Orientador: Idomeo Bonetti Filho / Co-orientador: / Banca: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Banca: Yara Teresinha Corrêa Silva Sousa / Banca: Gisele Faria / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Resumo: Cimentos endodônticos associados à amoxicilina têm sido pesquisados como uma alternativa para obturação do canal radicular. Os objetivos do presente estudo foram: Avaliar a citocompatibilidade do AH Plus e do Sealapex associados com amoxicilina em quantidade de 10% do peso total dos cimentos (Capítulo 1) e avaliar o escoamento e o tempo de presa dos cimentos AH Plus e Sealapex associados à amoxicilina em diferentes concentrações e a atividade antibiofilme dos cimentos associados a uma maior concentração de amoxicilina que não altera as propriedades físicas de ambos os cimentos (Capítulo 2). No Capítulo 1 a citocompatibilidade dos materiais foi avaliada utilizando fibroblastos L929 expostos por 24 horas a diferentes diluições dos extratos dos cimentos puros e associados à amoxicilina. Os ensaios de brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil )-2,5-difenil-2Htetrazólio (MTT) e vermelho neutro foram utilizados para avaliação da viabilidade celular e a fluorescência para actina e α-tubulina foram utilizadas para análise do citoesqueleto. Os dados foram analisados empregando a análise de variância a dois critérios e pós teste de Bonferroni, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a incorporação de amoxicilina na concentração de 10% do peso total dos cimentos não diminuiu a viabilidade dos fibroblastos e não causou alterações estruturais nos componentes do citoesqueleto estudados. Conclui-se que à amoxicilina poderia ser um agente antimicrobiano promissor para ser incorporada aos cimentos endodônticos. No Capítulo 2 o escoamento a o tempo de presa dos cimentos puros ou associados à amoxicilina em concentrações de 0,25 a 10% foram estudadas de acordo com a especificação no6876 da Organização Internacional de Padronização (ISO 2012). A avaliação antibiofilme dos cimentos puros e associados à amoxicilina 1% foi realizada por teste de contato...(Resumo completo clicar acesso eletrônico) / Abstract: Sealers associatedwith amoxicillinhave been developed as an alternative to root canal filling. The objectives of this study were to evaluate the cytocompatibility of AH Plus and Sealapex associated with amoxicillin in concentration of 10% of the total weight of sealer (Chapter 1) and evaluate the flow and the setting time of AH Plus sealer and Sealapex associated with amoxicillin at different concentrations and the activity of sealers antibiofilm associated with higher concentrations of amoxicillin which does not alter the physical properties of both sealers (Chapter 2). In Chapter 1 cytocompatibility of the materials was assessed using the L929 fibroblasts exposed for 24 hours with different dilutions of the extracts of pure sealer and associated with amoxicillin. The testing of 3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT), and neutral red were used for evaluation of cell viability and fluorescence actin and α-tubulin were used for analysis of the cytoskeleton. Data were analyzed using analysis of variance and two criteria Bonferroni post test at 5% significance level. The results showed that incorporation of amoxicillin at a concentration of 10% by weight of the sealer did not decrease the viability of fibroblasts and did not cause structural changes in the cytoskeletal components studied. It is concluded that amoxicillin could be a promising antimicrobial agent to be incorporated in sealers. In chapter 2 the flow and setting time of the sealer pure or associated with amoxicillin from 0.25 to 10% concentrations were evaluated according to no 6876 specification of the International Organization for Standardization (ISO 2012). The antibiofilm evaluation of pure sealer and 1% associated with amoxicillin was performed by direct contact test with Enterococcus faecalis biofilm previously induced in bovine dentin for 14 days. Fresh sealer were in contact with the biofilm... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Resumo: Novos cimentos endodônticos à base de silicatos de cálcio são propostos na busca de materiais com potencial bioativo. Publicação 1: Desenvolvimento e avaliação físico-química de dois cimentos endodônticos experimentais compostos por silicato tricálcico, silicato dicálcico, fosfato de cálcio monobásico, hidróxido de cálcio, óxido de zircônio e tungstato de cálcio; manipulados com polietilenoglicol - Experimental 1 (EXP1) ou com polietilenoglicol e hidrogel de quitosana - Experimental 2 (EXP2). TotalFill BC sealer (TF) e AH Plus (AHP) foram usados para comparação. Tempo de presa, escoamento e radiopacidade foram avaliados com base nas normas ISO 6876. Avaliou-se pH por um pHmetro digital, nos períodos de 3 e 12 horas, 1, 7, 14 e 21 dias. Avaliou-se solubilidade pela perda de massa após imersão em água destilada por 7 e 30 dias. Os dados obtidos foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey (α=0,05). EXP2 e EXP1 apresentaram maior tempo de presa (P<0,05). Radiopacidade e escoamento de EXP1 e EXP2 atendem às normas da ISO 6876. EXP1 apresentou radiopacidade semelhante à TF (P>0,05) e maior que EXP2 (P<0,05). EXP1 apresentou escoamento semelhante à AHP (P>0,05) e maior que EXP2 (P<0,05). EXP1 e EXP2 apresentaram maior solubilidade após 7 dias (P<0,05). Após 30 dias de imersão, solubilidade de EXP1 foi semelhante à TF (P>0,05). EXP1, EXP2 e TF apresentaram pH alcalino em todos os períodos experimentais. Conclui-se que EXP1 apresenta tempo de presa, radiopacidade, escoamento, solubilida... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: New calcium silicate-based endodontic cements are proposed in the search for materials with bioactive potential. Publication 1: Development and physical-chemical evaluation of two experimental endodontic cements composed of tricalcium silicate, dicalcium silicate, monobasic calcium phosphate, calcium hydroxide, zirconium oxide and calcium tungstate; handled with polyethylene glycol - Experimental 1 (EXP1) or with polyethylene glycol and chitosan hydrogel - Experimental 2 (EXP2). TotalFill BC sealer (TF) and AH Plus (AHP) were used for comparison. Setting time, flow and radiopacity were evaluated based on ISO 6876. pH was evaluated with a digital pH meter, in the periods 3 and 12 hours, 1, 7, 14 and 21 days. Solubility was evaluated by mass loss after immersion in distilled water for 7 and 30 days. Data were submitted to ANOVA and Tukey tests (α=0.05). EXP2 and EXP1 presented higher setting time (P<0.05). Radiopacity and flow of EXP 1 and EXP2 meet ISO 6876 standards. EXP1 presented radiopacity similar to TF (P>0.05) and higher than EXP2 (P<0.05). EXP1 presented similar flow to AHP (P>0.05) and higher than EXP2 (P<0.05). EXP1 and EXP2 presented higher solubility after 7 days (P<0.05). After 30 days of immersion, solubility of EXP1 was similar to TF (P>0.05). EXP1, EXP2 and TF presented alkaline pH in all experimental periods. It is concluded that EXP1 presents proper setting time, radiopacity, flow, solubility and pH, and it has potential for use as endodontic cement. Publicat... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-21Bitstream added on 2014-06-13T20:49:54Z : No. of bitstreams: 1 komiyama_ey_me_sjc.pdf: 400075 bytes, checksum: e55105ff517c14d2f0afa991e2fc4312 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e suscetibilidade aos antibióticos de Enterococcus spp. isolados da cavidade bucal de indivíduos (n=240) de diferentes faixas etárias (4 a 11, 12 a 17, 18 a 34, 35 a 59 e acima de 60 anos). Foram excluídos indivíduos diabéticos, gestantes, fumantes, edêntulos totais, indivíduos sob tratamento com fármacos que interfiram sobre o fluxo e composição salivar, pacientes usuários de prótese total, prótese parcial removível ou aparelhos ortodônticos, indivíduos que tenham sido submetidos à antibioticoterapia ou utilizado antiséptico nos últimos 45 dias. Amostras foram coletadas por enxagüe bucal e isolamento utilizando ágar Enterococcosel. Os isolados foram identificados pelo sistema API 20 Strep e avaliação da suscetibilidade aos antibióticos pela metodologia de diluição em ágar CLSI (2003). Considerando a população total (n=240), foram observados 16,6% dos indivíduos positivos para Enterococcus spp. na cavidade bucal com média de 121,73 UFC/ml de enxágüe bucal. Maior número de pacientes acima de 35 anos foram positivos. Observou-se diferença entre as contagens de enterococos dos grupos estudados (p=0,0019). O teste de Dunn indicou diferença entre o grupo de 12-17 anos em relação aos grupos 35-59 anos (p=0,0004) e acima de 60 anos (p=0,004). Não foi observada diferença estatisticamente significante entre as medianas de UFC/ml para os gêneros masculino e feminino (p=0,3645). Foi observada maior prevalência de E. faecalis em todos os grupos etários em relação as demais espécies (p=0.000). Do total de isolados 12% foram resistentes à vancomicina, 16% à amoxicilina, 54% à tetraciclina, 18% à ampicilina, 20% à cloranfenicol e 46% à eritromicina. / The aim of this study was to evaluate the prevalence and antimicrobial susceptibility of Enterococcus spp. isolated from the oral cavity of individuals (n=240) with different ages (4 to 11, 12 to 17, 18 to 34, 35 to 59 and 60+ years). Patients with diabetes mellitus, pregnant women, smokers, edentulous, individuals