El género Enterococcus es conocido por ser de origen fecal o intestinal, pero tiene una amplia distribución en la naturaleza y se le puede encontrar en suelos, aguas, plantas y en productos alimenticios, siendo capaz de sobrevivir en medios poco enriquecidos. Los estudios reportados sobre estos microorganismos generalmente inciden en su aspecto clínico y su resistencia a antibióticos, y algunos se ubican en un contexto ambiental evaluando métodos para su detección o enumeración para uso en aguas recreacionales. Está aumentando la importancia de este microorganismo como agente causal de infecciones adquiridas en hospitales, pero el interés de estudio en este género radica en su alta resistencia natural a múltiples antimicrobianos y a su capacidad de adquirir y transferir dicha resistencia. Se sabe que Enterococcus es un microorganismo introducido al ecosistema marino debido a la contaminación de éste ambiente con desechos orgánicos, pero son pocos los reportes sobre estudios de resistencia antimicrobiana de éste género provenientes de muestras de agua de mar, siendo necesario este tipo de investigación que nos permita conocer la importancia de estos microorganismos en estos ambientes. / The genus Enterococcus is recognized as being of fecal origin but have a wide distribution in nature, they can be found in soil, water, plants and food products, being able to survive in low-enriched media. Studies on these microorganisms usually affect their appearance and clinical resistance to antibiotics, and there are some who are placed in an environmental context, evaluating methods of detection or enumeration in waters for recreational use. It is increasing the importance of this microorganism as a causative agent of infections acquired in hospitals, but the interest in this kind of study lies in its high natural resistance to multiple antimicrobials and their ability to acquire and transfer the resistance. Despite that Enterococcus is a microorganism introduced to the marine ecosystem by contamination with organic wastes, there are few reports on studies of antimicrobial resistance of the Enterococcus genus water samples from the sea, being necessary to this type of research that allows us to know the importance of these microorganisms in these environments.

El género Enterococcus es conocido por ser de origen fecal o intestinal, pero tiene una amplia distribución en la naturaleza y se le puede encontrar en suelos, aguas, plantas y en productos alimenticios, siendo capaz de sobrevivir en medios poco enriquecidos. Los estudios reportados sobre estos microorganismos generalmente inciden en su aspecto clínico y su resistencia a antibióticos, y algunos se ubican en un contexto ambiental evaluando métodos para su detección o enumeración para uso en aguas recreacionales. Está aumentando la importancia de este microorganismo como agente causal de infecciones adquiridas en hospitales, pero el interés de estudio en este género radica en su alta resistencia natural a múltiples antimicrobianos y a su capacidad de adquirir y transferir dicha resistencia. Se sabe que Enterococcus es un microorganismo introducido al ecosistema marino debido a la contaminación de éste ambiente con desechos orgánicos, pero son pocos los reportes sobre estudios de resistencia antimicrobiana de éste género provenientes de muestras de agua de mar, siendo necesario este tipo de investigación que nos permita conocer la importancia de estos microorganismos en estos ambientes. / The genus Enterococcus is recognized as being of fecal origin but have a wide distribution in nature, they can be found in soil, water, plants and food products, being able to survive in low-enriched media. Studies on these microorganisms usually affect their appearance and clinical resistance to antibiotics, and there are some who are placed in an environmental context, evaluating methods of detection or enumeration in waters for recreational use. It is increasing the importance of this microorganism as a causative agent of infections acquired in hospitals, but the interest in this kind of study lies in its high natural resistance to multiple antimicrobials and their ability to acquire and transfer the resistance. Despite that Enterococcus is a microorganism introduced to the marine ecosystem by contamination with organic wastes, there are few reports on studies of antimicrobial resistance of the Enterococcus genus water samples from the sea, being necessary to this type of research that allows us to know the importance of these microorganisms in these environments.

