Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-30. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:18Z : No. of bitstreams: 1 000866601.pdf: 1192960 bytes, checksum: b230a294adc85fc16f62c1b42c3673a6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi verificar o efeito de diferentes meios e tempos de refrigeração sobre o desenvolvimento e expressão gênica de embriões bovinos produzidos in vitro. Para tanto, blastocistos D7 foram divididos em três grupos: controle, embriões mantidos em meio SOFaa, em incubadora de CO2, por 6 e 48h; refrigerados, embriões mantidos a 5 °C, em Meio 199, por 24 (M199-24h) e 48h (M199-48h) ou em meio BotuEmbryo®, por 24 (BE-24h) e 48h (BE-48h). Após a refrigeração, os embriões foram cultivados sob as mesmas condições do grupo controle para avaliação da viabilidade embrionária às 6 e 48h, e das taxas de reexpansão e eclosão, às 24 e 48h, respectivamente. Às 6h de cultivo parte dos embriões foi retirada e armazenada para posterior análise de qPCR e TUNEL. Menor porcentagem (P<0,05) de blastocistos viáveis, às 6 e 48h, foi observada no grupo M199-48 em relação ao grupo controle. A taxa de reexpansão não diferiu entre os embriões refrigerados e o grupo controle, porém, menor (P<0,05) taxa de eclosão foi observada nos grupos M199-48h e BE-48h do que no grupo controle. Maior (P<0,05) porcentagem de células apoptóticas foi observada no grupo BE-48h do que nos grupos controle e BE-24h. Os meios e tempos utilizados não alteraram a expressão dos genes HSPA1A, PRDX1, SOD1 e SLC2A1. Portanto, de modo geral, o meio e o tempo de refrigeração não promoveram efeito potencial adverso sobre a viabilidade embrionária, taxa de reexpansão e eclosão, número de células apoptóticas e expressão gênica, sugerindo o emprego do meio BotuEmbryo®, o qual é disponível comercialmente / This study was carried out to investigate the effects of different media and cooling times on the development and gene expression of in vitro-derived bovine embryos. Therefore, blastocysts D7 were divided into three groups: control, embryos kept in SOFaa medium, under CO2 incubation, for 6, 24 and 48 hours; cooled embryos, kept in Medium 199, for 24 (M199-24h) and 48 hours (M199-48h) or in BotuEmbryo® medium, for 24 (BE-24h) and 48 hours (M199-48h). After cooling, the embryos were cultured under the same conditions used for the control group for evaluation of embryo viability at 6 and 48 hours, and of re-expansion and hatching rates, at 24 and 48 hours, respectively. At 6h of culture part of the embryos was removed and stored for later analysis of qPCR and TUNEL. Low percentage (P<0.05) of viable blastocysts, at 6 and 48 hours, was observed in group M199-48h than for control group. Re-expansion rate did not differ between cooled embryos and control group, however, lower (P<0.05) hatching rate was observed in M199-48h and BE-48h groups than for control group. Higher (P<0.05) percentage of apoptotic cells was found in BE-48h compared with control and BE-24h groups. Media and cooling times used did not alter the expression of genes HSPA1A, PRDX1, SOD1 and SLC2A1. Thus, overall, medium and cooling time did not promoted potential adverse effect on the embryonic viability, re-expansion and hatching rate, number of apoptotic cells and gene expression, suggesting the use of BotuEmbryo® medium, which is commercially available / FAPESP: 13/15905-9

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Coorientador: Alício Martins Júnior / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Resumo: Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / Abstract: This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-29Bitstream added on 2014-06-13T18:31:15Z : No. of bitstreams: 1 souza_dg_me_araca.pdf: 1858727 bytes, checksum: 571362381118ee9810c1695198ec90f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-05Bitstream added on 2014-06-13T19:08:35Z : No. of bitstreams: 1 costa_rs_me_sjrp.pdf: 2335330 bytes, checksum: a362b3c9ff0199411e65f245cbed8903 (MD5) / A criopreservação é uma ferramenta biotecnológica que permite congelar e estocar, por longos períodos células, tecidos, órgãos e embriões; contudo, o sucesso desta tecnologia, para peixes, é bem estabelecida apenas para as células germinativas masculinas, conservando assim, parcialmente material genético de uma população. Desta forma objetivou-se