A presente investigação científica visou estudar o desenvolvimento do Aparelho Respiratório de bovinos, durante o período embrionário, através de técnicas empregadas em microscopias de luz transmitida e eletrônica de transmissão. Em nossos resultados pudemos observar a formação do tubo laringotraqueal em embriões apresentando idade gestacional estimada de 20 / 21 dias (CR 9,0 mm), sendo sua parede formada por epitélio constituído de várias camadas de células apoiado em mesênquima. No interior do pulmão, as áreas subjacentes ao epitélio apresentam mesênquima condensado e áreas mais afastadas mesênquima frouxo, sendo que neste último já estão presentes os vasos sanguíneos, contendo células próprias em seu interior. As células mesenquimais apresentaram formas irregulares, com aspecto estrelado ou fusiforme estando unidas por desmossomos, locais onde o citoesqueleto se prende a membrana celular, formando um elo de ligação. A bifurcação da porção caudal da traquéia nos brônquios principais é simultânea ao surgimento do brônquio traqueal, ocorrendo em embriões com idade gestacional de 28 dias (CR 12,0 mm). / The present study aims at investigating the development of the respiratory system in bovines during embryonic phase, using techniques of transmitted light microscopy and electronic transmissions. The results show the development of the laryngotracheal tube in embryos at approximately 20 / 21 days of gestation (CR 9.0 mm), being the walls of the tube made of epithelium with several layers of cells supported by mesenchyme. Inside the lung, the areas next to the epithelium show a condensed mesenchyme and further, there is a loose mesenchyme where blood vessels containing cells of their own kind can be observed. The mesenchymal cell displays irregular shapes, stellate or fusiform, being united by desmosomes, where the cytoskeleton is attached to the cell membrane creating a link. The bifurcation of the tail end of the trachea in the main bronchi is concomitant to the arising of the tracheal bronchus, occurring in embryos at 28 days of gestation (CR 12.0 mm).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-03Bitstream added on 2014-06-13T20:09:12Z : No. of bitstreams: 1 farias_et_me_botfca.pdf: 343928 bytes, checksum: d998c3f6cbfb1c91556f0445b48bd677 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A germinação de sementes de café (Coffea arabica L.) é lenta e irregular, controlada por eventos que ocorrem, simultaneamente, no embrião e no endosperma. Embora os referidos eventos estejam determinados, ainda são necessários estudos sobre a fisiologia molecular, para auxiliar na avaliação da qualidade fisiológica das sementes durante a germinação. O objetivo do trabalho foi realizar estudos fisiológicos e moleculares durante a germinação de sementes embebidas em água e em ácido abscísico (ABA) na concentração de 1000 μM. Durante o trabalho foi determinado o teor de água, a curva de embebição, a germinação, o crescimento do embrião e a expressão dos genes associados com o crescimento do embrião e com a degradação do endosperma micropilar. Para tanto, embriões e os endospermas micropilares foram isolados para a extração de RNA total e síntese de cDNA. “Primers” específicos foram desenhados para o estudo da expressão gênica em PCR em tempo real. Foi estudada a expressão dos genes actina, ciclina e α-expansina, associados ao crescimento do embrião, e α-galactosidase, β-manosidase e endo-β-mananase, associados à degradação do endosperma micropilar. A curva de embebição apresentou um padrão trifásico. A primeira semente de café germinou com cinco dias de embebição e 50% de germinação ocorreram no décimo dia de embebição. A expressão dos genes associados com o crescimento do embrião, tais como actina, α-expansina e quinase dependente de ciclina, aumentou durante a germinação em água e inibiu parcialmente a expressão destes genes quando tratados com ABA. A expressão de β-manosidase e endo-β-mananase aumentou durante a embebição em água e ABA inibiu completamente a expressão. No entanto, α-galactosidase parece ter a expressão mais constitutiva durante a germinação em água e é menos influenciada por ABA, em comparação com outras enzimas estudadas / Germination of coffee (Coffea arabica L.) seed is slow and uneven. The germination is a net result of events that occur simultaneously in the embryo and endosperm under the control of ABA. The aim of the study was to perform physiological and molecular studies during germination of seeds imbibed in water and 1000 μM abscisic acid (ABA). We studied the expression of the genes ciclin, α-expansin and cyclin-dependent of kinase in the embryo and α-galactosidase, β-mannosidase, endo-β-mannanase in the micropylar endosperm. The first coffee seed germinate at five days of imbibition and 50% germinate at tenth day of imbibition. Coffee embryo grew inside the seed pior radicle protrusion and ABA inhibited the embryo grow as well as radicle protrusion. The expression of the genes associated with the growth of the embryo such as ciclin, α-expansin and cyclin-dependent of kinase increased during germination and ABA partially inhibited the expression of these genes. The expression of β-mannosidase and endo-β-mannanase increased during imbibitions in water and ABA completely inhibited its expression. However, α-galactosidase seems to have a more constitutive expression during germination in water and it is less affected by ABA as compared with other enzymes studied

