Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2016-11-22T18:28:57Z No. of bitstreams: 1 LAYANE MARQUES DE SOUZA.pdf: 3595271 bytes, checksum: 8d01d5b4eb1f6e1875b61c882f6ac903 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-22T18:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LAYANE MARQUES DE SOUZA.pdf: 3595271 bytes, checksum: 8d01d5b4eb1f6e1875b61c882f6ac903 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / This study had descriptive and retrospective character in order to get an overview of cases of scorpionism in the State of Goiás between 2003 and 2012, describing the possible variables that influenced the accidents. Data were obtained from the collection directly from the Toxicological Information Center notification forms of Goiás (CIT). It was analyzed a total of 6,046 cases of accidents with scorpions for the state in this time frame. In the monthly distribution of the cases found little variation in the number of accidents. Where we obtained 71.65% of cases occurring in urban areas and between genders were almost evenly distributed with most of the involvements with male with 51.88%. The scorpion sting area prevailed in hands, feet and fingers, which together add up to 72.83%. The time between the accident and medical care in the State of Goiás prevailed mostly less than 3 hours. The highest number of reported accidents was related to patients aged between 20 to 40 years old. It was found that the age groups between 0 to 10 years and above 50 years there has been a higher rate of deaths related to other age groups. In all cases, according to the clinical picture 72.42% were classified as mild. Regarding the evolution of accidents, 81.17% of the cases had healing as prognosis. As for treatment with antivenom, 37% made use of serum antiscorpion equating to 38% who did not use the serum antiscorpion as a treatment and 25% was not informed about the mode of treatment. For treatment with antivenom, it was used 2,237 ampoules including serum antiscorpion, antiarachnid and antibothropic. In cases classified as mild used at least 1 ampoule to a maximum of 10 ampoules. In moderate cases at least 1 ampoule to a maximum of 15 ampoules or in severe cases at least 1 ampoule to a maximum of 20 ampoules. By correlating the data provided by SINAN and the data collected in CIT reporting forms, there was a discrepancy in number of cases every year in both Information Systems. Regarding the rainfall, the average accident presents a discrete relation to the rainy season. We have not found a direct relation between the months with higher temperatures and the increasing number of records of the accident. The antivenom treatment revealed serious problems arising from lack of classification of cases, and consequently an exaggerated use of SAE ampoules. As it can be emphasized by the overuse of serum vials, considering that most cases were mild injury. The assimilation of cases in both genders and in the areas of largest urban agglomeration is highly suggestive of scorpion's relationship to the process of domestication. The difference in data between SINAN and CIT suggests that there is a miscommunication between both systems. / Este estudo teve caráter descritivo e retrospectivo com o objetivo de obter um panorama dos casos de escorpionismo no Estado de Goiás entre 2003 e 2012, apresentando as possíveis variáveis que influenciaram nos acidentes. Os dados foram obtidos a partir da coleta de dados das fichas de notificação do Centro de Informações Toxicológicas de Goiás (CIT). Foi analisado um total de 6.046 casos de acidentes com escorpiões para o estado neste recorte temporal. Na distribuição mensal dos casos verificou-se pouca variação no número de acidentes. Em 71,65 % dos casos foram ocorridos em áreas urbanas e entre os gêneros foram quase que uniformemente distribuídos com a maioria dos acometimentos com o sexo masculino com 51,88%. A região da picada prevaleceu em mãos, pés e dedos, que juntos somam 72,83%. O tempo entre o acidente e a assistência médica no Estado de Goiás prevaleceu em sua maioria inferior a três horas. De todos os casos, de acordo com o quadro clínico, 72,42% foram classificados como leves. Com relação à evolução dos acidentes, 81,17% dos casos tiveram a cura como prognóstico. Quanto ao tratamento com soroterapia, 37% fizeram uso do soro equiparando com 38% que não utilizaram o soro como tratamento e em 25% não foi informado o modo de tratamento. Para o tratamento com soroterapia, utilizaram 2.237 ampolas de soro incluindo antiescorpiônico, antiaracnídico e antibotrópico. Em casos classificados como leves foram utilizados no mínimo uma ampola ao máximo de dez ampolas. Nos casos moderados de no mínimo uma ampola ao máximo de 15 ampolas e nos casos graves de no mínimo uma ampola ao máximo de 20 ampolas. Ao correlacionar os dados disponibilizados pelo SINAN e os dados coletados nas fichas de notificação do CIT, houve uma discrepância de quantidade de casos em todos os anos nos dois Sistemas de Informação. Com relação à pluviosidade, a média de acidentes apresenta uma discreta relação com os meses chuvosos. Não houve uma relação direta entre os meses com temperaturas mais elevadas e o aumento do número de registros do acidente. A soroterapia revelou sérios problemas decorrentes da falta de classificação dos casos, e em consequência um uso excessivo de ampolas do SAE. Como pode ser enfatizado pelo uso exagerado de ampolas de soro, haja vista, que a maioria dos casos foi de agravo leve. A equiparação de casos nos dois gêneros e nas áreas de maior aglomerado urbano é altamente sugestiva da relação do escorpionismo com o processo de domiciliação. A diferença de dados entre SINAN e CIT sugere que existe uma falha na comunicação entre os dois sistemas.

