Trezentos pacientes portadores de colonização intracavitária pulmonar (pelos exames soro lógico e/ou tecidual) foram investigados num período de 10 anos. Os casos foram classificados como: Aspergillus fumigatus (246 casos); Ao niger (21 casos); A. flavus (7 casos); Pseudallescheria boydii (1 caso); colonização fúngica não especificada (21 casos) e colonização actinomicética (4 casos). os grupos A. niger (çasos)e A. fumigatus (controles) foram comparados a respeito de variáveis clínicas e laboratoriais, por serem os mais freqUentes e pela pobreza da literatura sobre A. niger. Esta análise mostrou associações estatisticamente significativas com o A. niger para;sexo masculino (Razão de Chances = 3,28; p <0,05); infecção nosocomial, ocorrendo em hospitais de conservação precária (RC = 150,8; p< 0,001); tuberculose ativa (RC = 8,03; P <0,001); diabete mélito tipo 11 (RC = 10,67; p<O,OOl); e êxito letal (RC = 3,1; p<0,02). Por outro lado, cristais de oxalato de cálcio no escarro e oxalose sitêmica só ocorreram no grupo A.niger. As implicações etiológicas e diagnósticas destes achados sao discutidas, enfatizando o papel do ambiente externo, da oxalose, do acúmulo de ácidos e da tuberculose ativa na etiopatogenia do A. niger. / Three hundred patients with intracavitary pulmonary colonization (by serologic and/or tissue examinations) were analysed during a ten years period. The cases were classified as: Aspergillus fumigatus (246 cases); A. niger (21 cases); A. flavus (7cases); Pseudallescheria boydii (1 case); fungal colonization not especified (21 cases) and actinomycetic colonization (4 cases). Due to their frequency and the scarcity of literature about A. niger, the groups A. niger (cases) and A. fumigatus (controls) were compared with respect to clinical and laboratorial variables. This analysis showed statistically significant associations with A. niger for: male sex (Odds Ratio = 3,28; p< 0,05); nosocomial infection, which occurred.in hospitaIs in poor state of repair (aR = 150.8; p<O,ooU; active tuberculosis (aR = 8,03; p<O,OOl); type 11 diabete mellitus (aR = 10,67; p<O,ooU; and lethal outcome (aR = 3, 1; p < o, 02). On the other hand, calcium oxalate crystals in the sputum and sistemic oxalosis occured only in A. niger group. The etiologic and diagnostic implications of these findings are discussed, with emphasis on the role of the externa 1 environernent, oxalosis, acid acurnulation and ative tuberculosis in the etiopathogenesis of A. niger.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-02T18:17:54Z No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-06T17:55:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-06T17:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_SandroCoelhoLinharesMontalvão_PARCIAL.pdf: 1518701 bytes, checksum: d86ee1aac30dfe2a9bb7f01f5ab7f320 (MD5) Previous issue date: 2017-10-06 / O algodoeiro é uma das espécies mais cultivadas no mundo. A cotonicultura brasileira tem destaque, ocupando o 5o lugar entre os produtores mundiais e 3o como exportador. Apresenta a maior média de produção por área cultivada (~5t/ha) em sequeiro no mundo. As pragas e doenças podem comprometer a produtividade. Assim, duas doenças merecem destaque, a meloidoginose (Meloidogyne incognita raças 3 e 4) e a murcha de fusário (Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum), pois podem ser destrutívas às plantas, tanto isoladamente como em associação. A dificuldade de se fazer um controle eficiente, é devido à capacidade dos patógenos de parasitarem uma ampla gama de hospedeiros e terem grande persistência no solo, dificultando o controle através de tratos culturais como a rotação de cultura e até mesmo a utilização de tratamentos químicos. A busca por alternativas como o uso de Bacillus sp. no controle de doenças de plantas é justificada. Assim, o objetivo geral desse trabalho foi selecionar e caracterizar estirpes