Os disruptores endócrinos são substâncias químicas, sintéticas ou naturais, capazes de interferir no sistema endócrino de seres humanos e animais. Pertencem à classe dos micro poluentes, pois mesmo em concentrações de μg e ng.L-1 causam efeitos adversos aos organismos a eles expostos. Os hormônios destacam-se dentre os disruptores endócrinos por serem compostos potencialmente ativos no sistema biológico e estão relacionados à origem de diversos tipos de cânceres. Esta dissertação teve por objetivo desenvolver e validar metodologia para determinar hormônios, considerados disruptores endócrinos, em amostras de água bruta e tratada da região da Bacia Hidrográfica do Rio Paraíba do Sul utilizando a técnica de cromatografia gasosa com detecção por espectrometria de massas. A população atendida pelas unidades da SABESP dessa região é de aproximadamente 11 milhões de habitantes. Através do processo de validação, a metodologia desenvolvida pode ser considerada seletiva, robusta, exata, linear e precisa para a análise proposta. Aplicando o procedimento analítico validado nas amostras coletadas, alguns dos compostos estudados puderam ser detectados tanto em água bruta como em água tratada permanecendo abaixo do limite de quantificação, exceto a cafeína que apresentou concentração média de 0,45 μg.L-1 em água bruta e 0,17 μg.L-1 em água tratada, observando-se indícios de contaminação principalmente nas épocas secas. Este projeto de pesquisa está vinculado a uma parceria entre o Instituo de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN) e a Companhia de Saneamento Básico do Estado de São Paulo (SABESP). / The endocrine disruptors are chemicals substances, synthetic or natural, which can interfere in endocrine system from humans and animals. They belong to the class of micro pollutants, because even at concentrations of μg e ng.L-1 can cause adverse effects to organisms to them exposed. The hormones stand out as endocrine disruptors because they are potentially active compounds in biological systems and are related to the origin of several types of cancers. This work aimed to develop and validate analytical methodology to determine hormones, considered endocrine disruptors, in drinking water and raw water at region of Paraíba do Sul River, using gas chromatography with mass spectrometry detector. The population served by the units of SABESP is around 11 million inhabitants. By the validation process, the developed methodology can be considered selective, robust, accurate and linear for the proposed analysis. Applying the validated analytical procedure for the samples, some compounds could be detected at drinking water and raw water remaining below limit of quantization, except caffeine that was detected in mean concentration of 0,45 μg.L-1 in raw water and 0,17 μg.L-1 in drinking water, principally due to drought season. This Project is linked to a partnership between Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN) and Companhia de Saneamento Básico do Estado de São Paulo (SABESP).

Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biancardi_ManoelFrancisco_M.pdf: 6869231 bytes, checksum: 32275d5e0c79d81cecdc898bc5e42bb9 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A próstata é uma glândula encontrada não somente em machos de mamíferos, podendo estar presente em fêmeas de alguns roedores e também em mulheres. Os andrógenos são essenciais durante o desenvolvimento e também para a manutenção da homeostasia prostática ao longo da vida. No entanto, sensíveis interferências, principalmente em momentos críticos do desenvolvimento, podem predispor este órgão a desenvolver lesões durante a vida adulta e senil. Pesquisas tem demonstrado que o programa de expressão gênica controlado pelo receptor de andrógeno durante a organogênese prostática é muito semelhante ao que é ativado durante a instalação do câncer de próstata. Aliado a isso, um grande número de estudos tem demonstrado que a predisposição às desordens prostáticas tem sua origem nos momentos iniciais da vida. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a exposição androgênica intra-uterina e pós-natal pode interferir na morfofisiologia da próstata de roedores, podendo levar ao surgimento de desordens prostáticas durante a vida adulta. Para isto, este trabalho foi dividido em duas etapas. Primeiro, grupos de ratos Wistar jovens e adultos não tratados e de ratas adultas tratadas com testosterona (1 mg/Kg/48 horas) durante 7, 14 e 21 dias foram analisadas. As próstatas destes animais foram submetidas a análises morfométrico-estereológicas, imunohistoquímicas e ultra-estruturais. Em uma segunda etapa, grupos de gerbilos machos e fêmeas expostos à testosterona durante a vida embrionária (100 ?g ou 1 mg) e pós-natal (100 ?g) foram avaliados na vida adulta. As glândulas prostáticas destes animais foram submetidas a análises morfométrico-estereológicas, imunohistoquímicas, além da reconstrução tridimensional. Os resultados mostraram que as próstatas das ratas sujeitas a terapias androgênicas durante a vida adulta apresentaram um intenso desenvolvimento, tornando-se mais ativas nos processos de síntese e secreção. Além de sofrer um intenso desenvolvimento, a glândula prostática destes animais tornou-se, morfologicamente e fisiologicamente, muito semelhante à próstata ventral dos ratos. Entretanto, apesar das próstatas das ratas tratadas sofrerem um expressivo desenvolvimento induzido pela ação androgênica, não foram observadas a presença de lesões nestas glândulas. Já os machos e as fêmeas de