Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-01-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:46Z : No. of bitstreams: 1 000196893.pdf: 6813671 bytes, checksum: 148366ff716050122ca1a1043bcf709b (MD5) / Para avaliar o efeito da exposição de ovos de matrinxã à triiodotironina, sobre o desenvolvimento embrionário, ovócitos extrusados foram fertilizados e imersos em soluções de 0,00; 0,01; 0,05 e 0,10ppm de triiodotironina, durante a hidratação. A pesquisa foi desenvolvida no Centro Nacional de Pesquisa em Peixes Tropicais (CEPTA/IBAMA), Pirassununga, SP, e Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, UNESP, campus de Jaboticabal, SP. Para a observação do desenvolvimento embrionário, da fertilização até a eclosão das larvas, durante as duas primeiras horas após a fertilização os ovos foram amostrados a cada 15 minutos, e depois a cada 30 minutos e observados ao esteromicroscópio. Foi calculado a taxa de eclosão e a contagem dos ovos para classificação quanto a qualidade. Os ovos (50 por fêmea) obtidos por desova induzida mostraram-se esféricos, com diâmetro médio de 912,5 ± 15,31 μm, independente do tratamento. Após a fertilização aconteceu a formação do disco germinativo no polo animal, o que classifica estes ovos como telolécitos e também polilécitos, em virtude da grande quantidade de vitelo e a clivagem em parcial ou meroblástica, acontecendo apenas no polo animal. O desenvolvimento embrionário do matrinxã ocorreu à temperatura de 27oC em um intervalo de aproximadamente 12 horas para ovos do grupo controle e os que receberam o hormônio na dose de 0,1ppm, 12 horas e 30 minutos para aqueles da dose 0,05ppm e 13 horas para os da dose de 0,01ppm. Pela taxa de eclosão, observou-se que a imersão dos ovos em triiodotironina não afetou o número de ovos com larvas viáveis e larvas mortas e os ovos expostos à dose de 0,01ppm apresentaram maior número de larvas com anormalidades / The present work evaluated the effect of the exposure of matrinxã (Brycon cephalus) eggs to triiodothyronine (T3) on the embrionic development. The study was performed at the Centro Nacional de Pesquisa em Peixes Tropicais (CEPTA/IBAMA), Pirassununga, SP, and Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, UNESP, Jaboticabal campus, SP. Fertilized eggs were exposed to 0.00; 0.01; 0.05 e 010ppm T3 and samplings were carried out at each 15 minutes during the first 2 hs after the fertilization and following at each 30 minutes to observation in stereomicroscopy. Hatching rate and eggs counting were done to qualify the biological material. Eggs (50 per female) were spheric, average diameter of 912.5 ± 15.31 μm regardless the treatment. After fertilization, it was possible to observe the germinative disk at animal pole, what characterize the eggs as telolecits and polilecits due to the great amont of yolk, and partial cleavage, or meroblastic cleavage occurring only in the animal pole. The embrionic development of matrinxã occurred at 27oC in intervals of 12hs in the control group (0ppm T3) and 0.1ppm group, 12:30hs in the 0.05ppm group and 13hs in the 0.01ppm group. The hatching rate showed that the exposure of the eggs to triiodothyronine did not affect the number of viable and dead larvae. Besides eggs exposed to 0.01ppm T3 produced higher number of abnormalities

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-30Bitstream added on 2014-06-13T20:18:55Z : No. of bitstreams: 1 cavassani_tb_me_araiq.pdf: 1899529 bytes, checksum: c90c7f090f98ce6f94ef871d0d70f937 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / É consenso entre cientistas do mundo inteiro que existem moléculas com o poder de alterar o funcionamento do sistema endócrino humano e de diversas espécies de animais, conhecidas atualmente como alteradores endócrinos. Dentro deste grupo de substâncias, merece destaque as isoflavonas presentes em maior abundância nos grãos de soja, principalmente a genisteína (GEN) e a daidzeína (DAID), apontadas como responsáveis por desencadear inúmeros efeitos endócrinos em espécies aquáticas. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi otimizar e validar um novo método para determinação de GEN e DAID em efluente de ETE, água subterrânea, potável e de rio; aplicando o método já validado nestas matrizes na cidade de Araraquara e avaliar o comportamento sazonal destes alteradores endócrinos. O método apresentado é baseado na pré-concentração e simplificação de amostra proporcionado pelo uso de SPE aplicado a 2 litros de amostras de água de rio e subterrânea e ao volume de 1,5 litro de efluente de ETE, analisados por HPLC-UV utilizando um sistema MeOH/Água como alternativa ao uso de acetonitrila. A exatidão mostrou-se na faixa de 75 a 110%, com precisão entre 0,5 e 14 %. O LQ alcançado com o referido método foi de 6,3 e 188 ng L-1 para daidzeína e 2,17 e 187 ng L-1 para a genisteína nas matrizes de água subterrânea, superficial e efluente de ETE, respectivamente. A aplicação do método nas amostras de água subterrânea e do Ribeirão das Cruzes demostrou que as concentrações de DAID e GEN situaramse abaixo dos LD. Já para as amostras de efluente de ETE, estas moléculas foram identificados em todas as amostras coletadas, com concentrações variando entre 60-306 ng L-1 para GEN e de 76 a 288 ng L-1 para DAID. Comparando-se os dados de temperatura e pluviosidade com as concentrações destes fitoestrógenos no período amostrado, percebe-se que a temperatura... / It is a common thought among scientists worldwide that there are molecules with the capacity of altering the functioning of the endocrine system of humans and several species of animals, currently known as endocrine modifiers. Inside this group of substances, the highlighted ones are the isoflavones more abundantly present in soybean grains, especially genistein (GEN) and daidzein (DAID), pointed as those responsible for triggering a