Orientador: Antonio Carlos Artur / Coorientador: Daniel Marcos Bonotto / Banca: Tamar Milca Bortolozzo Galembeck / Banca: Antonio Misson Godoy / Banca: Fabiano Cabañas Navarro / Banca: José de Araújo Nogueira Neto / Resumo: A presente pesquisa trata da quantificação da exalação do gás 222Rn e correspondentes teores de U, Th e 40K em rochas utilizadas para fins ornamentais e para revestimento do Estado do Ceará. Cerca de 75% do território do Ceará é ocupado por embasamento cristalino, proporcionando condições favoráveis à ocorrência de granitos e outras rochas com características ornamentais tais como mármores, quartzitos, pegmatitos, entre outras. Considerando a crescente utilização de rochas como material de revestimento em ambientes de interiores, foram selecionados e utilizados quinze tipos distintos de rochas exploradas no Estado do Ceará, incluindo treze granitos com diferentes aspectos texturais e estruturais, um conglomerado e um pegmatito, que foram submetidos a análises petrográficas, determinações de índices físicos (densidade aparente, porosidade aparente e absorção de água), determinação dos teores de U, Th e K por ICP-MS e monitoramento da quantidade do gás 222Rn emanado pelas referidas rochas. As rochas naturalmente apresentam em sua composição mineralógica determinadas concentrações de elementos radioativos, como 232Th, 235U e 238U, que por decaimento radioativo geram o 220Rn, 219Rn e 222Rn, respectivamente, sendo este último alvo da pesquisa em questão por ser o elemento que apresenta a maior meia-vida dentre os três radionuclídeos, cerca de 3,85 dias. As concentrações de U fornecidas pelas rochas variaram de 0,2 ppm a 13,6 ppm, as quais foram utilizadas para determinar os teores de 222Rn em Bq/kg gerados pelas rochas (que se situaram entre 2,47 e 167,82 Bq/kg) e posteriormente comparados com as quantidades de gás 222Rn efetivamente exaladas (entre 0,09 e 6,04 Bq/kg). Os resultados relativos aos teores de U e correspondentes exalações do gás 222Rn fornecidos pelas rochas se mostraram bastante coerentes com as respectivas características petrográficas e de porosidade de cada material. As exalações do... / Abstract: This research aims to quantify the gas 222Rn exhalation and the corresponding levels of U, Th and 40K in rocks used for ornamental purposes and coating in Ceará State. About 75% of the Ceará territory has been occupied by crystalline basement, providing favorable conditions for the occurrence of granite and other rocks with ornamental features such as marble, quartzite, and pegmatite, among others. Considering the increasing use of rocks as coating material in interior environments, it had been selected and used fifteen different types of rocks exploited in Ceará State, including thirteen granites with different textural and structural aspects, a conglomerate and a pegmatite, which were submitted to petrographic analysis, determination of physical characteristics (apparent density, apparent porosity and water absorption), determination of the U level, Th and K by ICP-MS and monitoring the gas 222Rn amount emanated by these rocks. The rocks naturally present in their mineralogical composition determined concentrations of radioactive elements such as 232Th, 235U and 238U, which generate by radioactive decay the 220Rn, 219Rn and 222Rn, respectively, being the latter one the aim of this research, once this element has been showing the longer half-life among the three radionuclides, about 3.85 days. The U concentrations provided by the rocks had varied from 0.2 ppm to 13.6 ppm, which were used to determine the levels of 222Rn in Bq/kg generated by the rocks (which are between 2.47 and 167.82 Bq/kg) and then compared with the quantities of gas 222Rn effectively exhaled (between 0.09 and 6.04 Bq/kg). The results related to the U levels and the correspondent exhalation of the 222Rn gas, which had been provided by the rocks, had shown quite consistent with their petrographic characteristics and porosity of each material. The radon gas exhalations obtained in Bq/m3, for all the rocks studied in this work, were converted to pCi/L, showing values... / Doutor

Orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Cíntia Duarte de Freitas Milagre / Banca: André Gonzaga dos Santos / Banca: Marcelo Telascrêa / Banca: Flávio Soares Silva / Resumo: A cana-de-açúcar (Sacharam spp.) é uma planta de grande importância econômica para o Brasil, usada principalmente na produção de açúcar e etanol, mas que está sujeita ao ataque de diversas doenças, tais como aquelas associadas à proliferação de vírus, bactérias e fungos, que comprometem a produtividade, impactando a produção de biomassa. Estudos que visam estabelecer uma correlação entre a composição micromolecular e a resistência hospedeiro/patógeno ainda são pouco explorados, mas podem auxiliar na investigação dessas interações. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar e comparar os perfis metabólicos da cera epicuticular e de outros metabólitos lipofílicos de folhas de diversas variedades de cana-de-açúcar, por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas (GCMS). As análises qualitativas resultaram na identificação de 58 compostos na cera epicuticular (138 observados), 41 no extrato hexânico (65 observados) de folhas de cana-de-açúcar. Essas análises foram realizadas por GC-MS após sililação das amostras e alicerçadas principalmente na comparação de índices de retenção e espectros de massas experimentais com dados da literatura e de biblioteca de espectros. Algumas propostas foram também reforçadas pela análise do padrão de fragmentação, entre as quais incluem-se séries homólogas de hidrocarbonetos, ácidos e álcoois graxos e alquilresorcinóis, além de esteroides e triterpenos. A identificação de alquilresorcinóis e do triterpeno simiarenol foi confirmada por análise de frações de cera epicuticular por RMN de 1H e 13C. A julgar pelas massas de cada fração obtida no fracionamento da cera epicuticular de folhas, por cromatografia em camada delgada preparativa, e respectivos espectro de RMN de 1H, conclui-se que os constituintes principais da cera são 5-nonadecil resorcinol, heneicosil resorcinol e o triterpeno... / Abstract: Sugarcane (Sacharam spp.) is a plant of great importance to Brazil, used mainly in the production of sugar and ethanol, but is subject to several diseases, such as those associated with the proliferation of viruses, bacteria and fungi, that compromise productivity and impacting the production of biomass. Studies aimed to establish the correlation between the micromolecula composition and the host / pathogen resistance are underexplored, but may assist in the understanding of these interactions. Therefore, the aim of this study was to analyze and compare the metabolic profiles of epicuticular wax and other lipophilic metabolites from leaves of different varieties of sugarcane by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The qualitative analysis resulted in the identification of 58 compounds in epicuticular wax (seen 138) and 41 compounds in the hexane extract (seen 65) of leaves of sugarcane. These analyzes were performed by GC-MS after sample silylation, and the compound identification was grounded mainly on comparison of retention indices and mass spectra with experimental literature data and spectra libraries. Some proposals have also been enhanced by the fragmentation pattern analysis. The identified compounds include homologous series of hydrocarbons, fatty acids, policosanols and alkyl resorcinols, triterpenes and steroids. The identification of alkyl resorcinols and the triterpene simiarenol was confirmed by 1H NMR and 13C. Judging by the masses of fractions obtained from analysis of the epicuticular wax by preparative TLC, and its 1 H NMR spectrum, it was concluded that the main constituents of wax are 5-nonadecyl resorcinol, 5-heneicosil resorcinol and simiarenol. The comparison of the chemical profiles of epicuticular waxes and the hexane extract of leaves from different sugarcane cultivars showed random qualitative and quantitative variations between the samples, but without... / Doutor

Orientador: Mario Sergio Palma / Banca: Emer Suavinho Ferro / Banca: Norberto Peporinel Lopes / Banca: José César Rosa / Banca: Solange Maria de Toledo Serrano / Resumo: As aranhas construtoras de teia aérea orbital tornaram-se eficientes produtoras de diferentes tipos de sedas. Essas sedas são caracterizadas pela notável diversidade em sua composição química, estrutura e função, que vai desde a construção da teia orbital até o casulo. A seda produzida pelas aranhas são filamentos proteicos, constituindo uma interessante relação de estrutura-função e propriedades mecânicas, sendo produzida por um conjunto de glândulas abdominais. As fibras produzidas pela glândula ampulada maior são um dos tipos mais importantes de fibras, sendo um material nanoestruturado predominantemente composto por duas proteínas estruturais, espidroína-1 e espidroína-2. Enquanto que as fibras produzidas pela glândula flageliforme são compostas somente por uma proteína, a proteína da seda flageliforme. Apesar do grande interesse pelas propriedades mecânicas da seda das aranhas, visando o seu uso em aplicações biomédicas e biotecnológicas devido as suas propriedades de resistência, elasticidade e biocompatibilidade, pouco se conhece sobre os detalhes das glândulas produtoras de seda e o processo de fiação que ocorre para a produção das fibras. A seda da teia de aranha tem sido extensivamente estudada através de dados oriundos da engenharia genética e da tecnologia do DNA recombinante. No entanto, informações químicas como as modificações pós-traducionais (PTMs) podem ser perdidas, o que pode inviabilizar a manutenção das propriedades mecânicas e fisico-químicas tão características da seda