuals with typical development (TD group). The task which evaluates speed and accuracy of movement was based on Fitts´ Law, consisting on the execution of manual movements aimed at a target at 3 different indices of difficulty (ID). Movement time was obtained through division, pre-established in seconds, for a task and the number of touches performed to target. The software which simulated the task was \"Fitts´ Reciprocal Aiming Task v.1.0 (Horizontal)\". MANOVA demonstrated statistically significant differences in dispersion data of between DMD group (r2: M= 0.70, SD=0.04) and TD group (r2: M= 0.85, SD=0.04) [F(1,32)=5.93; p=0.021; ?2=0.16] and intercept values [F(1,32)=5.16; p=0.030; ?2=0.14], with greater movement time in DMD group (M= 321 ms, SD= 73 ms) compared to TD group (M= 86 ms; SD= 73). ANOVA indicated effect among groups between ID, except among ID4 and ID6. Individuals in DMD group had significantly longer movement time when compared to DT group only in ID2 and ID4. In ID6, where there is greater demand on the accuracy of the movement, the groups had similar performance. These data show that the development of individuals with DMD is more affected when the task involves speed

Em nossa cultura casar-se e ter filhos são etapas no processo de desenvolvimento do ser humano que têm amplo significado social e psicológico; e ser pai/mãe é uma etapa dentro do ciclo de vida que traz mudanças significativas, tanto para a família, como um todo, quanto para seus membros. Assim como a maternidade tem seus significados para a mulher, a paternidade também os tem e estes, para os homens, são influenciados pelas concepções, crenças e valores que têm acerca do papel paterno. A literatura aponta que a presença de uma doença crônica/deficiência do filho afeta a maneira como estes homens exercem a paternidade. Este trabalho teve como objetivo conhecer a vivência da paternidade em pais de filhos com diagnóstico de Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e as consequências da presença da doença nas interações familiares e sociais. Participaram oito pais cujos filhos possuem diagnóstico confirmado de DMD, com idade acima dos dez anos e residentes em Ribeirão Preto e cidades circunvizinhas. Foram realizadas entrevistas com a utilização de um roteiro semiestruturado e os dados foram analisados com base na análise temática de conteúdo. Os resultados mostram que a notícia da confirmação do diagnóstico de DMD desencadeou uma reação de choque, coexistindo com sentimentos de tristeza, impotência e desesperança. A negação foi a defesa psíquica mais utilizada por eles e a maioria dos pais considera a enfermidade do filho como missão enviada por Deus, desse modo diminuindo a dor e a angústia causadas pelo adoecimento. Os pais utilizaram-se de diversos recursos para enfrentar a doença dos seus filhos, desde a busca de informações sobre tratamento/cura da doença e a religião apareceu como um fator positivo que os ajudou a enfrentar as situações mais difíceis. Apresentam sobrecarga física e psíquica e, ainda, preocupação constante e tristeza em virtude da grande dependência de cuidados que o filho doente exige; além disso, o exercício da paternidade se mostrou mais participativo, sendo o relacionamento com o filho avaliado como de companheirismo. Os pais experimentam, desde a percepção dos sintomas da doença, inúmeras perdas que os expõem a grande sofrimento, diversos eventos estressores e deflagram o processo de luto antecipatório que é atualizado a cada perda funcional que acontece em decorrência da doença. A paternidade de um filho com deficiência foi percebida por eles como um fator que os fez sentirem-se \"pais especiais\", promovendo também amadurecimento e crescimento pessoais. Os pais atribuíram à paternidade o significado de missão a ser cumprida e este significado foi permeado pelo sistema de crenças e valores religiosos. O significado dado à \"paternidade especial\" influenciou positivamente na adaptação à doença, pois favoreceu a elaboração psíquica, mantendo-os motivados frente à adversidade. Conhecer e compreender como os pais vivenciam a paternidade na presença de uma doença crônica/deficiência é fundamental para que se estabeleçam programas de acompanhamento psicológico e assistência não somente para os pais, mas para toda a família, visando à promoção de apoio e estratégias de enfrentamento para uma melhor adaptação à enfermidade e à paternidade. / In our culture to marry and have children are steps in the process of human development that have broad social and psychological meaning and to become a father/mother is a stage in the life cycle that brings significant changes for both the family and its members. As well as motherhood having its meanings for the woman fatherhood also has them and this is