Spiders and scorpions are efficient predators arachnid (PA) consuming preys larger than themselves. Few studies reported, molecularly, the digestion in PA. This work describes a biochemical, transcriptomic and proteomic analysis of the midgut and midgut glands (MMG) and digestive juice (DJ) from Nephilengys cruentata and Tityus serrulatus MMG. Cathepsin L, B, D and F, legumain, trypsin, astacin, carbohydrases and lipases were identified by these approaches. Peptide isomerase and ctenitoxins, which are venom proteins were identified, showing a correlation among digestive and venom enzymes. Summarily, PA relies in multi peptidase system mainly constituted of astacins for extracellular prey liquefaction and cathepsin L for intracellular digestion, describing a molecular model for digestion. Probably, during evolution, gene duplication led a diversification of astacins in the derived groups of Arachnida, like spiders, distinctly from what is observed in basal groups like scorpions. These data on Arachnida digestion will allow detailed multi disciplinary studies. / Aranhas e escorpiões são aracnídeos predadores eficientes (AP) consumindo presas maiores que eles mesmos. Poucos estudos descrevem molecularmente a digestão em AP. Neste trabalho caracterizamos bioquimicamente, por transcriptoma e proteoma o intestino e glândulas digestivas (IGD) e suco digestivo (SD) de Nephilengys cruentata e o IGD de Tityus serrulatus. Catepsinas L, B, D e F, legumaína, tripsinas, astacinas, carboidrases e lipases foram identificadas. Peptídeo isomerase e ctenitoxina foram identificadas no IGD. Estas proteínas podem indicar uma correlação entre enzimas digestivas e do veneno. Portanto, AP apresentam várias peptidases principalmente astacinas para liquefazer a presa extraoralmente e catepsinas L para digestão intracelular, descrevendo um modelo molecular para a digestão. Provavelmente, durante a evolução, eventos duplicação gênica levaram à diversificação das astacinas aracnídeos derivados, como as aranhas, diferentemente dos grupos basais, como os escorpiões. Estes dados sobre a digestão em Arachnida permitirão estudos multidisciplinares.

Este trabalho relata o isolamento e caracterização bioquímica parcial de componentes do veneno de Tityus serrulatus (VTs) com ação sobre o sistema complemento (SC). O procedimento de purificação envolveu uma cromatografia de troca iônica do VTs em CM-celulose-52, em pH 7,8 e doze frações foram obtidas, denominadas de I a XIII. A fração I, que apresenta atividade sobre o SC sérico, foi filtrada em Sephacryl S-200 e dez subfrações foram obtidas e denominadas I-1 a I-10. A subfração I-1 foi recromatografada em uma coluna de DEAE-Sepharose, em pH 7,8. Cinco subfrações foram obtidas (DE-1 a DE-5) e as subfrações DE-2, DE-3 e DE-4 incubadas com soro humano normal (SHN) induziram redução da atividade lítica da via clássica/lectina (VC/L) de forma concentração-dependente. A subfração DE-2 apresentou uma banda eletroforética única no gel de eletroforese de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE), com peso molecular (PM) de aproximadamente 247.000 na ausência de b-mercaptoetanol e seis bandas na presença de b-mercaptoetanol. O procedimento de purificação dos componentes ativos da subfração I-4 envolveu basicamente uma cromatografia de troca iônica em Mono-Q, em pH 7,1. Sete subfrações (MQ-1 a MQ-7) foram obtidas neste passo cromatográfico. As proteínas MQ-5 e MQ-7 da subfração I-4 induziram redução da atividade hemolítica das VC/L e via alternativa (VA). Com o objetivo de investigar o mecanismo de ação sobre o SC, SHN foi incubado com a subfração I-4 ou seus componentes (MQ-5 e MQ-7). A imunoeletroforese mostrou a clivagem do fator B e de C3 por estas proteínas, similar ao induzido pela incubação de SHN com zimosan, o que confirma a hipótese de que MQ-5 e MQ-7 induzem a ativação do SC. A capacidade de gerar fatores quimiotáticos no soro foi investigada. Nas condições experimentais, a incubação de SHN com a subfração I-4, proteínas MQ-5 e MQ-7 induziu a migração de neutrófilos similar a induzida pela incubação de soro com zimosan, demonstrando que estas proteínas induzem clivagem de C3 e C5, gerando os fragmentos ativos de C3a e C5a. As proteínas MQ-5 e MQ-7 não foram capazes de lisar eritrócitos de coelho e carneiro. MQ-5 e MQ-7 não induziram redução da atividade hemolítica da VC/L após o aquecimento a 100ºC, portanto a ação destas proteínas não é conseqüência da presença de produtos bacterianos, como lipopolissacarídeos (LPS). As proteínas MQ-5 e MQ-7 apresentaram atividade fibrinogenolítica e caseinolítica e são metaloproteases, já que a atividade fibrinogenolítica foi inibida por EDTA, EGTA e 1,10-fenantrolina. Ambas proteínas apresentaram uma banda eletroforética única por SDS-PAGE, com um PM aproximado de 24.500 na ausência de b-mercaptoetanol, 33.100 na presença de b-mercaptoetanol e um ponto isoelétrico de 4,2. A seqüência N-terminal (Degradação de Edman) e a seqüência de peptídeos trípticos (Espectrometria de massa ESI-MS/MS) de MQ-5 e MQ-7 foram determinadas. Ambas proteínas apresentaram seqüência similar de aminoácidos. Em resumo, este trabalho mostrou que o VTs contém proteases (MQ-5 e MQ-7, metaloproteases) que são capazes de ativar o SC e podem ser importantes no processo inflamatório que ocorre em conseqüência do envenenamento. Além disso, estas proteínas podem ser usadas para depledar o SC em modelos experimentais de doenças em que este sistema está envolvido. / This work reports the isolation and partial biochemical characterization of components from Tityus serrulatus venom (TsV) with action on the complement system (CS). The purification procedure involved an ion-exchange chromatography of TsV on CM-celullose-52, at pH 7.8, twelve fractions were obtained and named I to XIII. Fraction I, showing activity on the serum CS, was filtered on Sephacryl S200 and ten subfractions were obtained and denominated I-1 to I-10. The subfraction I-1 