Orientador : Laura Maria Mariscal Ottoboni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:31:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HernandezFernandez_Jorge_D.pdf: 10758413 bytes, checksum: 0aaae29272eee872225ce67704ef0e69 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A Araucaria angustifolia, única espécie do gênero de ocorrência natural no Brasil, era encontrada principalmente nos Estados do Paraná (40% da superficie), Santa Catarina (31 %) e Rio Grande do Sul (25%). Manchas esparsas eram observadas no sul de São Paulo (3%), sul de Minas Gerais e Rio de Janeiro, em áreas de altitude elevada (1%). A madeira serrada e laminada da Araucária foi, por um longo período, um dos produtos mais importantes de exportação brasileira. Atualmente, a A. angustifolia se encontra na lista das espécies brasileiras ameaçadas de extinção. As matas remanescentes correspondem a apenas 4,3% da área original. Estudos histológicos mostraram que durante o desenvolvimento, o embrião de A. angustifolia apresenta os estágios: (1) globular, (2) globular tardio, (3) torpedo, (4) cotiledonar e (5) maduro. O desenvolvimento do embrião de A. angustifolia difere em vários aspectos morfológicos do de Pinus, considerado como "modelo" das coníferas mais evoluídas. Este fato, torna interessante do ponto de vista acadêmico a realização de estudos moleculares sobre o desenvolvimento do embrião de A. angustifolia. No Capítulo 1, "Caracterização das principais proteínas de reserva de A. angustifolia", os resultados obtidos indicaram que as principais proteínas de reserva da semente de A. angustifolia são solúveis em solução salina (0,25 M NaCl), não apresentam pontes bisulfidicas e têm peso molecular aparente de 20-21 IeDa e 28 IeDa. Estas características diferem das já descritas para outras proteínas de reserva de coníferas, e colocam as principais proteínas de reserva de A. angustifolia no grupo das vicilinas 7S. No Capítulo 2, "Identificação de genes expressos diferencialmente durante o desenvolvimento do embrião zigótico de A. angustifolia", foi utilizada a técnica de display diferencial de mRNA para a identificação de genes específicos dos estágios globular, cotiledonar e maduro do embrião zigótico e no megagametófito da semente madura de A. angustifolia. Foram isolados 315 cDNAs com expressão diferencial. Entre os 189 cDNAs confirmados, 39 foram c1onados, seqüenciados e as seqüências foram comparadas às depositadas em bancos de dados. No Capítulo 3, "Isolamento da seqüência completa e caracterização dos cDNAs J6G-36, J5G-26 e J5G-20", três cDNAs que apresentam similaridade com seqüências disponíveis em bancos de dados, vicilina 7S, araCAF 1 e lipocalina, tiveram a respectiva seqüência completa caracterizada / Abstract: Arauearia angustifolia, the only native conifer in Brazil, covered the States of Paraná (40%), Santa Catarina (31 %) and Rio Grande do Sul (25%). Sparse patches were also found in areas with elevated altitudes, in the States of São Paulo (3%), Minas Gerais and Rio de Janeiro (1 %). The A. angustifolia wood was, for a long time, one of the most important exportation products in Brazil. In the present days, the A. angustifolia is at risk of extinction, and the remaining areas correspond to 4.3% ofthe original. The A. angustifolia embryo development is divided in the following stages: (1) early globular stage, (2) late globular stage, (3) torpedo stage, (4) cotiledonar and (5) mature stage. The development of the A. angustifolia embryo differs in some morphologic aspects from other conifers. Therefore, it is interesting to studyembryo development in A. angustifolia. In Chapter 1,"Characterization of the major storage proteins in A. angustifolia", the characterization of the major storage proteins of A. angustifolia was described. These proteins are soluble in solutions with low-salt concentration (NaCl 0.25 M). They have apparent molecular weights around 20-21 kDa and 28 kDa, and there are no evidences of bisulfide bonds. All these characteristics diverged from those described for storage proteins in other conifers, and indicated that the major storage proteins of A. angustifolia are 7S vicilin-like. In Chapter 2, "ldentification of differential expressed genes during development of the zygotic embryo in A. angustifolia", the mRNA differential display technique was used to identify