gerbilos que sofreram exposição androgênica anormal durante o período embrionário, apresentaram uma alta incidência de lesões prostáticas na vida adulta, podendo-se evidenciar a presença frequente de focos inflamatórios e de neoplasias intra-epiteliais. Os resultados mostraram que o excesso de andrógeno interfere significantemente na homeostasia prostática, levando a um intenso desenvolvimento glandular ou mesmo predispondo esta glândula a desenvolver lesões durante a vida adulta. Estes aspectos são de grande interesse, pois é cada vez maior o número de relatos na literatura mostrando que a desbalanço hormonal durante os momentos iniciais do desenvolvimento prostático podem predispor este órgão a manifestar doenças durante a vida adulta e senil. / Abstract The prostate is a gland found not exclusively in male mammals, may also be present in female of some rodents and also in women. The androgens are essential for the development and maintenance of prostatic homeostasis throughout life. However, sensible interferences, especially during critical stages of development, can predispose this organ to develop lesions in adult and senile life. Researches have shown that the gene expression program controlled by androgen receptor during prostatic organogenesis is very similar to that activated during the installation of prostate cancer. Moreover, a large number of studies have demonstrated that the predisposition to prostate disorders has its origin in the early stages of life. Thus, the objective of this study was to evaluate whether intrauterine and postnatal androgen exposure alters the morphophysiology of rodents prostate leading to the development of prostatic disorders in adulthood. For this, the work was divided into two stages. At first, groups of untreated young and adult male Wistar rats and adult female rats treated with testosterone (1mg/Kg/48 hours) for 7, 14 and 21 were analyzed. The prostates of these animals were subjected to morphometric-stereological, immunohistochemical and ultrastructural analyses. In a second step, groups of male and female gerbils exposed to testosterone (100 ?g or 1 mg) during embryonic and postnatal (100 ?g) life were analyzed at adulthood. The prostatic glands of these animals were subjected to morphometric-stereological, immunohistochemical and also to three-dimensional reconstruction analyses. The results showed that prostates of female rats subjected to androgen therapy during adulthood had an intense development, presenting a more active synthesis and secretion status. In addition to this intense development, the prostate gland of these animals became morphologically and physiologically very similar to the ventral prostate of adult male rats. However, despite the prostates of treated rats suffered a significant development caused by the androgenic action, it was not observed the presence of lesions in these glands. In other hand, males and females gerbils submitted to abnormal androgen exposure during the embryonic period exhibited a high incidence of prostatic lesions in adulthood, being frequent the presence of inflammatory foci and intraepithelial neoplasia. The results showed that androgen excess interfere significantly in the prostate homeostasis, leading to an intense glandular development or even predisposes this gland to develop lesions during adulthood. These aspects are of great interest because a growing number of reports in the literature has shown that the hormonal imbalance during the early stages of prostate development may predispose this organ to manifest disease during adulthood and senescence. / Mestrado / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Os metais podem causar efeitos adversos de grande amplitude na função reprodutiva de animais, principalmente em organismos aquáticos. Eles podem alterar o sistema endócrino, atuando na esteroidogênese, afetando o processo reprodutivo dos peixes. Nosso objetivo foi investigar os efeitos dos metais alumínio (Al) e manganês (Mn) em pH ácido sobre a esteroidogênese de machos de Astyanax bimaculatus, sexualmente maduros, após uma exposição aguda de 96 horas e avaliar se os animais foram capazes de recuperar dos possíveis efeitos destes metais em água livre de metais. Esses animais foram expostos a uma concentração nominal de 0,5 mg.L-1 de Al e Mn (isolados ou combinados), e os grupos experimentais foram mantidos em pH ácido (5,5) para manter os metais biodisponíveis. Foi realizada uma exposição aguda de 96 horas, com amostragens em 24h e 96h, e depois também um período de 96h em água livre de metais, com amostragens em 120h e 192h, a partir do o início do experimento. Foram determinadas as concentrações plasmáticas de testosterona (T), 11-cetotestosterona (11-KT), 17β-estradiol (E2) e cortisol (C) por ELISA. Além disso, foram realizadas análises histológicas dos testículos e avaliação da concentração espermática. Os metais estudados, além do pH ácido, foram capazes de aumentar as concentrações plasmáticas dos androgénos T e 11-KT. Também foi observado um aumento transitório de E2 em 24h, mas apenas em animais expostos ao Mn e depois uma diminuição em 96h. A exposição ao pH ácido e metais, sozinhos ou combinados não provocou alterações nos níveis de C. Sendo assim, Al e Mn , assim como a acidez da água podem atuar como desregulador endócrino em machos de A. bimaculatus, principalmente por estimulação da síntese de androgénos, causando alterações no sistema fisiológico. No entanto, 96 horas não foram suficientes para que os animais se recuperassem. Os testículos