Los enterococos, considerados patógenos emergentes, presentan una gran versatilidad genética actuando en el medio ambiente como reservorios genéticos de virulencia y resistencia. Se determinó comparativamente en 33 cepas de enterococos clínicos y 34 cepas de origen marino los perfiles de resistencia antimicrobiana, perfil fenotípico y la presencia de los marcadores de virulencia gelE, cylA, esp y hyl, relacionados respectivamente con: la gelatinasa, hemolisina, la proteína de superficie enterocócica y una putativa glicosil-hidrolasa; además se realizaron ensayos de mortalidad en el modelo experimental Galleria mellonella (Orden: Lepidoptera). Se determinó en cepas marinas sólo la presencia de gelE y esp, con una expresión fenotípica fuerte de biopelículas en casi todas las cepas, aunque no se demostró asociación con estos marcadores. Sólo el 14.3% de enterococos gelE+ presentó actividad gelatinasa y ninguna cepa resultó ser betahemolítica ni portar cylA (Activador de la hemolisina). En el grupo clínico se observó múltiples antibiotipos y perfiles de virulencia en relación directa a la especie y al origen de la infección. El marcador hyl estaba presente sólo en cepas resistentes a vancomicina (EVR) y portadoras de esp, además se detectó en este grupo cepas betahemolíticas (12.1%) y portadoras de cylA (15.2%) mientras que el 48.5% presentaron gelE y la actividad gelatinasa fue detectada en un 30.3% de la cepas. Las cepas clínicas con actividad gelatinasa y hemolisina positivas desarrollaron una alta mortandad en G. mellonella, en tanto una cepa de E. faecalis de origen marino (gelatinasa positiva) presentó una mortandad similar al grupo clínico. Se determinó que los enterococos marinos, principalmente E. faecalis, conservan ciertas características de virulencia y de resistencia antimicrobiana por lo que su persistencia en el ambiente marino representa una amenaza potencial a la salud pública / --- Enterococci are emerging pathogens, retaining virulence and antimicrobial resistance genes in marine environmental. antimicrobial resistance profiles, phenotype profile and presence of virulence markers were compared in 33 clinical isolates and 34 marine strains. Virulence markets gelE, CylA, esp and hyl, these respectively are gelatinase, hemolysin, enterococcal surface protein, and putative glycosyl-hydrolase; besides mortality trials were conducted in the experimental model Galleria mellonella (Order: Lepidoptera). Was found only in marine enterococci the presence of gelE and esp, with strong biofilms in almost all strains, no association showed with these markers. Only 14.3% of enterococci gelE+ and gelatinase activity showed no strain proved beta hemolytic or carry cylA (hemolysin activator). In the clinical group multiple virulence antibiotypes and profiles related to the species and origin of infection was observed, hyl marker was present only in strains vancomycin resistance (VRE) and esp-positives, also detected in this group, beta-hemolytic (12.1%) and strains carrier cylA (15.2%), in addition 48.5% of clinical enterococci are gelE and gelatinase activity was detected in 30.3% of the strains. Gelatinase positive isolates and hemolysin developed a high mortality in G. mellonella, a strain of E. faecalis of marine origin (positive gelatinase) with similar clinical group mortality. It was determined that marine enterococci, mainly E. faecalis, retain some virulence characteristics and antimicrobial resistance so its persistence in the marine environment is a threat to public health. Keywords: Virulence, enterococci, multiresistance, pathogenicity, G. mellonella. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-15Bitstream added on 2014-06-13T20:11:00Z : No. of bitstreams: 1 beraldo_rm_me_arafcf.pdf: 282816 bytes, checksum: 5801e8fb514fd0197781c52154b68859 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O consumo de alimentos frescos como frutas e hortaliças representa riscos à saúde humana, uma vez que tais alimentos podem estar contaminados, constituindo veículos de transmissão de várias doenças. A água utilizada na irrigação de hortas representa umas das possíveis fontes desse tipo de contaminação, comprometendo a qualidade do produto e, principalmente, a saúde humana. Assim, o controle da qualidade bacteriológica de águas utilizadas para tal finalidade torna-se de vital importância para a saúde pública. O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade bacteriológica de amostras de águas utilizadas na irrigação de 40 hortas dos municípios de Araraquara, Boa Esperança do Sul e Ibitinga, SP. Foram colhidas em cada horta duas amostras de águas destinadas à irrigação. Tais amostras foram colhidas no mesmo ponto e em diferentes meses, caracterizando dois grupos de coleta com 40 amostras cada, totalizando 80 amostras. Foi determinado o número mais provável (NMP/100 mL) de coliformes totais, coliformes termotolerantes e enterococos, através da técnica dos tubos múltiplos (APHA, 2005). Foi utilizado o padrão de qualidade estabelecido pela Resolução n°357 do Conselho Nacional do Meio Ambiente- CONAMA, que determina um limite de 200 coliformes termotolerantes em 100 mL de amostra de água utilizada para irrigação de hortaliças consumidas cruas (CONAMA, 2005). Após a análise das amostras referentes à primeira coleta, os proprietários das hortas, cujas águas utilizadas na irrigação não atenderam ao padrão de