Enterococos são ubíquos no ambiente e fazem parte da microbiota do trato gastrintestinal de humanos e animais. A importância dessas bactérias tem sido associada com infecções hospitalares e resistência a múltiplas drogas, principalmente à vancomicina. O objetivo do presente estudo foi realizar a caracterização molecular de cepas de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina (VRE) isoladas a partir de amostras coletadas de pacientes hospitalizados, água superficial de rios urbanos e carne de frango comercializada no Brasil. A presença do gene vanA foi confirmada em 20 cepas multirresitentes isoladas durante 1997-2011. Dentre os isolados VRE, 12 cepas foram identificadas como E. faecium e oito como E. faecalis. Cepas de E. faecium isoladas de amostras clínicas e águas foram classificadas como clonalmente relacionadas pelo PFGE, com perfil virulência predominante (acm+, esp+). Adicionalmente, enquanto cepas de E. faecium isoladas dos rios pertenceram aos ST203, ST412 e ST478 (previamente caracterizados como endêmicos em hospitais brasileiros), novos STs foram identificados entre as cepas de E. faecalis (ST614, ST615 e ST616) e E. faecium (ST953 e ST954) isoladas de alimentos. Sequências completas do transposon Tn1546 das cepas clínicas VREfm 320/07 (ST478) e ambiental VREfm 11 (ST412) mostraram Tn1546-like element de ~12800 pb, com um ponto de mutação no gene vanA na posição 7.698 (substituição do nucleotídeo T pelo C) e uma no gene vanX na posição 8.234 (G pelo T). Além disso, uma deleção na extremidade esquerda do Tn1546, e as sequências IS1251 e IS1216E na região intergênica vanHS e vanYX, respectivamente, também foram detectados. A este respeito, a IS1216E na região intergênica vanXY constitui um conjunto de genes previamente relatado em cepas clínicas de VREfm no Brasil, denotando uma característica regional. IS1216E tem sido associada com os genes tcrB e aadE que conferem resistência ao cobre e aminoglicosídeos, em E. faecium e Streptococcus agalactiae, respectivamente. Portanto, essa IS pode contribuir para a rápida aquisição de resistência antimicrobiana entre as espécies de cocos Gram-positivos clinicamente importantes. Os tipos de Tn1546 indistiguíveis que foram identificados no atual estudo isolados de humano e ambientes aquáticos sugerem uma comum partilha de um pool de genes de resistência à vancomicina. / Enterococci are ubiquitous in the environment and in the intestinal tract of humans and animals. The importance of these bacteria has been associated with nosocomial infection and multiple resistance to antimicrobial agents, mainly vancomycin. The aim of the present study was to perform molecular characterization of vancomycin-resistant Enterococcus spp. strains (VRE) isolated from hospitalized patients, surface water of urban rivers and retail chicken meat in Brazil. The presence of the vanA gene was confirmed in 20 multidrug-resistant strains isolated in 1997-2011. Among these VRE isolates, (n = 12) were identified as E. faecium and (n = 8) as E. faecalis. E. faecium strains isolated from water and clinical samples were classified as clonally related by PFGE, the predominant virulence profile being (acm+, esp+). Additionally, while E. faecium strains isolated from rivers belonging to ST203, ST412 and ST478 (previously characterized as endemic in Brazilian hospitals), new STs were identified among strains of E. faecalis (ST614, ST615 and ST616) and E. faecium (ST953 and ST954) isolated from food. Complete sequences of transposon Tn1546 from VREfm clinical strain 320/07 (ST478) and environmental strain VREfm 11 (ST412) showed a Tn1546-like element of ~12800 bp, with T7698C vanA and G8234T vanX mutations. Moreover, deletion of the Tn1546 left extremity, and the IS1251 and IS1216E sequence inside the vanHS and vanYX intergenic region, respectively, were also detected. In this regard, the IS1216E sequence inside the vanXY intergenic region constitutes a gene array previously reported for Brazilian VREfm clinical strains alone, denoting a regional characteristic. IS1216E has been associated with tcrB and aadE genes, which confer resistance to copper and aminoglycosides, in E. faecium and Streptococcus agalactiae, respectively. Therefore, IS1216E should contribute to rapid acquisition of antimicrobial resistance among species of the clinically important Gram-positive cocci. On the other hand, Tn1546-like elements were identical among clinical and environmental VREfm isolates, suggesting sharing of a common vancomycin resistance gene pool.

