Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-02-07T13:27:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alessandro M. Silva.pdf: 1750169 bytes, checksum: 4e3dca31adc1b3f046d94221fe9febbb (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-02-07T13:28:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alessandro M. Silva.pdf: 1750169 bytes, checksum: 4e3dca31adc1b3f046d94221fe9febbb (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-02-07T13:28:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alessandro M. Silva.pdf: 1750169 bytes, checksum: 4e3dca31adc1b3f046d94221fe9febbb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-07T13:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Alessandro M. Silva.pdf: 1750169 bytes, checksum: 4e3dca31adc1b3f046d94221fe9febbb (MD5) Previous issue date: 2016-10-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the Amazon the smell of pepper culture (Capsicum chinense Jacq.) Is subject to attack by many pathogens, especially fungal diseases, among these anthracnose caused by Colletotrichum spp., is one of the most important, because it causes damage to fruit and prevents the marketing. Given the commercial importance of this disease, this study aimed to characterize morphocultural, molecular and pathogenic isolates of Colletotrichum spp. from fruits with symptoms of anthracnose in pepper-of-smell, collected in producing municipalities of Amazonas state (Iranduba, Itacoatiara, President Figueiredo and Manaquiri). The mycelial growth index ranged from 19.29 to 12.77 mm. The color of colonies ranged from white to dark gray. The colony reverse color varied from white, brown, cream, orange, dark brown, black and gray. Most of the isolates were moderately abundant aerial growth, followed by abundant and reduced air. The observed conidia were the oblong/cylindrical type, with dimensions ranging from 15.4 to 9.0 mm in length, 5.5 to 2.9 mm in width and 4.0 to 2.6 μm ratio length width. The format of appressoria were rounded, slightly lobed and lobed, with dimensions of length ranging from 14.6 to 7.3 μm width from 8.8 to 5.2 m and length / width ratio from 1.7 to 1.1 μm. Five isolates did not produce appressoria. The pathogenicity test possible to observe that the isolates from President Figueiredo, Itacoatiara, Manaquiri and Iranduba showed high variability in the mean diameter of lesions (mm), aggressiveness index (%) and incidence (%) when inoculated in different species of Capsicum. Genotyping by Ap- PCR showed genetic diversity within and among isolates of the same origin. The results show possibly the existence of more than one species of Colletotrichum associated with anthracnose in pepper-of-smell in the state of Amazonas. / No Amazonas o cultivo de pimenta-de-cheiro (Capsicum chinense Jacq.) está sujeito ao ataque de diversos patógenos, destacando-se as doenças fúngicas, dentre estas a antracnose causada por Colletotrichum spp., é uma das mais importantes, pois causa danos aos frutos e inviabiliza a comercialização. Dada a importância comercial dessa doença, esse trabalho teve por objetivo realizar a caracterização morfocultural, molecular e patogênica de isolados de Colletotrichum spp. oriundos de frutos com sintomas de antracnose em pimenta-de-cheiro, coletados em municípios produtores do Estado do Amazonas (Iranduba, Itacoatiara, Presidente Figueiredo e Manaquiri). O ICM variou de 19,29 a 12,77 mm. A cor do verso das colônias variou entre branca à cinza escura. A cor do reverso da colônia variou de branca, castanha, creme, laranja, marrom escura, preta e cinza. A maior parte dos isolados apresentaram crescimento aéreo moderadamente abundante, seguido de aéreo abundante e reduzido. Os conídios observados foram do tipo oblongo/cilíndrico, com dimensões variando de 15,4 a 9,0 μm de comprimento, 5,5 a 2,9 μm de largura e 4,0 a 2,6 μm de relação comprimento largura. O formato dos apressórios foram arredondados, levemente lobado e lobado, com dimensões de comprimento variando de 14,6 a 7,3 μm, largura de 8,8 a 5,2 μm e relação comprimento/largura de 1,7 a 1,1 μm. Cinco isolados não produziram apressórios. O teste de patogenicidade cruzada possibilitou observar que os isolados oriundos de Presidente Figueiredo, Itacoatiara, Manaquiri e Iranduba apresentaram alta variabilidade quanto ao diâmetro médio das lesões (mm), índice de infecção (%) e incidência (%) quando inoculados nas diferentes espécies de Capsicum usadas no presente estudo. A genotipagem por Ap-PCR evidenciou alta diversidade genética dentre e entre isolados de uma mesma procedência. Os resultados demonstram, possivelmente, a existência de mais de uma espécie de Colletotrichum associada à antracnose em pimenta-de-cheiro no Estado do Amazonas.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-06T12:46:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Victor C. Souza.pdf: 8939456 bytes, checksum: 0daae471197aedca86b8d195ca72ad7e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-06T12:47:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Victor C. Souza.pdf: 8939456 bytes, checksum: 0daae471197aedca86b8d195ca72ad7e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-06T12:47:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Victor C. Souza.pdf: 8939456 bytes, checksum: 0daae471197aedca86b8d195ca72ad7e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-06T12:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Victor C. Souza.pdf: 8939456 bytes, checksum: 0daae471197aedca86b8d195ca72ad7e (MD5) Previous issue date: 2010-05-21 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In the Amazon, the tropical climate is the main factor that favors the development of superficial fungal infections and opportunistic, especially the high temperature and relative humidity, providing ideal conditions for continuity in the life cycle of pathogenic and opportunistic fungi. Among the most prevalent mycosis in this region, is pityriasis versicolor (PV), a major skin diseases treated at health care in dermatology, can affect people of both genders, age, race and social class. Different species of Malassezia spp., Some of which recently described by means of genetic studies, are responsible for PV and, despite its high prevalence in several regions of the world and in Brazil, there are few studies with more detailed approach on epidemiological, clinical and laboratory features of this mycosis in our region. Research on the susceptibility of these species to antifungal drugs is fundamental to the advancement of scientific knowledge in order to better clinical management and treatment of PV. The testing for evaluation of in vitro susceptibility to antifungal agents for yeasts and molds (vitro antifungal susceptibility), constitutes an important tool for monitoring the resistance of fungal strains and also to assist in choosing the best therapeutic regimen. Given this, the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), formerly National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) have developed methods for the assessment of fungal susceptibility, however, due to different nutritional requirements of these species, there is still no specific protocol for testing with Malassezia spp. that has been recommended by this or any other body accredited for the regulation of clinical and laboratory procedures. The present study with the main objective to contribute to the development of a simplified protocol for assessing the susceptibility of three species of Malassezia, being isolated from 01 M. furfur, 01 and 01 M.obtusa M. sympodialis front to drugs ketoconazole, itraconazole and fluconazole. For this, bioassay were performed using the method in broth at different experimental conditions, which were defined from some methodological variants found in publications in the last 10 years, for the optimum conditions for growth, which were tested three different concentrations of inoculum, four types of culture media, incubation temperatures and two different criteria for interpretation