de Bacillus antagonistas a M. incognita e F. oxysporum f. sp. vasinfectum (Fov). Para tanto, foi realizado um ensaio in vitro com 11 estirpes de Bacillus thuringiensis para verificar a atividade tóxica a Caenorhabditis elegans, e posteriormente contra J2 de M. incognita, em laboratório e em casa de vegetação. Também foram testados quatro produtos biológicos (Onix, Rizos, NemaControl e Nemix) e carbofuran – (Furadan 350 SC) para o controle de M. incognita em casa vegetação. Para isso, foi instalado um ensaio em delineamento inteiramente casualizado com seis repetições por tratamento e uma planta por vaso. Foram inoculados os ovos e eventuais J2 do nematoide, 20 dias após a emergência das plantas e as seguintes variáveis foram avaliadas: altura (cm), peso fresco da parte aérea (g), peso seco da parte aérea (g), peso fresco de raiz (g), peso seco de raiz (g) e fator de reprodução (FR). Para a histopatologia, foi selecionado o produto Onix (Bacillus methylotrophicus) inoculado em sementes de algodão. Vinte dias após a emergência das plântulas foi inoculada uma suspensão de J2 de M. incognita. As avaliações foram realizadas entre 2 e 45 dias após a inoculação, com o cálculo de fator de reprodução, acompanhamento da penetração de J2 durante os 12 primeiros dias após a inoculação dos nematoides e cortes histopatológicos da raiz para acompanhar o desenvolvimento do parasita. Para a realização dos ensaios de seleção de Bacillus contra Fov, foi realizada uma seleção prévia do meio de cultura, onde diferentes concentrações de meio EMBRAPA e meio BDA foram avaliadas. Nos testes de antagonismo, foi proposta uma escala de notas para facilitar as avaliações, onde com os testes e o auxilio da escala foram avaliados 178 isolados de Bacillus e selecionadas 13 estirpes para os ensaios de metabólitos solúveis em água e metabólitos voláteis. Por fim, foi realizado um teste em casa de vegetação para avaliar a eficiência dos isolados selecionados in vitro, onde as sementes de algodão foram sanitizadas, microbiolizadas com micélio e esporo de Fov colocadas em bandejas com substrato, inoculadas com os tratamentos e conduzidas em casa de vegetação por 25 d. Quatro estirpes de B. thuringiensis tóxicas a C. elegans também apresentaram atividade de controle in vivo sobre M. incognita; o produto Onix reduziu aproximadamente 50% o FR de M. incognita; para os testes de antagonismo contra Fov, as estirpes de Bacillus, GF267, S1301, S1823, S1967, S2535 e S2536 foram selecionadas. / Cotton crop is one of the most cultivated arround the world. The brazilian cotton production has grown, occupying 5th place among the world's producers and 3rd as exporter. Brazil presents the highest average production per cultivated area (~5t/ha) in non-irrigated land in the world. Pests and diseases can compromise the productivity. Thus, two diseases highlight: root-knot nematode (Meloidogyne incognita races 3 e 4) and Fusarium-wilt (Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum). These pathogens can be destructive to the plant, both singly as in association. The difficulty of making an efficient control, is due to the ability of the pathogens to infect a wide range of hosts and to have great persistence in soil, making difficult to control through cultural practices as the crop rotation and even the use of chemical treatments. The search for alternatives such as the use of Bacillus sp. in the control of plant diseases is justified. Thus, the overall objective of this work was to select and characterize strains of Bacillus antagonists to M. incognita and F. oxysporum f. sp. vasinfectum (Fov). For that, initialy an in vitro trial was conducted with 11 strains of Bacillus thuringiensis to evaluate their toxic activity to Caenorhabditis elegans, and later against J2 juvenilles of M. incognita, in laboratory conditions and under greenhouse. Were also tested four commercial