estabelecer um eficaz protocolo de crioconservação para embriões de peixes neotropicais, visando à preservação total da bagagem genética da espécie. Utilizou-se como modelo biológico embriões de Prochilodus lineatus, que foram avaliados quanto a sua sensibilidade ao frio, à toxicidade dos crioprotetores dimetil formamida, dimetil sulfóxido, propileno glicol e glicerol, aos protocolos de resfriamento nos estágios de gastrulação e organogênese com seis e vinte somitos e a vitrificação nos estágios de organogênese com seis e vinte somitos. As amostras foram fixadas em solução de paraformaldeído a 4% e glutaraldeído a 2% em tampão fosfato Sorensen 0,2 M pH 7,2, incluídos em metacrilato glicol, seccionados a 3 e 5 µm de espessura e corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidína, P.A.S. e metanil yellow. A fase embrionária de organogênese com 20 somitos foi a mais resistente ao frio e a toxicidade dos crioprotetores. Apesar das altas taxas de larvas vivas nos tratamento de resfriamento, em nenhum dos protocolos propostos obteve-se êxito na preservação das estruturas embrionárias, sendo verificado graves danos morfológicos como corpo reduzido e com sinuosidades, nadadeiras com crescimento desordenado das células, alta concentração de células necróticas na região do encéfalo, má-formação das vesículas ópticas e óticas, má-formação das narinas, fusão desordenada dos mioblastos, retração do vitelo, espaços entre as células provocadas... / Cryopreservation is a biotechnological tool that allows you to freeze and store cells, tissues, organs and embryos for long periods; however, the success of this technology, to the fish, it is established only from the male germ cells, preserving, partly the material of a population. Therefore the purpose was to establish an effective protocol of cryopreservation to embryos of neotropical fish, in order to preserv all the genetic load of the species. As biological model of this research it was used Prochilodus lineatus type of embryos, which were evaluated regarding to their sensibility to cold temperatures, the toxicity of cryoprotectants dimethyl formamide, dimethyl sulfoxide, propylene glycol and glycerol, also the protocols of cooling down on the gastrulation and organogenesis stages with six and twenty somites, and the vitrification on the organogenesis stages with six and twenty somites. The samples were fixed in solutions with 4% of paraformaldehyde and 2% of glutaraldehyde, Sorensen phosphate with 0.2 M pH 7.2, included in glycol methacrylate, sectioned at 3 and 5 µm of thickness and stained with hematoxylin-eosin, Blue toluidine, PAS and Metanil Yellow. The embryonic phase of organogenesis with 20 somites was the most resistant to cold and toxicity of cryoprotectants. Despite of the high rates of alived larvae founded in the cooling treatment, none of the proposed protocols succedded in the preservation of the embryonic structures, it could be seen severe morphological damages as reduction in the body and sinuous in the forms, with fins disorderly cell growth, high concentration of necrotic cells on region of the brain, malformation of the ear and eyes vesicle, malformation of the nostrils, disorderly fusion of the myoblasts, retraction of the yolk, spaces between cells caused by the formation of ice crystals... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-14Bitstream added on 2014-06-13T20:10:41Z : No. of bitstreams: 1 000739343.pdf: 2203610 bytes, checksum: ac8c342ce3d51256ef5b4bf0a36feb39 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / mortalidade embrionária em bovinos, entre 15 e 19 dias de prenhez, pode ser promovida pela liberação de PGF2 endometrial. A síntese de PGF2 é inibida pela suplementação com compostos ricos em ácido linoléico, como a semente de girassol. Assim, objetivou-se avaliar o efeito e os mecanismos pelos quais a suplementação com semente de girassol atua na performance reprodutiva de fêmeas bovinas de corte. Hipotetizou-se que tal suplementação promove um incremento na taxa de concepção de receptoras de embriões produzidos in vitro submetidas à TETF e que tal efeito decorra de modificações na composição lipídica plasmática e endometrial, alterações na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides e/ou modificações no número e/ou morfometria das glândulas endometriais. No Experimento 1, novilhas