number of endocrine effects in aquatic species. Therefore, the aim of the present work was optimize and validate a new method for the determination of GEN and DAID in an effluent of a Sewage Treatment Unit (STU), as well as subterranean, drinking and river waters, applying the method already validated in these matrixes in the city of Araraquara, and then evaluate the seasonal behavior of these endocrine modifiers. The method presented is based on the sample pre-concentration and simplification enabled by the use of SPE applied to 2 liters of samples from subterranean and river waters, and to the volume of 1.5 liter of STU effluent, analyzed through HPLC-UV using a system of MeOH/Water as an alternative to the use of acetonitrile. The accuracy was shown to be in the range of 75 to 110%, with a precision between 0.5 and 14 %. The LQ reached with the method referred was of 6.3 and 188 ng L-1 for daidzein, and 2.17 and 187 ng L-1 for genistein in the matrixes of subterranean and superficial waters, as well as STU effluent, respectively. The application of the method in the samples of subterranean water and also in that of the Cruzes stream demonstrated that the DAID and GEN are below the LD. For the samples of STU effluent, such molecules were identified in all samples collected, with concentrations ranging between 60-306 ng L-1 for GEN and 76-288 ng L-1 for DAID. Comparing the temperature and rainfall data with the concentrations of these... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Patricia Pintor dos Reis / Banca: Miriam Galvonas Jasiulionis / Banca: Janete Maria Cerutti / Banca: Sandra A. Drigo Linde / Resumo: O câncer de tireoide (CT) é a neoplasia mais comum do sistema endócrino. O carcinoma papilífero da tireoide (CPT) compreende 80-85% dos casos, seguido dos carcinomas foliculares (CFT), pouco diferenciados (CPDT) e anáplasicos (CAT). O diagnóstico dos CT, principalmente nos casos bem diferenciados, ainda é um desafio devido a semelhanças morfológicas compartilhadas por esses tumores e lesões benignas (LBT). O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de metilação do DNA para identificar marcadores epigenéticos envolvidos no desenvolvimento das lesões benignas e dos diferentes subtipos histológicos de carcinomas. Além disso, buscou-se identificar marcadores prognósticos nos CT. Foram incluídos nesse estudo 17 lesões benignas da tireoide (8 adenomas, 6 bócios tireoideanos e 3 tireoidites), 60 CPT, 8 CFT, 2 carcinomas de células de Hurthle (CCH), 1 CPDT e 3 CAT, além de 50 tecidos não neoplásicos (TN) obtidos dos pacientes que tiveram CPT. As análises de metilação diferencial foram realizadas utilizando a plataforma microarray Infinium® Human Methylation450 BeadChip (Illumina). Na primeira etapa do estudo, os resultados obtidos de sondas diferencialmente metiladas foram utilizados na construção de um algoritmo útil como classificador diagnóstico. Na segunda etapa, o perfil de metilação do DNA das lesões benignas e dos diferentes subtipos tumorais foi comparado aos dados de tecidos não neoplásicos. Somente sondas significativamente alteradas no presente estudo e aquelas confirmadas no GEO (Gene Expression Omnibus) foram selecionadas para a construção de algoritmos. Foram delineados três algoritmos diagnósticos baseados na metilação diferencial de nove sondas selecionadas a partir de área abaixo da curva de 0,75 para o classificador de LBT e 0,90 para os classificadores CFT e CPT além de análise multivariada. Foram também aplicados métodos lineares de classificação. A aplicação do algoritmo... / Abstract: Thyroid cancer (TC) is the most prevalent type of endocrine cancer. Papillary thyroid carcinoma (PTC) comprises 80-85% of the diagnosed thyroid cancers, followed by follicular (FTC), poorly differentiated (PDTC) and anaplastic carcinomas (ATC). Diagnosis of thyroid carcinomas, especially of well-differentiated carcinomas is a challenge due to morphological similarities between these tumors and benign lesions. The aim of this study was to evaluate the methylation profile to identify diagnostic markers involved in benign lesions and in different histological subtypes of carcinomas. Moreover, a search for reliable molecular prognostic markers was also performed in TC. The study included 17 benign lesions (8 adenomas, 6 goiters and 3 thyroiditis), 60 PTCs, 8 FTCs, 2 Hürthle cell carcinomas (HCC), 1 PDTC and 3 ATC, as well as 50 non-neoplastic tissues (NT) obtained from patients who had PTC. Differential methylation analyzes were performed using the Infinium® Human Methylation450 BeadChip microarray (Illumina). In the first stage of the study, the results of differentially methylated probes were used in the development of diagnostic classifier algorithm. In second step, the methylation profile of benign lesions and tumor subtypes was compared to data from non-neoplastic tissues. Only probes significantly altered in the current study and those confirmed by GEO data (Gene Expression Omnibus) were selected for the development of the algorithms. Three diagnostic algorithms were developed based on differential methylation of nine probes selected from area under the curve of 0.75 for BTL classifier and 0.90 for FTC and PTC classifiers and multivariate analysis. It was also applied linear classification methods. Application of the algorithm diagnosis allowed the correct classification of non-neoplastic tissues, benign and malignant lesions (sensitivity: 91.9% and specificity: 76.5%). The same strategy was performed using the GEO database... / Doutor