A proposta deste estudo foi avaliar a infiltração bacteriana em dentes obturados pela técnica de condensação lateral, cone único modificada e termoplastificada por onda contínua de condensação. Quarenta e nove raízes disto-vestibulares de molares superiores padronizados no limite de trabalho de 9 mm foram instrumentados com sistema ProTaper até lima F2, e assim divididos em 3 grupos (n=15) de acordo com a técnica de obturação: G1 cone único modificada, G2 condensação lateral, e G3 - termoplastificada por onda contínua de condensação e injeção de guta percha. O grupo controle positivo foram 2 espécimes sem obturação, e o grupo controle negativo foram 2 espécimes obturados pela técnica de condensação lateral e abertura coronária selada com cianoacrilato. As raízes foram impermeabilizadas deixando 2 mm apicais livre e montadas no aparato de duplo compartimento. Após esterilização com óxido de etileno, 3 ml de TSB estéril foi inoculado no compartimento inferior, e 400 l de caldo contendo Enterococcus faecalis no compartimento superior. A nutrição bacteriana foi realizada a cada 48 h através da retirada de 200 l de caldo bacteriano e adição de 200 l de TSB. O TSB contido no compartimento inferior foi checado a cada 48 h para verificar presença de turvamento num período experimental de 30 dias. O grupo controle positivo infiltrou em 24 h, e nenhum controle negativo apresentou infiltração em 30 dias. No tempo experimental, o grupo do cone único modificado apresentou 73,3% das amostras infiltradas, a condensação lateral apresentou 66,6%, e a termoplastificada 53,3%, não havendo diferença significante entre os grupos aplicando-se os testes do Quiquadrado e Kruskal-Wallis (p>0.05). Pode-se concluir que a técnica de cone único modificada apresenta capacidade de selamento semelhante à técnica de condensação lateral e termoplastificada por onda contínua. / The aim of this study was to evaluate bacterial leakage in root canals obturated with lateral condensation, modified single-cone and continuous wave of condensation techniques. Forty-nine distobuccal root canals of upper molars were standardized with 9 mm of working length. Then the canals were shaped by ProTaper Rotary system up to F2, and divided in three groups (n=15) according to obturation technique: G1 modified single-cone, G2 lateral condensation and G3 continuous wave of condensation. The positive control was two no obturated root canals, and positive control two root canals obturated with lateral condensation technique and coronal opening sealed with cyanoacrylate. The roots external surfaces were sealed, except for the apical 2 mm around the apical foramen, and the bacterial leakage model of two chambers was used. After sterilization by ethylene oxide gas, 3 ml of TSB was poured into the lower chamber, and 400 l of soy broth containing Enterococcus faecalis was inoculated into the upper chamber. Bacterial nutrition was performed each through changing of 200 l of bacterial soy broth to 200 l of TSB. The TSB placed in the lower chamber was checked each 48 h to verify turbidity on the experimental period of 30 days. The positive control leaked within 24 h, and the negative control no leaked on 30 days. In the experimental period, modified single-cone technique showed leakage of 73,3% samples, lateral condensation showed 66,6%, and wave continuous of condensation 53,3%. There were no significant difference between the groups according to Chi-square and Kruskal-Wallis tests (p>0.05). It can be concluded that modified single-cone technique shows sealing ability semelhante to lateral condensation and continuous wave of condensation techniques.

O objetivo foi avaliar a influência da agitação ultrassônica (U) na atividade antimicrobiana e penetrabilidade de pastas de hidróxido de cálcio (HC) em propilenoglicol, com ou sem extrato etanólico de própolis (EEP) em propilenoglicol a 10%, através da Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL) e cultura microbiológica (CM). Para isso setenta e dois tubos de dentina bovina padronizados foram infectados com Enterococcus faecalis em caldo BHI (Brain Heart Infusion) utilizando um novo protocolo de contaminação com dois ciclos de centrifugação por 5 dias. Durante o período experimental os espécimes foram divididos em 4 grupos e preenchidos com as medicações a seguir: Grupo1- HC, Grupo 2 HC + EEP, Grupo 3 HC + U e Grupo 4 HC + EEP + U. A agitação ultrassônica foi realizada durante 1 minuto nas direções vestíbulo-lingual e mésio-distal, com o auxílio de um inserto liso. As medicações permaneceram no interior dos espécimes por 15 dias. A MCVL analisou as bactérias viáveis (verde) e mortas (vermelho), com o auxílio do corante Live and Dead® nos tubos de dentina após o período de medicação. A contagem de Unidades Formadoras de Colônia (UFCs) foi realizada a partir da cultura microbiológica (CM). As raspas de dentina foram coletadas e diluídas para semeadura em placas de Petri com ágar BHI. Para a penetração foi utilizado o corante Rodamina B durante a manipulação das pastas de HC e as análises feitas por MCVL. O grupo 1 (HC) mostrou a maior viabilidade bacteriana nos tubos de dentina contaminados e o grupo 4 (HC + EEP +U) a menor. A agitação ultrassônica (U) reduziu significativamente a viabilidade bacteriana para todos os grupos. A pasta de HC + EEP mostrou-se mais eficaz que aquela somente com HC (p<0,05%). Concluiu-se que a agitação ultrassônica das pastas de HC aumentou sua atividade antimicrobiana e possibilitou maior penetração intratubular, com preenchimento de túbulos dentinários. / The purpose was to evaluate the influence of ultrasonic agitation (U) on the antimicrobial potential and penetrability of calcium hydroxide (CH) pastes with or without the ethanolic extract of propolis (EEP) in propylene glycol (10%) using Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) and microbiological cultures (MC) of infected dentin. Seventy two cylindrical dentin specimens were infected with Enterococcus faecalis in BHI broth using a new contamination protocol for 5 days with centrifugations. During the experimental period, the specimens were divided into 4 groups and dressed with the following: Group1- CH paste, Group 2 - CH + EEP, Group 3 CH + U and Group 4 CH + EEP + U. The ultrasonic activation was made during 1 minute in both directions (buccal-lingual / mesio-distal), with the aid of plain point insertion. The medications remained in the root canals for 15 days. The CLSM analyzed the viable (green) and dead (red) bacteria in the infected dentinal tubules, with Live and Dead dye. The colony forming units (CFUs) count was made possible with the MC method. The dentinal wall debris were collected and diluted to be seeded on Petri BHI-agar plates. For the penetration test, the dye Rodamine B was added to CH pastes during the manipulation and analysed by CLSM. Group 1 (CH) showed the greatest bacteria viability in the infected dentinal tubes and Group 4 (CH + EEP+ U) the lowest. Ultrasonic activation created a significant reduction of bacteria viability for all groups. The CH + EEP paste was more bactericidal than the CH (p< 0.05%). It was possible to conclude that ultrasonic activation of CH pastes increased the antimicrobial action and was responsible for better intradentinal penetration with fulfilling of the dentinal tubules.

