Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-04Bitstream added on 2015-04-09T12:48:24Z : No. of bitstreams: 1 000815814.pdf: 419662 bytes, checksum: b03fc09d9d326c880d6e914d837b278f (MD5) / Animais da raça Holandesa, criados nas regiões de clima temperado a quente apresentam baixa eficiência quanto ao número, qualidade e competência oocitária para a produção in vitro de embriões, em comparação às raças Zebuínas. Por outro lado o controle da onda folicular e a estimulação com FSH exógeno pode incrementar o número e melhorar a qualidade e competência oocitária para a produção embrionária. Com o objetivo comparativo sete novilhas, sete vacas não lactantes e sete vacas em lactação foram utilizadas em um delineamento em “crossover” foram submetidas a quatro tratamentos: T1 – Aspiração folicular ao acaso em dia aleatório do ciclo estral; T2 – Aspiração folicular dois dias após a remoção do folículo dominante; T3 - Aspiração folicular 24 horas após remoção do folículo dominante e estimulação com dose única de FSH (100 UI para novilhas e 200 UI para vacas não lactantes ou em lactação) vinte quatro horas antes da aspiração folicular; T4 – Aspiração folicular após estimulação e indução do pico de LH (inserção de implante de progestágeno, aspiração do folículo dominante e estimulação com FSH na dose de 250 UI para novilhas, 500 UI para vacas não lactantes e lactantes, subdividas em 8 doses decrescentes, indução de luteólise e retirada do implante 36 horas antes do GnRH e aspiração folicular 24 horas após a administração de GnRH). Não foi observada diferença estatística entre os tratamentos (P>0,05) quando foi avaliada a recuperação de oócitos, no entanto a categoria de novilhas obteve melhores resultados e apresentou diferença estatística (P<0,05) quando comparada com vacas lactantes e não lactantes, porém não foi observada diferença estatística entre as categorias vacas não lactantes ou vacas lactantes. Quando os oócitos viáveis foram avaliados, a categoria de novilhas apresentou melhor resultado e diferença significativa ... / Holstein cows, bred in temperate to hot climate have low efficiency on the number, quality and oocyte competence for in vitro production of embryos, compared to Zebu breeds. On the other hand the control of follicular wave and stimulation with exogenous FSH can increase the number and improve the quality and oocyte competence for embryo production. With the comparative goal seven heifers, seven non-lactating cows and seven lactating cows were used in a complete crossover were subjected to four treatments: T1 - Follicular Aspiration randomly at any time of the estrous cycle; T2 - Follicular Aspiration two days after removal of the dominant follicle; T3 - Follicular Aspiration 24 hours after removal of the dominant follicle and stimulation with single dose of FSH (100 IU to 200 IU for heifers and non-lactating cows or lactating) twenty four hours before follicular aspiration; T4 - Follicular Aspiration after stimulation and induction of the LH surge (progestagen implant insertion, aspiration of the dominant follicle and FSH stimulation at a dose of 250 IU to 500 IU for heifers and non-lactating and lactating cows, subdivided in 8 decreasing doses, induce luteolysis and removal of the implant 36 hours before of the GnRH and follicular aspiration 24 hours after GnRH administration). No statistical difference between treatments (P>0.05) was evaluated oocyte retrieval was observed, however category heifers achieved better results and statistical differences (P<0.05) compared with lactating cows and non-lactating, although no statistical difference between the categories of non-lactating cows and lactating cows was observed. When the viable oocytes were evaluated, the grade of heifers showed better results and significant difference (P <0.05) compared with lactating and non-lactating cows, and no significant difference was observed between non-lactating cows and lactating cows (P>0.05). In relation to treatments, treatment 1 (T1) differed ...

