Estudos realizados no gênero flex, família Aquifoliaceae, ordem Celastrales, mostram que embriões pertencentes a este gênero permanecem rudimentares, em estágio de coração, quando os frutos estão maduros, sendo que as sementes necessitam de um período de 6 a 8 meses para germinar, com uma taxa de germinação muito baixa. As características apresentadas fazem com que a produção de mudas de erva-mate seja lenta e a quantidade não suficiente para a demanda. A análise morfoanatômica do embrião e endosperma de flex paraguariensis, durante a embriogênese tardia, mostram a presença de suspensor, mesmo em fases mais avançadas. Apresenta também modificações nas reservas do endosperma nessas fases. Tendo por base essa análise, o presente trabalho objetiva apresentar um estudo criterioso do suspensor desta espécie, desde sua formação, até sua degradação durante a embriogênese final, bem como do embrião e endosperma, na embriogênese. As diferentes fases da embriogênese e endospermogênese foram analisadas e descritas utilizando métodos anatômicos tradicionais, para microscopia óptica, microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Acompanhando o desenvolvimento ontogenético desta espécie, o trabalho caracteriza o ciclo reprodutivo, as flores pistiladas, o processo de fecundação, os frutos, bem conío o embrião e o endosperma. O endosperma é classificado como celular, segundo o sistema EODP. O tipo de divisão celular, que ocorre na embriogênese inicial, permite classificar o desenvolvimento embrionário como pertencente ao tipo Cariofiláceo. Durante a embriogênese inicial, as fases analisadas vão desde a formação do zigoto, passando por proembrião bicelular até proembrião pós-octante. Durante a embriogênese final, as fases analisadas vão desde embrião piriforme até embrião em estágio de torpedo (maduro), quando ocorre a germinação. O aporte de nutrientes ao embrião esporofitico, nas fases iniciais de seu desenvolvimento, ocorre predominantemente via suspensor, pois o embrião xenofitico não está totalmente desenvolvido. Quando o embrião xenofitico apresenta as reservas estruturadas, a utilização destas é observada através das modificações de suas características morfológicas que obedecem a um gradiente, tanto no sentido micrópila-calaza como no sentido tegumento-embrião. Suas variações de síntese, absorção e translocação morfologicamente são: (1) formação de vesículas de membrana simples que se fundem formando vacúolos; (2) deposição de proteína amorfa no seu interior; (3) surgimento de adensamentos protéicos (globóides ou pró-globóides) na massa fundamental; (4) formação de lipídios ao longo de toda a margem do vacúolo protéico; (5) início da cavitação intema do vacúolo, evidenciando sinais de reutilização das reservas; (6) fragmentação do conteúdo protéico; (7) adensamento do material fragmentado com visualização óptica ou eletro-transparente do vacúolo, com início da degradação dos lipídios; (8) vacúolo com pouco material adensado no seu interior e proteína identificada no citoplasma como fragmentos ou adensamentos, sem qualquer sinal de lipídios contornando a estrutura; (9) vacúolo sem qualquer material protéico individualizado no seu interior, sendo constituído apenas por uma matriz solúvel. Em particular, o suspensor assume três distintos padrões de comportamento: (1) a lise através de Morte Celular Programada da célula basal e das células contíguas a esta, durante a embriogênese inicial, (2) alise caracterizada por rompimento das paredes das células de comunicação entre a hipófise e embrião, na embriogênese final, e (3) a permanência do suspensor íntegro, em embriões em estágio de torpedo. A manutenção do suspensor para a continuidade do desenvolvimento embrionário, tanto quanto a dinâmica das reservas lipoprotéicas e seu processo de translocação, são de fundamental importãncia para a conclusão do desenvolvimento embrionário. / Previous papers on the flex genus, Aquifoliaceae family, Celastrales arder have shown that the embryos stay rudimentary, in the heart shaped stage, even when the fruits are ripe. The seeds need a period of 6 to 8 months to germinate, with a very low germination rate. Due to these facts, the production of seeds of maté (flex paraguariensis St. Hil.) is slow and scarce. The morphoanatomical analysis of the embryo and endosperm, during late embryogeny, has shown the presence of the suspensor even in advanced stages. This analysis has also shown changes in the storage and translocation of the endosperm reserves. Based on these results, the present work aims to detail the embryo and endosperm ontogeny, and the entire suspensor development, from its origin to degradation. The different stages of embryo and endosperm development were analyzed and described using the traditional anatomical methods for optical, as well as scanning and transmission electron microscopy. Along the ontogenetic development, the work describes the reproduction cycle of this species, its pistilate flowers, fruits, fertilization process, and embryo and endosperm ontogeny. The endosperm was classified as cellular, according to the EODP system. The type of cellular division during early embryogeny leads to the classification of the embryo development as being of Caryophyllad type. During early embryogeny, differerít stages were analyzed, beginning willi zygote formation, then bicellular stage all the way to the post-octant proembryos. During late embryogeny, the analysis was performed of stages ranging from the pyriform to the ripe torpedo embryos, when germination occurs. The increase of nutrients to the sporophytic embryo during early stages of development occurs mainly through the suspensor. This is because the xenophytic embryo is not completely developed. When the xenophytic embryo contains structured reserves, their mobilization is observed through the characteristic morphological changes. These changes follow a gradient in the micropyle-chalaza direction, as well as in the integument-embryo direction. Different steps of syntheses or translocation of reserves can be classified as: (1) formation of single membrane vesicles binding into vacuoles, (2) deposition of amorphous protein into them, (3) appearance of proteinous spots (globoids or progloboids) in the ground mass, (4) formation of lipids around