O presente trabalho teve como objetivo estudar a morfologia e fisiologia reprodutiva de Lobotes surinamensis em ambiente natural, reunindo informações que permitam trabalhos aplicados na produção e conservação desta espécie. Machos e fêmeas adultos foram coletados na Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro durante a primavera (outubro-novembro-dezembro), verão (janeiro-fevereiro-março), outono (abril-maio-junho) e inverno (julho-agosto-setembro). Os perfis plasmáticos dos esteroides gonadais, 17β-estradiol (E2), 17-hidroxiprogesterona (17-OHP) e 11-cetotestosterona (11-KT) foram analisados em fêmeas, e a concentração de testosterona (T) e 11-KT nos machos. Análises histológicas das gônadas foram realizadas como uma ferramenta para avaliação morfológica, que foi corroborada com os dados fisiológicos, durante o ciclo reprodutivo. Foram analisadas ainda a expressão gênica hipofisária do fshβ e lhβ e a fecundidade relativa pelo número de oócitos desenvolvidos. Durante a primavera e verão, as fêmeas estavam com os ovários desenvolvidos e capazes de desovar, com oócitos vitelogênicos e desenvolvidos, e membrana radiata bem evidente. No outono e inverno, as fêmeas estavam se preparando para o período reprodutivo, com predomínio de ninhos de oogônias e oócitos perinucleolares de uma forma geral. A concentração plasmática de E2 se manteve elevada nas fêmeas durante a primavera em relação ao verão e outono/inverno. O perfil anual deste esteroide nas fêmeas de L. surinamensis pode ser relacionado com o grau de desenvolvimento do folículo ovariano, observado na histologia. Já a concentração plasmática de 11-KT foi inversa ao observado para o E2, com baixa concentração na primavera e tendência à elevação no inverno, corroborando com o papel da 11-KT no crescimento primário dos oócitos. A concentração plasmática de 17-OHP nas fêmeas não apresentou diferenças significativas entre as estações, o que sugere que este não seja o progestágeno ativo em teleósteos, mas sim o precursor do esteroide indutor da maturação final (MIS). Na primavera e no verão, o lhβ apresentou expressão maior do que no período outono/inverno em fêmeas, enquanto o fshβ se manteve com níveis de expressão constante durante todas as estações. Nos machos, a análise histológica dos testículos, mostrou que na primavera e no verão, os ductos espermáticos estavam preenchidos com espermatozoides, evidenciando o período de espermiação, já no período outono/inverno houve predominância de cistos de espermatogônias e as células em diferentes estágios de desenvolvimento, o que corresponde a uma fase de maturação inicial, ou seja, preparação para o período reprodutivo. A concentração plasmática de T nos machos se manteve estável ao longo das estações, já a concentração plasmática de 11-KT foi mais elevada na primavera quando comparada ao período outono/inverno. Na primavera e verão, a expressão de lhβ foi mais elevada que no período outono/inverno, enquanto de forma similar às fêmeas, os níveis de expressão de fshβ não se alteraram ao longo das estações. As análises de expressão destas gonadotropinas, associadas à concentração dos esteroides gonadais e à morfologia gonadal deixou evidente que o pico do período reprodutivo de L. surinamensis ocorre na primavera, estendendo-se até o verão / The present study aimed to study the morphology and reproductive physiology of Lobotes surinamensis in a natural environment, gathering information that allows applied works in the production and conservation of this species. Adult males and females were collected in the Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro during the spring (October-November-December), summer (January-February-March), autumn (April- May-June) and winter (July-August-September). Plasma profiles of gonadal steroids, 17β-estradiol (E2), 17-hydroxyprogesterone (17-OHP) and 11-ketotestosterone (11-KT) were analyzed in females, and the concentration of testosterone (T) and 11-KT in males. Histological analyzes of the gonads were performed as a tool for morphological evaluation, which was corroborated with the physiological data, during the reproductive cycle. The genetic expression of fshβ and lhβ and the relative fecundity by the number of developed oocytes were also analyzed. During spring and summer, the females had the ovaries developed and capable of spawning, with vitellogenic and developed oocytes, and a well evident radiata zone. In autumn and winter, females were preparing for the reproductive period, with a predominance of nest of oogonia and perinucleolar oocytes in general. The plasma concentration of E2 remained higher in females during the spring in relation to summer and autumn/winter. The annual profile of this steroid in L. surinamensis females may be related to the degree of development of the ovarian follicle observed in histology. The plasma concentration of 11-KT was inversely of that observed for E2, with a low concentration in the spring and a tendency to increase in winter/autumn, corroborating the role of 11-KT in the primary oocyte growth. The plasma concentration of 17-OHP in the females did not present significant differences between the seasons, suggesting that this is not the active progestogen in teleosts, but the precursor of the final maturation inducing steroid (MIS). In spring and summer, lhβ presented higher gene expression than in the autumn/winter period in females, while fshβ remained with constant expression levels during all seasons. In males, the histological analysis of the testicles showed that in the spring and summer, the sperm ducts were filled with spermatozoa, evidencing the period of spermiation, whereas in the autumn/winter period there was a predominance of cysts of spermatogonia and cells in different stages of. development, which corresponds to an initial maturation stage, that is, the preparation for the reproductive period. The plasma concentration of T in males remained stable throughout the seasons, whereas the plasma concentration of 11-KT was higher in the spring when compared to the autumn/winter period. In spring and summer, the expression of lhβ was higher than in the autumn/winter period, while similarly to females, fshβ expression levels did not change over the seasons. The analysis of the expression of these gonadotropin genes, associated with the concentration of gonadal steroids and gonadal morphology, made it evident that the peak of the reproductive period of L. surinamensis occurs in the spring, extending until the summer