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo "Synthetic Oviduct Fluid" (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob ... / Abstract: In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ... / Mestre

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Junior / Resumo: Nos programas de transferência de embriões um dos principais entraves são a disponibilidade de receptoras aptas por doadora de embrião. Sendo assim, estudos estão sendo desenvolvidos utilizando de diferentes protocolos hormonais para utilização nas receptoras em programas de TE . O objetivo do presente trabalho foi sincronizar éguas receptoras de embriões, independentes da fase do ciclo estral e da atividade ovariana, com o ciclo da doadora, maximizando a utilização das receptoras no programa de transferência de embriões (TE). Foram utilizadas 160 éguas, que foram separadas em grupos de 20 animais conforme a fase do ciclo estral: 1) éguas acíclicas em anestro e transição, 2) cíclicas em estro com folículos < 35 mm, 3) em estro com folículos ≥ 35 mm, 4) em diestro com CL < 5 dias e 5) em diestro com CL ≥ 5 dias. Inicialmente, todos os animais receberam uma aplicação de 10mg de dinoprost trometamina e 1 aplicação de 17β estradiol por 4 dias consecutivos seguido por uma aplicação de 300 mg de altrenogest. Posteriormente, o protocolo foi modificado e realizado em mais um grupo 6) com uma dose de 10mg de dinoprosttrometamina no segundo dia do tratamento. Os embriões foram transferidos de três a oito dias após a aplicação do altrenogest. O diagnóstico de gestação foi efetuado 5 a 7 dias após a TE. Com apenas uma aplicação de prostaglandina no primeiro dia de tratamento todos os animais apresentaram edema uterino acentuado e taxas de prenhez superior a 70%, entretanto as receptoras ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In embryo transfer programs, one of the main obstacles is the availability of recipients suitable for embryo donors. Thus, studies are being developed using different hormonal protocols for use in recipients in ET programs. The objective of the present study was to synchronize the uterine environment of embryo recipient mares, independent of the estrous phase and ovarian activity, with the donor cycle, maximizing the use of recipients in the embryo transfer program. A total of 160 mares were used, which were separated into groups of 20 animals according to the estrous phase: acyclic mares in anestrus and transition, cyclic estrus with follicles <35 mm, estrus with follicles ≥ 35 mm, in right ventricle with CL <5 Days and in right arm with CL ≥ 5 days. Initially, all animals received an application of 10 mg of dinoprost tromethamine and 1 application of 17β estradiol for 4 consecutive days followed by a 300 mg application of altrenogest. Subsequently, the protocol was modified and another 10mg dose of dinoprost tromethamine was added on the second day of treatment. The embryos were transferred three to eight days after the application of altrenogest. The diagnosis of gestation was made 5 to 7 days after ET. With only one application of prostaglandin on the first day of treatment, all the animals had marked uterine edema and pregnancy rates higher than 70%; however, those receiving at the start of treatment had a CL <5 days showed significantly lower uterine edema than The othe... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

191 f. / Submitted by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-26T16:30:56Z No. of bitstreams: 1 ANA THEREZA MEIRELES ARAÚJO - Dissertação.pdf: 977993 bytes, checksum: 74fc2106946bbd7cf534c96982f85a37 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Valéria de Jesus Moura(anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-26T16:31:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANA THEREZA MEIRELES ARAÚJO - Dissertação.pdf: 977993 bytes, checksum: 74fc2106946bbd7cf534c96982f85a37 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-26T16:31:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA THEREZA MEIRELES ARAÚJO - Dissertação.pdf: 977993 bytes, checksum: 74fc2106946bbd7cf534c96982f85a37 (MD5) Previous issue date: 2009 / Dissertação destinada à análise do conceito dogmático de homem como sujeito de direito, considerando os seus diferentes estágios de vida: o embrião, o feto e o indivíduo já nascido. Para isso, urge verificar, como premissa, a contribuição ontológica da filosofia e da história na formação do conceito em questão, revelada pela influência do direito romano, do pensamento cristão e da filosofia moderna e contemporânea, essencialmente, através das concepções do personalismo e do existencialismo. Em seguida, busca-se a identificação do procedimento que origina o embrião em estado