of results. According to the results, the conditions that led to better performance during the experiments and the growth curves in bioassays with the drugs were: inoculum concentration of 0.5 to 2.5 x104 cells / mL and incubation temperature of 32 ° C; medium modified Leeming-Notman with some changes in its composition, and spectrophotometric reading at 620 nm after 3 days of incubation. Accordingly, the MIC values obtained were: MIC ≤ 0.03 mg / mL for ketoconazole and itraconazole to inhibit 50% and 80% of the growth of M. obtusa and M. furfur. For the fluconazole MICs were found for 2 and 4 mg / mL to inhibit 50% of the growth of M. sympodialis and M. obtusa respectively, and MIC of 4:08 g / mL for inhibition of 80%, while for M. furfur found an MIC ≤ 0.03 mg / mL of this drug to inhibit 50% and 80% of fungal growth. Therefore, although preliminary, considering the small number of samples analyzed, the results of this study provided important information in view of developing a protocol for susceptibility testing of Malassezia species. / Na região Amazônica, o clima tropical é o principal fator que favorece o desenvolvimento de infecções fúngicas superficiais e oportunistas, especialmente pela elevada temperatura e umidade relativa do ar, oferecendo condições ideais à continuidade no ciclo de vida dos fungos oportunistas e patogênicos. Dentre as micoses mais prevalentes nesta região, encontra-se a pitiríase versicolor (PV), uma das principais dermatoses atendidas nos serviços de saúde em dermatologia, podendo acometer pessoas de ambos os gêneros, idade, raça e classe social. Diferentes espécies do gênero Malassezia spp., algumas das quais recentemente descritas por meio de estudos genéticos, são responsáveis pela PV e, a despeito de sua alta prevalência em diversas regiões do mundo e no Brasil, ainda são poucos os estudos com abordagem mais aprofundada acerca dos aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais desta micose em nossa região. A investigação sobre a susceptibilidade destas espécies às drogas antifúngicas é de fundamental importância para o avanço do conhecimento científico na perspectiva de uma melhor abordagem clínica e terapêutica da PV. A realização de testes para avaliação da suscetibilidade in vitro aos agentes antifúngicos para leveduras e fungos filamentosos (antifungigrama), se constitui em uma importante ferramenta para o monitoramento da resistência de cepas fúngicas e também para auxiliar na escolha do melhor esquema terapêutico. Diante disto, o Clinical and Laboratorial Standards Institute (CLSI), antigo National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), têm desenvolvido métodos de referência para a avaliação da susceptibilidade fúngica, entretanto, devido às exigências nutricionais diferenciadas dessas espécies, ainda não existe um protocolo específico para testes com Malassezia spp. que tenha sido recomendado por este ou por algum outro órgão credenciado para a regulamentação de procedimentos clínicos e laboratoriais. O presente estudo teve como objetivo principal contribuir para a elaboração de um protocolo simplificado para avaliação da susceptibilidade de três espécies de Malassezia, sendo, 01 isolado de M. furfur, 01 de M.obtusa e 01 de M. sympodialis frente às drogas cetoconazol, itraconazol e fluconazol. Para isto, foram realizados bioensaios com base no método de microdiluição em caldo, em diferentes condições experimentais, as quais foram definidas a partir de algumas variantes metodológicas encontradas em publicações nos últimos 10 anos, quanto às condições ótimas de crescimento, no qual foram testadas três diferentes concentrações de inoculo, quatro tipos de meios de cultura, duas temperaturas de incubação e diferentes critérios de leitura dos resultados. De acordo com os resultados obtidos, as condições que permitiram melhor desempenho durante os experimentos nas curvas de crescimento e nos bioensaios com a drogas foram: concentração do inoculo de 0,5 a 2,5x104 céls/mL; temperatura de incubação de 32 ºC; meio de cultura Leeming-Notman modificado com algumas alterações em sua composição, e leitura espectrofotométrica em 620nm após 3 dias de incubação. Nestas condições, os valores de CIMs obtidos foram: CIM ≤0,03 μg/mL, para o cetoconazol e itraconazol para inibir 50% e 80% do crescimento de M. obtusa e M. furfur. Para o fluconazol foram encontradas CIMs de 2 e de 4 μg/mL para inibir 50% do crescimento de M. sympodialis e M. obtusa respectivamente, e CIM de 4 e 8 μg/mL para inibição de 80%; enquanto que para M. furfur foi encontrada uma CIM ≤0,03 μg/mL desta droga para inibir 50% e 80% do crescimento fúngico. Portanto, apesar de preliminares, considerando o número reduzido de amostras analisadas, os resultados obtidos neste estudo forneceram informações importantes na perspectiva da elaboração de um protocolo para testes de susceptibilidade às espécies de Malassezia.

Orientador: Luciana Francisco Fleuri / Resumo: Resíduos e subprodutos agroindustriais são extensivamente estudados a fim de se reaproveitar seu potencial biológico e agregar valor. A fermentação em estado sólido (FES) é uma das formas de utilizar estes resíduos e subprodutos para obtenção de enzimas, como as proteases. Este trabalho objetivou estudar a produção de proteases fúngicas por FES utilizando farelo de soja e farinhas de banana, caracterizar bioquimicamente as proteases mais promissoras e, por fim, aplicar na hidrólise da farinha de grilo (Gryllus assimilis), avaliando os produtos de hidrólise. O estudo da composição do meio de cultivo foi conduzido através de um delineamento experimental, o planejamento de misturas, para definir a proporção ótima de parte sólida dos substratos de fermentação. Posteriormente, realizou-se a cinética de produção de protease por FES, a caracterização bioquímica das proteases mais promissoras quanto ao pH e temperatura ótimos de atuação, bem como a influência de íons metálicos e L-cisteína em diferentes concentrações. Por meio de relargagem (salting-out), fez-se a purificação parcial das enzimas, seguida de diálise e liofilização, para então serem aplicadas na hidrólise da farinha de grilo. O fator de hidrólise, a atividade antioxidante e o perfil eletroforético dos produtos de hidrólise foram avaliados. O planejamento de misturas resultou em duas proporções com altas atividades proteolíticas, 50 % de farelo de soja (FS) e 50 % de farinha de casca de banana madura (FCBM) e um terço d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Agro-industrial waste and by-products are extensively studied aiming to add value and explore their full biological potential. Solid state fermentation (SSF) is a technique that use agro-industrial waste and by-products and may be used to obtain enzymes, such as proteases. This study aimed to produce fungal proteases by SSF using soybean bran and banana flours as substrate, characterize biochemically and apply most promising proteases to hydrolysis of cricket flour (Gryllus assimilis), and evaluate the hydrolysis products. The composition of the culture medium was evaluated through an experimental design to define the optimal proportion of solid part of the fermentation substrates. Subsequently, the protease production kinetics were performed by SSF, the most promising proteases were characterized biochemically according to the optimal pH and temperature, as well as according to the influence of metal ions and L-cysteine ​​in different concentrations. Proteases were partially purified by salting-out, followed by dialysis and lyophilization and applied in hydrolysis of the cricket flour. The hydrolysis factor, the antioxidant activity and the electrophoretic profile of the hydrolysis products were evaluated. The mixture design resulted in two combinations with high proteolytic activities, 50% soybean bran (SB) and 50% ripe banana peel flour (RBPF) and one third of each component (soybean bran, ripe banana peel flour and green banana flour) for the microorganisms Trichoderma ko... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Aspergillus fumigatus é o principal agente etiológico da aspergilose invasiva, infecção fúngica oportunista com altas taxas de mortalidade afetando, principalmente, pacientes com neutropenia profunda e prolongada. Durante o processo de invasão e disseminação características desta infecção sistêmica, os conídios do fungo inalados e não eliminados pelas células do sistema imune inato diferenciam-se em hifas que, por sua vez, são angioinvasivas. Pouco se conhece sobre as moléculas da parede celular envolvidas na patogênese do A. fumigatus e/ou secretadas por este patógeno. Neste contexto, este trabalho procura ampliar o entendimento desta doença através do estudo de proteínas diferencialmente expressas na superfície de A. fumigatus durante a morfogênese. Foi utilizada uma abordagem proteômica e foram estudados extratos de superfície de células de A. fumigatus em diferentes estágios durante o processo de filamentação. Estas células foram denominadas, de acordo com o tempo de cultivo e a morfologia, como: TG6h (tubo germinativo), H12h ou H72h (hifas). As proteínas de superfície celular foram extraídas, a partir de células intactas, por tratamento brando com o agente redutor DTT (ditiotreitol). Observou-se que o perfil funcional das proteínas expressas por H12h e H72h foi similar, com exceção de proteínas relacionadas à resposta ao estresse, enquanto o perfil para TG6h apresentou diferenças significativas para vários grupos funcionais de proteínas quando comparado às hifas. Desta forma, foram realizados experimentos de proteômica diferencial entre tubo germinativo (TG6h) e a hifa madura (H72h), pela técnica de DIGE (differential gel electrophoresis). Os resultados revelaram que entre as proteínas diferencialmente expressas, aquelas relacionadas às vias de biossíntese e outras denominadas multifuncionais encontraram-se superexpressas em TG6h. Em relação às proteínas de resposta a estresse, observou-se que algumas HSPs eram mais expressas neste morfotipo, enquanto a MnSOD, relativa à resposta ao estresse oxidativo, era mais abundante na hifa. Com exceção da PhiA, integrante da parede celular, as proteínas identificadas como diferencialmente expressas na superfície do A. fumigatus não possuem sinal para secreção identificável, enquadrando-se nas proteínas atípicas de superfície. Foi verificada a integridade da membrana celular após tratamento com DTT, bem como a marcação por biotina das proteínas extraídas, o que comprovou sua localização superficial na célula fúngica. Hipóteses de que estas proteínas sejam endereçadas à parede celular por via secretória alternativa sustentam estes dados. Estas evidências foram confirmadas pelo fato de não terem sido encontradas as mesmas proteínas da superfície na análise do secretoma do A. fumigatus. Além disso, todas as proteínas caracterizadas no secretoma apresentavam sinal de secreção determinado pelo FunSecKB (www.proteomics.ysu.edu/secretomes/fungi.php). A análise do secretoma foi realizada utilizando-se a cepa selvagem AF293 e a mutante ∆prtT, mutante para um fator de transcrição que atua na regulação da secreção de proteases. Os resultados revelam a ALP1 como expressa na cepa selvagem, assim como outras proteases importantes para virulência e desenvolvimento da célula fúngica, estando suprimidas quando o gene prtT foi deletado. / Aspergillus fumigatus is the main etiologic agent of invasive aspergillosis (IA), a opportunistic a life-threatening disease for immunocompromised hosts, especially those with acute and prolonged neutropenia. During the invasion and dissemination, which occurs in this systemic infection, the A. fumigatus conidia, after its inhalation, germinates into angioinvasive hyphae in case the innate immune response fails in eliminate these cells. Little is known about the cell wall molecules and/or the secreted proteins involved on the A. fumigatus pathogenesis, at this context the present work aims to amplify the knowledge about the aspergillosis by studying the differentially surface proteins of A. fumigatus during the filamentation process. These cells were denominated according to their morphology and their growth time as: TG6h (germ tubes), H12h and H72h (hyphae). The surface proteins were mildly extracted from intact cells using the reducing agent DTT (dithiothreitol). The functional profile of the H12h and H72h were similar except for the stress response proteins, while the TG6h presented significant differences for several functional groups. On this base, the DIGE (differential gel electrophoresis) was performed using the surface extracted proteins of the germ tubes (TG6h) and mature hyphae (H72h) cells. The results indicate that multiple functional proteins and proteins related to the biosynthesis pathways were overexpressed at TG6h. Some stress response proteins as the HSPs were overexpressed on this morphotype while the MnSOD, oxidative stress responsive protein, was most abundant at the hyphae. PhiA, an integrant protein of the cell wall, was the only protein with a secretion signal sequence. All other proteins identified on the cell surface lack an identifiable secretion sign, and are denominated atypical proteins. The plasma membrane integrity was verified after the mild extraction using DTT, and also the biotinylation of the cell extracted proteins, which ensured these proteins surface localization on the fungal cell. There are hypothesis that some proteins can be transport to the cell wall by alternative pathways and support the results found for this work. These evidences were confirmed by the fact that the proteins identified at the surface were not the same identified on the A. fumigatus secretome. Besides, all proteins identified on the secretome presented secretion signal determinate by the FunSecKB (www.proteomics.ysu.edu/secretomes/fungi.php). The secretome analysis was performed using the wild type AF293 and the ∆prtT mutant, lacking a transcription factor that regulates proteases secretion. The results demonstrate ALP1 overexpressed on the wild type and also other proteases important to virulence and development of the fungal cell suppressed when prtT was deleted.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Aspergillus fumigatus é o principal agente etiológico da aspergilose invasiva, infecção fúngica oportunista com altas taxas de mortalidade afetando, principalmente, pacientes com neutropenia profunda e prolongada. Durante o processo de invasão e disseminação características desta infecção sistêmica, os conídios do fungo inalados e não eliminados pelas células do sistema imune inato diferenciam-se em hifas que, por sua vez, são angioinvasivas. Pouco se conhece sobre as moléculas da parede celular envolvidas na patogênese do A. fumigatus e/ou secretadas por este patógeno. Neste contexto, este trabalho procura ampliar o entendimento desta doença através do estudo de proteínas diferencialmente expressas na superfície de A. fumigatus durante a morfogênese. Foi utilizada uma abordagem proteômica e foram estudados extratos de superfície de células de A. fumigatus em diferentes estágios durante o processo de filamentação. Estas células foram denominadas, de acordo com o tempo de cultivo e a morfologia, como: TG6h (tubo germinativo), H12h ou H72h (hifas). As proteínas de superfície celular foram extraídas, a partir de células intactas, por tratamento brando com o agente redutor DTT (ditiotreitol). Observou-se que o perfil funcional das proteínas expressas por H12h e H72h foi similar, com exceção de proteínas relacionadas à resposta ao estresse, enquanto o perfil para TG6h apresentou diferenças significativas para vários grupos funcionais de proteínas quando comparado às hifas. Desta forma, foram realizados experimentos de proteômica diferencial entre tubo germinativo (TG6h) e a hifa madura (H72h), pela técnica de DIGE (differential gel electrophoresis). Os resultados revelaram que entre as proteínas diferencialmente expressas, aquelas relacionadas às vias de biossíntese e outras denominadas multifuncionais encontraram-se