O preparo biomecânico acompanhado pela irrigação no tratamento endodôntico de canais infectados tem se mostrado efetivo, porém alguns micro-organismos ainda sobrevivem. A espécie bacteriana mais frequentemente encontrada em casos de fracasso endodôntico é Enterococcus faecalis. Para combatê-lo diferentes medicações intra-canal são utilizadas, principalmente as pastas a base de hidróxido de cálcio e outras substâncias vem sendo associadas a estas para potencializar seu efeito antimicrobiano. Desta forma, é pertinente comparar in vitro a capacidade antimicrobiana do hidróxido de cálcio com diferentes veículos e aditivos, sobre Enterococcus faecalis, através de cultura microbiológica e microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). Para isso, tubos de dentina bovina padronizados foram previamente esterilizados e em seguida contaminados durante 5 dias com a bactéria. Os espécimes receberam a medicação por 15 dias e foram divididos em cinco grupos-teste: pasta de hidróxido de cálcio veiculado em água destilada (G1), pasta veiculada em propilenoglicol(G2), pasta de hidróxido de cálcio veiculado em propilenoglicol com os aditivos extrato etanólico de própolis (G3), clorexidina (G4) e paramonoclorofenol canforado - PMCC (G5). Após o período da medicação, a coleta bacteriana dos fragmentos de dentina foi realizada com brocas de Largo em dispositivo esterilizado, para contagem dos micro-organismos ainda viáveis em unidades formadoras de colônias. A MCVL analisou as bactérias viáveis (verde) e mortas (vermelho) no interior dos túbulos dentinários, com o auxílio do corante Live and Dead®. Houve ação antimicrobiana intra-tubular dentinária sobre Enterococcus faecalis por todas as pastas de hidróxido de cálcio testadas. A partir deste trabalho foi possível observar a melhor ação antimicrobiana contra E. faecalis pela pasta de hidróxido de cálcio com propilenoglicol e PMCC nas regiões superficial e profunda da massa dentinária. / Biomechanical preparation followed by irrigation in endodontic treatment of infected root canals has been shown, however, some micro-organisms still survive. The most frequently founded bacterial specie in endodontic treatment fail is Enterococcus faecalis. To combat it, different intra-canal medications are used, mainly the calcium hydroxide pastes and other substances have been associated to calcium hydroxide to leverage it antimicrobial effect. Thus, its relevant to compare in vitro the antimicrobial ability of calcium hydroxide with different vehicles and additives, against Enterococcus faecalis, through microbiological culture and confocal laser scanning microscopy (CLSM). For this, standard dentine tubes were sterilized and then infected with the bacteria for 5 days and were divided in five test-groups, submitted to medication for 15 days with calcium hydroxide paste in distilled water (G1), in propylene glycol (G2), besides clacium hydroxide in propylene glycol with ethanol extract of propolis (G3), chlorexidine (G4) and CPMC (G5). After the medication period, the bacterial collection of the dentine´s fragments was done with Largos drill in a sterilized device, to count micro-organisms still viable in colony forming units. The CLSM evaluated the viable (green) and dead (red) bacteria inside the dentinal tubules with the aid of the Live and Dead® dye. There was dentinal intra-tubular antimicrobial action against Enterococcus faecalis for all the tested calcium hydroxide pastes. From this work was possible to observe a better antimicrobial activity against Enterococcus faecalis by the calcium hydroxide paste in propylene glycol and CPMC in superficial and deep areas of the dentine.