encontravam-se em estágio avançado de maturação, enquanto que a concentração espermática não apresentou alterações significativas que indicassem a atuação dos metais em conjunto ao pH ácido. Táticas reprodutivas podem ter sido utilizadas pela espécie para desencadear alterações na esteroidogênese testicular, principalmente acelerando o processo de espermatogênese e espermiogênese, o que pode interferir com a dinâmica reprodutiva / Metals can cause adverse wide range effects on reproductive function of animals, mostly in aquatic organisms. They can alter the endocrine system, acting on gonadal steroidogenesis, affecting the reproductive process of fish. We aimed to investigate the effects of the metals aluminum (Al) and manganese (Mn) in acidic pH on the steroidogenesis of Astyanax bimaculatus males, sexually mature, after an acute exposure of 96 hours and evaluate if the animals were able to recover of the possible effects of these metals in the water free of metals. Mature males were exposed to a concentration of 0.5 mg.l-1 of Al and Mn (isolated or combined) and the experimental groups were maintained at acidic pH (5.5) to keep the metals bioavailable. We performed an acute exposure of 96 hours, with samplings at 24h and 96h, and then also a period of 96h in water free of metals, with samplings at 120h and 192h from the beginning of the experiment. We measured the plasma levels of testosterone (T), 11-ketotestosterone (11-KT), 17?-estradiol (E2) and cortisol (C) by elisaimmunoassay. Furthermore, histological analysis of testes and evaluation of the sperm concentration were performed. The metals studied, in addition to acidic pH, were able to alter the plasma concentration of the androgens T and 11KT. A transitory increase (24h) of E2 levels was also observed, but only in animals exposed to Mn and then a decrease in 96h occurred. Exposure to acidic pH and metals, alone or combined did not trigger changes in C plasma levels. Generally, Al and Mn as well as the acidity of water can act as endocrine disruptor in A. Bimaculatus males, mainly by stimulating the androgens synthesis, causing changes on physiological system. However, 96 hours in water free of metals were not enough for the animals to recover from the effects of the metals. The testes were in the advanced stage of maturation, while sperm concentration was not significantly changed to suggest any influence of metals together with acidic pH in altering this variable. Reproductive tactic could be used by the species to trigger changes in testicular steroidogenesis, mainly accelerating the process of spermatogenesis and spermiogenesis, what may interfere with the reproductive dynamics

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T22:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guerra_MarinaTrevizan_D.pdf: 6009222 bytes, checksum: 1ca90ae1ef82035a0e6930b277dac172 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os desreguladores endócrinos são substâncias químicas que podem mimetizar ou antagonizar os hormônios endógenos, alterando o equilíbrio hormonal necessário para o desenvolvimento correto. Sabe-se que a exposição de organismos a agentes hormonalmente ativos durante períodos críticos do desenvolvimento pode levar a alterações permanentes detectadas somente na vida adulta. Em várias espécies animais estes compostos podem atingir o feto via placenta ou a prole, pelo leite materno. Embora pesquisas iniciais tenham focado em estrógenos e antiandrógenos ambientais, a presença de compostos com atividade androgênica tem sido descrita como contaminante em rios e animais destinados a alimentação. Vários estudos demonstraram que a exposição de animais a altos níveis de andrógenos durante o período perinatal pode causar alterações morfológicas, bioquímicas e funcionais permanentes em vários órgãos e sistemas. A exposição perinatal a andrógenos exógenos pode causar masculinização fisiológica e comportamental em fêmeas e levar a alterações reprodutivas em machos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos da exposição a um agente androgênico sobre o sistema genital e a função reprodutiva de animais expostos durante períodos críticos de desenvolvimento. Para tanto, ratas prenhes foram alocadas em quatro grupos experimentais: controle, que recebeu somente óleo de milho (veículo), e tratados com propionato de testosterona nas doses de 0,05mg/kg, 0,1mg/kg, ou 0,2mg/kg. Os tratamentos foram realizados por via subcutânea, do dia gestacional 12 ao final da lactação. A prole feminina foi avaliada quanto ao número de células germinativas fetais, peso corpóreo e distância anogenital no dia pós-natal 1, número de mamilos, idade de instalação da puberdade, histologia uterina e ovariana, dosagens hormonais, comportamento sexual, fertilidade, níveis de receptores esteroides uterinos através de imunohistoquímica, assim como taxa de proliferação/morte celular uterina e testes uterotróficos. Nos filhotes do sexo masculino foram avaliados, na idade adulta e meia idade, a histologia testicular e epididimária, contagens, morfologia e motilidade espermáticas, dosagens hormonais, comportamento sexual e fertilidade. Os resultados demonstraram que em fêmeas, a exposição perinatal ao propionato de testosterona ocasionou alteração na intensidade de marcação dos receptores esteroides uterinos em todas as doses testadas, diminuição nos índices de proliferação e morte celular no tecido uterino nas doses de 0,1 e 0,2mg/kg e aumentou a predisposição uterina a responder a estímulos estrogênicos na dose de 