influenced by the concepts, beliefs and values of the men concerning the paternal role. The literature indicates that the presence of a chronic illness/disability of the child affects how these men exercise fatherhood. This study aimed to understand the experience of fatherhood in fathers of boys diagnosed with Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) and the consequences of the presence of the disease in the social and family interactions. Participants were eight fathers whose children, aged ten years and over, had been diagnosed with DMD, living in Ribeirão Preto and surrounding cities. Interviews were conducted using a semi-structured script and analyzed using thematic content analysis. The results show that the news of the confirmation of the DMD diagnosis triggered a reaction of shock, coexisting with feelings of sadness, helplessness and hopelessness. Denial was the psychic defense most used by them and the majority of the fathers considered the illness of the child a mission sent from God, thereby decreasing the pain and anguish caused by the illness. The fathers used a variety of resources to cope with the illnesses of their sons, from seeking information regarding treatment/cure for the disease to religion, which appeared as a positive factor that helped them cope with the most difficult situations. They presented physical and mental overload, as well as constant concern and sadness because of the great dependence on care of the sick son. The exercise of fatherhood was shown to be more participatory and the relationship with the child was evaluated as one of companionship. From the perception of the disease symptoms, the fathers experienced many losses that exposed them to great suffering, many stressful events and triggered the process of anticipatory mourning that was upgraded with every functional loss that occured as a result of the disease. They perceived fatherhood of a child with disabilities to be a factor that made them feel like \"special parents\" and also promoted maturation and personal growth. The fathers attributed the meaning of a mission to be fulfilled to the fatherhood and this meaning was permeated by a system of religious beliefs and values. The meaning given to \"special fatherhood\" positively influenced the adaptation to the disease, as it favored psychic elaboration, keeping them motivated in the face of adversity. To know and comprehend how fathers experience fatherhood in the presence of a chronic disease/disability is fundamental to be able to establish psychological counseling and care programs, not only for parents but for the entire family, aiming to promote support and coping strategies for better adaptation to the illness and to fatherhood.

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é a distrofia muscular mais comum e severa da infância, resultando em fraqueza e perda de massa muscular progressiva, que leva a múltiplas incapacidades e diminuição da sobrevivência. Os tratamentos disponíveis incluem corticoterapia e gerenciamento das funções ventilatória e motora com o objetivo de postergar os acometimentos provocados pela doença. Objetivo: Avaliar a função respiratória de crianças com DMD. Método: Foi realizado um estudo do tipo transversal, sendo coletados dados referentes a avaliações de função respiratória realizadas em 101 pacientes com DMD. Foram considerados elegíveis, todos os pacientes, do sexo masculino, que estavam em seguimento clínico pelo Ambulatório de DMD e com diagnóstico confirmado por método molecular ou por análise imunohistoquímica da distrofina na biópsia muscular e que tivessem passado por avaliação da função respiratória durante as visitas de seguimento clínico entre janeiro de 2012 e junho de 2013. Resultados: Os pacientes avaliados tinham em média 14,4 anos (dp=4,4 anos), 147cm de altura (dp=17,1), com mediana de peso de 45kg e capacidade vital forçada de 65,1 por cento (dp=24,6) em média em relação ao predito e aproximadamente 45 por cento dos avaliados possuiam entre 60 a 89 por cento de capacidade vital forçada em relação ao seu predito. Sobre as demais variáveis espirométricas, os valores mais altos foram obtidos na faixa etária de 13 e 15 anos, seguida de um declínio da função respiratória. Após os 18 anos de idade, todos os parâmetros foram menores do que 50 por cento em relação ao predito. Conclusão: a casuística estudada apresentou resultados de avaliação da função respiratória semelhantes aos de grandes centros de pesquisa e seguimento de pacientes com DMD em países desenvolvidos, demonstrando a boa qualidade do serviço oferecido aos pacientes. / Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is the most common and severe muscular dystrophy of childhood, resulting in weakness and progressive loss of muscle