de aranha. Sendo assim, tanto as espidroínas naturais quanto as suas formas recombinantes foram até então, bioquimica e fisicamente, caracterizados como se apresentassem as mesmas (ou similares) propriedades físico-químicas, sem qualquer consideração sobre a existência de PTMs em suas sequências. Por tanto, no presente estudo adotamos a abordagem proteômica bottom-up com a utilização e... / Abstract: The orb-web spiders became efficient producers of different types of silks. These silks are characterized by diversity in their chemical composition, structure and function, ranging from the construction of the orb-web to the cocoon. Spider web silk proteins (spidroins) have interesting relationships between their 3-D structures and mechanical properties of these protein fibers, which are secreted by specialized abdominal glands. The major ampullate silk fibers, produced by major ampullate gland, are one of the most important types of fibers spun produced by the orb-web spiders of genus Nephila, and are nanostructured composite materials predominantly composed of two structural proteins, designated spidroin-1 and -2. While the fibers produced by the flagelliform gland consist of only a single protein, the flagelliform silk protein. Despite the great interest in the spider silk mechanical properties, targeting its use in biomedical and biotechnological applications due to its properties of strength, elasticity and biocompatibility, the knowledge about the details of the silk-producing glands and the spinning process that occurs for fiber production are limited. The spider silk has been extensively studied using data from genetic engineering and recombinant DNA technology. However, chemical information such as post-translational modifications (PTMs) may be lost, making difficult to explain the mechanical and physico-chemical properties of the spider silks. Thus, both the natural protein and the recombinant spidroins have been biochemically and physically characterized as they would have the same (or similar) physico-chemical properties, without any consideration about the existence of PTMs in their sequences. Therefore, in this study we used a bottom-up proteomic approach combining 2-DE with in-gel protein digestion by different proteolytic enzymes, followed by mass spectrometry analysis (NanoLC-ESI-CID/ETD-MSn) to identify the protein... / Doutor

Orientador: Jonas Contiero / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Francisco José dos Santos / Banca: José Gregório Cabrera Gomez / Banca: Humberto Marcio Santos Milagre / Resumo: Os biossurfactantes são metabólitos secundários que apresentam atividade de superfície, podendo ser aplicados em diferentes processos industriais, como produção de fármacos, compostos químicos, cosméticos, biorremediação de ambientes poluídos por petróleo e derivados e recuperação terciária do petróleo. A maior vantagem destes compostos quando comparado aos surfactantes sintéticos reside na sua diversidade estrutural, baixa toxicidade e alta biodegradabilidade. Apesar das inúmeras vantagens apresentadas pelos biotensoativos, eles não são comercialmente utilizados devido ao alto custo de produção. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de ramnolipídios por mutantes de P. aeruginosa a partir de resíduos industriais e óleos vegetais, bem como caracterizar as propriedades de solução desses biossurfactante, além de verificar a influência da fonte de carbono na produção de homólogos de ramnolipídios por P. aeruginosa. Na primeira etapa as fermentações foram conduzidas em tubos de ensaio, após a seleção dos micro-organismos com potencial para alta produção, os mesmos foram testados em frascos Erlenmeyer. O mutante com potencial para elevada produção foi avaliado, junto com a linhagem selvagem, em fermentadores. A linhagem selecionada e a utilização do meio de cultura livre de cálcio contendo óleo de girassol como fonte de carbono acarretou em um aumento de 70% na produção de ramnolipídios. A adição de etanol às soluções de ramnolipídios comprovou o potencial desse tensoativo para serem aplicados na indústria de cosméticos, já que as propriedades de tensão superficial, agregação e emulsificação foram mantidas nas três concentrações de álcool adicionadas. Além disso, verificou-se que a mudança da fonte de carbono acarreta alteração nos tipos ácidos graxos e proporções de homólogos de ramnolipídios produzidos por P. aeruginosa LBI 2A1 / Abstract: The biosurfactants are secondary metabolites that exhibit surface activity and can be applied in different industrial processes such as production of pharmaceuticals, chemicals, cosmetics, bioremediation of environments polluted by oil and derivatives and tertiary recovery of oil. The greatest advantage of these compounds compared to synthetic surfactants lies in their structural diversity, low toxicity and high biodegradability. Despite the numerous advantages