Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:38Z : No. of bitstreams: 1 000828456_20160101.pdf: 422063 bytes, checksum: 8476834ceb55ae5bce2c637566dd5def (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-04T10:26:22Z: 000828456_20160101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-04T10:28:15Z : No. of bitstreams: 1 000828456.pdf: 2122241 bytes, checksum: 622d6ebfa87551ddad978a95d5a84bc8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A endometriose é uma doença crônica multifatorial, inflamatória, estrógeno-dependente, que afeta entre 8 a 10% das mulheres em idade reprodutiva e caracterizada por tecido similar ao endométrio (glândula e estroma) fora da cavidade uterina. Embora a sua etiologia seja pouco conhecida, evidências recentes indicam que alterações epigenéticas estão envolvidas na sua patofisiologia. Esta hipótese é apoiada pelos achados envolvendo padrões alterados de metilação do DNA em genes específicos, bem como pelos níveis alterados de expressão de componentes da maquinaria epigenética nas lesões endometrióticas, quando comparadas ao endométrio eutópico da mesma paciente ou ao endométrio de mulheres que não apresentam a doença. Assim, um melhor entendimento do papel dos mecanismos epigenéticos na patogênese e progressão da endometriose tem se tornado necessário, podendo contribuir para a identificação de marcadores diagnósticos e para o delineamento de novas abordagens terapêuticas, que trariam benefícios e melhor qualidade de vida para as mulheres que apresentam esta condição. Neste contexto, este estudo buscou a identificação de genes diferencialmente metilados candidatos a biomarcadores na endometriose. Os resultados obtidos foram organizados em dois artigos científicos. O primeiro artigo teve como objetivo investigar o perfil diferencial de metilação do DNA na endometriose intestinal em comparação com amostras pareadas de endométrio eutópico da mesma paciente. Para isso, foi empregada uma abordagem em larga escala baseada em microarranjos contendo 27.800 ilhas CpG, que resultou na identificação de 546 genes hipermetilados e 871 genes hipometilados. A análise in silico para a classificação funcional dos genes diferencialmente metilados permitiu identificar conjuntos de genes com funções de fatores de transcrição, remodeladores da cromatina entre outras classes funcionais. Após a realização de uma ... / The endometriosis is a multi-factorial and chronic disease affecting 5% to 10% of women in reproductive age characterized by endometrium-like tissue (gland and stromma) outside uterine cavity. Although its etiology is poorly understood, recent evidences have indicated that epigenetic alterations are implicated in the pathophysiology. This hypothesis has been supported by findings surrounding altered DNA methylation pattern of specific genes, as well as by altered levels of expression of epigenetic machinery components in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium from the same patient or endometrium of women free of disease. Thus, a better understanding of the role of epigenetic mechanisms in the pathogenesis and progression of endometriosis has become necessary and may contribute to the identification of diagnostic markers and for designing new therapeutic approaches that could benefit and improve the quality of life of women with this condition. In this context, this study aimed to identify differentially methylated genes as candidate biomarkers in endometriosis. The results could be organized in two papers. The first study aimed to investigate the profile of differential DNA methylation in intestinal endometriosis compared to eutopic endometrium of paired samples from the same patient. For this, we carried out a large-scale approach based on microarray containing 27,800 CpG islands, resulting in the identification of 546 genes as hypermethylated and 871 genes as hipomethylated. In silico analysis for the functional classification of differentially methylated genes enabled us to identify sets of genes with functions of transcription factors, chromatin remodeling, besides other functional classes. After conducting a comparative assessment with data available in other large-scale studies of literature, it was possible to recognize recurrent alteratons evolving 227 hypermethylated and 322 hypomethylated ...

Endometriosis and breast cancer are sex hormone dependent diseases characterised by the local production of high levels of 17β-oestradiol. The relationship between prostaglandins and sex steroid hormones is one of the focal questions in endometriosis, breast cancer and other sex steroid hormone related disorders. Therefore, the main hypothesis was that the aldo-keto reductase (AKR) 1C isoenzymes are responsible for controlling the availability of 17β-oestradiol, progesterone and prostaglandins in the microenvironment of the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours. This was investigated using quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR) for measuring the gene expression of AKR1C1-3 enzymes, and prostaglandin E (1-4) and F receptors in the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours. This was then followed by investigating the role of one of the AKR1C enzymes - AKR1C3 - by inhibiting its catalysis using bimatoprost, followed by using PGE2 as one of the main candidates acting as a transcription factor for upregulating the expression of AKR1C3 which in turn upregulates the production of the local 17β-oestradiol. The gene expression of AKR1C1 was significantly higher in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium of endometriosis patients. However, there was no significant difference in the gene expression of AKR1C (1-3) enzymes in the surrounding adipose tissues of endometriotic lesions between patients with or without endometriosis. Also, there was no significant difference in the gene expression of AKR1C (1-3) enzymes in the breast adipose tissues of patients with breast tumours, regardless of the oestrogen or progesterone receptor status. The gene expression of prostaglandin E (EP) receptor subtype 3 was significantly higher in the endometriotic lesions compared to eutopic endometrium of endometriosis patients. In the omental adipose tissue, there was no significant difference in the gene expression of EP1-4 and FP receptors between endometriosis and non-endometriosis patients. In the breast adipose tissue, there was also no significant difference in the gene expression of EP1-4 and FP receptors in patients with breast cancer regardless of the oestrogen or progesterone receptor status. The inhibitory constant (Ki) of bimatoprost was determined using oestrone as a substrate: Ki = 2.9µM and αKi = 0.7µM. Bimatoprost also significantly inhibited the production of 17β-oestradiol and inhibited the production of 9α,11β PGF2 in a dose dependent manner in the human endometrial cells. The effect of PGE2 on the expression of AKR1C1 and AKR1C3 was assessed in the human endometrial cells. The EP4 receptor agonist, L-902688, increased the gene expression of AKR1C1 and AKR1C3. Despite gene expression elevation, L-902688 did not increase the production of 17β-oestradiol. In conclusion, the results were contradictory and highlighted the need for further investigation into the relationship between prostaglandins and sex steroid hormones in the microenvironment of the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours.