0,1mg/kg e 0,2mg/kg. Entretanto, estas alterações não foram capazes de prejudicar a diferenciação sexual feminina e a fisiologia normal do sistema genital feminino. Em relação aos filhotes do sexo masculino, a exposição perinatal a andrógenos provocou redução na produção e nas reservas espermáticas na idade adulta, sem, contudo, alterar a fertilidade destes animais após acasalamentos naturais. Podemos concluir que a exposição perinatal a andrógenos, nas doses utilizadas neste experimento, provocou o aparecimento de alterações tardias no sistema genital feminino como modificações nos receptores esteroides uterinos e anormalidade na resposta a estímulos estrogênicos e, no sistema genital masculino, alterações na produção espermática. Estas repercussões, entretanto, não foram capazes de alterar o desempenho geral de fertilidade em ambos os sexos / Abstract: Endocrine disruptors are chemicals that may mimic or antagonize endogenous hormones, altering the critical hormonal balance required for proper health and development. It is well known that exposure of organisms to some hormonally active agents during critical periods of development imprints permanent changes that can be detected later in adulthood. In many animal species these substances reach the fetus via placenta and/or the offspring via the mother's milk. Although first researches have focused on environmental estrogens and antiandrogens, androgenic activity has been described as contaminant in rivers and beef cattle. Previous studies demonstrated that exposure of experimental animals to high levels of androgens during perinatal age causes permanent morphological, biochemical, and functional alterations in several organs and systems. Perinatal exposure of female rodents to exogenous androgens results in both physiological and behavioral masculinization and causes reproductive disruption in male rodents. The aim of this study was to assess the possible effects of an androgenic compound on genital system and reproductive function of animals exposed during critical periods of development. Pregnant female rats were allocated into four experimental groups: control, which received corn oil (vehicle), and treated with testosterone propionate at doses of 0.05mg/kg, 0.1mg/kg and 0.2mg/kg. Treatments were performed subcutaneously, from gestational day 12 until the end of lactation. The female offspring was evaluated for fetal germ cell number, body weight and anogenital distance at post-natal day 1, number of nipples, puberty onset, histology of reproductive organs, hormonal levels, sexual behavior, fertility test, immunohistochemistry of steroid receptors, proliferation/apoptotic index, uterotrophic test and uterine stimulation with estrogens. On male offspring, at adult age and middle-age, histology of testis and epididymis, sperm counts, morphology and motility, hormonal levels, sexual behavior and fertility test were evaluated. Results demonstrated that, in females, the perinatal testosterone propionate exposure caused an alteration in the pattern of uterine steroidal receptors imunostaining in all tested doses, a decreased proliferation/apoptotic index in the uterine tissue at 0.1 and 0.2mg/kg and a greater predisposition from uterus in responding to estrogens stimulation at dose of 0.2mg/kg. However, these alterations were not capable of impairing female sexual differentiation and normal physiology of female genital tract. On male offspring, the perinatal androgenization provoked a reduction in sperm production and reserves at adult age, without altering fertility after natural mating. We can conclude that perinatal exposure to androgens, at doses used in this experiment, provoked the appearance of late alterations in the female genital system as modifications in the uterine steroidal receptors and abnormalities in uterine response to estrogenic stimulation, and in male genital system, as spermatic production impairment. These repercussions, however, were not capable to alter the general fertility performance in both sexes / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: A nutrição é um dos principais fatores que afetam diretamente o metabolismo produtivo e reprodutivo dos animais. Dentre os fatores nutricionais a proteína é um dos elementos mais importantes. Este estudo objetivou a análise de possíveis alterações no sistema reprodutivo de carneiros mediadas pela diferença de proteínas fornecidas na dieta total. Foram instituídas quatro dietas com distintos níveis protéicos: A- (controle) 13,4% PB; 210 g/dia PM; B- 11,4% PB e 187 g/dia PM; C- 17,5% PB e 231 g /dia PM; D-22,4% PB e 215,0 g/dia PM. As coletas de dados foram realizadas em D0; D20; D40; D80; D120. Durante o experimento os animais foram pesados e avaliados quanto a condição corporal; foi feita coleta de sêmen e avaliação em sistema computadorizado (CASA), ultrassonografia e citologia testicular; e dosagem de testosterona, T3 e T4. Os dados obtidos neste estudo, mostraram que a dieta A, não provocou alterações no sistema reprodutivo, portanto foi considerada a mais indicada a carneiros em atividade reprodutiva. / Abstract: Nutrition is one of the main factors that directly affect the productive and reproductive metabolism of animals. Among nutritional factors, protein is one of the most important elements. The objective of this study was to analyze the possible alterations in the reproductive system of rams mediated by the difference of proteins provided in the total diet. Four diets were established, with distinct protein levels: A- (control) 13,4% CP (Crude Protein); 210 g/day MP (Metabolized Protein); B- 11,4% CP and 187 g/day MP; C- 17,5% CP and 231 g /day MP; D-22,4% CP and 215,0 g/day MP. Data collections were performed in D0; D20; D40; D80; D120. During the experiment, animals were weighted and evaluated concerning body condition; semen collection and evaluation were carried out in computer system (CASA); ultrasound examination and testicular cytology; and hormonal count of testosterone, T3 e T4. The results obtained in this study showed that diet is A did not cause changes in the reproductive system of rams. Therefore, it was considered the most appropriate for rams in reproductive activity. / Mestre