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:19:51Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_wcl_dr_jabo.pdf: 604780 bytes, checksum: 1cec49a81cce36885b26b13513f4bdf7 (MD5) / O fornecimento de CO2 durante as primeiras 240 horas de incubação melhora os resultados de incubação e pós-eclosão, porém o seu uso em diferentes idades de matriz é pouco compreendido. Portanto, foram realizados três experimentos com os seguintes objetivos: O primeiro objetivo foi avaliar o efeito de duas idades de matriz (36 e 55 semanas) e três concentrações de CO2 (controle, 1,0% e 1,4%) durante as primeiras 240 horas de incubação sobre o desenvolvimento embrionário de frangos de corte. O segundo objetivo foi avaliar o desempenho, rendimento de órgãos, morfologia intestinal, rendimento de carcaça e índice cardíaco de frangos de corte oriundos de duas idades de matriz e três concentrações de CO2. Finalmente, o objetivo do terceiro estudo foi avaliar os efeitos da incubação com CO2 (aumento gradual até 1,5%) durante 10 dias (0 - 240 horas de incubação) na vascularização da membrana corioalantóide (CAM), nas variáveis sanguíneos do embrião e pós-eclosão e nos resultados de incubação de frangos de corte. Os resultados mostraram que a exposição ao CO2 promoveu alterações no desenvolvimento embrionário e na qualidade pós-eclosão. A idade de matriz deve ser considerada no processo de incubação com CO2. A idade de matriz e a exposição ao CO2 nas primeiras 240h de incubação exerceramm influencia no desempenho pós-eclosão. A exposição gradual de 1,5% de CO2 nas primeiras 240 horas de incubação aumenta a vascularização da CAM, altera as variáveis sanguíneas, influencia negativamente o desenvolvimento embrionário e o metabolismo pós-eclosão. Em conclusão, a interação idade de matriz e concentração de até 1,4% de CO2, na primeira fase de incubação afeta o metabolismo embrionário, principalmente em matriz com idade de 55 semanas. A exposição a 1,5% CO2 aumenta a vascularização da CAM, mas afeta negativamente o desenvolvimento embrionário / Supplementing CO2 during the first 240 hours of incubation has been proposed for improving incubation and post hatch performance, but its use on eggs coming from breeders of different ages needs to be better understood. Therefore, three experiments were carried out with the following objectives: The first objective was to evaluate the effects of two breeder ages (36 and 55 weeks) and three concentrations of CO2 (control, 1,0% and 1,4%) during the first 240 hours of incubation on the embryonic development of broilers. The second objective was to evaluate the performance, organ performance, intestinal morphology, carcass yield, and cardiac index of broilers from two breeder ages and three CO2 concentrations. Finally, the objective of the third experiment was to evaluate the effects of incubation with increasing CO2 concentration up to 1,5% for 240 hours of incubation on the vascularization of the chorioallantoic membrane (CAM) in embryogenic and post-hatch blood parameters, and the results of chickens at post hatch. The results showed that exposure to CO2 promoted changes in embryonic development and post-hatching quality. The old breeder must be considered in the process of incubation with CO2.The breeder ages and exposure to CO2 in the first 240h incubation exert influence in post-hatching performance. The gradual exposure of 1,5% of CO2 in the first incubation phase (240 hours) increased vascularization of the CAM, altered blood parameters, adversely influenced embryonic development and metabolism post-hatching. In conclusion, the interaction of breeder age and CO2 concentration up to 1,4% in the first stage of incubation affects the embryonic metabolism, especially in a old breeder at 55 weeks of age. The exposure to 1,5% CO2 increases vascularization of CAM and negatively affects embryonic development

Orientador: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Banca: Fernanda C. L. Alvarenga / Banca: José Buratini Junior / Resumo: No quimerismo por agregação, células de embriões oriundos de fertilizações distintas se distribuem, aleatoriamente, para formar um único indivíduo. Entretanto, a formação de embriões tetraploides (4n), por eletrofusão, e o posterior quimerismo com um embrião diploide (2n) deve resultar em um embrião quimérico, porém com massa celular interna (MCI) não aleatória, isto é, exclusivamente 2n. Desta forma, a agregação de um embrião zebuíno (4n, genótipo termorresistente) com um taurino (2n, genótipo termossensível) resultaria em uma MCI exclusivamente ―taurina‖, porém com o trofectoderma (futuro elemento extraembrionário, isto é, o córion) de maior composição zebuína, podendo constituir um modelo para estudos de adaptação - durante a gestação - deste embrião/feto em clima tropical. O objetivo do presente trabalho foi padronizar a produção de embriões 4n da raça Nelore (Bos indicus) bem como o quimerismo por agregação com embriões mestiço Bos taurus (2n) com Bos indicus (4n). Oócitos de vacas Nelore provenientes de abatedouro foram maturados, fertilizados com sêmen de touros Nelore ou Holandês Preto e Branco e cultivados em meio SOF. Embriões da raça Nelore, em estágio de 2 células (30 h pós-inseminação, hpi) e com o eixo interblastômeros bem definido, foram selecionados para o procedimento de eletrofusão (equipamento ECM 830-BTX, Harvard Apparatus) com o intuito de produzir embriões tetraploides. Para este procedimento, foram testados alguns parâmetros, de acordo com o número de pulsos (1 ou 2), voltagem (0,40; 0,50; 0,75; 1,0; 1,4; 5,0 kV/cm) e duração do eletrochoque (20; 25; 50; 60 μs). Embriões zebuínos 4n, formados após a eletrofusão, e embriões mestiços taurinos 2n, ambos em estágio de 8 a 16 células (72 hpi), foram submetidos a tratamentos com protease... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The embryonic chimeras production by aggregation allows embryonic cells from two distinct fertilizations to be randomly distributed to compose a single individual. However, the formation of tetraploid embryo (4n) by electrofusion and its subsequent chimerism with a diploid embryo (2n) should result in a chimeric conceptus, whose inner cell mass (ICM) would be entirely 2n. Hence, the aggregation of a zebu embryo (4n, thermotolerant) with a European breed embryo (2n, thermosensitive or ―taurine‖) would result in an exclusively taurine ICM, but the trophectoderm (future extraembryonic components, i.e. chorion) would be mostly from zebu embryo, which could support taurine embryo/fetus in a different way - during pregnancy - under tropical environment. The aim of this study was to standardize the production of 4n Nelore embryos (Bos indicus) and the production of embryonic chimeras by aggregation of crossbred Bos taurus (2n) with Bos indicus (4n) embryos. Nelore cows ovaries were collected from abattoir and oocytes were obtained, matured, fertilized with semen from Nelore or Holstein bulls, and cultured in SOF (synthetic oviduct fluid). Two-cell stage Nelore embryos (30 hours post insemination or hpi), with a clearly visible interblastomeric axis, were selected for electrofusion procedure (ECM 830-BTX, Harvard Apparatus) to produce tetraploid embryos. For this purpose, some parameters were tested according to the number of pulses (1 or 2), voltage (40, 50, 75, 100, 140, 500 V) and time length of electroshock (20, 25, 50, 60 μs). Nelore tetraploid embryos produced after electrofusion and diploid crossbred taurine embryos, both on 8 to 16-cells stage (72 hpi) were subjected to protease treatment to remove the zona pellucida, and subsequently treated with the agglutinant agent... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Danilo Pedro Streit Junior / Resumo: A criopreservação é uma ferramenta biotecnológica que permite congelar e estocar, por longos períodos células, tecidos, órgãos e embriões; contudo, o sucesso desta tecnologia, para peixes, é bem estabelecida apenas para as células germinativas masculinas, conservando assim, parcialmente material genético de uma população. Desta forma objetivou-se estabelecer um eficaz protocolo de crioconservação para embriões de peixes neotropicais, visando à preservação total da bagagem genética da espécie. Utilizou-se como modelo biológico embriões de Prochilodus lineatus, que foram avaliados quanto a sua sensibilidade ao frio, à toxicidade dos crioprotetores dimetil formamida, dimetil sulfóxido, propileno glicol e glicerol, aos protocolos de resfriamento nos estágios de gastrulação e organogênese com seis e vinte somitos e a vitrificação nos estágios de organogênese com seis e vinte somitos. As amostras foram fixadas em solução de paraformaldeído a 4% e glutaraldeído a 2% em tampão fosfato Sorensen 0,2 M pH 7,2, incluídos em metacrilato glicol, seccionados a 3 e 5 µm de espessura e corados com hematoxilina-eosina, azul de toluidína, P.A.S. e metanil yellow. A fase embrionária de organogênese com 20 somitos foi a mais resistente ao frio e a toxicidade dos crioprotetores. Apesar das altas taxas de larvas vivas nos tratamento de resfriamento, em nenhum dos protocolos propostos obteve-se êxito na preservação das estruturas embrionárias, sendo verificado graves danos morfológicos como corpo reduzido e com sinuosidades, nadadeiras com crescimento desordenado das células, alta concentração de células necróticas na região do encéfalo, má-formação das vesículas ópticas e óticas, má-formação das narinas, fusão desordenada dos mioblastos, retração do vitelo, espaços entre as células provocadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation is a biotechnological tool that allows you to freeze and store cells, tissues, organs and embryos for long periods; however, the success of this technology, to the fish, it is established only from the male germ cells, preserving, partly the material of a population. Therefore the purpose was to establish an effective protocol of cryopreservation to embryos of neotropical fish, in order to preserv all the genetic load of the species. As biological model of this research it was used Prochilodus lineatus type of embryos, which were evaluated regarding to their sensibility to cold temperatures, the toxicity of cryoprotectants dimethyl formamide, dimethyl sulfoxide, propylene glycol and glycerol, also the protocols of cooling down on the gastrulation and organogenesis stages with six and twenty somites, and the vitrification on the organogenesis stages with six and twenty somites. The samples were fixed in solutions with 4% of paraformaldehyde and 2% of