products (Onix, Rizos, NemaControl and Nemix) and carbofuran – (Furadan 350 SC) for the control of M. incognita under greenhouse. This test was conducted in a completly randomized design with six replications per treatment and one plant per pot. Nematode eggs were inoculated, 20 d after emergence of plants and the following plant variables were evaluated: height (cm), shoot fresh weight (g), shoot dry weight (g), fresh root weight (g), root dry weight (g), the reproduction factor (RF). For the histopathological study was selected the product Onix (Bacillus methylotrophicus) inoculated in cotton seeds. Twenty days after cotton seed germination a suspension juvenilles of M. incognita was inoculated. The evaluations was carried out from 2 to 45 d after inoculation. The reproduction fator and penetration of J2 were evaluated and observed by histopathology tissue cuts. For the tests of selection of Bacillus against Fov, a prior selection of culture media was done, where different concentrations of culture medium EMBRAPA and BDA were evaluated. In tests of antagonism 178 isolates of Bacillus have been tested and 13 strains were selected for water-soluble metabolites and volatile metabolites. Finally, a greenhouse test was conducted to evaluate the efficiency of in vitro selected isolates, where the cotton seeds were inoculated with Fov and antagonists, and, cultivated under greenhouse for 25 d. Four strains of B. thuringiensis toxic to C. elegans also in vivo controled M. incognita; the product ‘Onix’ reduced around 50% of RF for M. incognita; in tests of antagonism against Fov, the strains of Bacillus, GF267, S1301, S1823, S1967, S2535 e S2536 were selected.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-17T17:17:06Z No. of bitstreams: 1 2018_LaraRodriguesNesralla.pdf: 1156814 bytes, checksum: c33542f90711f474b97e7997a27b4a28 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-07-20T21:04:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_LaraRodriguesNesralla.pdf: 1156814 bytes, checksum: c33542f90711f474b97e7997a27b4a28 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T21:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_LaraRodriguesNesralla.pdf: 1156814 bytes, checksum: c33542f90711f474b97e7997a27b4a28 (MD5) Previous issue date: 2018-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Atualmente a ocorrência de perdas na produção da cultura da soja (Glycine max (L.) Merrill no Brasil é decorrente, entre outros fatores, de doenças fúngicas. A engenharia genética é uma importante ferramenta para solucionar esses problemas, visto que possibilita a introdução de genes exógenos nas plantas, os quais favorecem a resposta de defesa destas a estresses envolvendo esses patógenos causadores de doenças. Dentre esses genes destaca-se o Gsl5, que atua no espessamento da parede celular das plantas. Com o objetivo de obter plantas transgênicas de soja cuja parede celular fosse mais espessa e retardasse o avanço do fungo, o gene Gsl5 foi utilizado para transformação de embriões de soja via biobalística. Foram bombardeados 1080 embriões e destas 357 plantas desenvolveram e foram analisadas pelo método da PCR, do Dot-Blot e do sequenciamento para assim se obter a taxa e a eficiência da transformação e para se obter a confirmação da inserção do gene na planta. / Currently, the occurrence of losses in the production of soybean [(Glyicine max (L.) Merrill] in Brazil is due, among other factors, to fungal diseases. Genetic engineering is an important tool to solve these problems, since it allows the introduction of exogenous genes in plants, which favor the defense response of the plants to stresses involving these disease-causing pathogens, among them Gsl5, which acts on the thickening of the cell wall of plants.In order to obtain transgenic soy plants the Gsl5 gene was used to transform soy embryos via biobalistics, and 1080 embryos were bombarded and of these 357 plants developed and were analyzed by the PCR method, Dot-Blot and sequencing in order to obtain the rate and efficiency of the transformation and to obtain confirmation of the insertion of the gene into the plants.