extracorpóreo e passa-se a verificar as teorias que fundamentam a determinação do início da vida humana, precisamente, a concepcionista, as teorias genético-desenvolvimentistas ou biológicas e a teoria da potencialidade. A partir disso, surge a necessidade de avaliar os conceitos, categorias e classificações dogmáticas delineadas precisamente pelo direito civil, que são os conceitos de pessoa, sujeito de direito, prole eventual, personalidade e capacidade jurídica. Considerando tais análises, passa-se a identificar os estágios de vida humana e a respectiva pretensão de cada um em ser sujeito de direito, ou seja, busca-se a averiguação da natureza jurídica do embrião (fecundado artificialmente e conservado em laboratório), do feto (o nascituro, conquanto esteja no ventre materno) e do indivíduo nascido, qualificado juridicamente como pessoa física ou natural. Enfim, chega-se à reflexão sobre a existência ou não de princípio ou previsão dentro do regramento jurídico brasileiro que vincule a aquisição da personalidade jurídica à possibilidade de titularizar direitos, para que se possa determinar a delimitação dogmática do conceito de homem como sujeito de direito e, consequentemente, a condição jurídica do embrião e do nascituro. / Salvador

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-10-16T11:25:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566274 bytes, checksum: 435b70c31d30f285a894df8e6609cd67 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T11:25:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566274 bytes, checksum: 435b70c31d30f285a894df8e6609cd67 (MD5) Previous issue date: 2015-06-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da adição de L-carnitina, um acelerador do metabolismo lipídico, e ácido linoléico conjugado (trans-10, cis-12) em diferentes fases da produção in vitro de embriões sobre o desenvolvimento e criotolerância embrionária. Em todos os experimentos, embriões foram produzidos in vitro utilizando-se complexos cumulos-oócitos (CCO) provenientes de ovários coletados em abatedouro. Foram calculadas as taxas de clivagem (dia 3 do cultivo), taxa de formação de blastocistos expandidos e blastocistos em estágio avançado de desenvolvimento (dia 7 do cultivo) em função do total de CCO inseminados. Embriões em estágio de blastocisto expandido foram coletados de cada tratamento no dia 7 do cultivo in vitro e submetidos ao congelamento lento. Avaliou-se a taxa de reexpansão e eclosão embrionária 24, 48 e 72 h após o descongelamento em função do total de embriões descongelados. No experimento 1, oócitos fertilizados foram incubados em meio de cultivo contendo diferentes concentrações de L-carnitina (0,00; 0,75; 1,50 ou 3,03 mM) suplementado ou não com 5 % de soro fetal bovino (SFB). A adição de L-carnitina ao meio de cultivo na concentração de 1,5 mM melhorou a taxa de formação de blastocistos em estágio avançado de desenvolvimento quando comparado ao grupo controle (15,2±2,0 vs. 11,2±1,5; P<0,05). A L-carnitina também apresentou efeito positivo sobre a reexpansão embrionária 24 e 48 h pós-descongelamento quando adicionada na concentração de 0,75 e 3,03 mM (77,4±4,5; 80,1±4,0 e 75,0±5,5; 78,0±4,2 vs. 64,0±4,7; 67,4±4,7) ao meio de cultivo (P<0,05). Não houve interação entre os efeitos da adição de L-carnitina e SFB ao meio de cultivo embrionário. Apesar da suplementação do meio de cultivo com SFB ter melhorado o desenvolvimento embrionário (27,2±1,1 vs. 19,4±0,9; P<0,01), houve uma redução das taxas de reexpansão 24, 48 e 72 h pós-descongelamento (65,8±2,9; 67,8±2,8; 66,0±3,0 vs. 78,1±3,8; 81,4±3,0; 79,1±3,5; P<0,01). No experimento 2, os embriões foram cultivados em meio contendo L-carnitina (0,75 mM) ou ácido linoleíco conjugado (CLA – 100 mM) durante as primeiras 96 h, últimas 72 h ou durante todo o cultivo in vitro. A suplementação do meio de cultivo com L-carnitina ou CLA durante diferentes vifases do cultivo in vitro não afetou o desenvolvimento e a criotolerância embrionária. No experimento 3, avaliou-se o desenvolvimento e a crioresistência embrionária quando oócitos foram maturados em meio suplementado com L-carnitina (3.03 mM) e/ou CLA (100 mM). L-carnitina e CLA não afetaram o desenvolvimento embrionário quando adicionados ao meio de maturação. Apesar da L-carnitina não ter afetado a a taxa de reexpansão embrionária pós-descongelamento, o CLA apresentou efeito negativo sobre a eclosão embrionária 72h pós-descongelamento (53,3±3,6 vs. 65,1±4,3; P<0,05) quando adicionado ao meio de maturação oócitaria. Como conclusão, a L- carnitina melhora a criotolerância de embriões produzidos in vitro quando adicionada à concentração de 0,75 mM ao meio de cultivo embrionário. Já o CLA apresenta efeito negativo sobre a sobrevivência