was rechromatographed on a column of DEAE-sepharose, at pH 7.8. Five subfractions were obtained (DE-1 to DE-5) and subfractions DE-2, DE-3 and DE-4 incubated with NHS induced a concentration-dependent reduction in lytic activity of CP/L. Subfraction DE-2 showed a single electrophoretic band by SDS-PAGE, with a molecular weight (MW) of approximately 247,000 in the absence of -mercaptoethanol and six bands in the presence of -mercaptoethanol. The purification procedure of the active compounds of subfraction I-4 involved basically an ion-exchange chromatography on Mono-Q, at pH 7.1. Seven subfractions (MQ-1 to MQ-7) were obtained in this chromatography step. We found that proteins MQ-5 and MQ-7 of subfraction I-4 induced reduction in hemolytic activity for CP/L and AP. In order to investigate the mechanism of action on the CS, NHS was incubated with subfraction I-4 or its components (MQ-5 and MQ-7). The immunoelectrophoresis showed cleavage of factor B and C3 by these proteins, similar to that induced by incubation of NHS with zymosan, which corroborated the hypothesis that MQ-5 and MQ-7 induce activation of the CS. Their capacitiy to elicit serum-induced chemotaxis was then investigated. Under our assay conditions, incubation of NHS with subfraction I-4, protein MQ-5 and MQ-7 induced neutrophil migration similar to that induced by incubation of serum with zymosan, showing that the proteins induce cleavage of C3 and C5, thereby generating the active fragments C3a and C5a. Proteins MQ-5 and MQ-7 alone were unable to lyse rabbit or sheep erythrocytes. MQ-5 and MQ-7 did not induce reduction in hemolytic activity for CP/L after being heated to 100ºC, therefore the action of these proteins is not a consequence of the presence of bacterial products, such as lipopolyssaccharides (LPS). Proteins MQ-5 and MQ-7 showed fibrinogenolytic and caseinolytic activities and they probably are metalloproteases, since its fibrinogenolytic activity was inhibited by EDTA, EGTA and 1,10-phenantroline. Both MQ-5 and MQ-7 showed a single electrophoretic band by SDS-PAGE, with an approximate MW of 24,500 in the absence of -mercaptoethanol, 33,100 in the presence of -mercaptoethanol and an isoelectric point of 5.9. The N-terminal sequence (Edman Degradation) and the sequence of tryptic peptides (Mass spectrometry- ESI-MS/MS) from MQ-5 e MQ-7 were determined. The proteins MQ-5 e MQ-7 showed similar sequence of aminoacids. In summary, this work showed that the TsV venom contains proteases (MQ-5 and MQ-7, metalloproteases) which are able to activate the CS, and may therefore be important in the context of the inflammatory process occurring in consequence of envenomation. In addition these proteins may be used to deplete complement in experimental models of diseases involving participation of this system.

Introdução: O escorpionismo é reconhecido como um problema de saúde pública em alguns países em desenvolvimento devido à significativa incidência e gravidade, particularmente entre crianças e idosos com comorbidades. No Brasil, estima-se que ocorram cerca de 58.000 acidentes com mais de 80 óbitos por ano, o que representa uma incidência anual aproximada de 30 casos/100.000 habitantes/ano. Justifica-se, portanto, o presente estudo, tendo em vista que, no Município de Santarém-PA, na Amazônia, há dificuldade de acesso aos serviços de saúde pela população local, devido à extensão territorial da região. Objetivo: Analisar como se processa a ocorrência de acidente escorpiônico no Município de Santarém-PA. Método:O estudo foi observacional, exploratório, prospectivo, descritivo e qualitativo. Foram sujeitos do estudo, 19 pacientes vítimas de acidente escorpiônico atendidos no PSM, no período de Novembro de 2016 a Fevereiro de 2017. Dados relativos às características pessoais, de condições de vida e de trabalho foram extraídos dos prontuários e confirmados por ocasião das entrevistas realizadas enquanto estiveram internados na unidade hospitalar. Também foram levantados dados clínicos. Utilizou-se de instrumento para a captura dos dados. Os procedimentos éticos foram resguardados.Resultados: Em relação à caracterização dos sujeitos, verificou-se que dos 19 entrevistados 14 (73,7%) eram do sexo masculino. Quanto à faixa etária, 5 (26,3%) tinham idade entre 5 e 10 anos, e 2 (10,6%) entre 11-20 anos, os demais eram adultos ente 21 e 60 anos. Em relação ao tempo de estudo, mesmo levando em consideração os sujeitos menores de idade, alguns dos sujeitos adultos possuíam baixa escolaridade, sendo o maior número de anos de estudo entre 8 e 10 anos, em 7 (36,8%) dos entrevistados. A maior parte dos acidentes ocorreu na zona rural: 13 (68,5%). Quanto aos sintomas, a dor local foi relatadapor 18 (94,7%); a sensação de choque por 18 (94,7%). O tempo de chegada à unidade hospitalar, após a picada, foi maior que uma hora em 15 (78,9%) dos casos. A análise qualitativa dos depoimentos revelou cinco Temas: Situação em que ocorreu o acidente escorpiônico; Trajetória percorrida pelo paciente até o tratamento;Providências após a ocorrência do acidente; Manifestações clínicas apresentadas pelas vítimas dos acidentes escorpiônicos; O que foi feito com o escorpião (lacrau).Estes temas evidenciam a experiência dos sujeitos no manejo do agravo; a forma como se processa o percurso até a unidade de atendimento, evidenciando falhas no acesso e vulnerabilidade programática; e algumas características relacionadas ao modo de vida dos indivíduos. Conclusão: Verificou-se dificuldade no acesso aos serviços de saúde, relacionada à distância geográfica entre as comunidades rurais e o Município de Santarém, onde há o tratamento específico para o acidente escorpiônico, além da necessidade de percorrer várias unidades de saúde até a obtenção do tratamento adequado; a severidade das manifestações locais e sistêmicas; o desconhecimento da população local acerca do manejo apropriado do agravo escorpiônico; e afalta de informações a respeito de ações