qualidade estabelecido pela Resolução CONAMA n°357 foram orientados quanto à necessidade de medidas de desinfecção das mesmas ou suas fontes. A segunda coleta das amostras ocorreu somente após terem sido tomadas as providências para a melhoria da qualidade da água, nos casos em que isso foi necessário. Após a primeira análise observou-se... / The consumption of fresh foods such as fruits and vegetables represents risks to human health, since these foods may be contaminated, behaving as sources of various diseases. The water used for irrigation of vegetables gardens represents one of the possible sources of contamination, which may compromise the quality of the product and, mainly, the human health. Thus, the bacteriological quality control of water used for such purposes becomes vitally important for public health. The objective of this paper was to evaluate the bacteriological quality of water used for irrigation of 40 vegetables gardens in the municipalities of Araraquara, Boa Esperança do Sul and Ibitinga, SP. Were collected in each vegetables garden two samples of water for irrigation. The samples were collected in different months at the same point, featuring two groups collection with 40 samples each, totaling 80 samples. It was determined the most probable number (MPN/100 mL) of total coliforms, termotolerants coliforms and enterococcus using the multiple tube technique (APHA, 2005). It was used the quality standard established by Resolution n°357 of Environmental National Council - CONAMA, which determines a limit of 200 termotolerants coliforms in 100 mL of sample of water used for irrigation of vegetables consumed raw (CONAMA, 2005). After the analysis of the samples from the first collects, the owners of the vegetables gardens, whose waters used in irrigation not satisfy the quality standard established by CONAMA Resolution n°357, were instructed about the necessary disinfection measures of the water or its sources. The second collects of the samples occurred only after been taken steps to improve water quality, when it was necessary. After the first analysis it was observed the presence of termotolerants coliforms, in quantities above the permitted by law, in nine samples (22,5%). The owners of these vegetable... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-26T19:10:00Z No. of bitstreams: 1 Publico-06.pdf: 1095297 bytes, checksum: 4b8b87835ffd2946238eecd1b33b8462 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-26T19:11:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-06.pdf: 1095297 bytes, checksum: 4b8b87835ffd2946238eecd1b33b8462 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T19:11:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-06.pdf: 1095297 bytes, checksum: 4b8b87835ffd2946238eecd1b33b8462 (MD5) Previous issue date: 2009 / INTRODUÇÃO: O câncer pediátrico representa entre 0,5 - 3% dos tumores. As infecções por VRE, nesta população, representam um risco potencial, relacionado a altas taxas de morbi-mortalidade especialmente na aquisição de VRE-EFM, devido ao seu maior poder de virulência e resistência. Embora a relação colonização versus infecção seja relativamente baixa, a probabilidade do paciente oncológico desenvolver infecção pela cepa colonizante é considerável. OBJETIVOS: Devido à alta incidência de VRE isolados em pacientes do IOP, entre Janeiro a Agosto/08, foram adotadas ações emergenciais, com a finalidade de rastrear os isolados de VRE e conter a sua disseminação na instituição. O presente estudo teve como objetivo analisar epidemiologicamente os isolados de VRE no IOP no período de Janeiro/08 a Março/09. MATERIAL E MÉTODOS: No estudo retrospectivo foi realizado levantamento de dados, seguidos de análises fenotípicas e genotípicas de amostras de enterococos durante os oito primeiros meses de 2008, com a finalidade de verificar a incidência de pacientes colonizados e/ou infectados por VRE. Os dados do estudo prospectivo foram avaliados de acordo com quatro sucessivas etapas de culturas de vigilância de swab anal realizadas em todos os pacientes internados no IOP em um determinado dia, entre Outubro/08 a Março/09. Foram utilizados meios de cultura de triagem e realizada caracterização fenotípica e molecular dos VRE, assim como PFGE dos VRE-EFM. RESULTADOS: Verificou-se grande incidência de VRE (colonizados e infectados) no IOP (70,8%). Todos os casos foram de E. faecium, sendo 23,5% provenientes de ICS relacionada a CVC. O maior índice de isolados de VRE-EFM foi verificado em julho (n=8), sendo três casos de infecção. No estudo prospectivo, as sucessivas coletas de culturas de vigilância somadas às medidas de controle adotadas no IOP mostraram uma redução significativa no índice de VRE-EFM, caindo de 36% (Outubro/08) para 0% (Março/09). De acordo com o PFGE, houve a prevalência de dois clones A e B, totalizando 27 dos 35 isolados de VRE-EFM analisados, localizados, principalmente, no sétimo andar (12 casos). Acredita-se que este andar foi o principal responsável pela disseminação deste patógeno no IOP. CONCLUSÃO: O modelo prospectivo utilizado neste estudo, somado as estratégias de controle coordenadas pela CCIH do IOP, apresentou impacto positivo no controle da disseminação de VRE, uma vez que verificou-se uma drástica redução no número de casos. Sendo assim, o presente estudo pode servir como modelo epidemiológico para as CCIH de outras instituições no controle