under treatment with medications acting of salivary composition and flow, dentures and orthodontic devices users, and individuals under antibiotic or antiseptic use for the last 45 days were excluded. Samples were collected by oral rinses and the isolation was performed by using Enterococcosel agar. The isolates were identified by API 20 Strep system and the evaluation of antimicrobial susceptibility were performed by CLSI (2003) agar dilution methodology. Considering the total population (n=240), 16.6% of the individuals were positive to Enterococcus spp. in the oral cavity with mean value of 121.73cfu/ml. Higher number of patients over 35 years were positive. Differences of enterococci counts among the studied groups were observed (p=0.0019). Dunn’s test indicated differences between the group of 12 to 17 years in relation to the groups 35-59 years (p=0.0004) and over 60 years (p=0.004). No statistically significant difference between the median values of cfu/ml of male and female genders was observed (p=0.3645). E. faecalis was prevalent in all the age groups (p=0.000). From the total of isolates 12% were resistant to vancomycin, 16% to amoxicillin, 54% to tetracycline, 18% to ampicillin, 20% to chloramphenicol and 46% to erythromycin.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-26Bitstream added on 2014-06-13T18:09:33Z : No. of bitstreams: 1 kuba_ee_me_arafcf.pdf: 816726 bytes, checksum: 855ca4798f7fb494846e5bded4c923c4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os alimentos probióticos representam uma classe muito importante para a manutenção do estado de saúde. No mercado, esses produtos são predominantemente iogurtes e leites fermentados, havendo uma demanda por alimentos probióticos não-lácteos para ampliar as opções dos consumidores vegetarianos, bem como atender às necessidades dos indivíduos intolerantes à lactose. Nesse contexto, a soja apresenta-se como um adequado substituto do leite, em virtude das suas qualidades nutricionais e funcionais. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma sobremesa potencialmente probiótica mista de tofu e extrato hidrossolúvel de soja, fermentado com Enterococcus faecium CRL 183. No total, foram produzidas três formulações de sobremesa probiótica, com diferentes proporções de tofu e fermentado de soja: “A” (50%/ 50%), “B” (70%/ 30%) e “C” (80%/ 20%). Todas apresentavam as mesmas porcentagens de NaHCO3, creme de soja, polpa de morango, aroma de leite em pó, corante natural carmim de colchonilha, goma carragena e açúcar refinado. Testes sensoriais de aceitação e de intenção de compra foram realizados com 65 consumidores visando a escolha da melhor formulação, à qual foi submetida a análises físico-químicas e microbiológicas nos tempos de 2, 14 e 28 dias de estocagem a ±5ºC e, também, a análise sensorial nos tempos de 4, 14 e 28 dias. A composição centesimal e o valor calórico também foram determinados. Os dados foram avaliados através de análise de variância e teste de médias de Tukey (p<0,05). A sobremesa “A” foi considerada a melhor em termos sensoriais, principalmente quanto à intenção de compra, uma vez que 47% dos consumidores afirmaram que “certamente ou provavelmente comprariam” o produto. Sendo assim, ela foi selecionada para prosseguir o estudo... / The probiotic foods represent a very important class for the maintenance of health state. At the market, these products are predominantly yogurts and fermented milks. There is a demand for non-dairy probiotic foods to increase the vegetarian options and attend the individuals with lactose intolerance. In this context, soy based food appears as an ideal substitute because its nutritional and functional qualities. The present study aimed the development of a potentially probiotic dessert added with tofu and aqueous extract of soy fermented with Enterococcus faecium CRL 183. Three formulations were produced with different proportions of tofu and fermented soy product: A (50% / 50%), B (70% / 30%) and C (80% / 20 %). All the desserts contained the same percentages of NaHCO3, soy cream, strawberry pulp, flavor milk powder, natural colouring agent, carrageenan gum, and sugar. Sensory tests for acceptance and purchase intent were performed to choose the best formulation, which was studied by physico-chemical, microbiological and rheological analysis after 2, 14 and 28 days of storage (± 5 º C) and sensory analysis after 4, 14 and 28 days. The chemical composition and caloric value were also determined. Data were evaluated by analysis of variance and Tukey test (p <0,05). The dessert A was considered the best sensorially, especially regarding the purchase intent, since that 47% of the panelists said they would certainly or probably buy this product”. Thus, it was chosen for further study. The composition of the formulation A had 72.2% of moisture, 4.4% of protein, 3.1% of fat, 0.6% of ash and 19.6% of carbohydrate, and the caloric value was 124 3 kcal / 100g. In this formulation, the strains of E. faecium CRL 183 and L. helveticus 416 remained viable throughout the experimental period, they exhibited... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Eloi Dezan Júnior / Coorientador: Carolina Simonetti Lodi / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Resumo: Enterococcus faecalis é uma bactéria Gram-positiva que pode resistir ao tratamento endodôntico e manter a infecção presente no sistema de canais radiculares. Assim, o uso de cimentos endodônticos com atividade antimicrobiana pode ajudar a eliminar microrganismo residuais que sobreviveram após o tratamento endodôntico. Diante dessa realidade, o presente estudo teve por objetivo avaliar comparativamente a ação antimicrobiana dos cimentos endodônticos Acroseal, Sealapex e AH Plus em um modelo de biofilme in vitro. Para a realização do estudo foram confeccionados 144 espécimes de dentina bovina, sendo doze blocos para cada cimento em cada tempo experimental que permaneceram em placas contendo meio de cultura inoculado com E. faecalis (ATCC 51299) para permitir a formação de biofilme. Decorrido 14 dias, os espécimes foram transferidos para outra placa onde discos dos cimentos testados foram colocados sobre o biofilme formado. As placas de cultura foram deixadas em estufa a 37°C e 5% de CO2 por 2, 7 e 14 dias. Espécimes sem aplicação dos cimentos foram utilizados como controle para cada período. Após cada tempo experimental, as amostras foram agitados em sonicador. As suspensões foram agitadas em vortex e foi realizada uma diluição seriada decimal em solução salina, sendo estas diluições plaqueadas em triplicata em meio de cultura m-Enterococcus ágar. As unidades formadoras de colônia foram contadas e os dados analisados estatisticamente usando os teste ANOVA, Shapiro-Wilk e Kruskal-Wallis one-way (p<0,05) para determinação do potencial antimicrobiano. Resultados: O Sealapex apresentou diferença estatística em todos os tempos experimentais quando comparado com os demais grupos. O AH Plus e o Acroseal mostraram atividade antimicroabina apenas no 14o dia de experimento. Conclusão: Nenhum... / Abstract: Enterococcus faecalis is a gram positive bacteria that can resist to the endodontic therapy and maintain the infection present in the root canal system. Therefore, the use of endodontic sealers with antimicrobial activity could help to eliminate residual microorganism that have survived after endodontic treatment. The present study aimed to compare the antimicrobial activity of the endodontic sealers Acroseal, Sealapex and AH Plus in vitro biofilm model. It were prepared 144 bovine dentin specimens, twelve blocks for each cement in each experimental time that remained in plates containing culture medium inoculated with E. faecalis (ATCC 51299) for biofilm formation. After 14 days, the samples were transferred to another plate with test sealers and were kept at 37oC and 5% CO2 for 2, 7 and 14 days. Specimens without sealers were used as a control for each period. After each experimental, the samples were agitated in sonicator. The suspensions were agitated in vortex and serially diluted in saline and triple plaqued in m-Enterococcus agar. Colony forming unit were counted and the data were statistically analyzed using ANOVA, Shapiro-Wilk and Kruskal-Wallis one-way test (p<0.05) for the antimicrobial potential determination. Results: Sealapex showed significant difference in all experimental times in comparison to all other groups. AH Plus and Acroseal showed antimicrobial activity just at 14th experimental day. Conclusion: Neither of sealers setting tested was able to remove biofilm . The Sealapex showed higher antimicrobial activity in all experimental periods. All sealers examined the antimicrobial effectiveness was higher with over time / Mestre

Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Banca: Cristiane Yumi Koga Ito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Celia Regina Golçalves e Silva / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e suscetibilidade aos antibióticos de Enterococcus spp. isolados da cavidade bucal de indivíduos (n=240) de diferentes faixas etárias (4 a 11, 12 a 17, 18 a 34, 35 a 59 e acima de 60 anos). Foram excluídos indivíduos diabéticos, gestantes, fumantes, edêntulos totais, indivíduos sob tratamento com fármacos que interfiram sobre o fluxo e composição salivar, pacientes usuários de prótese total, prótese parcial removível ou aparelhos ortodônticos, indivíduos que tenham sido submetidos à antibioticoterapia ou utilizado antiséptico nos últimos 45 dias. Amostras foram coletadas por enxagüe bucal e isolamento utilizando ágar Enterococcosel. Os isolados foram identificados pelo sistema API 20 Strep e avaliação da suscetibilidade aos antibióticos pela metodologia de diluição em ágar CLSI (2003). Considerando a população total (n=240), foram observados 16,6% dos indivíduos positivos para Enterococcus spp. na cavidade bucal com média de 121,73 UFC/ml de enxágüe bucal. Maior número de pacientes acima de 35 anos foram positivos. Observou-se diferença entre as contagens de enterococos dos grupos estudados (p=0,0019). O teste de Dunn indicou diferença entre o grupo de 12-17 anos em relação aos grupos 35-59 anos (p=0,0004) e acima de 60 anos (p=0,004). Não foi observada diferença estatisticamente significante entre as medianas de UFC/ml para os gêneros masculino e feminino (p=0,3645). Foi observada maior prevalência de E. faecalis em todos os grupos etários em relação as demais espécies (p=0.000). Do total de isolados 12% foram resistentes à vancomicina, 16% à amoxicilina, 54% à tetraciclina, 18% à ampicilina, 20% à cloranfenicol e 46% à eritromicina. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the prevalence and antimicrobial susceptibility of Enterococcus spp. isolated from the oral cavity of individuals (n=240) with different ages (4 to 11, 12 to 17, 18 to 34, 35 to 59 and 60+ years). Patients with diabetes mellitus, pregnant women, smokers, edentulous, individuals under treatment with medications acting of salivary composition and flow, dentures and orthodontic devices users, and individuals under antibiotic or antiseptic use for the last 45 days were excluded. Samples were collected by oral rinses and the isolation was performed by using Enterococcosel agar. The isolates were identified by API 20 Strep system and the evaluation of antimicrobial susceptibility were performed by CLSI (2003) agar dilution methodology. Considering the total population (n=240), 16.6% of the individuals were positive to Enterococcus spp. in the oral cavity with mean value of 121.73cfu/ml. Higher number of patients over 35 years were positive. Differences of enterococci counts among the studied groups were observed (p=0.0019). Dunn's test indicated differences between the group of 12 to 17 years in relation to the groups 35-59 years (p=0.0004) and over 60 years (p=0.004). No statistically significant difference between the median values of cfu/ml of male and female genders was observed (p=0.3645). E. faecalis was prevalent in all the age groups (p=0.000). From the total of isolates 12% were resistant to vancomycin, 16% to amoxicillin, 54% to tetracycline, 18% to ampicillin, 20% to chloramphenicol and 46% to erythromycin. / Mestre

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar a ação das soluções de hipoclorito de sódio e clorexidina associadas à cetramida e do QMiX, produto comercial que combina clorexidina, EDTA e cetramida, sobre Enterococcus faecalis (ATCC 29212) em fase planctônica e biofilme. As soluções avaliadas foram: G1: Hipoclorito de sódio (NaOCl) a 2,5%; G2: NaOCl a 2,5% + cetramida (CTR) a 0,2%; G3: Clorexidina (CLX) a 2%; G4: CLX a 2% + CTR a 0,2%; G5: CTR a 0,2%; G6: QMiX. Como controle negativo foi utilizada solução salina. O estudo foi dividido em dois capítulos. No capítulo 1, foi realizada a avaliação da atividade antibacteriana sobre os micro-organismos em fase planctônica e biofilme. Para o contato direto com E. faecalis em fase planctônica, 50 μl da suspensão bacteriana foram colocados em tubos contendo 1,45 mL de cada solução irrigadora ou associações e, após os períodos de 1 e 3 minutos foram utilizadas soluções neutralizantes da ação antimicrobiana dos irrigantes. Em seguida, foi realizada diluição decimal seriada e plaqueamento em meio Tryptic Soy agar (TSa). Para a indução dos biofilmes foram utilizados blocos de dentina bovina como substrato no período de 14 dias. Os biofilmes foram colocados em contato com as soluções avaliadas, e transferidos para tubos de ensaio contendo soluções neutralizantes. Após agitação por 60 segundos para a suspensão das células remanescentes, foi realizada diluição decimal seriada e plaqueamento em TSa em triplicata. A incubação foi realizada em microaerofilia a 37°C por 24 horas e a análise efetuada por meio da contagem de UFC mL-1. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey, com nível de significância de 5%. Todas as soluções irrigadoras e associações avaliadas eliminaram completamente os micro-organismos em fase planctônica. Sobre biofilme, somente NaOCl e NaOCl+CTR apresentaram 100% de eliminação bacteriana... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the action of conventional endodontic solutions such as sodium hypochlorite and chlorhexidine associated with cetrimide and QMiX, a commercial product composed by chlorhexidine, EDTA and cetrimide, on biofilm and planktonic phase of Enterococcus faecalis (ATCC 29212). The evaluated solutions were: G1: 2.5% Sodium Hypochlorite (NaOCl); G2: 2.5% NaOCl + 0.2% cetrimide (CTR); G3: 2% Chlorhexidine (CLX) 2%; G4: 2% CLX + 0.2% CTR; G5: 0.2% CTR; G6: QMiX. Saline solution was used as negative control. The study was divided into two chapters. In Chapter 1, the antibacterial activity of the solutions on microorganisms in planktonic phase and biofilm was evaluated. For direct contact with E. faecalis in planktonic phase, 50 μL of bacterial suspension were placed in tubes containing 1.45 mL of each irrigation solution or associations and after 1 and 3 minutes, neutralizing solutions were used to stop of the antimicrobial action of endodontic solutions. Decimal serial dilutions were performed and the suspensions were plated in Tryptic Soy agar medium (TSa). Dentin bovine blocks were used as substrate for induction of biofilms for 14 days. The biofilms were placed in contact with the solutions evaluated and transferred to test tubes containing neutralizing solution. After agitation for 60 seconds to suspend the remaining cells, decimal serial dilutions were performed and the suspensions were cultivated in triplicate on TSA plates. The incubation was held in microaerophilic at 37 ° C for 24 hours and the analysis was performed by counting CFU mL-1. The results were submitted to ANOVA and Tukey test, with significance level of 5%. All irrigating solutions and associations evaluated completely eradicated the microorganisms in planktonic phase. On biofilm, only NaOCl and NaOCl+CTR showed 100%- of bacterial elimination. CLX showed similar activity to CLX+CTR, CTR and QMiX after... / Mestre

Este estudo objetivou investigar a distribuição e a relação entre os genes envolvidos com a virulência e formação de biofilme em 196 Enterococcus faecalis isolados de alimentos, clínicos e suabes cloacais de frangos de corte que receberam oocistos de Eimeria maxima e Eimeria acervulina e ração suplementada ou não com anticoccidiano. No primeiro experimento foi investigada a frequência dos genes agg, ace, tet(M), tet(L) e do operon bopABCD; e foi analisada a produção da enzima gelatinase em duas temperaturas de crescimento (36°C e 42°C). Assim como a capacidade de formar biofilme em meio de cultura suplementado com 10% de sangue, 10% de urina ou 0,75% de glicose por 70 Enterococcus faecalis isolados de frangos. Os Enterococcus faecalis isolados de frangos de corte que receberam oocistos de Eimeria maxima e Eimeria acervulina e ração suplementada ou não com anticoccidiano apresentaram capacidade de se adaptar a diferentes nichos biológicos, como por exemplo, sangue e urina. Foi observado um alto percentual dos genes dos fatores de virulência. No segundo experimento, foi avaliada a diversidade filogenética, com base no método de PCR, de 182 cepas isoladas de humanos, frangos de corte e alimentos. Estas cepas formaram quatro grupos filogenéticos (A, B, C e D) e quatro subgrupos (A1, A2, B1 e B2) com índice de similaridade entre 65 a 100%, demonstrando a adaptação de Enterococcus faecalis a diferentes ambientes. No terceiro experimento, foi determinada a capacidade de formação de biofilme de isolados clínicos e alimentares em diferentes meios de cultivo. Observou-se que o meio suplementado com 0,75% de glicose demonstrou ser o mais adequado para estabelecimento de forte aderência e, consequente formação do biofilme microbiano nos isolados de todas as origens. Em contrapartida, o meio suplementado com 10% de sangue foi o que registrou as maiores taxas de fraca formação de biofilme. Os estudos conduzidos demonstram características fenotípicas e genotípicas de Enterococcus faecalis que sugerem uma ampla adaptação ambiental entre os isolados pesquisados. / This study aimed to investigate the distribution and the relationship between genes involved in virulence and biofilm formation in 196 Enterococcus faecalis isolates from food, clinical and cloacal swabs of broilers that received oocysts of Eimeria maxima and Eimeria acervulina and diet supplemented or not with anticoccidial. The first experiment investigated the frequency of agg, ace, tet(M), tet(L) genes and bopABCD operon; production of gelatinase enzyme was analyzed at two growth temperatures (36°C and 42°C). Thus the ability to form biofilm in culture medium supplemented with 10% of blood, 10% of urine and glucose 0.75% for 70 Enterococcus faecalis isolates of