provided by biosurfactants, they are not commercially used due to the high cost of production. The present study aimed to evaluate the production of rhamnolipids by mutants of P. aeruginosa using industrial waste and vegetable oils as carbon source, as well as to characterize the properties of these biosurfactant solutions and investigate the influence of carbon source in the production of homologous rhamnolipds by P. aeruginosa. In the first stage fermentations were conducted in test tubes, after selection of microorganisms with potential for high production they were tested in Erlenmeyer flasks. The mutant with the potential for increased production was assessed, along with the wild strain in bioreactors. The selected strain and the calcium free medium used with sunflower oil as carbon source resulted in an 70% increase in the production of rhamnolipids. The addition of ethanol to the rhamnolipids solutions proved the potential of this biosurfactant to be applied in the cosmetic industry, since the properties of surface tension, emulsification and aggregation were held in all three concentrations of ethanol added. Moreover, it was found that changing the carbon source caused alteration in the types of fatty acids and rhamnolipids counterparts proportions produced by P. aeruginosa LBI 2A1 / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Alexander Batista Duharte / Banca: Fanny Guzman Quimbayo / Banca: Sandro Antonio Pereira / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Angela Maria Victoriano Campos Soares / Resumo: A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que afeta seres humanos e outros mamíferos, causada pelo complexo de espécies Sporothrix schenckii. A doença tem uma distribuição mundial, mas é endêmica no Brasil, principalmente no estado do Rio de Janeiro, onde o gato tem se tornado o principal agente transmissor. O tratamento antifúngico convencional é demorado e está associado a efeitos adversos, apontando a necessidade de terapias mais eficazes e seguras, sendo a vacinação profilática ou terapêutica provavelmente a alternativa mais promissora. Neste estudo foi avaliada a imunogenicidade e a toxicidade de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular (PSCs) de S. schenckii stricto sensu. As PSCs isoladas com o agente redutor Ditiotreitol foram caracterizadas por eletroforese, espectrometria de massas e pelo programa preditor de adesinas FungalRV. As PCSs foram formuladas com dois adjuvantes, hidróxido de alumínio (HA) ou Gel PetA, em duas concentrações ou usadas isoladamente. As formulações resultantes (PSC10, PSC100, HA+PSC10, HA+PSC100, PetA+PSC10 e PetA+PSC100) foram administradas em duas doses pela via subcutânea em camundongos Balb/C com intervalo de 2 semanas. O soro obtido de cada grupo sete dias após a segunda dose foi usado para analisar a imunogenicidade de cada formulação. O soro de todos os grupos vacinados, exceto os grupos PSC10 e HA+PSC10, reagiram com uma banda de 47 kDa, previamente identificada como a enzima glicolítica enolase e predita como uma adesina pela base dados FungalRV. Posteriormente foi demonstrada por citometria de fluxo a presença dessa proteína na parede celular de S. schenckii, sugerindo o papel imunogênico da mesma. A indução das imunoglobulinas IgG e IgG2a foi significativamente maior com HA+PSC100 e Pet+PSC100 em relação a PSC10, PSC100, HA+PSC10 e PetA+PSC10. A indução... / Abstract: Sporotrichosis is a subacute or chronic infection affecting humans and other mammals, caused by the Sporothrix schenckii species complex. The disease has a worldwide distribution, but is considered endemic in Brazil, mainly in the state of Rio de Janeiro, where the cat has become the main transmitting agent. The antifungal treatment is very long and often associated to adverse effects indicating the demand for preventive or more effective and safe therapeutic strategies. One of the more promissory approaches would probably be the prophylactic or therapeutic vaccination. This study evaluated the immunogenicity and toxicity of cell surface protein-based (CSP) vaccine candidates of S. schenckii stricto sensu. The CSPs isolated with dithiotreitol were characterized by electrophoresis, mass spectrometry and FungalRV adhesin predictor. The CSPs were formulated with two adjuvants, aluminum hydroxide (AH) or gel PetA, or used alone, in two concentrations. The obtained formulations (CSP10, CSP100, AH+CSP10, AH+CSP100, PetA+ CSP10 and PetA+ CSP100) were administered to Balb/C mice in two subcutaneous doses at 2 weeks interval. The serum obtained from each group 7 days after the second dose was used to analyze the immunogenicity of each formulation. All the serum obtained from vaccinated groups, except those from CSP10 and AH+CSP10 groups, reacted with a 47 kDa band, previously identified as the glycolytic enolase enzyme and predicted as an adhesin in the FungalRV program. Subsequently, we