mestiças zebuínas submetidas ao protocolo de TETF suplementadas com semente de girassol, por 22 dias a partir da remoção do dispositivo de progesterona, apresentaram maior taxa de concepção em relação ao grupo controle (55,66% vs. 36,94%; P < 0,01). No Experimento 2, vacas Nelore suplementadas com semente de girassol apresentaram maiores concentrações plasmáticas de colesterol total, LDL e HDL; modificações na composição lipídica endometrial e alterações na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides. Conclui-se que a suplementação com semente de girassol aumenta a taxa de concepção por modificar a composição lipídica plasmática e endometrial, a expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides e número... ( / Embryonic mortality in cattle, between 15 and 19 days of pregnancy, can be promoted by the release of endometrial PGF2. Synthesis of PGF2 is inhibited by supplementation with compounds rich in linoleic acid such as sunflower seed. This study aimed to evaluate the effects and the mechanisms by which supplementation with sunflower seed acts on reproductive performance of beef cows. It was hypothesized that such supplementation promotes an increase on conception rate of in vitro-produced embryos subjected to FTET; and that this effect arises from changes in plasma lipid composition and endometrial changes in the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids and/or changes in the number and/or endometrial gland morphology. In Experiment 1, zebu crossbred heifers submitted to the FTET protocol supplemented with sunflower seed, for 22 days from the removal of the progesterone device, showed higher conception rate in the control group (55.66% vs. 36.94% ; P < 0.01). In Experiment 2, Nelore cows supplemented with sunflower seed showed higher plasma concentrations of total cholesterol, LDL and HDL, changes in endometrial lipid composition and changes in the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids. It was concluded that supplementation with sunflower seeds increases the conception rate by modifying the lipid composition of the plasma and the endometrium, the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids and number and morphometry of the endometrial glands / FAPESP: 09/09234-9

Submitted by IVAN VERDUSSEN DE OLIVEIRA NETO null (ivanverdussen@hotmail.com) on 2017-06-20T20:32:18Z No. of bitstreams: 1 Diss_Ivan com ficha catalográfica.pdf: 967546 bytes, checksum: 271829e746e3d0d011517c1d32820c8f (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-21T12:29:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveiraneto_iv_me_bot.pdf: 967546 bytes, checksum: 271829e746e3d0d011517c1d32820c8f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T12:29:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveiraneto_iv_me_bot.pdf: 967546 bytes, checksum: 271829e746e3d0d011517c1d32820c8f (MD5) Previous issue date: 2017-04-27 / Nos programas de transferência de embriões um dos principais entraves são a disponibilidade de receptoras aptas por doadora de embrião. Sendo assim, estudos estão sendo desenvolvidos utilizando de diferentes protocolos hormonais para utilização nas receptoras em programas de TE . O objetivo do presente trabalho foi sincronizar éguas receptoras de embriões, independentes da fase do ciclo estral e da atividade ovariana, com o ciclo da doadora, maximizando a utilização das receptoras no programa de transferência de embriões (TE). Foram utilizadas 160 éguas, que foram separadas em grupos de 20 animais conforme a fase do ciclo estral: 1) éguas acíclicas em anestro e transição, 2) cíclicas em estro com folículos < 35 mm, 3) em estro com folículos ≥ 35 mm, 4) em diestro com CL < 5 dias e 5) em diestro com CL ≥ 5 dias. Inicialmente, todos os animais receberam uma aplicação de 10mg de dinoprost trometamina e 1 aplicação de 17β estradiol por 4 dias consecutivos seguido por uma aplicação de 300 mg de altrenogest. Posteriormente, o protocolo foi modificado e realizado em mais um grupo 6) com uma dose de 10mg de dinoprosttrometamina no segundo dia do tratamento. Os embriões foram transferidos de três a oito dias após a aplicação do altrenogest. O diagnóstico de gestação foi efetuado 5 a 7 dias após a TE. Com apenas uma aplicação de prostaglandina no primeiro dia de tratamento todos os animais apresentaram edema uterino acentuado e taxas