chicken. The Enterococcus faecalis isolates from broilers that received oocysts of Eimeria maxima and Eimeria acervulina and supplemented or not with anticoccidial showed the ability to adapt to different biological niches, such as blood and urine. A high percentage of genes of virulence factors were observed. In the second experiment, we evaluated the phylogenetic diversity based on PCR method of 182 strains isolated from humans, broilers and food. These strains formed four phylogenetic groups (A, B, C and D) and four subgroups (A1, A2, B1 and B2) with similarity index between 65 and 100%, demonstrating the adaptation of Enterococcus faecalis to different environments. In the third experiment, the ability of biofilm formation of clinical and food isolates in different culture media was determined. It was observed that the medium supplemented with 0.75% glucose was shown to be more suitable for the establishment of strong adhesion and subsequent formation of the biofilm isolates from all sources. In other hand, medium supplemented with 10% blood was reported that the highest rates of weak biofilm formation. Studies conducted show phenotypic and genotypic characteristics of Enterococcus faecalis that suggest a broad environmental adaptation among the isolates studied.

Os Enterococcus spp. apresentam uma natureza ubiquitária que lhes permite sobreviver em diversos nichos ecológicos. Estudos envolvendo enterococos isolados de animais marinhos são escassos. Em razão disso, este trabalho teve como objetivo isolar, identificar, avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos, a presença de fatores de virulência e a diversidade genética de enterococos isolados de amostras fecais de pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) encontrados no Litoral Norte do Rio Grande do Sul, Brasil. No total, 172 enterococos foram isolados e identificados como E. faecalis (43%), E. faecium (33,7%), E. hirae (12,8%) e E. mundtii (10,5%). Cento e quatorze isolados foram sensíveis aos dez antimicrobianos testados. Fenótipos de resistência foram encontrados para ciprofloxacina (28,5%), eritromicina (25%), norfloxacina (14,5%) e tetraciclina (4,6%). Todos os isolados resistentes à tetracilina apresentavam o gene tet(M) e apenas dois não apresentaram o tet(L). O gene erm(B) não foi detectado nos resistentes à eritromicina. Genes de virulência, gelE e ace (43%) e asa (35,5%) foram detectados nos E. faecalis. A atividade de gelatinase foi verificada em 64 isolados. A maioria dos enterococos foi fraco formador de biofilme. A análise dos perfis gerados por PFGE revelou um grande número de clones. Em conclusão, os enterococos compõem a microbiota do trato gastrintestinal dos pinguins-de-magalhães e a detecção de determinantes de resistência e virulência indica que os enterococos podem constituir um reservatório de tais características e, sendo o ambiente marinho um meio de disseminação, é importante considerar o potencial deste gênero em ocasionar riscos à saúde desses animais e à do ecossistema marinho. / Enterococcus spp. shows a ubiquitous nature that enables survival in different ecological niches. Studies involving enterococci isolated from marine animals are scarce. For this reason, this study aimed to isolate, identify, evaluate the antimicrobial susceptibility profile, the presence of virulence factors and the genetic diversity of enterococci isolated from fecal samples of magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) found in the North coast of Rio Grande do Sul, Brazil. Overall, 172 enterococci were isolated and identified as E. faecalis (43%) E. faecium (33.7%), E. hirae (12.8 %) and E. mundtii (10.5%). One hundred and fourteen isolates were susceptible to the ten tested antimicrobials. Resistance phenotypes were found for ciprofloxacin (28.5%), erythromycin (25%), norfloxacin (14.5%) and tetracycline (4.6%). The tetracycline resistant isolates showed the tet(M) gene and only two isolates didn’t present tet(L). The erm(B) gene wasn’t detected in erythromycin resistant isolates. Virulence genes, gelE/ ace genes (43%) and asa (35.5%) were found only in E. faecalis. The gelatinase activity was observed in 64 strains. The majority of enterococci were weak biofilm formers. The analysis of the profiles generated by PFGE has revealed a large number of clones. In conclusion, enterococci compose the microbiota of magellanic penguins and the detection of resistance and virulence determinants indicates that enterococci may constitute a reservoir of such characteristics and, as the marine environment is a way of dissemination, it is important to consider the potential of this genus in cause health risks of these animals and the marine ecosystem.