O 4-Nonilfenol (4-NF) é o principal produto formado a partir da degradação do Nonilfenol etoxilado, surfactante não iônico amplamente utilizado em formulações de uso doméstico e industrial. Objetivou-se neste estudo desenvolver método de quantificação de 4-NF em HPLC; avaliar a remoção de 4-NF em reatores em batelada com co-substratos (etanol, metanol e fumarato) e avaliar a remoção e degradação de 4-NF em Reator Anaeróbio de Leito Fluidificado (RALF) em escala aumentada (20L), bem como caracterizar a comunidade microbiana estabelecida no material suporte por meio das técnicas de PCR/DGGE do gene RNAr 16S e sequenciamento massivo via plataforma Illumina-Miseq®. O RALF foi preenchido com areia como material suporte, operado com Tempo de Detenção Hidráulico (TDH) de 18,2±1,1 horas e alimentado com meio de cultura acrescido de 4-NF PESTANAL® (Sigma-Aldrich®). Análises de monitoramento da concentração de 4-NF e matéria orgânica, bem como, dos parâmetros físico-químicos foram realizadas para avaliar a estabilidade do reator quanto a remoção e degradação do composto de interesse. A operação do reator foi dividida em distintas etapas, contando com inoculação do RALF em circuito fechado, adaptação ao meio de cultura e subsequentes fases com adição de 4-NF. Para reatores em batelada a adição de 4-NF (de 288,97±96,49 a 469,98±182,42 µg L-1) favoreceu a produção média de metano acumulada (de 2.292,3 para 2.744,7 mol, respectivamente) para todos os co-susbtratos testados, todavia, retardou o tempo médio de início da produção (de 15,9 h para 107,9 h), bem como reduziu a velocidade de produção (de 24,4 para 10,9 µmol d-1). Para ensaio com adição de 4-NF e Fumarato foram verificados os maiores valores de produção acumulada de metano (3.163,68±169,17 µmol) e de remoção de DQO (75,52±0,34% para DQO inicial de 1.242,00±27,48 mg L-1), em relação aos demais ensaios com adição de 4-NF. Para a remoção de 4-NF em reatores em batelada os valores não diferiram significativamente. Para o RALF, foram verificadas eficiências médias de remoção de DQO de 90,34±6,1% (Fase I), 94,0±1,2% (Fase II), 97,0±1,3% (Fase III) e 95±1,5% (Fase IV) e 4-NF de 73,2±11,1% (Fase II), 67,3±7,3% (Fase III) e 77,88±8,9% (Fase IV). As diferentes concentrações de 4-NF aplicadas ao RALF não afetaram a eficiência de remoção de DQO e promoveram a seleção dos microrganismos que compuseram a biomassa do leito. Os gêneros mais abundantes identificados no reator sem adição de 4-NF foram Prolixibacter, Geothrix, Klebsiella, Lactobacillus e Geobacter. Os gêneros com maior abundância relativa identificados após adição de 4-NF foram os seguintes: Geothrix, Holophaga, Elusimicrobium, Paludibacter, Lactobacillus, Aeromonas, Pelobacter, Aquaspirillum, Pseudomonas, Delftia, Acinetobacter, Arcobacter, Ignavibacterium, Treponema, Lysinibacillus e Enterococcus. / 4-Nonylphenol (4-NP) is the main product formed in the Nonylphenol ethoxylate degradation, nonionic surfactant used in formulations of domestic and industrial use. The objective of this study was to develop a method to determine 4-NP in HPLC; to evaluate the 4-NP removal in batch reactors with co-substrates (ethanol, methanol and fumarate) and removal and degradation of 4-NP in anaerobic Fluidized Bed Reactor (AFBR) on an enlarged scale (20L), as well as characterize the microbial community established in the support material by PCR / DGGE techniques of the 16S RNAr gene and massive sequencing by the Illumina-Miseq® platform. The AFBR was filled with sand as carrier material, operated with Hydraulic Retention Time (HRT) of 18.2±1.1 hours and fed with synthetic sewage plus 4-NP PESTANAL® (Sigma-Aldrich®). Monitoring of the 4-NP concentration and organic matter, as well as physical-chemical parameters were performed to evaluate the stability of the reactor for the removal and degradation of the compound of interest. Reactor operation was divided into different stages, with inoculation of the RALF in closed circuit, adaptation to the culture medium and subsequent phases with 4-NF addition. The addition of 4-NP (from 288.97±96.49 to 469.98±182.42 µg L-1) in batch reactors favored the average accumulated methane production (from 2,292.3 to 2,744.7 µmol, respectively) for all tested co-susbtrates, however, delayed the mean time to start production (from 15.9 h to 107.9 h), as well as reduced production rate (from 24.4 to 10.9 µmol d-1). The highest accumulated values of methane production (3,163.68 ± 169.17 µmol) and COD removal (75.52±0.34% for the initial COD of 1,242±27.48 mg L-1) were verified for the addition of 4-NP and Fumarate, compared to the other tests with addition of 4-NP. For the 4-NP removal in batch reactors the values did not differ significantly. Mean values of COD removal for the AFBR were 90.34±6.1% (Phase I), 94.0±1.2% (Phase II), 94.0±1.2% (Phase III) and 97.0±1.3% (Phase IV) and 4-NF of 73.2±11.1% (Phase II), 67.3±7.3% (Phase III) and 77.88±8.9% (Phase IV). Different concentrations of 4-NP applied to the AFBR did not affect the COD removal efficiency and promoted the selection of the microorganisms that composed the bed biomass. The most abundant genera identified in the reactor without addition of 4-NP were Prolixibacter, Geothrix, Klebsiella, Lactobacillus and Geobacter. The genotypes with the highest relative abundance identified after addition of 4-NP were as follows: Geothrix, Holophaga, Elusimicrobium, Paludibacter, Lactobacillus, Aeromonas, Pelobacter, Aquaspirillum, Pseudomonas, Delftia, Acinetobacter, Arcobacter, Ignavibacterium, Treponema, Lysinibacillus and Enterococcus.