de prenhez superior a 70%, entretanto as receptoras que ao início do tratamento apresentavam a presença de CL < 5 dias mostraram um edema uterino significativamente menor que os demais grupos e índices de gestação de 40%, inferiores aos observados nos demais grupos. Entretanto, quando este grupo foi submetido a duas aplicações de prostaglandina nos dois primeiros dias do tratamento as taxas de gestação aumentaram para 70%. Baseado nos dados obtidos pode-se concluir que boas taxas de prenhez de receptoras de embrião estão relacionadas a uma eficiente sensibilização uterina ao estrógeno que contribui para a posterior ação progesteronica fundamental para obtenção da sincronização do ambiente uterino. / In embryo transfer programs, one of the main obstacles is the availability of recipients suitable for embryo donors. Thus, studies are being developed using different hormonal protocols for use in recipients in ET programs. The objective of the present study was to synchronize the uterine environment of embryo recipient mares, independent of the estrous phase and ovarian activity, with the donor cycle, maximizing the use of recipients in the embryo transfer program. A total of 160 mares were used, which were separated into groups of 20 animals according to the estrous phase: acyclic mares in anestrus and transition, cyclic estrus with follicles <35 mm, estrus with follicles ≥ 35 mm, in right ventricle with CL <5 Days and in right arm with CL ≥ 5 days. Initially, all animals received an application of 10 mg of dinoprost tromethamine and 1 application of 17β estradiol for 4 consecutive days followed by a 300 mg application of altrenogest. Subsequently, the protocol was modified and another 10mg dose of dinoprost tromethamine was added on the second day of treatment. The embryos were transferred three to eight days after the application of altrenogest. The diagnosis of gestation was made 5 to 7 days after ET. With only one application of prostaglandin on the first day of treatment, all the animals had marked uterine edema and pregnancy rates higher than 70%; however, those receiving at the start of treatment had a CL <5 days showed significantly lower uterine edema than The other groups and gestation rates of 40%, lower than those observed in the other groups. However, when this group underwent two prostaglandin applications on the first two days of treatment, gestation rates increased to 70%. Based on the data obtained it can be concluded that good pregnancy rates of embryo recipients are related to an efficient uterine sensitization to estrogen that contributes to the subsequent progesterone action fundamental to obtain the synchronization of the uterine environment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:38:27Z : No. of bitstreams: 1 cabrera_t_me_botfmvz.pdf: 238669 bytes, checksum: af95e99a0d314d942c43862f9ad27ccd (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o intuito de estender um aceitável intervalo entre a ovulação da receptora e dia da transferência de embrião (TE), o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido mefenâmico na capacidade de manutenção da função do corpo lúteo em receptoras que se encontravam no dia 10 do ciclo (D10), bem como verificar as taxas de prenhez após a transferência do embrião. Foram transferidos 48 embriões para receptoras no dia 10 do ciclo divididos em três grupos experimentais: Grupo 1 controle (n=18); Grupo 2 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral desde o oitavo até o décimo sexto dia após a ovulação; Grupo 3 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral no dia da transferência e por mais dois dias. Seis dias após a transferência dos embriões foi confirmada a gestação por ultrassonografia e repetida aos 30 dias. Para análise das porcentagens de gestação e classificação uterina no dia da TE foi utilizado o Teste de Fisher e para os valores obtidas da dosagem sérica de progesterona foi utilizado o teste de ANOVA seguido pelo teste de Tukey. O grupo controle apresentou 33,3% de taxa de gestação (6/18). Os grupos 2 e 3 apresentaram 40,0% (6/15) e 33,3% (5/15), respectivamente. Nas éguas não gestantes, os três grupos apresentaram queda progressiva na concentração média de progesterona, significativamente a partir do 12° dia pós ovulação, não havendo interferência no tempo da ocorrência da luteólise. As taxa de prenhez em receptoras D10 apresentaram índices satisfatórios em receptoras com bom tônus uterino e cervical no dia da TE. Conclui-se que o ácido mefenâmico não impediu a luteólise e não melhorou as taxas de prenhez das receptoras no dia 10 do ciclo estral / In order to extend an acceptable interval between ovulation of the recipient and the day of the embryo transfer (ET), the purpose of this study was to evaluate the effect of mefenamic acid in the ability to maintain corpus luteum function in recipient mares that were on Day 10 (D10) of the estrous cycle, and to verify the pregnancy rate after embryo transfer. 