embrionária após o descongelamento quando adicionado ao meio de maturação oócitaria. / High lipid content in embryo is associated with low freezing tolerance. This study assessed the effects of exogenous L-carnitine and trans-10, cis-12 (t10, c12) conjugated linoleic acid (CLA) on in-vitro development and cryotolerance of bovine embryos when added during different stages of in vitro production of embryos. For all experiments, embryos were produced in vitro using slaughterhouse cows oocytes. Cleavage rates on Day 3, blastocyst and advanced blastocyst (hatching/hatched blastocyst) formation rates on Day 7 were calculated from the total number of oocytes subjected to in vitro fertilization (IVF). Expanded blastocysts-stage embryos from each treatment were harvested on Day 7 and subjected to slow freezing. Embryo viability was assessed 24, 48 and 72 h after thawing. In experiment 1, fertilized oocytes were incubated with different L-carnitine concentrations (0.0, 0.75, 1.50 or 3.03 mM) in the presence or absence of fetal bovine serum (FBS). There was an improvement (P<0.05) on embryo development when 1.5 mM of L-carnitine was added to in vitro culture (IVC) medium. L-carnitine had also a positive effect (P<0.05) on post thaw embryo competence when supplemented at 0.75 and 3.03 mM during IVC. There was no interaction (P>0.05) between the effects of L-carnitine and FBS supplementation on IVC on embryo development and cryosurvival. Although FBS supplementation had increased blastocyst development (P<0.05), it reduced the reexpansion rates at 24, 48 and 72 h post thawing. In experiment 2, L-carnitine (0.75 mM) or CLA (100 mM) were supplemented during the first 96 h, last 72 h or throughout the entire IVC period. There was no effect of L-carnitine or CLA supplementation during different periods of IVC on embryo development and cryotolerance. In experiment 3, embryo development and cryosurvival were evaluated when oocytes were maturated in medium supplemented with L-carnitine (3.03 mM) or/and CLA (100 mM). No effect of L-carnitine and CLA supplementation during in vitro maturation (IVM) on IVP embryo development was detected. Although there was no effect (P>0.05) of L-carnitine supplementation on embryo cryotolerance, CLA showed a negative effect (P<0.05) on embryo cryosurvival when added during IVM. In conclusion, L-carnitine improved embryo cryosurvival viiiwhen added at 0.75 mM during IVC and CLA supplementation during IVM has a negative effect on post thaw embryo survival.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-29T17:51:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573452 bytes, checksum: b30ab12e24dedee6f3cd4b820e641897 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T17:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573452 bytes, checksum: b30ab12e24dedee6f3cd4b820e641897 (MD5) Previous issue date: 2016-07-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A produção in vitro de embriões caprinos ainda não é considerada uma biotecnologia rotineiramente efetiva. Um dos fatores mais importante e que dificulta a evolução no processo de todo o processo da PIV é o estresse oxidativo. A proposta adotada neste estudo foi avaliar os efeitos da adição de melatonina em meios de maturação e cultivo in vitro no desenvolvimento de embriões caprinos e na qualidade dos blastocistos oriundos de oocitos de cabras pré-púberes. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro de embriões partenogenéticos através da taxa de desenvolvimento de blastocistos e vitrificação. Foi utilizado um meio de maturação e de cultivo in vitro e convencional com e sem melatonina (10-9 mol L-1). Os oocitos com células do Cumulus oophorus foram maturados in vitro naqueles meios de maturação por 27 h e então ativados. Estas células ativadas foram cultivadas nos respectivos meios de cultivo por oito dias e então aferidos as taxas de blastocistos. O método de vitrificação foi utilizado de acordo com Mermillod et al., 1998. A adição da melatonina a 10-9 mol L- aos meios de maturação e de cultivo in vitro não apresentou melhora na taxa de blastocistos produzidos. Na segunda parte deste estudo objetivou-se avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro, porém em embriões fertilizados artificialmente, por meio da taxa de desenvolvimento de blastocistos. Utilizou-se um meio convencional para MIV com ou sem adição de melatonina a 10-9 mol L-1. Após a MIV, os oocitos maturados foram inseminados com semen a fresco, e os espermatozoides foram capacitados em meio de capacitação contendo heparina. Os possíveis zigotos foram separados e uma parte foi cultivado em meio de cultura padrão com adição da melatonina a 10-9 mol L-1. Ambos foram cultivados durante oito dias