A utilização de implantes osseointegráveis e componentes protéticos tornaram-se recursos muito viáveis à resolução de casos simples e complexos na odontologia reabilitadora. No entanto, a junção implante componente pode apresentar problemas, tais como a presença de um microgap entre essas partes constituintes. Assim, vários materiais tem sido testados na tentativa de obstruir esse espaço, com resultados controversos. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o comportamento de um adesivo anaeróbico (Loctite® 510, Henkel Ltda) monocomponente, de alta resistência e inerte, na vedação do microgap impedindo a passagem bacteriana do meio externo para o interno do conjunto. Foram utilizados 90 implantes de conexão externa hexagonal (n = 30), conexão interna hexagonal (n = 30) e conexão interna cônica (n = 30), divididos em Grupo Controle (n = 45) e Grupo Teste (n = 45). Os implantes foram abertos em fluxo laminar e cada unidade recebeu 3l de BHI estéril internamente. Sobre cada unidade era parafusado um componente protético especifico para cada marca e com torques recomendados pelos fabricantes com torquímetro digital. Os conjuntos Teste receberam ainda uma fina camada de adesivo que era aplicada com microbrush entre as partes; e todas as unidades dos grupos Controle e Teste foram vedados com material obturador provisório na sua porção mais coronal. Cada conjunto foi então imerso em 75 l de Enterococcus faecalis (ATCC 29212) em minitubos até o limite entre a junção implante/componente protético. Todas as amostras foram incubadas em estufa bacteriológica por 7, 14 e 28 dias a 37oC antes de serem reabertas. Após o período proposto, o conteúdo interno dos implantes foi coletado com cones de papel estéreis, diluído e semeado em placas de Petri, incubadas por 48 horas. Houve diferença significante entre o grupo teste e controle no grupo de conexão externa hexagonal, em todos os tempos (Teste de Fischer e Qui-quadrado, p 0.05). O adesivo anaeróbico testado funciona como barreira, não permitindo a migração de bactérias para o meio interno do conjunto implante/componente protético. / The use of dental implants and prosthetic components have become very feasible resources to solve simple and complex cases in rehabilitation dentistry. However, the implant component junction may present problems, such as the presence of a microgap between these components parts.Therefore, several materials have been tested in an attempt to obstruct this space, with controversial results. The objective of this study was to evaluate in vitro the behavior of an anaerobic monocomponent adhesive (Loctite® 510, Henkel Ltda), high resistance and inert characteristics, in the microgap seal preventing bacterial passage from the external side to the inner side of the assembly. A total of 90 implants were used, with hexagonal external connection (n = 30), internal hexagonal connection (n = 30) and internal conical connection (n = 30) divided into Control Group (n = 45). Implants were opened in laminar flow cabinet and each unit received 3l of sterile BHI internally. On each unit a specific prosthetic component was screwed in for each brand and with torques recommended by the manufacturers with digital torque wrench. The sets of Test also received a thin layer of adhesive that was applied with microbrush between the parts; and all units of the Control and Test groups were sealed with provisional obturator material in their most coronal portion. Each set was immersed in 75 l of Enterococcus faecalis (ATCC - 29212) in mini-tubes to the limit between the implant / prosthetic component junction. All samples were incubated in a bacteriological incubator for 7, 14 and 28 days at 37oC before being reopened. After the proposed period, the internal contents of the implants were collected with sterile paper cones, diluted and seeded in Petri dishes, incubated for 48 hours. There was a significant difference between the test and control groups in the hexagonal external connection group at all times (Fischer and Chi-square test, p 0.05). The anaerobic adhesive tested works as a barrier, not allowing the migration of bacteria into the internal environment of the implant / prosthetic component assembly.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Rita.pdf: 19490568 bytes, checksum: 013237cc37f3177397fb7ac6f745899e (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / The present study aimed to introduce new intracanal medications and evaluate their antimicrobial effect against endodontic microorganisms involved in most of the cases of endodontic failure. The composition of the new formulations included 3% doxycycline hydrochloride (DX) or 3% nitrofurantoin (NIT), and a 2% chlorhexidine gel (CHX) was used as a positive control.This study was divided into three phases. The first phase evaluated the antimicrobial effect of the formulations DX and NIT against Gram-positive bacteria, Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus, Gram-negative bacteria, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, and fungus Candida albicans. The formulations were tested using the traditional agar diffusion test and the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) test. Based on the descriptive analysis of the agar diffusion test, DX presented a better antibacterial effect for most bacteria in the study. NIT values were lower than the CHX’s for all bacteria, with the exception of E. coli. DX and NIT were found ineffective for C. albicans. The descriptive analysis of MIC showed that DX was more effective than NIT, but when compared with CHX, it presented a lower antimicrobial effect. The second phase evaluated the antimicrobial effect against E. faecalis on the external root surface and the ability of diffusion through dentinal tubules of the new intracanal medications. Fifty human canine teeth were instrumented, sterilized and randomly divided into 5 groups of 10 teeth each, according to