48 embryos were transferred into recipients on Day 10 of the cycle divided into three experimental groups: Group 1 control (n = 18); Group 2 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally since the eighth until the tenth sixth days after ovulation; Group 3 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally on day of transfer and for two more days. Six days after ET, pregnancy was confirmed by ultrasound and repeated at 30 days. For analysis of percentages of pregnancy and classification uterine on ET day was used Fisher's exact test and the values obtained from the serum progesterone was used ANOVA followed by Tukey test.The control group showed a 33.3% pregnancy rate (6/18). Groups 2 and 3 presented 40.0% (6/15) and 33.3% (5/15), respectively. In non-pregnant mares, all three groups showed a progressive decrease in the mean concentration of progesterone significantly from day 12 post ovulation, without interference in the time of the occurrence of luteolysis. The pregnancy rate in recipients on Day 10 showed satisfactory rates in recipients with good uterine tone and neck on the day of ET. It is concluded that mefenamic acid did not prevent luteolysis and did not improve pregnancy rates of recipients on day 10 of the estrous cycle

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:39:02Z : No. of bitstreams: 1 rola_ld_me_jabo.pdf: 1100112 bytes, checksum: e5705e1710fde07da43891e94919e554 (MD5) / Assim como outras espécies brasileiras de vida livre, os cervídeos têm sofrido pressões sobre seu habitat, o que provoca segregação entre populações, diminuição de troca gênica e de diversidade genética, aumento da endogamia, e um maior risco de extinção. A produção in vitro de embriões (PIVE) tem ganhado destaque como uma ferramenta a ser utilizada nos programas de conservação de espécies selvagens in situ e ex situ. Entre as etapas da PIVE, a maturação in vitro (MIV) assume grande importância, pois o seu sucesso pode garantir a melhora nas taxas de produção de embriões. Assim, os objetivos do presente trabalho foram: avaliar viabilidade do protocolo de estimulação ovariana para a aspiração folicular, a eficiência da laparoscopia para a aspiração folicular, e a maturação nuclear e a distribuição mitocondrial em oócitos maturados in vitro para a espécie M. gouazoubira. Para isso, foram utilizadas cinco fêmeas, submetidas a repetidas estimulações ovarianas com intervalos de 30 dias. Os oócitos aspirados foram classificados morfologicamente de acordo com a qualidade, submetidos à maturação in vitro por 24 horas e, posteriormente, corados para a avaliação da distribuição mitocondrial (Mitotracker Red CMXRos); e do estágio de maturação nuclear (Hoescht 33342). Foram realizados 14 procedimentos cirúrgicos para a colheita de 94 oócitos de fêmeas superestimuladas. A média de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos colhidos por cirurgia foi, respectivamente, de 17,07±9,12, 13,54±6,64 e 7,15±3,72. Dos oócitos maturados in vitro, 64,52% alcançaram a MII e a classificação da distribuição mitocondrial não foi conclusiva. Houve ativação espontânea por partenogênese em 16,13% dos oócitos. Ainda, foi realizada avaliação de... / The cervids, as well as other free-living brazilian species, have suffered pressures on their habitat, causing segregation between populations and reduced genetic exchange, which may decrease the genetic diversity and generate increased inbreeding and extinction risk. In vitro embryo production (IVEP) has been highlighted as a tool to be used in wild species conservation programs in in situ and ex situ. The maturation process has a great importance among the steps of IVEP, and its success can ensure an improvement in the rate of production