Objetivo: Evaluar el límite de inhibición bacteriana del Hidróxido de Calcio en polvo sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC® 29212™. Materiales y Métodos: Este estudio experimental in vitro utilizó 40 placas petri con agar BHI solidificado. Se preparó la solución de Hidróxido de Calcio [Ca(OH)2] en polvo de la marca Biodinámica y Maquira a la concentración de 1g/ml. La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bacteriostática (CMB) fueron evaluadas mediante diferentes concentraciones de Ca(OH)2 (0.02 g/ml - 1g/ml). La CMI fue evaluada mediante la técnica de Kirby Bauer y la CMB mediante la técnica de Recuento de Unidades Formadoras de Colonia (UFC). Resultados: Al evaluar la actividad antibacteriana de Ca(OH)2 contra la cepa de E. faecalis, se observó las siguientes medias del halo de inhibición: Biodinámica 22.66 ± 0.38 mm; Maquira 23.58 ± 0.47 mm y Clorhexidina al 12% (control positivo) 23.93 ± 0.73 mm. La CMI del Ca(OH)2 en polvo de ambas marcas fue de 0.063 g/ml como límite inferior, confirmando la inhibición del crecimiento de la cepa de Enterococcus faecalis ATCC® 29212™, siendo el límite superior de 1g/ml. Por otro lado, el CMB del Ca(OH)2 en polvo muestra un valor de 0.031 g/ml para la marca Biodinámica y 0.063 g/ml. para la marca Maquira. Conclusión: El límite inferior y superior de inhibición bacteriana del Hidróxido de Calcio, sobre cepas de Enterococcus faecalis ATCC® 29212™ fue de 0.063 g/ml y de 1gr/ml, respectivamente. / Objective: To evaluate the bacterial inhibition limit of Calcium Hydroxide powder on strains of Enterococcus faecalis ATCC® 29212™. Materials and Methods: This in vitro experimental study used 40 petri dishes with solidified BHI agar. The solution of Calcium Hydroxide [Ca(OH)2] powder of the brand Biodinámica and Maquira was prepared at the concentration of 1 g / ml. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Bacteriostatic Concentration (MBC) were evaluated using different concentrations of Ca(OH)2 (0.02 g /ml - 1 g/ml). The CMI was evaluated using the Kirby Bauer technique and the CMB using the Colonies Formation Units (CFU) technique. Results: The antibacterial activity of Ca(OH)2 against the E. faecalis strain, presented the following means of inhibition halo were observed: Biodinámica 22.66 ± 0.38 mm; Maquira 23.58 ± 0.47 mm and 12% Chlorhexidine (positive control) 23.93 ± 0.73 mm. The MIC of the Ca(OH)2 powder of both brands was 0.063 g / ml as the lower limit, confirming the inhibition of the growth of Enterococcus faecalis ATCC ® 29212 ™ strain with the upper limit of 1 g / ml. On the other hand, CMB of the Ca(OH)2 powder shows a value of 0.031 g / ml for Biodinámica and 0.063 g / ml. for Maquira. Conclusion: The lower and upper limit of bacterial inhibition of Calcium Hydroxide, on strains of Enterococcus faecalis ATCC ® 29212™ was 0.063 g / ml and 1 g / ml, respectively. / Tesis

Objetivo: Evaluar el efecto antibacteriano del extracto metanólico de Moringa oleifera (Moringa) combinado con Hidróxido de calcio sobre cepas de Enterococcus faecalis (ATCC29212). Materiales y métodos: Se preparó extractos metanólicos de tallos, hojas y tallos más hojas de Moringa oleifera, los cuales fueron combinados con Hidróxido de calcio en igual proporción. Posteriormente se procedió a evaluar el efecto antibacteriano de los extractos en presencia y ausencia del Hidróxido de calcio contra la cepa bacteriana de Enterococcus faecalis utilizando el método de Kirby-Bauer y el recuento de Unidades Formadoras de Colonias (UFC). Resultados: Se observó que al comparar el Hidróxido de calcio con los extractos metanólicos de Moringa oleifera en presencia y ausencia del Hidróxido de calcio se demuestra que, el Hidróxido de calcio por si solo tiene alto efecto antibacteriano a diferencia de las diversas combinaciones. Conclusiones: La importancia de este estudio fue evaluar si el extracto metanólico de Moringa oleifera repotencia el efecto antibacteriano del Hidróxido de calcio. Los resultados muestran que los diferentes extractos metanólicos de Moringa oleifera no tienen la capacidad de repotenciar al Hidróxido de calcio. / Objective: Evaluate the antibacterial effect of the methanolic extract of Moringa oleifera (Moringa) combined with calcium hydroxide on strains of Enterococcus faecalis (ATCC29212). Materials and methods: Methanolic extracts of stems, leaves and stems plus Moringa oleifera leaves were prepared, which were combined with calcium hydroxide in equal proportion. Subsequently, the antibacterial effect of the extracts in the presence and absence of calcium hydroxide against the bacterial strain of Enterococcus faecalis was evaluated using the Kirby-Bauer method and the count of Colony Forming Units (CFU). Results: It was observed that when comparing calcium hydroxide with the methanolic extracts of Moringa oleifera in the presence and absence of calcium hydroxide, it is shown that calcium hydroxide alone has a high antibacterial effect unlike the various combinations. Conclusions: The importance of this study was to evaluate if the methanolic extract of Moringa oleifera enhances the antibacterial effect of calcium hydroxide. The results show that different methanolic extracts of Moringa oleifera do not have the capacity to repower the calcium hydroxide. / Tesis