demonstrated the presence this protein in the cell wall of S. schenckii, suggesting its immunogenic role. The induction of IgG and IgG2a immunoglobulins was significantly higher with AH+CSP100 and PetA+CSP100 formulations with respect to CSP10, CSP100, AH+CSP10, and PetA+CSP10. The significant induction of IgG1 and IgG2a subtypes and IL-12, IFN-γ, IL4 and IL-17 by AH+CSP100, suggests a balance ... / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Alberto José Cavalheiro / Banca: Humberto Márcio Santos Milagre / Banca: Alessandra Regina Pepe Ambrozin / Resumo: Os ciclotídeos são produtos natura is de estrutura polipeptídica, contendo de 2 8 a 37 resíduos de aminoácidos, sendo seis deles resíduos de cisteína, altamente conservados e formados por ligações dissulfeto as quais exib em ciclização tipo "cabeça - cauda". Ess e arranjo estrutura l característico co nfere aos ciclotí deos uma estabilidade excepcional e resistência à proteólise . Devido a estas peculiaridades moleculares os ciclotídeos são substâncias com importante s funç ões biológica s, entre elas, de stacam - se as de defesa e adaptação dos organismos que as acumulam . São de gran de interesse para agricultura, agindo como inseticida s e, no uso medicinal p or apresentarem atividades anti - HIV, anti - helmíntic a, antimicrobian a e efeitos uterotônicos . A presente dis sertação trata d o estudo de ciclotídeos isolados d a planta Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, pertencente à família Violaceae, um táxon de ocorrência frequente n a Mata Atlântica . Já existem dados na literatura sobre o estudo de ciclotídeos das raíze s e o presente estudo é importante na medida que registra a ocorrência desta classe de substâncias e a sua caracterização nas folhas e galhos desta espécie, levando a informações mais completas sobre a ocorrência de ciclotídeos em Violaceae . A extração de c iclotídeos do material vegetal ( galhos e folhas secos e moído s ) foi feita mediante maceração hidrometanólica até esgotamento do material vegetal, seguid a de partição líquido - líquido com diclorometano. A fase polar foi concentrada e submetida à crom atografia em coluna, empregando octadecilsilano (C 18 ) como fase estacioná ria, obtendo - se frações ricas em peptídeos. O processo de purificação foi realizado p or HPLC preparativ o e/ou analític o com eluição gradiente, empregando - se acetonitrila e ág ua como fase móv e l, o que permitiu a obt... / Abstract: C yclotides are pol ypeptide str uctures, c omprise 2 8 - 37 amino acid residues, six of the m, are cysteine residues, highly conserved and formed by disulfide bonds, which exhibit "head - tail" cyclization type. This structural feature gives to cyclotides remarkable stability and resistance to proteolysis. Due to these singularities, such compound s have disclosed important biological functions . A mong the m ; the literature has highlighted important ecological properties as defense and adaptation of the organisms, which accumulate these natural products. Accordingly, they are of great interest to agri culture, acting as insecticide, and to medicine, since some compounds have displayed anti - HIV activity, anthelmintic, antimicrobial and uterotonic properties. This research deals with the study of cyclotides isolated Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, belonging to the taxon Violaceae, which frequently occurs in the Atlantic Forest. There are several studies in the literature on the occurr ence of this class of compounds and their characterization in the leaves and branches of Violaceae plant species, le ading to more complete information on the occurrence of cyclotides, and their biological significance for these plants. The cyclotides extraction of plant material (dried and ground branches and leaves) was carried out by maceration with methanol/water, fo llowed by a liquid - liquid partition with dichloromethane. The polar phase was concentrated and subjected to chromatographic column using octadecylsilane (C 18 ) as stationary phase, achieving several fractions rich in peptides. The purification process was p erformed by analytical and/or preparative HPLC, in gradient of acetonitrile and water as mobile phase, which led to the isolation of the cyclotides. The amino acid sequence (primary structure) of the isolated compounds was established by MALDI - TOF /TOF by r eduction and alkylation re... / Mestre