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1599_1.pdf: 10160665 bytes, checksum: 18093a04cd5f95193e064e8b75b921af (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Universidade Federal de Pernambuco / O resultado de óbitos mal-definidos torna indispensável à necropsia para que seja elucidada a causa morte. Dessa forma, este estudo visou verificar infecções fúngicas isoladas ou em associação com outras doenças relacionadas ao óbito, bem como dados epidemiológicos que possam ter contribuído. Durante a necropsia, foram realizados exames micológicos e histopatológicos. Os órgãos acometidos por fungos foram pulmões, cérebro, rim, meninges, fígado e coração, sendo diagnosticadas post mortem aspergilose, candidíase, fusariose e trichosporonose. Os indivíduos eram de ambos os sexos, com idade variando de 29 a 91 anos e desempenhavam variadas ocupações. Diabetes mellitus, tuberculose, esquistossomose, cardiopatia, hipertensão intracraniana, neoplasia cerebral, insuficiência renal foram doenças de base associadas às infecções fúngicas. Os dados refletem a dificuldade diagnóstica e terapêutica dessas infecções e confirmam a importância da necropsia

Trezentos pacientes portadores de colonização intracavitária pulmonar (pelos exames soro lógico e/ou tecidual) foram investigados num período de 10 anos. Os casos foram classificados como: Aspergillus fumigatus (246 casos); Ao niger (21 casos); A. flavus (7 casos); Pseudallescheria boydii (1 caso); colonização fúngica não especificada (21 casos) e colonização actinomicética (4 casos). os grupos A. niger (çasos)e A. fumigatus (controles) foram comparados a respeito de variáveis clínicas e laboratoriais, por serem os mais freqUentes e pela pobreza da literatura sobre A. niger. Esta análise mostrou associações estatisticamente significativas com o A. niger para;sexo masculino (Razão de Chances = 3,28; p <0,05); infecção nosocomial, ocorrendo em hospitais de conservação precária (RC = 150,8; p< 0,001); tuberculose ativa (RC = 8,03; P <0,001); diabete mélito tipo 11 (RC = 10,67; p<O,OOl); e êxito letal (RC = 3,1; p<0,02). Por outro lado, cristais de oxalato de cálcio no escarro e oxalose sitêmica só ocorreram no grupo A.niger. As implicações etiológicas e diagnósticas destes achados sao discutidas, enfatizando o papel do ambiente externo, da oxalose, do acúmulo de ácidos e da tuberculose ativa na etiopatogenia do A. niger. / Three hundred patients with intracavitary pulmonary colonization (by serologic and/or tissue examinations) were analysed during a ten years period. The cases were classified as: Aspergillus fumigatus (246 cases); A. niger (21 cases); A. flavus (7cases); Pseudallescheria boydii (1 case); fungal colonization not especified (21 cases) and actinomycetic colonization (4 cases). Due to their frequency and the scarcity of literature about A. niger, the groups A. niger (cases) and A. fumigatus (controls) were compared with respect to clinical and laboratorial variables. This analysis showed statistically significant associations with A. niger for: male sex (Odds Ratio = 3,28; p< 0,05); nosocomial infection, which occurred.in hospitaIs in poor state of repair (aR = 150.8; p<O,ooU; active tuberculosis (aR = 8,03; p<O,OOl); type 11 diabete mellitus (aR = 10,67; p<O,ooU; and lethal outcome (aR = 3, 1; p < o, 02). On the other hand, calcium oxalate crystals in the sputum and sistemic oxalosis occured only in A. niger group. The etiologic and diagnostic implications of these findings are discussed, with emphasis on the role of the externa 1 environernent, oxalosis, acid acurnulation and ative tuberculosis in the etiopathogenesis of A. niger.

