El cáncer escamosos de cabeza y cuello (CECC) es un tumor de origen epitelial que representa un grave problema sociosanitario, debido a que cadaaño en el ámbito mundial se diagnostican 500.000 nuevos casos. En España la incidencia del CECC excede los 40 casos/100.000 hab./año. La supervivencia de estos pacientes está condicionada principalmente por la presencia demetástasis ganglionares. Hasta la fecha ningún medio diagnóstico (técnicas de imagen, marcadores bioquímicos) ha mostrado eficacia suficiente parapredecir la presencia de metástasis ganglionares. Hay nuevos marcadores relacionados con el proceso metastásico que todavía no se han evaluado suficientemente en el CECC. Mediante la determinación de diferentes marcadores tumorales de nueva aplicación, se trata de encontrar un perfil de éstos que sea aplicable en el CECC, así como tratar de predecir la evolución antes del tratamiento quirúrgico, relacionando los marcadores con la presencia de metástasis.

Introducción Una de las principales razones que limitan la supervivencia final de los pacientes con un carcinoma de cabeza y cuello tras el control de su enfermedad es la aparición de segundas neoplasias. Los criterios para considerar un tumor como una segunda neoplasia fueron definidos por Warren y Gates en 1932. Existen numerosos trabajos que demuestran que los pacientes con un carcinoma de cabeza y cuello cuentan con un riesgo elevado de aparición de segundas neoplasias, y que en la mayoría de ocasiones estas segundas neoplasias se localizan a nivel del tracto aerodigestivo. Una de las conclusiones más interesantes de los estudios longitudinales en pacientes con un tumor índice de cabeza y cuello es que el riesgo de aparición de segundas neoplasias se mantiene elevado de forma constante a lo largo del periodo de seguimiento, con una incidencia anual que varía entre el 2% y el 4%.Sin embargo, no existen estudios que de forma explícita aborden la aparición de nuevos tumores malignos tras la aparición de una segunda neoplasia en los pacientes con carcinomas de cabeza y cuello. Definimos como tercer tumor la aparición de una tercera neoplasia maligna en pacientes con un tumor índice de cabeza y cuello que han sufrido la aparición de una segunda neoplasia, como cuarto tumor la aparición de una cuarta neoplasia maligna en pacientes que han sufrido la aparición de una tercera neoplasia, y así sucesivamente.Nuestro objetivo es evaluar los tumores malignos sucesivos en pacientes tras un tumor índice de cabeza y cuello, estudiando de forma específica la incidencia de aparición de terceros y cuartos tumores, su localización, y la repercusión que tiene su aparición en cuanto a la supervivencia en este grupo de pacientes. Material y MétodosSe recogieron de forma prospectiva desde 1985 hasta 2005 los datos clínicos de 3334 pacientes diagnosticados de carcinomas de cabeza y cuello. En un análisis longitudinal retrospectivo se estudian la incidencia, la supervivencia, la ubicación y la histología de las segundas, terceras y cuartas neoplasias. También se evalúan las modalidades de tratamiento para cada tumor. ResultadosEn el periodo de seguimiento fueron diagnosticadas 716 segundas neoplasias, 110 terceras y 18 cuartas. El riesgo actuarial de aparición de las terceras y cuartas neoplasias (6% y 7%, respectivamente) fue significativamente superior al de los segundos tumores (3,8%).La supervivencia final ajustada disminuyó significativamente después de cada nuevo tumor en cabeza y cuello. La supervivencia actuarial ajustada a 5 años fue del 43% para las segundas neoplasias, del 29% para las terceras y del 11% para las cuartas neoplasias. La utilización de radioterapia como tratamiento del tumor índice redujo significativamente la supervivencia final. Conclusiones El aumento del riesgo de aparición de terceras y cuartas neoplasias se debe a una aceleración de los mecanismos carcinogenéticos después de la segunda neoplasia. La aparición de neoplasias sucesivas produce un empeoramiento gradual en el pronóstico de los pacientes, probablemente relacionado con la progresiva limitación de las opciones de tratamiento. La localización más frecuente de los tumores sucesivos de cabeza y cuello son otra vez en cabeza y cuello y en pulmón.Palabras clave, segundas neoplasias, carcinoma escamoso, neoplasias laringe, neoplasias orofaringe, neoplasias hipofaringe, neoplasias cavidad oral. / IntroductionOne of the main reasons that limit the final survival of head and neck carcinoma patients who achieve control of the disease is the appearance of second neoplasm. The criteria to consider a tumor as a second neoplasm were defined by Warren and Gates in 1932. Numerous studies have probed that head and neck carcinoma patients have an increased risk of appearance of second malignant tumors, and that in most cases these second tumors are located in the aerodigestive tract. The risk of second neoplasm was maintained constant throughout all the follow-up period, with an incidence ranging between 2% and 4% new malignant tumors per year.However, there are not studies approaching the appearance of new malignant tumors in head and neck carcinoma patients after a second neoplasm. A third tumor was defined as any malignant tumor that appeared