Submitted by Juliana Jabur Damiao Polete null (36492619870) on 2016-05-19T02:12:33Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO - JULIANA WITZLER 28-03-16.pdf: 908490 bytes, checksum: 813f3b334ef44efd2e6b6abb35e2702e (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-23T14:22:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 witzler_jjp_me_arafcf.pdf: 908490 bytes, checksum: 813f3b334ef44efd2e6b6abb35e2702e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T14:22:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 witzler_jjp_me_arafcf.pdf: 908490 bytes, checksum: 813f3b334ef44efd2e6b6abb35e2702e (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A utilização de microrganismos probióticos para a manutenção da saúde bucal tem despertado o interesse da comunidade científica, tendo em vista que estudos indicam que tais microrganismos podem conferir benefícios como: atividade anticariogênica, tratamento de doenças periodentais e halitose, e redução na população de microrganismos patogênicos relacionados a patologias bucais. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento e a caracterização de uma pastilha alimentícia diet contendo o microrganismo Enterococcus faecium CRL 183 e a avaliação do potencial da referida cepa probiótica em sobreviver em saliva humana e inibir a multiplicação da cepa patogênica Streptococcus mutans ATCC 25175. O microrganismo E. faecium CRL 183 foi microencapsulado por extrusão e coacervação em matriz complexa. A técnica de coacervação complexa apresentou o melhor desempenho em relação à manutenção da viabilidade durante o período de armazenamento à temperatura ambiente (23ºC), sendo selecionada para a produção das pastilhas potencialmente probióticas. As pastilhas foram processadas em três tratamentos: PC – pastilha controle, sem adição do probiótico; PPP1 – com adição do microrganismo probiótico e PPP2 – pastilha com adição do microrganismo probiótico e de inulina (prebiótico). Análises microbiológicas (viabilidade e segurança), físico-químicas (umidade, atividade de água, pH e cor) e sensoriais (testes de aceitação e intenção de compra) foram conduzidas no tempo inicial e ao longo do tempo de estocagem. A sobrevivência do probiótico à saliva e a inibição da multiplicação da cepa patogênica, foram avaliadas através da inoculação da cepa pura e das pastilhas em saliva e da técnica de difusão em poços, respectivamente. A cepa de E. faecium teve sua viabilidade reduzida (p<0,05) imediatamente após a produção das pastilhas e durante o tempo de armazenamento à temperatura ambiente, em ambos os tratamentos PPP1 e PPP2. Na etapa de análise sensorial, as pastilhas apresentaram médias de aceitação superiores a seis para os atributos aroma, textura e impressão global, sem diferirem significativamente entre si (p<0,05). A adição da cepa probiótica e da substância prebiótica reduziu a aceitação do produto em relação à aparência e cor e melhorou a impressão dos consumidores em relação ao sabor. As análises físico-químicas revelaram que as formulações PC, PPP1 e PPP2 não diferiram entre si em relação aos parâmetros físico-químicos avaliados, com exceção do parâmetro cor. Todos os tratamentos apresentaram características microbiológicas adequadas durante os 28 dias de estudo. A cepa E. faecium CRL 183 inoculada em saliva humana na forma de pastilhas e de células livres teve sua população de células viáveis aumentada após 24 horas de incubação. O teste de difusão em poços evidenciou que a cepa probiótica foi capaz de inibir a multiplicação de S. mutans ATCC 25175 nas condições do estudo. Os resultados obtidos indicam que a associação do probiótico com inulina melhorou a aceitação do produto em relação ao atributo sabor e que a cepa probiótica sobrevive à saliva humana e apresenta potencial para inibir a multiplicação do microrganismo causador de cárie dental – S. mutans ATCC 25175. No entanto, a queda brusca da viabilidade da cepa probiótica durante o armazenamento das pastilhas, indica a necessidade de aprimoramento do processo de obtenção das mesmas, além de adequação da embalagem utilizada à matriz alimentícia. / The interest in the local effect of probiotic microorganisms is increasing among the scientific community, since studies have indicated that such microorganisms can present anticariogenic activity, help on the treatment of periodontal and halitosis diseases, and reduction in the population of pathogenic microorganisms associated to oral pathologies. The main purpose of this study was the development and characterization of a diet lozenge containing the probiotic strain Enterococcus faecium CRL 183. Its potential of surviving in the human saliva environment and the inhibition of the pathogenetic strain Streptococcus mutans ATCC 25175, were also evaluated. The probiotic strain E. faecium CRL 183 was microencapsulated through the extrusion and complex coacervation techniques. The last one was selected to the next step of the study (lozenges production), as it showed the best performance in comparison to the extrusion technique, regarding viability maintenance during the storage period at room temperature (23ºC). The