de prevenção e de tratamento correto. Propõe-se, portanto, uma cartilha para ser utilizada junto às comunidades, para instrumentalizá-las sobre as melhores ações a serem adotadas na prevenção e por ocasião do acidente. / Introduction: Scorpionism is recognized as a public health problem in some developing countries due to its significant incidence and severity especially among children and elderly with comorbidities. It is estimated that about 58,000 accidents occur in Brazil with over 80 deaths per year, representing an approximate annual incidence of 30 cases/100,000 inhabitants per year. The present study is justified since in the Municipality of Santarém-PA, in the Amazon region, there is great difficulty of access to health services by the local population due to the territorial extension. Objective: Analyze how the scorpion accident occurs in the municipality of Santarém-PA. Method:The study was observational, exploratory, prospective, descriptive and qualitative. Nineteen patients who were victims of scorpionic accidents were included in the study. They were treated at the PSM during November 2016 through February 2017. Data on personal characteristics and living and working conditions were extracted from the medical records and confirmed at the time of the interviews while the patients were at the hospital. Clinical data was also collected. An instrument was used to collect the data. The ethical procedures were preserved. Results: In relation to the characterization of the subjects, it was verified that 14 out of the 19 interviewed (73.7%) were male. As for the age group 5 (26.3%) were aged between 5 and 10 years old and 2 (10.6%) between 11 and 20 years old. The others were adults ranging from 21 and 60 years. Regarding the schooling, taking into consideration even the underage subjects, the majority of the adult subjects had low schooling and 7 (36.8%) with the greatest number of years of schooling ranged only from 8 to 10 years. Most accidents occurred in the rural area 13 (68.5%). Regarding to the symptoms, the local pain was pointed out by 18 (94.7%); the shock sensation by 18 (94.7%). The time of arrival at the hospital after the accident was over one hour in 15 (78.9%) cases. The qualitative analysis of the testimonies revealed five themes: Situation in which the scorpionic accident occurred; Trajectory traveled by the patient to the treatment site, Measures taken after the occurrence of the accident; Clinical manifestations presented by the patients; What had been done with the scorpion (lacrau). The themes revealed evidence of the experience by which the subjects dealt with the situation; the flow of the trajectory to the service unit evidencing access failures and programmatic vulnerability; and some characteristics related to the way of life of individuals. Conclusion:There was difficulty in accessing health services, related to the geographical distance between rural communities and the Municipality of Santarém, where there is the specific treatment for the scorpionic accident, as well as the need to go through several health units until obtaining the treatment; the severity of local and systemic manifestations; the lack of knowledge of the local population about the proper management of the scorpionism; preventive actions and the lack of information regarding to the correct treatment. Therefore, it is proposed a hornbook to be used at the communities, to instrumentalize the population on the best actions to be taken for prevention and after the accident.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T21:38:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T17:10:05Z : No. of bitstreams: 1 173997.pdf: 3927403 bytes, checksum: 7b16f6d300c40b56dbeab5015d05b909 (MD5) / Ocorre em torno 10 mil casos de acidentes por ano no Brasil, causados por escorpião amarelo, sendo que o sintoma mais expressivo do envenenamento relatado por indivíduos picados é a dor intensa no local da picada. Devido a estes relatos propomos estudar neste trabalho os mediadores envolvidos na dor inflamatória induzida pelo veneno do escorpião Tityus serrulatus. Utilizamos para avaliar a intensidade de hiperalgesia em patas de ratos (Wistar,machos), o método de Randall-Selitto modificado por Ferreira e cols., 1978. O veneno administrado em patas de rato foi capaz de induzir hiperalgesia dependente da dose (0,312 a 10 ug/pata). Sugerimos a participação da bradicinina na hiperalgesia, uma vez que esta foi abolida pelo HOE140. O veneno possivelmente é capaz de liberar citocinas inflamatóriaa , visto que drogas como nimesulide, dexametasona e pentoxifilina foram capazes de abolir a hiperalgesia induzida pelo veneno. E o teste de ELISA para dosagem das concentrações interleucina-1 beta (IL-1) e TNF alfa, demonstraram que estas aumentam uma e duas horas após a administração do veneno. Substâncias que inibem a COX, como indometacina , meloxicam , paracetamol e dexametasona foram capazes de inibir a hiperalgesia, sugerindo a participação de prostaglandinas. Substâncias que bloqueiam a ação de aminas simpatomiméticas, como atenolol e guanetidina atenuaram a hiperalgesia, sugerindo a participação de aminas simpatomiméticas. A liberação de prostaglandinas e aminas simpatomiméticas provavelmente é concomitantee possui efeito somatório, visto que a associação de AINEs e simpatolíticos aboliram a hiperalgesia induzida pelo veneno. Demonstramos que substâncias como dipirona e diclofenaco, foram capazes de reverter o quadro de hiperalgesia. E que estas substâncias agem de forma analgésica via liberação de NO, visto que as ações do diclofenaco e da dipirona foram abolidas pelo prévio tratamento com LNMMA ou azul de metileno. Possivelmente o veneno não induz a liberação de histamina, e nem a síntese de leucotrienos, visto que substâncias que inibem a ações da histamina como a meclisina e composto 48/80 e o MK886, que impede a síntese de leucotrienos foram incapazes de inibir a hiperalgesia.

