Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pedro_manso_ioc_dout_2014.pdf: 3405057 bytes, checksum: 6746c4f31f57631cda4cf25c55563336 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A vacina contra febre amarela é produzida a partir da inoculação do vírus atenuado 17DD em ovos embrionados de galinha. Esta vacina é extremamente eficaz e segura, gerando imunidade que pode perdurar por até trinta e cinco anos. Embora a replicação deste vírus em embriões de galinha seja utilizada desde 1937, pouco se sabe sobre os aspectos da infecção nestes embriões, especialmente que órgãos, tecidos e células são responsáveis pela replicação viral. Nesse trabalho, analisamos embriões de galinha (Gallus gallus) infectados pelo vírus da FA 17DD em diferentes tempos de infecção (24, 48, 72 e 96 horas) conforme as condições empregadas na produção de vacina na Fiocruz. Identificamos o vírus da Febre Amarela através de imunofluorescência em diferentes tecidos, correlacionamos a presença deste agente infeccioso às pequenas reações histopatológicas observadas nos tecidos, validamos essa detecção pela confirmação do material genético viral e seu sequenciamento, e confirmamos que este vírus replica na região onde foi identificado pela presença detecção de seu intermediário replicativo. Nesse sentido observamos que as alterações histopatológicas que ocorrem nos embriões de galinha infectados pelo vírus FA 17DD se apresenta branda e sistêmica ao longo do tempo analisado. Nossos dados apontam que as primeiras células a manifestar a infecção são mioblastos com aspecto mesenquimal que puderam ser observados no coração e no músculo esquelético a partir de 48 horas de infecção Após 72 horas, o vírus FA 17DD replica em células do músculo esquelético, cardiomiócitos, células da glia e neurônios, no epitélio tubular renal, parênquima pulmonar e fibroblastos. Nossos dados permitem sugerir o tecido muscular esquelético como um local privilegiado na produção das partículas virais. Após 96 horas a infecção se torna mais intensa no sistema nervoso e se mantém nos mesmos níveis nos demais tecidos já infectados. O conjunto de dados gerados nesse trabalho contribui para elucidar aspectos importantes sobre a patologia da febre amarela em embriões de galinha, e evidenciar os tecidos e células responsáveis pela produção do vírus FA 17DD nestes embriões. Estes dados podem ser úteis na compreensão e formulação de novas estratégias de produção da vacina, além de impactar no desenvolvimento de estratégias baseadas no uso do vírus FA 17DD como plataforma de produção para outras vacinas / Yellow fever vaccine is produced from the inoculation of attenuated virus YF 17DD in embryonated chicken eggs. This vaccine is extremely effective and safe, generating immunity that can persist across up to thirty-five years. Although replication of this virus in chicken embryos is used since 1937, little is known about aspects of infection in these embryos, especially that organs, tissues and cells are responsible for viral replication. In this study we analyzed chicken embryos (Gallus gallus) infected in vaccine production (Biomanguinhos) with YF 17DD virus in different times post infection (24, 48, 72 and 96 hours). Here it was possible to detect the Yellow Fever Virus by immunofluorescence, to correlate this presence with tiny tissue reactions, to validate it by genomic RNA detection and to sequence it in the same studied area, confirming that this virus is replicated in these regions by the replicative intermediate detection. In this thesis the histopathological changes that occur in chicken embryos infected by YF 17DD virus during the production of yellow fever vaccine were observed in a kinetic way. We observed that the infection in these embryos presented itself mild and systemic. Our data show that the first cells which express infection are myoblasts with mesenchymal shape that could be observed in the heart and skeletal muscle at 48 hours of infection. After 72 hours the yellow fever virus 17DD replicates mainly in skeletal muscle cells, cardiomyocytes, glial cells and neurons, but also in the renal tubular epithelium, lung parenchyma and fibroblasts. Our findings suggested skeletal muscle tissue as a main place in the production of viral particles. After 96 hours the infection becomes more intense in the nervous system and is maintained at the same levels in other tissues already infected. The data generated in this study contributes to elucidate important aspects of the yellow fever pathology in chicken embryos, and elucidate the tissues and cells responsible for YF 17DD virus production in this model. Our data may be helpful in the understanding and design new strategies of vaccine production, and impact in development of strategies based on the use of the virus YF 17DD as a platform for other vaccines production.