glutaraldehyde, Sorensen phosphate with 0.2 M pH 7.2, included in glycol methacrylate, sectioned at 3 and 5 µm of thickness and stained with hematoxylin-eosin, Blue toluidine, PAS and Metanil Yellow. The embryonic phase of organogenesis with 20 somites was the most resistant to cold and toxicity of cryoprotectants. Despite of the high rates of alived larvae founded in the cooling treatment, none of the proposed protocols succedded in the preservation of the embryonic structures, it could be seen severe morphological damages as reduction in the body and sinuous in the forms, with fins disorderly cell growth, high concentration of necrotic cells on region of the brain, malformation of the ear and eyes vesicle, malformation of the nostrils, disorderly fusion of the myoblasts, retraction of the yolk, spaces between cells caused by the formation of ice crystals... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-17T11:52:18Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tárik Kassem Saidah - 2015.pdf: 2186450 bytes, checksum: ff29c97a86ff6cb315b6365052160a3f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-17T11:54:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tárik Kassem Saidah - 2015.pdf: 2186450 bytes, checksum: ff29c97a86ff6cb315b6365052160a3f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-17T11:54:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tárik Kassem Saidah - 2015.pdf: 2186450 bytes, checksum: ff29c97a86ff6cb315b6365052160a3f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-09-20 / Aims: To make a review article on ectopic pregnancy (EP) in high complexity fertilization, to define the epidemiological and reproductive profile of women carriers of EP, to evaluate the prevalence of EP after in vitro fertilization (IVF) and to verify if the transfer of frozen embryos reduces the rates of EP. METHODS: All fresh and frozen embryos transfers obtained through IVF via ICSI conducted between January 2007 and December 2014 were reviewed. Clinical pregnancies characterized by the visualization of an intrauterine gestational sac or ectopic pregnancy were included in the evaluation. Ectopic pregnancies were diagnosed by ultrasonography and / or laparoscopy. The prevalence of EP and the comparison of the rates between fresh and frozen embryos transfers were analyzed by logistic regression using the SPPS software version 15.0. Results: Of the 933 embryos obtained through IVF that resulted in clinical pregnancies, 19 cases of EP were found. The fertilization with fresh embryos resulted in 772 clinical pregnancies (group I), and 161 with frozen embryos (group II). The global prevalence of EP was 2.02%. When considered by group, group one had 16 EP that represented a rate of 2.1% and group two had a rate of 1.9%. There was a lower rate of ectopic pregnancy with frozen embryos in comparison to fresh embryos, although this did not demonstrate statistical significance (p=0.86)(OR=0.89, IC=0.258-3.11). CONCLUSIONS: The reproductive profile of patients that exhibit EP was of young female with young partner, good ovarian response and that had more than 3 embryos transferred. The prevalence of EP in this study was 2.02. It was observed that there was no significant difference in the occurrence of EP when both groups, frozen and fresh embryos, were compared. / Objetivos: fazer um artigo de revisão sobre gestação ectópica (GE) em fertilização de alta complexidade, definir o perfil epidemiológico e reprodutivo das mulheres portadores de GE, avaliar a prevalência de GE pós-fertilização de alta complexidade e verificar se a transferência de embriões congelados reduz as taxas de GE. Métodos: foram revisadas todas as transferências de embriões frescos e congelados realizadas através de fertilização in vitro pela técnica de injeção intracitoplasmática de espermatozoides no período compreendido entre janeiro de 2007 a dezembro de 2014. Foram incluídas as gestações clínicas, sendo consideradas as gestações com visualização de saco gestacional intraútero e gestações ectópicas. As gestações ectópicas foram diagnosticadas por ultrassonografia e/ou laparoscopia. A prevalência de ectópica e a comparação das taxas entre os grupos de embriões frescos e congelados foram verificadas por meio da análise de regressão logística utilizando o programa Software SPSS versão 15.0. Resultados: foram analisadas 933 fertilizações in vitro que resultaram em gestações clínicas e verificou-se 19 casos de gestações ectópicas. As fertilizações com embriões frescos totalizaram 772 (grupo I) e com embriões congelados 161 (grupo 2). A prevalência de gestação ectópica foi de 2,02 %. No grupo I ocorreram 16 gestações ectópicas representando uma taxa de 2,1 % das fertilizações, no grupo 2 a taxa foi de 1,9 %. Uma menor taxa de gestação ectópica com embriões congelados foi verificada em comparação com embriões frescos, porém, não apresentou significância estatística (p=0,86) (OR= 0,89, IC 0,258 – 3,11). Conclusões: o perfil reprodutivo das pacientes que apresentaram GE foi de mulheres jovens com parceiros jovens, com boa resposta ovariana e que tiveram mais de três embriões transferidos. A prevalência de GE verificada no presente estudo foi de 2,02 %. Observou-se que não houve diferença significativa quanto à GE quando foram comparadas as transferências de embriões frescos com os congelados.