mass, which leads to multiple disabilities and decrease of the survival. The available treatments include corticosteroids and management of respiratory and motor functions in order to postpone the damages caused by the disease. Objective: To evaluate the respiratory function of children with DMD. Method: A cross-sectional study was made in order to collect data based on the evaluation of the respiratory function applied in 101 patients with DMD. It was considered eligible all the patients, males, who were being followed up by the clinical ambulatory DMD, with the diagnosis confirmed by molecular method or by the immunohistochemical analysis of dystrophin in muscle biopsy and for the once who had passed by an evaluation of the respiratory function during the visits between January 2012 and June 2013. Results : All patients had an average of 14.4 years ( SD = 4.4 years ) , height 147cm ( SD = 17.1 ) with a median weight of 45kg and forced vital capacity of 65.1 per cent (SD = 24.6) related to the predicted and approximately 45 per cent of the evaluated had 60 per cent to 89 per cent FVC related to its predicted. About the other spirometric variables, the highest values were obtained from the age of 13 to 15 years, followed by a decline in respiratory function. After the age of 18, all parameters were lower than 50 per cent compared to predicted. Conclusion: the population studied showed similar results of respiratory function assessment with major centers of research and follow-up of patients with DMD in developed countries, showing the good quality of the service offered to the patients

O gene DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) humano está localizado no locus 19q13.3, sendo dividido em 15 éxons, com uma região polimórfica de repetições CTG em sua região 3’ não traduzida. Indivíduos normais apresentam de 5 a 34 repetições CTG. Indivíduos com alelos com mais de 50 repetições CTG apresentam distrofia miotônica tipo 1 (DM1), uma doença multissistêmica de herança autossômica dominante. Os sintomas incluem miotonia, fraqueza muscular progressiva, hipogonadismo, entre outros. Neste trabalho, a distribuição dos alelos do gene DMPK em indivíduos controles foi estabelecida em duas populações (brasileira e peruana), por meio de PCR convencional utilizando iniciadores fluorescentes e repeat-primed PCR. O protocolo confirmou 93 casos não relacionados de DM1 (76 brasileiros e 17 peruanos) após a análise de 224 amostras com suspeita clínica. A distribuição e as frequências dos alelos normais foram estabelecidas em ambas as populações e os alelos mais frequentes foram 5 (frequência = 0,326) e 13 (frequência = 0,545) repetições de CTG em brasileiros e peruanos, respectivamente. A frequência de alelos normais grandes (aqueles com mais de 45 repetições CTGs) foi de 9% e 4% em brasileiros e peruanos, respectivamente. Neste trabalho é descrita a análise molecular de DM1 na maior coorte brasileira até o momento e é o primeiro trabalho em que foi analisada a população peruana. A distribuição e a frequência de alelos normais também foram estabelecidas e alelos mutáveis foram detectados entre os indivíduos controles. / The human DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) gene is located at 19q13.3 locus, being organized into 15 exons, with a polymorphic tract of CTG repeats in its 3' untranslated region. Normal individuals have 5-34 CTG repeats. Individuals carrying alleles with more than 50 CTG repeats have myotonic dystrophy type 1 (DM1), a multisystemic disease of autosomal dominant inheritance. Symptoms include myotonia, progressive muscle weakness, hypogonadism, among others. Disease prevalence is variable among populations and may be related to the frequency of large normal alleles (those with more than 18 CTG repeats). Here we determined here the distribution of alleles of DMPK gene in healthy and DM1 patients in Brazilian and Peruvian populations, through conventional PCR using fluorescent primers and repeat-primed PCR. This protocol confirmed 93 unrelated cases of DM1 (76 Brazilians and 17 Peruvians) following the analysis of 224 samples with clinical suspicion. Distribution and frequencies of normal alleles were also established in both populations and the most frequent alleles were 5 (frequency of 0.326) and 13 (frequency of 0.545) CTG repeats in Brazilians and Peruvians, respectively. Frequency of large normal alleles (those with more than 45 CTG repeats) was established to be 9% and 4% in Brazilians and Peruvians, respectively. This report describes molecular analysis of DM1 in the largest Brazilian cohort so far, and is the first to report any data in the Peruvian population. Distribution and frequency of normal alleles were also established and mutable alleles were detected among controls.