e a taxa de blastocisto foi aferida. Os resultados desta segunda etapa mostraram que ao utilizar melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada ao meio de maturação in vitro convencional melhoraram quanto ao número de células fertilizadas (34,57% vs. 17,39%, p<0,05), embora, não houve melhora na taxa de clivagem e no número de blastocistos produzidos. A conclusão mostra que a melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada tanto em MIV, quanto em CIV, não melhora o desenvolvimento e a produção dos embriões in vitro, embora possa aumentar a taxa fertilização in vitro. / The in vitro production of goat embryos is not considered a routinely effective biotechnology. There are a number of factors that hinder the progress in the process of maturation, fertilization, cultivation and freezing. One of the most important factors that cause deleterious effects throughout the IVP process is the oxidative stress. The proposal of this study in order to prevent and to control that stress condition was to supplement the in vitro maturation (IVM) and in vitro culture media (IVC) with melatonin evaluating it effects on the development of goat embryos and quality of embryos derived from prepubertal goats oocytes. The aim of the first experiment was to evaluate the effect of melatonin supplementation in the in vitro culture on development of parthenogenetic embryos. It was used two in vitro maturation media [conventional maturation media (CM) and CM + 10-9 M melatonin] and two in vitro culture media [conventional cultivation media (CC) and CC + 10-9 M melatonin. The oocytes with cumulus cells were randomly distributed in the IVM and then activated by ionomycin method followed by 6-DMAP. Afterwards, presumptive zygotes were randomly distributed in the IVC media and cultured for eight days. Supplementation of 10-9 M melatonin to the IVM and IVC media showed no improvement in the parthenogenetic blastocyst rate. The blastocyst rate diminished when melatonin was added in vitro culture medium. The second study was also evaluate the effect of melatonin in vitro culture medium, but using in vitro fertilization over the blastocyst development rate. We used a conventional medium (CM) to in vitro maturation media and other CM was supplemented with melatonin at 10-9 M. After IVM, the matured oocytes were inseminated with fresh semen, and then, that spermatozoa were capacitated and cultured for eight days. There was an in vitro culture media used and other one added with melatonin (10-9 M). The results of this second study demonstrated that the use of melatonin at 10-9 M added to the in vitro conventional maturation medium presented a beneficial effect on the number of fertilized cells (34.57 % vs. 17.39%, p<0.05). However, this addition there was no improvement in the cleavage rate nor the blastocyst rate. We concluded that melatonin at 10-9 M added in both IVM medium and IVC medium do not improve the development of embryos. However, it can be a gain in the in vitro fertilization rate when melatonin is added in the IVM medium.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivos: este trabalho objetivou estudar a expressão gênica da família das interleucinas-1 em células células-tronco embrionárias indiferenciadas de camundongos e avaliar se ela se altera após a diferenciação celular. Métodos: Pesquisou-se a expressão gênica dessas substâncias em células-tronco (CT) indiferenciadas e durante a diferenciação celular em cardiomiócitos de camundongos. Colônias na 5a , 10a , 15a , 20a e 25a passagens em meios de cultivo foram removidas para a pesquisa de RT-PCR utilizando-se o kit SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. A amplificação do DNAc através do PCR foi realizada com a enzima Platinum® Taq DNA Polymerase. Foram utilizados os primers da interleucina-1β (IL- 1F2), antagonista do receptor de IL-1 (IL-1F3) e receptor tipo 1 de IL-1 (IL-1RI). Para estudo da IL-1 em estado diferenciado, foram utilizados corpos embrionários de três e cinco dias de cultivo e cardiomiócitos derivados de CT. Resultados: todas as 45 colônias indiferenciadas de CT mostraram-se negativas para IL-1F2; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1F3 e também para marcadores de ectoderma (FGF5) e endoderma (Gata6) primitivos; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1RI e também para ectoderma e mesoderma. Nenhum dos quatro corpos embrionários estudados foram positivos para IL-1F2. Um deles foi positivo para IL-1F3 e dois positivos para IL-1RI. Todas as quatro biópsias de cardiomiócitos mostraram-se positivas para IL- 1F2 e também para IL-1F3. Duas delas foram positivas para IL-1RI. Pelo que se pôde observar, este é o primeiro estudo que descreve a expressão