Os Enterococcus spp. apresentam uma natureza ubiquitária que lhes permite sobreviver em diversos nichos ecológicos. Estudos envolvendo enterococos isolados de animais marinhos são escassos. Em razão disso, este trabalho teve como objetivo isolar, identificar, avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos, a presença de fatores de virulência e a diversidade genética de enterococos isolados de amostras fecais de pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus) encontrados no Litoral Norte do Rio Grande do Sul, Brasil. No total, 172 enterococos foram isolados e identificados como E. faecalis (43%), E. faecium (33,7%), E. hirae (12,8%) e E. mundtii (10,5%). Cento e quatorze isolados foram sensíveis aos dez antimicrobianos testados. Fenótipos de resistência foram encontrados para ciprofloxacina (28,5%), eritromicina (25%), norfloxacina (14,5%) e tetraciclina (4,6%). Todos os isolados resistentes à tetracilina apresentavam o gene tet(M) e apenas dois não apresentaram o tet(L). O gene erm(B) não foi detectado nos resistentes à eritromicina. Genes de virulência, gelE e ace (43%) e asa (35,5%) foram detectados nos E. faecalis. A atividade de gelatinase foi verificada em 64 isolados. A maioria dos enterococos foi fraco formador de biofilme. A análise dos perfis gerados por PFGE revelou um grande número de clones. Em conclusão, os enterococos compõem a microbiota do trato gastrintestinal dos pinguins-de-magalhães e a detecção de determinantes de resistência e virulência indica que os enterococos podem constituir um reservatório de tais características e, sendo o ambiente marinho um meio de disseminação, é importante considerar o potencial deste gênero em ocasionar riscos à saúde desses animais e à do ecossistema marinho. / Enterococcus spp. shows a ubiquitous nature that enables survival in different ecological niches. Studies involving enterococci isolated from marine animals are scarce. For this reason, this study aimed to isolate, identify, evaluate the antimicrobial susceptibility profile, the presence of virulence factors and the genetic diversity of enterococci isolated from fecal samples of magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) found in the North coast of Rio Grande do Sul, Brazil. Overall, 172 enterococci were isolated and identified as E. faecalis (43%) E. faecium (33.7%), E. hirae (12.8 %) and E. mundtii (10.5%). One hundred and fourteen isolates were susceptible to the ten tested antimicrobials. Resistance phenotypes were found for ciprofloxacin (28.5%), erythromycin (25%), norfloxacin (14.5%) and tetracycline (4.6%). The tetracycline resistant isolates showed the tet(M) gene and only two isolates didn’t present tet(L). The erm(B) gene wasn’t detected in erythromycin resistant isolates. Virulence genes, gelE/ ace genes (43%) and asa (35.5%) were found only in E. faecalis. The gelatinase activity was observed in 64 strains. The majority of enterococci were weak biofilm formers. The analysis of the profiles generated by PFGE has revealed a large number of clones. In conclusion, enterococci compose the microbiota of magellanic penguins and the detection of resistance and virulence determinants indicates that enterococci may constitute a reservoir of such characteristics and, as the marine environment is a way of dissemination, it is important to consider the potential of this genus in cause health risks of these animals and the marine ecosystem.