lozenges were produced through three different treatments: PC – control formulation, without the probiotic; PPP1 – probiotic formulation; PPP2 – probiotic formulation with inulin addition. Microbiologic (viability and security), physicochemical (moisture, water activity, pH and color) and sensorial (acceptance and purchase intention) analyses were conducted during the storage period. The probiotic survival to human saliva was evaluated through inoculation of the pure probiotic strain and the probiotic lozenges in saliva. The agar diffusion technique was used to evaluate the E. faecium CRL 183 inhibition potential against the pathogenic strain, S. mutans ATCC 25175. The probiotic strain had the viability decreased after the lozenges production and also during the storage period at room temperature for the PPP1 and PPP2 treatments. At sensorial analysis, lozenges showed acceptance averages higher than 6 to flavor, texture and global impression attributes, with no significant difference among then (p<0,05). The addition of the probiotic strain and the prebiotic ingredient reduced the product acceptance regarding appearance and color and improved the flavor impression. The physicochemical analysis revealed that the formulations PC, PPP1 and PPP2 did not differ among themselves concerning the parameters evaluated, except for color. The microbiologic results obtained during the storage were appropriated to the confectionery category. The E. faecium strain inoculated in saliva as lozenges and as free cells had the cell viability increased after 24 h of incubation. The diffusion test showed that the probiotic strain was able to inhibit the growth of S. mutans ATCC 25175 in the study conditions. The results suggested that the association of probiotic microorganism and inulin improved the acceptance of the product, in relation to the flavor attribute, and that the probiotic strain survived in the human saliva and has potential to inhibit the multiplication of dental caries-causing organism – S. mutans ATCC 25175. However, the drastic viability reduction during the storage period indicates the necessity of a process refinement and also the adjustment of the packaging to food matrix.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi comparar a capacidade de selamento apical de três materiais retrobturadores em dentes submetidos à infiltração microbiana por Enterococcus faecalis. Além de analisar a ocorrência da infiltração microbiana em relação à variável tempo. Para tal, foram utilizados 45 incisivos superiores permanentes humanos extraídos, instrumentados com o sistema rotatório ProTaper Universal (MAILLEFER) e obturados pela técnica Híbrida de Tagger, com cimento endodôntico: AH Plus (DENTSPLY). A apicetomia foi realizada com a remoção de 3mm do terço apical e o retropreparo confeccionado com pontas ultrasônicas. As amostras foram subdivididas, aleatoriamente, em três grupos com 15 dentes cada, e dois grupos controles. Os materiais utilizados para a retrobturação foram MTA branco (ANGELUS), Sealer 26 (Dentsply), Palacos-R (HERAEUS KULZER). Foram confeccionados dispositivos para fixação dos dentes aos tubos Eppendorfs. As amostras foram inoculadas com cepas de E. faecalis e incubadas a 37C, por um período de 60 dias, para análise da presença de turvação do meio Enterococosel. Para a realização da análise estatística foram utilizados os seguintes testes: Quiquadrado pela correção de Yates, Prova Exata de Fisher e pela curva de sobrevivência com os testes Mantel-Cox e o Gehan-Breslow-Wilcoxon. Os resultados mostraram que todos os grupos nos quais foi realizada a obturação e a posterior retrobturação apresentaram infiltração. Comparando todos os grupos, houve diferença significativa entre o Palacos-R e o Sealer 26. Mas não houve diferença significativa entre o Palacos-R e o MTA e nem do MTA com o Sealer 26. Em relação aos materiais retrobturadores, o Palacos-R obteve a menor infiltração, seguido do MTA branco e do Sealer 26. / The objective of this study was to compare the apical sealing ability of three root-end filling materials in teeth submitted to the microbial leakage by Enterococcus faecalis. Besides analyzing the occurrence of the microbial leakage in relation to the variable time.For such, 45 incisiv permanent superior teeth extracted from humans were used, which were instrumented with ProTaper Universal system (MAILLEFER) and filled by the Hybrid of Tagger compaction technique, with endodontic sealer: AH Plus (DENTSPLY). The apices were resected with the removal of 3mm of the apical third and the root-end cavities prepared with ultrasonic tips. The samples were subdivided, randomly, in three groups with 15 teeth each, and two control groups. The materials used for the retrofilling were white MTA (ANGELUS), Sealer26 (DENTSPLY), Palacos-R (HERAEUS KULZER). Devices were made for fixation of the teeth to the Eppendorf tubes. The filling samples were inoculated with strains of E. faecalis and incubated at 37C, for a period of 30 days, for analysis of the presence of turbidity of Enterococosel medium. For the accomplishment of the statistical analysis the following tests were used: Quisquare by Yates correction, Fisher Exact Test and survival curve testing Mantel-Cox and the Gehan-Breslow-Wilcoxon. The results showed that all the groups in which the filling was accomplished and the subsequent retrofilling presented leakage. Comparing all the groups, it had significant difference between the Palacos-R and Sealer 26. But it did not have significant difference between the Palacos-R and the MTA and nor of the MTA with Sealer 26. In regard to only the root-end filling materials, Palacos-R obtained the smallest leakage, followed by white MTA and Sealer26.