Interferentes endócrinos são substâncias que podem causar efeitos deletérios na saúde, crescimento e capacidade reprodutiva dos organismos, e colocam em risco a continuidade de várias espécies. Suas fontes são as mais variadas possíveis, sendo possível detectá-los em alguns alimentos, produtos farmacêuticos, produtos químicos e seus respectivos subprodutos de degradação. Também vêm sendo detectados em várias matrizes ambientais, tais como o ar, solo, água e sedimentos. Devido as suas capacidades de ação sinérgica, aditiva e antagônica é extremamente complexa a determinação da relação dose-resposta, informação esta necessária para a definição de limites de padrões de qualidade e medidas de controle e monitoramento. A partir da avaliação do estado da arte relativa ao tema foram apresentados os mais atuais instrumentos de gestão ambiental e suas respectivas aplicações. Finalmente, foi realizado teste visando detectar a eventual presença de efeito estrogênico em amostras de dois sistemas de grande importância para a Região Metropolitana de São Paulo: a água da Represa Guarapiranga e o efluente da Estação de Tratamento de Esgotos Barueri. Os testes realizados foram do tipo in vivo, onde peixes machos da espécie Cyprinus carpio foram expostos a amostras destes dois sistemas e foi investigada a presença da proteína vitelogenina no plasma sanguíneo em concentrações anômalas. Verifica-se a necessidade premente de maiores estudos que foquem o efeito dos interferentes endócrinos na saúde e no meio ambiente, através de ensaios biológicos, de forma a municiar a sociedade de informações que permitam definir medidas estratégicas de atuação para minimização do impacto desta poluição. / Endocrine disrupters are substances that can play a role of deleterious efects in organisms health, growth and reproductive capability. They can be found in food, pharmaceuticals, chemical products and by-products and in diverse environmental matrixes, as air, soil, water and sediments. Because their ability to sinergistic, additive and antagonistic action, it is difficulty to determine the dose-response relationship, which is necessary for establishment of quality standards and monitoring measures. From the assessment of state-of-art about endocrine disrupters were present the most current environmental tools and applications. Finally, one test was performed to detect the possible presence of estrogenic effect in samples of two systems located in Metropolitan Region of São Paulo, from Guarapiranga Reservoir and the effluent from Wastewater Treatment Plant in Barueri. The tests in vivo were with male fish of the species Cyprinus Carpio, and investigated the presence of protein vitellogenin in blood plasma and in anomalous concentrations. There is a need for more studies that focus on the effect of endocrine disrupters on human health and the environment, by means of biological tests, in order to arm the society with informations to set strategic measures of performance for minimizing the impact of this kind of pollution.

Nas últimas décadas, a ocorrência de atividade estrogênica e interferentes endócrinos (IEs) no ambiente aquático têm se tornado uma crescente preocupação. Dentre as diversas substâncias classificadas como IEs, destacam-se os fármacos, produtos de higiene e cuidados pessoais, hormônios naturais e sintéticos, produtos químicos industriais, praguicidas e muitos outros compostos que atingem o ambiente aquático por meio de descargas de esgoto doméstico, industrial ou de escoamento agrícola. Os objetivos deste estudo foram determinar a atividade estrogênica em amostras de águas superficiais, e avaliar seus efeitos biológicos no desenvolvimento de embriões de Danio rerio, a fim de propor faixas baseadas em valores de desencadeamento de efeitos para categorizar a atividade estrogênica. As amostras ambientais também foram analisadas por cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas para identificar as substâncias que são suspeitas de causar alteração endócrina. Os compostos analisados foram: praguicidas, hormônios, triclosan, bisfenol A, octilfenol, nonilfenol, e a cafeína como indicador de atividade antrópica. A atividade estrogênica foi medida pelo ensaio Bioluminescent Yeast Estrogen (BLYES), que fornece os resultados em equivalente de 17β-estradiol (EEQ). No entanto, este ensaio não é capaz de prover informações sobre os efeitos adversos em organismos aquáticos. Para observação de possíveis efeitos na biota, os embriões foram expostos a amostras de águas superficiais com resultados acima de 0,1 EEQ no BLYES. Os ensaios foram realizados de acordo com a OECD No. 236 (2013), verificando efeitos agudos como: ausência de batimento cardíaco, não formação de somitos, não desprendimento da cauda, e embrião coagulado. Malformações embrionárias tais como: redução do tamanho do organismo, edema cardíaco e