Áreas verdes urbanas são ambientes que podem oferecem oportunidade de interação entre reservatórios e vetores dos meios urbano e silvestre, potencializando o risco de transmissão de doenças e de mudanças em seu perfil epidemiológico. Entender como as alterações da paisagem interferem na composição da fauna de culicídeos e conhecer quais espécies de vetores ocorrem nessas áreas, pode auxiliar na predição da distribuição espacial das espécies frente à urbanização, fornecendo importantes ferramentas para o controle de endemias e planejamento urbano. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de espécies de mosquitos vetores e avaliar a relação entre os diferentes tipos de uso e cobertura do solo e a composição da fauna de culicídeos. As coletas ocorreram quinzenalmente entre outubro de 2012 a março de 2013 com a utilização de armadilhas de oviposição instaladas em oito áreas verdes com diferentes características de paisagem do município de Porto Alegre, sul do Brasil. Foram coletados 4179 culicídeos de pelo menos 10 espécies. Destas, Aedes albopictus e Limatus durhami foram eudominante/dominantes, juntos representando 90% do total de indivíduos. Esse estudo foi o primeiro registro de ocorrência de Sabethes albiprivus e Li. durhami em Porto Alegre. As espécies de culicídeos demonstraram responder de maneira diversa aos tipos de uso e cobertura do solo, indicando que as afinidades mais evidentes se mantém nas três escalas avaliadas. A abundância relativa de Ae. albopictus foi relacionada às áreas verdes mais urbanizadas, enquanto a de Li. durhami, Haemagogus leucocelaenus e Toxorhynchites sp., à presença da mata nativa. A ocorrência de Aedes aegypti não demonstrou ser influenciada pelo tipo de uso e cobertura do solo. Foram coletadas três espécies relacionadas à transmissão de febre amarela, febre chikungunya e dengue, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus e Ae. aegypti e verificada a ocorrência simultânea dessas em algumas áreas, o que pode representar a oportunidade para o surgimento de surtos epidêmicos e a mudança do perfil epidemiológico dessas doenças. / Urban green areas can offer opportunity for interactions between reservoirs and vectors of urban and wild environments, increasing the risk of disease transition and changes in their epidemiological profile. The understanding of how changes in the landscape affect the composition of culicid fauna and which vector species occur in these areas may help and prediction the spatial distribution of the species along urbanized areas, providing important tools to control endemic disease. This study aimed to verify the occurrence of mosquito vector species and to evaluate the relationship between different types of land cover and land use with the composition of Culicidae fauna. Sampling occurred biweekly, from October 2012 to March 2013, where oviposition traps were installed in eight green areas with different landscape traits, in Porto Alegre, Southern Brazil. 4179 mosquitoes belonging to et least ten species were sampled. Aedes albopictus and Limatus durhami were eudominants/dominant representing together 90% of total individuals. This is the first report of Sabethes albiprivus and Li. durhami occurrence in Porto Alegre. The mosquitos species responded differently to types of land use cover and land use, indicating that the most obvious affinities are maintained in three scales evaluated. The relative abundance of Ae. albopictus was related to the more urbanized green area, while the abundance of Li. durhami , Haemagogus leucocelaenus and Toxorhynchites sp., was related to the presence of preserved areas. The occurrence of Aedes aegypti was not influenced by land use and land cover. Three species related to dengue, chikungunya and yellow fever transmission were sampled, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus and Ae. aegypti. We also verified the simultaneous occurrence of these species, which may represent an opportunity of changes in the epidemiologic of these diseases.

Áreas verdes urbanas são ambientes que podem oferecem oportunidade de interação entre reservatórios e vetores dos meios urbano e silvestre, potencializando o risco de transmissão de doenças e de mudanças em seu perfil epidemiológico. Entender como as alterações da paisagem interferem na composição da fauna de culicídeos e conhecer quais espécies de vetores ocorrem nessas áreas, pode auxiliar na predição da distribuição espacial das espécies frente à urbanização, fornecendo importantes ferramentas para o controle de endemias e planejamento urbano. O objetivo desse estudo foi verificar a ocorrência de espécies de mosquitos vetores e avaliar a relação entre os diferentes tipos de uso e cobertura do solo e a composição da fauna de culicídeos. As coletas ocorreram quinzenalmente entre outubro de 2012 a março de 2013 com a utilização de armadilhas de oviposição instaladas em oito áreas verdes com diferentes características de paisagem do município de Porto Alegre, sul do Brasil. Foram coletados 4179 culicídeos de pelo menos 10 espécies. Destas, Aedes albopictus e Limatus durhami foram eudominante/dominantes, juntos representando 90% do total de indivíduos. Esse estudo foi o primeiro registro de ocorrência de Sabethes albiprivus e Li. durhami em Porto Alegre. As espécies de culicídeos demonstraram responder de maneira diversa aos tipos de uso e cobertura do solo, indicando que as afinidades mais evidentes se mantém nas três escalas avaliadas. A abundância relativa de Ae. albopictus foi relacionada às áreas verdes mais urbanizadas, enquanto