Introdução: O escorpionismo é reconhecido como um problema de saúde pública em alguns países em desenvolvimento devido à significativa incidência e gravidade, particularmente entre crianças e idosos com comorbidades. No Brasil, estima-se que ocorram cerca de 58.000 acidentes com mais de 80 óbitos por ano, o que representa uma incidência anual aproximada de 30 casos/100.000 habitantes/ano. Justifica-se, portanto, o presente estudo, tendo em vista que, no Município de Santarém-PA, na Amazônia, há dificuldade de acesso aos serviços de saúde pela população local, devido à extensão territorial da região. Objetivo: Analisar como se processa a ocorrência de acidente escorpiônico no Município de Santarém-PA. Método:O estudo foi observacional, exploratório, prospectivo, descritivo e qualitativo. Foram sujeitos do estudo, 19 pacientes vítimas de acidente escorpiônico atendidos no PSM, no período de Novembro de 2016 a Fevereiro de 2017. Dados relativos às características pessoais, de condições de vida e de trabalho foram extraídos dos prontuários e confirmados por ocasião das entrevistas realizadas enquanto estiveram internados na unidade hospitalar. Também foram levantados dados clínicos. Utilizou-se de instrumento para a captura dos dados. Os procedimentos éticos foram resguardados.Resultados: Em relação à caracterização dos sujeitos, verificou-se que dos 19 entrevistados 14 (73,7%) eram do sexo masculino. Quanto à faixa etária, 5 (26,3%) tinham idade entre 5 e 10 anos, e 2 (10,6%) entre 11-20 anos, os demais eram adultos ente 21 e 60 anos. Em relação ao tempo de estudo, mesmo levando em consideração os sujeitos menores de idade, alguns dos sujeitos adultos possuíam baixa escolaridade, sendo o maior número de anos de estudo entre 8 e 10 anos, em 7 (36,8%) dos entrevistados. A maior parte dos acidentes ocorreu na zona rural: 13 (68,5%). Quanto aos sintomas, a dor local foi relatadapor 18 (94,7%); a sensação de choque por 18 (94,7%). O tempo de chegada à unidade hospitalar, após a picada, foi maior que uma hora em 15 (78,9%) dos casos. A análise qualitativa dos depoimentos revelou cinco Temas: Situação em que ocorreu o acidente escorpiônico; Trajetória percorrida pelo paciente até o tratamento;Providências após a ocorrência do acidente; Manifestações clínicas apresentadas pelas vítimas dos acidentes escorpiônicos; O que foi feito com o escorpião (lacrau).Estes temas evidenciam a experiência dos sujeitos no manejo do agravo; a forma como se processa o percurso até a unidade de atendimento, evidenciando falhas no acesso e vulnerabilidade programática; e algumas características relacionadas ao modo de vida dos indivíduos. Conclusão: Verificou-se dificuldade no acesso aos serviços de saúde, relacionada à distância geográfica entre as comunidades rurais e o Município de Santarém, onde há o tratamento específico para o acidente escorpiônico, além da necessidade de percorrer várias unidades de saúde até a obtenção do tratamento adequado; a severidade das manifestações locais e sistêmicas; o desconhecimento da população local acerca do manejo apropriado do agravo escorpiônico; e afalta de informações a respeito de ações de prevenção e de tratamento correto. Propõe-se, portanto, uma cartilha para ser utilizada junto às comunidades, para instrumentalizá-las sobre as melhores ações a serem adotadas na prevenção e por ocasião do acidente. / Introduction: Scorpionism is recognized as a public health problem in some developing countries due to its significant incidence and severity especially among children and elderly with comorbidities. It is estimated that about 58,000 accidents occur in Brazil with over 80 deaths per year, representing an approximate annual incidence of 30 cases/100,000 inhabitants per year. The present study is justified since in the Municipality of Santarém-PA, in the Amazon region, there is great difficulty of access to health services by the local population due to the territorial extension. Objective: Analyze how the scorpion accident occurs in the municipality of Santarém-PA. Method:The study was observational, exploratory, prospective, descriptive and qualitative. Nineteen patients who were victims of scorpionic accidents were included in the study. They were treated at the PSM during November 2016 through February 2017. Data on personal characteristics and living and working conditions were extracted from the medical records and confirmed at the time of the interviews while the patients were at the hospital. Clinical data was also collected. An instrument was used to collect the data. The ethical procedures were preserved. Results: In relation to the characterization of the subjects, it was verified that 14 out of the 19 interviewed (73.7%) were male. As for the age group 5 (26.3%) were aged between 5 and 10 years old and 2 (10.6%) between 11 and 20 years old. The others were adults ranging from 21 and 60 years. Regarding the schooling, taking into consideration even the underage subjects, the majority of the adult subjects had low schooling and 7 (36.8%) with the greatest number of years of schooling ranged only from 8 to 10 years. Most accidents occurred in the rural area 13 (68.5%). Regarding to the symptoms, the local pain was pointed out by 18 (94.7%); the shock sensation by 18 (94.7%). The time of arrival at the hospital after the accident was over one hour in 15 (78.9%) cases. The qualitative analysis of the testimonies revealed five themes: Situation in which the scorpionic accident occurred; Trajectory traveled by the patient to the treatment site, Measures taken after the occurrence of the accident; Clinical manifestations presented by the patients; What had been done with the scorpion (lacrau). The themes revealed evidence of the experience by which the subjects dealt with the situation; the flow of the trajectory to the service unit evidencing access failures and programmatic vulnerability; and some characteristics related to the way of life of individuals. Conclusion:There was difficulty in accessing health services, related to the geographical distance between rural communities and the Municipality of Santarém, where there is the specific treatment for the scorpionic accident, as well as the need to go through several health units until obtaining the treatment; the severity of local and systemic manifestations; the lack of knowledge of the local population about the proper management of the scorpionism; preventive actions and the lack of information regarding to the correct treatment. Therefore, it is proposed a hornbook to be used at the communities, to instrumentalize the population on the best actions to be taken for prevention and after the accident.