vitelínico, curvatura da coluna vertebral, também foram avaliadas. As informações obtidas pelo ensaio com embriões de Danio rerio foram adequadas para mostrar os efeitos da mistura de contaminantes em organismos não-alvo. A atividade estrogênica medida pelo BLYES ficou abaixo do limite de quantificação (0,1 EEQ) em 44,8% do total de 116 amostras analisadas, e a faixa de atividade estrogênica variou de 0,11 a 14,6 EEQ. Além disso, a presença de contaminantes mesmo que em concentrações baixas ressalta a necessidade de mais estudos para entender os efeitos dessas substâncias nos organismos aquáticos. / Over the last few decades, the occurrence of estrogenic activity and endocrine disrupting chemicals (EDCs) in aquatic environment has become a worldwide issue of increasing environmental concern. The EDCs have the ability to alter the endocrine system of organisms, and includes pharmaceuticals, personal care products, steroid hormones, industrial chemicals, pesticides and many other compounds. Such compounds are present in several industrial and domestic activities and reach the aquatic environment via wastewater discharges or agricultural runoff. The aim of this study was to determine the overall estrogenic activity of surface water, evaluate biological effects on fish embryos development, in order to propose concentrations range based on trigger value to categorize estrogenic activity. Environmental samples were also analyzed by liquid chromatography tandem mass spectrometry to identify substances that are suspected to be an endocrine disruptor. The analyzed compounds were: pesticides, hormones, triclosan, bisphenol A, octylphenol, nonylphenol, and caffeine as an indicative of anthropic activity. The estrogenic activity was measured by Bioluminescent Yeast Estrogen assay (BLYES), with the results expressed in 17β-estradiol equivalent quotient (EEQ). However, this assay is not able to provide information about adverse effects to aquatic organisms. In order to observe effects on aquatic organisms, organic extracts of surface water with results ≥ 0.1 EEQ in BLYES were tested in a bioassay using Danio rerio embryos. The methodology was conducted according OECD No. 236 and verified effects such as: lack of heart beat, lack of somites formation, non-detachment tail and coagulated embryo. Embryonic malformations were also evaluated, such as: reduction of organism size, edema and spine curvature, which are chronic effects. These effects probably are associated with contaminants mixtures. The obtained information by embryonic assay with Danio rerio was suitable to show the effects of contaminants mixture and was used to a categorization proposal of estrogenic activity. Estrogenic activity was below the limit of quantification (0.1 EEQ) in 44.8% of 116 analyzed samples, and range of estrogenic activity was from 0.11 to 14.6 EEQ. The tested samples in FET test were analyzed for acute or chronic toxicity in Danio rerio embryos. Based on the obtained results, even when estrogenic activity is present in surface water, the contaminants mixture can cause toxic effects in non-target organisms. Besides this, the widespread presence of these chemicals highlight the need for further studies in order to understand the harmfulness of these contaminants to aquatic organisms.

A poluição marinha por petróleo e seus derivados é uma preocupação crescente de caráter global. O litoral norte do estado de São Paulo é hoje caracterizado como a região mais altamente impactada por esses contaminantes de toda a costa Sul e Sudeste do país. Dentre as substâncias que compõem esses produtos estão os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (HPAs), como o fenantreno, que apresentam potencial de alterar o sistema endócrino de peixes, gerando desajustes hormonais de alto risco para o processo reprodutivo dos animais expostos. Com base nestes fatos, o presente trabalho buscou verificar efeitos do fenantreno como desregulador endócrino em juvenis de E. marginatus. Essa espécie se caracteriza pelo hermafroditismo protogínico, de modo que os juvenis costumam apresentar altas concentrações de esteroides gonadais, o que gera preocupação quanto os efeitos reprodutivos decorrentes de alterações no padrão de produção de esteroides, especialmente em uma espécie que já vem sofrendo declínios populacionais por conta da sobrepesca. A CL50 encontrada para juvenis de E. marginatus foi 1,51 mg⁄L. Em seguida, foi realizado um bioensaio subletal (96h) com quatro grupos experimentais (n=5) em duplicata: grupo controle; duas concentrações distintas de fenantreno (0,1 mg⁄L e 1 mg⁄L) e grupo exposto ao veículo de diluição (0,004% de etanol). Foram dosadas as concentrações de 17β-estradiol (E2), testosterona (T) e 11-cetotestosterona (11-KT) plasmáticos por ELISA. Gônadas, fígado e baço foram processados para análise histológica. Foi conduzido bioensaio in vitro com incubação de fragmentos gonadais sob ação de fenantreno (50μM) ou etanol. Os níveis dos mesmos esteroides também foram dosados por ELISA. A exposição in vivo ao fenantreno resultou em aumento na área dos hepatócitos, bem como no número de centro melanomacrofágicos e hemossiderose no baço. O etanol induziu efeitos similares no baço. Os níveis de E2 e T não se alteraram no plasma ou no meio de incubação in vitro. O fenantreno reduziu a concentração de 11-KT in vitro e in vivo. No plasma, o etanol também causou esse decréscimo. Considerando a importância do 11-KT no desenvolvimento dos ovários em teleósteos, o fenantreno parece causar desregulação da esteroidogênese em juvenis de E. marginatus, possivelmente gerando disfunções durante a inversão sexual / Marine pollution by crude oil and its residual products is a growing global concern. The Northern coast of São Paulo is characterized as the highly impacted area by these contaminants through Brazil\'s South and Southeast coast. Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH), such as phenanthrene, are the main crude oil components and have a significant toxic potential to biota, acting as endocrine disruptors (ED) and negatively impacting reproduction. This study aimed to investigate the effects of phenanthrene as ED on gonadal steroidogenesis in E. marginatus juveniles. As a hermaphrodite protogynous species, E. marginatus juveniles maintain high levels of plasma steroids as substrates for sex inversion, which causes concern about reproductive effects of disruptions in steroid production patterns, especially in an overfished species. LD50 to E. marginatus exposed to phenanthrene was established in 1.51 mg⁄L. An in vivo sublethal exposure (96 h) to phenanthrene was carried out at two concentrations (0.1mg⁄L and 1 mg⁄L); exposure to the vehicle (ethanol) was also performed. Plasma levels of 17β-estradiol (E2), testosterone (T) and 11-ketotestosterone (11-KT) were measured by ELISA. Gonads, liver and spleen were processed for histological analysis. In an in vitro bioassay, gonad fragments were incubated with phenanthrene (50μM) or ethanol. Steroid levels in the culture media were also measured by ELISA. The in vivo exposure to phenanthrene triggered an increase of the area of the hepatocytes, increased number of melanomacrophagic centers and hemosiderosis in the spleen. Ethanol also induced similar effects on spleen. E2 and T levels did not change neither in plasma nor in vitro media. Phenanthrene sharply reduced 11-KT levels in vitro and in vivo. In plasma, ethanol also decreased 11-KT levels. Considering the importance of 11-KT in fish developing ovaries, phenanthrene seems to disrupt steroidogenesis in juvenile grouper, possibly being able to cause dysfunctions during sex change

O objetivo deste trabalho foi avaliar a liberação de Bisfenol A (BPA) de sistemas adesivos resinosos ortodônticos in vitro e in vivo. No estudo in vitro foram testadas 5 marcas comerciais de sistemas adesivos resinosos ortodônticos (Eagle Spectrum, Enlight, Light Bond, Mono Lok II e Transbond XT). Por meio da simulação de exposição intraoral, os corpos de prova foram imersos numa solução água/etanol e a liberação de BPA foi medida nos tempos de 30 minutos, 24 horas, 1 dia, 1 semana e 1 mês. No estudo in vivo utilizou-se amostra composta por 20 pacientes com indicação para tratamento ortodôntico com aparelhos fixos. Foram coletadas amostras de saliva em 5 tempos: antes, 30 minutos, 24 horas, 1 dia, 1 semana e 1 mês após a colagem dos bráquetes e as de urina em 4 tempos: antes, 1 dia, 1 semana e 1 mês após a colagem. Todos os compósitos avaliados liberaram pequena quantidade de BPA, sendo que o compósito Enlight-ORMCOR foi o que apresentou maior liberação,1020 ng/g no tempo de 1 mês. Os maiores níveis de BPA na saliva, foram encontrados no tempo de 30 minutos (1,0445 ng/mL) e na urina, 24 horas (5,035 ng/mL) após a colagem dos bráquetes. Mesmo que as quantidades de BPA liberadas fossem pequenas, houve diferença significativa quando esses valores foram comparados com os níveis iniciais, sugerindo aumento da quantidade de BPA no organismo com a colagem dos bráquetes ortodônticos. Como a literatura especializada têm destacado os potenciais tóxicos do BPA e têm sugerido alterações celulares \"com baixas\" doses, mais estudos são necessários para se chegar a um consenso no sentido de propiciar segurança no uso desses materiais. / The purpose of this study was measure the release of Bisphenol A (BPA) from the orthodontic resinous adhesive systems in vitro and in vivo. The study was divided into two stages: At in vitro study, five trademarks of Resinous Adhesive Systems (Eagle Spectrum, Enlight, Light Bond, Mono Lok II and Transbond XT) was tested. The samples were immersed in a water/ethanol solution simulating the intraoral exposition and the release of BPA was measured at times of 30 minutes, 24 hours, 1 day, 1 week and 1 month. At in vivo study, 20 patients with indication to fixed orthodontic appliances were used. Samples of saliva and urine were collected in these patients at previously determined time. To the saliva, it was collected 5 times ( before bonding the orthodontic brackets and 30 minutes, 24 hours, 1 day, 1 week and 1 month after this procedure); to the urine, it was collected 4 times ( before, 1 day, 1 week, 1 month, after bonding the orthodontic brackets). All the tested resinous adhesives released a small quantity of BPA, with peack at 1 month, with Enlight resinous presenting the highest level (1020 ng/g). The peack level in saliva (130445 ng/ml) and urine (5.035 ng/ml) were found in 30 minutes and 24 hours after the bonding of fixed appliances, respectively. However the quantities of released BPA are small which validate the security of the procedure. A significant difference was observed when these values were compared to the initial levels, suggesting a correlation of the increase of the quantity of BPA in the body and the bonding of the orthodontic appliances. As several studies have reported, the probable toxic effect of BPA and cellular changes in \"low doses\", more studies are necessary to reach a consensus. to provide security in the use of such materials.