a de Li. durhami, Haemagogus leucocelaenus e Toxorhynchites sp., à presença da mata nativa. A ocorrência de Aedes aegypti não demonstrou ser influenciada pelo tipo de uso e cobertura do solo. Foram coletadas três espécies relacionadas à transmissão de febre amarela, febre chikungunya e dengue, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus e Ae. aegypti e verificada a ocorrência simultânea dessas em algumas áreas, o que pode representar a oportunidade para o surgimento de surtos epidêmicos e a mudança do perfil epidemiológico dessas doenças. / Urban green areas can offer opportunity for interactions between reservoirs and vectors of urban and wild environments, increasing the risk of disease transition and changes in their epidemiological profile. The understanding of how changes in the landscape affect the composition of culicid fauna and which vector species occur in these areas may help and prediction the spatial distribution of the species along urbanized areas, providing important tools to control endemic disease. This study aimed to verify the occurrence of mosquito vector species and to evaluate the relationship between different types of land cover and land use with the composition of Culicidae fauna. Sampling occurred biweekly, from October 2012 to March 2013, where oviposition traps were installed in eight green areas with different landscape traits, in Porto Alegre, Southern Brazil. 4179 mosquitoes belonging to et least ten species were sampled. Aedes albopictus and Limatus durhami were eudominants/dominant representing together 90% of total individuals. This is the first report of Sabethes albiprivus and Li. durhami occurrence in Porto Alegre. The mosquitos species responded differently to types of land use cover and land use, indicating that the most obvious affinities are maintained in three scales evaluated. The relative abundance of Ae. albopictus was related to the more urbanized green area, while the abundance of Li. durhami , Haemagogus leucocelaenus and Toxorhynchites sp., was related to the presence of preserved areas. The occurrence of Aedes aegypti was not influenced by land use and land cover. Three species related to dengue, chikungunya and yellow fever transmission were sampled, Ae. albopictus, Hg. leucocelaenus and Ae. aegypti. We also verified the simultaneous occurrence of these species, which may represent an opportunity of changes in the epidemiologic of these diseases.

A febre maculosa, doença de caráter endêmico, já foi diagnosticada em vários estados brasileiros. Em São Paulo a doença é considerada endêmica em algumas regiões e não endêmica ou desconhecida na maior parte do estado. Com o objetivo de estudar a epidemiologia da febre maculosa em regiões consideradas endêmica e não endêmica do estado de São Paulo, foram colhidos carrapatos das pastagens e amostras de sangue de seres humanos, cães e equídeos que viviam em propriedades rurais dos municípios de Pedreiras, (região endêmica); Pirassununga, Sorocaba e Cotia (não endêmica). A colheita de carrapato e de sangue foi efetuada no período de novembro de 2000 a março de 2001, época de predomínio do estágio adulto de ixodideos do gênero Amblyomma na região. Foram colhidos 686 amostras de carrapatos, 50 amostras de sangue de seres humanos, 28 eqüinos, quatro asininos e 16 caninos de região endêmica e 658 amostras de carrapatos, 16 amostras de sangue de seres humanos, 48 eqüinos e cinco caninos de região não endêmica. Os carrapatos foram examinados pelo teste de hemolinfa e pela nested reação em Cadeia da Polimerase (n-PCR). A amplificação de uma região do gene que codifica uma proteína interna de membrana de 17 kDa pela n-PCR, foi utilizada para a detecção do gênero Rickettsia spp nos carrapatos. De um total de 686 amostras de carrapatos de região endêmica, foram encontrados 34 amostras positivas (4,9%) e de 658 amostras de carrapatos de região não endêmica, foram encontrados seis amostras positivas (0,9%). O seqüenciamento de um fragmento de 232 pares de bases do gene 17 kDa efetuados em duas amostras de região endêmica e seis de região não endêmica demonstraram homologia em 100% com a Rickettsia felis. Foi realizada a reação de imunofluorescência indireta (IFI) nos soros sangüíneos utilizando-se antígenos brutos de superfície de Rickettsia rickettsii. Foram considerados positivos soros com títulos superiores a 64. Nenhuma amostra de soro de seres humanos de região endêmica e não endêmica apresentou sorologia positiva. 17 (65,3%) amostras de soros de eqüinos, de região endêmica, apresentaram sorologia positiva, com titulação máxima de 4096. Apenas uma (2,0%) amostra de soro eqüino de região não endêmica apresentou sorologia positiva, com titulação de 128. Cinco (31,2%) amostras de soros de cães de região endêmica apresentaram sorologia positiva, com titulação máxima de 512. Não foi detectada sorologia positiva para cães de região não endêmica. Os títulos elevados da sorologia de cães e eqüinos de região endêmica sugerem indiretamente a circulação de Rickettsia rickettsii nesta localidade. A vigilância epidemiológica em regiões não endêmicas é de grande importância visto que são consideradas vulneráveis a futuros casos de febre maculosa. / Spotted fever, a disease of endemic characteristics, has already been diagnosed in several Brazilian states. The disease is considered to be endemic in some regions of the state of São Paulo and non-endemic or unknown in most of the state. In order to study the epidemiology of spotted fever in endemic and non-endemic regions of the state of São