superexpressas em TG6h. Em relação às proteínas de resposta a estresse, observou-se que algumas HSPs eram mais expressas neste morfotipo, enquanto a MnSOD, relativa à resposta ao estresse oxidativo, era mais abundante na hifa. Com exceção da PhiA, integrante da parede celular, as proteínas identificadas como diferencialmente expressas na superfície do A. fumigatus não possuem sinal para secreção identificável, enquadrando-se nas proteínas atípicas de superfície. Foi verificada a integridade da membrana celular após tratamento com DTT, bem como a marcação por biotina das proteínas extraídas, o que comprovou sua localização superficial na célula fúngica. Hipóteses de que estas proteínas sejam endereçadas à parede celular por via secretória alternativa sustentam estes dados. Estas evidências foram confirmadas pelo fato de não terem sido encontradas as mesmas proteínas da superfície na análise do secretoma do A. fumigatus. Além disso, todas as proteínas caracterizadas no secretoma apresentavam sinal de secreção determinado pelo FunSecKB (www.proteomics.ysu.edu/secretomes/fungi.php). A análise do secretoma foi realizada utilizando-se a cepa selvagem AF293 e a mutante ∆prtT, mutante para um fator de transcrição que atua na regulação da secreção de proteases. Os resultados revelam a ALP1 como expressa na cepa selvagem, assim como outras proteases importantes para virulência e desenvolvimento da célula fúngica, estando suprimidas quando o gene prtT foi deletado. / Aspergillus fumigatus is the main etiologic agent of invasive aspergillosis (IA), a opportunistic a life-threatening disease for immunocompromised hosts, especially those with acute and prolonged neutropenia. During the invasion and dissemination, which occurs in this systemic infection, the A. fumigatus conidia, after its inhalation, germinates into angioinvasive hyphae in case the innate immune response fails in eliminate these cells. Little is known about the cell wall molecules and/or the secreted proteins involved on the A. fumigatus pathogenesis, at this context the present work aims to amplify the knowledge about the aspergillosis by studying the differentially surface proteins of A. fumigatus during the filamentation process. These cells were denominated according to their morphology and their growth time as: TG6h (germ tubes), H12h and H72h (hyphae). The surface proteins were mildly extracted from intact cells using the reducing agent DTT (dithiothreitol). The functional profile of the H12h and H72h were similar except for the stress response proteins, while the TG6h presented significant differences for several functional groups. On this base, the DIGE (differential gel electrophoresis) was performed using the surface extracted proteins of the germ tubes (TG6h) and mature hyphae (H72h) cells. The results indicate that multiple functional proteins and proteins related to the biosynthesis pathways were overexpressed at TG6h. Some stress response proteins as the HSPs were overexpressed on this morphotype while the MnSOD, oxidative stress responsive protein, was most abundant at the hyphae. PhiA, an integrant protein of the cell wall, was the only protein with a secretion signal sequence. All other proteins identified on the cell surface lack an identifiable secretion sign, and are denominated atypical proteins. The plasma membrane integrity was verified after the mild extraction using DTT, and also the biotinylation of the cell extracted proteins, which ensured these proteins surface localization on the fungal cell. There are hypothesis that some proteins can be transport to the cell wall by alternative pathways and support the results found for this work. These evidences were confirmed by the fact that the proteins identified at the surface were not the same identified on the A. fumigatus secretome. Besides, all proteins identified on the secretome presented secretion signal determinate by the FunSecKB (www.proteomics.ysu.edu/secretomes/fungi.php). The secretome analysis was performed using the wild type AF293 and the ∆prtT mutant, lacking a transcription factor that regulates proteases secretion. The results demonstrate ALP1 overexpressed on the wild type and also other proteases important to virulence and development of the fungal cell suppressed when prtT was deleted.

Neste trabalho, avaliaram-se o crescimento e a capacidade de biosorção de metais de Pleurotus sajor-caju PS 2001, em meios de cultivo líquido e sólido, contendo sulfatos de cobre II, de ferro II, de alumínio, de zinco, de cromo II e de níquel II, em concentrações de 30 ou 60mg.100mL-1 . O crescimento e a massa micelial foram avaliados aos 7, 14 e 21 dias de desenvolvimento para cultivo líquido sendo que para cada etapa de desenvolvimento foram retiradas amostras que foram submetidas a metodologia PIXE para determinação da biosorção dos elementos presentes nas amostras. No cultivo sólido, após 21 dias forampara os corpos de frutificação dos cultivos sólidos. Para cada etapa de de do trabalho desenvolveu-se um método que se mostrou adequado para quantificar indiretamente a massa fúngica. Os diferentes tratamentos foram propostos seguindo o método de análise de superfície de Box-Wilson, possibilitou a otimização do meio de crescimento ao indicar que adições de sais nas concentrações variáveis presentes nos fermentadores e aplicadas nos tratamentos otimizados de T1 até T5, correspondentes a (NH4)2SO4: T1 = 20,50mg a T5 = 24,48mg; MnSO4: T1 = 0,0235mg T5 = 0,0275mg e CuSO4.5 H2O : T1 = 0,024mg a T5 = 0,030mg, possibilitaram um aumento de até três vezes da massa fúngica de P. sajor-caju, nos primeiros 15 dias de crescimento, em relação aos meios sem adição. Os diferentes tratamentos também apresentaram variação favorável para a secreção das enzimas lacases que tiveram sua produção aumentada em valores de 75% até 200%; a secreção das enzimas manganês peroxidases apresentaram aumento variável de 25% até 90%, indicando que as variações nas adições dos sais empregados nos tratamentos originaram diferentes valores para as secreções enzimáticas. Adicionalmente, constatou-se que a adição de sulfato de cromo III e sulfato de níquel II aos meios de cultivo na ordem de 9,41 mg/ favorece a produção de massa fúngica, bem como a secreção de lacases e manganês peroxidases. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-19T16:54:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Stela Maris da Silva.pdf: 1824607 bytes, checksum: 1e6abbbc92abcf6cd0bba5a861e37b93 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-19T16:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Stela Maris da Silva.pdf: 1824607 bytes, checksum: 1e6abbbc92abcf6cd0bba5a861e37b93 (MD5) / In this work, Pleurotus sajor-caju PS2001 was cultivated in solid-state, in a medium formulated with sawdust of Pinus spp and wheat bran, to which had been added cupric sulphate, manganese sulphate and ammonium sulphate. Different treatments had been made with these salts, aiming at the solid cultive medium otimization for attainment of bigger productivity in the commercial production of mushrooms. In the first stage of the work a method was developed that was adequate to quantify indirectly the fungi mass indirectly. This method was based on the amount of chitin of the fungi wall which was estimated by the evaluation of the free N-acetilglucosamine concentration released for enzymatic hydrolysis. Different treatments had been considered following the methodology of Box-Wilson, who indicated the amounts of salts ideals to the medium, which allowed an increase of up to three times in the content of fungus mass during the first 15 days of growth. The treatments had also shown to favorable variation for the secretion of lacases and manganese peroxidases, indicating the potential use of these mushrooms also for the production of these enzymes and purpose of biorremediation. Additionally, one evidenced that the phenol addition to the cultive medium favors the production of fungus mass as well as the secretion of lacases and manganese peroxidases.

