Orientador: Nilza Maria Martinelli / Banca: Douglas Henrique Bottura Maccagnan / Banca: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Tomás Kanashiro Matuo / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Resumo: Quesada gigas (Olivier, 1790) (Hemiptera: Cicadidae) é uma espécie de cigarra com ampla distribuição geográfica no continente americano. Atualmente esta espécie é considerada praga em cultivos cafeeiros do sul e sudoeste do Estado de Minas Gerais. A principal forma de controle desta praga se dá a partir da aplicação de inseticidas sistêmicos no solo, o que pode implicar na elevação dos custos de produção e também no aumento de contaminação ao meio ambiente. A compreensão sobre aspectos bioecológicos de Q. gigas em lavouras cafeeiras pode permitir a geração de informações para o aprimoramento e o desenvolvimento de técnicas alternativas visando seu manejo. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram estudar aspectos bioecológicos de Q. gigas, como: i) desenvolvimento embrionário; ii) desenvolvimento ninfal em diferentes hospedeiros; iii) comportamento de dispersão, cópula e oviposição de adultos; e iv) determinar a maturação ovariana e o padrão de emergência de machos e fêmeas. Os estudos foram conduzidos em duas fazendas localizadas no Município de São Sebastião do Paraíso - MG, e nos laboratórios da UNESP/FCAV e da USP - Ribeirão Preto, SP. As etapas do desenvolvimento embrionário foram visualizadas através de cortes semifinos, e analisadas por microscopia. O período embrionário de Q. gigas variou de 40 a 115 dias em condições de laboratório. Em condições de campo, foram observadas em 2014/2015 eclosões ninfais dos 42 aos 81 dias após oviposições, e em 2015/2016, dos 40 a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Quesada gigas (Olivier, 1790) (Hemiptera: Cicadidae) is a species of cicada with wide geographic distribution in the American continent. Currently this species is considered a pest in coffee plantations in the south and southwest of the State of Minas Gerais. The main strategy used to control this pest is the application of systemic insecticides in the soil, which increases production costs and causes environmental contamination The knowledge of bioecological aspects of Q. gigas in coffee plantations may allow the generation of information for the improvement and development of alternative techniques aiming its management. Thus, the objectives of this work were to study the bioecological aspects of Q. gigas, such as: i) embryonic development; ii) nymphal development in different hosts; iii) adult dispersal, mating and oviposition behavior; and iv) determine ovarian maturation and emergence pattern of males and females. The experiments were conducted in two farms located in the municipality of São Sebastião do Paraíso - MG, and in the laboratories of UNESP / FCAV and USP - Ribeirão Preto, SP. The stages of embryonic development were visualized through semithinned sections, and analyzed by microscopy. The embryonic period of Q. gigas ranged from 40 to 115 days under laboratory conditions. In field conditions, in 2014/2015, the nymphs hatched from 42 to 81 days post-oviposition; and in 2015/2016, from 40 to 88 days post-oviposition. All nymphs hatched in rainy days. Histological analysis revealed chrorion structure and the vitelline membrane, as well as the processes of cleavage, blastoderm formation, gastrulation and blastokinesis. Through the rearing technique, where different hosts were used in semi-field conditions, it was possible to obtain nymphals in first, second, thir... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:40:25Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_assbs_dr_botib.pdf: 4158514 bytes, checksum: 5956ae458c6e301103b5dc97aeaa09ce (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O processo educacional sofreu massificação nos últimos anos devido ao crescimento do conhecimento, a facilidade de acesso, a oferta de cursos, aliados às novas tecnologias da informação e comunicação. Assim, surgiram grupos de pesquisa dedicados a métodos de aprendizagem com o objetivo de elucidar e aperfeiçoar o processo de aquisição de conhecimentos e suas competências, além de torná-los mais eficientes. Desta forma, esta pesquisa teve como objetivos elaborar conteúdos didáticos, na forma de curso sobre o tema “Embriologia Comparada”, transpô-los para um ambiente virtual de apoio ao aprendizado presencial e não presencial, disponibilizá-lo aos alunos do 2º ano de Biologia noturno da UNESP, Campus de Botucatu, e por fim avaliar o seu impacto no processo ensino/aprendizagem. Para isto, foi necessária a construção do projeto didático-pedagógico sobre o tema proposto voltado para a educação não presencial O conteúdo didático foi produzido por professores especialistas e dividido em 15 módulos para facilitar a sua visualização, interação e compreensão pelos alunos. Estes foram customizados para linguagem digital, contendo textos, hipertextos, multimídia, hipermídia, imagens, vídeos e animações. Após, baseado na análise do público-alvo, iniciou-se a construção da sua programação visual e seu design instrucional, sendo inserido no ambiente virtual de ensino Moodle, que era acessado mediante senha. Este foi customizado e disponibilizado durante o oferecimento da Disciplina de “Embriologia Comparada” aos alunos do 2º ano de Biologia noturno da UNESP, Campus de Botucatu. Os alunos participaram do ambiente por meio de fórum, consulta ao material didático, chat, wiki e jogos interativos. A avaliação do processo de aprendizagem ocorreu de duas formas: a primeira comparou as notas dos alunos com as notas das três turmas anteriores