Paulo, ticks were collected from pastures, and blood samples were collected from humans, dogs and horses living in rural properties in the cities of Pedreiras (endemic region); Pirassununga, Sorocaba and Cotia (non-endemic regions). Collection of the ticks was performed from November 2000 to March 2001, a period when adults ticks of the Amblyomma genus predominate in the region. Collection was performed as follows: 686 tick samples, 50 blood samples from humans, 26 blood samples from horses, four blood samples from donkeys and 16 blood samples from dogs in the endemic region. In the non-endemic region, 658 tick samples, 16 blood samples from humans, 48 blood samples from horses and one blood sample from a dog were collected. Ticks were studied using the hemolymph test, and by means of the nested polymerase chain reaction (n-PCR). The amplification, by n-PCR, of a region of the gene that codifies a 17 kDa internal protein in the membrane of the microorganism was used for the detection of the Rickettsia spp genus, in the ticks. From 686 tick samples from the endemic region, 34 were positive (4.9%). From the 658 tick samples collected in the non-endemic region, six were positive (0.9%). Sequencin of a 232 base-pair fragment of the 17 kDa gene, performed in two samples of the endemic region and in six samples of the non-endemic region, showed 100% homology with Rickettsia felis. Indirect immunofluorescence (IFI) was performed in serum samples using crude antigens from Rickettsia rickettsii surface. Serum samples were considered to be positive when presenting titers higher than 64. No human serum sample from the endemic or non-endemic region was positive. Seventeen (65.3%) serum samples from horses in the endemic region were positive, with maximum titer equal to 4096. Only one horse (2,0%) in the non-endemic region presented positive serology, with titer equal to 128. Five (31.2%) dog serum samples from the endemic region were positive, with maximum titer equal to 512. No dog serum sample was positive in the non-endemic region. Epidemiological surveillance in endemic regions is very important, for new spotted fever cases may be expected.

Os hormônios tireoidianos são essenciais no controle de múltiplas funções envolvidas na manutenção da homeostase, incluindo os processos de produção de calor e balanço energético. As relações entre o eixo hipotálamo-hipófise-tireoide e a função imunológica são complexas e ainda carecem de mais investigações. Comportamento doentio é uma expressão de um estado motivacional desencadeada pela ativação do sistema imune inato periférico, pelo qual um organismo organiza suas funções para combater a infecção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do estado tireoidiano sobre as respostas comportamentais ao desafio imunológico. O hipotireoidismo experimental foi induzido por propiltiouracil (PTU) por 30 dias (0,05%), adicionado à água de beber. As doses de 100, 200 e 500 ug/Kg de lipopolissacarídeo foram testadas para evidenciarmos o comportamento doentio. Após, camundongos controle e tratados com PTU receberam a dose de 200 ug/kg de LPS ou solução salina (ip) e as respostas comportamentais foram avaliadas durante 24 horas. Nos camundongos com hipotireoidismo induzido pelo PTU observou-se aumento do tempo de imobilidade no nado forçado (FST), maior número de esferas escondidas (MB) e comprometimento das respostas mneicas nas tarefas de reconhecimento de objetos de longa duração (LTM) e no labirinto aquático de Moris (MWM). Durante o desafio imunológico, a locomoção em campo aberto (OF) e o tempo de floating no nado forçado (FST) não foram modificados duas horas após a aplicação do LPS. Porém, nas análises após 24 horas, houve redução da atividade locomotora, aumento do tempo de floating, diminuição da ingestão de alimentos e maior perda de peso, comprometimento da memória e menor tempo de investigação social nos camundongos tratados com PTU. Além disto, observamos um menor índice térmico associado à redução da expressão de c-Fos no núcleo paraventricular (PVN) e na área pré-optica mediana (MPOA). Estes resultados demonstram que o estado tireoidiano modifica as respostas comportamentais ao desafio imunológico, sugerindo que os hormônios tireoidianos são essenciais para a manifestação do comportamento doentio durante a endotoxemia. / Thyroid hormones are essential to control of multiple functions involved in maintaining homeostasis, including heat production and energy balance processes. Relations between the hypothalamic-pituitary-thyroid axis and immune function are complex and still require further investigation. Sickness behavior is an expression of a motivational state triggered by the activation of the peripheral innate immune system, by which an organism organizes its functions to combat the infection. The aim of this study was to evaluate the influence of thyroid status on behavior responses during endotoxemy. Experimental hypothyroidism was induced by propylthiouracil (PTU) for 30 days (0.05%, added to drinking water). Different doses (100, 200 and 500 ug/Kg) of lipopolysaccharide were tested to evidence sickness behavior. Then, control and treated with PTU mice received a 200ug/Kg LPS dose or saline (ip), and behavioral responses were evaluated for 24 hours. In mice with hypothyroidism PTU-induced were observed an increase in immobility time in the forced swimming (FST), a largest number of hidden balls (MB) and an impairment of memory answers in the long term object recognition tasks (LTM) and water maze Moris (WMM). During the immune challenge, locomotion in the open field (OF) and the floating time in the FST are not modified two hours after LPS administration. However, in the analysis after 24 hours, there was a reduction in locomotor activity, increased floating time, decreased food intake and higher weight loss, learning and memory impairment and also shorter social investigation time in PTU mice. In addition, we observed a lower thermal index and reduction of c-Fos expression in the paraventricular nucleus (PVN) and medial preoptic area (mPOA). These results demonstrate that the thyroid status modifies the behavioral responses to immune challenge, suggesting that the thyroid hormones are essential for the manifestation of sickness behavior during endotoxemy. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