Submitted by Valquíria Barbieri (kikibarbi@hotmail.com) on 2018-04-18T21:53:49Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Joziane Agnoria da Silva Seidel.pdf: 1143253 bytes, checksum: 01e26fdc5f5bcaf7a1637db77e13ffed (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-04-27T17:34:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Joziane Agnoria da Silva Seidel.pdf: 1143253 bytes, checksum: 01e26fdc5f5bcaf7a1637db77e13ffed (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T17:34:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Joziane Agnoria da Silva Seidel.pdf: 1143253 bytes, checksum: 01e26fdc5f5bcaf7a1637db77e13ffed (MD5) Previous issue date: 2015-08-27 / CNPq / A endometriose é uma condição nosológica caracterizada pela presença de tecido funcional semelhante ao endométrio eutópico em locais como peritônio pélvico, ovários, septo reto-vaginal. Sua prevalência varia entre 30 a 50% nas mulheres inférteis. O quadro clínico inclui dispareunia profunda, dismenorreia incapacitante, dor pélvica crônica e infertilidade. A influência de genes envolvidos com o sistema imunológico e suas variantes têm sido investigadas quanto à suscetibilidade e evolução da endometriose. O gene antígeno leucocitário humano-G (HLA-G) pertence ao complexo de histocompatibilidade principal classe I, mapeado e 6p21 e contem o polimorfismo 14pb inserção/deleção (ins/del). O presente estudo objetiva identificar possível associação entre o polimorfismo 14pb ins/del no gene HLA-G e endometriose em mulheres de Mato Grosso, Brasil. O desenho epidemiológico é observacional do tipo caso-controle. Foram incluídas 349 mulheres (209 casos e 140 controles) com idades entre 16 a 50 anos, atendidas e diagnosticadas através de videolaparoscopia em serviço de referência em reprodução humana de Mato Grosso. Entrevistas semipadronizadas e coleta de amostras de sangue periférico foram realizadas. Obtiveram-se DNA através do método com utilização de sais, foi realizada reação em cadeia de polimerase utilizando iniciadores específicos, os fragmentos foram visualizados em gel de poliacrilamida 10%. As frequências genotípicas e alélicas do polimorfismo 14pb ins/del do gene HLA-G entre casos e controles mais observadas foram os genótipos heterozigotos ins/del 111 (53,1%) e 69 (49,3%) e alelos del 249 (59,6%), 151 (54,0%), respectivamente. Em relação ao estadiamento, as frequências genotípicas ins/del no grau I foram 28 (58,3%); grau II, 36 (46,2%); grau III, 21 (48,8%) e grau IV, 26 (65,0%). As frequências alélicas del no grau I foram 54 (56,3%); grau II, 98 (62,8%); grau III, 49 (57,0%) e grau IV, 48 (60,0%). Não houve diferença estatisticamente significante em nenhuma variável analisada. Quanto a avaliação do polimorfismo 14pb ins/del do gene HLA-G nas variáveis clínicas entre casos com ou sem infertilidade, a maior frequência obtida foram os genótipos heterozigotos ins/del em 88 (55,0%) das pacientes com infertilidade e em 23 (47,0%) das pacientes sem infertilidade. O alelo del foi observado nas inférteis com frequência de 186 (58,1%) e nas mulheres sem infertilidade apresentou frequência de 63 (51,7%). Analisando as mulheres com xiv endometriose e que relataram ter tido abortamento ou não, observou-se que os genótipos heterozigotos foram mais frequentes. Nas mulheres com abortamento a frequência foi de ins/del 13 (48,1%) e sem abortamento ins/del 98 (53,8%). Os resultados não foram estatisticamente significantes em todas as variáveis clínicas analisadas p>0,05. Nosso estudo verificou que o polimorfismo 14pb ins/del no gene HLA-G não está associado à endometriose em mulheres de Mato Grosso – Brasil. As frequências genotípicas e alélicas não estão associadas com a doença ou com o estadiamento da mesma, as frequências genotípicas também não estão associadas com infertilidade e com abortamento. / Endometriosis is a nosological condition characterized by the presence of functional tissue similar to eutopic endometrium in pelvic peritoneum, ovaries, rectovaginal septum. Its prevalence in infertile women varies between 30 and 50%. The clinical manifestations are variable, including deep dyspareunia, disabling dysmenorrhea, chronic pelvic pain and infertility. The influence of genes involved in the immune system and its variants have been investigated for their susceptibility and progression of endometriosis. The gene of human leukocyte antigen-G (HLA-G) belongs to the main histocompatibility complex class I. It´s mapped on 6p21, has eight exons and seven introns being translated region where polymorphism is present 14pb insertion/deletion (ins/del). This study aims to identify possible association between the polymorphism 14pb ins/del in HLA-G gene and endometriosis in women of Mato Grosso-Brazil. The epidemiological design is observational case-control type. 349 women were included (209 cases and 140 controls) aged 16-50 years, seen and diagnosed by laparoscopy in a human reproduction center of Mato Grosso. Interviews and collection of peripheral blood samples were performed for each participant. DNA was extracted by salting out method, polymerase chain reaction using specific primers, was performed and the fragments were visualized on 10% polyacrylamide gel. The genotypic and allelic frequencies of polymorphism 14pb ins/del HLA-G gene between cases and controls were observed more heterozygous genotypes ins/del 111 (53.1%) and 69 (49.3%) and alleles del 249 (59, 6%), 151 (54.0%), respectively. As regards staging, the genotypic frequencies ins/del grade I were 28 (58.3%); grade II, 36 (46.2%); grade