the proteinous vacuole, (5) beginning of the intemal cavitation of the vacuole, showing signs of reserve degradation and translocation, (6) fragmentation of the proteinous bodies, (7) adhesion of fragmented material with optically or electrotransparent visualization of the vacuole, and the beginning of lipid degradation, (8) vacuoles with little dense material and protein identified in the cytoplasm as fragmentary or adhesion masses, without any sign of lipids around them, (9) vacuoles without any sign of proteinous material, being solely constituted by a soluble matrix. The suspensor showed three distinct developmental behavior pattems: (1) the lysis by programmed cell death of the basal cell and its contiguous cells during early embryogeny, (2) the lysis by the breaking of the cell wall between hypophysis and embryo during late embryogeny, and (3) the maintenance of the intact suspensor in embryos until the torpedo stage. The suspensor is not only a characteristic structure during early embryogeny stages, but its mainten ance as well as the dynamics of lipid and protein storage, and the translocation process are essential for the conclusion of embryo development.

Tese (Doutorado)—Universidade Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-21T11:52:14Z No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-21T11:52:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T11:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 4964531 bytes, checksum: 9d463cc52f0602d4161f0a4808dbf390 (MD5) / A avaliação de embriões produzidos in vitro (PIV) no estágio pós-eclosão é uma importante ferramenta para verificar a qualidade de embriões PIV. É justamente nessa fase, em que ocorre a maior perda embrionária. Para avaliar os embriões nesse estágio, esse trabalho propõe a utilização do sistema de cultivo pós-eclosão (PHD). Esse sistema é um método alternativo que pode auxiliar na avaliação do potencial de desenvolvimento dos embriões sem a necessidade de transferi-los para receptoras. Mas, para utilizar esse sistema na rotina é necessário verificar sua eficiência. Portanto, esse trabalho teve por objetivo avaliar a viabilidade do sistema PHD através de avaliações morfológicas e moleculares de embriões produzidos nesse sistema. Esse trabalho foi composto de três estudos. O primeiro visou validar o sistema PHD no laboratório e verificar o melhor protocolo para realizar esse sistema. Para isso, túneis de agarose foram construídos com água Milli-Q ou com solução fosfato salina (PBS) foram utilizados para o desenvolvimento dos embriões PIV. O segundo trabalho, após a escolha do melhor protocolo, objetivou avaliar o comportamento de embriões produzidos in vivo e in vitro de D7 cultivados no sistema PHD até D14. E finalmente, o último trabalho, verificou a eficiência do sistema PHD para o cultivo de embriões PIV até D14 comparado à transferência múltipla para o útero de receptoras. Durante o período de cultivo, os embriões foram mensurados e avaliados quanto à qualidade morfológica do trofoblasto e botão embrionário. Além disso, o perfil molecular foi avaliado pela quantificação da expressão de genes relacionado com qualidade do embrião, SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD , HSP70, IFNT, nos embriões de D7 e D14. Quanto ao primeiro trabalho observou-se que o melhor protocolo para o sistema PHD foi quando se utilizou a água Milli-Q para a construção dos túneis, pois nesse os embriões tiveram um maior crescimento durante o cultivo. No segundo, trabalho verificouse que apesar da baixa taxa de crescimento os embriões in vivo tiveram desenvolvimento semelhante no sistema PHD do que os in vitro. E quando se comparou os embriões totalmente in vitro com os totalmente in vivo, verificou-se que os in vitro eram menores, mas a maioria da expressão dos genes foi semelhante entre os grupos (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSO , IFNT). E, no último trabalho, o principal resultado foi que os embriões in vitro cultivados até D14 no útero de receptoras foram semelhantes ao grupo controle (totalmente in vivo), mas esses dois tipos de embriões foram diferentes dos cultivados no sistema PHD, principalmente, em relação à porcentagem de embriões crescidos/recuperados, ao tamanho e a expressão gênica. Porém, verificou-se a possibilidade de embriões PIV se desenvolverem nos túneis de agarose. Concluiu-se que o sistema PHD ainda não está apto para se utilizado na rotina, principalmente, devido à baixa porcentagem de embriões que se desenvolvem. Portanto, investimentos em métodos para que ele se torne menos seletivo e dê condições para o desenvolvimento de embriões de boa qualidade que se desenvolveria normalmente em ambiente uterino seriam de grande valia. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The evaluation of in vitro-produced embryos (IVP) in the post hatching stage is an important tool to verify the quality of IVP embryos, as is in this phase that most embryonic loss occurs. In the order to evaluate the embryos at this developemental stage, the present study proposes the use of the post-hatching development (PHD) system. This system is an alternative method which may help to evaluate the developmental potential of embryos without transfering them to a recipient’s uterus. However, to use this system routinely in the laboratory, it is necessary to verify its efficiency. Therefore, this study aimed to evaluate the viability of the PHD system using morphological and molecular evaluations of embryos produced in this system. This study was conducted in three different studies. The first was designed to validate the PHD system in the laboratory and to determine the best testing protocol. Agarose tunnels were subsequently constructed either with Milli-Q water or with phosphate buffer saline (PBS) and IVP embryo development was evaluated. Sencondly, after selecting the best protocol, we aimed to evaluate the behavior of in vivo and in vitro embryos in the PHD system from Day (D)7 through D14. Finally, in the third study, we verified the efficiency of the PHD system and multiple transfer protocol for culture IVP embryos until D14. During the culture period, embryos were measured and evaluated for morphological quality of the embryonic trophoblast and embryonic disc. The molecular profile