genes differentially expressed in the developing embryo, globular, cotiledonar and mature stages, and in the megagametophyte of mature seed. A total of 315 differentially expressed cDNAs were isolated. From these, 189 cDNAs had their differential expression confirmed and 39 were cloned and submitted to sequencing. Nine cDNAs showed similarity with GenBank sequences. In Chapter 3, "lsolation and characterization of the full length sequences of J6G-63, J5G-26 and J5G-20 cDNAs", the isolation of full-Iength cDNA sequences of the 7S vicilin-like gene (J6G-63 cDNA), the lipocalin gene (J5G-20 cDNA) and the araCAFl transcription factor gene (J5G-26) is described. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

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Visando melhoria das técnicas de colheita embrionária por via transcervical em caprinos, o presente experimento testou a viabilidade da utilização da sonda uretral humana nessa espécie animal. Utilizou-se 18 animais da raça Boer puros de origem como doadores de embriões que, após serem superovulados foram tranqüilizados e colocados em uma mesa específica para colheita com o animal em estação. Com auxílio de um espéculo vaginal, a sonda foi introduzida via transcervical no interior do corpo uterino e procedeu-se as lavagens com solução fosfatada (PBS). Após as lavagens o conteúdo foi filtrado e os embriões avaliados e selecionados. Os percentuais relativos à viabilidade da passagem da cérvice, embriões coletados e volume de líquido coletado foram de 83,3%, 81,15% e 94,3% respectivamente. Viabilizando a técnica adotada, em função das dificuldades de se ultrapassar a cérvice em fêmeas primíparas, recomenda-se a adoção de outras técnicas

A gastrosquise passou, nos últimos 50 anos, da condição de uma patologia fatal para índices de sobrevida ao redor de 90%, graças aos avanços na neonatologia e cirurgia neonatal modernas. Porém uma significativa morbidade permanece, relacionada principalmente com o atraso no início do funcionamento intestinal normal. Este tema é objeto de estudo em vários centros visando determinar a origem do problema e promover soluções. Os modelos experimentais em animais são parte importante desses estudos. O objetivo deste trabalho foi o de reproduzir o modelo experimental da gastrosquise em embriões de galinha e comprovar que as alterações histopatólogicas apresentadas são comparáveis às da gastrosquise em humanos. Foram utilizados 278 ovos galinha da raça Leghorn (Gallus domesticus).Os embriões foram divididos em três grupos: grupo gastrosquise, no qual, através de um orifício na casca do ovo, o cordão umbilical foi aberto e as alças intestinais expostas a uma mistura de líquidos amniótico e alantóide; grupo mistura, no qual se promovia apenas a mistura de líquidos amniótico e alantóide, sem a manipulação do coto umbilical e sem a exposição de alças intestinais; e o grupo controle, que consistia de embriões normais e nos quais nenhum procedimento foi realizado. Os procedimentos foram feitos no 13o dia do desenvolvimento embrionário, e o estudo encerrado no 19o, quando as alças intestinais dos embriões foram removidas e encaminhadas para análise histológica convencional e análise morfométrica digital. Ao final do experimento, foram obtidos 23 embriões vivos do grupo gastrosquise (11,1% de sobrevida), 18 dos quais apresentavam alças intestinais expostas (8,7% de sucesso). No grupo mistura, 12 (70,5%) de 17 embriões sobreviveram ao procedimento. Como controle foram utilizados 10 embriões normais. Os embriões do grupo gastrosquise apresentaram um peso menor que os dos outros grupos. Este grupo também desenvolveu alterações intestinais consistindo em infiltrado inflamatório da serosa e mucosa, alterações isquêmicas da parede intestinal e formação de uma camada de fibrina sobre as alças. Tais achados são característicos da gastrosquise humana e não foram observados nos demais grupos. Os embriões do grupo gastrosquise mostraram também espessamento da parede intestinal, principalmente da serosa, quando em comparação com os outros grupos. Desta forma, o modelo experimental em embriões de galinha mostrou ser capaz de reproduzir as alterações intestinais da gastrosquise humana. / In the last 50 years gastroschisis has gone from a fatal condition to a disease with survival rates of around 90%. This is due to advances achieved