Les cellules souches pluripotentes (CSP) humaines sont devenues en quelques années des modèles de choix pour étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires qui gouvernent l'apparition de maladies monogéniques, mais également pour le développement de criblages à haut débits afin d'identifier parmi plusieurs milliers de molécules chimiques celles qui ont un potentiel thérapeutique. C'est dans ce contexte de criblage que mes travaux de thèse s'inscrivent, alliant automatisation et miniaturisation de la biologie des CSP dans le cadre de deux maladies monogéniques, l'amyotrophie spinale infantile (SMA) et la dystrophie myotonique de type I (DM1). De manière générale, la mise en place d'une telle stratégie repose sur trois étapes essentielles qui sont l'obtention de CSP porteuses d'une mutation donnée, l'identification d'un modèle d'étude pertinent et la réalisation du criblage à proprement parlé. L'obtention de CSP humaines repose sur deux approches principales. La première consiste en la dérivation de cellules embryonnaires humaine (hES) issues de diagnostiques préimplantatoires et la seconde repose sur la reprogrammation de cellules somatiques par l'induction de pluripotence (iPS). Une partie de mon travail a consisté en la création de cellules iPS modèles de la SMA et leur caractérisation par une approche à haut débit. Par la suite un travail d'optimisation du protocole de génération de motoneurones à partir de CSP humaines a permis d'accélérer et augmenter les rendements de production de ces cellules qui sont principalement affectées dans la SMA. Enfin, l'utilisation de cellules hES porteuses de la mutation causale de la DM1 a permis le criblage de 12000 molécules et a conduit à l'identification d'une famille chimique capable de restaurer plusieurs défauts typiques de cette maladie tels que des défauts d'épissage et de fusion moléculaire. / For only few years, Human pluripotent stem cells (PSC) have become wide spread models in order to study and decipher cellular or molecular mechanims involved in monogenic diseases, but also for the development of large scale screening strategies allowing the identification of new therapeutics among thousands of chemicals. Mythesis research aimed at the development of such strategies, miniaturizing and automating PSC biology within the framework of two monogenic diseases, namely spinal muscular atrophy (SMA) and myotonic dystrophy type 1 (DM1).Basically, PSC based screening programs are generally built around three main steps which are the access to a stem cell model, the identification of a relevant cell type and lastly the screening campaign. There is actually two main ways to generate human PSC. Firstly, human embryonic stem cells (hES) can be derived from the inner cell mass of blastocyte through a pre-implantation diagnosis and secondly, induced pluripotent stem cells (iPS) can be generated after somatic cell reprogramming in vitro. A part of my work has consisted in the generation of hiPS cellular models for SMA by reprogramming fibroplasts that carried SMN1 gene deletion, followed bay the characterization of several dozen of independant clones with high throughput. Then an optimization process of the protocol for the generation of Motoneuron from PSC has been done multiplying experimental conditions. This finally allowed the description of a fast and efficient protocol to generate the most affected cell type in SMA. Finally, DM1 mutated hES were uded for the screening of 12.000 compounds among which a chemical family has been identified to rescue DM1 typical splicing and myogenesis defects.

Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é a forma mais severa das distrofias e considerando as dificuldades que caracterizam a doença, o objetivo deste trabalho é avaliar o tempo de movimento durante uma tarefa com diferentes níveis de dificuldade e verificar se a dificuldade na execução do movimento prevalece em realizar a tarefa quando a demanda for velocidade ou acurácia. Participaram 17 indivíduos com DMD (com média de idade de 15 ± 2,2) e 17 indivíduos com desenvolvimento típico (DT), pareados por sexo e idade. A tarefa que avalia a relação velocidade e acurácia de movimento, baseada na Lei de Fitts, consiste na realização de movimentos manuais direcionados a um alvo, em 3 índices de dificuldade (ID). O tempo de movimento foi obtido por meio da divisão entre segundos pré-estabelecidos para a tarefa (10) e o número de toques realizados no alvo. O software que simulou a tarefa foi \"Fitts Reciprocal Aiming Task v.1.0 (Horizontal)\". A MANOVA demonstrou diferenças estatisticamente significantes nos dados de dispersão do tempo de movimento entre o grupo DMD (r2: M= 0.70, SD=0.04) e o grupo DT (r2: M= 