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste trabalho consistiu na análise da infiltração apical em dentes retrobturados por três materiais: MTA, iROOT SP e Endo CPM Sealer. Para tal, foram utilizados 51 dentes humanos extraídos, incisivos centrais superiores, que foram instrumentados manualmente com limas tipo K, pela técnica Crown-down, obturados com compactação lateral e, após serem apicectomizados a 3mm aquém do ápice foram submetidos à retrobturação, com os três materiais propostos. As amostras foram divididas, randomicamente, em três grupos: GI MTA, GII iROOT SP e GIII Endo CPM Sealer, cada grupo com 15 amostras. Os dentes foram inseridos em tubos de eppendorfs, e feitos a impermeabilização do remanescente radicular utilizando duas camadas de cianocrilato, epóxi, e outra camada de esmalte. Em cada eppendorf foi adicionado caldo TSB estéril e uma suspensão de Enterococcos faecalis e adaptado ao frasco de vidro com meio de cultura enterococcosel. A infiltração bacteriana foi verificada pela turvação do meio de cultura. Após a análise no período de 60 dias, podemos concluir que durante esse tempo ocorreram infiltrações no Grupo I, 43,75 % das amostras apresentaram turvamento do meio de cultura demonstrando persistência da infecção. Já no Grupo II, 31,25 % das amostras tiveram crescimento bacteriano. Por fim no Grupo III, 25,00 % houve a infiltração. Grupos controle positivo e negativo para crescimento bacteriano foram realizados (n=3, cada). Os cimentos testados comportaram-se de maneira semelhante frente à infiltração bacteriana durante o período testado. / The objective of this study consisted in the analysis of apical leakage in retrofilled teeth by three materials: MTA, iROOT SP and Endo CPM Sealer. 51 extracted human central incisors were instrumented manually with K-type files by Crown-down technique, filled by lateral compactation and apicectomyzed to 3mm below the apex. Then, teeth were retrofilling with the three proposed materials. The samples were divided, randomly, in three groups: GI - MTA, GII - iROOT SP and GIII - Endo CPM Sealer, each group with 15 samples. Teeth were inserted into eppendorf tubes, and the remaining root were sealed using two layers of cyanoacrylate, epoxy, and another layer of nail varnish. In each eppendorf tube were added sterile TSB broth and a suspension of Enterococcos faecalis. The body proof was adapted to a glass bottle with culture medium Enterococcosel. The bacterial leakage was checked by turbidity of the culture medium. After analysis within 60 days the bacterial leakage was recorded: the Group I showed infiltration in 43.75% of body proof, the Group II in 31.25% and Group III 25%. Positive and negative control groups for bacterial growth were performed (n = 3, each). We can conclude that the tested cements behave similarly to bacterial infiltration front during the period tested.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano e a dissolução de biofilme promovido pela terapia fotodinâmica (PDT) associada com o hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5% e a clorexidina (CHX) sobre biofilmes mono-espécie e multi-espécies. No modelo de biofilme mono-espécie, quarenta e seis prémolares inferiores foram contaminados com cepas de Enterococcus faecalis (ATCCC 29212) por 21 dias. Os espécimes foram divididos em três grupos de acordo com a solução irrigadora utilizada: soro fisiológico, CHX 2% e NaOCl 2,5%. Após irrigação com 5 mL de cada irrigante, a PDT foi realizada. Amostras foram coletadas previamente aos protocolos de irrigação (S1), após irrigação (S2) e após PDT (S3). No modelo de biofilme multi-espécies, sessenta blocos de dentina bovina foram infectados intraoral e divididos em seis grupos: soro fisiológico, soro fisiológico/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT. Microscopia confocal a laser foi usada para avaliar a porcentagem e o biovolume de células vivas e o volume total de biofilme. Todos os grupos reduziram as contagens de UFCs após os procedimentos de irrigação (S1-S2); porém a CHX e o NaOCl promoveram as menores contagens de UFCs (P < 0,05). A PDT diminuiu significativamente a contagem bacteriana no grupo do soro fisiológico (S2-S3; P < 0,05). No modelo de biofilme multi-espécies, a menor quantidade de células vivas foi observada nos grupos CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT, sem diferenças entre si (P > 0,05). A PDT não reduziu o volume total de biofilme (P > 0,05); porém parece diminuir o biovolume e a quantidade de células vivas após irrigação com CHX 2% e NaOCl 2,5%. A terapia fotodinâmica associada ao soro fisiológico reduziu a carga bacteriana em canais infectados com E. faecalis. A PDT parece reduzir a quantidade