in modern neonatology and neonatal surgery. However, there is still significant morbidity, related mainly to the delay in beginning normal intestinal function observed in these patients. This topic has been studied at several centers with a view to determining the source of this problem and achieving solutions. Experimental animal models are a major part of these studies. The purpose of this study was to reproduce the experimental model of gastroschisis in chicken embryos and to prove that the histopathological changes that occur in this model can be compared to those in human gastroschisis. A total of 278 Leghorn hen (Gallus domesticus) eggs were used. The embryos were divided into three groups: the gastroschisis group, in which the umbilical cord was opened through an orifice made in the eggshell, and the intestinal loops were exposed to a mixture of amniotic liquid and allantoid; the mixture group, in which the amniotic liquid and allantoid were simply mixed without manipulating the umbilical stump and without exposing intestinal loops; and the control group which consisted of normal embryos in which no procedure was performed. The procedures were performed on the 13th day of embryo development and the study was ended on the 19th day, when the intestinal loops of the embryos were removed and sent for conventional histological study and digital morphometric analysis. At the end of the experiment, 23 live embryos were obtained in the gastroschisis group (11.1% survival), and 18 of these presented exposed intestinal loops (8.7% success). In the mixture group, 12 (70.5%) of 17 embryos survived the procedure. And 10 normal embryos were used as control. The embryos of the gastroschisis group weighed less than those of the other two groups. The gastroschisis group also developed intestinal changes consisting of an inflammatory infiltrate of the serosa and mucosa, ischaemic changes in the intestinal wall and formation of a fibrin layer over the loops. These findings are characteristic of human gastroschisis and were not observed in the two other groups studied. The embryos of the gastroschisis group also presented a thickening of the intestinal wall, particularly the serosa, as compared with the other groups. Thus, the experimental model in chicken embryos proved able reproduce the intestinal changes of human gastroschisis.

109 f. / Submitted by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-27T16:25:57Z No. of bitstreams: 1 TIAGO BATISTA FREITAS.pdf: 605273 bytes, checksum: 13b124bc1a34a9f069c3b2bcb67c2882 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Valéria de Jesus Moura(anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-27T16:26:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TIAGO BATISTA FREITAS.pdf: 605273 bytes, checksum: 13b124bc1a34a9f069c3b2bcb67c2882 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-27T16:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TIAGO BATISTA FREITAS.pdf: 605273 bytes, checksum: 13b124bc1a34a9f069c3b2bcb67c2882 (MD5) Previous issue date: 2009 / Este trabalho visa realizar uma análise ética e jurídica acerca da constitucionalidade da utilização de embriões humanos gerados in vitro em experimentos científicos. A doutrina acerca do tema é escassa e se mostra bastante dividida. Para alguns, não existiria nenhum problema ético ou jurídico na utilização de embriões humanos em tais experimentos, posto que estes não possuiriam nenhum atributo biológico ou moral inerente à pessoa humana, sendo apenas uma vida potencial. Outros entendem que a vida humana surge no ato da concepção e possui um valor intrínseco, entendendo, por isso, ser absolutamente imoral e inconstitucional a utilização de embriões humanos em experimentos científicos. De outra parte, a Declaração Universal dos Direitos Humanos, subscrita pelo Estado Brasileiro em 1948, reconhece a dignidade e assegura o direito à vida a todos os membros da espécie humana, sem qualquer tipo de discriminação. A seu turno, a própria Constituição Federal brasileira, por sua vez, estatui como princípio do Estado Brasileiro a dignidade da pessoa humana (art. 1º, III), assegurando a vida como direito fundamental (art. 5º, caput). Todavia, a Lei 11.105/2005 – cuja constitucionalidade foi reconhecida pelo Supremo Tribunal Federal em sede da Ação Direta de Inconstitucionalidade nº 3510-0 – em seu art. 5º, autoriza a utilização de embriões concebidos in vitro, não utilizados em processo de reprodução humana assistida, em experimentos para obtenção de células-tronco, os quais, podem levar à destruição dos embriões utilizados. Assim, o autor propõe-se a investigar, a partir de uma concepção da teoria dos direitos fundamentais, a existência dos status biológico, moral e jurídico do embrião humano, com vistas a investigar a eticidade e constitucionalidade da sua utilização em experimentos científicos. / Salvador