da disseminação de VRE no ambiente hospitalar. / BACKGROUND: The pediatric cancer represent between 0.5 - 3% of the tumors. VRE infections in this population, is a potential risk related to high rates of morbidity and mortality especially in the acquisition of VRE-EFM, due to their greater virulence and resistance. Although the relationship between colonization versus infection is relatively low, the likelihood of oncology patients develop infection with the colonizing strain is considerable. OBJECTIVES: Due to high incidence of VRE isolated from patients in IOP between January and August/08 were adopted emergency measures, in order to trace the VRE isolates and contain its spread in the institution. The objective of the present work was to study epidemiologically isolates of VRE in IOP during the January/08 to March/09. MATERIAL AND METHODS: A retrospective study was conducted on the data, followed by phenotypic and genotypic analysis of enterococcal samples during the first eight months of 2008, in order to determine the incidence of colonized patients and/or infected with VRE. Data from the prospective study were evaluated according to four successive surveillance cultures of anal swabs taken from all units of the IOP between Octuber/08 and March/09. We used screening media and performed phenotypic and molecular characterization of VRE, and PFGE of VRE-EFM. RESULTS: A high incidence of VRE (colonized and infected) in IOP (70.8%) was observed. All cases were related to the species E. faecium, with 23.5% from BSI associated to the CVC. The highest rate of isolates of VRE-EFM was observed in July (n=8), and three cases related to infection. In the prospective study, successive samples of surveillance cultures added to the new control measures adopted in IOP showed a significant reduction in the rate of VRE-EFM, decreasing from 36% (Octuber/08) to 0% (March/09). According to PFGE results, there was the prevalence of two clones A and B, totalling 27 of 35 isolates of VRE-EFM analysed, mainly located on the seventh floor (12 cases). We believed that this floor was the main responsible for the dissemination of this pathogen in IOP. CONCLUSION: The prospectively study used in this study, associated with control strategies coordinated by the HICC of IOP showed a positive impact on controlling the spread of VRE, since there was observed a significant reduction in the number of cases. Therefore, this study can serve as an epidemiological model for HICC of other institutions in controlling the spread of VRE in the hospital.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os Enterococcus sÃo cocos Gram-positivos catalase-negativos, habitantes do trato gastrintestinal e geniturinÃrio. SÃo identificados por meios manuais baseados no clÃssico de Facklam, por sistemas semi-automatizados, automatizados e por Biologia Molecular. Em vista da diversidade de mÃtodos de identificaÃÃo e com o intuito de se verificar a concordÃncia entre alguns mÃtodos, foi realizada identificaÃÃo de 62 cepas bacterianas, advindas da coleÃÃo do Centro Especializado em Micologia MÃdica (CEMM) da Universidade Federal do CearÃ, Brasil, presumidamente identificadas como Enterococcus sp. e Enterococcus faecalis pelo esquema de Facklam. Este estudo iniciou-se com a identificaÃÃo por trÃs mÃtodos manuais: esquema de facklam e dois modificados deste - Modificado 1 e Modificado 2 - e semi-automatizado â API 20 Strep. Para a definiÃÃo de resultados discordantes, recorreu-se ao semi-automatizado â BBL â e à Biologia Molecular â PCR. O esquema de Facklam identificou 16% (10) como cepas do gÃnero Enterococcus sp. e 84% (52) como E. faecalis. O esquema Modificado 1 apresentou a seguinte identificaÃÃo: 82,2% (51) E. faecalis, 9,7% (6) E. mundtii, e 8,1% (5) E. gallinarum. O Modificado 2 identificou 98,4% (61) E. faecalis e 1,6% (1) E. gallinarum. O API 20 Strep identificou 51,6% (32) E. faecalis, 19,4% (12) A viridans, 13,0% (8) E. avium, 4,8% (3) S. agalactiae, 3,2% (2) E. faecium, 1,6% (1) S. acidominimus, 1,6% (1) Leuconoctocc sp., 1,6% (1) S. uberis, 1,6% (1) A. adiacens e 1,6% (1) InaceitÃvel. Foram selecionadas 10 amostras (cepas nÂs 05, 13, 15, 20, 27, 31, 32, 33, 50 e 60), que apresentaram resultados discordantes entre os sistemas Modificado 1, Modificado 2 e API 20 Strep para serem identificadas pelo BBL Crystal e por PCR. O BBL identificou 6 amostras como E. faecium, inclusive a cepa-controle E. faecalis ATCC 29212 e nÃo identificou 4 amostras. Na PCR, uma amostra nÃo amplificou e 9 foram identificadas como Streptococcus spp.. Uma amostra apresentou-se positiva para o gÃnero Enterococcus, mas nÃo para a espÃcie E. faecalis e 1 (uma) amplificou para a espÃcie S. agalactiae. Nenhuma das amostras se apresentou positiva para a espÃcie E. gallinarum. A amostra-controle â E. faecalis ATCC 29212 - foi amplificada corretamente. Com a anÃlise dos resultados, verificou-se que houve concordÃncia de identificaÃÃo das 62 cepas em 84% das amostras entre os sistemas manuais (Facklam, Modificado 1 e Modificado 2) e em 52% das amostras entre os sistemas manuais e semi-automatizado (API 20 Strep). Nas 10 amostras com resultados discrepantes, nÃo houve concordÃncia de identificaÃÃo entre os sistemas manuais, API 20 Strep e o BBL. A PCR concordou com os sistemas manuais e o BBL e foi discordante do API 20 Strep, em gÃnero, em 01 amostra. Correlacionando a PCR com o API 