III, 21 (48.8%) and grade IV, 26 (65.0%). The allelic frequencies del grade I were 54 (56.3%); grade II, 98 (62.8%); grade III, 49 (57.0%) and grade IV, 48 (60.0%). There was no significant difference in any variable analyzed. As the evaluation of polymorphisms 14pb ins/del HLA-G gene in the clinical variables between cases with or without infertility, most often heterozygous genotypes obtained were ins/del in 88 (55.0%) patients with infertility and 23 (47.0%) patients without infertility. The allele del was observed in infertile woman with a frequency of 186 (58.1%) and in no infertile women showed frequency of 63 (51.7%). Analyzing women with endometriosis and who reported abortion or not, it was noted that heterozygous genotypes were more frequent. In women with abortion was the frequency of ins/del 13 (48.1%) and without abortion ins/del 98 (53.8%). The results were not statistically significant in all clinical variables p>0.5. Our study found that the polymorphism 14pb ins/del in HLA-G gene did not influence the susceptibility to endometriosis in women Mato Grosso - Brazil. The genotypic and allelic frequencies are not associated with the staging and/or severity of the disease, infertility and miscarriages.

L’endométriose est une pathologie chronique qui provoque des douleurs pelviennes et une infertilité. On décrit trois phénotypes d’endométriose :l’endométriose péritonéale superficielle, les kystes ovariens d’endométriose (endométriomes) et l’endométriose profonde.L’examen standard pour le diagnostic de l’endométriose est, encore aujourd’hui, la laparoscopie. Nous avons étudié, de façon prospective, l’utilité d’un examen non invasif, la tomographie par émission de positrons (PET), chez les patientes avec suspicion d’endométriose. Nous n’avons pas mis en évidence d’hyperactivité métabolique sur les images de PET pré opératoires, après injection de déoxyglucose marqué au 18F (18FDG), des lésions d’endométriose ayant été confirmées par laparoscopie. Nous avons réalisé, dans un second temps, la même étude après injection d’un analogue de la somatostatine, le DOTATATE, marqué au 68Ga, qui montre une avidité pour les récepteurs à la somatostatine (SSTR) de type 2. Dans cette dernière étude, seules les lésions d’endométriose profonde se sont révélées hyperactives sur les images pré opératoires de PET. Nous avons ensuite réalisé une étude immunohistochimique rétrospective sur différents échantillons d’endométriose superficielle, d’endométriomes et d’endométriose profonde. Nos résultats ont confirmé l’expression de SSTR de type 1 et 5 par les cellules épithéliales des trois phénotypes d’endométriose. Par contre, seules les lésions d’endométriose profonde exprimaient les SSTR de type 2.Le traitement chirurgical des endométriomes et de l’endométriose superficielle est bien codifié. Par contre, la chirurgie de l’endométriose profonde reste au cœur des débats dans la littérature. Nous avons évalué notre aptitude à appliquer les techniques de chirurgie mini-invasive aux procédures complexes telles que la résection des nodules d’endométriose profonde du septum recto-vaginal (NEPSRV). Nous avons évalué la faisabilité de la laparoscopie avec assistance robotique pour une autre procédure complexe :la dissection des ganglions para-aortiques dans le cadre des cancers du col utérin localement avancés. Nous l’avons jugée faisable et sûre pour les patientes. En l’absence de bénéfice démontré de la laparoscopie avec assistance robotique sur la laparoscopie conventionnelle pour le traitement des NEPSRV, nous avons décidé d’évaluer une nouvelle stratégie opératoire mini-invasive de résection des NEPSRV. Nous avons réalisé une analyse des 10 premières patientes opérées selon cette stratégie et avons montré une amélioration significative des symptômes et de la qualité de vie des patientes. Nous avons également étudié la morbidité post opératoire. Nous avons finalement étudié l’apport de la laparoscopie guidée par la fluorescence au traitement des NEPSRV et observé des résultats prometteurs.A l’avenir, les lésions symptomatiques d’endométriose profonde exprimant les SSTR2 pourraient être sélectionnées à l’aide d’un PET au 68Ga-DOTATATE afin d’être traitées, dans le cadre d’essais cliniques, par des analogues de la somatostatine. Ces thérapies ciblées permettaient, dans ces cas, d’éviter la chirurgie. Notre stratégie opératoire mini-invasive pourraient dès lors être appliquée aux lésions n’exprimant pas les SSTR2. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Introdução: A endometriose é uma doença ginecológica comum, caracterizada pela presença de tecido endometrial glandular e/ou estromal fora dos limites uterinos. Acomete principalmente as mulheres na idade reprodutiva e representa causa freqüente de dor pélvica crônica e infertilidade. O diagnóstico representa um dos maiores problemas no contexto clínico desta doença, sendo o mapeamento dos focos de extrema importância na escolha da modalidade terapêutica e no prognóstico da paciente. Este estudo teve por finalidade avaliar a capacidade da ressonância magnética (RM) da pelve para o diagnóstico pré-operatório da endometriose nos ovários, região retrocervical, reto-sigmóide, bexiga, ureteres e vagina em correlação aos achados de laparoscopia e de anatomia patológica, além de descrever os aspectos de imagem da doença nestes sítios à RM. Métodos: O presente estudo, transversal, observacional e prospectivo, efetuado em 92 pacientes do sexo feminino com suspeita clínica de endometriose profunda, foi realizado de novembro de 2005 a julho