O estudo avalia as alterações pleuro-pulmonares e mediastinais detectáveis pela tomografia computadorizada de alta resolução na paracoccidioidomicose com comprometimento pulmonar em momentos distintos da evolução da doença: na fase ativa previamente ao tratamento medicamentoso específico ou até 30 dias do seu início, e na fase inativa, a partir do 6° mês (em média, 11,53 meses após). Foram acompanhados 37 pacientes (de 32 a 68 anos) com envolvimento pulmonar crônico por, em média, 29,60 ± 11,21 meses. No total, foram analisadas 60 tomografias, 28 na fase ativa da doença e 32 na fase inativa, sendo que 23 pacientes realizaram exames nas duas fases e 14 somente em uma delas. Utilizaram-se cortes axiais de 2mm, com intervalo de 10mm, no sentido crânio-caudal, em cuja reconstituição usou-se algoritmo de alta freqüência espacial. Os cortes foram fotografados em duas janelas de densidades apropriadas ao estudo do pulmão, parênquima pulmonar e mediastino (120 V; 2 s; 80 a 130 mA). Os achados mais freqüentemente detectados na fase ativa da doença foram: 1) espessamento de septos interlobulares (96,43%); 2) nódulos (92,86%); 3) consolidação (71,43%); 4) enfisema (67,86%); 5) espessamento de paredes brônquicas (64,29% ); 6) distorção da arquitetura broncovascular (60,71% ); 7)espessamento pleural (57,14%); 8) bolha (46,42 %); 9) bronquiectasias (42,86%); 10) linfonodomegalias (39,29%); 11) cavidades (35,71 %); 12) opacidade em vidro despolido (32,14%); 13) retração pleural (32,14%); 14) tree-in-bud (17,86%); 15) faveolamento e alterações fibróticas (14,29%). Em nenhum caso identificou-se pneumotórax espontâneo e/ ou derrame pleural. Em relação aos achados detectados no exame feito após o tratamento, verificou-se tendência 1) em manter a mesma quantidade de nódulos, com dimensões semelhantes, à detectada na fase ativa, mas com contornos bem-definidos mais freqüentemente; 2) em manter a presença de consolidação, mas em menos áreas; 3) em reduzir a presença e extensão de espessamento de paredes brônquicas; 4) em reduzir a quantidade de cavidades, sem alteração no seu diâmetro; 5) em reduzir a quantidade de bronquiectasias; 6) em reduzir a presença de linfonodomegalias; 7) em reduzir a quantidade de áreas com opacidade em vidro despolido; 8) em manter múltiplas áreas com espessamento de septos interlobulares. Predominaram as alterações de distribuição difusa, nos campos médios, bilaterais, nas regiões posteriores. Em três pacientes detectou-se bola fúngica na tomografia, sendo que em um identificou-se A.fumigatus no material obtido através da punção pulmonar transcutânea. A tomografia permite uma avaliação objetiva do tipo, extensão, distribuição, intensidade, localização e tamanho das alterações pleuro-pulmonares na paracoccidioidomicose, mas não identifica um achado ou característica que possa ser utilizado como critério para definir .doença ativa ou inativa. O estudo não detectou, no que se refere às variáveis analisadas, diferença estatísticamente significante (P Fischer • 1,00) entre as proporções iniciais encontradas na fase ativa da doença quando comparadas com as finais (fase inativa).

Orientador: Luciana Francisco Fleuri / Resumo: A fermentação em estado sólido (FES) é um bioprocesso especialmente adequado para obtenção de produtos de alto valor biotecnológico, tais como enzimas resultantes do metabolismo de micro-organismos. É particularmente interessante para fungos filamentosos, que são adaptados ao sistema, crescendo em substratos sólidos com baixo ou nenhum teor de água livre. A FES oferece diversas vantagens em relação à fermentação submersa, com destaque para a sustentabilidade e economia do processo pelo baixo consumo de água e a aproveitamento de resíduos agroindustriais, que podem ser utilizados como substratos e são amplamente disponíveis. Mundialmente, a demanda industrial por enzimas está em ascensão: movimentou USD 4,4 bilhões em 2015 e possui crescimento estimado em 7,8% (USD 2 bilhões) para 2015-2020. As enzimas obtidas por FES apresentam elevada versatilidade, relacionada às diferentes capacidades hidrolíticas e propriedades bioquímicas, cujas enzimas proteolíticas produzidas por esse sistema podem ser aplicadas na produção de fragmentos proteicos com atividades biológicas distintas capazes de beneficiar a saúde humana e animal, denominados peptídeos bioativos. Já foram obtidos peptídeos bioativos com ações antimicrobiana, antioxidante, antihipertensiva, imunomodulatória, opióide e antineoplásica. É reportado que estes compostos podem ser mais seletivos quando comparados a outras pequenas moléculas empregadas como fármacos. O leite é uma das principais fontes de obtenção de peptídeos r... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Actualmente las proteasas alcalinas son ampliamente utilizadas en la industria del cuero, en distintas formulaciones de detergentes, también en el proceso de recuperación de plata, y en la producción de hidrolizados de proteínas. Comúnmente, todas estas proteasas se obtienen de fuentes microbianas que crecen en sustrato relativamente caros. Muchos estudios demuestran que cerca del 40% del costo de producción de estas enzimas está relacionada con la composición del medio de cultivo. Para reducir el costo de producción es importante la búsqueda de microorganismos capaces de crecer y de producir suficiente cantidad de la enzima usando sustratos baratos. En este sentido desechos de naturaleza queratínica tienen un enorme potencial para ser utilizacos como sustrato para la producción de un grupo de enzimas proteolíticas llamado queratinasas, las cuales presentan la capacidad de hidrolizar la queratina, proteína sumamente resistente a la degradación por su estructura y por la presencia en su molécula de puentes disulfuro. En el presente trabajo de tesis seis cepas de hongos no patógenos aislados de suelos alcalinos de la provincia de Buenos Aires, Argentina, (Acremonium murorum, Aspergillus sidowii, Cladosporium cladosporioides, Neurospora tetrasperma, Purpureocillium lilacinum (ex Paecilomyces lilacinus) y Westerdikella dispersa) fueron evaluados de acuerdo a su capacidad de producir enzimas queratinolíticas. Entre estas cepas, P. lilacinum resultó ser el hongo con mayor producción de actividad proteolítica y queratinolítica, tanto en fermentación en sustrato solido como en sumergido, siendo seleccionado para continuar con este trabajo. Se establecieron las condiciones óptimas de cultivo para la producción enzimática utilizando diseños experimentales y la metodología de superficie de respuesta. Las condiciones óptimas fueron: 7,10 g/l de glucosa; 0.0065 mg/l de CaCl<SUB>2</SUB> y pH inicial de 5.60; en estas condiciones de cultivo, el rendimiento máximo para la producción de queratinasas predijo por el modelo fue de 26,7 U azo/ml. La validación del modelo demostró que, tanto el polinomio como las correspondientes superficies de respuesta obtenidas describen adecuadamente la influencia de la concentración de glucosa, de calcio y el pH inicial en la producción de queratinasas. Luego de la optimización del medio de cultivo se procedió a la purificación de la enzima, las etapas involucradas en la purificación fueron la precipitación con sulfato de amonio y distintas técnicas cromatográficas de intercambio iónico y permeación en gel, con un factor de purificación de 19.8 veces y una actividad específica de 1430 U/mg de proteína. El peso molecular de la enzima, determinado por SDS-PAGE, fue de 37 kDa. La queratinasa extracelular de P. lilacinum se caracteriza por su apreciable estabilidad en un amplio intervalo de pH (4.0 a 9.0), y hasta 65°C. La inhibición que presenta frente a PMSF (98,2% de la inhibición) sugiere su naturaleza serínica. La enzima es activa y estable en presencia de solventes orgánicos tales como dimetilsulfóxido, metanol, e isopropanol; ciertos tensioactivos como Triton X-100, dodecilsulfato de sodio, y Tween 85, y agentes oxidante como el peróxido de hidrógeno. Sus parámetros cinéticos de inactivación térmica fueron estimados bajo diferentes condiciones y fue posible observar cómo afectan calcio, el glicerol y el propilenglicol a la estabilidad térmica de la enzima. Se investigó la inmovilización covalente de la queratinasa pura sobre un soporte de quitosán, optimizando la concentración de los agentes entrecruzantes glutaraldehído y genipina, así como también el tiempo de activación. La enzima inmovilizada presentó mayor estabilidad frente a pH y temperaturas extremas en comparación con la enzima libre, además retiene 61.37 % de la actividad enzimática inicial después de cinco ciclos de hidrolisis. Se estudiaron las potenciales aplicaciones biotecnológicas del extracto enzimático, entre ellas se estudió por su compatibilidad y estabilidad