O comportamento materno consiste em um conjunto de mudanças comportamentais e fisiológicas, exercidas pelos indivíduos adultos em torno dos indivíduos reprodutivamente imaturos, garantindo sua sobrevivência e a propagação de sua espécie. A interação mãe e filhote é tida tipicamente como simbiótica. Os filhotes quando separados da mãe sinalizam para serem recolhidos através de dicas olfativas, visuais e da vocalização que representa uma forma de comunicação filhote e mãe. O modelo de febre clássico e amplamente empregado envolve a utilização do lipopolissacarídeo (LPS), principal componente da parede celular de bactérias Gram-Negativas. Além da febre, as infecções apresentam uma cadeia de respostas não especificas do hospedeiro que se sabe estarem envolvidos em muitas das funções vitais, incluindo a resposta imune estas incluem a hipozinquemia. Sendo assim, fêmeas virgens, gestantes e lactantes receberam LPS (100 µg/kg, i.p.) e foram tratadas com zinco (2 mg/kg, s.c.) O peso corporal, consumo de água, ração, e a temperatura corporal foram medidas por noventa e seis horas, duas horas após a administração do LPS. No quinto dia de lactação foram observados o comportamento maternal, a atividade geral em campo aberto e a vocalização ultrassônica nos filhotes. No dia do desmame os filhotes dessas fêmeas receberam um desafio com LPS (50 µg/kg, i.p.) e duas horas após a administração, foram observados a atividade geral em campo aberto, e o burst e fagocitose de neutrófilos. Observamos que: 1) Em ratas virgens, gestantes e lactantes, a exposição ao LPS e o tratamento com zinco modificou de forma específica a temperatura e peso corporal, consumo de água e ração e a atividade geral observadas em campo aberto; 2) No período de lactação, houve redução da latência para busca do primeiro filhote. Na prole das fêmeas lactantes verificou-se que: 3) Houve alteração no padrão de vocalização dos filhotes; 4) houve alteração na atividade geral observada em campo aberto e no burst e fagocitose de neutrófilos no vigésimo primeiro dia pós natal, após um desafio com a endotoxina, Assim, os resultados indicam que a administração de LPS e o tratamento com zinco têm seus efeitos modulados conforme o estágio fisiológico em que a fêmea se encontra, e interfere com a interação mãe/filhote, resultando em efeitos de curto e longo prazo sobre o comportamento dos filhotes. A partir deste trabalho, a possibilidade da exposição de mães à endotoxina bacteriana e da modulação de seus efeitos pelo zinco programar as respostas inflamatórias dos filhos torna-se factível / The maternal behavior consists of a set of behavioral and physiological changes, performed by adults around the reproductively immature individuals, ensuring their survival and propagation of their species. The mother and pups’ interaction is typically seen as symbiotic. Puppies give signal to be collected when separated from their mother, through olfactory, visual and vocalization tips that represents a form of communication between mother and pup. The classic disease model is widely used involves the use of lipopolysaccharide (LPS), the major component of the cell wall of Gram-negative bacteria. In addition to fever, infections present a chain of non-specific host responses known to be involved in many vital functions, including the immune response these include hypokinemia. Therefore, virgin, pregnant and lactating female rats received LPS (100 µg/kg, ip) and were treated with zinc (2 mg/kg, sc). Temperature and Body weight, water and food consumptions were measured for ninety-six hours, two hours after LPS administration. On the fifth day of lactation were observed maternal behavior, the overall activity in the open field and ultrasonic vocalization in puppies. On the day of weaning pups of these females received a challenge with LPS (50 µg/kg, ip) two hours after administration were observed general activity in the open field and the burst and phagocytosis of leukocytes. We observed that: In virgin, pregnant and lactating, the exposure to LPS and the treatment with zinc, modified of the form differentially between these females, the temperature and body weight, water and food consumption, and the general activity observed in the open field; In the lactation period the latency to search the first pup was reduced. In the offspring, it was found that: There was a change in the pattern of vocalization of the puppies; changes in general activity observed in the open field and in burst and phagocytosis of leukocytes in the twenty-first day of lactation after challenge with endotoxin. Thus, the results indicate that administration of LPS and treatment with zinc have effects modulated according to the physiological stage when the female is, and interferes with the interaction between mother and puppies, resulting in short and long term effects on behavior their offspring. From this work, the possibility of the exposure of mothers to bacterial endotoxin modulates the effects caused by zinc, programing the inflammatory responses in their offspring, becomes feasible