de 2007. As pacientes foram procedentes do Serviço de Ambulatório de Endometriose do Departamento de Ginecologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP), e tinham idades entre 20 e 52 anos (média de 33 anos). As imagens de RM foram analisadas independentemente por dois radiologistas experientes e o diagnóstico estabelecido através de consenso entre eles. Endometriose foi diagnosticada quando foram identificados cistos ovarianos com elevado sinal em T1 e baixo sinal em T2 (shading) ou nódulos peritoniais de baixo sinal em T2 localizados na região retrocervical, reto-sigmóide, bexiga, ureteres e vagina. Os achados da RM foram comparados com aqueles obtidos na laparoscopia e anatomia patológica. Foram avaliados os valores de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e acurácia da RM para o diagnóstico da endometriose. Resultados: Endometriose ovariana e profunda foi confirmada através da anatomia patológica em 77 das 92 pacientes inclusas neste estudo. Em 15 pacientes foram observadas somente lesões peritoniais superficiais. A sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e acurácia da RM para o diagnóstico de endometriose nos diversos sítios avaliados foi: ovários, 100%, 88,9%, 93,3%, 100% e 95,7%; região retrocervical, 89,4%, 92,3%, 96,7%, 77,4% e 90,2%; reto-sigmóide, 86%, 92,9%, 93,5%, 84,8% e 89,1%; bexiga, 23,1%, 100%, 100%, 88,8% e 89,1%; ureteres, 50%, 100%, 100%, 95,5% e 95,7% e vagina, 72,7%, 100%, 100%, 96,4% e 96,7%. Conclusão: A RM demonstrou elevada acurácia no diagnóstico pré-operatório da endometriose nos ovários, região retrocervical, reto-sigmóide, bexiga, ureteres e vagina. Os achados mais representativos da doença à RM são os cistos ovarianos de conteúdo hemorrágico com elevado sinal em T1 e baixo sinal em T2 (shading) e os nódulos peritoniais de baixo sinal em T2 em localizações específicas / Introduction: Endometriosis is a prevalent gynecological disease characterized by the presence of endometrial glandular and/or stromal tissue outside the uterine boundaries. This disorder causes infertility and it is the most common cause of chronic pelvic pain affecting women in the reproductive age. Appropriate clinical diagnosis and pelvic imaging information regarding the spread and the infiltration of the lesions remains a major diagnostic challenge. The objectives of this study were to describe magnetic resonance imaging (MRI) aspects of endometriosis in the most commonly affect sites and to evaluate the accuracy of the pre-operative MRI findings with those obtained at surgery and pathology. Methods: This prospective, transversal and observational study included 92 women with clinical suspicion of deeply infiltrative endometriosis and was carried out between November 2005 and July 2007. Women aged 20 and 52 (mean 33) years old were followed at the Serviço de Ambulatório de Endometriose do Departamento de Ginecologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP). Two experienced radiologists evaluated the magnetic resonance (MR) images independently and provided consensus reading. Endometriosis was defined as ovarian cysts with high signal intensity on T1-weighted images and low signal intensity on T2 (shading) and nodule or masses that appeared as hypointense areas on T2-weighted images in the following locations: retrocervical space, rectosigmoid, bladder, ureters and vagina. MR findings were compared with those obtained at laparoscopy and pathology. Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy of MRI for prediction of deep pelvic endometriosis were assessed. Results: Endometriomas and deep infiltrative endometriosis were confirmed at histopathology in 77 (83.7%) out of 92 patients. In 15 women there were only superficial peritoneal lesions. Sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy of MRI for prediction of deep pelvic endometriosis in the specific sites were: endometriomas (100%, 88.9%, 93.3%, 100%, 95.7%); retrocervical (89.4%, 92.3%, 96.7%, 77.4%, 90.2%); rectosigmoid (86.0%, 92.9%, 93.5%, 84.8%, 89.1%); bladder (23.1%, 100%, 100%, 88.8%, 89.1%); ureters (50.0%, 100%, 100%, 95.5%, 95.7%) and vagina (72.7%, 100%, 100%, 96.4%, 96.7%).Conclusions: Magnetic resonance imaging demonstrates high accuracy in prediction of deep pelvic endometriosis in the ovaries, retrocervical region, rectosigmoid, bladder, ureters and vagina. The most characteristic findings representatives of deep pelvic endometriosis are ovarian cysts which appeared with elevated signal in T1 and low signal in T2 (shading) and peritoneal nodes situated in the specifically described locations outlined by low signal in T2

Orientador: Cláudia Apaecida Rainho / Banca: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Erika Cristina Pavarino / Banca: Adriana Camargo Ferrasi / Banca: Sandro José Conde / Resumo: A endometriose é uma doença crônica multifatorial, inflamatória, estrógeno-dependente, que afeta entre 8 a 10% das mulheres em idade reprodutiva e caracterizada por tecido similar ao endométrio (glândula e estroma) fora da cavidade uterina. Embora a sua etiologia seja pouco conhecida, evidências recentes indicam que alterações epigenéticas estão envolvidas na sua patofisiologia. Esta hipótese é apoiada pelos achados envolvendo padrões alterados de metilação do DNA em genes específicos, bem como pelos níveis alterados de expressão de componentes da maquinaria epigenética nas lesões endometrióticas, quando comparadas ao endométrio eutópico da mesma paciente ou ao endométrio de mulheres que não apresentam a doença. Assim, um