was determined by quantification of the expression of genes related to embryo quality, such as SLC2A1, SLC2A3, G6PD, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, HSP70, IFNT, in D7 and D14 embryos, using qPCR. In the first study, we concluded that the best protocol was when agarose tunnels were constructed with Milli-Q water, as embryos demonstrade a greater increase in size. In the second study, we found in vivo embryos presented a lower development rate in the PHD system, when compared morphologically to the in vitro embryos. On comparison of the completely in vitro embryos with completely in vivo embryos, it was found that in vitro embryos were smaller than the in vivo embryos, but most of the genes had similar expression between the groups (SLC2A3, PGK-1, KRT8, PLAC 8, CD9, HSF-1, MNSOD, IFNT). In the last study, we concluded that IVP embryos cultured until D14 in a recipients uterus were similar to control group (completely in vivo), and both were different from embryos cultured in the PHD system. Although the PHD system is inefficient we demonstrated that it can be used to develop IVP embryos. It was concluded that the PHD system is not yet able to be routinely used, especially due to the low percentage of embryos that develop in it. Therefore, an investment into this method, it can become less selective and provide conditions for the develop of good quality embryos that would normally development in uterine conditions, would be of great value.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-10-16T13:56:17Z No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-23T22:07:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T22:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_ReginaldoVieiradeSouxa.pdf: 671043 bytes, checksum: 847820a52781eb05975638a844332018 (MD5) Previous issue date: 2007-06 / Com o aprimoramento das técnicas de reprodução assistida, a produção de embriões in vivo (TE) e in vitro (PIV), tem crescido consideravelmente e por conseqüência, a demanda por metodologia eficaz de identificação do sexo desses embriões. Este trabalho teve por objetivo avaliar um sistema de identificação do sexo (Diagnóstico pré-implantacional do sexo) de embriões bovinos produzidos em programas comerciais de TE e PIV. Os embriões produzidos in vivo (n=609) foram coletados de animais das raças Holandesa e Jersey, sete dias (D7) após a Inseminação Artificial (IA) nos estágios de mórula compacta (Mc), blastocisto inicial (Bi), blastocisto (Bl) e blastocisto expandido (Bx). Os embriões foram divididos em dois grupos: Grupo TE-B, constituído por embriões biopsiados e Grupo TE-C, constituído por embriões intactos (controle). Para o experimento de produção in vitro, foram utilizados embriões de bovinos da raça Gir (n=318), nos estágios de blastocisto inicial Bi, Bl e Bx, em D-6,5. Os embriões foram divididos em dois grupos: Grupo PIV-B, constituído por embriões biopsiados e Grupo PIV-C, constituído por embriões intactos (controle). Os embriões dos Grupos TE-B (n=380) e PIV-B (n=91) foram submetidos à micromanipulação por microssecção para retirada da biopsia. Os embriões biopsiados foram cultivados até o final do processo de identificação do sexo e então transferidos para receptoras síncronas. Os embriões do Grupo TE-C (n=229) e PIV-C (n=227) foram transferidos íntegros para receptoras síncronas no mesmo momento dos biopsiados. As receptoras foram submetidas à ultra-sonografia aos 30 (TE) e 60 (TE e PIV) dias após as inovulações para diagnóstico de gestação e confirmação do sexo, respectivamente. Para a identificação do sexo dos embriões biopsiados, as respectivas biopsias foram submetidas às técnicas de PCR e eletroforese em gel de agarose. Na reação, foram utilizados 2 pares de oligonucleotídeos iniciadores (primers), sendo um específico para o cromossomo Y e o outro para um gene autossômico (controle da reação que amplifica uma seqüência de DNA específica em ambos os sexos). Para a comparação das taxas de gestação aos 60 dias, entre os grupos e respectivos controles, foi utilizado o teste do quiquadrado (χ2) e não houve diferenças entre os grupos, com TE-B =206/380 (54,21%), TE-C = 128/229 (55,89%); PIV-B =24/91 (26,37%) e PIV-C=45/227 (19,82%). Das gestações confirmadas que tiveram suas respectivas biopsias submetidas à sexagem, 133 do Grupo TE-B, e 20 do Grupo PIV-B, foram avaliadas por ultra-sonografia aos 60 dias após as inovulações sendo que 124 (93,23%) e 19 (95%), respectivamente, tiveram sexo coincidente com aquele atestado pela PCR. O resultado deste trabalho indicou que o procedimento de retirada de biopsia de embriões produzidos in vivo e in vitro não interfere na viabilidade dos mesmos, e que a metodologia utilizada é viável para identificação do sexo dos embriões em programas comerciais de transferência de embriões. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / With the advance of the assisted reproductive techniques, the use of in vivo (ET) and in vitro embryo production (IVP) has increased considerable, which has lead to a demand for an efficient method for embryo sexing. The present study aimed to evaluate the effect of the micromanipulation of ET and IVP embryos on their viability and to test, in field conditions, a methodology embryo sexing. In vivo produced embryos (n=609) were collected from Holstein and Jersey females. Embryo at compact morula (Mc), initial blastocyst (Bi), blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) stage on Day 7 post insemination (D-7) were allocated into two groups: Group ET-B, biopsied embryos and Group ET-C, intact embryos (control). For the in vitro production experiment embryos of Gir breed females were used (n=318) at the initial blastocyst (Bi), blastocyst (Bl) and expanded blastocyst (Bx) stage at Day 6,5 post insemination. Embryos were distributed into two groups: Group IVP-B, biopsied embryos and Group IVP-C, intact embryos (control). Embryos from both groups ET-B (n=380) and IVP-B (n=91) were submitted to micromanipulation by section, for biopsy removal. Biopsied embryos were cultured until the end of the process of sex identification and then were transferred for synchronized recipients. Embryos from the groups ET-C (n=229) and IVP-C (n=227) were transferred intact to the synchronized recipients. All the