Interferentes endócrinos são substâncias que podem causar efeitos deletérios na saúde, crescimento e capacidade reprodutiva dos organismos, e colocam em risco a continuidade de várias espécies. Suas fontes são as mais variadas possíveis, sendo possível detectá-los em alguns alimentos, produtos farmacêuticos, produtos químicos e seus respectivos subprodutos de degradação. Também vêm sendo detectados em várias matrizes ambientais, tais como o ar, solo, água e sedimentos. Devido as suas capacidades de ação sinérgica, aditiva e antagônica é extremamente complexa a determinação da relação dose-resposta, informação esta necessária para a definição de limites de padrões de qualidade e medidas de controle e monitoramento. A partir da avaliação do estado da arte relativa ao tema foram apresentados os mais atuais instrumentos de gestão ambiental e suas respectivas aplicações. Finalmente, foi realizado teste visando detectar a eventual presença de efeito estrogênico em amostras de dois sistemas de grande importância para a Região Metropolitana de São Paulo: a água da Represa Guarapiranga e o efluente da Estação de Tratamento de Esgotos Barueri. Os testes realizados foram do tipo in vivo, onde peixes machos da espécie Cyprinus carpio foram expostos a amostras destes dois sistemas e foi investigada a presença da proteína vitelogenina no plasma sanguíneo em concentrações anômalas. Verifica-se a necessidade premente de maiores estudos que foquem o efeito dos interferentes endócrinos na saúde e no meio ambiente, através de ensaios biológicos, de forma a municiar a sociedade de informações que permitam definir medidas estratégicas de atuação para minimização do impacto desta poluição. / Endocrine disrupters are substances that can play a role of deleterious efects in organisms health, growth and reproductive capability. They can be found in food, pharmaceuticals, chemical products and by-products and in diverse environmental matrixes, as air, soil, water and sediments. Because their ability to sinergistic, additive and antagonistic action, it is difficulty to determine the dose-response relationship, which is necessary for establishment of quality standards and monitoring measures. From the assessment of state-of-art about endocrine disrupters were present the most current environmental tools and applications. Finally, one test was performed to detect the possible presence of estrogenic effect in samples of two systems located in Metropolitan Region of São Paulo, from Guarapiranga Reservoir and the effluent from Wastewater Treatment Plant in Barueri. The tests in vivo were with male fish of the species Cyprinus Carpio, and investigated the presence of protein vitellogenin in blood plasma and in anomalous concentrations. There is a need for more studies that focus on the effect of endocrine disrupters on human health and the environment, by means of biological tests, in order to arm the society with informations to set strategic measures of performance for minimizing the impact of this kind of pollution.

O fipronil, um inseticida e acaricida de amplo espectro de ação, atua como bloqueador dos canais de cloreto acoplados aos receptores GABA (GABA-Cls) e aos receptores glutamatérgicos (GluCls), estes últimos são alvo inseto-específico não presente nos vertebrados. O fipronil é utilizado na agricultura, medicina veterinária e saúde publica no combate a vetores de doenças. Comercialmente conhecido pelas marcas Frontline® (uso veterinário) e Regent 800 WG® (uso agrícola), esse inseticida, além de atuar sobre sistema nervoso central, atua, ainda, em organismos não-alvo como desregulador endócrino, podendo causar prejuízos nos sistemas reprodutor, nervoso e imunológico, por gerações. Assim, o presente estudo buscou investigar os efeitos da exposição pré-natal ao fipronil na geração F1 de ratas Wistar. Quarenta ratas virgens, Wistar, adultas (a partir de 90 dias de vida), foram acasaladas e separadas em quatro grupos: três experimentais, que receberam: 0,1, 1,0 e 10,0 mg/Kg de peso de fipronil; e o grupo controle, que recebeu água (1 mL/Kg de peso), via gavagem, do 6º ao 20º dia de gestação (n = 10 animais por grupo). O estudo foi então dividido em três partes: 1) estudos sobre a toxicidade materna e o comportamento maternal dessas ratas no 5º dia pós-nascimento (DPN5); 2) avaliação do desenvolvimento físico e reflexológico da geração F1, desde o dia de seu nascimento (DPN0) até o DPN35; e 3) avaliações comportamentais e de necropsia dos filhotes na idade adulta. O tratamento pré-natal com fipronil causou leve toxicidade materna na maior dose, apenas na segunda semana de gestação, caracterizada pela redução do consumo de ração (p<0,01), porém, essa redução não causou prejuízos no desempenho reprodutivo dessas ratas quando comparadas ao grupo controle. Além disso, o tratamento do fipronil mostrou leve melhoria do comportamento maternal, onde as ratas que receberam as doses de 1,0 e 10,0 mg/Kg apresentaram aumento do tempo de lambedura em seus filhotes (p<0,05), enquanto a maior dose agrupou toda a ninhada mais rapidamente (p<0,05) quando comparadas ao grupo controle. Na infância, não foram observadas alterações significantes nos parâmetros do desenvolvimento físicos da prole, porém os filhotes que estiveram expostos à menor dose durante o período gestacional, apresentaram retardo para o desenvolvimento do reflexo de geotaxia negativa, tanto machos (p<0,01), quanto fêmeas (p<0,05). A análise do desenvolvimento motor desses filhotes, constatou alterações nos perfis da atividade geral em campo aberto, observados por sete dias consecutivos, nos grupos de 0,1 e 1,0 mg/Kg, tanto na prole feminina, quanto na prole masculina. Na idade adulta, as proles de ratas tratadas com fipronil, tanto masculina, quanto feminina, apresentaram alterações comportamentais, indicando aumento de ansiedade e alterações no tempo de interação social. A prole masculina apresentou ainda, alteração na motivação sexual sem prejudicar a eficiência copulatória e a prole feminina apresentou alterações no ciclo estral, sem prejudicar o