melhor entendimento do papel dos mecanismos epigenéticos na patogênese e progressão da endometriose tem se tornado necessário, podendo contribuir para a identificação de marcadores diagnósticos e para o delineamento de novas abordagens terapêuticas, que trariam benefícios e melhor qualidade de vida para as mulheres que apresentam esta condição. Neste contexto, este estudo buscou a identificação de genes diferencialmente metilados candidatos a biomarcadores na endometriose. Os resultados obtidos foram organizados em dois artigos científicos. O primeiro artigo teve como objetivo investigar o perfil diferencial de metilação do DNA na endometriose intestinal em comparação com amostras pareadas de endométrio eutópico da mesma paciente. Para isso, foi empregada uma abordagem em larga escala baseada em microarranjos contendo 27.800 ilhas CpG, que resultou na identificação de 546 genes hipermetilados e 871 genes hipometilados. A análise in silico para a classificação funcional dos genes diferencialmente metilados permitiu identificar conjuntos de genes com funções de fatores de transcrição, remodeladores da cromatina entre outras classes funcionais. Após a realização de uma ... / Abstract: The endometriosis is a multi-factorial and chronic disease affecting 5% to 10% of women in reproductive age characterized by endometrium-like tissue (gland and stromma) outside uterine cavity. Although its etiology is poorly understood, recent evidences have indicated that epigenetic alterations are implicated in the pathophysiology. This hypothesis has been supported by findings surrounding altered DNA methylation pattern of specific genes, as well as by altered levels of expression of epigenetic machinery components in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium from the same patient or endometrium of women free of disease. Thus, a better understanding of the role of epigenetic mechanisms in the pathogenesis and progression of endometriosis has become necessary and may contribute to the identification of diagnostic markers and for designing new therapeutic approaches that could benefit and improve the quality of life of women with this condition. In this context, this study aimed to identify differentially methylated genes as candidate biomarkers in endometriosis. The results could be organized in two papers. The first study aimed to investigate the profile of differential DNA methylation in intestinal endometriosis compared to eutopic endometrium of paired samples from the same patient. For this, we carried out a large-scale approach based on microarray containing 27,800 CpG islands, resulting in the identification of 546 genes as hypermethylated and 871 genes as hipomethylated. In silico analysis for the functional classification of differentially methylated genes enabled us to identify sets of genes with functions of transcription factors, chromatin remodeling, besides other functional classes. After conducting a comparative assessment with data available in other large-scale studies of literature, it was possible to recognize recurrent alteratons evolving 227 hypermethylated and 322 hypomethylated ... / Doutor

A endometriose é uma doença benigna que causa dor e infertilidade. As disfunções sexuais são frequentes, especialmente a dispareunia de profundidade, interferindo na qualidade de vida e particularmente na vida conjugal dessas pacientes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a satisfação sexual de pacientes com endometriose infiltrativa profunda. Foram analisadas cinquenta e sete pacientes com diagnóstico de endometriose infiltrativa profunda acompanhadas no Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE) de julho de 2010 a dezembro de 2011. O grupo controle incluiu 38 pacientes saudáveis do ambulatório de planejamento familiar do HUPE. Foi aplicado o Female Sexual Function Index (FSFI), questionário validado para avaliação funcional da atividade sexual. Em relação ao resultados não houve diferença estatisticamente significativa no escore total do FSFI entre os dois grupos. No domínio dor, as pacientes com endometriose apresentaram escores significativamente menores, ou seja, maior intensidade de dor, do que o grupo controle. O resultado deste estudo sugere que as pacientes com endometriose apresentam um comprometimento do domínio dor, sem prejuízo potencial da função sexual global. / Endometriosis is a benign condition that causes pain and infertility. Sexual dysfunction, particularly deep dyspareunia, is common in patients with endometriosis, and interferes with quality of life and sexual satisfaction. The aim of this study is to assess sexual satisfaction in women with deep infiltrating endometriosis. Fifty-seven women diagnosed with deep infiltrating endometriosis were selected from the endometriosis sector of the Hospital Universitário Pedro Ernesto (HUPE) between July 2010 and December 2011. The control group was consisted of 38 healthy women selected at the HUPE family planning clinic. Full-scale and individual domain scores on the Female Sexual Function Index (FSFI), a validated questionnaire for functional assessment of sexual activity in women was used. There were no statistically significant between-group differences in overall (full-scale) FSFI scores. Patients with endometriosis scored significantly lower than controls in the Pain domain, which means, more pain than control group . These findings suggest that women with endometriosis had a more negative impact in the Pain domain of the FSFI, but with no effect on overall sexual function.