e o volume de células vivas, mas não o volume total de células em biofilme multiespécies induzido in situ. Finalmente, o tipo de irrigante foi decisivo para dissolver biofilme multi-espécies. / The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect and the biofilm dissolution promoted by photodynamic therapy (PDT) associated with 2.5% NaOCl and 2% CHX over monospecies and multispecies biofilms. In monospecies biofilm model, forty-six mandibular premolars were contaminated with Enterococcus faecalis strains (ATCC 29212) broth culture for 21 days. Specimens were divided into three groups according to the irrigant used: saline, 2% of CHX and 2.5% of NaOCl. After irrigation with 5 mL of each irrigant, PDT was performed. Samples were collected at baseline (S1), after irrigation (S2) and after PDT (S3). In multispecies biofilm model, sixty bovine dentin blocs were infected intraorally, and divided into six groups: saline, saline/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT. Confocal laser scanning microscopy was used to assess the percentage and the biovolume of live cells and the total biovolume. All groups reduced UFC’ counts after irrigation procedures (S1-S2); however CHX and NaOCl promoted the lowest UFCs counts (P < 0.05). PDT significantly reduced the bacterial counts in saline group (S2-S3; P < 0.05). In multispecies biofilm model, the lowest amount of live cells was observed in CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT groups, with no differences among them (P > 0.05). PDT did not reduce the total biovolume (P > 0.05); however it appears to decrease the biovolume and the amount of live cells after irrigation with 2% CHX and 2.5% NaOCl. PDT associated with saline reduced the bacterial load in canal infected with E. faecalis. PDT seems to reduce the amount and the biovolume of live cells, but did not reduce the total biovolume of cells in multispecies biofilm induced in situ. Finally, the irrigant was decisive to dissolve multispecies biofilm.

Enterococcus são associados à microbiota intestinal de mamíferos e aves. Além dos primatas apresentarem estreita relação evolutiva com seres humanos, é pouco conhecido o impacto da resistência antimicrobiana associada às bactérias comensais, como os enterococos. O trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar enterococos isolados de amostras fecais de macacos-prego (Sapajus nigritus) em relação a determinantes de resistência e virulência. As amostras foram coletadas de animais vivendo em cativeiro no Zoológico de Sapucaia do Sul (ZOO) e selvagens, nas cidades de São Sebastião do Caí (SSC) e Santa Cruz do Sul (SCS). As espécies isoladas foram identificadas utilizando a técnica de MALDI-TOF. Estas foram testadas frente a 12 antimicrobianos através do método disco difusão. Genes que conferem resistência à tetraciclina (tetM, tetL e tetS), fluoroquinolonas (gyrA), eritromicina (msrC e ermB) e virulência (agg, esp, cylA, ace e gelE) foram detectados por PCR. Foram identificados 296 isolados de Enterococcus sp. oriundos de 24 amostras fecais de macacos-prego. Destes, 137 eram oriundos de amostras de SSC, 86 de SCS e 73 do ZOO. A espécie mais encontrada foi E. faecalis (42,6 %), seguida de E. hirae (29,4 %) e E. faecium (15,5 %). Cento e noventa e nove amostras (67,2 %) apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos. As amostras apresentaram menos suscetíveis para rifampicina (46,3 %), tetraciclina (26,0 %) e eritromicina (22,3 %). Entre os isolados, E. faecalis (69,0 %) apresentou as maiores frequências de suscetibilidade reduzida. Em relação ao local de coleta, 69,3 % dos isolados das amostras SSC apresentaram suscetibilidade reduzida a antimicrobianos, 69,7 % dos isolados das amostras SCS e 60,2 % dos isolados das amostras do ZOO, sendo atribuído perfil de múltipla resistência a 29 isolados de SSC, 6 isolados SCS e 8 de ZOO. As amostras ZOO apresentaram maiores índices para os genes de resistência msrC (81,8 %), gyrA (60,7 %) e tetL (44,4 %). Para o gene tetM os isolados de SCS apresentaram maior frequência (100 %). As amostras SSC e SCS apresentaram as maiores porcentagens para o gene gelE (100 %). Para esp (3,5 %), ace (93,0 %) e agg (10,5 %), as amostras SCS apresentaram as maiores porcentagens. As presenças de determinantes de resistência e virulência nas amostras foram atribuídas tanto à ação antropogênica encontrada no habitat dos macacos como através do próprio resistoma ambiental. Ainda, a proximidade dos animais com o ser humano demonstrou ser uma das principais fontes de disseminação de resistência bacteriana. / Enterococcus is associated with the intestinal microbiota of mammals and birds. In addition to primates having a close evolutionary relationship with humans, the impact of antimicrobial resistance associated with commensal bacteria, such as enterococci, is little known. The objective of this work was to identify and characterize isolates of enterococci from faecal samples of black capuchin monkey (Sapajus nigritus) in relation to determinants of resistance and virulence. The samples were collected from animals living in the Sapucaia do Sul Zoo (ZOO) and wild, in the cities São Sebastião do Caí (SSC) and Santa Cruz do Sul (SCS). The