Nas últimas décadas, a ocorrência de atividade estrogênica e interferentes endócrinos (IEs) no ambiente aquático têm se tornado uma crescente preocupação. Dentre as diversas substâncias classificadas como IEs, destacam-se os fármacos, produtos de higiene e cuidados pessoais, hormônios naturais e sintéticos, produtos químicos industriais, praguicidas e muitos outros compostos que atingem o ambiente aquático por meio de descargas de esgoto doméstico, industrial ou de escoamento agrícola. Os objetivos deste estudo foram determinar a atividade estrogênica em amostras de águas superficiais, e avaliar seus efeitos biológicos no desenvolvimento de embriões de Danio rerio, a fim de propor faixas baseadas em valores de desencadeamento de efeitos para categorizar a atividade estrogênica. As amostras ambientais também foram analisadas por cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas para identificar as substâncias que são suspeitas de causar alteração endócrina. Os compostos analisados foram: praguicidas, hormônios, triclosan, bisfenol A, octilfenol, nonilfenol, e a cafeína como indicador de atividade antrópica. A atividade estrogênica foi medida pelo ensaio Bioluminescent Yeast Estrogen (BLYES), que fornece os resultados em equivalente de 17β-estradiol (EEQ). No entanto, este ensaio não é capaz de prover informações sobre os efeitos adversos em organismos aquáticos. Para observação de possíveis efeitos na biota, os embriões foram expostos a amostras de águas superficiais com resultados acima de 0,1 EEQ no BLYES. Os ensaios foram realizados de acordo com a OECD No. 236 (2013), verificando efeitos agudos como: ausência de batimento cardíaco, não formação de somitos, não desprendimento da cauda, e embrião coagulado. Malformações embrionárias tais como: redução do tamanho do organismo, edema cardíaco e vitelínico, curvatura da coluna vertebral, também foram avaliadas. As informações obtidas pelo ensaio com embriões de Danio rerio foram adequadas para mostrar os efeitos da mistura de contaminantes em organismos não-alvo. A atividade estrogênica medida pelo BLYES ficou abaixo do limite de quantificação (0,1 EEQ) em 44,8% do total de 116 amostras analisadas, e a faixa de atividade estrogênica variou de 0,11 a 14,6 EEQ. Além disso, a presença de contaminantes mesmo que em concentrações baixas ressalta a necessidade de mais estudos para entender os efeitos dessas substâncias nos organismos aquáticos. / Over the last few decades, the occurrence of estrogenic activity and endocrine disrupting chemicals (EDCs) in aquatic environment has become a worldwide issue of increasing environmental concern. The EDCs have the ability to alter the endocrine system of organisms, and includes pharmaceuticals, personal care products, steroid hormones, industrial chemicals, pesticides and many other compounds. Such compounds are present in several industrial and domestic activities and reach the aquatic environment via wastewater discharges or agricultural runoff. The aim of this study was to determine the overall estrogenic activity of surface water, evaluate biological effects on fish embryos development, in order to propose concentrations range based on trigger value to categorize estrogenic activity. Environmental samples were also analyzed by liquid chromatography tandem mass spectrometry to identify substances that are suspected to be an endocrine disruptor. The analyzed compounds were: pesticides, hormones, triclosan, bisphenol A, octylphenol, nonylphenol, and caffeine as an indicative of anthropic activity. The estrogenic activity was measured by Bioluminescent Yeast Estrogen assay (BLYES), with the results expressed in 17β-estradiol equivalent quotient (EEQ). However, this assay is not able to provide information about adverse effects to aquatic organisms. In order to observe effects on aquatic organisms, organic extracts of surface water with results ≥ 0.1 EEQ in BLYES were tested in a bioassay using Danio rerio embryos. The methodology was conducted according OECD No. 236 and verified effects such as: lack of heart beat, lack of somites formation, non-detachment tail and coagulated embryo. Embryonic malformations were also evaluated, such as: reduction of organism size, edema and spine curvature, which are chronic effects. These effects probably are associated with contaminants mixtures. The obtained information by embryonic assay with Danio rerio was suitable to show the effects of contaminants mixture and was used to a categorization proposal of estrogenic activity. Estrogenic activity was below the limit of quantification (0.1 EEQ) in 44.8% of 116 analyzed samples, and range of estrogenic activity was from 0.11 to 14.6 EEQ. The tested samples in FET test were analyzed for acute or chronic toxicity in Danio rerio embryos. Based on the obtained results, even when estrogenic activity is present in surface water, the contaminants mixture can cause toxic effects in non-target organisms. Besides this, the widespread presence of these chemicals highlight the need for further studies in order to understand the harmfulness of these contaminants to aquatic organisms.