O presente estudo avaliou os efeitos letais e subletais de dipirona sódica e paracetamol para organismos de água doce. O efeito letal foi determinado pela realização de ensaios agudos com D. similis, C. dubia, C. silvestrii e D. rerio. A influência da temperatura, tipo de água de diluição e fotoperíodo na ecotoxicidade aguda foram avaliadas. Os efeitos subletais foram determinados por meio de ensaios de embrioxicidade com D. similis (20°C), crônicos individuais e populacionais com D. similis, C. dubia e C. silvestrii. A influência da temperatura na ecotoxicidade crônica individual e populacional foi determinada. Os critérios para aceitabilidade para o controle (número de neonatas) nos ensaios populacionais com D. simlis (20 e 25°C) e C. dubia, foram estabelecidos. Nos ensaios de ecotoxicidade aguda, D. similis (20°C) foi mais sensível a dipirona sódica que a 25°C e, para paracetamol, D. similis (25°C) foi mais sensível. A água de diluição influenciou na ecotoxicidade aguda apenas do paracetamol e o fotoperíodo não influenciou na ecotoxicidade aguda de ambos os fármacos. Os valores de CL(I);96H obtidos para D. rerio foram 3670 e 590mg.L-1 para dipirona sódica e paracetamol, respectivamente. Dipirona sódica e paracetamol induziram malformações nas neonatas e embriões de D. similis e os valores de CI50 obtidos foram 21,1 e 94,00mg.L-1, respectivamente. Os valores de CI50 nos ensaios crônicos individuais com dipirona sódica para D. similis (20°C e 25°C) foram 7,53mg.L e 8,08mg.L-1, respectivamente. Para C. dubia e C. silvestrii a CI50 para ensaios crônicos individuais com dipirona sódica foram 5,38 e 3,57mg.L-1, respectivamente. Nos ensaios crônicos individuais com paracetamol, a CI50 para D. similis (20°C) foi 21,84mg.L-1 e 10,72mg.L-1 para D. similis (25°C). Para C. dubia e C. silvestrii a CI50 nos ensaios crônicos individuais com paracetamol foram 7,24 e 4,15mg.L-1, respectivamente. Como critérios de aceitabilidade para os ensaios crônicos populacionais estabeleceu-se para o controle de D. similis (20 e 25°C) e C. dubia 137, 143 e 80 neonatas, respectivamente. Os valores de CI50 nos ensaios populacionais com D. similis (20 e 25°C), C. dubia e C. silvestrii para dipirona sódica foram 8,84, 10,82, 4,68 e 2,81mg.L-1, respectivamente. Para os ensaios populacionais com paracetamol os valores de CI50 para D. similis (20 e 25°C), C. dubia e C. silvestrii foram 9,57, 10,1, 6,48 e 4,26mg.L-1, respectivamente. Os valores das concentrações que causaram ecotoxicidade aguda e crônica não são superiores as concentrações destes compostos no ambiente porém, de acordo com a classificação baseada na Diretiva Européia 93/67/EEC, estes compostos são classificados como nocivos para o ambiente. / The present study evaluated the lethal and sublethal effects of dipyrone and paracetamol to different freshwater organisms. The lethal effect was determined by acute toxicity assays with D. similis, C. dubia, C. silvestrii and Danio rerio. The influence of temperature, type of dilution water and photoperiod were evaluated in acute toxicity assays. The sublethal effects were determined by Embryotoxicity with D. similis (20°C) and chronic toxicity assays both individual and population methods with D. similis, C. dubia and C. silvestrii. The influence of temperature upon individual and population chronic ecotoxicity was also determined. The criteria for acceptability for the population control assays with D. simlis (20 and 25°C) and C. dubia were established. D.similis (20°C) was more sensitive for dipyrone that 25 °C and for paracetamol, D.similis (25°C) was more sensitive. Dilution water interfere on acute ecotoxicity paracetamol, only and the photoperiod did not influence the acute ecotoxicity of both drugs. The LC(I);96H to Danio rerio was 3670mg.L-1 and 590mg.L-1 for dipyrone and paracetamol, respectively. Dipyrone and paracetamol induced malformations in D. similis neonates and embryos. The IC50 for these assays with dipyrone were 21,1mg.L-1 and 94mg.L-1 for tests with paracetamol. The IC50 of dipyrone to D. similis (20°C) was 7,53 and 8,08 at 25°C. Values of IC50 to C. dubia and C. silvestrii on individual chronic toxicity tests with dipyrona was 5,98 and 3,57mg.L-1respectively. The IC50 of paracetamol for D. similis (20°C) was 21,84 and 10,72mg.L-1 for at 25°C in individual chronic tests. The IC50 to C. dubia and C. silvestrii in individual chronic tests with paracetamol was 7,24 and 4,15mg.L-1 respectively. As criteria of acceptability for the population chronic tests were established to control the D. similis (20 and 25°C) and C. dubia, 137, 143 and 80 respectively. The IC50 obtained to D. similis (20 and 25°C), C.dubia and C.silvestrii for Dipyrone 8,84; 10,82; 4,68 and 2,81mg.L-1 respectively. For chronic population tests with paracetamol the IC50 to D. similis with 20 and 25°C, C.dubia and C.silvestrii was 9,57; 10,1; 6,48 and 4,26mg.L-1 respectively. The concentrations that cause acute and chronic ecotoxicity on organisms in this study are higher than environmental concentrations of these compounds. However, according to the classification based on the European Directive 93/67/EEC, these compounds are hazardous to the environment.