isolated species were identified using the MALDI-TOF technique. These were tested against 12 antimicrobials using the disc diffusion method. Genes that confer resistance to tetracycline (tetM, tetL and tetS), fluoroquinolones (gyrA), erythromycin (mrsC and ermB) and virulence (agg, esp, cylA, ace and gelE) were detected by PCR. It were identified 296 isolates of Enterococcus sp. from 24 faecal samples of S. nigritus. Of these, 137 were from SSC samples, 86 from SCS and 73 from ZOO. The most common species was E. faecalis (42.6 %), followed by E. hirae (29.4 %) and E. faecium (15.5 %). One hundred and ninety-nine samples (67.2%) presented reduced antimicrobial susceptibility. The samples were less susceptible to rifampicin (46.3%), tetracycline (26.0%) and erythromycin (22.0%). Among the isolates, E. faecalis (69.0%) had the highest frequencies of reduced susceptibility. Regarding the collection site, 69.3% of the SSC isolates presented reduced susceptibility to antimicrobials, 69.7% of the isolates from the SCS samples and 60.2% from the isolates from the ZOO samples, with a multiple resistance profile 29 SSC isolates, 6 SCS isolates and 8 ZOO isolates. The ZOO samples presented higher indices for the resistance genes msrC (81.8%), gyrA (60.7%) and tetL (44.4%). For the tetM gene the SCS isolates showed a higher frequency (100%). The SSC and SCS samples showed the highest percentages for the gelE gene (100%). For esp (3.5%), ace (93.0%) and agg (10.5%), the SCS samples presented the highest percentages. The presences of resistance and virulence determinants in the samples were attributed both to the anthropogenic action found in the monkey habitat and through the environmental resistance itself. Furthermore, the proximity of animals to humans has been shown to be one of the main sources of dissemination of bacterial resistance.

O meio ambiente aquático vem recebendo grande carga de poluição fecal, sendo este um dos fatores que contribuem para sua degradação. O objetivo deste trabalho foi identificar bactérias do gênero Enterococcus em oito pontos ao longo da Lagoa dos Patos – RS, com diferentes níveis de degradação ambiental e verificar a resistência a antimicrobianos nestes isolados. Foi observado que nos pontos situados no Parque Itapuã e na praia do Cassino as contagens de Enterococcus sp. foram baixas. Os pontos situados em Tapes e São Lourenço do Sul apresentaram níveis elevados de contagens de Enterococcus sp no verão e na primavera e os pontos na região estuariana de Rio Grande apresentaram valores elevados no outono e inverno. Dentre os antimicrobianos testados a resistência a tetraciclina e a doxaciclina foram verificadas em todos os pontos de coleta, sendo que as maiores percentagens de isolados resistentes foram na região estuarina de Rio Grande. Os Enterococcus spp também apresentaram suscetibilidade diminuída para ampicilina, gentamicina (120μg/ml) e estreptomicina (300 μg/ml) e nenhuma para vancomicina. Entre os isolados resistentes a tetraciclina, as duas espécies mas frequentemente identificadas foram E. faecalis e E. faecium. O nível de resistência à tetraciclina, verificada através da Concentração Inibitória Mínima (CIM), variou de 16μg/ml a 256μg/ml nas duas espécies. Isolados de E. faecalis foram encontrados mais em Tapes e São Lourenço do Sul e E. faecium na região estuarina de Rio Grande, os últimos apresentaram os maiores níveis de resistência a tetraciclina e gentamicina. Os resultados do presente estudo indicam que a contaminação fecal pode estar relacionada ao descarte de dejetos humanos e de animais nestes locais. / The aquatic environment has been receiving a great amount of fecal pollution and this is one of the factors that contribute to its degradation. The aim of the present study was to identify Enterococcus sp in eight collection points with different levels of environmental degradation at Lagoa dos Patos/RS and to verify the antimicrobial resistance among these isolates. We verified low numbers of Enterococcus sp in Parque Itapuã e Praia do Cassino collection points. In Tapes and São Lourenço do Sul, higher counting of Enterococcus were observed during summer and spring seasons and at the estuarine area of Rio Grande, higher numbers were observed during autumn and winter. Among the antimicrobial drugs tested, the resistance to tetracycline and doxycycline was detected in all collection sites and the highest percentages of resistant isolates were in the estuarine area of Rio Grande. The Enterococcus spp have also presented diminished susceptibility to ampicillin, gentamicin (120μg/ml) and streptomycin (300 μg/ml) and none to vancomycin. Among the isolates resistant to tetracycline, E. faecalis e E. faecium were the most identified species. The resistance level to tetracycline, verified by MIC analysis, varied from 16μg/ml to 256μg/ml in both species. E. faecalis isolates were found mostly in Tapes and São Lourenço and E. faecium, in the estuarine area of Rio Grande and among these, the higher level of resistance to tetracycline and gentamycin was verified. The results from the present study indicate that the fecal contamination from this sampling points can be related to the discharge of human and animal waste.