Introdução. A fertilização in vitro (FIV) é uma opção de tratamento para pacientes inférteis com endometriose (EDT), e a escolha dos embriões a serem transferidos é um passo fundamental para o sucesso do processo. A endometriose é capaz de interferir em todas as etapas do processo de FIV, a qual pode estar associada à foliculogênese anormal, a defeitos de implantação e à qualidade oocitária inferior, bem como a alterações na receptividade endometrial. Em estágios mais severos da doença, pode-se observar um importante substrato anatômico associado. O Escore de Graduação Embrionário (GES) é uma classificação baseada numa combinação da morfologia pronuclear, clivagem precoce e morfologia no terceiro dia após a fertilização que permite avaliar quais embriões terão maiores chances de implantação/gestação. Ainda não há, na literatura, relatos de comparação do GES com pacientes portadoras de endometriose. Objetivo. Determinar o escore de graduação embrionário médio entre as pacientes inférteis com endometriose submetidas à fertilização in vitro e comparar com pacientes inférteis sem endometriose. Métodos. Foram comparados, através de uma coorte prospectiva, 706 embriões (162 pacientes), sendo 472 embriões pertencentes às pacientes do grupo controle sem endometriose (n=109; infertilidade tubária ou por fator masculino) e 234 embriões de pacientes com endometriose (n=53). Todas as pacientes foram submetidas à fertilização in vitro, utilizando o protocolo de indução da ovulação com antagonista do GnRH. Todos os embriões foram transferidos no dia 3 após fertilização. O escore de graduação embrionário (GES) foi realizado através de avaliação de todos os embriões por 3 vezes, nos tempos: 16 – 18 horas, 25 – 27 horas e 64 – 67 horas, sempre pelo mesmo embriologista. Para pontuação do GES, avaliaram-se: citoplasma, morfologia pronuclear, fragmentação, alinhamento nucleolar, posição do corpo polar, número de blastômeros/morfologia e simetria. Consideramos escore médio a soma dos escores embrionários dividida pelo número de embriões obtidos; e o escore embrionário médio transferido como a soma dos GES dividido pelo número de embriões transferidos. Foi considerado estatisticamente significativo quando P < 0,05 utilizando-se os testes t Student e qui-quadrado. Resultados. Os grupos foram comparados quanto à idade, índice de massa corporal, perfil obstétrico (infertilidade primária, secundária, paridade, abortamentos) e perfil hormonal, não sendo encontrada diferença estatisticamente significativa. Apesar de o número de embriões transferidos ser maior em pacientes com endometriose quando comparadas ao grupo controle (2,38 ± 0,66 versus 2,15 ± 0,54, respectivamente; P=0,001), não se observou diferença no escore de graduação embrionário médio entre os grupos de estudo e controle (71 ± 19,8 versus 71,9 ± 23,5, respectivamente; P=0,881). Quanto às taxas de fertilização, houve semelhança entre os grupos, correspondendo a 61% nas pacientes com endometriose e 59% naquelas do grupo controle (P=0,511). Também não houve diferença estatisticamente significativa quando os grupos foram comparados quanto às taxas de implantação (21% versus 22%, respectivamente; P=0,989) e gestação (26,4% versus 28,4%, respectivamente; P=0,989). Para estes parâmetros de avaliação, os diferentes graus de severidade da endometriose não interferiram significativamente nos resultados. Conclusão. A presença de endometriose não impactou significativamente na qualidade embrionária. Da mesma forma, não foram observadas diferenças nos desfechos reprodutivos avaliados entre pacientes inférteis com e sem endometriose. / Objective. To determine embryo quality (Mean Graduated Embryo Score, MGES) in infertile patients with endometriosis submitted to in vitro fertilization (IVF-ET). Design. Prospective cohort. Setting. Private Human Reproduction Center. Patients. We compared 706 embryos (162 patients) divided in two groups: 472 embryos derived from patients without endometriosis (n=109, infertile patients with tubal or male infertility) and 234 embryos from patients in study group (n=53, infertile patients with endometriosis). Interventions. All patients were submitted to IVF using an estradiol-antagonist-recombinant FSH protocol for ovarian stimulation. MGES was performed evaluating all embryos three times: 16 – 18 hours, 25 – 27 hours and 64 – 67 hours, by the same embryologist. Embryo evaluation was performed according to the following parameters: fragmentation, nucleolar alignment, polar body apposition, blastomere number/morphology and symmetry. Main Outcome Measures. MGES scores, fertilization, implantation and pregnancy rates. Results. Groups were compared for age, body mass index (BMI), past ob/gyn characteristics (primary or secondary infertility, parity, abortions) and hormonal profile. Although the number of embryos transferred was greater in patients with endometriosis than in the control group (2.38 ± 0.66 versus 2.15 ± 0.54, respectively; P = 0.001), the MGES was similar in both groups (71 ± 19.8 versus 71.9 ± 23.5, respectively; P = 0.881). Likewise, fertilization rate was similar in groups, 61% in patients with endometriosis and 59% in control group (P=0,511). Moreover, no significant differences were found in implantation rates (21% versus 22%, respectively [P=0,989]) and in pregnancy rates (26,4% versus 28,4%, respectively [P=0,989]). The severity of endometriosis did not influence the results. Conclusions. Embryo quality measured by MGES was not influenced by endometriosis. Likewise, the reproductive outcomes evaluated were similar between infertile patients with and without endometriosis.

O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e o turnover da melatonina estão associados à dor pélvica crônica (DPC) associada à endometriose. Nós realizamos este estudo para entender se a secreção de melatonina, avaliada pela 6-sulfatoximelatonina urinária (aMT6-s), está correlacionada com o controle do BDNF a outros fatores como fator de necrose tumoral (TNF), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), cortisol ou nível de dor. Foram analisadas vinte mulheres com idade entre 18 e 45 anos com dor pélvica crônica e diagnóstico de endometriose por videolaparoscopia. Diferenças nos padrões temporais de aMT6-s e cortisol salivar de acordo com os intervalos de tempo no dia sugerem que ambos apresentaram padrões fisiológicos de flutuação. A dispersão da média da aMT6-s obtida a cada 6 h foi plotada em uma curva de regressão polinomial correspondendo por 43% da variância no perfil de excreção. Aumentos de 1 ng/mL no BDNF sérico levaram a uma modificação média da aMT6-s de -14,32 [intervalo de confiança (IC) 95% (-24,09 a -4,59)] ou vice-versa, enquanto aumentos de 1 ng/mL no TNF sérico levaram a um aumento da excreção média de aMT6-s em 1,32 (IC 95% 0,65 a 1,98). aMT6-s não estava associada com IL-6, IL-10 ou nível de dor. Portanto, nós encontramos que o BDNF sérico está inversamente correlacionado com a aMT6-s, enquanto os níveis de TNF sérico estão positivamente correlacionados com aMT6-s. Estes achados demonstraram que a interação e as relações entre BDNF e secreção de melatonina na endometriose são complexas e que estudos longitudinais subsequentes são necessários para elucidar como estes sistemas interagem a longo prazo. / The brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and melatonin turnover has been involved in the endometriosis-associated chronic pelvic pain (EACPP). We run this study to understand whether melatonin secretion, indexed by urinary 6-sulfatoxymelatonin (aMT6-s), is correlated with BDNF controlling to other factors such as tumor necrosis factor (TNF), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10), cortisol or pain index. Twenty females, aged 18 to 45, with chronic pelvic pain and endometriosis diagnoses by videolaparoscopy, were analyzed. Differences in the temporal patterns of aMT6-s and salivary cortisol according to time-of-day intervals suggest that both presented physiological patterns of flotation. The dispersion of mean aMT6-s obtained every 6 h fitted a quadratic curve of polynomial regression accounting for 43% of the variance in the excretion profile. Increases of 1 ng/mL in serum BDNF led to a mean change in aMT6-s of -14.34 [confidence interval (CI) 95% (-24.09 to -4.59)] or vice versa, while increases of 1 ng/mL in serum TNF led to an increment of the mean aMT6-s excretion by 1.32 (CI 95%, 0.65 to 1.98). aMT6-s was not associated with interleukin (IL-6), interleukin (IL-10) or pain index. Therefore, we found that serum BDNF is inversely correlated with aMT6-s, while levels of serum TNF are positively correlated with aMT6-s. These findings demonstrated that the interaction and relations of BDNF and melatonin secretion in endometriosis are complex and that further longitudinal studies are needed to elucidate how these systems interact over a longer term.