da mesma... / The educational process has undergone massification in recent years due to the growth of knowledge, ease of access and offering of courses combined with new information and communication technology. Thus, research groups appeared devoted to study learning methods in order to clarify and improve the process of acquiring knowledge and skills, as well as to make them more efficient. This research aimed to develop an educational content in “Comparative Embryology”, and customize it in a virtual environment of learning to support classroom and distance learning. The content was available to second-year Biology students of UNESP, Botucatu, and its impact on teaching/learning process was assessed. It was necessary to build the didactic-pedagogic project while the scientific contents were produced by expert teachers and divided into 15 modules for easy viewing, interaction and understanding among the students. The modules were adapted to digital language and contained texts, hypertexts, multimedia, hypermedia, images, videos and animations. Based on analysis of the target audience, the visual programming and instructional design begun, inserted in Moodle Virtual Learning Environment, which was accessed by password. The students participated in the online learning environment through forums, consultation of the material, chat, wiki and interactive games. The evaluation of the learning process occurred in two ways: the first compared the grades of the students with grades of three previous classes of the same discipline; the second was performed by means of a questionnaire that assessed the environment, by the end of the course, answered by the students. Regarding test scores, when compared with previous years, there was no significant difference. In contrast, after the students analyzed the virtual environment, they said that the educational content was good and approved... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-28Bitstream added on 2014-06-13T21:01:46Z : No. of bitstreams: 1 nakamura_at_dr_rcla.pdf: 6553085 bytes, checksum: f435f359f0a4b6c70dc1300f43ee20ad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A embriologia e o desenvolvimento pós-seminal de Olyra humilis, Sucrea monophylla (Bambusoideae), Axonopus aureus, Paspalum polyphyllum (Panicoideae), Eragrostis solida e Chloris elata (Chloridoideae) foram estudadas visando à caracterização dessas subfamílias de Poaceae. As anteras são bitecas e tetrasporangiadas; apresentam tapete secretor; microsporogênese sucessiva; tétrades isobilaterais, grãos de pólen esféricos, tricelulares, monoporados, com anel e opérculo. Apresentam óvulo bitegumentado; saco embrionário tipo Polygonum; endosperma nuclear e embrião lateral. As espécies apresentam raiz embrionária de origem endógena (adventícia), cotilédone dividido em hiperfilo (escutelo), bainha reduzida e hipofilo (coleóptilo), coleorriza (raiz primária reduzida), mesocótilo (eixo entre escutelo e coleóptilo) e epiblasto (folha embrionária). O desenvolvimento pósseminal inicia-se com a emissão da coleorriza, seguida do coleóptilo e primeira folha desenvolvida semelhante ao metafilo, exceto em Bambusoideae, que é modificada em catafilo. Essas características embriológicas e do desenvolvimento pós-seminal se assemelham com as demais espécies de Poaceae já estudadas. Algumas características são diagnósticas para as subfamílias como grãos de pólen com exina granulosa em Bambusoideae, insular com espínulos densamente agrupados em Panicoideae e com espínulos esparsamente agrupados em Chloridoideae; óvulo hemianátropo pseudocrassinucelado em Bambusoideae e Panicoideae e campilótropo tenuinucelado em Chloridoideae; tegumento externo restrito à base do óvulo em Bambusoideae, estendendo até um terço do nucelo em Panicoideae e alongado até a região próxima à micrópila em Chloridoideae. / The embryology and post-seminal development of Olyra humilis, Sucrea monophylla (Bambusoideae), Axonopus aureus, Paspalum polyphyllum (Panicoideae), Eragrostis solida and Chloris elata (Chloridoideae) were studied here in order to characterize the respective subfamilies within Poaceae. The bithecous and tetrasporangiate anthers present: secretory tapetum, successive microsporogenesis, isobilateral tetrads, and spherical pollen grains, which are tricellular and monoporate and have annulus and operculum. The ovule is bitegmic and the embryo sac is of the Polygonum type. The endosperm is nuclear and the embryo is lateral. The studied species have endogenous embryonic root (adventitious); cotyledon divided into hyperphyll (scutellum), reduced sheath and hypophyll (coleoptile); coleorhiza (reduced primary root); mesocotyl (axis between the scutellum and the coleptile); and epiblast (embryonic leaf). The post-seminal development starts with the emission of the coleorhiza, followed by the coleoptile and the first leaf, which is similar to the metaphyll except for Bambusoideae, in which it converts into a cataphyll. These embryological and post-seminal developmental features resemble the ones already known for species of Poaceae. Some features are diagnostic within the subfamilies: the exine of the pollen grain is granulose in Bambusoideae, insular with densely grouped spinules in Panicoideae, and insular with scarcely grouped spinules in Chloridoideae; the ovule is hemi-anatropous and pseudocrassinucelate in both Bambusoideae and Panicoideae, but it is campylotropous and tenuinucellate in Chloridoideae; the outer integument is restricted to the base of the ovule in Bambusoideae, whereas in Panicoideae it reaches up to one third of the nucellus, and in Chloridoideae it extendes until the micropyle.