A utilização de uréia na alimentação de fêmeas bovinas pode prejudicar o desempenho reprodutivo destes animais, provavelmente decorrente do aumento do teor de nitrogênio uréico plasmático (NUP). O objetivo deste estudo foi avaliar se alimentação com uréia por curto prazo oferecida a novilhas, e conseqüente aumento de NUP, exerce influência sobre a quantidade, qualidade e competência dos complexos cumulus-oócito (CCO). O experimento teve duração de 62 dias, dividido em oito semanas e dois períodos. Foram utilizadas 40 novilhas mestiças mantidas a pasto, alocadas a dois tratamentos, utilizando-se delineamento \"cross-over\": dieta sem uréia (SU): 5 kg (matéria original) de silagem de milho e 1 kg de concentrado/animal/dia ou dieta com uréia (U): 5 kg de silagem de milho e 1 kg de concentrado contendo 75 g de uréia/animal/dia. Os animais selecionados a cada semana receberam as dietas por seis dias, uma única vez ao dia. No sexto dia de oferecimento das dietas, foram realizadas aspiração folicular (OPU) e colheita de sangue, em jejum e 3 horas após a alimentação. Imediatamente após a OPU, foi realizada contagem total de CCO recuperados e classificação dos mesmos em viáveis e inviáveis. Apenas os viáveis foram destinados à produção In vitro de embriões. Em relação ao teor de NUP, houve efeito de interação entre tratamento e tempo de colheita (P=0,04) e dentro de cada tempo foi observado aumento significativo (P<0,01) para os animais do tratamento U. Não foi observado efeito de tratamento em relação ao número total de CCO recuperados por animal (média ± EPM: SU=9,15 ± 0,82 vs. U=8,82 ± 0,95), nem sobre a porcentagem de CCO viáveis sobre total de CCO recuperados por animal (SU=73,61% ± 2,47 vs. U=70,26% ± 2,31). A taxa de clivagem obtida no dia 3 após a inseminação In vitro (IIV) e as taxas de blastocisto nos dias 6, 7 e 9 após a IIV, não foram influenciadas pelo tratamento. Porém, no 11º pós IIV, houve diminuição (P=0,04) da taxa de blastocistos eclodidos para o tratamento U (SU=82,50% ± 0,05 vs. U=64,33% ± 0,07). Apesar do aumento do teor de NUP observado nas novilhas do tratamento U, a quantidade, qualidade e competência dos CCO durante as primeiras clivagens até atingirem o estádio de blastocisto In vitro não foram influenciadas pelo oferecimento de 75 g de uréia na dieta, durante seis dias. Porém, foi observada redução da taxa de eclosão dos blastocistos das novilhas do tratamento U. / Urea feeding offered to bovine dams may damage their reproductive performance, probably due to an increase in levels of plasmatic urea nitrogen (PUN). The aim of this study was evaluate if short-term urea feeding of heifers, following high PUN levels, would have an influence on the quantity, quality and competence of cumulus-oocyte complexes (COC). Trial lasted 62 days, divided into eight weeks and two periods. Forty crossbred grazing heifers were allocated to one of two treatments, using a cross-over design: diet without urea (WU): 5 kg (as fed) of corn silage and 1 kg of concentrated/animal/day, or diet with urea (U): 5 kg of corn silage and 1 kg of concentrated with 75 g of urea/animal/day. Heifers selected in each week received these diets once a day, for six days. On the sixth day of diets? offer, ovum pick-up (OPU) and blood sampling at fasting and 3 hours after feeding were carried out. Immediately after OPU, total COC recovered was counted and classified as either viable or unviable. Only viable were destined to In vitro embryo production. In relation to PUN level, there was a significant interaction between treatment and sampling time (P=0.04) and a significant (P<0.01) increase in animals undergoing U treatment for each of the test times. No significant effect was observed relative to either the total number of recovered COC per animal (mean ± SEM: WU=9.15 ± 0.82 vs. U=8.82 ± 0.95), or the viable COC as a percentage of total recovered COC per animal (WU=73.61% ± 2.47 vs. U=70.26% ± 2.31). Cleavage ratio assessed on day 3 post In vitro insemination (IVI) and blastocyst ratio on days 6, 7 and 9 post IVI were not influenced by treatments. However, there was a significant treatment effect (P=0.04) in relation to hatched blastocysts on day 11 after IVI (WU=83% ± 0.05 vs. U=64% ± 0.07). Even though higher PUN levels were observed in animals from treatment U, quantity, quality and competence of the COC during first cleavages until reaching the blastocyst stage In vitro were not influenced by adding 75 g of urea on the diet offered to heifers, during six days. Neverthless, a decline in hatched blastocysts rate was observed in heifers of treatment U.