frente a detergentes comerciales (7 mg/ml) como Ariel y Skip, observándose que éste retiene más de 70 % de su actividad proteolítica inicial después de 1 h de incubación a 40ºC. La simulación de lavado reveló que el extracto era capaz de eliminar eficazmente las manchas de sangre. Se estudió también la posibilidad de utilizar este extracto enzimático en la recuperación de plata a partir de placas radiográficas usadas. En dosis de enzima de 6,9 U azoc/ml y a 60ºC, la eliminación completa de la capa de gelatina con la liberación completa de las partículas de plata se alcanzó en 6 min a pH 9.0. Por último, P. lilacinum además de producir enzimas queratinolíticas con la producción de paralela de amonio, mostró la capacidad producir sideróforos y ácido indolacético (IAA) al crecer con residuo pelo como sustrato en presencia de Trp y baja concentración de hierro. Se realizaron ensayos a nivel de invernadero con plantas de tomate, encontrándose que, en términos de peso seco, el hidrolizado mostró un efecto similar al del fertilizante de referencia. Además, el hidrolizado demostró poseer actividad antifúngica contra varios patógenos de las plantas. Estos resultados indican el potencial biotecnológico tanto del extracto enzimático como el de la enzima pura de P. lilacinum siendo interesante además la capacidad del hongo de producir esta enzima utilizando un como sustrato un residuo de valor nulo, con lo cual sería de esperar que su costo de producción resulte relativamente bajo.

Orientador: Luciana Francisco Fleuri / Resumo: O descarte de resíduos agroindustriais pode causar poluição e desperdício se feito de maneira incorreta. Uma solução viável econômica e ecologicamente é usá-los como meio de cultura para crescimento fúngico por fermentação em estado sólido (FES), visando à obtenção de enzimas de interesse. Nesse contexto, grãos de destilaria secos com solúveis (DDGS) são ótima opção para a produção de lipases devido à grande geração mundial e a sua composição. Lipases são enzimas versáteis que podem expressar atividade hidrolítica e de síntese. O uso de resíduos como substrato acarreta uma produção enzimática barata, contornando o problema de acesso a essas enzimas, que são comercializadas a altos preços por poucas empresas. Assim sendo, este trabalho objetivou cultivar fungos por FES em DDGS de sorgo e milho, visando à produção de lipases e à sua caracterização quanto à especificidade, regiosseletividade e massa molecular. Objetivou também aplicar essas enzimas em reações de hidrólise (almejando a biorremediação), esterificação e alcoólise (almejando a produção de biodiesel), assim como testar os produtos destas reações quanto às capacidades antioxidante, antimicrobiana e de influenciar a viabilidade celular, correlacionando-as com estrutura química. As fermentações fúngicas produziram lipases 1,3-específicas com afinidade predominante por ácidos graxos de cadeia longa (até 246,5 U/g) e com o extrato bruto contendo proteínas de massas moleculares entre 14,12 e 37,15 kDa. As lipases foram cap... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-17T14:11:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 433513 bytes, checksum: 3179a8726b6c21426b9e401a2e29f61a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T14:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 433513 bytes, checksum: 3179a8726b6c21426b9e401a2e29f61a (MD5) Previous issue date: 2002-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O controle biológico de helmintos parasitos de bovinos é uma forma alternativa ao uso dos fármacos e tem como principal objetivo a redução do número de larvas infectantes disponíveis na pastagem. Os fungos nematófagos produzem estruturas em forma de armadilha, responsáveis pela captura e morte dos estágios pré-parasitários dos nematóides. A manutenção contínua da atividade predatória dos isolados fúngicos é um dos pré-requisitos básicos para o sucesso desta forma de controle. Neste trabalho foi verificado o comportamento dos isolados I31 de Arthrobotrys robusta e NF34a de Monacrosporium thaumasium, submetidos a manutenção em temperatura de 4 o C, criopreservados com e sem adição de DMSO e glicerol e mantidos em sílica-gel. Os resultados demonstraram que os isolados NF34a e I31 não apresentaram variação no crescimento radial, quando armazenados em temperatura de 4 o C e congelados com ou sem