Estudos realizados no gênero flex, família Aquifoliaceae, ordem Celastrales, mostram que embriões pertencentes a este gênero permanecem rudimentares, em estágio de coração, quando os frutos estão maduros, sendo que as sementes necessitam de um período de 6 a 8 meses para germinar, com uma taxa de germinação muito baixa. As características apresentadas fazem com que a produção de mudas de erva-mate seja lenta e a quantidade não suficiente para a demanda. A análise morfoanatômica do embrião e endosperma de flex paraguariensis, durante a embriogênese tardia, mostram a presença de suspensor, mesmo em fases mais avançadas. Apresenta também modificações nas reservas do endosperma nessas fases. Tendo por base essa análise, o presente trabalho objetiva apresentar um estudo criterioso do suspensor desta espécie, desde sua formação, até sua degradação durante a embriogênese final, bem como do embrião e endosperma, na embriogênese. As diferentes fases da embriogênese e endospermogênese foram analisadas e descritas utilizando métodos anatômicos tradicionais, para microscopia óptica, microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Acompanhando o desenvolvimento ontogenético desta espécie, o trabalho caracteriza o ciclo reprodutivo, as flores pistiladas, o processo de fecundação, os frutos, bem conío o embrião e o endosperma. O endosperma é classificado como celular, segundo o sistema EODP. O tipo de divisão celular, que ocorre na embriogênese inicial, permite classificar o desenvolvimento embrionário como pertencente ao tipo Cariofiláceo. Durante a embriogênese inicial, as fases analisadas vão desde a formação do zigoto, passando por proembrião bicelular até proembrião pós-octante. Durante a embriogênese final, as fases analisadas vão desde embrião piriforme até embrião em estágio de torpedo (maduro), quando ocorre a germinação. O aporte de nutrientes ao embrião esporofitico, nas fases iniciais de seu desenvolvimento, ocorre predominantemente via suspensor, pois o embrião xenofitico não está totalmente desenvolvido. Quando o embrião xenofitico apresenta as reservas estruturadas, a utilização destas é observada através das modificações de suas características morfológicas que obedecem a um gradiente, tanto no sentido micrópila-calaza como no sentido tegumento-embrião. Suas variações de síntese, absorção e translocação morfologicamente são: (1) formação de vesículas de membrana simples que se fundem formando vacúolos; (2) deposição de proteína amorfa no seu interior; (3) surgimento de adensamentos protéicos (globóides ou pró-globóides) na massa fundamental; (4) formação de lipídios ao longo de toda a margem do vacúolo protéico; (5) início da cavitação intema do vacúolo, evidenciando sinais de reutilização das reservas; (6) fragmentação do conteúdo protéico; (7) adensamento do material fragmentado com visualização óptica ou eletro-transparente do vacúolo, com início da degradação dos lipídios; (8) vacúolo com pouco material adensado no seu interior e proteína identificada no citoplasma como fragmentos ou adensamentos, sem qualquer sinal de lipídios contornando a estrutura; (9) vacúolo sem qualquer material protéico individualizado no seu interior, sendo constituído apenas por uma matriz solúvel. Em particular, o suspensor assume três distintos padrões de comportamento: (1) a lise através de Morte Celular Programada da célula basal e das células contíguas a esta, durante a embriogênese inicial, (2) alise caracterizada por rompimento das paredes das células de comunicação entre a hipófise e embrião, na embriogênese final, e (3) a permanência do suspensor íntegro, em embriões em estágio de torpedo. A manutenção do suspensor para a continuidade do desenvolvimento embrionário, tanto quanto a dinâmica das reservas lipoprotéicas e seu processo de translocação, são de fundamental importãncia para a conclusão do desenvolvimento embrionário. / Previous papers on the flex genus, Aquifoliaceae family, Celastrales arder have shown that the embryos stay rudimentary, in the heart shaped stage, even when the fruits are ripe. The seeds need a period of 6 to 8 months to germinate, with a very low germination rate. Due to these facts, the production of seeds of maté (flex paraguariensis St. Hil.) is slow and scarce. The morphoanatomical analysis of the embryo and endosperm, during late embryogeny, has shown the presence of the suspensor even in advanced stages. This analysis has also shown changes in the storage and translocation of the endosperm reserves. Based on these results, the present work aims to detail the embryo and endosperm ontogeny, and the entire suspensor development, from its origin to degradation. The different stages of embryo and endosperm development were analyzed and described using the traditional anatomical methods for optical, as well as scanning and transmission electron microscopy. Along the ontogenetic development, the work describes the reproduction cycle of this species, its pistilate flowers, fruits, fertilization process, and embryo and endosperm ontogeny. The endosperm was classified as cellular, according to the EODP system. The type of cellular division during early embryogeny leads to the classification of the embryo development as being of Caryophyllad type. During early embryogeny, differerít stages were analyzed, beginning willi zygote formation, then bicellular stage all the way to the post-octant proembryos. During late embryogeny, the analysis was performed of stages ranging from the pyriform to the ripe torpedo embryos, when germination occurs. The increase of nutrients to the sporophytic embryo during early stages of development occurs mainly through the suspensor. This is because the xenophytic embryo is not completely developed. When the xenophytic embryo