0.85, SD=0,04) [F(1.32)=5,93; p=0,021; ?2=0.16] e nos valores do intercepto [F(1,32)=5.16; p=0.030; ?2=0.14], com maior tempo de movimento no grupo DMD (M= 321 ms, SD= 73 ms) comparado ao grupo DT (M= 86 ms; SD= 73). A ANOVA indicou efeito para grupos entre os ID, exceto entre ID4 e ID6. Os indivíduos do grupo DMD apresentaram um tempo significativamente maior se comparado ao grupo DT apenas nos ID2 e ID4. No ID6, onde há maior exigência por acurácia, os grupos tiveram desempenho semelhante. Estes dados demonstram que o desempenho dos indivíduos com DMD é mais afetado quando a tarefa envolve velocidade / Duchenne muscular dystrophy (DMD) is the most severe form of all the dystrophies, and taking into account the motor difficulties that characterize the disease, the aim of this study was to evaluate movement time during a task at various levels of difficulty and verify whether the difficulty in task execution in movement had prevalence over the demand of speed or accuracy. The DMD group comprised of 17 individuals (mean age 15 years ± 2.2) who were age- and sex-controlled matched paired with 17 individuals with typical development (TD group). The task which evaluates speed and accuracy of movement was based on Fitts´ Law, consisting on the execution of manual movements aimed at a target at 3 different indices of difficulty (ID). Movement time was obtained through division, pre-established in seconds, for a task and the number of touches performed to target. The software which simulated the task was \"Fitts´ Reciprocal Aiming Task v.1.0 (Horizontal)\". MANOVA demonstrated statistically significant differences in dispersion data of between DMD group (r2: M= 0.70, SD=0.04) and TD group (r2: M= 0.85, SD=0.04) [F(1,32)=5.93; p=0.021; ?2=0.16] and intercept values [F(1,32)=5.16; p=0.030; ?2=0.14], with greater movement time in DMD group (M= 321 ms, SD= 73 ms) compared to TD group (M= 86 ms; SD= 73). ANOVA indicated effect among groups between ID, except among ID4 and ID6. Individuals in DMD group had significantly longer movement time when compared to DT group only in ID2 and ID4. In ID6, where there is greater demand on the accuracy of the movement, the groups had similar performance. These data show that the development of individuals with DMD is more affected when the task involves speed

Contextualização: A toracometria é uma técnica simples e acessível para avaliar mobilidade do tórax durante respiração forçada, mas não permite analisar os movimentos compensatórios utilizados por portadores de doenças crônicas, como a distrofia muscular de Duchenne (DMD), caracterizada pela degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. Objetivos: Ampliar a técnica de toracometria, permitindo avaliação das compensações posturais, analisar a confiabilidade da ferramenta e, descrever a mobilidade torácica de crianças com DMD, durante respiração profunda. Métodos: Participaram 60 meninos, 30 com DMD (10,1±0,5 anos) e 30 saudáveis (9,5±0,6 anos). Aplicou-se a técnica de toracometria expandida em duas fases: livre movimentação corporal, permitindo avaliação de compensações posturais (toracometria livre) e, bloqueio de movimentos compensatórios, facilitando análise de movimentos do gradil costal (toracometria dirigida). Esta técnica prevê filmagem e observação sistemática dos movimentos, gerando dados numéricos e descritivos permanentes. O estudo de confiabilidade da técnica foi realizado nos dois grupos. Resultados: As medidas de toracometria axial e xifóide (livre e dirigida) apresentaram excelente confiabilidade intra e interexaminadores. As medidas coletadas apresentaram diferenças significantes entre os grupos. Nas crianças com DMD, a toracometria livre apresentou valor de expansibilidade torácica maior, mostrando que as compensações facilitam a mobilidades da caixa torácica. A técnica de toracometria livre apresentada permitiu a descrição de compensações posturais, sendo que as observadas com maior frequência foram os movimentos associados de cabeça, ombro e tórax. Conclusões: A técnica de toracometria expandida apresentou excelente confiabilidade e permitiu descrever os movimentos do tórax e dos arcos costais. Sugere-se sua utilização na avaliação respiratória de crianças com DMD / Background: Thoracic cirtometry is a simple and accessible technique to assess chest mobilization during forced breathing, but does not allow to analyze compensatory movements commonly used by people with chronic diseases, such Duchenne muscular dystrophy (DMD), characterized by progressive degeneration of musculoskeletal system. Objectives: To expand the technique of thoracic cirtometry to allow assessment compensatory movements, to analyze the reliability of the tool and to describe