recipients were evaluated by ultrasonography 30 (ET) and 60 (ET, IVP) days after inovulation, for pregnancy and sex identification. For embryo sex identification the biopsies were submitted to PCR and agarose gel electrophoresis. In the PCR reaction 2 primers were used, one specific for Y chromosome and the other for a bovine autossomic gene. To compare pregnancy rates at 60 days between the groups and their respective controls a Chi-square(χ2) analysis was used. No differences were observed for pregnancy rates between groups, being ET-B = 206/380 (54.21%), ET-C = 128/229 (55.89%); IVP-B = 24/91 (26.37%) and IVP-C = 45/227 (19.82%). Of the confirmed pregnancies that had their biopsies (ET-B = 133 and IVP-B = 20) submitted to sex identification, 124 (93.23%) and 19 (95%) had the same sex in the PCR reaction and in the ultrasonography evaluation at 60 days. The results of the present study indicated that biopsy removal did not affect the viability of the in vivo and in vitro embryos. In addition, the methodology used for embryo sex identification is suitable to be used in embryo transfer commercial programs.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-25T16:38:05Z No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-12-07T19:44:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-07T19:44:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese TANIA MARIA DE ANDRADE RODRIGUES.pdf: 1596619 bytes, checksum: 19f1be4f615d67ff61d6579d7d4262ba (MD5) Previous issue date: 2006 / Doenças cardíacas tanto congênitas quanto adquiridas apresentam alta morbi-mortalidade, constituindo no Brasil a primeira causa de óbito (29,9%). O impacto sócio-econômico dessas patologias repercute no sistema de saúde e em uma realidade de escassez de recursos e necessidade de priorização em sua alocação, direcionando para a primacia de investimentos em ciências básicas. Este estudo de cardiogênese experimental é de extrema importância para a compreensão dos mecanismos envolvidos na formação do coração, e o modelo de camundongos geneticamente modificados constitui valiosa ferramenta investigativa. Camundongos com deleção do gene Ringer finger 4 (rnf4) foram gerados com o objetivo de avaliar a repercussão nos embriões recessivos negativos das alterações anátomo-patológicas, visando entender a função deste gene na formação do coração. RNF4 é um fator de transcrição que é expresso no coração durante a embriogênese. Foram utilizados camundongos das linhagens BALBc e C57Bl6. Foram dissecados 825 embriões, sendo 423 BALBc e 402 C57Bl6, distribuídos entre as seguintes faixas etárias: de 11 a 17 dias de desenvolvimento embrionário, animais com menos de um dia de vida e animais com 21 dias pós-natal. Os resultados demonstraram que 34.6% dos camundongos com deleção total do rnf4, a partir do décimo terceiro dia de desenvolvimento embrionário, apresentaram defeito do septo ventricular, paredes ventriculares finas e desorganização das camadas ventriculares, ocasionando repercussão hemodinâmica e clínica sugestiva de insuficiência cardíaca congestiva. Além disso, nenhum animal foi viável. Conclui-se que a deleção do gene rnf4 é letal para os embriões de camundongos por ser essencial na formação do coração. Esses resultados contribuem para entendermos os mecanismos moleculares envolvidos na embriogênese. Ademais, serão úteis no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para as doenças cardíacas. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cardiac diseases, whether congenital or acquired, show a high mortality rate worldwide and in Brazil, they represent the major cause in natural deaths with 29.9% of the cases. The social and economical impact of those pathologies on the Brazilian Public Health System is particularly worsened due to the lack of resources and the need to optimize the scarce resource allocation, leading to the prioritization of investments towards the basic sciences. For all the above reasons, research in experimental cardiogenesis is of vital importance to the understanding of the mechanisms involved in the heart formation, where models using genetically altered mice constitute an invaluable tool in the investigation for cures. Our study was conducted by deleting the Ring Finger 4 (Rnf4) mouse genes and observing the effects the absence of such gene has in the formation of their hearts. RNF4 is a transcription factor which is expressed in the heart during embryogenesis. In that sense, mice of lineage BALBc and C57B6 which presented the Rnf4 deletion were selected for our experiments. A total of 825 embryos were dissected, where 423 were of the BALBc lineage and 402 of the C57B16 lineage. In either case, the embryos were separated into age groups: 1) 11 to 17 days of embryonary development; 2) less than 1 day old; and 3) 21-day old specimens. The results show that 34.6% of the mice with deletion of the Rnf4 gene presented ventricular septal defect (VSD), thin ventricular walls, and disorder of the ventricular layers, leading to hemodynamic and clinical pathologies that suggest congestive heart failure (CHF). Moreover, animals which lack of functional Rnf4 gene die due to cardiac defect. We concluded that deletion of the rnf4 gene is lethal for mice embryos, since such gene is apparently essential in the heart formation. These results will contribuite to understand the molecular mecanisms involved in the heart embryogenesis. In addition, it will be helpful to development new therapeutical strategies to heart diseases.