contains structured reserves, their mobilization is observed through the characteristic morphological changes. These changes follow a gradient in the micropyle-chalaza direction, as well as in the integument-embryo direction. Different steps of syntheses or translocation of reserves can be classified as: (1) formation of single membrane vesicles binding into vacuoles, (2) deposition of amorphous protein into them, (3) appearance of proteinous spots (globoids or progloboids) in the ground mass, (4) formation of lipids around the proteinous vacuole, (5) beginning of the intemal cavitation of the vacuole, showing signs of reserve degradation and translocation, (6) fragmentation of the proteinous bodies, (7) adhesion of fragmented material with optically or electrotransparent visualization of the vacuole, and the beginning of lipid degradation, (8) vacuoles with little dense material and protein identified in the cytoplasm as fragmentary or adhesion masses, without any sign of lipids around them, (9) vacuoles without any sign of proteinous material, being solely constituted by a soluble matrix. The suspensor showed three distinct developmental behavior pattems: (1) the lysis by programmed cell death of the basal cell and its contiguous cells during early embryogeny, (2) the lysis by the breaking of the cell wall between hypophysis and embryo during late embryogeny, and (3) the maintenance of the intact suspensor in embryos until the torpedo stage. The suspensor is not only a characteristic structure during early embryogeny stages, but its mainten ance as well as the dynamics of lipid and protein storage, and the translocation process are essential for the conclusion of embryo development.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Carlos Antônio de Carvalho Fernandes / Banca: Eunice Oba / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: Neste estudo vitrificou-se em OPS ovócitos (Experimentos 1, 2 e 3) e embriões bovinos (Experimentos 4, 5 e 6) em três soluções de vitrificação distintas: Experimentos 1 e 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sacarose; Experimentos 2 e 5) 20%DF + 20%EG + 0,5M sacarose; Experimentos 3 e 6) 20%DF + 20%DMSO + 0,5M sacarose. Os embriões foram vitrificados na presença ou não de citocalasina B. Os ovócitos foram vitrificados ou somente expostos aos crioprotetores imaturos (G0h e G0hexp), ou após 6 horas (G6h e G6hexp), 12 horas (G12h e G12hexp) ou 22 horas de MIV (G22h e G22hexp). Após a exposição ou aquecimento, parte dos ovócitos completou as 22 horas de MIV e foi destinada à PIV, para avaliação da capacidade de se desenvolverem até blastocisto. No restante avaliou-se o estágio de maturação nuclear e a distribuição dos grânulos corticais e das mitocôndrias. Observou-se que a exposição dos ovócitos imaturos (0 ou 6 horas de MIV) aos crioprotetores nos experimentos 1, 2 e 3 resultou em perda substancial de viabilidade, avaliada pelas taxas de clivagem (GC=79,4%; 1G0hexp=37,1%; 1G6hexp=51,1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52,5%; 3G0hexp=36,2%; 3G6hexp=49,8%), o que foi menos notável nos ovócitos expostos após 12 ou 22 horas de MIV (1G12hexp=59,1%; 1G22hexp=71,1%; 2G12hexp=61,5%; 2G22hexp=62,5%; 3G12hexp=58,8%; 3G22hexp=68,6%). A realização da MIV antes da vitrificação foi benéfica. Apesar de nenhuma das soluções de crioprotetores ter sido capaz de promover proteção adequada aos ovócitos submetidos à vitrificação em qualquer momento da MIV, no Experimento 1 foi observada clivagem (1G12h=7,3%; 1G22h=4,2%) indicando que a mistura de crioprotetores EG+DMSO foi a mais eficiente nas condições utilizadas. Entretanto, não houve produção de blastocistos em nenhum experimento. Nos Experimentos 4, 5 e 6 notou-se que em todos os grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study bovine oocytes (Experiments 1, 2 and 3) and embryos (Experiments 4, 5 and 6) were vitrified in OPS using 3 different cryoprotectant solutions: Experiments 1 and 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sucrose; Experiments 2 and 5) 20%DF + 20%EG + 0.5M sucrose; Experiments 3 and 6) 20%DF + 20%DMSO + 0.5M sucrose. Embryos were vitrified in the presence or not of cytocalasin B. Oocytes were vitrified or just exposed to the cryoprotectant solutions after 0h (G0h and G0hexp), 6h of IVM (G6h and G6hexp), 12h of IVM (G12h and G12hexp) and 22h of of in vitro maturation (IVM) (G22h and G22hexp). Oocytes from groups 0 and 6h were considered immature and from 12 and 22h groups were considered mature. After exposure to cryoprotectants or warming, part of the oocytes that completed 22h of IVM were submitted to IVF to evaluate their developmental ability. Another part of the oocytes were used to evaluate nuclear maturation in the distribution of mitochondria and cortical granules. The results showed that the exposure of immature oocytes (0 and 6 hours of MIV) to cryoprotectants reduce their viability, since cleavage rates of all groups were significantly lower compared to control group (GC=79.4%; 1G0hexp=37.1%; 1G6hexp51.1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52.5%; 3G0hexp=36.2%; 3G6hexp=49.8%). This effect was less evident in the groups of mature oocytes submitted to IVM for 12 or 22 hours (1G12hexp=59.1%; 1G22hexp=71.1%; 2G12hexp=61.5%; 2G22hexp=62.5%; 3G12hexp=58.8%; 3G22hexp=68.6%). The previous IVM is beneficial to vitrification. Although none of the cryoprotectant solutions utilized were totally efficient in protecting the oocytes form cryodamage, in Experiment 1 cleavage was observed (1G12h=7.3%; 1G22h=4.2%) indicating that the combination of EG+DMSO was more effective than the other two. However in none of the groups blastocyst was formed. When embryos... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