genética da família da IL-1 em colônias individuais de células-tronco embrionárias de camundongos. Conclusão: as células-tronco indiferenciadas de camundongos estudadas não produziram genes da família da IL-1. / Purpose: this work objectived to study the IL-1 family gene expression in undifferentiated mouse embryonic stem (ES) cells and during diferentiation into cardiomyocytes. Methods: Colonies at 5, 10, 15, 20 and 25th passages were taken to perform RT-PCR using SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. PCR amplification of cDNA was done with Platinum® Taq DNA Polymerase. We used Interleukin-1β (IL-1F2), IL-1 receptor antagonist (IL-1F3) and IL-1 receptor type I (IL-1RI) primers. Results: all 45 undifferentiated ES cells were negative for IL-1F2; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1F3 and also for primitive ectoderm (FGF5) and endoderm (Gata6) markers; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1RI and also for ectoderm and mesoderm. To further study IL-1 at a late stage of cell differentiation, we used embroyd bodies (EB) at day 3 and 5 and ES cell derived cardiomyocytes. None of four embroid bodies studied were positive for IL-1F2. One out of four EB was positive for IL-1F3 and two out of four EB were positive for IL- 1RI. Four out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1F2 and also for IL-1F3. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. To our knowledge this is the first time to describe an IL-1 family gene expression study in undifferentiated single mouse ES cells. Conclusion: undifferentiated mouse ES cells studied didn’t produce major components of IL-1 family. / CAPES: BEX 1475/03-7 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-15T04:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334483.pdf: 1280732 bytes, checksum: 5afacf59241ca14703bff615c0f6abbd (MD5) Previous issue date: 2015 / O aumento da incidência da radiação ultravioleta (UV) na superfície terrestre, decorrente, entre outros, da emissão de compostos poluentes na atmosfera e a existência do buraco na camada de ozônio na região Antártica, tem chamado atenção dos pesquisadores. A radiação UV mais danosa aos seres vivos é a radiação ultravioleta B (UVB). Os ambientes aquáticos, assim como os terrestres, estão sujeitos à incidência dessa radiação, porém poucos trabalhos têm elucidado os efeitos celulares provocados pela radiação UVB nos organismos que habitam estes ambientes. Dentre os muitos efeitos celulares da radiação UVB está a indução à apoptose, que no desenvolvimento embrionário desempenha um papel importante de controle do número celular. O objetivo deste trabalho foi caracterizar espacialmente e temporalmente a expressão de proteínas envolvidas no processo apoptótico induzido pela radiação UVB durante a morfogênese e organogênese iniciais, utilizando embriões do camarão de água doce Macrobrachium olfersi como modelo de estudo (autorização IBAMA - 15294/1). Assim, foi simulado, em laboratório, a irradiação UVB (310 mW/cm2) que os embriões recebem durante a época de reprodução no ambiente natural. Fêmeas ovígeras, com embriões em E6, foram irradiados usando uma lâmpada UVB 6W por 30 min. Após a irradiação, os embriões foram mantidos no escuro por 4 h, 6 h, 8 h, 12 h e 20 h. Embriões em E6 e E7 não irradiados foram utilizados como controle. Os resultados obtidos sugerem que a radiação UVB induz, em embriões de M. olfersi, a ocorrência de apoptose através do recrutamento inicial de proteínas relacionadas às vias intrínsecas, desencadeada por dano ao DNA e também pela ativação de proteína pró-apoptótica Bak, devido a alterações na permeabilidade da membrana mitocondrial. Posteriormente foi observado um aumento da proteína Fas, que atua como receptor de morte na sinalização da via extrínseca. A ocorrência de apoptose não se restringiu a uma região embrionária específica. Este trabalho permitiu caracterizar espacial e temporalmente a expressão de proteínas envolvidas no processo apoptótico em embriões de M. olfersi, contribuindo assim para a compreensão deste processo em células embrionárias de invertebrados e dessa forma contribuir também para o conhecimento atual sobre o impacto da radiação UVB nos organismos aquáticos.