desempenho copulatório, ambos na menor dose de exposição pré-natal. Apesar das alterações comportamentais, a necropsia não mostrou alterações anatômicas nos órgãos desses animais. Assim, esses resultados sugerem que a exposição ao fipronil na gestação causou alterações na geração F1, sendo proposto o envolvimento do sistema endócrino regulado pelo sistema GABAérgico. / Fipronil, a broad spectrum action insecticide and acaricide, acts blocking GABA-regulated chloride channels and Glutamate-gated chloride channels, which is a specific insect target not present on vertebrates. It is used in crops, veterinarian medicine and public health against disease vectors. Commercially known as Frontline® (vet) and Regent 800 WG® (crops), it acts on the central nervous system and on non-target organisms as an endocrine disruptor causing impairment on reproductive, nervous and immunological system, through generations. Thus, this study investigated effects of prenatal exposition to fipronil in Wistar rats offspring. Forty adult Wistar rats (90 days old) were matted and separated into four groups: three experimental, that received 0.1, 1.0, and 10.0 mg/Kg (bw) of fipronil; and the control group, that received water (1 mL/Kg bw), through gavage from the 6th to 20th pregnancy day (n=10 animals per group). The study was divided into three sections: 1) maternal toxicity and maternal behavior evaluations; 2) physical end reflexological development of F1 generation, since day of birth until the 35th day of life; and 3) behavior and necropsy evaluation of the adult offspring. The fipronil prenatal treatment caused slight maternal toxicity in the highest dose on the second pregnancy week, by the reduction of food intake (p<0,01), although, these reduction did not caused reproductive performance impairment, compared to the control group. Furthermore, the fipronil treatment showed slight increase of maternal behavior in rats treated with 1.0 and 10.0 mg/Kg. Both groups showed increased pup-grooming time (p<0,05), and the highest dose, grouped theirs pups earlier than the control group (p<0,05). No alterations were observed in the offspring physical development, however, the lowest dose exposed offspring showed delay on geotaxis reflex development, in both male (p<0,01) and female offspring (p<0,05). The motor development assessment, of the 0.1 and 1.0 mg/Kg dose offspring, showed variation on motor activity profile on the open field arena, observed for seven consecutive days. In the adulthood, the treated offspring, male and female, showed behavior changes denoting anxiety increase and social behavior alterations. Furthermore, in the lower dose, male offspring showed decrease on sexual motivation without interfering on copulatory efficiency and the female offspring showed estrus cycle deregulation without interfering on lordosis performance. Despite behavior alterations, there were no anatomic alterations in these animals\' organs. Therefore, these results suggest that the prenatal exposition to fipronil caused alterations on F1 generation, being proposed involvement of the endocrine system controlled by GABAeregciystem.

Metais como o alumínio (Al) e o manganês (Mn) são encontrados na natureza como também em efluentes industriais, e podem ser tóxicos para a biota aquática, apresentando efeitos de desregulação endócrina, por exemplo, para os peixes, podendo afetar o desempenho reprodutivo de uma espécie. Rios e tributários do Estado de São Paulo, mesmo em áreas teoricamente conservadas, têm demonstrado um aumento no aporte destes metais, em concentrações superiores ao permitido pela legislação, e a consequência disso para os peixes é pouco conhecida. Neste estudo foram delineados ensaios de toxicidade para exposição aquática aguda (96 horas) ao Al e ao Mn, de forma isolada e sincrônica, em fêmeas vitelogênicas do teleósteo Astyanax bimaculatus. Este período de exposição foi seguido de um período em água limpa (96 horas) para avaliar a possibilidade de recuperação dos efeitos tóxicos promovidos por estes metais, avaliando-se os seguintes parâmetros: a fecundidade relativa (FR), potencial de bioconcentração destes metais, concentração plasmática de Estradiol (E2), 17&alpha; hidroxiprogesterona (17&alpha;- OHP), Cortisol (CT), Triiodotironina (T3), Tiroxina (T4) e a expressão do mRNA do &beta;FSH e &beta;LH. Foram estabelecidos cinco grupos experimentais: Controle em pH neutro, pH ácido, Al, Mn e exposição Sincrônica ao Al e ao Mn. Os resultados demonstraram que o pH ácido e o Al reduziram a FR sem efeito de recuperação. O Al se bioconcentrou principalmente nas brânquias, fígado e encéfalo, enquanto que o Mn se bioconcentrou principalmente nas brânquias, mas em menor intensidade que o Al. Quando expostos sincronicamente, o Mn potencializou os efeitos de bioconcentração do Al, causando a redução na concentração plasmática de E2 e 17&alpha;-OHP, para este progestágeno apenas na exposição ao Mn, tanto isolada quanto em exposição sincrônica. Contudo não foi observada recuperação na concentração de E2. Ambos os metais, em exposição isolada, causaram redução na concentração plasmática de CT, todavia nenhuma alteração foi registrada na exposição sincrônica. Da mesma forma, ambos os metais causaram redução na concentração plasmática de T4, inclusive a exposição sincrônica, enquanto que o T3 se alterou diferentemente em cada grupo de exposição metálica. Possivelmente os efeitos sobre os hormônios tireoidianos tenham refletido uma resposta de modulação endócrina, enquanto que sobre os esteroides foram efeitos de desregulação endócrina, em uma via anti-esteroidogênica. Nenhum efeito foi observado na expressão gênica do mRNA &beta;LH e não foi possível obter resultado sobre o &beta;FSH, embora os primers tenham sido desenhados especialmente para A. bimaculatus e tenham funcionado corretamente na elaboração da curva padrão para o qRT - PCR. Os resultados encontrados em fêmeas vitelogênicas de A. bimaculatus podem ser relacionados ao tipo de exposição e a interação / Metals such as Aluminum (Al) and Manganese (Mn) are found