of embryos. The objectives of this study were to assess feasibility of the protocol of ovarian stimulation for ovum pick, the efficiency of laparoscopy for oocyte retrieval, and the nuclear maturation and mitochondrial distribution in oocytes matured in vitro for the species M. gouazoubira. Thus, we used five females, submitted to repeated stimulation with intervals of 30 days. After the visualization of the ovaries, the visible follicles were counted and punctured by laparoscopy on day eight (D8). The aspirated oocytes were classified morphologically according the quality, subjected to in vitro maturation for 24 hours and then stained for the evaluation of mitochondrial distribution (Mitotracker Red CMXRos) and nuclear maturation stage (Hoescht 33342). Fourteen surgical procedures were performed on overstimulated females and 94 oocytes were collected in total. The average number of visualized follicles, aspirated follicles, and harvested oocytes was equal to 17.07±9.12, 13.54±6.64 e 7.15±3.72, respectively. Of the in vitro matured oocytes, 64.52% reached the MII stage and 67.74% were classified with homogeneous mitochondrial distribution. There was spontaneous activation by parthenogenesis in 16.13% of the oocyte. Furthermore, 21 non-matured oocytes were evaluated and of these, 81%... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:38:28Z : No. of bitstreams: 1 000748839.pdf: 1424826 bytes, checksum: 8b005873ea1e668e7352dd202f004baf (MD5) / A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo “Synthetic Oviduct Fluid” (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob... / In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:38:28Z : No. of bitstreams: 1 guardieiro_mm_me_botfmvz.pdf: 504146 bytes, checksum: 07979740dad67abc78d3a31a2e3dde43 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis, degenerados e ovócitos não fecundados colhidos. Apesar do grupo C ter mostrado maior reposta superovulatória que o G (15,7 ± 1,2 vs 18,0 ± 1,3 CL; P = 0,06), os embriões do Grupo C apresentaram maior taxa de eclosão, independentemente do método de criopreservação, às 48 h (33,1 ± 4,0%; n = 148 vs 17,3 ± 3,3%; n = 137; P = 0,009) e às 72 h (44,3 ± 4,2%; n = 148 vs 30,9 ± 4,0%; n = 137; P = 0,04) de cultivo do que os do grupo G. Além disso, os embriões vitrificados e congelados apresentaram taxas similares de eclosão (P > 0,10). Nas condições do presente estudo, o suplemento composto com gordura protegida não afetou a resposta superestimulatória e a produção de embriões, e os embriões do Grupo Controle foram mais tolerantes à criopreservação. / The aim of the current study was to evaluate the superovulatory response and embryo production, as well as embryo resistance to cryopreservation through freezing or vitrification of embryos from Nellore heifers supplemented with rumen-protected fat, Megalac-E®. Forty heifers kept in pasture were randomly divided into two experimental groups according to supplement source (G = supplement with rumen-protected fat and C = Control, without fat supplementation). The supplements were formulated to be isocaloric and isoproteic. Each female underwent both treatments in a cross-over design with approximately 67 d (first replicate) and 70 d (second replicate). After 50 d of feeding, the emergence of the wave was synchronized with the aid of hormones to iniciate the superovulation protocol. The embryos recovered were frozen or vitrified and subsequently in vitro embryo development evaluation was accomplished. There was no difference between G and C groups (P > 0.10) regarding superstimulatory response, number of total embryos/ova, viable embryos, degenerate embryos, or unfertilized oocytes recovered. However, group C had a greater superovulatory response than G (15.7 ± 1.2 vs 18.0 ± 1.3 CL; P = 0.06). Group C embryos presented greater hatching rate, independently of the cryopreservation method, at 48 h (33.1 ± 4.0%; n = 148 vs 17.3 ± 3.3%; n = 137; P = 0.009) and at 72 h (44.3 ± 4.2%; n = 148 vs 30.9 ± 4.0%; n = 137; P = 0.04) of in vitro culture. Moreover, vitrified and frozen embryos had similar hatching rate (P > 0.10). Under the conditions of the present study, supplementation with protected fat did not affect superstimulatory response, quantity or quality of embryos. However embryos from the Control group were more tolerant to cryopreservation.