adição de crioprotetores. Não houve diferença na produção massal de micélio seco dos isolados quando armazenados a temperatura de 4 o C e congelados com adição de crioprotetores. O armazenamento em sílica-gel e o congelamento sem crioproteção pareceram interferir negativamente na capacidade dos fungos em produzir massa micelial. O armazenamento de NF34a em temperatura de 4 o C e o congelamento com adição de DMSO foram os tratamentos em que se obteve maior redução das larvas infectantes in vitro. Não foi verificada diferença na capacidade predatória in vitro do isolado I31 quando mantido em temperatura de 4 o C ou quando congelado com adição de DMSO ou glicerol. A manutenção dos isolados em sílica-gel e o congelamento sem crioproteção interferiram negativamente na capacidade predatória, porém estes ainda foram capazes de reduzir a população de larvas infectantes em relação ao grupo controle. No teste de passagem dos isolados pelo trato gastrintestinal de bovinos, a administração de 20 g de micélio aos animais foi suficiente para recuperação de material fúngico nas fezes e pico de redução no número de larvas infectantes nas fezes após 24 horas da administração das amostras. O isolado NF34a foi responsável pelos maiores índices de redução das populações de larvas de helmintos após a passagem pelo trato gastrintestinal dos animais e o armazenamento em 4 o C foi o tratamento em que se observou maior taxa de redução. A criopreservação parece ser um método eficiente para manutenção dos isolados, porém neste trabalho foi evidenciada diminuição da capacidade predatória do isolado NF34a. A manutenção dos isolado em sílica-gel deve ser utilizado para manutenção das amostras por períodos prolongados, quando não houver disponibilidade de nitrogênio líquido. / Biological control of helminths parasites of cattle is an alternative to the use of anthelmintics, and its main goal is to reduce the amount of infective larvae in the pasture. The nematophagous fungi produce trap-shaped structures, which are responsible for capturing and destroying the pre-parasite stages of nematodes. Continuous maintenance of the fungi isolates’ predatory activity is one of the basic prerequisites for the success of this form of control. This research analyzed the behaviour of I31 isolates of Arthrobotrys robusta and NF34a isolates of Monacrosporium thaumasium, submitted to maintenance at a temperature of 4 o C, cryopreserved with and without DMSO and glicerol, and kept in silica gel. Results showed that the NF34a and I31 isolates did not present variation in radial growth when stored at a temperature of 4 o C and frozen with or without adding cryoprotectants. There was no difference in production of dry biomass by the isolates when stored at a temperature of 4 o C and frozen with added cryoprotectants. Silica gel storage and freezing without cryoprotection seemed to interfere negatively with the fungi’s capacity to produce biomass. Storing NF34a at a temperature of 4 o C and freezing it with DMSO were the treatments in which the largest in vitro reduction of infective larvae was obtained. There was no difference in terms of in vitro predatory capacity of the I31 when stored at a temperature of 4 o C or when frozen with DMSO or glicerol. Storage of the isolates in silica gel and freezing without cryoprotection interfered negatively in their predatory capacity, but they were still able to reduce the population of infective larvae in relation to the control. When the passage of isolates through the gastrointestinal tract of bovines was tested, the administration of 20 g of mycelium was enough to recover fungi material in feces and for a peak reduction of the number of infective larvae in feces 24 hours after the administration of the samples. The NF34a isolate was responsible for the largest reduction rates in helminth larvae populations following passage through the gastrointestinal tract of the animals, and storage at 4 o C was the treatment in which the largest reduction rate was observed. Cryopreservation seems to be an effective method for keeping the isolates, although, in this research, a reduction of the NF34a’s predatory capacity became evident. Storage of the isolates in silica gel should be chosen when keeping the samples for long periods of time, whenever liquid nitrogen is not available. / Dissertação importada do Alexandria