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-09-06T11:19:09Z No. of bitstreams: 2 Tese - Danillo Fabrini Maciel Costa Veloso - 2018.pdf: 15996172 bytes, checksum: 30a5841de71ac68f55a18e1b917ed259 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-10T10:40:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Danillo Fabrini Maciel Costa Veloso - 2018.pdf: 15996172 bytes, checksum: 30a5841de71ac68f55a18e1b917ed259 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-10T10:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Danillo Fabrini Maciel Costa Veloso - 2018.pdf: 15996172 bytes, checksum: 30a5841de71ac68f55a18e1b917ed259 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Voriconazole, a second-generation triazole with a large spectrum of action is one of the most recommended systemic antifungal agents as the first line therapy against several clinically important fungal pathogens, among them Candida albicans. This antifungal has moderate water solubility and exhibits a nonlinear pharmacokinetic profile due to metabolic clearance saturation. By entrapping voriconazole into liposomes it is possible to circumvent its physico-chemical limitations, avoid the high toxicity of the antimicrobial, caused by sulfobutyl ether-betacyclodextrin, vehicle used to increase its solubility, present in its commercially available formulation: VFEND®. Pharmacokinetics and biodistribution of voriconazole modified by encapsulation in liposomes allowed its antifungal activity to be potentiated, leading to increased specificity and tissue penetration, protection the drug from biological degradation and reduced metabolism. Liposomes entrapping voriconazole (LVCZ) showed a particle size of 95.3 ± 1.27 nm, PdI of 0.09 ± 0.01, zeta potential near to neutrality, as well as a high efficiency of encapsulation of the antifungal and vesicles presenting spherical morphology uni and/or multilamellar. In vitro and in vivo evaluations of the performance of the liposomal formulation containing voriconazole were all performed in a comparative fashion with the commercially available formulation, VFEND®. In the in vitro assays using different species of fungal isolates of Candida and Aspergillus sp. the liposomal formulation was equivalent or superior to VFEND®. In a non-clinical pharmacokinetic assay in Balb/c mice, using a dose of 10 mg/kg, the main pharmacokinetic parameters were obtained: Cmax (μg/mL) = 1.23 ± 0.28 and 0.61 ± 0.15; AUC0-24 (μg/ml*h) = 4.86 ± 1.01 and 1.96 ± 0.30; Cl (mL/h) = 52.75 ± 8.88 and 100.91 ± 20.14; Vd (mL) = 230.18 ± 53.61 and 314.18 ± 106.24 for LVCZ and VFEND®, respectively. In all calculated/observed parameters, the liposomal formulation presented superior performance, using the same dose as the commercial formulation. Increases in antifungal concentrations found in blood, liver and kidneys and lower amounts of the inactive metabolite formed when using the liposomal formulation can be attributed to the ability of liposomes to alter the pharmacokinetics and biodistribution of voriconazole in the body mainly because of their capacity to protect the drug from accelerated metabolism. In vivo efficacy evaluation of voriconazole was also performed in a systemic candidiasis model in immunosuppressed animals, as well as parameters such as weight loss, fungal burden in the liver and kidneys and histological alterations caused by infection and treatment. As a consequence of voriconazole pharmacokinetics and biodistribution modified by the encapsulation in liposomes, the antifungal activity of drug was potentiated, leading to greater specificity and tissue penetration. In conclusion, in order to provide appropriate dose regimens for the treatment of systemic fungal infections, avoiding obstacles such as toxicity and resistance mechanisms we developed na alternative therapeutic platform, able to lead to safe and effective treatment. / O voriconazol, um triazólico de segunda geração de amplo espectro de ação, é um dos agentes antifúngicos sistêmicos mais recomendados como terapia de primeira linha contra vários patógenos fúngicos clinicamente importantes, dentre eles Candida albicans. Este antifúngico apresenta algumas desvantagens do ponto de vista tecno-farmacêutico: baixa solubilidade em água e perfil farmacocinético não-linear devido à saturação de depuração metabólica. Alem disso, sua formulação comercialmente disponível (VFEND®), utiliza um agente complexante, a sulfobutil éter-beta-ciclodextrina, para aumentar a solubilidade do voriconazol em água, porém esse agente apresenta consideráveis efeitos de toxicidade. Diante dessas limitações, encapsular o antifúngico em uma formulação lipossomal, que utiliza componentes biodegradáveis e biocompatíveis, os fosfolipídeos, é uma alternativa para aumentar a solubilidade do voriconazol em água, possibilitando o uso intravenoso. Além de contornar suas limitações físico-químicas, o uso de lipossomas permite eliminar o uso do veiculo tóxico presente na formulação comercial, além de possibilitar melhoras na farmacocinética e na distribuição tecidual do voriconazol. Os lipossomas contendo voriconazol (LVCZ) apresentaram tamanho de partícula de 95,3 ± 1,27 nm, índice de polidispersão de 0,09 ± 0,01, potencial zeta próximo da neutralidade, bem como uma elevada eficiência de encapsulação do antifúngico (aproximadamente 80%) e vesículas de morfologia esférica uni e/ou multilamelares. As avaliações in vitro e in vivo da performance da formulação lipossomal contendo voriconazol foram realizadas de forma comparativa com o VFEND®. Nos ensaios in vitro utilizando diferentes espécies de isolados fúngicos de Candida e Aspergillus sp. a formulação lipossomal se mostrou equivalente ou superior ao VFEND®. No estudo não-clínico de farmacocinética em camundongos Balb/c com dose de 10 mg/kg, foram obtidos os principais parâmetros farmacocinéticos: Cmax (μg/mL) = 1,23 ± 0,28 e 0,61 ± 0,15; AUC0-24 (μg/mL*h) = 4,86 ± 1,01 e 1,96 ± 0,30; Cl (mL/h) = 52,75 ± 8,88 e 100,91± 20,14; Vd (mL) = 230,18 ± 53,61 e 314,18 ± 106,24 para LVCZ e VFEND®, respectivamente. Em todos os parâmetros calculados/observados, a formulação lipossomal apresentou melhor desempenho, utilizando a mesma dose que a formulação comercial. Aumentos nas concentrações do antifúngico encontradas no sangue, fígado e nos rins e menores quantidades do metabólito inativo (voriconazol-N-óxido) formado, quando se utilizou a formulação lipossomal podem ser atribuídos à capacidade dos lipossomas de alterar a farmacocinética e biodistribuição do voriconazol no organismo, principalmente devido à sua capacidade de proteger o fármaco do metabolismo acelerado. A avaliação da eficácia in vivo do voriconazol também foi realizada em modelo de candidíase sistêmica em animais imunossuprimidos, assim como parâmetros como a perda de peso, a carga fúngica no fígado e rins e alterações histológicas provocadas pela infecção e pelo tratamento. Como consequência da farmacocinética e da biodistribuição de voriconazol modificadas devido à encapsulação do voriconazol em lipossomas, a atividade antifúngica do fármaco foi potencializada, levando a maior especificidade e penetração tecidual. Em conclusão, a fim de fornecer regimes de dose adequados para o tratamento de infecções fúngicas sistêmicas, evitando obstáculos, como mecanismos de resistência e alta toxicidade, desenvolvemos uma plataforma terapêutica alternativa, capaz de prover a um tratamento seguro e eficaz.