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334691.pdf: 804006 bytes, checksum: 0752fbbe5b1b5e200587dc173c23168f (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho propôs estudar a ação do Fator de Crescimento Fibroblástico 18 (FGF18) durante o processo de expansão das células do cúmulus, ma-turação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial. Os experimen-tos desenvolvidos utilizaram ovários provenientes de abatedouro e matu-rados durante 24h em meio de cultura suplementados ou na ausência de diferentes dosagens de FGF18 dependendo do ensaio proposto. O pri-meiro experimento desenvolvido utilizou 24 Complexos do cúmulus oophorus (CCOs) e avaliou diferentes doses de Hormônio folículo esti-mulate (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 e 500 ng/ml) a fim de obter concentrações com diferentes efeitos sobre a expansão das células do cúmulus. Neste experimento, foi demonstrado que a suplementação do meio de maturação in vitro com 100 e 500 ng/ml (P< 0,05) resultam na expansão das células do cúmulus, sendo a dose de 500 ng/ml culminar em uma maior taxa de expansão. O segundo experimento visou avaliar a maturação nuclear de CCOs após o período de incubação com 100ng/ml de FGF18 nas concen-trações de FSH do experimento 1. Após o período de incubação da matu-ração in vitro, oócitos foram fixados e corados com HOESCHT-33342 para avaliar a taxa de oócitos que atingiram o estágio de metáfase II da meiose. Os resultados deste experimento demonstram que FGF18 não in-fluenciou a maturação oocitária (P< 0,05). O experimento 3 visou avaliar diferentes concentrações de FGF18 (100, 500 e 1000 ng/ml) sobre a ma-turação oocitária e expansão das células do cúmulus durante o período de incubação de 24h. Foram utilizados 50 CCOs por grupo em quatro repli-cações. Foi demonstrado que FGF18 não afetou a maturação e expansão dos CCOs nos grupos avaliados (P<0,05). O quarto experimento avaliou a suplementação de FGF18 em diferentes etapas da produção in vitro de embriões. Foram elaborados três grupos: controle (ausência de FGF18 em todos as etapas), FGF-MIV (CCOs tratados somente durante a maturação in vitro (MIV) com 100ng/ml de FGF18) e FGF-CIV (zigotos tratados somente durante o cutivo in vitro (CIV) com 100 ng/ml de FGF18). Os resultados apresentam menores taxas quantitativas e qualitativas no grupo FGF-CIV (P<0,05). O experimento 5 teve como objetivo avaliar a expres-são de diferentes genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, Interferon-tau, FasL e Cox2) nos grupos do experimento 4. Apenas COX2 se apresentou menos expresso no grupo FGF-MIV. Conclui-se que o FGF18 não influ-encia nos processos de expansão das células do cúmulus e maturação oo-citária. No entanto, foi observado que a suplementação deste fator às eta-pas da PIV reduz a taxa de embriões produzidos, tal como retardo no de-senvolvimento destas células, entretanto, os mecanismos moleculares no controle deste evento ainda não estão elucidados.<br> / Abstract : This work proposed to study the Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18) during the cumulus expansion, oocyte maturation and the early embryo development. The experiments used ovaries from slaughterhouses and matured for 24 hours in culture medium in the presence or not of FGF18 depending on the proposed test. The first experiment used 24 cumulus- oocyte complex (COCs) to to evaluate different doses of follicle stimulat-ing hormone (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 and 500 ng / ml) to obtain concen-trations with different effects on the expansion of the cumulus cells. This experiment demonstrated that supplementation of the in vitro maturation medium with 100 and 500 ng / ml (P <0.05) result in cumulus expansion. The dose of 500 ng/ml culminate in an increased growth rate. The second experiment aimed avaliate the COC?s nuclear maturation after incubation period with 100 ng/ml FGF18, using the FSH doses of the first experi-ment. After the in vitro maturation, oocytes were fixed and stained with Hoechst 33342 to evaluate the rate of oocytes that reached the metaphase II stage. The results of this experiment demonstrate that FGF18 did not affect oocyte maturation (P <0.05). The third experiment was performed to evaluate different concentrations of FGF18 (100, 500, and 1000 ng / ml) on oocyte maturation and cumulus expansion during the 24 h incuba-tion period. 