20 Strep, houve concordÃncia, em gÃnero, em 01 amostra e foi discordante dos demais sistemas. Para aumentar a sensibilidade de identificaÃÃo de Enterococcus spp. devem ser utilizados pelo menos dois mÃtodos com testes fenotÃpicos. Amostras com identificaÃÃes discordantes devem ser reidentificadas por PCR / The Enterococcus are Gram-positive cocci catalase negative - which inhabit the gastrointestinal, and genitourinary tract. They are identified manually and the procedure is based on the classic of Facklam, by semi-authomatized and automatized systems as well as by Molecular Biology. Due to the diversity of identification methods and aiming to verify the concordance among some methods, it was accomplished the identification of 62 bacteria strains proceeding from the collection of the Centro Especializado em Micologia MÃdica (CEMM) of the Federal University of CearÃ, in Brazil. They were presumably identified as Enterococcus sp. e Enterococcus faecalis by the Facklam scheme. This study was begun with the identification for two manual methods, modified from the Facklam scheme â Modified 1 and Modified 2- and semi-automatized â API 20 Strep. For the inconsistent results definition we used the semi-automatized â BBL and the Molecular Biology- PRC. The Franklin scheme identified 16% (10) as strains of the genre Enterococcus sp. and 52% (84) as E. faecalis. The Modified Scheme 1 presented the following identification: 82, 2% (51) E. faecalis, 9, 7% (6) E. mundtii and 8, 1% (5) E. gallinarum. The Modified 2 identified 98, 4% (61) E. faecalis and 1, 6% (1) E. gallinarum. The API 20 Strep identified 51,6% (32) E. faecalis, 19,4% (12) A viridans, 13,0% (8) E. avium, 4,8% (3) S. agalactiae, 3,2% (2) E. faecium, 1,6% (1) S. acidominimus, 1,6% (1) Leuconoctocc sp., 1,6% (1) S. uberis, 1,6% (1) A. adiacens and1,6% (1) unacceptable. It was made the selection of 10 sample (strains), among them, the ones numbered (05, 13, 15, 20, 27, 31, 32, 33, 50 and 60), which presented discordant results among the systems Modified 1, Modified 2 and API 20 Strep to be identified by BBL Crystal and by PCR. The BBL identified 6 samples as E. faecium, including the control- strain E. faecalis ATCC 29212 and did not identify 4 samples. In the PCR, one sample did not amplify and 9 were identified as Streptococcus spp. One sample was identified as positive for the genre Enterococcus, but it did not for the species E. faecalis and 1 (one) was amplified for the species S. agalactiae. None of the samples presented were positive for the species E. gallinarum. The control-sample â E. faecalis ATCC 29212 â was correctly amplified. With the analysis of the results, it was noticed that there was identification concordance of the 62 strains in 84% of the samples among the manual systems (Facklam, Modified 1 and Modified 2) and in 52% of the samples among the manual and semi-automatized systems (API 20 Strep). In 10 samples with disagreeing results there was no identification concordance among the manual systems, API 20 Strep and the BBL. A PCR agreed with the manual systems and the BBL and did not agree with the API 20 step, in genre, in one sample. Correlating the PCR with the API 20 Strep, there was agreement, in genre, in 01 sample and disagreement with the other systems

Enterococcus spp. pertencem ao grupo das bactérias láticas e estão presentes em solos, águas, plantas, microbiota autóctone de vários alimentos e como membros da microbiota intestinal de humanos e animais. Esses microrganismos foram considerados por muito tempo como comensais, mas o aumento da severidade das infecções nosocomiais causadas por enterococos mutirresistentes a antimicrobianos e, a falta de conhecimento sobre seus fatores de virulência geram insegurança na utilização de cepas deste gênero na produção de alimentos como culturas fermentadoras e/ou probióticas. A diferença entre uma cepa de enterococos com potencial patogênico e outra aparentemente segura para uso em processamento de alimentos não é clara, e a probabilidade de que esta última adquira fatores de virulência merece investigação. O objetivo do presente projeto foi determinar características fenotípicas e genotípicas de Enterococcus spp. isolados de amostras de alimentos e águas correlacionando sua presença com indicadores clássicos de higiene e contaminação fecal. De 812 colônias indicativas do gênero enterococos obtidas a partir de 120 amostras de alimentos, 299 isolados (37%) foram presuntivamente caracterizados como Enterococcus spp. Após identificação por PCR, 139 (46,5%) E. faecium, 80 (26,8%) E. faecalis, 36 (12%) E. casseliflavus e 8 (2,7%) E. gallinarum. Produção de gelatinase foi detectada apenas em isolados de E. faecalis (60%). Um isolado de E. faecium (0,7%) e 31 isolados de E. faecalis (38,7%) apresentaram perfil β-hemolítico. Produção de bacteriocina contra Lactobacillus sakei e/ou Listeria monocytogenes foi observada para 10% dos isolados de E. faecalis e 23% dos isolados de E. faecium. Hidrólise de sais biliares foi observada para 100% dos isolados de E. gallinarum, 86% E. casseliflavus, 65% E. faecalis e 62,6% de E. faecium. Alguns isolados de E. faecium apresentaram resistência à vancomicina, eritromicina e tetraciclina. Entre os isolados de E. faecalis não houve resistência à vancomicina, mas foi observada resistência à tetraciclina, eritromicina e alta concentração de gentamicina. Houve uma maior