Cofatores ferro-enxofre são grupos prostéticos inorgânicos ubíquos e evolutivamente ancestrais, cuja formação é dependente de complexas maquinarias protéicas. Três sistemas de formação distintos já foram determinados, denominados sistemas NIF, ISC e SUF. Apesar de bem descritos em diversos organismos, estas maquinarias são pouco caracterizadas no filo Firmicutes, o qual agrupa diversas bactérias patogênicas, e onde Enterococcus faecalis aparece como um representante clinicamente relevante. O objetivo deste estudo foi identificar a maquinaria biossintética de formação dos cofatores [Fe-S] de E. faecalis mediante análises de bioinformática, determinação das regiões promotoras do operon e de elementos cis-atuantes, padrão de expressão gênica, caracterização bioquímica dos elementos encontrados e comparação entre as maquinarias de associação do cofator [Fe-S] presente em Proteobacteria e Firmicutes através da capacidade de complementação deste sistema nos sistemas ISC e SUF de Azotobacter vinelandii e Escherichia coli, respectivamente. Metodologias de bioinformática permitiram identificar representantes da maquinaria SUF de formação dos cofatores [Fe-S], previamente identificado em Proteobacteria, apresentando os genes sufB, sufC, sufD e sufS e a presença de sufU, o único representante homólogo do sistema ISC, codificando possível proteína arcabouço, no lugar de sufA; da mesma forma, sufE e sufR não foram identificadas. A alta conservação deste sistema foi verificada em Firmicutes através de análises filogenéticas. Análise de sequências primária e estrutural de SufU verificaram um padrão estrutural similar à IscU. Modelagem molecular de SufU de E. faecalis apresentou dados de alta flexibilidade na região do sítio ativo, bem como a presença de região específica em Firmicutes, denominada região Gram-positiva (GPR), possivelmente envolvida em interações com outros fatores e/ou reguladores. SufU e o complexo SufSU são capazes de reconstituir cofactor [4Fe-4S], apresentando-se portanto como a proteína arcabouço do sistema. A enzima SufS purificada apresenta PLP ligado como cofator e atividade de cisteína desulfurase. Esta enzima apresenta um residuo catalítico essencial de cisteína na posição 365 , e necessita SufU como ativador, onde outro residuo de cisteína (128) atua como aceptor do enxofre durante a reação de transpersulfuração. SufC apresenta atividade ATPase, porém em nível reduzido em comparação ao homólogo de E. coli; SufD apresenta alta similaridade com homólogo de proteobactérias. Por outro lado, SufB não apresenta os resíduos de cisteína previamente descritos como importantes na formação dos cofatores [Fe-S] em outros organismos, assim sua função no sistema ainda deve ser determinada. Experimentos in vivo demonstraram a conservação específica de sistemas biossintéticos dos cofatores [Fe-S], onde o operon SUF de E. faecalis não foi capaz de complementar os sistemas ISC de Proteobacteria, porém complementou sistema SUF de E. coli, tornando viáveis mutantes de ambos os operons sufABCDSE e iscRSU-hscBA-fdx. / Iron-sulfur clusters are ubiquitous and evolutionary ancient inorganic prosthetic groups, which biosynthesis depends on complex protein machineries. Three distinct assembly systems involved in the maturation of cellular Fe-S proteins have been determined, designated the NIF, ISC and SUF systems. Although well described in several organisms, these machineries are poorly understood in the Firmicutes phylum, which groups several pathological bacteria, where Enterococcus faecalis rises as a clinical relevant representative. The aim of this study was to identify the E. faecalis [Fe-S] cluster biosynthetic machinery through bioinformatics analysis, determination of operon promoter regions and cis-acting elements, relative genetic expression pattern, biochemical characterization of putative elements, and comparison of Proteobacteria and Firmicutes machineries through the ability of complementing Azotobacter vinelandii and Escherichia coli ISC and SUF systems, respectively. Bioinformatics methods enabled us to identify representatives of the SUF machinery for [Fe-S] cluster biosynthesis, previously verified in Proteobacteria showing conserved sufB, sufC, sufD and sufS genes and the presence of sufU, the only ISC homolog representative, coding for putative scaffold protein, instead of sufA; neither sufE nor sufR are present. High conservancy of this system for Firmicutes bacteria was verified through phylogenetic analysis. Primary sequences and structural analysis