the formulation used as intracanal dressing: teeth sealed without medication (SM), negative control; CHX, positive control; placebo gel (PC); NIT and DX. After filling the root canals with the formulations, the teeth were incubated in the agar plates seeded with E. faecalis. The analysis of the halos revealed that DX had a larger inhibitory zone than CHX, while PC and NIT showed no antibacterial effect on the external root surface. The last phase evaluated the antimicrobial activity on infected root canals with E.faecalis. The chosen formulation was DX, as it obtained the best results on previous phases. Microbial samples were collected during three different time periods. The first sample (S1) was collected 21 days after contamination with E. faecalis; the second sample (S2) was collected 14 days under the effect of the intracanal medication, and the third sample (S3) 7 days after replacing the medication by BHI (Brain Heart Infusion) broth. The count of Colony Forming Units (CFU/mL) was statistically analyzed by repeated measures test (ANOVA) (p<0,05). All intracanal dressings significantly reduced the number of bacterial cells in the root canal after 14 days with medication (S2). After a period of 7 days with BHI broth (S3), the CFU counts of E. faecalis remained at low values in DX and CHX groups. The SM group, however, showed a significant increase of CFU in this period, to values similar to those of the initial contamination. These results show that DX was effective in eliminating E. faecalis from the root canal system, significantly decreasing the number of microorganisms after 14 days with medication and suggesting some substantivity after 7 days.Conclusion: From the two formulations suggested in this study, DX presented better antimicrobial effect against the microorganisms in the study (agar diffusion and MIC),supported by the effect on the external root surface and inside the root canal system. This new formulation containing DX can be considered as a possible intracanal dressing, namely in cases of endodontic failure. / Este estudo teve como objetivo investigar novas formulações de medicações intracanal e verificar a ação antimicrobiana destas em microrganismos frequentemente implicados em casos de insucesso endodôntico. As formulações estudadas continham doxiciclina a 3% (DX) ou nitrofurantoína a 3% (NIT), tendo sido usado como controlo positivo um gel de clorohexidina a 2% (CHX).O estudo foi dividido em três fases experimentais. Na primeira fase, foi analisado o efeito antimicrobiano das formulações DX e NIT, na presença das bactérias de Gram positivo, Enterococcus faecalis e Staphylococcus aureus, das bactérias de Gram negativo, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, e do fungo Candida albicans através de testes de difusão em agar e da determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Com base na análise descritiva dos resultados da difusão em agar, a DX foi a que apresentou maior efeito antimicrobiano, na generalidade das bactérias estudadas. Os resultados da NITforam inferiores aos da CHX em todas as bactérias do estudo, à exceção de E. coli.Tanto a DX como a NIT evidenciaram-se inativas para C. albicans. A análise descritiva da determinação da CIM revelou que a DX apresentou maior eficácia comparativamente com a NIT, mas resultados inferiores quando comparada com a CHX.Na segunda fase, as novas formulações foram avaliadas pela sua ação antimicrobiana, na superfície externa radicular, contra E. faecalis e eventual capacidade de difusão através dos canalículos dentinários. Foram usados 50 dentes humanos (caninos), previamente instrumentados e esterilizados, distribuídos aleatoriamente em cinco grupos (n=10), e atribuída uma formulação diferente a cada grupo: sem medicação (SM), controlo negativo; gel de clorohexidina a 2% (CHX), controlo positivo; gel placebo (PC); gel de nitrofurantoína a 3% (NIT); e gel de doxiciclina a 3% (DX). Preencheu-se o interior dos canais com as respetivas formulações e fez-se a incubação dos dentes em placas de agar com E. faecalis. A análise dos halos dos grupos em estudo demonstrou que a DX tem maior atividade na face externa da raiz do que a CHX, e que a NIT e o PC não evidenciaram ação antibacteriana no exterior da raiz. Na terceira e última fase, avaliou-se a ação antimicrobiana, em canais radiculares contaminados com E. faecalis. A formulação usada nesta fase foi a DX, uma vez que foi a que obteve melhores resultados nas duas fases anteriores. Efetuaram-se colheitas bacterianas em três períodos de tempo distintos. A primeira colheita (S1) realizou-se 21 dias depois da contaminação com E. faecalis; a segunda colheita (S2) foi efetuada 14 dias após a aplicação das formulações e a terceira colheita (S3), 7 dias depois da substituição das formulações por caldo de BHI (“Brain Heart Infusion”). A contagem das Unidades Formadoras de Colónias (UFC/mL) foi analisada através do teste de medidas repetidas (ANOVA) (p<0,05). Todas as novas formulações diminuíram significativamente o número de células bacterianas no interior dos canais após os 14 dias (S2) sob a ação da medicação intracanal. Depois do período de 7 dias com o caldo de BHI (S3), os valores de UFC de E. faecalis mantiveram-se em valores baixos nos grupos DX e CHX. No grupo SM verificou-se um aumento significativo para valores similares aos da contaminação inicial.Verificou-se, assim, que a DX foi eficaz na desinfeção dos canais, reduzindo significativamente o número de microrganismos após 14 dias e demonstrando alguma substantividade após 7 dias.Conclusão: Das duas formulações sugeridas neste estudo, o gel DX apresentou uma eficácia maior sobre os microrganismos estudados (difusão em agar e CIM), corroborado pela ação na superfície externa da raiz e no interior dos canais radiculares. Na formulação apresentada, o gel DX pode ser considerado como uma medicação intracanal alternativa, nomeadamente nos casos de insucesso endodôntico.