La importància de les anomalies cromosòmiques en els problemes d'infertilitat ha estat àmpliament confirmada per diversos autors. S'ha estimat que la freqüència d'aberracions cromosòmiques dels zigots humans pot anar des d'un 8-10% (Kajii i Mikamo, 1978) fins a un 50% (Boué i col., 1975) al moment de la concepció. Una estimació directa de la incidència primària d'aparició de les anomalies cromosòmiques després de la fecundació en humans és molt difícil d'obtenir pels problemes de tipus tècnic i ètic que comporta. De la mateixa manera és difícil de realitzar una anàlisi directa de les característiques cromosòmiques dels gametes, fonamentalment els femenins, a causa de la seva inaccessibilitat inherent. De tota manera s'ha suggerit (Bond i Chandley, 1983) que l'espècie humana presenta un major nombre d'anomalies cromosòmiques al moment de la fecundació que no pas altres espècies de mamífers. Aquest fet ha passat malgrat que les noves tècniques de fertilització in vitro (FIV), cada cop més exteses en el tractament de determinats tipus d'infertilitat, podrien carregar l'espècie humana amb una font extra d'aberracions cromosòmiques derivades dels processos de fecundació fora del tracte genital femení. L'estudi de la freqüència primària d'aparició d'anomalies cromosòmiques en una població de mamífers (els ratolins), mitjançant l'anàlisi de la primera divisió embrionària, ha permès abordar aquest problema a través d'un enfocament experimental lliure de les limitacions ètiques i tècniques a les que ja hem fet esment. Per aquesta raó s'ha desenvolupat un mètode (Fraser i Maudlin, 1979) consistent en el cultiu dels zigots de ratolí recent fecundats en un medi amb antimitòtic que impedeix la singàmia, de manera que els complements d'origen matern i patern romanen separats i fàcilment distingibles l'un de 1'altre. Mercès a aquest sistema es pot atribuir l'origen, masculí i femení, de cada anomalia cromosòmica observada alhora que s'obté la incidència d'aberracions cromosòmiques en el moment de la concepció. Mitjançant la comparació de les característiques cromosòmiques de la primera divisió zigòtica d'una població d'embrions de ratolí fecundats in vivo amb una de fecundats in vitro, s'ha pogut esbrinar quin és l'efecte de la tècnica de FIV sobre la dotació cromosòmica dels embrions que se'n deriven. D'altra banda la possibilitat de manipular els donants dels gametes amb substàncies de suposat efecte genotòxic ofereix l'oportunitat d'utilitzar aquests estudis com a test de mutagenicitat per a certs tipus de compostos amb unes característiques concretes. Seguint aquest disseny experimental s'han detectat un total d'anomalies cromosòmiques al moment de la concepció que representen un 20.74% dels zigots fecundats in vivo, dels quals un 8.41% són aneuploides, un 10.37% poliploides i un 1.76% presenten anomalies estructurals.Pel que fa a l'aportació dels gamètes, la incidència d'aneuploïdies (un 4%) i d'anomalies estructurals (al voltant del 0.7%) s'ha observat que és igual en ambdós sexes.D'altra banda l'anàlisi dels embrions fecundats in vitro mostra que un 21.39% presenten anomalies cromosòmiques, dels quals el 5.42% són aneuploïdies, el 14"23% són poliploïdies i el 1.74% tenen anomalies estructurals. Aquest resultats indiquen que, en general, les tècniques de FIV no augmenten el nombre d'anomalies detectades en la primera divisió, tret d'un increment significatiu del nombre de dispèrmies i del nombre d'espermato zoides diploides que intervenen en la fecundació. Aquesta darrera observació confirma l'existència d'una selecció pre-zigòtica exercida pel tracte genital femení en contra dels espermatozoides morfològicament anòmals. Pel que fa a la utilització de la primera divisió embrionària com a test de mutagenicitat es confirma llur interès, en detectar-se un tipus d'acció de la substància emprada (la I3PL) difícilment observable a través d'altres proves clàssiques de detecció del caràcter genotòxic d'un compost, com és la formació d'oòcits diploides a causa.de la no-extrusió del segon corpuscle polar. / The importance of chromosomal abnormalities in reproductive failures has been confirmed by several authors. It is estimated that the frequen cy of chromosomally abnormal human zygotes at the time of conception may range from 8-10% (Kajii and Mikamo, 1978) to 50% (Boue et al.,1975). A direct estimate of the number of chromosomally abnormal human conceptus is difficult to obtain because of ethical and technical difficulties. Likewise, a direct study of human gametes has been limited, mainly for human oocytes, because of the problems involved in their obtention. It has been suggested that more conceptions are lost through chromosome imbalance in man than in other mammalian species (Bond and Chandley, 1983). This has led to the concern that in vitro fertilization (IVF) procedures, which have become a common technique for some infertility problems, would load the human species with an extra source of chromosome abnormalities. Fraser & Maudlin (1979) developed a mouse experimental system, of first embryonic cleavage chromosome analysis which can be used as a model for man. It involves the culture of mouse embryos in a medium containing antimitotic to arrest the cleaving process before singamy is reached.Thus the male and female chromosome sets do not mingle, but remain in separate clusters, which permits to assess the parental origin and incidence of chromosomal abnormalities at conception. Comparing the characteristics of first cleavage in vivo and in vitro fertilized embryos, it is possible to evaluate whether IVF techniques enhance the proportion of chromosomally abnormal embryos.On the other hand, the possibility of injecting genotoxic compounds to gametic donors, permit the use of the first