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2009-11-30T23:47:25Z No. of bitstreams: 1 dissertacao Flávia Melissa de Souza Moraes.pdf: 3544803 bytes, checksum: 711ca4494d2c03b3a5d69511c5faab6b (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-12T23:46:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao Flávia Melissa de Souza Moraes.pdf: 3544803 bytes, checksum: 711ca4494d2c03b3a5d69511c5faab6b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-12T23:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao Flávia Melissa de Souza Moraes.pdf: 3544803 bytes, checksum: 711ca4494d2c03b3a5d69511c5faab6b (MD5) Previous issue date: 2006-08-29 / Ocotea catharinensis é uma espécie lenhosa florestal nativa da Mata Atlântica que possui grande importância econômica devida à sua madeira e à produção de óleos essenciais. Por causa de sua intensa exploração comercial e da baixa reprodução e viabilidade de suas sementes, O. catharinensis tornou-se ameaçada de extinção. O objetivo deste trabalho foi estudar a embriogênese somática de O. catharinensis por meio da análise proteômica comparativa dos diferentes estágios embriogênicos e também de agregados celulares cultivados em diferentes meios de cultura que produzem células com distintas competências embriogênicas. Para isso, os extratos de proteínas dos agregados celulares cultivados em diferentes meios (WPM, MS, MS+2,4 D) e dos embriões somáticos nos estágios globular (E1), cotiledonar inicial (E2), cotiledonar intermediário (E3) e embrião maduro (E4) foram submetidos à eletroforese bidimensional (2-DE). As amostras foram maceradas em N2 líquido e pó de vidro e precipitadas com solução de TCA/acetona seguida pela extração e solubilização em tampão 2-DE. A concentração de proteína foi determinada utilizando-se Plus One 2D QuantKit (GE Healthcare). As amostras foram submetidas à focalização isoelétrica utilizando-se géis de gradiente imobilizados de pH (IPG) na faixa de 4-7. Também foram realizados géis bidimensionais "dois-em-um" dos agregados celulares, nos quais os géis IPG com a mesma faixa de pH para duas diferentes amostras foram colocados lado-a-lado no topo de um gel para SDS PAGE vertical para a separação na segunda dimensão (Wang et al., 2003). Após a coloração com nitrato de prata, as imagens dos géis foram digitalizadas e submetidas à análises computacionais para se determinar o número e a intensidade dos spots, levando à informação da expressão diferencial de proteínas. Poucos spots mostraram mudanças de intensidade durante o desenvolvimento e nos meios de cultura testados. Estes spots foram analisados por espectrometria de massa utilizando-se espectrômetros de massa tipo MALDI TOF e nano-LC MS/MS (LTQ Orbitrap). Somente um spot foi identificado por MALDI-TOF e oito por LTQ Orbitrap. Entre os diferentes polipeptídeos identificados estão proteínas estruturais como a actina, proteínas antioxidantes como tiorredoxina, superóxido dismutase e outras como proteínas da família 14-3-3, germina e enzima biossintética de tiamina. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Ocotea catharinensis is a forest tree species from Mata Atlântica that has economic importance due to its wood and essential oils. O. catharinensis became an endangered species mostly because of its intense exploitation and its low seed production and viability. The objective of this work was to study O. catharinensis somatic embryogenesis through the comparative proteome analysis of different embryogenic stages as well as cell aggregates maintained in different culture media that produce distinct cell embryogenic competence. For that, the protein extracts of cell aggregates (calus) cultured in different medias (WPM, MS, MS+2,4-D) and of the somatic embryos in globular (E1), initial cotiledonary (E2), intermediary cotiledonary (E3) and mature embryo (E4) stages were subjected to two-dimensional gel electrophoresis (2-DE). The samples were ground in liquid N2 and glass powder, and the proteins precipitated with TCA/acetone solution followed by extraction and solubilization in 2-DE buffer. The protein concentration was determined using Plus One 2D QuantKit (GE Healthcare). The samples were submitted to isoelectric focusing using pH 4-7 immobilized pH gradient (IPG) strips. We also carried out “two-inone” gels (Wang et al., 2003) of cell aggregates, where IPG strips with the same pH range for two different samples were loaded side by side on top of a vertical SDS-PAGE gel for separation in the second dimension. After silver staining, the gel images were digitalized and subjected to computational analyses in order to determine the number and intensity of the spots, allowing the determination of protein differential expression. Few protein spots showed different intensities during the development and in the different culture media tested. These spots were analyzed by mass spectrometry using MALDI-TOF and nano-LC MS/MS (LTQ Orbitrap). Just one spot were identified by MALDITOF and eight by LTQ-Orbitrap. Among the identified polypeptides, there were structural proteins like actin, antioxidant proteins like tioredoxin, superoxide dismutase and others like the 14-3-3 family, germin and thiamine biosynthetic enzyme.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-05T17:48:19Z No. of bitstreams: 1 2009_AnaClaudiadeMeloValeriano.pdf: 348938 bytes, checksum: 1dacb40fa7251b2be3b866121a3a4eab (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-09T01:46:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_AnaClaudiadeMeloValeriano.pdf: 348938 bytes, checksum: 1dacb40fa7251b2be3b866121a3a4eab (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-09T01:46:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_AnaClaudiadeMeloValeriano.pdf: 348938 bytes, checksum: 1dacb40fa7251b2be3b866121a3a4eab (MD5) Previous issue date: 2009-05-25 / Estudos baseados em genes candidatos buscam identificar polimorfismos e a prospecção de genes candidatos que estão envolvidos no processo de ovulação são ferramentas de importantes quando se pretende incrementar a eficiência reprodutiva de rebanhos e melhorar as respostas das biotécnicas de multiplicação animal. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi sequenciar e detectar polimorfismos em parte do “exon” 10 do gene do receptor do hormônio folículo estimulante (FSHR); genotipar doadoras de embriões para um SNP nos genes receptor de estrógeno (ER) e FSHR; analisar se esses genes podem ser usados como marcadores moleculares para a resposta superovulatória em bovinos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Candidate gene based studies intend to identify polymorphisms and to prospect candidate genes evolved in ovulation process are important tools to increase the cattle reproduction efficiency and to improve animal biotechnology response. Thus, the aim of this study was to sequence and to detect polymorphisms present in exon 10 from follicle stimulation hormone receptor (FSHR) gene; to genotype estrogen receptor gene (ER1) and FSHR SNPs in embryo donors; and to verify the possibility to use these genes as molecular markers to assess the bovine ovullatory response.