<br> / Abstract : The increase of ultraviolet radiation (UV) on Earth?s surface, due to the emissions of pollutant compounds in the atmosphere and the existence of the ozone hole in the Antarctic region, have attracted the attention of researchers. The most harmful spectrum of UV radiation to organisms is ultraviolet B radiation (UVB). The aquatic, as well as, the terrestrial environments are subject to incidence of this radiation, but few studies have elucidated the cellular effects caused by UVB radiation in organisms that inhabit these environments. Among the multiple cellular effects of UVB radiation is the induction to apoptosis that plays an important role in embryonic development on control of the cellular number. The aim of this study was to spatially and temporally characterize the expression of proteins involved in the apoptotic process induced by UVB radiation during early morphogenesis and organogenesis, using embryos of freshwater Macrobrachium olfersi as a model (IBAMA authorization - 15294/1). Thus, the UVB irradiation (310 mW/cm2) that embryos receive during the breeding season in the natural environment was simulate in the laboratory. Ovigerous females with embryos at E6 were irradiated using a UVB lamp 6W for 30 min. After irradiation, the embryos were kept in darkness for 4 h, 6 h, 8 h, 12 h and 20 h. Non-irradiated embryos at E6 and E7 were used as controls. The obtained results suggest that UVB radiation induces in M. olfersi embryos the occurrence of apoptosis, through the initial recruitment of proteins related to intrinsic pathways, triggered by DNA damage and also by the activation of pro-apoptotic protein Bak, due to changes in permeability of mitochondrial membrane. After, was observed a increase in Fas proteins that acts a death receptor in the extrinsic pathway signaling. The occurrence of apoptosis was not restricted to a specific embryonic region. This work allows to characterize spatial and temporally the expression of proteins involved on apoptotic process in M. olfersi embryos, contributing to the understand of this process in embryonic cells of invertebrates, and thereby contribute to the current knowledge about the impact of UVB radiation on aquatic organisms.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:16:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320917.pdf: 1503080 bytes, checksum: c10252040c4aed94efc82e695b51d2bc (MD5) Previous issue date: 2013 / O aumento da radiação UVB que atinge a superfície terrestre está associado à redução da camada de ozônio. A radiação UVB pode penetrar em ambientes aquáticos e atingir adultos, larvas e embriões que nele habitam. Macrobrachium olfersi é um camarão de água doce que vive e se reproduz em águas rasas e transparentes, e seus ovos estão expostos à radiação durante os estágios do desenvolvimento. O objetivo deste estudo foi investigar se a radiação UVB induz danos no DNA e compromete o ciclo celular em embriões de M. olfersi. Assim, foi simulada a irradiação UVB (310 mW/cm2) recebida pelos embriões durante a época de reprodução. Embriões em estágio pós-naupliar inicial (E5) foram irradiados com lâmpada UVB 6W por 30 minutos. Após, os embriões foram mantidos por: (i) uma hora no escuro, (ii) dois dias sob fotoperíodo natural ou (iii) dois dias no escuro. Embriões não irradiados foram utilizados como controle. Danos no DNA, especificamente dímeros de pirimidina, foram observados uma hora após a irradiação, os quais foram similares aos embriões do grupo irradiado-escuro. No entanto, os embriões irradiados que foram mantidos em fotoperíodo natural tiveram diminuição significativa dos dímeros de pirimidina. Além disso, foi observada a diminuição da proliferação de células embrionárias nos grupos irradiados. Não foi observada superexpressão das proteínas p21 e p53. Embriões irradiados com UVB mostraram superexpressão do antígeno PCNA. Observou-se também que nos embriões irradiados aumentou a ocorrência da apoptose. Este estudo mostrou que a UVB altera a proliferação celular em embriões, que pode comprometer os eventos de morfogênese e organogênese. No entanto, os resultados indicam que os embriões M. olfersi foram capazes de reparar danos no DNA quando mantidos em condição de luz visível. <br> / Abstract : The increase of UVB radiation that reaches the Earth surface of the is associated with the reduction of the ozone layer. UVB radiation can penetrate in clear shallow aquatic environments and therefore compromise adults, larvae and embryos. Macrobrachium olfersi is a prawn that lives and reproduces in transparent shallow Waters, and their eggs are exposed to radiation during developmental stages. The aim of this study was to investigate whether UVB radiation induces DNA damage and compromises cell cycle in embryos of M. olfersi. Thus, it was simulated the natural UVB irradiance (310 mW/cm2) that embryos received during the breeding season. Embryos at early post-naupliar stage (E5) were irradiated using a UVB lamp 6W for 30 minutes. After, the embryos were kept for: (i) one hour in the dark, (ii) two days under natural photoperiod or (iii) two days in the dark. Non-irradiated embryos were used as controls. DNA damage, specifically pyrimidine dimers, was observed one hour