Neste trabalho, avaliaram-se o crescimento e a capacidade de biosorção de metais de Pleurotus sajor-caju PS 2001, em meios de cultivo líquido e sólido, contendo sulfatos de cobre II, de ferro II, de alumínio, de zinco, de cromo II e de níquel II, em concentrações de 30 ou 60mg.100mL-1 . O crescimento e a massa micelial foram avaliados aos 7, 14 e 21 dias de desenvolvimento para cultivo líquido sendo que para cada etapa de desenvolvimento foram retiradas amostras que foram submetidas a metodologia PIXE para determinação da biosorção dos elementos presentes nas amostras. No cultivo sólido, após 21 dias forampara os corpos de frutificação dos cultivos sólidos. Para cada etapa de de do trabalho desenvolveu-se um método que se mostrou adequado para quantificar indiretamente a massa fúngica. Os diferentes tratamentos foram propostos seguindo o método de análise de superfície de Box-Wilson, possibilitou a otimização do meio de crescimento ao indicar que adições de sais nas concentrações variáveis presentes nos fermentadores e aplicadas nos tratamentos otimizados de T1 até T5, correspondentes a (NH4)2SO4: T1 = 20,50mg a T5 = 24,48mg; MnSO4: T1 = 0,0235mg T5 = 0,0275mg e CuSO4.5 H2O : T1 = 0,024mg a T5 = 0,030mg, possibilitaram um aumento de até três vezes da massa fúngica de P. sajor-caju, nos primeiros 15 dias de crescimento, em relação aos meios sem adição. Os diferentes tratamentos também apresentaram variação favorável para a secreção das enzimas lacases que tiveram sua produção aumentada em valores de 75% até 200%; a secreção das enzimas manganês peroxidases apresentaram aumento variável de 25% até 90%, indicando que as variações nas adições dos sais empregados nos tratamentos originaram diferentes valores para as secreções enzimáticas. Adicionalmente, constatou-se que a adição de sulfato de cromo III e sulfato de níquel II aos meios de cultivo na ordem de 9,41 mg/ favorece a produção de massa fúngica, bem como a secreção de lacases e manganês peroxidases. / In this work, Pleurotus sajor-caju PS2001 was cultivated in solid-state, in a medium formulated with sawdust of Pinus spp and wheat bran, to which had been added cupric sulphate, manganese sulphate and ammonium sulphate. Different treatments had been made with these salts, aiming at the solid cultive medium otimization for attainment of bigger productivity in the commercial production of mushrooms. In the first stage of the work a method was developed that was adequate to quantify indirectly the fungi mass indirectly. This method was based on the amount of chitin of the fungi wall which was estimated by the evaluation of the free N-acetilglucosamine concentration released for enzymatic hydrolysis. Different treatments had been considered following the methodology of Box-Wilson, who indicated the amounts of salts ideals to the medium, which allowed an increase of up to three times in the content of fungus mass during the first 15 days of growth. The treatments had also shown to favorable variation for the secretion of lacases and manganese peroxidases, indicating the potential use of these mushrooms also for the production of these enzymes and purpose of biorremediation. Additionally, one evidenced that the phenol addition to the cultive medium favors the production of fungus mass as well as the secretion of lacases and manganese peroxidases.