Orientador: Sandro Roberto Valentini / Coorientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Mário Henrique Bengtson / Banca: Erich Birelli Tahara / Banca: Iran Malavazi / Banca: Flávio Henrique da Silva / Resumo: O fator de tradução 5A (eIF5A) é altamente conservado e essencial para a viabilidade celular. eIF5A é a única proteína conhecida que sofre uma modificação pós-traducional que gera um resíduo de hipusina, essencial para sua função. Apesar de eIF5A já ter sido envolvida em diferentes vias celulares, estudos mais recentes reforçam seu papel no processo de síntese proteica, mais especificamente na etapa de elongação da tradução. Resultados do nosso grupo revelaram uma relação funcional entre eIF5A e o Fator de Elongação da Tradução 2 (eEF2). No intuito de melhor compreender o papel de eIF5A com o processo de elongação da tradução, o presente trabalho buscou aprofundar os estudos de interação física entre eIF5A e eEF2. Foi mostrado que eIF5A não interage fisicamente de forma direta com eEF2 e que a interação física destes dois fatores é dependente de complexos ribossomais. Ainda, foi revelado que eIF5A e eEF2 não estão presentes no ribossomo simultaneamente ou não ocupam o mesmo ribossomo por muito tempo. Além disso, como foi mostrado que o homólogo de eIF5A em bactéria, EF-P, interage físicamente com a proteína ribossomal L1, foi investigada a relação funcional entre eIF5A e L1 em levedura. Os resultados obtidos mostraram uma forte interação genética entre estes fatores e uma possível dependência da presença de L1 para a ligação de eIF5A no ribossomo. Por fim, como foi mostrado que eIF5A é necessária para a tradução de sequências de prolinas, as quais causam stalling do ribossomo durante a tradução, e que outros tipos de stalling do ribossomo recrutam e ativam o complexo Ribossome Quality Control (RQC), foi estudada também a interação funcional entre o eIF5A e os fatores do RQC, Ltn1 e Tae2. Apesar de ter sido identificada interação genética entre mutantes de eIF5A e destes fatores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The translation factor 5A (eIF5A) is highly conserved and essential for cell viability. eIF5A is the only protein known to contain the essential amino acid residue hypusine, generated by a post-translational modification. Although eIF5A has been involved in different cellular pathways, recent studies have strengthened its role in protein synthesis, more specifically in the translation elongation step. Results of our group revealed a functional correlation between eIF5A and the Translation Elongation Factor 2 (eEF2). To further investigate the role of eIF5A in translation elongation, we carried out new experiments to study the physical interaction between eIF5A and eEF2. eIF5A does not interact directly with eEF2 and their physical interaction is dependent on ribosomal complexes. Moreover, eIF5A and eEF2 do not bind simultaneously to the same ribosome or they do not occupy the same ribosome for a long time. Additionally, as it was shown that the homolog of eIF5A in bacteria, EF-P, interacts physically with the Large Ribosome Protein 1 (L1). We evaluated a functional interaction between eIF5A and L1. The results demonstrated a strong genetic interaction between these factors and a possible dependency of L1 in the eIF5A ribosome binding. Finally, as eIF5A was recently involved in translation of polyproline stretches, which cause ribosome stalling, and other types of ribosome stalling recruit and activate the Ribosome Quality Control (RQC) complex, we also investigated the functional interaction between eIF5A and the RQC factors Ltn1 and Tae2. Although it was identified genetic interaction between mutants of eIF5A and mutants of these RQC factors, ribosome stalled at polyproline residues does not recruit the RQC complex. Curiously, it was observed that eIF5A is important for the formation of cellular aggregates... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O esgotamento de reservas de petróleo e os problemas ambientais fomentados pela combustão de combustíveis fósseis gera interesse na utilização de biomassas na obtenção de combustíveis e produtos químicos. O bio-óleo, líquido viscoso de coloração escura, produzido mediante pirólise de biomassa, consiste em uma mistura complexa de compostos orgânicos. O tegumento do grão de café (silverskin), é subproduto oriundo da torra deste, sendo atualmente descartado, representando um grave problema ambiental. Logo, neste estudo foi otimizado a temperatura final e a vazão de gás inerte para a pirólise de silverskin em reator de leito fixo, utilizando um delineamento composto central aliado à superfície de resposta. Os valores ótimos calculados foram 560 °C, para a temperatura final de pirólise, e 49,4 mL.min-1, para a vazão de N2, sendo obtido um rendimento de fase orgânica de 15,2 ± 0,3% nessas condições. A composição química desse bio-óleo foi avaliada por cromatografia gasosa bidimensional abrangente acoplada à espectrometria de massas quadrupolar (GC×GC/qMS), aliado à utilização de padrões e de índices de retenção. Foram identificados 228 compostos (90,1% da amostra) nesse bio-óleo. A classe química majoritária, em termos de volume percentual, foi a dos fenóis (27%), seguida dos compostos nitrogenados (18,4%). Além disso, vale ressaltar a elevada representatividade da classe dos hidrocarbonetos saturados (8,3%), insaturados alifáticos (6,7%) e aromáticos (7,8%), que juntos somam 22,8% da amostra. Os resultados apontam que o bio-óleo de silverskin possui potencial para atuar como fonte de insumos químicos. / The depletion of oil reserves and environmental issues promoted by the combustion of fossil fuels generates interest in the use of biomass to obtain fuel and chemicals. The bio-oil, a dark colored viscous liquid produced by pyrolysis of biomass, is a complex mixture of organic compounds. The coffee bean tegument (silverskin), is a by-product derived from the coffee roasting. This residue has been discarded, which constitutes a serious environmental problem. Therefore, this study has optimized the final temperature and the flow of inert gas for the pyrolysis of silverskin in a fixed bed reactor, by using a central composite design and response surface. The optimal values calculated were 560 °C for the final pyrolysis temperature, and 49.4 mL min-1 for the N2 flow rate. The organic phase yield was 15.2 ± 0.3% under these conditions. The bio-oil chemical composition was evaluated by comprehensive two-dimensional gas chromatography coupled to quadrupole mass spectrometry (GC×GC/qMS), combined with the use of standards and retention indexes. 228 compounds were identified (90.1% of the sample) in this bio-oil. The major chemical class, in terms of volume percentage, were the phenols (27%), followed by nitrogen compounds (18.4%). In addition, it is worth mentioning the high representability of the saturated hydrocarbons (8.3%), unsaturated aliphatic (6.7%), and aromatics (7.8%), which together account for 22.8% of the sample. The results show that the silverskin bio-oil has the potential as a source of chemical inputs.

O uso de inseticidas piretróides na agricultura, pecuária e em áreas urbanas pode gerar problemas à saúde dos seres humanos e dos animais. O controle destes inseticidas nos alimentos é uma importante ferramenta para avaliar o risco da exposição a estes compostos. Em vista disso, este estudo tem por objetivo desenvolver um método analítico eficiente, sensível e confiável para o preparo das amostras e quantificação de ultra traços de 17 piretróides e um organofosforado, o clorpirifós, utilizando padrões marcados além de realizar uma discussão sobre a incidência destes inseticidas. Os alimentos de origem animal selecionados para este estudo são: músculo bovino, peixe e de frango, leite e ovos. São alimentos ricos em gordura, devido a isso, são candidatos a estarem contaminados com estes inseticidas que apresentam propriedades lipofílicas. O preparo da amostra consistiu na liofilização, extração assistida por ultrassom com solvente orgânico e clean up utilizando cartuchos de SPE com fases C18 e alumina básica. A técnica instrumental utilizada foi a cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massa no modo tandem utilizando ionização química no modo negativo (GC/NCI-MS/MS). As recuperações obtidas foram entre 50 e 120% para a maioria dos inseticidas com uma média de desvio padrão relativa abaixo de 10%. Na análise do perfil isomérico dos resultados de recuperação houve predominância dos isômeros na forma cis perante a trans. No quesito sensibilidade, os limites de detecção atingiram valores de 0,06 a 101 ng kg-1. O método desenvolvido foi utilizado para analisar 152 amostras, sendo que destas, apenas 4 não apresentaram nível de contaminação por inseticidas piretróides ou clorpirifós. A maioria estava contaminada com pelo menos 2 a 3 destes inseticidas. Os inseticidas detectados foram a bifentrina, cipermetrina, cialotrina, permetrina, deltametrina e o clorpirifós. Cabe ressaltar que apenas uma amostra de leite estava contaminada com níveis de clorpirifós acima do permitido. Na estimativa da ingestão diária, nenhum dos inseticidas ultrapassou os limites de segurança aceitáveis. Houve um maior nível de correlação entre a quantidade de inseticida e o teor de lipídios nas amostras de músculo bovino, de peixe e de frango. Nas amostras segregadas de ovos, os inseticidas estavam concentrados na gema. Os fatores isoméricos calculados nas amostras positivas apresentaram valores diferentes dos fatores isoméricos dos padrões e dos produtos comerciais. Houve uma predominância dos isômeros cis para a cipermetrina e um predomínio do segundo isômero (λ-cialotrina), no caso da cialotrina. / The use of pyrethroid insecticides in agriculture, livestock and in urban areas can lead to problems for the health of humans and animals. The control of these insecticides in food is an important tool to control the risk of exposure to these compounds. Therefore, the objective of this study was to develop an efficient, sensitive and reliable analytical method to promote the sample preparation and analysis of 17 pyrethroids and one organophosphorus, chlorpyrifos, using labelled standards and to discuss the incidence of these insecticides. The foods selected for this study