A febre maculosa, doença de caráter endêmico, já foi diagnosticada em vários estados brasileiros. Em São Paulo a doença é considerada endêmica em algumas regiões e não endêmica ou desconhecida na maior parte do estado. Com o objetivo de estudar a epidemiologia da febre maculosa em regiões consideradas endêmica e não endêmica do estado de São Paulo, foram colhidos carrapatos das pastagens e amostras de sangue de seres humanos, cães e equídeos que viviam em propriedades rurais dos municípios de Pedreiras, (região endêmica); Pirassununga, Sorocaba e Cotia (não endêmica). A colheita de carrapato e de sangue foi efetuada no período de novembro de 2000 a março de 2001, época de predomínio do estágio adulto de ixodideos do gênero Amblyomma na região. Foram colhidos 686 amostras de carrapatos, 50 amostras de sangue de seres humanos, 28 eqüinos, quatro asininos e 16 caninos de região endêmica e 658 amostras de carrapatos, 16 amostras de sangue de seres humanos, 48 eqüinos e cinco caninos de região não endêmica. Os carrapatos foram examinados pelo teste de hemolinfa e pela nested reação em Cadeia da Polimerase (n-PCR). A amplificação de uma região do gene que codifica uma proteína interna de membrana de 17 kDa pela n-PCR, foi utilizada para a detecção do gênero Rickettsia spp nos carrapatos. De um total de 686 amostras de carrapatos de região endêmica, foram encontrados 34 amostras positivas (4,9%) e de 658 amostras de carrapatos de região não endêmica, foram encontrados seis amostras positivas (0,9%). O seqüenciamento de um fragmento de 232 pares de bases do gene 17 kDa efetuados em duas amostras de região endêmica e seis de região não endêmica demonstraram homologia em 100% com a Rickettsia felis. Foi realizada a reação de imunofluorescência indireta (IFI) nos soros sangüíneos utilizando-se antígenos brutos de superfície de Rickettsia rickettsii. Foram considerados positivos soros com títulos superiores a 64. Nenhuma amostra de soro de seres humanos de região endêmica e não endêmica apresentou sorologia positiva. 17 (65,3%) amostras de soros de eqüinos, de região endêmica, apresentaram sorologia positiva, com titulação máxima de 4096. Apenas uma (2,0%) amostra de soro eqüino de região não endêmica apresentou sorologia positiva, com titulação de 128. Cinco (31,2%) amostras de soros de cães de região endêmica apresentaram sorologia positiva, com titulação máxima de 512. Não foi detectada sorologia positiva para cães de região não endêmica. Os títulos elevados da sorologia de cães e eqüinos de região endêmica sugerem indiretamente a circulação de Rickettsia rickettsii nesta localidade. A vigilância epidemiológica em regiões não endêmicas é de grande importância visto que são consideradas vulneráveis a futuros casos de febre maculosa. / Spotted fever, a disease of endemic characteristics, has already been diagnosed in several Brazilian states. The disease is considered to be endemic in some regions of the state of São Paulo and non-endemic or unknown in most of the state. In order to study the epidemiology of spotted fever in endemic and non-endemic regions of the state of São Paulo, ticks were collected from pastures, and blood samples were collected from humans, dogs and horses living in rural properties in the cities of Pedreiras (endemic region); Pirassununga, Sorocaba and Cotia (non-endemic regions). Collection of the ticks was performed from November 2000 to March 2001, a period when adults ticks of the Amblyomma genus predominate in the region. Collection was performed as follows: 686 tick samples, 50 blood samples from humans, 26 blood samples from horses, four blood samples from donkeys and 16 blood samples from dogs in the endemic region. In the non-endemic region, 658 tick samples, 16 blood samples from humans, 48 blood samples from horses and one blood sample from a dog were collected. Ticks were studied using the hemolymph test, and by means of the nested polymerase chain reaction (n-PCR). The amplification, by n-PCR, of a region of the gene that codifies a 17 kDa internal protein in the membrane of the microorganism was used for the detection of the Rickettsia spp genus, in the ticks. From 686 tick samples from the endemic region, 34 were positive (4.9%). From the 658 tick samples collected in the non-endemic region, six were positive (0.9%). Sequencin of a 232 base-pair fragment of the 17 kDa gene, performed in two samples of the endemic region and in six samples of the non-endemic region, showed 100% homology with Rickettsia felis. Indirect immunofluorescence (IFI) was performed in serum samples using crude antigens from Rickettsia rickettsii surface. Serum samples were considered to be positive when presenting titers higher than 64. No human serum sample from the endemic or non-endemic region was positive. Seventeen (65.3%) serum samples from horses in the endemic region were positive, with maximum titer equal to 4096. Only one horse (2,0%) in the non-endemic region presented positive serology, with titer equal to 128. Five (31.2%) dog serum samples from the endemic region were positive, with maximum titer equal to 512. No dog serum sample was positive in the non-endemic region. Epidemiological surveillance in endemic regions is very important, for new spotted fever cases may be expected.