Este trabalho relata o isolamento e caracterização bioquímica parcial de componentes do veneno de Tityus serrulatus (VTs) com ação sobre o sistema complemento (SC). O procedimento de purificação envolveu uma cromatografia de troca iônica do VTs em CM-celulose-52, em pH 7,8 e doze frações foram obtidas, denominadas de I a XIII. A fração I, que apresenta atividade sobre o SC sérico, foi filtrada em Sephacryl S-200 e dez subfrações foram obtidas e denominadas I-1 a I-10. A subfração I-1 foi recromatografada em uma coluna de DEAE-Sepharose, em pH 7,8. Cinco subfrações foram obtidas (DE-1 a DE-5) e as subfrações DE-2, DE-3 e DE-4 incubadas com soro humano normal (SHN) induziram redução da atividade lítica da via clássica/lectina (VC/L) de forma concentração-dependente. A subfração DE-2 apresentou uma banda eletroforética única no gel de eletroforese de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE), com peso molecular (PM) de aproximadamente 247.000 na ausência de b-mercaptoetanol e seis bandas na presença de b-mercaptoetanol. O procedimento de purificação dos componentes ativos da subfração I-4 envolveu basicamente uma cromatografia de troca iônica em Mono-Q, em pH 7,1. Sete subfrações (MQ-1 a MQ-7) foram obtidas neste passo cromatográfico. As proteínas MQ-5 e MQ-7 da subfração I-4 induziram redução da atividade hemolítica das VC/L e via alternativa (VA). Com o objetivo de investigar o mecanismo de ação sobre o SC, SHN foi incubado com a subfração I-4 ou seus componentes (MQ-5 e MQ-7). A imunoeletroforese mostrou a clivagem do fator B e de C3 por estas proteínas, similar ao induzido pela incubação de SHN com zimosan, o que confirma a hipótese de que MQ-5 e MQ-7 induzem a ativação do SC. A capacidade de gerar fatores quimiotáticos no soro foi investigada. Nas condições experimentais, a incubação de SHN com a subfração I-4, proteínas MQ-5 e MQ-7 induziu a migração de neutrófilos similar a induzida pela incubação de soro com zimosan, demonstrando que estas proteínas induzem clivagem de C3 e C5, gerando os fragmentos ativos de C3a e C5a. As proteínas MQ-5 e MQ-7 não foram capazes de lisar eritrócitos de coelho e carneiro. MQ-5 e MQ-7 não induziram redução da atividade hemolítica da VC/L após o aquecimento a 100ºC, portanto a ação destas proteínas não é conseqüência da presença de produtos bacterianos, como lipopolissacarídeos (LPS). As proteínas MQ-5 e MQ-7 apresentaram atividade fibrinogenolítica e caseinolítica e são metaloproteases, já que a atividade fibrinogenolítica foi inibida por EDTA, EGTA e 1,10-fenantrolina. Ambas proteínas apresentaram uma banda eletroforética única por SDS-PAGE, com um PM aproximado de 24.500 na ausência de b-mercaptoetanol, 33.100 na presença de b-mercaptoetanol e um ponto isoelétrico de 4,2. A seqüência N-terminal (Degradação de Edman) e a seqüência de peptídeos trípticos (Espectrometria de massa ESI-MS/MS) de MQ-5 e MQ-7 foram determinadas. Ambas proteínas apresentaram seqüência similar de aminoácidos. Em resumo, este trabalho mostrou que o VTs contém proteases (MQ-5 e MQ-7, metaloproteases) que são capazes de ativar o SC e podem ser importantes no processo inflamatório que ocorre em conseqüência do envenenamento. Além disso, estas proteínas podem ser usadas para depledar o SC em modelos experimentais de doenças em que este sistema está envolvido. / This work reports the isolation and partial biochemical characterization of components from Tityus serrulatus venom (TsV) with action on the complement system (CS). The purification procedure involved an ion-exchange chromatography of TsV on CM-celullose-52, at pH 7.8, twelve fractions were obtained and named I to XIII. Fraction I, showing activity on the serum CS, was filtered on Sephacryl S200 and ten subfractions were obtained and denominated I-1 to I-10. The subfraction I-1 was rechromatographed on a column of DEAE-sepharose, at pH 7.8. Five subfractions were obtained (DE-1 to DE-5) and subfractions DE-2, DE-3 and DE-4 incubated with NHS induced a concentration-dependent reduction in lytic activity of CP/L. Subfraction DE-2 showed a single electrophoretic band by SDS-PAGE, with a molecular weight (MW) of approximately 247,000 in the absence of -mercaptoethanol and six bands in the presence of -mercaptoethanol. The purification procedure of the active compounds of subfraction I-4 involved basically an ion-exchange chromatography on Mono-Q, at pH 7.1. Seven subfractions (MQ-1 to MQ-7) were obtained in this chromatography step. We found that proteins MQ-5 and MQ-7 of subfraction I-4 induced reduction in hemolytic activity for CP/L and AP. In order to investigate the mechanism of action on the CS, NHS was incubated with subfraction I-4 or its components (MQ-5 and MQ-7). The immunoelectrophoresis showed cleavage of factor B and C3 by these proteins, similar to that induced by incubation of NHS with zymosan, which corroborated the hypothesis that MQ-5 and MQ-7 induce activation of the CS. Their capacitiy to elicit serum-induced chemotaxis was then investigated. Under our assay conditions, incubation of NHS with subfraction I-4, protein MQ-5 and MQ-7 induced neutrophil migration similar to that induced by incubation of serum with zymosan, showing that the proteins induce cleavage of C3 and C5, thereby generating the active fragments C3a and C5a. Proteins MQ-5 and MQ-7 alone were unable to lyse rabbit or sheep erythrocytes. MQ-5 and MQ-7 did not induce reduction in hemolytic activity for CP/L after being heated to 100ºC, therefore the action of these proteins is not a consequence of the presence of bacterial