are of animal origin, they are beef, fish, chicken, milk and eggs. They are foods rich in fat, in view of that, are candidates to be contaminated with these insecticides that have lipophilic properties. The proposed sample preparation method was based on freeze-dried samples, solvent extraction and clean up using SPE cartridges with C18 and basic alumina phases. The instrumental technique used was gas chromatography coupled to mass spectrometry in tandem, with negative chemical ionization (GC/NCI-MS/MS). Recoveries in the range of 50 and 120% were obtained with a mean relative standard deviation below 10%. In the analysis of the isomeric profile of the recovery results there was predominance of the isomers in the form cis. In the sensitivity question, detection limits reached values of 0.06 to 101 ng kg-1. The method developed was used to analyze 152 samples, of which only 4 did not present any level of contamination with pyrethroids or chlorpyrifos insecticides. Most were contaminated with at least 2 to 3 of these insecticides. The insecticides detected were bifenthrin, cypermethrin, cyhalothrin, permethrin, deltamethrin and chlorpyrifos. It is important to mention that only one milk sample was contaminated with chlorpyrifos levels above that allowed. In the estimation of daily intake, none of the insecticides exceeded the safety limits of acceptable daily intake. There was a strong correlation between the amount of insecticide and the lipid content in bovine muscle, fish and chicken samples. In the eggs segregated samples the insecticides were concentrated in the yolk. The calculated isomeric factors in the positive samples presented different values of the isomeric factors of the commercial products and standard. There was a predominance of the cis isomers for cypermethrin and a predominance of the second (λ-cyhalothrin) isomer in the case of cyhalothrin.

Neste trabalho foi desenvolvido um método de análise de erva mate mediante as técnicas de espectroscopia no infravermelho próximo (NIR), espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES) e espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS), com o intuito de classificar a erva mate por país de origem da América do Sul. Para isto, foram utilizados métodos de análise multivariada supervisionada e não supervisionada, como a análise hierárquica por agrupamentos (HCA), a análise por componentes principais (PCA), o método do k-ésimo vizinho mais próximo (kNN), soft independent modeling class analogy (SIMCA), análise discriminante por mínimos quadrados parciais (PLS-DA) e análise discriminante por máquinas de vetor de suporte (SVM-DA). Foram analisadas 54 amostras de erva mate provenientes da América do Sul (Argentina, Brasil, Paraguai e Uruguai). As amostras foram cominuídas em moinho criogênico e diretamente analisadas para a obtenção dos espectros de reflexão no NIR. Para a determinação dos elementos Ca, K, Mg, Al, Fe, Mn, Ba, Cu, P, Sr e Zn por ICP OES e Li, Be, Ti, V, Cr, Ni, Co, As, Se, Rb, Mo, Ag, Cd, Sb, La, Ce, Pb, Bi e U por ICP-MS, foi realizada a decomposição das amostras por via úmida em bloco digestor em sistema fechado. A classificação da erva mate por país de origem foi possível, sendo que a melhor classificação para todos os métodos de análise multivariada foi obtida por NIR e para as concentrações dos elementos avaliados, a SVM-DA foi o melhor. Conclui-se que a erva mate pode ser avaliada por país de origem mediante a técnicas de ICP OES, ICP-MS e NIR. / A method of yerba mate analyzis using near infrared spectroscopy (NIR), inductively coupled plasma optical emission spectrometry ( ICP OES ) and inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) was developed in order to classify yerba mate by country of origin in South America. To this end, principal components analysis (PCA), k-nearest neighbor (KNN), soft independent modeling class analogy (SIMCA), partial least square discriminant analysis (PLSDA), discriminant analysis by vector machine (SVM-DA) were used for multivariate analysis of the NIR spectra and element concentrations found in 54 samples of yerba mate from South America (Argentina, Brazil, Paraguay and Uruguay ). The samples were ground in cryogenic mill and directly analyzed in order to obtain the reflectance spectra in the NIR region. For elements determination (Ca, K, Mg, Al, Fe, Mn, Ba, Cu, P, Sr and Zn by ICP OES and Li, Be, Ti, V, Cr, Ni, Co, As, Se, Rb, Mo, Ag, Cd, Sb, La, Ce, Pb, Bi and U by ICP-MS), the samples were acid digested in closed vessel in digestion block. The classification of the yerba mate by country of origin was possible, whereas the best classification using all multivariate analysis methods was obtained for NIR. For the element concentrations, the best classification was obtained by SVM-DA. It was concluded that yerba mate classification by country of origin can be assessed through ICP OES, ICP-MS and NIR.