of the SufU protein demonstrated its structural-like pattern to the scaffold protein IscU. E. faecalis SufU molecular modeling showed high flexibility over the active site regions, and demonstrated the existence of a specific region in Firmicutes, the Gram positive region (GPR), a possible candidate for interaction with other factors and/or regulators. SufU is able to reconstitute a [4Fe-4S] cluster, such as the complex SufSU, arising as the scaffold protein in the system. Purified SufS corresponds to a PLP containing enzyme with cysteine desulfurase activity. It encloses a catalytically essential cysteine residue at position 365, and requires SufU as activator, where another cysteine residue (128) works as a proximal sulfur acceptor site for transpersulfurization reaction. SufC presents ATPase activity, though in a reduced level, when compared to the Escherichia coli homolog; SufD also shares high similarity with proteobacterial SufD. On the other hand, SufB does not present cysteine residues previously described as important involved in the [Fe-S] cluster formation process of other organisms, therefor its function in the system still have to be determined. In vivo experiments enabled us to dfemonstrate the conservancy of specific [Fe-S] cluster biosynthetic systems, where E. faecalis SUF operon was not able to complement Proteobacteria ISC systems, but complemented E. coli SUF system, turning viable mutants of both sufABCDSE and iscRSU-hscBA-fdx operons.

Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-04-23T13:15:59Z No. of bitstreams: 1 Tese Adalberto-sec.pdf: 2049819 bytes, checksum: 0026f018d6cf9d214f61bde027fee682 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Meirelles(rodrigomei@ufba.br) on 2013-05-08T11:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Adalberto-sec.pdf: 2049819 bytes, checksum: 0026f018d6cf9d214f61bde027fee682 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-08T11:52:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Adalberto-sec.pdf: 2049819 bytes, checksum: 0026f018d6cf9d214f61bde027fee682 (MD5) Previous issue date: 2004 / Sendo a doença periodontal alterações imuno-inflamatórias resultantes da resposta do hospedeiro à placa bacteriana, a eliminação da placa e cálculo com descontaminação das superfícies radiculares são condições fundamentais para restabelecimento e manutenção da saúde periodontal. O objetivo deste trabalho foi avaliar, ?in vitro?, a efetividade de dois métodos de raspagem mecânica ? manual e ultrasônica ? associadas ou não ao digluconato de Clorexidina, e, ainda, este usado separadamente, em dentes comprometidos periodontalmente. As unidades dentárias foram seccionadas transversalmente na região cervical e ápice radicular, ficando a porção experimental com aproximadamente 10mm. A amostra constava de trinta e cinco dentes, divididos em sete grupos. As porções dentais experimentais foram vedadas com resina e os grupos codificados e identificados por cores diferentes, em razão do tratamento a ser realizado em cada um dos grupos, como se segue: grupo 1- raspagem manual; grupo 2- raspagem ultra-sônica; grupo 3- raspagem manual associada ao digluconato de Clorexidina; grupo 4- raspagem ultra-sônica associada ao digluconato de clorexidina; grupo 5- uso isolado de digluconato de clorexidina; grupo 6- controle negativo (-); e grupo 7- controle positivo (+). Os fragmentos foram esterilizados e contaminados com cepa de Enterococcus faecalis 5u-ATCC- 29212, exceto o grupo controle positivo. No grupo 1, foi utilizado tratamento com movimentos sequênciais de curetas manuais de Gracey, em direção longitudinal; nos demais grupos seguiu-se a mesma normatização de instrumentação, quando necessário; O grupo 2 foi tratado com ultrasom em potência de 70; O grupo 3 foi tratado com curetas manuais de Gracey, mais aplicação de Clorexidina; O grupo 4 foi tratado com ultrasom em potência de 70%, mais aplicação de Clorexidina; O grupo 5 foi tratado somente com Clorexidina; O grupo 6 referiu-se ao grupo contaminado não tratado (grupo controle negativo); e o grupo 7 referiu-se ao grupo estéril não tratado (grupo controle positivo). Após realização dos diversos experimentos entre os diferentes grupos amostrais, e os dados serem avaliados, pôde-se concluir que: tanto as instrumentações isoladas, quanto as associadas à Clorexidina foram efetivas no controle da bactéria Enterococcus faecalis, e, ainda, a efetividade foi similar para ambos os métodos de raspagem ? manual e ultra-sônica ? no controle da bactéria. / Salvador