thoracic mobility of children with DMD. Methods: Participated 60 boys, 30 with DMD (10.1 ± 0.5 years) and 30 healthy (9.5 ± 0.6 years). The expanded thoracic cirtometry was organized in two phases: body can move freely, allowing the assessment of postural compensations (free thoracic cirtometry) and with postural movements blocked, facilitating the analysis of movements of the rib cage (conducted thoracic cirtometry). This technique provides systematic observation and recording of body movements, creating descriptive and numeric permanent data. We investigated repeatability and reproducibility. Results: Measures of axial and the xiphoid thoracic cirtometry (free and conducted) showed excellent reliability. All measures showed significant differences between groups. In the DMD boys, free thoracic cirtometry presented a greater value, which probably occurs due to postural compensations. The most commons were movements of head, shoulder and chest. Conclusions: The expanded thoracic cirtometry technique showed excellent reliability and achieved the objectives of determining values related to ribs mobility during deep breath, and to describe compensatory movements. We suggested its use in respiratory evaluation of children with DMD

As doenças genéticas degenerativas atingem milhões de crianças em todo o mundo. Dentre essas doenças, a distrofia muscular, caracterizada como uma doença monogênica poderia ser tratada na sua origem através da terapia gênica. Assim, este estudo propõe à correção da mutação no gene da distrofina, causador da distrofia muscular através de modificações genéticas específicas. A criação de novas classes de terapêuticos que podem desencadear rearranjos no DNA genômico de maneira específica representa uma nova promessa para experimentos em terapia gênica. A tecnologia usada foi o RNA interferente (RNAi) que é utilizada para regulação da expressão gênica pós-transcricional. A Ku 70 é uma das proteínas específicas para a recombinação não homóloga, o RNAi foi usado na tentativa de atenuar a Ku70, prevalecendo então a expressão da recombinação homóloga, com intuito de corrigir a mutação gênica causadora da distrofia muscular em cães. Para tal avaliação, utilizamos linhagens de células tronco (CT) mesenquimais recentemente isoladas, oriundas de populações mononucleares da médula óssea de cães jovens afetados pela distrofia muscular, apresentando bons resultados em cultivo e caracterização. Este trabalho proporciona além da criação de uma nova terapêutica específica para a correção da distrofia muscular, o aumento do conhecimento e entendimento na indução de modificações genômicas em células, no desenvolvimento de novas classes de agentes terapêuticos moleculares que representam um grande potencial em estudos e no tratamento de várias doenças genéticas e infecciosas, degenerativas ou adquiridas. O presente trabalho apresenta métodos de isolamento e caracterização de células tronco-mesenquimais bem como a utilização de RNAi visando promover a recombinação homóloga entre o DNA transfectado e o alvo no DNA genômico. / The degenerative genetic diseases affect millions of children around the world. Among these diseases, muscular dystrophy, characterized as a monogenic disease can be treated at its source through gene therapy. Thus, this study proposes the correction of the gene that causes muscular dystrophy through genetic modification specific. The creation of new classes of therapeutics that can trigger rearrangements in the genomic DNA in a specific manner represents a new promise for gene therapy experiments. The technology will be used by RNA interference (RNAi) and that used to regulate gene expression post-transcriptional. The 70 Ku is a protein specific to the non-homologous recombination, RNAi was used in an attempt to mitigate the Ku70, then the prevailing expression of homologous recombination, aiming to correct the mutation that causes muscular dystrophy in dogs. For this evaluation, we use mesenchymal stem cell lines recently isolated populations derived from bone marrow mononuclear cells of young dogs affected by muscular dystrophy, presenting good results in characterization and culture. This work also provides the creation of a new specific therapy for the correction of muscular dystrophy, increased knowledge and understanding in the induction of genomic changes in cells in the development of new classes of molecular therapeutic agents have great potential in studies and treatment of various genetic and infectious diseases, degenerative or acquired. This paper presents methods for isolation and characterization of mesenchymal stem cells and the use of RNAi to promote homologous recombination between transfected DNA and genomic target DNA.