50 COCs were used per group on four replicates. It was shown that FGF18 did not affect the maturation and expansion of COCs in the study groups (P <0.05). The fourth experiment evaluate the supplementa-tion of FGF18 in different stages of in vitro production. Three groups were established: control (absence of FGF18 in all stages), FGF-IVM (COCs treated only during in vitro maturation (IVM) with 100 ng / ml FGF18) and FGF-IVC (zygotes treated only during the in vitro cultive (IVC) 100 ng / ml FGF18). The results show lower rates qualitative and quantitative FGF-IVC group (P <0.05). The experiment 5 aimed to eval-uate the expression of different genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, in-terferon-tau, FasL and COX 2) in the embryos derived of the fourth assay. Only COX2 was downregulated in the FGF-IVM group. We conclude that the FGF18 does not influence the processes of the cumulus expansion cells and oocyte maturation. It was observed that FGF18 supplementation to the IVP steps reduces the rate of embryo production, such as delay in the development of these cells, however, the molecular mechanisms in-volved in this event are not deciphered.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:32:33Z : No. of bitstreams: 1 000854796.pdf: 3287498 bytes, checksum: 5389246fc289aed76f7b12139edf692c (MD5) / Estudos para produção de formas jovens de peixes são fundamentais para o desenvolvimento da piscicultura e o manejo das populações naturais. Leporinus agassizii é apreciado nas distintas modalidades de pesca (comercial, artesanal, ornamental e esportiva), além de apresentar características desejáveis para a criação. Objetivou-se descrever o desenvolvimento embrionário e a densidade de estocagem de larvas do aracu-riscado, L. agassizii. Reprodutores foram submetidos a reprodução induzida por hipofisação, com a temperatura da água a 28,6 ± 0,7ºC, no Centro de Capacitação e Produção de Alevinos, pertencente ao Instituto Federal de Educação Ciência e Tecnologia, São Gabriel da Cachoeira, Amazonas, Brasil, no mês de setembro de 2014. Logo após a fertilização, os ovos foram mantidos em incubadoras (60L), com a temperatura média da água de 28,4 ± 0,7 ºC. Coletaram-se amostras de ovos em intervalos de 10 min, durante as primeiras três horas pós-fertilização (PF) e, posteriormente, em intervalos de 30min até a eclosão das larvas, para observação em estereomicroscópio equipado com câmera CMOS digital colorida, 10.0 MP e software para captura e análise de imagens (ISCapture). O efeito da densidade de estocagem de larvas do L. agassizii foi avaliado ao longo do 4º e 14º dias após a eclosão (DAE). Foram utilizadas 3600 larvas no 4º DAE, encontrando-se estas com o saco vitelínico totalmente absorvido, boca aberta e mantidas em jejum. As larvas foram submetidas às densidades de 5 (D5), 15 (D15) e 25 (D25) larvas.L-1, em caixas de polietileno (0,63 x 0,45 x 0,32 m), com 20 L de água. Utilizou-se um delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições. As larvas foram alimentadas seis vezes ao dia, sendo cada refeição composta por náuplios de Artemia, na proporção 50 náuplios.larva-1 (4º ao 6º DAE), 100 (7º ao 9º DAE), 200 (10° ao 11º DAE) e 400 (12º ao 13º DAE) e por ração... / Studies for the production of young fish shapes are key to the development of fish farming and the management of natural populations. Leporinus agassizii is appreciated in the different fishing methods (commercial, craft, ornamental and sports), and present desirable features for creation. This study aimed to describe the embryonic and larval stocking density of aracu-riscado, L. agassizii. Players underwent reproduction induced hypophysation, with the water temperature at 28.6±0.7 °C, the Centro de Capacitação e Produção de Alevinos