cleavage system as a mutagenic test for specific substances. After the analysis of 1022 in vivo fertilized embryos we have seen that, in the mouse, 20.74% are chromosomally abnormal, among them, 8 show aneuploidy, 10.37% polyploidy and 1.76% structural rearrangments. Comparing the origin of the abnormalities, the incidence of aneuplody (4%) and structural rearrangments (0.7%) is the same for both sexes. After the analysis of 1033 in vitro fertilized embryos, we have seen that 21.39% have a chromosome abnormality, among them 5.42% are aneuploid 14.23% are polyploid and 1.74% have structural rearrangments. These results indicate that, in mice, the exposure of the fertilizing gametes to an in vitro environment is not a source of extra chromosomal abnormalities, except for an increase in the level of polispermy and of diploi spermatozoa that fertilize in vitro. The later confirms the existence of a form of prezygotic selection exerted by the genital female tract against the morphologically abnormal spermatozoa. Upon the use of first cleavage analysis as a mutagenic test, our data stress its importance. We have detected a type of action that would be hard to assess through a classic mutagenic test: the production of diploid oocytes due to the non extrusion of second polar body.

El desarrollo embrionario del núcleo estriado está controlado por gran cantidad de factores de transcripción. En esta tesis, nos centramos en el estudio de los miembros de la familia de factores de transcripción Ikaros. Los miembros de esta familia que se expresan en el primordio embrionario del núcleo estriado, eminencia ganglionar lateral (EGL) son Helios e Ikaros. Helios se expresa en la EGL durante la etapa embrionaria y es completamente ausente en el estriado de animales adultos. Esta proteína se expresa tanto en las zonas donde habitan los precursores neurales como en las zonas de precursores más diferenciados. Presenta una elevada relación con marcadores de precursores neuronales inmaduros como la nestina siendo su expresión completamente ausente en los precursores neurales que se diferenciarán hacia astrocitos. Los estudios realizados in vitro, mediante el uso del ensayo de neurosferas y de cultivos primarios, demuestran que la sobreexpresión de Helios induce un aumento en la neurogénesis y una reducción en la astrogénesis. Al estudiar el otro factor de la familia, Ikaros, observamos que esta proteína se expresa exclusivamente durante las edades embrionarias del desarrollo de la EGL. Está localizada exclusivamente en la zona del manto donde residen los precursores neuronales postmitóticos. La sobreexpresión de Ikaros en el ensayo de neurosferas induce una reducción del número de células proliferantes. En cambio, los precursores derivados de animales deficientes de Ikaros presentan una tasa de proliferación más elevada. Estos resultados nos indican que Ikaros induce la salida de ciclo de los precursores neurales regulando el ciclo celular. El mecanismo de acción por el cual Ikaros induce la salida de ciclo celular es regulando los niveles de la proteína inhibidora de ciclina p21 y favoreciendo así la diferenciación hacia fenotipos neuronales, específicamente neuronas encefalinérgicasl. Además de demostrar la funcionalidad de estas proteínas, nuestros resultados demuestran que existe una relación en el mecanismo de acción de Helios e Ikaros y que ambas proteínas están situadas en la misma vía de diferenciación estriatal de la familia Dlx. Así pues, la presente tesis describe la función de dos factores de transcripción, Helios e Ikaros, que ambos están implicados en el desarrollo embrionario del núcleo estriado. / “Study the role of the family of Ikaros transcription factor during striatum development” TEXT: The embryionic development of striatum is controlled by many transcription factors. In this thesis, we focus on the study of family members of Ikaros transcription factor. The members of this family that are expressed in the striatum embryonic primordium, lateral ganglionic eminence (LGE), are Helios and Ikaros. Helios is expressed during embryonic ages specifically in LGE. During development, Helios is expressed in areas where precursors are inhabited (subventricular zone), as well as in areas where more mature cells are located (mantle zone). This protein has a high relationship with markers of immature neural precursors as nestin. Neurospheres assay that Helios overexpression induces a reduction of proliferative tax in the precursors. Moreover, Helios induces an increase in neurogenesis process and a reduction in astrogenesis differentiation as we can observe studying the overexpression of Helios in primary cultures. The other member of the family expressed in LGE, Ikaros, is expressed only in embryonic ages exclusively in the mantle zone. In vitro studies show that Ikaros overexpression in precursors cultures induce a reduction in proliferative tax. However, precursors from Ikaros knockout mice proliferate more than precursors from wilt type. The reduction of proliferative tax is regulated by cyclin inhibitor protein p21. Cell cycle exit promote enkephalinergic neuronal differentiation as well as astrogenic inhibition as we can observe in neurosphere assay and primary cultures. In order to study Ikaros and Helios function in striatum development, we observe Helios and Ikaros act in the same differentiation involved in striatum development, de Dlx pathways. Both proteins are expressed downstream of Dlx1/2 however the relationship with the other transcription factor Dlx5/6 is different. While Helios is expressed upstream of Dlx5/6, Ikaros is expressed downstream of these transcription factors. In summary, we describe the role of two new proteins involved in striatum development: Helios and Ikaros.