prevalência dos genes de virulência (esp, gel, ace, as, efaA e cylA) entre os isolados de E. faecalis quando comparado a E. faecium. Além disso, os isolados de E. faecalis, resistentes a antibióticos, mostraram forte adesão a células Caco-2 e capacidade de formação de biofilme em superfície abiótica. RAPD-PCR individualizou 14 cepas de E. faecium e 17 cepas de E. faecalis dentre os 52 isolados Enterococcus spp. resistentes a antibióticos. A variabilidade dos resultados impediu o estabelecimento de uma correlação entre a presença ou contagem de coliformes, E. coli e enterococos nas amostras analisadas. Os dados deste trabalho sobre marcadores fenotípicos e genotípicos de virulência, e a presença de cepas resistentes a antibióticos evidenciam a necessidade da avaliação cuidadosa de linhagens de enterococos para aplicações em alimentos. / Enterococcus spp. belong to the group of lactic acid bacteria widely distributed in soil, plants, foods, animals and humans. In the past, these microorganisms were considered commensals but the increase of antibiotic-resistant enterococci and the lack of knowledge about their virulence markers, had raised concerns regarding the safety of using strains of this genus in the food production as fermentative or probiotic cultures. Besides this, literature data suggests the use of enterococci as sanitary indicator for foods. Differences between enterococci strains with pathogenic potential and an apparently safe ones is unclear and there is a concern about virulence markers transfer. The aim of this work was to determine phenotypic and genotypic characteristics of Enterococcus spp. isolated from foods and water and also to correlate their presence with classical indicators of sanitary quality. Out of 812 presumptive enterococci colonies obtained from 120 food samples, 299 isolates (37%) were presuntively characterized as Enterococcus spp. Isolates were identified by PCR: 139 (46.5%) E. faecium, 80 (26.8%) E. faecalis, 36 (12.0%) E. casseliflavus and 8 (2.7%) E. gallinarum. Only E. faecalis isolates (60%) produced gelatinase. One E. faecium (0.7%) and 31 E. faecalis (38.7%) were β-haemolytic. Bacteriocin activity against Lactobacillus sakei and/or Listeria monocytogenes was observed for 10% of the E. faecalis and for 23% of the E. faecium isolates. All E. gallinarum isolates, 86% of the E. casseliflavus, 65% of the E. faecalis and 62.6% of the E. faecium isolates showed bile salt hydrolysis activity. Some E. faecium isolates were resistant to vancomycin, erythromycin and tetracycline. Vancomycin resistance was absent among the E. faecalis but, resistance to tetracycline, erythromycin and highlevel gentamicin was observed. There was a higher prevalence of virulence genes (esp, gel, ace, as, efaA e cylA) among the E. faecalis isolates when compared to the E. faecium. Antibiotic resistant E. faecalis isolates strongly adhered to Caco-2 cells and formed biofilm on abiotic surface. Using RAPDPCR 14 E. faecium and 17 E. faecalis strains could be individualized from the 52 antibiotic resistant enterococci. It was not possible to correlate the presence of total coliforms, E. coli and Enterococcus spp. in the samples of food and water analysed due to results variability. Data obtained regarding phenotypic and genotypic virulence markers and the presence of antibiotic resistant enterococci raise the needs of a carefully evaluation of the Enterococcus spp. strains before future applications in foods.

El objetivo general de esta investigación fue caracterizar fenotípicamente y determinar el perfil de resistencia in vitro de especies de enterococos aislados de alimentos de origen animal provenientes de un área rural del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Argentina. Durante el período 2009-2012 se analizaron N = 1937 muestras de carne picada (n = 1080), salamines artesanales (n = 642), quesos de vaca (n = 119), quesos de cabra (n = 42), leche de cabra (n = 30) y queso de oveja (n = 24). En una primera etapa se aislaron y caracterizaron fenotípicamente a nivel de especie, enterococos recuperados de alimentos de origen cárnico y lácteo elaborados en un área rural del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Argentina. Se recuperaron 252 enterococos de alimentos cárnicos y lácteos. E. faecalis (65,5%), E. faecium (32,1%), E. raffinosus (0,8%), E. avium (0,4%), E. durans (0,4%), E. gallinarum (0,4%) y E. hirae (0,4%). Se observó una mayor frecuencia de recuperación de enterococos en alimentos cárnicos (59,1%) que en productos lácteos (40,9%). En las dos especies de enterococos más prevalentes se observó un comportamiento divergente pues un mayor número de E. faecalis se aisló de alimentos cárnicos (81,8%) aunque se observó una mayor frecuencia de recuperación de E. faecium en productos lácteos (82,7%). Los aislamientos no tipificados como pertenecientes a estas especies fueron aislados en su totalidad de muestras de origen lácteo. Los resultados de esta tesis demuestran que los enterococos que habitan reservorios no humanos, como los alimentos de origen animal elaborados en un área rural del Centro de la Provincia de Buenos Aires, juegan un papel crítico en la adquisición y diseminación de aislamientos con resistencia múltiple a los antimicrobianos que limitan las opciones terapéuticas disponibles y/o que producen factores involucrados con la patogenicidad de este género bacteriano.