after a second neoplasm in patients with a head and neck index tumor, a fourth tumor was any malignant tumor that appeared after a third tumor, and so on. The objective of our study was to evaluate the appearance of the successive malignant tumors in patients with a head and neck index tumor, to analyze the incidence of second, third and fourth tumors, their location and effect on survival in this group of patients. Methods: Clinical data of 3334 head and neck cancer patients was prospectively collected from 1985 to 2005. Incidence, survival, location and histology of second, third and successive tumors was evaluated, as well as treatment modalities for every tumor. Results: In the follow up period, 716 second tumors, 110 third tumors and 18 fourth tumors were diagnosed. Actuarial hazard ratio for third and fourth tumors (6% and 7% respectively) was significantly higher than for second tumors (3.8%).Adjusted final survival dropped significantly after every new tumor in the head and neck. Five-year adjusted survival for second was 43%. It decreased to 29% for third tumors and dropped to 11% for fourth tumors.Regarding treatment modalities, index tumor treatment including radiotherapy significantly lowered final survival. Conclusions: The increased risk of third and fourth tumors is probably due to an acceleration of the carcinogenic mechanisms after the second neoplasm. Successive tumors produce a gradual worsening in the prognosis of the patients probably related to the progressive limitation in treatment options. The most frequently location of successive neoplasms are head and neck again and lung.Key words: neoplasms, second primary; carcinoma, squamous cell, laryngeal neoplasms; oropharyngeal neoplasms; hypopharyngeal neoplasms, mouth neoplasms.

Introducción: El cáncer escamoso de cabeza y cuello (CECC) es una patología con alta incidencia en nuestro medio. Los segundos tumores primarios (STP) y las recidivas tumorales (RT) tienen gran trascendencia en la progresión de la enfermedad y en la supervivencia de los pacientes. Objetivos: estudiar los cambios génicos en STP y RT para contribuir al conocimiento de la progresión tumoral, con posibles implicaciones en el diagnóstico precoz y en el pronóstico. Metodología: Se estudian 36 pacientes con CECC, 21 desarrollaron STP y 15 RT. Se excluyeron los que habían recibido radioterapia entre ambos diagnósticos. Empleamos la técnica de MLPA que utiliza una mínima cantidad de ADN (>20 ng) y permite amplificar más de 40 secuencias distintas de ADN, obteniendo un patrón de pérdidas/ganancias. Resultados: Los STP tienen mayor supervivencia (67%) que las RT (20%). Los cambios génicos que diferencian los CECC iniciales de los STP fueron las pérdidas en IL2, AI651963, IL18, BRCA2, DLEU, CDH2 y la ganancia de CDKN2D. Para las RT las pérdidas en IGSF4 y TP53 y las ganancias en LMNA y PTPN1. Los cambios génicos que diferencian los STP y las RT fueron las pérdidas en TP53, CDKN2A, AI651963, RENT2, IL18 y las ganancias en LMNA, CTSB, PTPN1 y N33. Entre los CECC con su correspondiente STP y RT predominan las discordancias, aunque también se observan concordancias. Conclusiones: El estudio realizado demuestra buen número de cambios génicos que diferencian los grupos estudiados, algunos no descritos previamente. El gran número de discordancias entre los CECC y sus RT, junto con algunas concordancias entre CECC y STP, sugieren que los criterios clínicos de progresión tumoral no son adecuados y deben modificarse por los genéticos.

O carcinoma de células escamosas (SCC) é um tumor maligno de origem epitelial no qual o receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR) está superexpresso e associado a malignização. O cetuximabe é um anticorpo monoclonal, capaz de se ligar seletivamente ao EGFR. A combinação de cetuximabe com o quimioterápico hidrofílico 5-fluorouracil (5-FU) é utilizada na clínica pela via intravenosa e é associada a efeitos colaterais. A administração tópica de 5-FU também é realizada a partir de cremes convencionais, porém sua eficácia é limitada a doenças pré-cancerosas e o carcinoma basocelular. Estima-se que a conjugação do cetuximabe à superfície de lipossomas, os quais podem ser administrados na pele em associação a um método físico, como a iontoforese, seja capaz de direcionar a liberação do 5-FU para as camadas da pele onde os tumores estão presentes, além de aumentar o uptake celular em linhagem EGFR positiva, viabilizando o tratamento tópico de SCC. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência do cetuximabe conjugado a um lipossoma (imunolipossoma) na penetração cutânea passiva e iontoforética do 5-FU e na regressão do SCC. Para tanto, um método analítico e um método bioanalítico foram desenvolvidos e validados para quantificação de 5-FU. Lipossomas convencionais foram preparados a partir de diferentes composições lipídicas, métodos de preparo e razão fármaco/lipídeo para selecionar aqueles que encapsulassem maior porcentagem de 5-FU. Lipossomas compostos por 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfocolina e colesterol (DSPC:Chol, 55:45), preparados por hidratação do filme lipídico, na razão fármaco/ lipídeo 0,1, de aproximadamente 140 nm, foram escolhidos por encapsularem cerca de 50% de 5-FU. Para obtenção dos imunolipossomas, o cetuximabe foi primeiramente conjugado ao lipídeo DSPE acoplado ao ligante maleimida(polietilenoglicol)-2000 (DSPE-PEG-Mal), resultando em 94% de eficiência de conjugação. Os imunolipossomas foram então obtidos da mesma forma que os lipossomas e apresentaram tamanho e porcentagem de encapsulação do 5-FU semelhante a apresentada pelos lipossomas. Estudo in vitro em linhagem EGFR positiva (A431) mostrou sinergismo entre 5-FU e imunolipossoma, resultando em valores de IC50 cerca de 3 vezes menores do que o apresentado pelo 5-FU em solução. O uptake celular do imunolipossoma foi 3,5 vezes maior do que o do lipossoma. Nos estudos de penetração cutânea in vitro observou-se que, em relação a uma solução de 5-FU, lipossomas e imunolipossomas diminuíram a quantidade de 5- FU que atravessou a pele. A iontoforese aumentou a penetração do 5-FU a partir de todas as formulações. Neste caso, o acúmulo de 5-FU na epiderme viável, onde os tumores estão presentes, foi duas vezes maior quando este estava encapsulado no imunolipossoma em relação ao lipossoma. In vivo, as formulações foram administradas por via subcutânea ou tópica usando iontoforese em modelo xenográfico de SCC. O tratamento com os imunolipossomas diminuiu o crescimento tumoral em mais de 60% em relação ao controle e em torno de 50% em relação aos tratamentos com solução e lipossoma de 5-FU. A administração tópica por iontoforese apresentou maior redução tumoral do que a subcutânea quando os tumores foram tratados com solução de 5-FU e lipossomas, mas foi igualmente eficaz para os imunolipossomas. Análise imunohistológica revelou que o potencial de proliferação celular foi reduzido para os grupos tratados. Desta forma, a administração por iontoforese de imunolipossomas contendo 5-FU é uma estratégia promissora para o tratamento tópico de SCC / Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant tumor of epithelial origin in which the epidermal growth factor receptor (EGFR) is overexpressed and associated with malignization. Cetuximab is a monoclonal antibody, able to selectively bind EGFR. The combination of the chemotherapy with the hydrophilic drug 5-fluorouracil (5- FU) and cetuximab is applied in the clinic by intravenous injection and is associated with side effects. Cetuximab conjugation onto liposomal surface, which can be administered topically onto the skin using physical methods, such as iontophoresis, is able to direct 5-FU release to the skin layers where tumors are localized and to increase cellular uptake in EGFR positive cells, making possible the topical treatment of SCC. Thus, the objective of this work was to investigate the influence of cetuximab conjugation to liposomes (immunoliposomes) in the passive and iontophoresis skin penetration of 5-FU and SCC regression. For this purpose, an analytical and a bioanalytical method were developed and validated for 5-FU quantification. Then, conventional liposomes were prepared using different lipid compositions, preparation methods and drug to lipid ratios in order to select those able to load higher percentages of 5-FU. Liposomes composed by 1,2-Distearoylsn- glycero-3-phosphocholine and cholesterol (DSPC:Chol, 55:45) prepared by the thin lipid film hydration with drug/lipid ratio 0.1 with approximately 140 nm, were chosen because they encapsulated about 50% of 5-FU. For the obtainment of immunoliposomes, cetuximab was first coupled to the lipid DSPE linked to maleimide (polyethylene glycol)-2000 (DSPE-PEG-Mal) as an anchor for the antibody conjugation, resulting in 94% coupling efficiency. The immunoliposomes were obtained similarly to liposomes, with similar particle size and loading efficiency of 5-FU. In vitro studies using EGFR positive cells (A431) showed synergism for 5-FU and cetuximab, resulting in IC50 values about 3 times lower than 5-FU solution. Cellular uptake of immunoliposomes increased 3.5-fold compared to the liposomes. In vitro skin penetration studies revealed that, compared to the 5-FU solution, liposomes and immunoliposomes reduced the amount of 5-FU that passed through the skin. Iontophoresis increased the amount of 5-FU retained in viable epidermis for all formulations. In this case, the amount of 5-FU in viable epidermis, where tumors are localized, was 2 times higher when it was encapsulated in immunoliposomes compared to liposomes. In vivo, the formulations were administered subcutaneously or topically with iontophoresis in xenograft animal model of SCC. Treatment with immunoliposomes reduced tumor growth more than 60% compared to the negative control and about 50% compared to the treatments with 5-FU solution and liposomes. The topical administration using iontophoresis resulted in improved tumor reduction compared to the subcutaneous administration when tumors were treated with 5-FU solution and liposomes, but was equally effective for the immunoliposomes. The histological analysis showed the reduction of cellular proliferation for the treated groups. In conclusion, the administration of immunoliposomes containing 5-FU using iontophoresis is a promising strategy for the topical treatment of SCC

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