in nature as well as in industrial effluents, and can be toxic to aquatic biota, with endocrine disrupting effects, e.g. for fish, which can affect the reproductive performance of a species. Rivers and tributaries of São Paulo State, even in theoretically preserved areas, have shown an increase in the supply of these metals in concentrations greater than allowed by law, and the consequence for the fish is poorly understood. In this study, toxicity tests were designed for acute aquatic exposure (96 hours) to Al and Mn, in isolated and synchronous forms, in vitellogenic females of Astyanax bimaculatus, a teleost fish species. This exposure period was followed by a period in clean water (96 hours) to assess the possibility of recovery of toxic effects promoted by these metals, evaluating the following parameters: relative fecundity (FR), bioconcentration potential of these metals, plasma concentration of Estradiol (E2), 17&alpha; hydroxyprogesterone (17&alpha; -OHP), Cortisol (CT), triiodothyronine (T3), thyroxine (T4) and mRNA gene expression of &beta;FSH and &beta;LH. Five experimental groups were established: Control at neutral pH, acidic pH, Al, Mn and synchronic exposure to Al and Mn. The results showed that acidic pH and Al reduced FR with no recovery effect. Al was mainly bioconcentrate in gills, liver and brain, whereas Mn was mainly bioconcentrate in gills, but with less intensity than Al. When exposed synchronously, Mn potentiated the effects of Al bioconcentration, causing a reduction in the plasma levels of E2 and 17&alpha;-OHP, for this progestogen only to Mn exposure, both, in isolated and synchronous exposure. But recovery was not observed in E2 levels. Both metals, in isolated exposure caused a reduction in plasma CT, but no change was recorded in synchronous exposure. Likewise, both metals induced reduction in plasma T4 levels, including synchronous exposure, whereas T3 levels were differently altered in each metal exposure group. Possibly the effects on thyroid hormones have reflected a response to endocrine modulation, whereas steroids showed endocrine disrupting effects in na antiesteroidogenic way. No effects were observed in mRNA &beta;LH gene expression and it was not possible to achieve &beta;FSH results, although the primers were designed especially for A. bimaculatus and have worked properly in the preparation of the standard curve for qRT - PCR. The results found in vitellogenic A. bimaculatus females may be related to the type of exposure and interaction, which were variable between Al and Mn ions.

Orientador: Renata Fracácio Francisco / Abstract: Metals are known for their toxic potential to the aquatic environment, as well as being bioaccumulative and persistent elements, which increases the concern with the concentration allowed by legislation, considering protection of biota Often, these compounds are released in the water bodies in concentrations which may not cause acute effects but may compromise the viability of biological systems in the long term, considering the continuous exposure to said elements and concentrations. In this context, liver is an important organ for the evaluation of metals toxicity due to its function of excretion and its potential to accumulate exogenous substances. In gonads metals can trigger disturbances in the production, release, transport, metabolism and action of natural hormones, which can lead to fecundity loss, males feminization and consequently imbalance to living organisms, compromising the viability of the species. Exogenous substances that act in this way are known as endocrine disrupters and their influences on individual organisms and aquatic life are not well established. One ways to identify them is through histological and histochemical analysis. Metals copper and nickel originate from natural and also artificial sources due to the generation of domestic and industrial waste, depending on the anthropic activities. They can be considered toxic or essential depending on the organism, the environment and its concentrations. In addition, they have the potential to be endocri... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: Os metais são conhecidos pelo seu potencial tóxico ao ambiente aquático, além de serem elementos bioacumulativos e persistentes, o que aumenta a preocupação com a concentração permitida pela legislação, considerando-se proteção da biota Muitas vezes, estes compostos são liberados nos corpos hídricos em concentrações subletais as quais não provocam efeitos agudo, mas , podem comprometer a viabilidade dos sistemas biológicos a longo prazo, considerando-se a contínua exposição aos referidos elementos e concentrações Nesse contexto, fígado é um importante órgão para avaliação da toxicidade de metais devido a sua função de excreção e seu potencial para acumular substâncias exógenas. Nas gônadas os metais podem desencadear perturbações na produção, liberação, transporte, metabolismo e ação dos hormônios naturais, que podem levar a perda de fecundidade, feminização de machos e consequentemente desequilíbrio aos organismos vivos, comprometendo a viabilidade das espécies. Substâncias exógenas que atuam dessa maneira são conhecidos como interferentes endócrinos e suas influências sobre os organismos individualmente e a vida aquática ainda não são bem estabelecidos. Uma das maneiras de identificá-los é através de análises em nível histológico e histoquímico. Os metais cobre e níquel originam-se de fontes naturais e também artificiais devido a geração de resíduos domésticos e industriais, em função das atividades antrópicas. Podem ser considerados tóxicos ou essenciais dependendo do orga... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A nicotina é considerada o principal componente psicoativo do tabaco e esta induz seus efeitos farmacológicos centrais atuando em receptores nicotínicos colinérgicos (nAChRs). A maturação dos sistemas colinérgicos é consolidada durante o período da periadolescência, o que sugere que o cérebro do adolescente é vulnerável aos efeitos de estimulantes colinérgicos. Dados os efeitos deletérios do consumo de tabaco, incluindo a dependência, têm sido desenvolvidas estratégias terapêuticas para facilitar a interrupção do uso. A mais recente é o uso da vareniclina, um agonista parcial dos nAChRs &#945;4&#946;2. Pouco se sabe sobre os efeitos da exposição à nicotina na adolescência e menos ainda dos efeitos de curto e longo prazos dos tratamentos disponíveis para a reversão da dependência ainda durante este período. Neste sentido, os objetivos desse trabalho foram o de estudar os comportamentos associados à ansiedade e busca por novos estímulos e a função adrenal em animais expostos à fumaça do cigarro durante a adolescência e subsequentemente tratados com procedimento para reversão de dependência à nicotina. Esse estudo utilizou 150 camundongos Suíços adolescentes (de ambos os sexos). Os animais foram expostos à solução aquosa de nicotina (50g/ml - NIC) ou de sacarina (2% - SAC) v.o. do 30o dia de vida pós-natal (PN) à PN45 e submetidos aos seguintes tratamentos por gavagem de PN45 à PN56: 1) vareniclina (0,1 ou 1,0 mg/kg/dia, VAR1 e VAR2 respectivamente); 2) veículo (VEH); 3) nicotina na dose utilizada entre PN30 e PN45 (NIC). Sete grupos experimentais foram utilizados: SACVEH, SACVAR1, SACVAR2, NICVEH, NICVAR1, NICVAR2 e NICNIC. Em PN55, os animais foram submetidos ao teste do labirinto em cruz elevado (LCE) por 5 min, e duas depois ao teste do campo vazado (CV) também por 5 min. Os tecidos coletados em PN56 (após o sacrifício dos animais) foram: adrenal esquerda para a verificação do conteúdo de catecolaminas, adrenal direita para avaliação da expressão da tirosina hidroxilase e soro para a dosagem de corticosterona. Os nossos resultados demonstraram que no final da vigência do tratamento não foram encontradas diferenças entre os grupos no comportamentos associados à ansiedade do LCE e nos associados à busca por novos estímulos no CV. Por outro lado, a análise do número de orifícios explorados no centro do CV, também utilizado como medida de ansiedade, sugerem que a vareniclina por si só e a exposição continuada à nicotina são ansiogênicas mas que que o tratamento com vareniclina após a exposição à nicotina mantém os resultados dentro da normalidade. Do ponto de vista endócrino, o conteúdo adrenal de catecolaminas foi corrigido pelo tratamento com vareniclina, os níveis séricos de corticosterona foram aumentados pela exposição à nicotina enquanto o tratamento com vareniclina aumentou a expressão de tirosina hidroxilase. Nosso estudo indica que, no final da vigência do tratamento, tanto aspectos comportamentais como endócrinos estão significativamente afetados em nosso modelo de exposição à nicotina durante a adolescência e tratamento subsequente com vareniclina. Estudos futuros deverão avaliar estes parâmetros em períodos posteriores, com o objetivo de verificar se as alterações observadas persistem na vida adulta. / Nicotine is considered the main psicoactive component of tobacco and it induce its central pharmacological effects by acting on cholinergic nicotinic receptors (nAChRs). The maturation of the cholinergic system is consolidated during the periadolescent period, which suggests that the adolescent brain is vulnerable to the effects of cholinergic stimulants. Considering the deleterious effects of tobacco consumption, including addiction, several therapeutic strategies are being developed to aid in the interruption of consumption. Varenicline treatment, a partial agonist of the &#945;4&#946;2 nAChRs is one of the most recent ones. Little is known regarding the effects of nicotine exposure during adolescence and even less is known regarding the short and long term effects of the available treatments for addiction during this period. In this sense, the aim of the present work is to study the behaviors associated with anxiety and novelty seeking, as well as adrenal function, in animals exposed to nicotine during adolescence and subsequently treated with a procedure to cure addiction to nicotine. This study used 150 adolescent Swiss mice of both sexes. The animals were exposed (orally) to a nicotine (50g/ml - NIC) solution or to a saccharine (2% - SAC) solution from the 30th postnatal day (PN) to PN45 and then treated by gavage with one of the following substances from PN45 to PN56: 1) vareniclina (0.1 or 1.0 mg/kg/day - VAR1 and VAR2 respectively); 2) vehicle (VEH); 3) nicotine (using the dose previously used from PN30 to PN45 - NIC). Seven experimental groups were used: SACVEH, SACVAR1, SACVAR2, NICVEH, NICVAR1, NICVAR2 and NICNIC. On PN55, the animals were tested in the elevated plus maze (EPM) for 5 min and, 2 h later, they were tested for 5 min on the hole board arena (HB). The tissue samples collected on PN56 (after the animals sacrifice) were: left adrenal gland for the analysis of catecholamine content; right adrenal gland for the analysis of tyrosine hidroxilase expression; serum for the analysis of corticosterone concentration. Our results show that by the end of the treatment no differences were observed between groups regarding behaviors associated with anxiety in the EPM and those associated with novelty-seeking in the HB. Conversely, the analysis of the number of explored holes on the center of the HB, also used as a measure of anxiety, suggest that varenicline by itself and the continued exposure to nicotine are anxiogenic but that varenicline treatment following nicotine exposure keeps results within normal levels. Regarding the endocrine system, the catecholamine adrenal content was corrected by varenicline treatment, the serum corticosterone levels were increased by nicotine exposure and the tyrosine hidroxilase expression was increased by varenicline treatment. Our study indicates that, by the end of the treatment, behavioral as well as endocrine parameters were affected in our model of nicotine exposure during adolescence and subsequent varenicline treatment. Further studies will have to address this parameters in later periods with then aim of verifying whether the observed alterations persist up to adulthood.