Enterococcus spp. pertencem ao grupo das bactérias láticas e estão presentes em solos, águas, plantas, microbiota autóctone de vários alimentos e como membros da microbiota intestinal de humanos e animais. Esses microrganismos foram considerados por muito tempo como comensais, mas o aumento da severidade das infecções nosocomiais causadas por enterococos mutirresistentes a antimicrobianos e, a falta de conhecimento sobre seus fatores de virulência geram insegurança na utilização de cepas deste gênero na produção de alimentos como culturas fermentadoras e/ou probióticas. A diferença entre uma cepa de enterococos com potencial patogênico e outra aparentemente segura para uso em processamento de alimentos não é clara, e a probabilidade de que esta última adquira fatores de virulência merece investigação. O objetivo do presente projeto foi determinar características fenotípicas e genotípicas de Enterococcus spp. isolados de amostras de alimentos e águas correlacionando sua presença com indicadores clássicos de higiene e contaminação fecal. De 812 colônias indicativas do gênero enterococos obtidas a partir de 120 amostras de alimentos, 299 isolados (37%) foram presuntivamente caracterizados como Enterococcus spp. Após identificação por PCR, 139 (46,5%) E. faecium, 80 (26,8%) E. faecalis, 36 (12%) E. casseliflavus e 8 (2,7%) E. gallinarum. Produção de gelatinase foi detectada apenas em isolados de E. faecalis (60%). Um isolado de E. faecium (0,7%) e 31 isolados de E. faecalis (38,7%) apresentaram perfil β-hemolítico. Produção de bacteriocina contra Lactobacillus sakei e/ou Listeria monocytogenes foi observada para 10% dos isolados de E. faecalis e 23% dos isolados de E. faecium. Hidrólise de sais biliares foi observada para 100% dos isolados de E. gallinarum, 86% E. casseliflavus, 65% E. faecalis e 62,6% de E. faecium. Alguns isolados de E. faecium apresentaram resistência à vancomicina, eritromicina e tetraciclina. Entre os isolados de E. faecalis não houve resistência à vancomicina, mas foi observada resistência à tetraciclina, eritromicina e alta concentração de gentamicina. Houve uma maior prevalência dos genes de virulência (esp, gel, ace, as, efaA e cylA) entre os isolados de E. faecalis quando comparado a E. faecium. Além disso, os isolados de E. faecalis, resistentes a antibióticos, mostraram forte adesão a células Caco-2 e capacidade de formação de biofilme em superfície abiótica. RAPD-PCR individualizou 14 cepas de E. faecium e 17 cepas de E. faecalis dentre os 52 isolados Enterococcus spp. resistentes a antibióticos. A variabilidade dos resultados impediu o estabelecimento de uma correlação entre a presença ou contagem de coliformes, E. coli e enterococos nas amostras analisadas. Os dados deste trabalho sobre marcadores fenotípicos e genotípicos de virulência, e a presença de cepas resistentes a antibióticos evidenciam a necessidade da avaliação cuidadosa de linhagens de enterococos para aplicações em alimentos. / Enterococcus spp. belong to the group of lactic acid bacteria widely distributed in soil, plants, foods, animals and humans. In the past, these microorganisms were considered commensals but the increase of antibiotic-resistant enterococci and the lack of knowledge about their virulence markers, had raised concerns regarding the safety of using strains of this genus in the food production as fermentative or probiotic cultures. Besides this, literature data suggests the use of enterococci as sanitary indicator for foods. Differences between enterococci strains with pathogenic potential and an apparently safe ones is unclear and there is a concern about virulence markers transfer. The aim of this work was to determine phenotypic and genotypic characteristics of Enterococcus spp. isolated from foods and water and also to correlate their presence with classical indicators of sanitary quality. Out of 812 presumptive enterococci colonies obtained from 120 food samples, 299 isolates (37%) were presuntively characterized as Enterococcus spp. Isolates were identified by PCR: 139 (46.5%) E. faecium, 80 (26.8%) E. faecalis, 36 (12.0%) E. casseliflavus and 8 (2.7%) E. gallinarum. Only E. faecalis isolates (60%) produced gelatinase. One E. faecium (0.7%) and 31 E. faecalis (38.7%) were β-haemolytic. Bacteriocin activity against Lactobacillus sakei and/or Listeria monocytogenes was observed for 10% of the E. faecalis and for 23% of the E. faecium isolates. All E. gallinarum isolates, 86% of the E. casseliflavus, 65% of the E. faecalis and 62.6% of the E. faecium isolates showed bile salt hydrolysis activity. Some E. faecium isolates were resistant to vancomycin, erythromycin and tetracycline. Vancomycin resistance was absent among the E. faecalis but, resistance to tetracycline, erythromycin and highlevel gentamicin was observed. There was a higher prevalence of virulence genes (esp, gel, ace, as, efaA e cylA) among the E. faecalis isolates when compared to the E. faecium. Antibiotic resistant E. faecalis isolates strongly adhered to Caco-2 cells and formed biofilm on abiotic surface. Using RAPDPCR 14 E. faecium and 17 E. faecalis strains could be individualized from the 52 antibiotic resistant enterococci. It was not possible to correlate the presence of total coliforms, E. coli and Enterococcus spp. in the samples of food and water analysed due to results variability. Data obtained regarding phenotypic and genotypic virulence markers and the presence of antibiotic resistant enterococci raise the needs of a carefully evaluation of the Enterococcus spp. strains before future applications in foods.