A nutrição é um dos principais fatores que afetam a eficiência reprodutiva por influenciar o crescimento, maturação e capacidade ovulatória do folículo bem como o perfil e estado metabólico do animal, gerando cenários que prejudicam ou corroboram o desenvolvimento e estabelecimento da prenhez. Diferentes fontes energéticas utilizadas na nutrição são capazes de alterar os padrões de fermentação ruminal e causar respostas endócrinas distintas. A partir disso, os objetivos desse estudo foram avaliar de que forma duas fontes energéticas da dieta influenciam a produção embrionária, a expressão gênica de enzimas hepáticas que metabolizam progesterona (P4) e a insulinemia. Em um delineamento em crossover, 22 vacas holandesas não lactantes e não gestantes foram distribuídas em dois grupos: um recebendo milho e outro polpa cítrica como fonte de energia da dieta. A quantidade de alimento fornecida foi de 1,3% do peso corporal em matéria seca por dia. O estudo foi composto por dois períodos de 71 dias de duração e em cada um deles foram realizadas duas superovulações (aos 35 e aos 70 dias) e uma biópsia hepática (aos 71 dias). Amostras sanguíneas foram colhidas imediatamente antes do fornecimento do alimento e 4 horas após, em dias pré-determinados, para dosagem de glicose, insulina e P4. Ao final do estudo as vacas passaram por teste de tolerância à glicose (TTG). Foi quantificada a expressão gênica de enzimas que metabolizam a P4 por RT-qPCR. A análise estatística foi realizada por meio de regressão logística pelo Proc MIXED do SAS 9.3. Os dados de expressão gênica foram avaliados por meio de delta CT. Imediatamente antes do fornecimento do alimento, a insulina circulante foi maior para o grupo milho (P < 0,01) e a P4 circulante foi maior para o grupo polpa cítrica (P < 0,01). Quatro horas após a alimentação, a P4 foi igual entre os tratamentos. A relação da P4 circulante na hora 4 e 0 foi maior para o grupo milho (P < 0,01). Tanto a glicose basal como o Homa-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) foram maiores para o grupo milho. No TTG, o grupo milho apresentou maior pico de glicose no momento 5 minutos, maior taxa de decaimento da glicose (P = 0,01) e menor tempo de meia vida da glicose (P = 0,05). Não houve efeito de tratamento na resposta superestimulatoria, superovulatória, produção de embriões e na expressão gênica das enzimas que metabolizam a P4, mas as superovulações realizadas aos 70 dias produziram embriões de qualidade inferior em relação às realizadas aos 35 dias, independente de tratamento. Conclui-se que, embora tenha sido possível alterar a insulina circulante através da dieta, a quantidade e qualidade de embriões produzidos não foram alteradas. O aumento pós-prandial da P4 circulante não foi relacionado a menor expressão gênica das enzimas hepáticas que metabolizam a P4. / Nutrition is one of the main factors affecting reproductive efficiency by influencing the growth, maturation and ovulatory capacity of the follicle and metabolic status of the animal, leading to scenarios that impair or corroborate the development and establishment of pregnancy. Different energy sources in the composition of the diet can alter ruminal fermentation patterns and cause different endocrine responses. The objectives of this study were to evaluate how two different energy sources in the diet can influence embryo production, gene expression of liver enzymes that metabolize progesterone (P4) and circulating insulin. In a crossover design, 22 non-lactating and non-pregnant Holstein cows were allocated into two groups: one receiving corn and other receiving citrus pulp as the energy supply of the diet. The amount of feed provided was 1.3% of body weight of dry matter per day. The study consisted of two 71-days periods and cows were superovulated twice on each period (at 35 and 70 days). Liver biopsy was performed after 71 days from the beginning of each replicate. Blood was sampled immediately before feeding and 4 hours later, at predetermined days, for measurement of glucose, insulin and P4. At the end of the study cows underwent a glucose tolerance test (GTT). Gene expression of liver enzymes that metabolize P4 was quantified by RT-qPCR. Statistical analysis was performed using logistic regression of Proc Mixed of SAS 9.3. Gene expression data were evaluated using delta CT. Immediately before feeding, the circulating insulin was greater for the corn group (P < 0.01) and circulating P4 was greater for the citrus pulp group (P < 0.01). Four hours after feeding, circulating P4 was similar. The relationship of circulating P4 between hour 4 and 0 was greater for the corn group (P < 0.01). Both basal circulating glucose and HOMA-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) were greater for the corn group. The corn group had also greater glucose peak at the time 5 minutes of the GTT, greater glucose rate of decay (P = 0.01) and a shorter half-life of glucose (P = 0.05). There was no treatment effect on superstimulatory and superovulatory response, on embryo production and on gene expression of liver enzymes that metabolize P4. However, superovulations performed at 70 days produced lower embryo quality compared to those performed at 35 days, regardless of treatment. In conclusion, although it was possible to change circulating insulin by feeding different diets, the quantity and quality of embryos produced were not affected by the diets. The postprandial increase in circulating P4 was not associated with altered gene expression of hepatic enzymes that metabolize P4.