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-30T14:20:06Z No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-18T04:34:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-18T04:34:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_GrazieliMarinheiroMachado.pdf: 533514 bytes, checksum: 9cda08d9e438cdb3a1719ae60d8ca5bb (MD5) Previous issue date: 2009 / Técnicas de preparação de sêmen são usualmente utilizadas na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos visando melhorar a qualidade espermática após o descongelamento. Dentre estas técnicas, a centrifugação em gradiente de Percoll tem sido a mais utilizada. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll nas características espermáticas, na produção e sexo de embriões bovinos. Foram descongeladas amostras de sêmen de quatro touros, que foram submetidas a três diferentes procedimentos no gradiente de Percoll : T1 – 4 mL (volume final) de Percoll 45%:90%, centrifugados por 20 minutos a 700 g; T2 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por 20 minutos a 700 g e T3 – 800 μL (volume final) de Percoll 45%:90% centrifugados por por 5 minutos a 5000 g. A avaliação espermática da motilidade, morfologia, integridade de acrossoma, membrana e cromatina, foi realizada antes e após a passagem pelo Percoll. Para a PIV foram utilizados 1194 ovócitos maturados in vitro, sendo a taxa de clivagem avaliada em D2 (48h) e a taxa de blastocisto avaliada no dia 7 após fecundação (D7). Os blastocistos em D7 (n=360) foram congelados para determinação do sexo. Os dados do desenvolvimento embrionário e avaliação espermática foram analisados pela ANOVA considerando o efeito de touro, tratamento e interação touro x tratamento (P<0,05). Para analisar o sexo dos embriões utilizou-se o teste 2 com freqüência esperada de 50:50 (P<0,05). A comparação entre os tratamentos e touro também verificada pelo teste 2. Todos os tratamentos com o Percoll melhoraram significativamente a proporção de espermatozóides móveis. Não houve efeito do tratamento em nenhuma característica espermática avaliada (P>0,05), entretanto, observou-se efeito de touro. A taxa de clivagem e blastocito também não foi afetada pelos tratamentos com o Percoll. Entretanto, foi observado diferenças entre touros (P<0,05). A taxa de clivagem e blastocisto foi melhor para o touro 1 (86 ± 1,6a% e 47 ± 2,6c%) seguido do touro 2 (86 ± 2,1a% e 39 ± 6,6c%) e touro 3 (65 ± 5,9b% e 17 ± 4,1d%). O touro 4 apresentou baixa produção total de blastocisto (n=5), sendo eliminado da análise. A proporção macho:fêmea foi semelhante em todos os tratamentos para os touros 2 e 3. Apenas o touro 1 no T1 apresentou uma maior porcentagem de embriões machos (61%) em relação aos embriões do sexo feminino (39%). Quando apenas os tratamentos foram considerados, independentes dos touros, não foi verificado diferença na proporção macho:fêmea entre T1 (55:45 %), T2 (45:55 %) e T3 (44:56 %). Os resultados mostraram que a utilização de diferentes velocidades, tempo de centrifugação e volume de Percoll não influenciou a taxa de blastocisto e a relação macho:fêmea. Entretanto, para o touro 1 foi observado um desvio para produção de embriões machos quando se utilizou o T1. Esses resultados sugerem a possibilidade de utilizar um menor volume de Percoll por um período de tempo mais curto, diminuindo assim o custo e o tempo para a realização da fecundação in vitro. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Techniques for sperm selection are usually used for bovine in vitro embryo production (IVP) to improve semen quality after thawing. Among these techniques Percoll gradient has been the most used. The aim of this study was to evaluate the effect of different volumes of Percoll, time and force of centrifugation on sperm quality, embryo development and sex of IVP bovine embryos. Frozen-thawed semen from four bulls were submitted to three different Percoll procedures: T1 - 4 mL (final volume) of Percoll 45%:90%, centrifuged for 20 minutes at 700 g, T2 - 800 μL (final volume) of Percoll 45%:90% centrifuged for 20 minutes at 700 g and T3 - 800 μL (final volume) of Percoll 45%:90% centrifuged for 5 minutes at 5000 g. Semen was evaluated before and after Percoll treatment for sperm total motility, morphology, integrity of acrosome, membrane and chromatin. A total of 1194 oocytes were matured, fetilized and cultured in vitro, cleavage rate was valued on D2 and blastocyst rate on D7 after in vitro insemination. The blastocysts in D7 (n=360) were frozen for posterior sex determination. Data from embryo development and sperm characteristic were analyzed by ANOVA considering the effect of bull, treatment and interaction bull x treatment (P <0.05). The ratios were compared with the expected ratio 1:1 by  2 test (P<0.05). All Percoll methods significantly improved the proportion of motile spermatozoa. No effect of treatment was detected in any of the sperm characteristic (P>0.05), however bull-related differences were observed in all parameters tested. Similarly, cleavage and blastocyst rate were not affected by Percoll procedure (P>0.05). However, there was a difference among bulls (P<0.05). Sire 4 had very low embryos production (n=5), and was eliminated from the analysis. Higher rates of cleavage and blastocyst were observed for bull 1 (86 ± 1.6 a % and 47 ± 2.6 c%) and bull 2 (86 ± 2.1a % and 39 ± 6.6c %) showed than for bull 3 (65 ± 5.9b % and 17 ± 4.1d %). The proportion of male:female embryos was similar in all treatments for bulls 2 and 3. Only bull 1 in the T1 presented a greater percentage of male (61%) than female embryos (39%). When only treatments were considered, independent of bulls, no difference was found in proportion male:female (%) among T1 (55:45), T2 (45:55) and T3 (44:56). The results showed that the use of different speed, time of centrifuge and volume of Percoll gradient did not influence the rate of blastocyst and the male:female ratio. However, for bull 1 it was observed a higher production of male embryos when T1 was used. These results suggest the possibility of using a lower volume of Percoll for a shorter period of time, thus reducing the cost and time to perform the in vitro fertilization.