belonging to the Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia, São Gabriel da Cachoeira, Amazonas, Brazil, in September 2014. After fertilization, the eggs were kept in incubators (60 Litre), with the average water temperature of 28.4±0.7 °C. Samples were collected 10 min intervals on eggs during the first three hours after fertilization (AF) and thereafter at intervals of 30 minutes until the outbreak of the larvae, for observation in stereo equipped with digital color CMOS camera, 10.0 MP and software to capture and analyze images (ISCapture). The effect of larval stocking density of L. agassizii was assessed over 4th and 14th days after hatching (DAH). 3600 larvae were used in the 4th DAH, meeting these with the yolk sac fully absorbed, mouth open and fasted. The effect of larval stocking density of L. agassizii was assessed over 4th and 14th (DAH). 3600 larvae were used in the 4th DAH, meeting these with the yolk sac fully absorbed, mouth open and fasted. The larvae were subjected to density of 5 (D5), 15 (D15) and 25 (D25) larvas.L-1, in polyethylene boxes (0.63 x 0.45 x 0.32 m) with 20 Litre of water. We used a completely randomized design with four replications. The larvae were fed six times a day, each meal consisting of Artemia in the proportion 50 náuplios.larva-1 (4th to 6th DAH), 100 (7th to 9th DAH), 200 (10th to 11th DAH) and 400 (12th to 13th DAH) and commercial diet ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-28Bitstream added on 2014-06-13T18:26:27Z : No. of bitstreams: 1 000736004.pdf: 627827 bytes, checksum: 411ff86dc11bb8a1a240b7427a561cdf (MD5) / A maturação in vitro (MIV) é considerada uma das etapas mais desafiadoras da produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. O meio de MIV deve fornecer condições necessárias para que a maturação citoplasmática e nuclear ocorra de modo próximo ao fisiológico. As gonadotrofinas hipofisárias são essenciais para que o oócito adquira (in vivo) a competência para ser fertilizado; entretanto, se as gonadotrofinas (hipofisárias ou coriônicas) são essenciais, na MIV, as concentrações a serem utilizadas ainda são controversas. Os objetivos, com este estudo, foram estabelecer concentrações otimizadas de gonadotrofinas coriônicas (eCG e hCG) para a substituição daquelas comumente utilizadas de FSH e LH; comparar o efeito de baixas concentrações de eCG e/ou de hCG, isoladamente ou em conjunto com gonadotrofinas hipofisárias; e analisar a necessidade da utilização do FSH e do LH, individualmente, na PIV de embriões livre de suplementação proteica. Complexos cumulus-oócito (CCOs) obtidos de ovários de vacas provenientes de abatedouro, foram selecionados e utilizados em três experimentos: 1) CCOs maturados em meio MIV com seis concentrações distintas de eCG (0; 0,015; 0,15; 1,3; 1,5 e 4 UI mL-1 ) dando origem aos grupos experimentais (C+; E1; E2; E3; E4 e E5, respectivamente), e seis concentrações distintas de hCG (0; 0,05; 0,5; 0,67; 2 e 5 UI mL-1), originando também seis grupos experimentais (C+; H1; H2; H3; H4 e H5, respectivamente); 2) Meio MIV com concentrações mínimas funcionais de eCG e hCG obtidas no experimento anterior, resultando em sete grupos experimentais: sem quaisquer gonadotrofinas; apenas eCG (0,015 UI mL-1); apenas hCG (0,05 UI mL-1); eCG mais hCG; eCG mais LH; hCG mais FSH; e SFB com FSH (0,5 μg mL-1) e LH (5 μg mL-1); e 3) MIV na presença de FSH (0,5 μg mL-1) ou LH (5 μg mL-1) sem nenhuma suplementação proteica. Os CCOs maturados foram fertilizados e... / The in vitro maturation (IVM) is considered one of the most challenging steps of in vitro production (IVP) of bovine embryos. The IVM medium must provide the conditions required for nuclear and cytoplasmic maturation to occur similarly to physiological. The pituitary gonadotropins are essential components that enable oocytes for fertilization (in vivo), but as the gonadotropins (pituitary or chorionic) are essential for IVM, their employed concentrations are still indefinite. We aimed to establish optimal concentrations of chorionic gonadotropin (eCG and hCG) to replace those of FSH and LH commonly used; to compare the effect of low concentrations of eCG and/or hCG alone or in combination with pituitary gonadotropins; and to analyze how necessary is the use of FSH and LH, individually, on the IVP of embryos free from any protein