O desenvolvimento da técnica de transferência embrionária no oviduto mediante videolaparoscopia e a avaliação de produtividade da punção folicular laparoscópica (LOPU) associada à transferência embrionária laparoscópica e/ou por laparotomia videoassistida, ambas no oviduto, foram os objetivos do presente trabalho. Foram utilizados 53 animais, sendo as punções foliculares para obtenção dos oócitos realizadas em 9 ovelhas adultas estimuladas hormonalmente, chamadas doadoras. Os oócitos foram obtidos através de LOPU repetidamente com intervalo mínimo de um mês entre os procedimentos nas mesmas doadoras. Os oócitos puncionados foram maturados, fertilizados e mantidos em cultivo por até três. Os embriões clivados foram transferidos no segundo dia após a fertilização in vitro (FIV) em ovelhas receptoras com cio sincronizado. A transferência dos embriões (TE) foi realizada primeiramente em 10 receptoras por laparoscopia e em 34 receptoras por laparotomia videoassistida, sendo esta última dividida em duas etapas cronológicas. Para a realização da TE por videolaparoscopia, foi introduzido, inicialmente, um trocarte de 5 mm na linha média ventral próximo à glândula mamária para passagem da óptica. Um segundo portal, crânio-lateral ao primeiro, foi criado para introdução de pinça de manipulação de ovário. Confirmada a existência de corpo lúteo (CL) em um dos ovários, um trocarte foi inserido no lado oposto a esse para passagem de cateter de Foley. Sua função foi auxiliar na exposição e abertura da fímbria. Um cateter urinário, contendo os embriões foi então introduzido na porção inicial do oviduto para deposição dos mesmos. Obteve-se 8 fetos resultantes da transferência por laparoscopia (10 receptoras), 10 fetos resultantes da primeira etapa da transferência por laparotomia (14 receptoras) e 30 fetos resultantes da segunda etapa da laparotomia (20 receptoras). A média de fetos por sessão de LOPU foi de 1 para transferência laparoscópica, 1,3 na primeira etapa da transferência por laparotomia e 3,3 na segunda etapa de laparotomia. A transferência embrionária videolaparoscópica de embriões clivados no oviduto mostrou resultado positivo na produção de fetos, podendo ser considerada técnica promissora. Quando associada à LOPU, a transferência embrionária no oviduto por laparoscopia / laparotomia videoassistida, apresentou resultados superiores aos relatados na literatura com a transferência intra-uterina de embriões FIV. / The development of the technique of embryo transfer in oviduct through video-assisted laparoscopy and the demonstration of productive association between laparoscopic follicle aspiration (LOPU) and embryonic transfer laparoscopy and / or open surgery (video-assisted laparotomy)both in oviduct was the goal of the work. From the 53 animals used in the study, follicular puncture was used to obtain oocytes from 9 adult ewes for super-ovulated with hormonally stimulation, referred to as the donors. The oocytes were obtained through repeated LOPU with minimum intervals of one month from the same donor. The retrieved oocytes were matured, fertilized with frozen semen and cultured in vitro for up to two days after IVF. The cleaved embryos were transferred on the second day after IVF into synchronized receptor ewes. The transfer of embryos was first done in 10 receptors through laparoscopy and then in 34 receptors through video-assisted laparotomy, the latter being divided into two chronological stages. For the development of ET by video-assisted laparoscopy, a 5mm trocar was initially introduced ventral midline near the mammary gland for passage of the laparoscope. A second portal, in a craniolateral position was used for passage of another 5 mm trocar for introduction of forceps to manipulate the ovary. After confirming the existence of CL in one of the ovaries, a trocar was inserted on the opposite side for passage of the Foley catheter, to assist in the exposure and opening of the fimbria. A urinary catheter, containing the embryo, was then introduced into the initial portion of the oviduct for deposition of the embryos. There were 8 fetuses resulting from the transfer by laparoscopy (10 receptors), 10 fetuses resulting from the first stage of the transfer by laparotomy (14 receptors) and 30 fetuses resulting from the second stage of the laparotomy (20 receptors). The average number of fetuses per session of LOPU was 1 for laparoscopic transfer, 1.3 for the first stage of the transfer by laparotomy and 3.3 in the second stage of laparotomy. The technique of embryo transfer through video-assisted laparoscopy with cleaved embryos in oviduct was thus shown to a positive fetus\'s result of production, and will be promising. When associated with LOPU, the transfer of embryos in oviduct by laparoscopy / video-assisted laparotomy presented better results then other authors when compare intrauterine IVF embryo transfer.