[ES] En la actualidad, el melón (Cucumis melo L.) es un cultivo con gran impacto económico mundial que se cultiva en más de 100 países. Su adaptación a diversas regiones en todo el mundo ha dado como resultado el gran polimorfismo actualmente observado en la especie. Esta variabilidad genética es un recurso imprescindible en los programas de mejora, pues constituye un reservorio valioso de nuevos alelos. La utilización de herramientas moleculares permite la optimización de los programas de mejora convencionales, consiguiendo el desarrollo de nuevas variedades más rápidamente y adaptándose así a las exigencias del productor y las preferencias del consumidor. El desarrollo de líneas de introgresión (ILs) mediante la ayuda de técnicas moleculares que facilitan el proceso de selección, constituye una estrategia óptima para la introducción de características favorables procedentes de tipos silvestres en cultivares comerciales. En la presente Tesis Doctoral se describe el desarrollo de una colección de ILs usando la entrada Queen's Pocket melon (del grupo Dudaim) de Irak, como parental exótico donante y el cultivar español 'Piel de Sapo' (del grupo Ibericus) como parental recurrente. Durante el proceso de generación de las ILs no sólo se tuvo en cuenta el genotipado (mediante diversas técnicas como HRM, la plataforma Agena Bioscience y GBS) para optimizar la recuperación del fondo genético recurrente, el número de introgresiones y la cobertura del genoma del parental donante, sino también el fenotipo mostrado por las diferentes familias. La selección final, formada por 16 ILs, presenta un promedio de 1,4 introgresiones por IL y representa el 62,6 % del genoma del parental donante. La caracterización fenotípica de esta colección de ILs permitió la identificación de 32 QTLs (Quantitative Trait Loci) estables en los dos ambientes evaluados. De éstos, 22 QTLs corresponden a caracteres morfológicos como peso, forma, reticulado, ancho de pulpa y cavidad; 9 QTLs están relacionados con características asociadas a maduración climatérica como la presencia de la capa de abscisión, aroma y firmeza de la pulpa; y uno se refiere al contenido de sólidos solubles. Muchos de los QTLs identificados en este trabajo no han sido descritos anteriormente, lo cual constituye un valioso recurso tanto de alelos nuevos potencialmente interesantes en mejora como para el estudio de las regiones genómicas y genes implicados en el control de ciertos caracteres de interés agronómico. Por otra parte, otros QTLs confirmaron regiones previamente descritas por otros autores. En esta Tesis se describen líneas potencialmente interesantes en cuanto a presencia de aroma, tamaño reducido del fruto y/o formas más redondeadas, características buscadas en el mercado de tipos 'Piel de Sapo'. La caracterización de ese conjunto de ILs también se llevó a cabo para la resistencia a un hongo patógeno del suelo, Macrophomina phaseolina. A pesar de la moderada resistencia descrita en trabajos anteriores para el parental Dudaim, ninguna línea resultó resistente. El estudio que se presenta en esta Tesis acerca de la influencia de la temperatura en la patogenicidad de este hongo ha demostrado que la resistencia del parental es superada con temperaturas altas y por tanto, no es estable. En este cribado, tan sólo una entrada silvestre africana resultó resistente a temperaturas altas. De igual manera se realizó un ensayo de tolerancia a los hongos del suelo Monosporascus cannonballus y M. eutypoides, principales responsables del colapso del melón, que causa también muchas pérdidas económicas. Los resultados permitieron concluir que M. cannonballus presenta mayor patogenocidad que M. eutypoides y que la temperatura también afecta de forma importante a la severidad de los síntomas, apoyando estudios previos. Las dos entradas africanas y de la India que presentaron mayor tolerancia a Monosporascus spp. pueden ser de interés en futu / [CAT] A l'actualitat, el meló (Cucumis melo L.) és un conreu amb gran impacte econòmic que es cultiva en més de 100 països. La seua adaptació a diverses regions per tor el món ha donat com a resultat el gran polimorfisme que actualment observem en l'espècie. Esta variabilitat genètica és un recurs imprescindible en els programes de millora, ja que constitueix un reservori valuós de nous al¿lels. La utilització de ferramentes moleculars permet l'optimització dels programes de millora convencionals, aconseguint el desenvolupament de noves varietats més ràpidament i adaptant-se així a les exigències del productor i les preferències del consumidor. El desenvolupament de línies d'introgressió (ILs) mitjançant l'ajuda de tècniques moleculars que faciliten el procés de selecció, constitueix una estratègia òptima per a la introducció de característiques favorables vinents de tipus silvestres en cultivars comercials. En la present Tesi Doctoral es descriu el desenvolupament d'una col¿lecció d'ILs usant l'entrada Queen's Pocket melon (grup Dudaim) d'Iraq, com a parental exòtic donant i el cultivar espanyol 'Piel de Sapo' (grup Ibericus) com a parental recurrent. Durant el procés de generació de les ILs no solament es tingué en compte el genotipatge (mitjançant diverses tècniques com HRM, la plataforma Agena Bioscience i GBS) per a optimitzar la recuperació del fons genètic recurrent, el nombre d'introgressions i la cobertura del genoma del parental donant, sinó també el fenotip mostrat per les diferents famílies. La selecció final, formada per 16 ILs, presenta una mitjana de 1,4 introgressions per IL i representa el 62,6% del genoma del parental donant. La caracterització fenotípica d'aquesta col¿lecció d'ILs permeté la identificació de 32 QTLs (Quantitative Trait Loci) estables en els dos ambients avaluats. D¿aquests, 22 QTLs corresponen a caràcters morfològics com pes, forma, reticulat, amplària de polpa i cavitat; 9 QTLs estan relacionats amb característiques associades a maduració climatèrica com la presència de la capa d'abscissió, aroma i fermesa de la polpa; i un es refereix al contingut de sòlids solubles. Molts dels QTLs identificats en este treball no han sigut descrits anteriorment, cosa que constitueix un valuós recurs tant d¿al¿lels nous potencialment interessants en millora com per a l¿estudi de les regions genòmiques i gens implicats en el control de certs caràcters d'interés agronòmic. Per una altra banda, altres QTLs confirmaren regions prèviament descrites per altres autors. En esta Tesi es descriuen ILs potencialment interessants respecte a la presència d¿aroma, mesura reduïda del fruit, i/o formes més arrodonides, característiques buscades en el mercat de tipus 'Piel de Sapo'. La caracterització d¿aquesta col¿lecció d'ILs també es va dur a terme per a la resistència a un fong patogen del sòl, Macrophomina phaseolina. Malgrat la moderada resistència descrita en treballs anteriors per al parental Dudaim, cap línia resultà resistent. L'estudi que es presenta en aquesta Tesi sobre la influència de la temperatura en la patogenicitat d'aquest fong ha demostrat que la resistència del parental es superada amb temperatures altes i per tant, no és estable. En aquest estudi, tan sols una entrada silvestre africana resultà resistent a temperatures altes. També es va realitzar un assaig de tolerància als fongs del sòl Monosporascus cannonballus i M. eutypoides, principals responsables del col¿lapse del meló, que causa també moltes pèrdues econòmiques. Els resultats permeteren concloure que M. cannonballus presenta major patogenicitat que M. eutypoides i que la temperatura també afecta de forma important a la severitat dels símptomes, recolzant estudis previs. Les dues entrades africanes i la hindú que presentaren major tolerància a Monosporascus spp. poden ser d'interés en futurs programes de millora. / [EN] Nowadays, the melon (Cucumis melo L.) is a crop with great economic impact worldwide that is grown in more than 100 countries. Its adaptation to diverse regions around the world has turned out in the high polymorphism this species shows. This genetic variability is an indispensable resource for breeding programs, since it is a valuable reservoir of new alleles. The use of molecular tools allows the optimization of conventional breeding programs, achieving the development of new varieties more quickly and adapting to the demands of the producer and to consumer preferences. The development of Introgression Lines (ILs) employing molecular techniques to assist in the selection process, constitutes an optimal strategy for the introduction of favourable traits from wild types in commercial cultivars. In this PhD thesis the development of an ILs collection is described, using the Queen's Pocket melon accession (Dudaim group) of Irak as the exotic donor parental and