products, such as lipopolyssaccharides (LPS). Proteins MQ-5 and MQ-7 showed fibrinogenolytic and caseinolytic activities and they probably are metalloproteases, since its fibrinogenolytic activity was inhibited by EDTA, EGTA and 1,10-phenantroline. Both MQ-5 and MQ-7 showed a single electrophoretic band by SDS-PAGE, with an approximate MW of 24,500 in the absence of -mercaptoethanol, 33,100 in the presence of -mercaptoethanol and an isoelectric point of 5.9. The N-terminal sequence (Edman Degradation) and the sequence of tryptic peptides (Mass spectrometry- ESI-MS/MS) from MQ-5 e MQ-7 were determined. The proteins MQ-5 e MQ-7 showed similar sequence of aminoacids. In summary, this work showed that the TsV venom contains proteases (MQ-5 and MQ-7, metalloproteases) which are able to activate the CS, and may therefore be important in the context of the inflammatory process occurring in consequence of envenomation. In addition these proteins may be used to deplete complement in experimental models of diseases involving participation of this system.

Envenenamentos por animais peçonhentos são frequentes e quase 35% dos acidentes são ocasionados por escorpiões, especialmente por Tityus serrulatus. A peçonha do escorpião amarelo Tityus serrulatus tem despertado o interesse médico e científico por ser uma mistura complexa de mucopolissacarídeos, inibidores de proteases, histamina, neurotoxinas, entre outros componentes. As neurotoxinas são as principais responsáveis pelos sintomas do envenenamento, por possuírem alta afinidade e seletividade para canais iônicos sensíveis à voltagem. Além de induzirem a liberação de neurotransmissores, as neurotoxinas também são capazes de estimular a liberação de citocinas, principalmente nos casos de envenenamento de maior gravidade. Os objetivos deste trabalho focaram o isolamento e a caracterização de uma nova toxina, denominada Ts19 fragmento I (Ts19 frag I) presente nas frações VII e VIII obtidas por cromatografia da peçonha de Tityus serrulatus em CM-celulose-52. Entre os componentes preponderantes destas frações estão a Ts4, um peptídeo não tóxico que induz reações alérgicas, e a Ts3-KS, que interage com canais para sódio e foi capaz de induzir a liberação de IL-6. As frações VII e VIII foram aplicadas em coluna de fase reversa C18 (4,6 x 250 mm) e os picos 19, 22 (Ts19 frag I) e 23 foram recromatografados em coluna C18 (2,1 x 250 mm). O sequenciamento por degradação de Edman permitiu a determinação de 57 resíduos de aminoácidos da Ts19 frag I, incluindo 6 resíduos de cisteína. Esta proteína mostrou compartilhar um elevado grau de identidade sequencial com outras toxinas que atuam em canais para K+ depositadas em bancos de dados. Sua massa molar íntegra de 6.571,3165 Da foi determinada por espectrometria de massas. Os ensaios funcionais em células de linhagem de macrófagos peritoneais demonstraram que a Ts19 frag I (50 ?g/mL) estimulou a liberação de óxido nítrico, IL-6 e não foi citotóxica na dose utilizada. Um ensaio para verificar a atividade hemolítica da Ts19 frag I também foi realizado e nas concentrações de 25 ?g/mL e 50 ?g/mL esta não demonstrou atividade citolítica. Nas frações VII e VIII também foram encontradas a Ts2, como um contaminante do pico 22, e a Ts19 frag II, cujo precursor é a Ts19 frag I. A Ts19 frag II presente no pico 19 foi sequenciada e mostrou-se contaminada com a Ts19 frag I. / Poisonings by venomous animals are frequent and almost 35 % of the accidents are caused by scorpions, especially by Tityus serrulatus. The venom of the yellow scorpion Tityus serrulatus has aroused scientific and medical interest, since it is a complex mixture of mucopolysaccharides, protease inhibitors, histamine, neurotoxins and other components. The neurotoxins are the main responsible for the symptoms of poisoning by having high affinity and selectivity for voltage-sensitive ion channels. In addition to inducing neurotransmitter release, neurotoxins are also able to stimulate the release of cytokines, especially in cases of severe poisoning. The objectives of this study focused on the isolation and characterization of a novel toxin, named Ts19 fragment I (Ts19 frag I) present in fractions VII and VIII obtained by chromatography of Tityus serrulatus venom on CM-cellulose-52 column. Among the predominant components of these fractions are Ts4, a non-toxic peptide that induces allergic reactions, and Ts3-KS, which interact with sodium channels and was able to induce the release of IL-6. Fractions VII and VIII were applied to C18 reverse phase column (4.6 x 250 mm) and the peaks 19, 22 (Ts19 frag I) and 23 were rechromatographed on C18 (2.1 x 250 mm) column. Sequencing by Edman degradation allowed the determination of 57 amino acid residues of Ts19 frag I, including six cysteine residues. This protein showed to share a high degree of sequence identity with other toxins acting on K+ channels deposited in databases. Its full molar mass of 6.571,3165 Da was determined by mass spectrometry. The functional assays in cell line of peritoneal macrophages showed that Ts19 frag I (50 ?g/mL) stimulated the release of nitric oxide, IL-6 and was not cytotoxic in the dose used. A test to verify the hemolytic activity of Ts19 frag I was also performed and concentrations of 25 ?g/mL and 50 ?g/mL of toxin showed no cytolytic activity. In the fractions VII and VIII were also found Ts2, as a contaminant of the peak 22, and Ts19 frag II, whose precursor is the Ts19 frag I. The Ts19 frag II present in peak 19 was sequenced and showed to be contaminated with Ts19 frag I.