El trabajo se centra fundamentalmente en lo concerniente a la participación de la cresta ectodérmica apical del esbozo de los miembros en el crecimiento y diferenciación de las extremidades. Se estudia también el papel del mesodormo de la raíz del esbozo en el crecimiento y diferenciación de los segmentos del futuro miembro. Se ha utilizado al embrión de pollo como animal de experimentación tetrápodo y la electrocoaglación como agente teratógeno. Las pruebas se realizaron sobre 800 embriones de pollo: a 550 se les practicó la electrocoagulación y a los 250 restantes el mesodermo postaxial. Las intervenciones se realizaron durante los estadios 17 a 23 de Hamburger y Hamilton; la mortalidad postoperatoria fue de 89’2%. Los embriones que sobrevieron al 3er día fueron sacrificados y fisados durante los estadios 28 a 36 de HyH.

Resumo: Este projeto de pesquisa teve como objetivo analisar o desenvolvimento de embriões provenientes dos cruzamentos interespecíficos entre as espécies de teleósteos neotropicais, pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e jandiá (Leiarius marmoratus). As coletas foram realizadas no Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Peixes Continentais - CEPTA/ICMBIO, Pirassununga - SP e na Piscicultura Muriti, Nova Mutum - MT. A reprodução foi feita através de indução hormonal, utilizando extrato bruto de hipófises de carpa. Os ovos foram incubados em incubadoras verticais e coletados desde o momento da fertilização até a eclosão das larvas. Os ovos dos parentais P. corruscans e L marmoratus e seus híbridos, são esféricos, demersais, córion nítido e espaço perivitelínico pequeno após a hidratação, não sendo observada a presença de gota de óleo na vesícula vitelínica durante todo o desenvolvimento embrionário. A média do espaço perivitelínico do L. marmoratus foi de 215,9μm, do P. corruscans foi de 352,5μm, do híbrido I foi de 561μm e do híbrido II foi de 247,2μm. O diâmetro médio do ovo do L. marmoratus foi de 589,6μm, do P. corruscans foi de 867,3μm, do híbrido I foi de 765,3μm e do híbrido II foi de 581μm. O período de incubação do P. corruscans e do híbrido I foi de 13 horas, à temperatura média de 28,7°C respectivamente. Já para o L. marmoratus e do híbrido II foi de 14 horas para o parental e 12 horas para o híbrido, a uma temperatura média de 28,3°C. Sendo estabelecidos os seguintes estágios embrionários: zigoto, clivagem, gástrula, organogênese e eclosão e estes divididos em fases. O estágio de clivagem foi dividido nas fases de 2, 4, 8, 16, 32, 64 células e na fase de mórula. O estágio de gástrula apresentou as fases de 25%, 50%, 75%, 90% e 100% do movimento morfogenético de epibolia e o estágio de organogênese... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main of this research project was analyze the embryos development from the inter-specific crossing between the neotropical teleostei species, pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e jandiá (Leiarius marmoratus). The samples were realized in the National Research and Conservation Nucleus of Continental Fishes - CEPTA/ICMBIO, Pirassununga - SP in the Buriti Fish Farming, Nova Mutum - MT. The reproduction was made through the hormonal induction, using gross extract of pituitary from carpa. The eggs were incubated in vertical incubators and collected since the fertilization time until the larval hatching. The eggs of the parents P. corruscans e L. marmoratus and their hybrids, are spherical, demersal, distinct chorion and small perivitelline space after the hydration without observation of the presence of drop oil in the vitelline vesicle during all embryonic development. The mean of the perivitelline space of the L. marmoratus was 215,9μm, in the P. corruscans was 352,5μm, in the hybrid I was 589,6μm and 247,2μm in the hybrid II. The mean diameter of the egg in L. marmoratus was 589,6μm, in P. corruscans was 867,3μm, in the híbrido I was 765,3μm and 581μm in the hybrid II. The incubation period of P. corruscans and the híbrido I was 13 hours , in the mean temperature of 28,7°C. However in L. marmoratus and Hybrid II was 14 hours for the parental and 12 hours for the hybrid in the mean temperature of 28,3°C. It was established the following embryonic stages: zygote, cleavage, gastrula, organogenesis and hatching and this divided in phases. The cleavage stage was divided in the phases 2, 4, 8, 16, 32, 64 cells and in the morula phase. The gastrula stage showed the phases 25%, 50%, 75%, 90% and 100% of morphogenetic movements of epiboly and the organogenesis stage was divided in the neurula, segmentation and larval phases... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Fábio Porto Foresti / Coorientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: José Augusto Senhorini / Banca: Rosicleire Verissimo Silveira / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-22T20:53:14Z No. of bitstreams: 1 2008_TatianeCarmoDuarteMundim.pdf: 429588 bytes, checksum: a569d620900910d9afcf1c181c02b277 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-23T22:54:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_TatianeCarmoDuarteMundim.pdf: 429588 bytes, checksum: a569d620900910d9afcf1c181c02b277 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T22:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_TatianeCarmoDuarteMundim.pdf: 429588 bytes, checksum: a569d620900910d9afcf1c181c02b277 (MD5) Previous issue date: 2008-11 / Embriões produzidos por hiperestimulação hormonal são usados como controle in vivo na maioria das publicações relacionadas à expressão gênica. Entretanto, ainda não se sabe se esses embriões são os controles mais apropriados a serem utilizados em estudos de perfil da expressão gênica. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi comparar a expressão dos genes candidatos relacionados ao desenvolvimento embrionário bovino: GRB-10, IGF-II, IGF-IIR, MnSOD, GPX-4, CATALASE, BAX, e INTERFERON-τ, entre embriões produzidos in vivo através de superovulação (SOV), através de Produção in vitro (PIV) e in vivo produzidos por ovulação natural, sem nenhuma estimulação hormonal (OVN). A comparação foi realizada através da técnica de RT-PCR usando β-ACTIN e GAPDH como os controles constitutivos. Quando a expressão individual dos genes foi analisada, GRB-10 foi menos expresso em embriões OVN do que em SOV (P = 0,04) e PIV (P = 0,01), no entanto, nenhuma diferença foi encontrada entre os outros genes. Genes relacionados à resposta ao estresse foram agrupados e comparados entre os diferentes tipos de embriões. A soma da expressão dos genes MnSOD, GPX-4, CATALASE tende (P = 0,10) a ser maior em embriões PIV do que em OVN. A expressão de todos os genes estudados foi também somadas para cada tratamento, e a expressão gênica geral foi menor em embriões OVN quando comparados com embriões de SOV(P = 0,06) ou de PIV(P = 0,04). Nenhuma diferença foi observada entre os embriões SOV e PIV(P = 0,70). Finalmente, os genes foram agrupados de acordo com suas funções, relacionadas ao desenvolvimento embrionário (GRB-10, IGF-II e IGF-IIR), a resposta ao estresse (MnSOD, xiv GPX-4 e CATALASE) e a qualidade embrionária (BAX, INTERFERON-τ). A análise de correlação foi realizada e mostrou um comportamento distinto nos embriões de OVN quando comparados com os de SOV (r = -0,9429) e com os de PIV (r = - 0,8833) para os genes GRB-10, IGF-II e IGF-IIR. No entanto, o comportamento desses genes foi similar para os embriões de SOV e de PIV (r = 0.9890). Concluímos que a estimulação hormonal ovariana afeta os embriões através da alteração de sua expressão gênica. Portanto, se os embriões de SOV tiverem que ser usados como contrôle em estudos de expressão gênica, os dados deverão ser analisados com cautela. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Embryos produced by hormonal hyperstimulation are used as “in vivo” control in the majority of publications related to gene expression. However, if those are the most appropriated control for gene expression profile studies it is not known. Thus, the objective of this study was to compare the expression of GRB-10, IGF-II, IGF-IIR, MnSOD, GPX-4, CATALASE, BAX, and Interferon-τ genes among embryos produced in vivo by hormonal hyperstimulation (SOV), by in vitro fertilization (IVF) or in vivo without any hormonal stimulus (NOV). Comparison was performed using a semi-quantitative RT-PCR using β-Actin and GAPDH as constitutive controls. When the individual gene expression was analyzed, GRB-10 was less expressed in NOV than SOV (P = 0.04) and IVF (P = 0.01) embryos, whereas no differences were found for the other genes. Then, genes related to stress response were grouped and compared among the types of embryos. The sum of expression of MnSOD, GPX-4, CATALASE genes tended (P = 0.10) to be greater in IVF than NOV embryos. The expression of all studied genes were also added together for each treatment, the “overall” gene expression was lower in the NOV embryos when compared with SOV (P = 0.06) or IVF (P = 0.04). No difference was observed between the SOV and IVF embryos (P = 0.70). Finally, genes were grouped according to their function as being related to embryo development (GRB-10, IGF-II, IGF-IIR), stress response (MnSOD, GPX4, CATALASE) and embryo quality (BAX, INTERFERONτ). A correlation analysis was performed and showed a distinct behavior for NOV embryos when compared with SOV (r = -0.9429) or IVF (r = -0.8833) for GRB-10, IGF-II and IGF-IIR genes. However, the behavior of xvi xvii those genes was similar for SOV and IVF embryos (r = 0.9890). We conclude that ovarian hormonal stimulation affects embryos by altering their gene expression. Therefore, if SOV embryos have to be used as experimental control for gene expression studies, data should be analyzed with caution.