source. Cumulus-oocyte complexes (COCs), obtained from ovaries of slaughterhouse were selected and used in three experiments: 1) COCs matured on the IVM medium with six different concentrations of eCG (0, 0.015, 0.15, 1.3; 1.5 and 4 IU ml-1) yielding the experimental groups (C +, E1, E2, E3, E4 and E5, respectively) and six different concentrations of hCG (0, 0.05, 0.5, 0, 67, 2 and 5 IU ml-1), also yielding six experimental groups (C +, H1, H2, H3, H4 and H5, respectively); 2) IVM medium with minimal concentrations functional of eCG and hCG obtained in the previous experiment, resulting in seven groups: without any gonadotropin; only eCG (0.015 IU mL-1); only hCG (0.05 IU mL-1); eCG plus hCG, eCG plus LH; hCG plus FSH; FCS with FSH (0.5 mg ml-1) and LH (5 mg ml-1); and 3) IVM in the presence of FSH (0.5 mg mL-1) or LH (5 mg ml-1), without protein supplementation. The matured COCs were fertilized and cultured in incubator (38.3 °C, 5% CO2 and maximum humidity). Embryo development was evaluated in terms of cleavage, blastocyst and hatching rates (at 72, 168 and 240 hours post-insemination, ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-09Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000735059.pdf: 4335227 bytes, checksum: 7137c59ad39313bbb60a087cc2ad7500 (MD5) / O forskolin eleva as concentrações de adenosina monofosfato cíclica (cAMP) por meio da ativação da adenilato ciclase. Esse experimento possuiu o objetivo de utilizar o forskolin para melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. No Experimento I o forskolin foi adicionado no meio de maturação in vitro (MIV) com o objetivo de bloquear a meiose nuclear induzindo sua sincronização com a maturação citoplasmática. O Experimento II possuiu o objetivo de induzir uma lipólise química em embriões do D 6 a partir da utilização do forskolin, diminuindo sua sensibilidade após a vitrificação. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6 horas na presença de três concentrações de forskolin: 0,025 mM; 0,05 mM; 0,1 mM e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de forskolin por 18 horas. Após esse tempo os oócitos foram fertilizados e cultivados in vitro. Foi avaliado o estágio de maturação nuclear, a atividade e distribuição mitocondrial, a ultraestrutura oocitária, contagem do número de células e a apoptose celular. O tratamento com forskolin por 6 horas não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, após a retirada do bloqueio e maturação por 18 horas um maior número de oócitos tratados com 0,1 mM de forskolin se encontrou em MI (P<0,05). Não houve diferença com relação a atividade e distribuição mitocondrial nos oócitos, no entanto a maior concentração da droga levou a alterações ultraestruturais nos oócitos, com excesso de metabolização lipídica e desorganização do citoesqueleto. Apesar disso, não se observou diferença na taxa de produção de blastocistos avaliados no D 7, bem como no número total de células íntegras dos embriões. Entretanto, observou-se uma maior taxa de apoptose no grupo de blastocistos produzidos a partir de oócitos bloqueados com a maior concentração... / The forskolin raises concentrations of cyclic adenosine monophosphate (cAMP) through the activation of adenylate cyclase. This experiment aimed the use of forskolin to enhance in vitro production (IVP) of bovine embryos. In Experiment I, forskolin was added in the medium of in vitro maturation (IVM) with the objective of blocking nuclear meiosis inducing your synchronization with cytoplasmic maturation. Experiment II aimed to induce lipolysis chemical in D 6 embryos from the use of forskolin, decreasing its sensitivity after vitrification. In the first experiment, the oocytes remained in IVM medium for 6 hours in the presence of three concentrations of forskolin: 0.025 mM, 0.05 mM, 0.1 mM and then were cultured in medium free forskolin for 18 hours. After this time the oocytes were in vitro fertilized and cultured. We assessed the stage of nuclear maturation, activity and distribution mitochondrial, ultrastructure oocyte, total number of cells and apoptosis. The treatment with forskolin for 6 hours did not resulted in delay in VCBD in relation to control group. However, after the removal of the drug and maturation for 18 hours a higher number of oocytes treated with 0.1 mM of forskolin were still in MI (P<0.05). No differences