Orientador : Edgard Ferro Collares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-13T21:44:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bucaretchi_Fabio_M.pdf: 1987105 bytes, checksum: 0b16fba8eea5d2003dcf03bf89feecc1 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram analisados os prontuários de 398 pacientes picados por escorpiões das espécies T. bahiensis (58,05%) e T. serrulatus (10,3%), e por aranhas do gênero Phoneutrta (31,75%), atendidos no CCI-HC-UNICAHP, no período de janeiro de 1984 a julho de 1988, com objetivo de avaliar as principais diferenças clínicas e epidemiológicas dos acidentes determinados por esses animais. Constatou-se que a maioria dos acidentes ocorreu dentro das residências, havendo diferenças entre os agentes quando analisou-se a distribuição quanto aos meses do ano, períodos do dia e geográfica, na Região Administrativa de Campinas. Os limites de idade variaram de 3 meses a 85 anos, e a faixa etária mais acometida, dividida em intervalos de 5 anos, foi de crianças com até 10 anos de idade. Predominaram os acidentes no sexo masculino, e, quanto ao segmento anatômico picado, verificou-se que a maioria ocorreu nas extremidades, sendo os determinados por escorpiões principalmente nas mãos e pela Phoneutría sp nos pés. Quanto à sintomatologia, foram mais freqüentes os sintomas locais, principalmente a dor. Utilizando-se uma classificação clínica de gravidade, comum aos três agentes, dividida em 4 estádios; ASSINTOMÁTICO, LEVE, MODERADO e GRAVE, pôde se constatar que, os acidentes foram significativamente mais graves quando os agentes foram T, serrulatu. e Phoneutria .p e em crianças com até 10 anos de idade / Abstract: The medical records of 398 patients attended at the Center for In toxication Control (CCI) \ HC-UNICAHP, victim of scorpion (T. bahinsis.-58,0% and T. Serralus-10,3%) or Phoneutria sp spider sting (31,7), from January 1984 to July 1988, were analysed in order to evaluate the clinical and epidemiological differences among the accidents caused by the these animals. It was found that the majority of the accidents occurred inside the residence, and that the three agents behaved differently when geographical, monthly and diurnal distribution of the accidents was considered. The age of the patients varied from 3 month to 85 years. The accidents occurred preferentially in children up to 10 years of age and in male patients. Host of the accidents involved the extremities , mainly the hands when caused by scorpions and the feet when Phoneutrta sp was the agent. As to the clinical picture, local symptoms were more frequent specially local pain. Using an unified classification of clinical grading from ASSYHPTOHATIC, HILD,HODERATE and SE VERE it was found that the accidents were significantly more serious in children up to 10 years or when T. Serrulatus or Phcneutria sp were the causing agents / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas

Spiders and scorpions are efficient predators arachnid (PA) consuming preys larger than themselves. Few studies reported, molecularly, the digestion in PA. This work describes a biochemical, transcriptomic and proteomic analysis of the midgut and midgut glands (MMG) and digestive juice (DJ) from Nephilengys cruentata and Tityus serrulatus MMG. Cathepsin L, B, D and F, legumain, trypsin, astacin, carbohydrases and lipases were identified by these approaches. Peptide isomerase and ctenitoxins, which are venom proteins were identified, showing a correlation among digestive and venom enzymes. Summarily, PA relies in multi peptidase system mainly constituted of astacins for extracellular prey liquefaction and cathepsin L for intracellular digestion, describing a molecular model for digestion. Probably, during evolution, gene duplication led a diversification of astacins in the derived groups of Arachnida, like spiders, distinctly from what is observed in basal groups like scorpions. These data on Arachnida digestion will allow detailed multi disciplinary studies. / Aranhas e escorpiões são aracnídeos predadores eficientes (AP) consumindo presas maiores que eles mesmos. Poucos estudos descrevem molecularmente a digestão em AP. Neste trabalho caracterizamos bioquimicamente, por transcriptoma e proteoma o intestino e glândulas digestivas (IGD) e suco digestivo (SD) de Nephilengys cruentata e o IGD de Tityus serrulatus. Catepsinas L, B, D e F, legumaína, tripsinas, astacinas, carboidrases e lipases foram identificadas. Peptídeo isomerase e ctenitoxina foram identificadas no IGD. Estas proteínas podem indicar uma correlação entre enzimas digestivas e do veneno. Portanto, AP apresentam várias peptidases principalmente astacinas para liquefazer a presa extraoralmente e catepsinas L para digestão intracelular, descrevendo um modelo molecular para a digestão. Provavelmente, durante a evolução, eventos duplicação gênica levaram à diversificação das astacinas aracnídeos derivados, como as aranhas, diferentemente dos grupos basais, como os escorpiões. Estes dados sobre a digestão em Arachnida permitirão estudos multidisciplinares.