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Susanne Mariani Loss.pdf: 2049956 bytes, checksum: 69145238536f7bbbe30c59f18c5e2885 (MD5) Previous issue date: 2012-12-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Ilha das Caieiras está localizada em uma das regiões mais carentes no município de Vitória/ES, a Grande São Pedro. Esta região é densamente povoada e é conhecida como um bolsão de pobreza da capital, com a população sobrevivendo, principalmente, da coleta e comercialização de frutos do mar do manguezal localizado em seu entorno. Estudos realizados anteriormente na região mostraram que a água deste estuário está contaminada com microrganismos patogênicos provenientes, principalmente, de esgotos domésticos lançados sem prévio tratamento. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de vírus entéricos (adenovírus AdV, rotavírus RV e norovírus GII NoV) e indicadores bacterianos de poluição fecal (coliformes termotolerantes e enterococos) em amostras de água de quatro pontos deste importante estuário da Ilha das Caieiras. O monitoramento ocorreu de janeiro de 2011 a julho de 2012 (19 meses) e utilizou-se as técnicas moleculares PCR Qualitativa e PCR em Tempo Real (qPCR), para detecção de vírus entéricos, e membrana filtrante, para análise de bactérias, além de avaliação de parâmetros físico-químicos da água. Os resultados das análises microbiológicas da água nos pontos estudados (P1, P2, P3 e P4) demonstraram a presença de coliformes termotolerantes, com médias geométricas de 1,66x102, 1,31x102, 2,29x103 e 3,13x102 UFC / 100 mL de água, respectivamente. Para enterococos, as médias encontradas foram 6,30x101 UFC / 100 mL em P1, 5,56x101 UFC / 100 mL em P2, 1,89x103 UFC / 100 mL em P3 e 1,62x103 UFC / 100 mL em P4. Os vírus entéricos foram detectados nos quatro pontos de monitoramento pelas duas técnicas moleculares utilizadas, com valores máximos de 2,00x103, 5,24x104 e 1,50x104 CG / 100 mL para AdV, RV e NoV, respectivamente, quantificados por qPCR. A frequências de detecção de vírus nas amostras de água do estuário variou de 21 27% para AdV, 42 53% para RV e 10 42% para NoV GII. Neste estudo foi possível verificar que o estuário da Ilha das Caieiras apresenta-se contaminado devido, possivelmente, aos lançamentos de esgoto in natura e/ou de lixiviados de áreas rurais. A ação antropogênica sobre este manguezal é evidente e preocupante, pois se reflete na qualidade ambiental deste meio, na saúde da população e na economia da região / The Ilha das Caieiras is located in one of the poorest regions in Vitória / ES, the Grande São Pedro. This region is densely populated and is known as a pocket of poverty in the capital, with a population surviving mainly on the collection and marketing of seafood mangrove located in their surroundings. Previous studies have shown that the region of this estuary water is contaminated with pathogenic microorganisms from mainly domestic sewage released without prior treatment. The aim of this study was to evaluate the presence of enteric viruses (adenovirus - AdV, rotavirus - RV and norovirus GII - NoV) and bacterial indicators of fecal pollution (fecal coliform and enterococci) in water samples from four sites of this important Ilha das Caieiras estuary. Monitoring occurred from January 2011 to July 2012 (19 months) and used molecular techniques Qualitative PCR and Real Time PCR (qPCR) for detection of enteric viruses, and membrane filter for analysis of bacteria, and assessment of physico-chemical parameters of the water. The microbiological analysis of water studied sites (P1, P2, P3 and P4) showed the presence of fecal coliform, with geometric means of 1.66 x102, 1.31 x102, 2.29 x103 and 3.13 x102 CFU / 100 mL water, respectively. For enterococci, the averages were 6.30 x101 CFU / 100 mL in P1, 5.56 x101 CFU / 100 mL at P2, 1.89 x103 CFU / 100 mL at P3 and 1.62 x103 CFU / 100 mL at P4. Enteric viruses were detected in the four monitoring sites by both molecular techniques used, with maximum values of 2,00x103, 5,24x104 and 1,50x104 GC / 100 mL for AdV, NoV and RV, respectively, quantified by qPCR. The frequencies of virus detection in samples of estuarine water ranged from 21 - 27% for AdV, 42 - 53% for RV and 10 - 42% for NoV GII. In this study we found that the estuary of the Ilha das Caieiras presents contaminated, possibly due to sewage releases fresh and / or leachate from rural areas. The anthropogenic mangrove on this is clear and worrisome because environmental quality is reflected in this environment, the health of the population and the economy of the region