Resumo: O presente estudo avaliou, ex vivo, atividade antimicrobiana do ozônio, associado ao veículo propilenoglicol e ao hidróxido de cálcio em canais radiculares contaminados com Enterococcus faecalis. Foram utilizados 50 dentes humanos unirradiculados, doados pelo Banco de Dentes da Faculdade de Odontologia de Araraquara. Após remoção das coroas dentárias, os canais radiculares foram instrumentados até uma lima endodôntica tipo kerr de número 50, e em seguida, os espécimes foram esterilizados, e os canais radiculares contaminados com E. faecalis e incubados a 37 ± 1°C por 21 dias. Os espécimes foram aleatoriamente divididos em cinco grupos experimentais, de acordo com a medicação utilizada: GI - Ozônio com propilenoglicol (n=11); GII - hidróxido de cálcio com paramonoclorofenolcanforado - PMCC (n=11), GIII - propilenoglicol com pó de hidróxido de cálcio ozonizado (n=11), GIV - grupo controle positivo - não foi colocada nenhuma medicação (n=11) e GV - grupo controle negativo - não foram contaminados (n=6). As coletas foram realizadas coletas após sete e quatorze dias e o crescimento microbiano verificado por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) de E. faecalis. Os resultados que foram submetidos ao teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn e também pelo teste nãoparamétrico de Friedman sendo ambos com um nível de significância de 0,05, mostraram que o propilenoglicol ozonizado e o hidróxido de cálcio com PMCC reduziram estatisticamente o número de bactérias quando comparados ao grupo controle positivo em 7 e 14 dias, não apresentando diferenças estatísticas entre eles; o hidróxido de cálcio ozonizado não reduziu estatisticamente o número de bactérias quando comparados ao grupo controle positivo em 7 e 14 dias e o propilenoglicol ozonizado e o hidróxido de cálcio PMCC não apresentaram diferença... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated in vitro bactericidal effect of ozone associated with the vehicle propylene glycol and calcium hydroxide in root canals contaminated with Enterococcus faecalis. It used 50 single-rooted human teeth, donated by the teeth of the Faculty of Dentistry of Araraquara. After removal of dental crowns, root canals were instrumented to an endodontic kerr file number 50, and then the specimens were sterilized, and the root canals contaminated with Enterococcus faecalis and incubated at 37 ± 1 ° C for 21 days. The specimens were randomly divided into five experimental groups, according to the medication used: GI - ozone with propylene glycol (n = 11), group II - calcium hydroxide with paramonoclorofenolcanforado - PMCC (n = 11), GIII - propylene glycol added powder calcium hydroxide ozoized (n=11), GIV - positive control group - was not placed any medication (n = 11) and GV - negative control group - were not infected (n = 6). Microbiological samples were collected after seven and fourteen days and the microbial growth observed at the count of the number of colony forming units of E. faecalis. The results were analyzed using the nonparametric Kruskal-Wallis followed by Dunn's test and also by the non-parametric Friedman and both with a significance level of 0.05, showed that the propylene ozonized and calcium hydroxide with PMCC statistically reduced the number of bacteria when compared to positive control group at 7 and 14 days, calcium hydroxide ozonized not statistically reduced the number of bacteria when compared to positive control group at 7 and 14 days and propylene ozonized calcium hydroxide and CMCP showed no statistically significant differences in bacterial growth at 7 and 14 days.In a descending order of bactericidal action in the two study periods, is calcium hydroxide PMCC, followed by propylene ozonized and ozonized calcium hydroxide / Orientador: Idomeo Bonetti Filho / Coorientador: Antonio Carlos Pizzolitto / Banca: Marco Antonio Húngaro Duarte / Banca: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Mestre

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antibacteriano e a dissolução de biofilme promovido pela terapia fotodinâmica (PDT) associada com o hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5% e a clorexidina (CHX) sobre biofilmes mono-espécie e multi-espécies. No modelo de biofilme mono-espécie, quarenta e seis prémolares inferiores foram contaminados com cepas de Enterococcus faecalis (ATCCC 29212) por 21 dias. Os espécimes foram divididos em três grupos de acordo com a solução irrigadora utilizada: soro fisiológico, CHX 2% e NaOCl 2,5%. Após irrigação com 5 mL de cada irrigante, a PDT foi realizada. Amostras foram coletadas previamente aos protocolos de irrigação (S1), após irrigação (S2) e após PDT (S3). No modelo de biofilme multi-espécies, sessenta blocos de dentina bovina foram infectados intraoral e divididos em seis grupos: soro fisiológico, soro fisiológico/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT. Microscopia confocal a laser foi usada para avaliar a porcentagem e o biovolume de células vivas e o volume total de biofilme. Todos os grupos reduziram as contagens de UFCs após os procedimentos de irrigação (S1-S2); porém a CHX e o NaOCl promoveram as menores contagens de UFCs (P < 0,05). A PDT diminuiu significativamente a contagem bacteriana no grupo do soro fisiológico (S2-S3; P < 0,05). No modelo de biofilme multi-espécies, a menor quantidade de células vivas foi observada nos grupos CHX, CHX/PDT, NaOCl e NaOCl/PDT, sem diferenças entre si (P > 0,05). A PDT não reduziu o volume total de biofilme (P > 0,05); porém parece diminuir o biovolume e a quantidade de células vivas após irrigação com CHX 2% e NaOCl 2,5%. A terapia fotodinâmica associada ao soro fisiológico reduziu a carga bacteriana em canais infectados com E. faecalis. A PDT parece reduzir a quantidade e o volume de células vivas, mas não o volume total de células em biofilme multiespécies induzido in situ. Finalmente, o tipo de irrigante foi decisivo para dissolver biofilme multi-espécies. / The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect and the biofilm dissolution promoted by photodynamic therapy (PDT) associated with 2.5% NaOCl and 2% CHX over monospecies and multispecies biofilms. In monospecies biofilm model, forty-six mandibular premolars were contaminated with Enterococcus faecalis strains (ATCC 29212) broth culture for 21 days. Specimens were divided into three groups according to the irrigant used: saline, 2% of CHX and 2.5% of NaOCl. After irrigation with 5 mL of each irrigant, PDT was performed. Samples were collected at baseline (S1), after irrigation (S2) and after PDT (S3). In multispecies biofilm model, sixty bovine dentin blocs were infected intraorally, and divided into six groups: saline, saline/PDT, CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT. Confocal laser scanning microscopy was used to assess the percentage and the biovolume of live cells and the total biovolume. All groups reduced UFC’ counts after irrigation procedures (S1-S2); however CHX and NaOCl promoted the lowest UFCs counts (P < 0.05). PDT significantly reduced the bacterial counts in saline group (S2-S3; P < 0.05). In multispecies biofilm model, the lowest amount of live cells was observed in CHX, CHX/PDT, NaOCl and NaOCl/PDT groups, with no differences among them (P > 0.05). PDT did not reduce the total biovolume (P > 0.05); however it appears to decrease the biovolume and the amount of live cells after irrigation with 2% CHX and 2.5% NaOCl. PDT associated with saline reduced the bacterial load in canal infected with E. faecalis. PDT seems to reduce the amount and the biovolume of live cells, but did not reduce the total biovolume of cells in multispecies biofilm induced in situ. Finally, the irrigant was decisive to dissolve multispecies biofilm.