after irradiation, which are similar to embryos of the irradiated dark group. However, irradiated embryos kept in natural photoperiod had a significant decrease of pyrimidine dimers. In addition, was observed a decrease of proliferation of embryonic cells in the irradiated groups. No overexpression was observed in p21 and p53 proteins. UVB irradiated embryos the overexpressed the antigen PCNA. It was also observed that irradiated embryos showed a increased occurrence of apoptosis. This study indicates that the UVB changes the cell proliferation of embryos, and may compromise the subsequent morphogenesis and organogenesis events. However, the results indicate that M. olfersi embryos were able to repair DNA damage, when exposed to visible light.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:57Z : No. of bitstreams: 1 000860413_20170910.pdf: 230352 bytes, checksum: 018e667c9aa92dfab87506346c37b2be (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-11T13:56:01Z: 000860413_20170910.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-11T13:56:50Z : No. of bitstreams: 1 000860413.pdf: 1309321 bytes, checksum: 5ddda6b6b143e0c96151c41cdd3f86a3 (MD5) / Embriões produzidos in vitro (PIV) apresentam baixa sobrevivência aos métodos convencionais de criopreservação. Na tentativa de melhorar a produção e taxa de sobrevivência embrionária após a vitrificação foram utilizados reguladores metabólicos L-carnitina (CA), Forskolina (FO) e Ácido linoleico conjugado trans-10; cis-12 (CLA), separadamente ou em associação em diferentes doses, à partir do quarto (D4) ou sexto (D6) dia do cultivo de desenvolvimento embrionário. No experimento 1 o uso de 2,5 mM de CA influenciou positivamente na produção (62,0±12,5%, P=0,02), expansão (60,7%, P=0,009) e eclosão (41,1%, P=0,04). No experimento 2, a produção de embriões não foi influenciada pela suplementação com FO (P=0,2), entretanto, a dose de 15,0μM afetou positivamente a expansão (53,2%, P=0,001) e eclosão (46,8%, P0,001). No experimento 3, a produção de embriões não foi influenciada pela suplementação do meio de cultivo com CLA (P=0,4), no entanto a dose de 150,0 μM afetou positivamente a expansão (85,5%, P=0,001) e eclosão (70,9%, P=0,001) dos embriões reaquecidos e cultivados por 48 horas. No experimento 4, a associação dos reguladores de metabolismo lipídico utilizados não influenciou a produção de embriões (P=0,16), entretanto o melhor resultado de produção observado foi no tratamento com 15,0 μM de FO individualmente. As taxas de expansão e eclosão foram influenciadas pela suplementação com reguladores de metabolismo adicionados individualmente ou em associação (P=0,001). A melhor taxa de expansão foi observada na suplementação associando CA+FO+CLA, com 90,05%, que não diferiu (P>0,05) da suplementação com CLA (86,4) e da associação CA+CLA (87,9%). Entretanto, a melhor taxa de eclosão foi obtida com CLA (71,8%, P=0,01), superior aos demais tratamentos. Foi concluído que o uso dos... / Embryos produced in vitro (IVP) have low survival to conventional cryopreservation methods. In attempt to improve the production and the rate of embryo survival to the cryopreservation process, was used the metabolic regulators, L-carnitine (CA), forskolina (FO) and the conjugated linoleic acid isomers trans-10, cis-12 (CLA), separately or in combination in different doses, starting the fourth (D4) or sixth (D6) days of the embryo culture development in vitro. In experiment 1, the best results of production (62,0 ± 12,5%, P = 0,02), expansion (60,7%, P = 0,009), and hatching (41,1 % P = 0,04) was obtained using 2,5 mM of CA. In experiment 2, the production of embryos was not influenced by supplementation with FO (P=0,2), however, the dose of 15,0μM was the best result of expansion (53,2%) and hatching (46,8%) (P=0,001). In experiment 3, the production of embryos was not influenced by supplementation with CLA (P=0,4), however, the dose of 150,0 μM resulted in higher rates of expansion (85,5%, P=0,001) and hatching (70,9%, P=0,001). In the experiment 4, the embryo production was not influenced by the supplementations (P=0,16), however the best result of the production was using 15,0μM of FO individually. The expansion and hatching rates was influenced by supplementation with the metabolism regulators added individually or in a combination (P=0,001). The best expansion rate was observed with the association CA+FO+CLA (90,05%), that was not different (P>0,05) of the CLA (86,4%) or CA+CLA (87,9%) groups. However, the best hatching rate was obtained with CLA (71,8%), which was higher to the other treatments (P=0.01). In conclusion, the use of the metabolic regulators CA, FO and CLA from the fourth day of the embryo culture in vitro increase ...