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-05-05T17:45:23Z No. of bitstreams: 1 2009_JosedeOliveiraCarvalhoNeto.pdf: 892538 bytes, checksum: d6830e182d5bd383c67b689fda62bdc3 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-19T06:07:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_JosedeOliveiraCarvalhoNeto.pdf: 892538 bytes, checksum: d6830e182d5bd383c67b689fda62bdc3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-19T06:07:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_JosedeOliveiraCarvalhoNeto.pdf: 892538 bytes, checksum: d6830e182d5bd383c67b689fda62bdc3 (MD5) Previous issue date: 2009-05 / Estudos utilizando sêmen sexado por citometria de fluxo têm demostrado uma menor fertilidade deste quando comparado ao não sexado. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade estrutural e funcional da célula espermática após sexagem por citometria de fluxo. Amostras de sêmen congelado de quatro touros foram utilizadas. Um ejaculado de cada touro foi coletado e fracionado em três partes, sendo: não sexado (NS), contendo espermatozóide sexado X (SX) e Y (SY). Uma palheta de sêmen foi descongelada sendo uma amostra retirada para avaliação da cinética espermática por sistema computadorizado (CASA computer-assisted semen analysis), aglutinação de cabeça, alterações morfológicas, integridade das membranas plasmáticas e acrossomal, capacitação espermática e integridade da cromatina. O restante foi depositado em gradiente de Percoll de 90:45% (NS90) ou 60:45% (NS60, SX e SY). Após centrifugação em gradiente de Percoll, o pellet resultante foi homogeneizado, sendo utilizado para avaliação espermática ou PIV. Cada procedimento foi repetido três vezes em manipulações diferentes. Para PIV, 2271 ovócitos maturados in vitro foram utilizados, sendo avaliada taxa de fecundação por coloração lacmóide 18 horas pi, clivagem avaliada em D2 (48 hpi) e a taxa de produção de blastocisto avaliada em D6, D7, D8 e D9 de cultivo. Os dados foram analizados usando procedimento GLIMMIX do programa SAS(R) (p < 0,05). Nas características espermáticas avaliadas antes ou após a passagem pelo gradiente de Percoll, nenhuma diferença foi observada entre os grupos SX e SY para todas as variáveis estudadas. As avaliações realizadas antes e após a passagem pelo gradiente de Percoll mostraram que o sêmen não sexado apresentou maior motilidade, maior porcentagem de células com membrana íntegra e células vivas com acrossoma intacto do que o sêmen sexado. Foi observado um efeito do gradiente de Percoll nas amostras de sêmen não sexado, sendo que aquelas submetidas ao gradiente de 90:45% apresentaram maior motilidade, maior porcentagem de células com membrana intacta e menor taxa de recuperação do que as submetidas ao gradiente de 60:45%. Para taxa de fecundação não foi encontrada diferença entre os grupos. O grupo NS90 apresentou maior taxa de clivagem do que o grupo SY, enquanto que os grupos NS60 e SX foram semelhantes aos demais. A taxa de produção de blastocisto dos dias 6, 7, 8 e 9 de cultivo foi maior no grupo NS90 do que no NS60, SX e SY. Com relação à cinética de desenvolvimento embrionário, não foi observado diferença entre os grupos no estágio do embrião nos dias 6, 7, 8 e 9 pi. Os resultados indicam que o processo de sexagem afeta as características espermáticas, mas não causa diminuição da fertilidade in vitro. No entanto, a diferença nas taxas de blastocisto entre os grupos NS60 e NS90 indica que há um efeito do protocolo de seleção espermática na produção de embriões. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Several studies using sex-sorted sperm by flow cytometry have shown that sexed sperm has lower fertility than the non-sexed. Therefore, the objective of the present study was to evaluate structural and functional characteristics of sperm sexed by flow cytometry. In addition, in vitro embryo production and development was assessed when sexed and non-sexed sperm were used for in vitro fertilization. Frozen sexed and non-sexed semen from four sires were used. One ejaculate from each bull was obtained and separated into three portions, being non-sexed (NS), sexed for X (SX) and sexed for Y (SY). Frozen-thawed semen from each sample was analyzed for motility by computer-assisted semen analysis (CASA), sperm head agglutination, sperm morphology, plasma membrane integrity, acrosome integrity, capacitation and chromatin integrity. Then, the samples were placed in 90:45% (NS90) or 60:45% (NS60, SX e SY) Percoll gradient. After Percoll centrifugation, the pellet was used for sperm analysis or IVF. All sperm quality tests and IVF experiments were repeated three times in independent replicates. For IVF a total of 2271 in vitro matured oocytes were used. To assess fertilization rate presumptive zygotes were fixed and stained with lacmoid at 18 hpi. Cleavage was evaluated at D2 (48 hpi) and blastocyst at D6, D7, D8 and D9 of culture. Data were analyzed using proc GLIMMIX of SAS(R) (p < 0.05). No differences were observed between SX and SY groups for any of the sperm variables evaluated either before or after Percoll centrifugation. The evaluations performed before and after Percoll treatment showed that non-sexed sperm had higher motility, higher percentage of cells with intact membrane and higher percentage of live cells with intact acrosome than sexed sperm. An effect of Percoll gradient was observed in the non-sexed samples, with those submitted to 90:45% gradient presenting higher motility, higher percentage of cells with intact membrane and lower recovery rate than those submitted to a 60:45% gradient. No differences among groups were observed for fertilization rate. NS90 group showed higher cleavage rate than the SY group, while groups NS60 and SX had similar rates to the others. Blastocyst rates at D6, D7, D8 and D9 of culture was greater for group NS90, and similar among NS60, SX and SY groups. Regarding embryo development kinetics, all groups showed similar developmental stages on D6, D7, D8 and D9. The results suggest that although the sex-sorting procedure by flow cytometry affected sperm characteristics, it did not cause a decrease on in vitro fertility. In addition, differences in blastocyst rates between groups NS60 and NS90 indicated an effect of sperm selection protocol on embryo production.