Char Tsui Shan. / Thesis submitted in: October 2000. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2001. / Includes bibliographical references (leaves 92-114). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract (in English) --- p.i / Abstract (in Chinese) --- p.iv / Acknowledgements --- p.vi / Table of Contents --- p.vii / Contents of Chapter 1: Introduction --- p.viii / Contents of Chapter 2: Materials & Methods --- p.viii / Contents of Chapter 3: Results --- p.x / Lists of Tables --- p.xi / List of Figures --- p.xii / Chapter Chapter 1: --- Introduction --- p.1-24 / Chapter Chapter 2: --- Material & Methods --- p.25 -41 / Chapter Chapter 3: --- Results --- p.42 -76 / Chapter Chapter 4: --- Discussion --- p.77 -89 / Chapter Chapter 5: --- Future Work --- p.90 -91 / References --- p.92 -107 / Chapter Chapter 1: --- Introduction / Chapter 1.1. --- Taxonomy of Enterococci --- p.1 / Chapter 1.2. --- Natural Habitat of Enterococci --- p.2 / Chapter 1.3. --- Characteristics of Enterococci --- p.2 / Chapter 1.4. --- Identification to Species Level of Enterococci --- p.2 / Chapter 1.5. --- Clinical Significance of Enterococci --- p.5 / Chapter 1.6 --- Clinical Management of Enterococcal Infections --- p.8 / Chapter 1.7. --- Antimicrobial Susceptibilities of Enterococci --- p.8 / Chapter 1.8. --- Antimicrobial Resistance of Enterococci --- p.11 / Chapter 1.9. --- Molecular typing of enterococci --- p.16 / Chapter 1.10. --- Epidemiological Studies of Enterococci --- p.19 / Chapter 1.11. --- Objectives --- p.21 / Chapter Chapter 2. --- Materials & Methods / Chapter 2.1. --- Collection of strains --- p.23 / Chapter 2.2. --- Quality control strains --- p.23 / Chapter 2.3. --- Identification of strains to genus level --- p.23 / Chapter 2.4. --- Identification of strains to species level --- p.24 -27 / Chapter 2.4.1. --- By commercially available biochemical method / Chapter 2.4.2. --- By molecular method 226}0ؤ multiplex PCR / Chapter 2.4.2.1. --- Source of primers / Chapter 2.4.2.2. --- Extraction of bacterial DNA / Chapter 2.4.2.3. --- Multiplex PCR / Chapter 2.4.2.4. --- Analysis of PCR products agarose gel electrophoresis / Chapter 2.4.3. --- By conventional biochemical methods --- p.27 / Chapter 2.5. --- Antimicrobial susceptibility testing --- p.27 -30 / Chapter 2.5.1. --- Preparation of antimicrobial agent stock solution / Chapter 2.5.2. --- Preparation of agar medium / Chapter 2.5.3. --- Preparation of inoculum and inoculation of plates / Chapter 2.5.4. --- Incubation and reading of plates / Chapter 2.6. --- Mechanisms of antibiotic resistance --- p.30 -35 / Chapter 2.6.1. --- Amplification of vancomycin resistance genes in enterococci by multiplex PCR / Chapter 2.6.1.1. --- Isolates / Chapter 2.6.1.2. --- Primers / Chapter 2.6.1.3. --- Extraction of bacterial DNA and PCR / Chapter 2.6.2. --- "Detection of gene coding for aminoglycoside-modifying enzyme (AAC6'-APH2"") by PCR" / Chapter 2.6.2.1. --- Isolates / Chapter 2.6.2.2. --- Primers / Chapter 2.6.2.3. --- Extraction of bacterial DNA and PCR / Chapter 2.6.3. --- Detection of β-lactamase in enterococci / Chapter 2.7. --- Molecular typing of enterococci by pulsed-field gel electrophoresis --- p.35 -37 / Chapter 2.7.1. --- Incorporation of chromosomal DNA into agarose plugs / Chapter 2.7.2. --- Digestion of chromosomal DNA in agarose plugs with restriction enzyme SmaI / Chapter 2.7.3. --- Pulsed-field gel electrophoresis / Chapter 2.7.4. --- Cluster analysis / Chapter 2.7.5. --- Data analysis / Chapter 2.8. --- Research plan --- p.37 / Chapter Chapter 3. --- Results / Chapter 3.1. --- Identification of enterococci by API 20 Strep and PCR --- p.39-46 / Chapter 3.2. --- Antimicrobial susceptibilities of enterococci --- p.47 -54 / Chapter 3.3. --- Detection of vancomycin resistance genes in enterococci by PCR --- p.55 -57 / Chapter 3.4. --- "Detection of gene coding for aminoglycoside-modifying enzyme (AAC6'- APH2"") by PCR" --- p.58 -60 / Chapter 3.5. --- Detection of β-lactamase in enterococci --- p.61 / Chapter 3.6. --- Resistance pattern of enterococci --- p.62 -64 / Chapter 3.7. --- Multiresistant enterococci investigated by pulsed-field gel electrophoresis