the Spanish cultivar 'Piel de Sapo' (Ibericus group) as the recurrent parental. During the ILs generation process, not only genotyping was taken into consideration (several techniques such as HRM, the Agena Bioscience platform and GBS were used) to optimize the recovery of the recurrent genetic background, the number of introgressions and the coverage of the donor genome, but also the phenotype shown by the different families. A set of 16 ILs was finally selected, bearing an average of 1.4 introgressions per IL and representing 62.6% of the donor genome. The phenotypic characterization of this IL collection allowed the identification of 32 stable QTLs (Quantitative Trait Loci) in the two environments evaluated. Out of these, 22 QTLs correspond to morphological traits such as weight, shape, netting, flesh width and cavity; 9 QTLs are related to traits associated with the climacteric ripening such as the presence of the abscission layer, aroma and flesh firmness; and one related to the soluble solids content. Many QTLs identified in this work have not been described previously. This implies new alleles of potential interest not only in breeding but also in the study of new genomic regions and genes controlling agronomical and quality traits. On the other hand, other QTLs confirmed regions previously described by other authors. In this work, interesting lines are described in terms of the presence of aroma, reduction of fruit size and / or more rounded shapes, characteristics requested by 'Piel de Sapo' consumers. The phenotyping of this set of ILs was also carried out for searching for resistance to a pathogenic soil fungus, Macrophomina Phaseolina. Despite the moderate resistance described for the Dudaim parental in a previous work, no line was resistant. The study presented herein about the influence of temperature on the pathogenicity of this fungus, has shown that the resistance of the donor parenal is overcome with the temperature increase and therefore, is not stable. In this screening, only one African wild accession was resistant to high temperatures. In addition, an assay searching for tolerance to the fungi of the soil, Monosporascus cannonballus and M. eutypoides, the main responsible for melon collapse, was carried out. The results allowed us to conclude that M. cannonballus presents higher pathogenicity than M. eutypoides. Additionally, temperature also affected the symptoms severity, which is coherent with previous studies. Two African and one Indian accessions were the ones displaying higher tolerance to Monosporascus spp. They may be of great interest in future melon breeding programs. / Castro Alcocer, GE. (2019). APROVECHAMIENTO DE HERRAMIENTAS GENETICAS Y GENOMICAS PARA DESARROLLO DE NUEVAS POBLACIONES PARA LA MEJORA DEL MELON POR RESISTENCIA A PATÓGENOS Y CALIDAD [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/131206 / TESIS

Introdução: Considerando-se a crescente tendência da utilização de próteses sobre implantes tanto em nossa população quanto em âmbito mundial, ganha importância o estudo das diversas condições envolvidas na longevidade e funcionalidade dessas peças para os indivíduos em geral. Objetivo: Determinar a ocorrência de alterações patológicas associadas a próteses totais implantadas e correlacioná-las a variáveis individuais, das peças protéticas e à participação de leveduras do gênero Candida nesses indivíduos. Metodologia: Pacientes portadores de próteses sobre implantes foram avaliados no momento da remoção das peças para controle e manutenção, após anuência com os termos do consentimento livre e esclarecido. Os participantes tiveram seus fluxos salivares totais avaliados inicialmente. Após a remoção das próteses, as peças foram avaliadas tecnicamente (próteses, implantes, parafusos e abutments), a boca examinada clinicamente, as condições da mucosa subjacente às próteses foram anotadas, e eventuais lesões associadas às próteses foram avaliadas e tratadas. Paralelamente foi realizada coleta de material para exame micológico de dois sítios - mucosa sob a prótese e base da prótese. O material foi coletado com auxílio de swabs e transferido a placas com meio de cultura diferencial (Chromagar®) para observação de crescimento e identificação de leveduras. Resultados: Foram coletados dados referentes a 91 participantes e 102 próteses sobre implantes. Trinta e quadro homens e 57 mulheres com idade média de 66,6 anos. Quatro overdentures, 72 protocolos inferiores e 26 superiores. Nenhum participante apresentou hipossalivação. Candida spp foram identificadas em 70,3% das arcadas inferiores e 85,7% das arcadas superiores. O tempo de uso das próteses interferiu na porcentagem de identificação das leveduras. Candida albicans foi a principal espécie identificada (93% dos casos positivos). Outras espécies identificadas foram: Candida glabrata, C. kruzei e C. tropicalis. Técnicas de higienização adicionais à escovação convencional reduziram a contaminação pelos fungos, enquanto hábitos de fumar ou consumir bebidas alcoólicas a aumentaram. Inflamação em mucosa relacionou-se positivamente à presença de Candida em mucosa e próteses. Oito participantes foram submetidos a intervenções cirúrgicas para remoção de processos proliferativos inflamatórios (8,8%). Foram avaliados 532 implantes, registrando-se perda de 1,13% deles e necessidade de reaperto em 271 parafusos (50,1%). Os dados foram analisados de forma descritiva e submetidos a testes estatísticos adequados ao tipo de dados obtidos. Conclusões: Os resultados obtidos nesta investigação sugerem que os cirurgiões dentistas que trabalham na área da Implantodontia devem rever seus protocolos de orientação aos pacientes e regimes de manutenção das próteses totais sobre implantes, a fim de manter a saúde dos indivíduos, prevenir lesões inflamatórias nos tecidos orais e proporcionar longevidade à reabilitação. / Introduction: Considering the increasing tendency of the use of prostheses on implants in both our population and worldwide, it is important to study the several conditions involved in the longevity and functionality of these parts for individuals in general. Aim: To determine the occurrence of pathological changes associated with full-arch implant-supported fixed prostheses and to correlate them with individual variables, prosthetic specimens and the participation of Candida yeasts in these individuals. Methodology: Patients with full-arch implant-supported fixed prostheses and overdentures were evaluated at the time of removal of the parts for control and maintenance, after consent with the terms of free and informed consent. The participants had their total salivary flows initially evaluated. After the removal of the prosthesis, the pieces were evaluated technically (prostheses, implants, screws and abutments), the mouth examined clinically, the conditions of the mucosa underlying the prostheses were noted, and any lesions associated with the prostheses were evaluated and treated. In parallel, material was collected for mycological examination of two sites - mucosa under the prosthesis and base of the prosthesis. The material was collected with the help of swabs and transferred to plates with differential culture medium (Chromagar®) for observation of growth and identification of yeasts. Results: Data were collected on 91 participants and 102 implants. Thirty-one men and 57 women with mean age of 66.6 years. Four overdentures, 72 in the lower arch and 26 in the upper arch. No participant presented hyposalivation. Candida spp. were identified in 70.3% of the lower arches and 85.7% of the upper arches. The time of use of the prostheses interfered in the percentage of identification of the yeasts. Candida albicans was the main species identified (93% of the positive cases). Other species identified were: Candida glabrata, C. kruzei and C. tropicalis. Hygiene techniques in addition to conventional brushing reduced fungal contamination, while smoking or drinking increased. Inflammation in mucosa was positively related to the presence of Candida in mucosa and prostheses. Eight participants underwent surgical interventions to remove proliferative inflammatory processes (8.8%). A total of 532 implants were evaluated, with a loss of 1,13% of them and the need to re-tighten 271 screws (50.1%). Data were analyzed descriptively and submitted to statistical tests appropriate to the type of data obtained. Conclusions: The results obtained in this research suggest that dental surgeons working in the implantology area should review their patient orientation protocols and maintenance of full-arch implant-supported fixed prostheses in order to maintain the health of individuals, prevent inflammatory lesions in tissues oral and provide longevity to rehabilitation.