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-23T11:02:16Z No. of bitstreams: 1 2013_DanielleYasminHashimotoFreitas.pdf: 8634592 bytes, checksum: 2887222762e9830ac38cc62f77ac6e47 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-13T12:09:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_DanielleYasminHashimotoFreitas.pdf: 8634592 bytes, checksum: 2887222762e9830ac38cc62f77ac6e47 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-13T12:09:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_DanielleYasminHashimotoFreitas.pdf: 8634592 bytes, checksum: 2887222762e9830ac38cc62f77ac6e47 (MD5) / A cultura da mandioca (Manihot esculenta Crantz) e a mais importante nos tropicos e subtropicos. Um das abordagens botanicas para seu melhoramento e a poliploidizacao. A introducao artificial de poliploidia pode gerar tanto poliploides totais quanto citoquimeras. Estudos citogeneticos e anatomicos nesses dois tipos foram realizados neste trabalho, com o intuito de caracterizar e selecionar individuos mais vantajosos para uso no melhoramento. Para tanto, apices meristematicos caulinares, graos de polen, ovulos, raizes, estomatos e periodos de florescimento foram analisados. A natureza citoquimeral foi comprovada pelo tamanho aumentado de estomatos e estruturas gameticas, alem do incremento na frequencia de poliembrioes. As associacoes e numeros cromossomicos obtidos em meiose indicaram a natureza tetraploide da camada subepidermica da quimera. A formacao da citoquimera foi acompanhada por total inibicao de florescimento em um dos genotipos, e por aumento no tamanho de raizes quando comparado a planta diploide. A combinacao de dados sobre viabilidade de polen e tamanho do grao revelou-se como marcador confiavel para se determinar a ploidia de individuos. O delineamento ontogenetico do saco embrionario da mandioca nos tipos diploide e citoquimeral mostrou similaridades com o desenvolvimento do saco sexual do tipo Polygonum. A apomixia em mandioca parece necessitar de dosagens geneticas maiores que as fornecidas por citoquimeras para ser expressa. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cassava (Manihot esculenta Crantz) is the most important crop in tropics and subtropics. One botanic approach for its improvement is polyploidization. Artificial introduction of polyploidy can generate total polyploids or cytochimeras. Cytogenetics and anatomic studies on both types were conducted in this work, in order to characterize and select superior individuals for breeding use. Then, apical shoots, pollen grains, ovules, roots, stomata and flowering periods were analysed. Cytochimeral nature was proved by stomatal and gametic size increase, beside a rise in frequency of polyembryo sacs. Chromosomal associations and numbers obtained by meiosis indicated tetraploid nature of cytochimera sub epidermis layer. Cytochimera formation was accompanied by complete inhibition of flowering in one genotype, and increase in root size when compared to diploid plant. Pollen viability and grain diameter showed reliable markers to determine ploidy level in cassava individuals. Embryo sac ontogeny in diploid and chimeric type revealed similarities with Polygonum development of sexual sacs. Apomixis in cassava seems to need bigger genetic dosages than cytochimeras offer to be expressed.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:01Z No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-24T14:15:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LauraVanessaMouraoGulart.pdf: 1864176 bytes, checksum: e06ce0b2306cd34aa7c2580745746aca (MD5) / Condições de cultivo in vitro também afetam a produção de embriões e a expressão de importantes genes, podendo alterar a competência de oócitos para a produção de embriões futuros. O FSH em baixas concentrações pode afetar a produção desses embriões. A busca por melhores condições de cultura e um sistema in vitro que seja menos variável e ao mesmo tempo em que simule o animal in vivo, levou ao desenvolvimento de vários sistemas de cultura para a maturação in vitro de oócitos bovinos. Para comparar a eficiência dos sistemas de MIV foram utilizados quatro grupos: 1) TCM-199 controle; 2) ?-MEM, 3) ?-MEM 1 FSH 4) ?-MEM 10 FSH. O meio de cultura do grupo 1, é um meio não definido, devido a presença de soro fetal bovino utilizado. Os grupos dois, três e quatro são definidos, onde foi usado o polyvinilalcohol-PVA como doador de macromolécula sintética. FSH de suíno foi usado nos grupos 1, 3 e 4. No 1 º e 3 grupo o a concentração de FSH foi de 1 ng /mL e no 4 grupo a concentração foi 10ng/mL. Ovários bovinos foram coletados em um abatedouro. Oócitos com citoplasma homogêneo e com mais de três camadas de células da granulosa foram utilizados. Oócitos maturos dos quatro tratamentos foram fertilizados in vitro com sêmen preparado pelo método de gradiente Percoll. Prováveis zigotos com até duas ou três camadas de células do cumulus foram cultivados em gotas de 50 ml de meio SOF, acrescido de 10% de SFB e 1 mg /mL BSA sob óleo mineral em uma atmosfera úmida 5% CO2 a 38,5 ° C. A taxa de clivagem foi avaliada 72 horas após a FIV, taxa de blastocisto foi avaliada 168-192 horas pós FIV. As taxas de clivagem e blastocisto foram calculados com base no número de oócitos. A expressão dos seguintes genes (Bax, Bcl-2 e Conexina 43) foram avaliadas, em blastocistos por RT-PCR. O teste de ANOVA foi utilizado para comparar o número de blastocistos. Não houve diferença na proporção de embriões com mais de oito blastômeros em todos os grupos testados, indicando que a taxa de desenvolvimento durante as primeiras 72h pós FIV, foi semelhante nos oócitos maturados em meio quimicamente definido e de oócitos maturados no meio contendo soro. O gene Bax é um marcador pró-apoptóticas e o Bcl um marcador anti-apoptótico. A conexina 43 (Cx43) pode ser um marcador de competência do embrião. GAPDH foi utilizado como controle interno. O gene Bax não foi expresso em nenhum grupo. Os genes Bcl-2 e da conexina 43 foram expressos, principalmente no ?-MEM 10. Resultados inéditos mostram que não foram observadas diferenças na taxa de blastocisto em nenhum dos grupos (30% a 40%), a forte expressão de BCL2 e da Cx43 no grupo contendo 10 ng / mL de FSH podem indicar que FSH pode melhorar a qualidade do embrião, sob condições definidas.