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antibacteriano do laser diodo com diferentes comprimentos de onda em blocos de dentina infectados com Enterococcus faecalis, por meio de análise microbiológica com espectrofotometria e alterações ultraestruturais por meio de microscópio eletrônico de varredura. Treze dentes unirradiculares foram seccionados de forma a obter 100 blocos de dentina intrarradicular. Inicialmente, os blocos foram imersos por 5 minutos em EDTA 17% e em seguida lavados por 5 minutos com água destilada, e então autoclavados por 30 minutos a 120&deg;C. As amostras de dentina foram inoculadas com 1mL de suspensão de E. faecalis em 5mL de BHI (Brain Heart Infusion) e incubadas a 37&deg;C por cinco dias. Após a contaminação, os espécimes foram distribuídos em dez grupos (n=10) de acordo com tratamento de superfície: GI - 5 mL NaOCl 2,5%, GII - 5 mL NaOCl 2,5% + diodo 808nm, GIII - 5 mL NaOCl 2,5% + diodo 970nm, GIV - diodo 808nm, GV - diodo 970nm, GVI - CHX 2%, GVII - CHX 2% + diodo 808nm, GVIII - CHX 2% + diodo 970nm, GIX - controle positivo e GX controle negativo. O crescimento bacteriano foi analisado pela turbidez e densidade óptica do meio de cultura por espectrofotometria (nm). Em seguida, os espécimes foram preparados para análise das alterações ultraestruturais da superfície dentinária em MEV. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA um fator e evidenciaram que o GI (77,5 ± 12,1), GII (72,5 ± 12,2), GIII (68,7 ± 8,7), GV (68,3 ± 8,7), GVI (62,0 ± 5,5) e GVII (67,5 ± 3,3) foram semelhantes entre si e diferente estatisticamente dos grupos GIV (58,8 ± 25,0), GVIII (59,2 ± 4,0) e grupos controles (p<0,05). A análise em MEV evidenciou uma matriz orgânica amorfa e derretimento da dentina intertubular quando submetidos à irradiação do laser diodo 970nm, e erosão da dentina intertubular quando irradiada com laser 808nm, sendo que ao associar NaOCl 2,5% ao laser com diferentes comprimentos de onda, observou-se maior erosão intertubular. Conclui-se que todos os protocolos terapêuticos foram capazes de reduzir o contingente bacteriano dos blocos de dentina e ao associar o laser diodo e soluções não houve melhora significativa na redução do contingente bacteriano. / The objective of this study was to evaluate the disinfection degree of dentin blocks contaminated by Enterococcus faecalis caused by different diode laser wavelengths through microbiological analysis with spectrophotometry and ultrastructural alterations by scanning electron microscope. Thirteen uniradicular teeth were sectioned into 100 dentin Intraradicular blocks. Initially, the blocks were immersed for 5 minutes in 17% EDTA and then washed for 5 minutes with distilled water, and then esterilized for 30 minutes at 120&deg;C. The dentin samples were inoculated with 1mL of E. faecalis suspension in 5mL BHI (Brain Heart Infusion) and incubated at 37&deg;C for five days. After contamination, the specimens were distributed into ten groups (n = 10) according to surface treatment: GI - 5 mL NaOCl 2.5%, GII - 5 mL NaOCl 2.5% + diode 808nm, GIII - 5 mL NaOCl 2.5% + diode 970nm, GIV - diode 808nm, GV - diode 970nm, GVI - CHX 2%, GVII - CHX 2% + diode 808nm, GVIII - CHX 2% + diode 970nm, GIX - positive control and GX - Negative control. Bacterial growth was analyzed by turbidity and optical density of the culture medium by spectrophotometry (nm). Afterwards, the specimens were processed for analysis of the ultrastructural changes of the dentin surface in SEM. The data was subject to the One-way ANOVA test and showed that GI (77,5 ± 12,1), GII (72,5 ± 12,2), GIII (68,7 ± 8,7), GV (68,3 ± 8,7) and GVII (67,5 ± 3,3) were statistically similar and statistically different from GIV (58,8 ± 25,0), GVIII (59,2 ± 4,0) and control groups (p <0.05). SEM analysis showed a modified organic matrix layer with an amorphous, intertubular dentin melting when dentin samples were irradiated with 970nm diode laser, erosion of the intertubular dentin in blocks submitted to 808nm diode laser, and a increased erosion of the intertubular dentin when associating NaOCl 2,5% to the laser with different wavelengths. All the therapeutic protocols were able to reduce the bacterial contingent in dentin blocks with the association of laser diode and solutions did not significantly improve the reduction of the bacterial contingent.