in relation to mitochondrial activity and distribution were observed between groups. However the higher concentration of the drug induced ultrastructural damage to oocytes, with excess of lipid metabolization and cytoskeleton disorganization. Nevertheless, no statistical differences were observed on blastocyst production and on the number of total cells. Despite of that, a higher rate of ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-11Bitstream added on 2014-06-13T20:06:39Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_mef_dr_jabo.pdf: 918161 bytes, checksum: 9751db33ae3b228fbba2eeae5557b579 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Foram realizados dois experimentos, no primeiro, 70 ovelhas foram submetidas a um dos dois protocolos de sincronização do estro, em três períodos estacionais (Fatorial 2x3; Anestro: G-1CIDR, n=12 e G-2CIDR, n=11; Transição: G-1CIDR, n=12 e G-2CIDR, n=12; Ciclicidade: G-1CIDR, n=11 e G-2CIDR, n=12). O estro foi sincronizado com um dispositivo intravaginal de progesterona (P4; CIDR) por 14 dias. No G-2CIDR, o CIDR foi trocado por um novo no D7 (D0 = início do protocolo). No D0 e 14, 2,5 mg de um análogo da PGF2 (dinoprost) foram administradas, i.m., em todas as ovelhas. Exames ultrassonográficos dos ovários, por via transretal, foram realizados diariamente durante os protocolos (14 dias). Os dados foram analisados por regressão logística utilizando o Proc GLIMMIX do SAS (P<0,05). As ovelhas apresentaram de duas a cinco emergências de ondas foliculares durante os tratamentos [2 ondas: 4,29% (3/70); 3 ondas: 34,29% (24/70); 4 ondas: 52,86% (37/70); e 5 ondas: 8,57% (6/70) das ovelhas]. Não houve efeito do tratamento sobre os dias de emergência das ondas (Onda 1: 2,05±0,42 vs. 2,02±0,37; Onda 2: 5,69±0,42 vs. 5,65±0,37; Onda 3: 9,77±0,42 vs. 10,09±0,37; Onda 4: 11,85±0,39 vs. 12,12±0,35 e; Onda 5: 12,5±0,40 vs. 12,16±0,78 dias para G-1CIDR e G-2CIDR respectivamente; P>0,05). Similarmente, os períodos estacionais não interferiram sobre os dias de emergência para as ondas 1, 2, 3, 4 e 5, respectivamente (Anestro: 2,01±0,46, 5,11±0,47, 9,33±0,45, 12,27±0,40 e 13,50±0,40; Transição: 2,12±0,51, 5,95±0,52, 10,32±0,51, 11,16±0,78 e 11,61±0,50; e Ciclicidade: 1,99±0,42, 5,95±0,42, 10,14±0,42 e 12,08±0,43; P>0,05). Na estação de ciclicidade, nenhuma ovelha apresentou cinco ondas. No segundo experimento, foram utilizadas 60 novas fêmeas, sendo 20 para cada período... / Two experiments were conducted, in the first, 70 ewes were submitted to one of two synchronization protocols in three seasons (Factorial 2x3; Non-breeding: G-1CIDR, n=12 and G-2CIDR, n=11; Transition: G-1CIDR, n=12 and G-2CIDR, n=12; Breeding: G-1CIDR, n=11 and G-2CIDR, n=12). On D0 (randomized day of estrus cycle), the estrus were synchronized with a P4 device (CIDR) for 14 days. However, in G-2CIDR, the CIDR was replaced by a new one on D7. On D0 and D14, 2.5mg of a PGF2 analogue (dinoprost), i.m., were administered, and on D14, all ewes received 300 IU of eCG (Novormon™, Syntex- Argentina). Ultrasonographic exam was performed daily between D0 and D14 and, every 8 hours until D19. Data were analyzed by GLIMMIX using the SAS (P<0.05). Ewes presented two to five follicular waves emergencies during treatments [2 waves: 4.29% (3/70); 3 waves: 34.29% (24/70); 4 waves: 52.86% (37/70) and; 5 waves: 8.57% (6/70) of ewes]. There were no effect of treatment on emergency waves days (Wave 1: 2.05±0.42 vs. 2.02±0.37; Wave 2: 5.69±0.42 vs. 5.65±0.37; Wave 3: 9.77±0.42 vs. 10.09±0.37; Wave 4: 11.85±0.39 vs. 12.12±0.35 and; Wave 5: 12.5±0.40 vs. 12.16±0.78 days for G-1CIDR and G-2CIDR respectively; P>0.05). Similarly, there were no effect of seasons on these variables (Nonbreeding: 2.01±0.46, 5.11±0.47, 9.33±0.45, 12.27±0.40 and 13.50±0.40; Transition: 2.12±0.51, 5.95±0.52, 10.32±0.51, 11.61±0.50 and 11.16±0.78 and; Breeding: 1.99±0.42, 5.95±0.42, 10.14±0.42 and 12.08±0.43 days for waves 1, 2, 3, 4 and 5, respectively, P>0.05). In Breeding season no ewes showed five waves. In the second experiment, were used 60 new females, 20 for each season (breeding, transition and non-breeding) and 10 for each group that received one of two superovulatory protocols according to the time that FSH treatment were initiated (G-FirstWave and G-LastWave). Ewes were... (Complete abstract click electronic access below)