O comportamento materno consiste em um conjunto de mudanças comportamentais e fisiológicas, exercidas pelos indivíduos adultos em torno dos indivíduos reprodutivamente imaturos, garantindo sua sobrevivência e a propagação de sua espécie. A interação mãe e filhote é tida tipicamente como simbiótica. Os filhotes quando separados da mãe sinalizam para serem recolhidos através de dicas olfativas, visuais e da vocalização que representa uma forma de comunicação filhote e mãe. O modelo de febre clássico e amplamente empregado envolve a utilização do lipopolissacarídeo (LPS), principal componente da parede celular de bactérias Gram-Negativas. Além da febre, as infecções apresentam uma cadeia de respostas não especificas do hospedeiro que se sabe estarem envolvidos em muitas das funções vitais, incluindo a resposta imune estas incluem a hipozinquemia. Sendo assim, fêmeas virgens, gestantes e lactantes receberam LPS (100 µg/kg, i.p.) e foram tratadas com zinco (2 mg/kg, s.c.) O peso corporal, consumo de água, ração, e a temperatura corporal foram medidas por noventa e seis horas, duas horas após a administração do LPS. No quinto dia de lactação foram observados o comportamento maternal, a atividade geral em campo aberto e a vocalização ultrassônica nos filhotes. No dia do desmame os filhotes dessas fêmeas receberam um desafio com LPS (50 µg/kg, i.p.) e duas horas após a administração, foram observados a atividade geral em campo aberto, e o burst e fagocitose de neutrófilos. Observamos que: 1) Em ratas virgens, gestantes e lactantes, a exposição ao LPS e o tratamento com zinco modificou de forma específica a temperatura e peso corporal, consumo de água e ração e a atividade geral observadas em campo aberto; 2) No período de lactação, houve redução da latência para busca do primeiro filhote. Na prole das fêmeas lactantes verificou-se que: 3) Houve alteração no padrão de vocalização dos filhotes; 4) houve alteração na atividade geral observada em campo aberto e no burst e fagocitose de neutrófilos no vigésimo primeiro dia pós natal, após um desafio com a endotoxina, Assim, os resultados indicam que a administração de LPS e o tratamento com zinco têm seus efeitos modulados conforme o estágio fisiológico em que a fêmea se encontra, e interfere com a interação mãe/filhote, resultando em efeitos de curto e longo prazo sobre o comportamento dos filhotes. A partir deste trabalho, a possibilidade da exposição de mães à endotoxina bacteriana e da modulação de seus efeitos pelo zinco programar as respostas inflamatórias dos filhos torna-se factível / The maternal behavior consists of a set of behavioral and physiological changes, performed by adults around the reproductively immature individuals, ensuring their survival and propagation of their species. The mother and pups’ interaction is typically seen as symbiotic. Puppies give signal to be collected when separated from their mother, through olfactory, visual and vocalization tips that represents a form of communication between mother and pup. The classic disease model is widely used involves the use of lipopolysaccharide (LPS), the major component of the cell wall of Gram-negative bacteria. In addition to fever, infections present a chain of non-specific host responses known to be involved in many vital functions, including the immune response these include hypokinemia. Therefore, virgin, pregnant and lactating female rats received LPS (100 µg/kg, ip) and were treated with zinc (2 mg/kg, sc). Temperature and Body weight, water and food consumptions were measured for ninety-six hours, two hours after LPS administration. On the fifth day of lactation were observed maternal behavior, the overall activity in the open field and ultrasonic vocalization in puppies. On the day of weaning pups of these females received a challenge with LPS (50 µg/kg, ip) two hours after administration were observed general activity in the open field and the burst and phagocytosis of leukocytes. We observed that: In virgin, pregnant and lactating, the exposure to LPS and the treatment with zinc, modified of the form differentially between these females, the temperature and body weight, water and food consumption, and the general activity observed in the open field; In the lactation period the latency to search the first pup was reduced. In the offspring, it was found that: There was a change in the pattern of vocalization of the puppies; changes in general activity observed in the open field and in burst and phagocytosis of leukocytes in the twenty-first day of lactation after challenge with endotoxin. Thus, the results indicate that administration of LPS and treatment with zinc have effects modulated according to the physiological stage when the female is, and interferes with the interaction between mother and puppies, resulting in short and long term effects on behavior their offspring. From this work, the possibility of the exposure of mothers to bacterial endotoxin modulates the effects caused by zinc, programing the inflammatory responses in their offspring, becomes feasible