Introdução: A taxa da prevalência da infertilidade em casais com idade reprodutiva atinge 8-10%. A fim de tentar contornar esse problema, esses casais optam pela reprodução assistida. Em muitos dos casos, os resultados das técnicas de reprodução assistida (TRA) são bem sucedidos ao realizarem a fertilização in vitro (FIV), em outros não são satisfatórios ou ocorrem gestações múltiplas que aumenta o risco de morbidade a essas gestantes. Diante deste quadro, estudam-se formas de aperfeiçoar as TRA no que se refere à seleção do embrião. O hormônio anti-Mülleriano (AMH) já desempenha este papel ao refletir a reserva ovariana na rotina das clínicas de FIV. Os antígenos leucocitários humanos-G solúveis (sHLA-G) vêm sendo investigado no seu papel em refletir a qualidade embrionária. A existência da associação entre as concentrações de HLA-G mensuradas em fluido folicular e a qualidade embrionária avaliada pelo critério de pontuação Graduated Embryo Score (GES) poderia caracterizar o sHLA-G como um possível biomarcador de qualidade embrionária. Objetivos: Investigar a associação entre as concentrações do sHLA-G no fluido folicular (FF) e a pontuação dos embriões gerados avaliados pelo critério GES em ciclos de mulheres submetidas à fertilização in vitro (FIV). Métodos: Um estudo transversal foi realizado. Avaliaram-se setenta e três mulheres com idade ≤ 39 anos, submetidas à FIV pelas seguintes causas: fator tubário, fator masculino e/ou endometriose, com ambos os ovários e níveis hormonais de TSH, FSH e PRL dentro dos valores de referência. Não foram elegíveis ao estudo mulheres com síndrome de hiperestimulação ovariana no ciclo avaliado, com doença auto-imune, com síndrome dos ovários policísticos, com luteinização precoce e/ou endometrioma. Realizou-se a mensuração de sHLA-G por ELISA no FF de um pool de folículos puncionados das mulheres submetidas à indução de ovulação para a FIV. Os embriões obtidos após fertilização foram classificados segundo o critério GES. As outras variáveis necessárias foram transcritas dos prontuários das pacientes participantes no estudo. Resultados: A associação entre as concentrações de sHLA-G e o escore médio dos embriões gerados não foi observada. Observou-se uma sensibilidade aumentada do teste ELISA, quando comprada aos estudos da literatura, com detecção em mais de 98% das amostras analisadas. Foi encontrada uma associação significativa entre o AMH e a idade (r=-0,38; p=0,003), entre AMH e total de oócitos ( r=0,53; p<0,05) e idade e total de oócitos (r= -0,31, p=0,009). A mensuração de sHLA-G em mulheres com endometriose e sem endometriose (fator tubário e masculino) não mostrou diferença significativa (p=0,57). Conclusão: Não houve associação entre a qualidade embrionária e dosagens de sHLA-G. Diante destes resultados, ainda está controverso o uso de sHLA-G mensurado em FF como marcador prognóstico de qualidade de embrião embrionária avaliada pelo critério GES. Os resultados encontrados referentes ao AMH corroboram com a literatura. / Background: The prevalence of infertility rate in the couples in reproductive age reaches 8-10%. In order to solve this problem, these couples opt for assisted reproduction. In many cases, the results of assisted reproduction techniques (ART) are successful in performing the in vitro fertilization (IVF), while in others they are not satisfactory or occur multiple pregnancy that increase morbidity risk to these pregnant women. In this context, several studies attempt new forms for to improve the ART in the selection the embryo. The anti-Müllerian hormone (AMH) already plays this role to reflect the ovarian reserve in IVF clinics routine. Soluble human leukocyte antigen-G (sHLA-G) has been investigated its role to reflect the embryo quality. The existence of the association between the sHLA-G concentrations measured in follicular fluid and embryo quality based on Graduated Embryo Score (GES) criteria could characterize the sHLA-G as a possible biomarker of embryo quality. Objectives: Our study investigated the association between the sHLA-G concentrations in follicular fluid (FF) and the score of embryo evaluated by Graduated Embryo Score (GES) criteria in women cycles treated by in vitro fertilization (IVF). Methods: A cross-sectional study was conducted. Evaluated a total of seventy-three women aged ≤ 39 years, undergoing IVF because of tubal factor, male factor and / or endometriosis, with both ovaries and hormone levels of TSH, FSH and PRL within the range of reference. It was not eligible to study women with ovarian hyperstimulation syndrome in the evaluated cycle, autoimmune disease, polycystic ovary syndrome, with early luteinization and / or endometrioma. In this study was measured the sHLA-G by ELISA in FF from a pool of follicles punctured of women undergoing ovulation induction for IVF. The embryos after fertilization were classified by GES criteria. The other study variables were transcribed from medical records of patients. Results: The association between concentrations of sHLA-G and the average score of the generated embryos was not observed. Sensitivity of the ELISA was observed with detection by more than 98% of the samples. Significant association was found between AMH and age (r = -0.38; p = 0.003), between AMH and total oocytes (r = 0.53; p <0.05) and age and total oocytes (r = -0.31, p = 0.009). The results of sHLA-G in women with endometriosis and without endometriosis (tubal and male factor) showed no significant difference (p = 0.57). Conclusion: There was no association between embryo quality and the dosages of sHLA-G. Considering these results, the use of sHLA-G measured in FF as a prognostic marker of quality embryo based on GES criteria is still controversial. The results for the AMH corroborate with the literature.