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Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 27/02/2015 / Inclui referências : f.98-108 / Resumo: A febre aftosa é uma doença altamente contagiosa que acomete animais biungulados. Tem distribuição cosmopolita, mas é endêmica na Ásia, África e em alguns países da América do Sul, sendo que o Brasil é considerado zona livre com vacinação. No Brasil o controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária sendo necessário diagnóstico diferencial entre animais vacinados de portadores do vírus, para provar a ausência da doença. Desta forma é fundamental o desenvolvimento de testes para diferenciar animais vacinados de doentes e para o controle do processo de produção da vacina. A resposta a anticorpos, contra proteínas não estruturais do vírus, tem sido amplamente utilizada para este propósito, como é o caso do ensaio imuno-enzimático-ELISA/EITB. A proteína 3ABC é uma proteína não estrutural do vírus da febre aftosa e está presente em altos níveis no soro de animais infectados. Visando a diferenciação entre animais doentes e vacinados a proteína ABC deve ser removida durante o processo de produção da vacina, para que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra ela. O objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar anticorpos policlonal e monoclonal contra a proteína 3ABC do vírus da febre aftosa, para serem utilizados no desenvolvimento de um teste imunoenzimático que permita monitorar os processos de purificação da vacina, para remover as proteínas não estruturais e controle de qualidade das partidas produzidas visando sua aprovação pelos órgãos fiscalizadores como o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para a produção dos anticorpos policlonal e monoclonal primeiramente foi produzida a proteína 3ABC recombinante a partir do plasmídeo contendo gene que codifica a proteína 3ABC, já com a mutegênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação, produzido por Gonzales, 2013. A produção da proteína foi realizada por fermentação da Escherichia coli recombinante em erlenmeyer de um litro e realizada as etapas de semi purificação (anticorpo policlonal) e ou purificação (anticorpo monoclonal). O anticorpo policlonal, produzido em coelhos, apresentou altos títulos a partir de 75 dias pós-imunização. A puriticação foi realizada por cromatografia de afinidade com proteína G, o que resultou em uma imunoglobulina altamente pura, tornando-a mais específica para a proteína de interesse. Para a produção do anticorpo monoclonal foram imunizados camundongos BALB/c por via intramuscular. A fusão realizada originou 217 colônias de hibridomas, sendo 10 deles positivos no tese ELISA indireto. Após clonagem e expansão dos clones positivos, foi realizado o teste de estabilidade permitindo a seleção de dois clones estáveis. Os anticorpos foram caracterizados pelas metodologias de ELISA e Western Blotting e mostraram alta reatividade contra a proteína 3ABC e podem ser utilizados no desenvolvimento do teste ELISA para o monitoramento dos processos de purificação da vacina contra a febre aftosa. Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal. Palavras chave: febre aftosa; proteína 3ABC; anticorpo policlonal anti-3ABC; anticorpo monoclonal anti-3ABC. / Abstract: FMD is a highly contagious disease that affects cloven-hoofed animals and is endemic in Asia, Africa and some countries in South America. In Brazil the epidemiological disease control is achieved by vaccination and health surveillance. For this control is necessary differential diagnosis between vaccinated animals and those carrying the virus, to prove the absence of the disease. Thus it is important to develop tests to differentiate vaccinated animals from sick animals. The antibody response against nonstructural proteins of the virus, have been widely used for this purpose, such as the enzyme-immunoassay ELISA / EITB. The 3ABC is a nonstructural protein of FMD virus and it is present in high levels in infected animals serum. It is necessary to be removed during vaccine production, so the immunized animal does not produce detectable antibodies against them. The aim of this study was to produce and characterize polyclonal and monoclonal antibodies against the 3ABC protein of FMD virus, for their use to develop an enzymatic immunoassay experiments. Such experiments will allows the monitoring of the vaccine purification processes, which removes non-structural proteins and also the quality control process of the produced batches for approval by regulatory agencies such as the Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA). In this study, the plasmid to heterologous protein 3ABC production was produced by GONZALEZ, 2013. The expression has been optimized for subsequent production of polyclonal and monoclonal antibodies. For animal's immunization, either rabbit or mouse, the protein used was the semi purified protein. And for the monoclonal antibody screening tests, the protein used was the purified protein. The purification in this stage was due to the need of a specific test to select the monoclonal antibody which is also highly specific. The polyclonal antibody produced in rabbits, showed high titers from 75 days post-immunization. The large amount of polyclonal antibody obtained enabled the using of affinity chromatography using protein G, as a purification method, which resulted in a highly pure immunoglobulin, making it more specific to the protein of interest. For the production of monoclonal antibody (Mabs) BALB/c Mice were immunized intramuscularly. The fusion carried out originated 217 hybridomas colonies, 10 of them were positives for antibody production by ELISA test. After cloning and expansion of positive clones, stability tests were performed wich allowed the selection of two stable clones. The antibodies were characterized by ELISA and Western Blotting approaches. The mabs obteined showed high reactivity against 3ABC protein and as a result they can be used in the development of an ELISA assay to monitor the purification processes of the vaccine against FMD. All experiments were performed in Ourofino Animal Health Company. Key-words: FMD; 3ABC protein; polyclonal anti-3ABC; monoclonal anti-3ABC.