Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os autores têm como objetivo, investigar a matriz extra celular, musculatura lisa e densidade vascular do prepúcio de pacientes tabagistas. Espécimes de prepúcio foram obtidas de 20 jovens adultos (média de idade= 27.2) submetidos a postectomia. Dentre os pacientes analisados, um grupo (n=10) possui história prévia de tabagismo (3 to 13 maços/ano, média = 5.8 3.2), e outro grupo (n=10) formam o grupo controle, não fumantes. A coloração de Tricrômico Masson foi utilizada para quantificar tecido conectivo, musculatura lisa e vasos. A coloração Resorcina-fucsina de Weigert foi utilizada para estabelecer as fibras do sistema elástico e a coloração, Vermelho de Picrosirius para o estudo do colágeno. O estudo estereológico foi realizado utilizando o software Image J, para determinar as densidades volumétricas. Para a análise bioquímica o colágeno total foi determinado em &#956;g de hidroxiprolina por MG de tecido seco. O estudo estatístico foi realizado lançando mão do t-teste (p<0,05). Fibras do sistema elástico de fumantes apresentaram-se aumentadas em 42.5% quando comparado ao grupo controle (p=0,002). Em contraste, musculatura lisa (p=0,42) e densidade vascular (p=0,16) não mostraram nenhuma diferença estatística. Foi realizado uma análise quantitativa utilizando Vermelho de Picrosirius sob luz polarizada, que evidenciou a presença de colágeno tipo I e III, sem diferença estatisticamente significativa. A concentração total do colágeno não mostrou diferença entre tabagistas e o grupo controle. (73.1&#956;g/mg 8.0 vs. 69.2&#956;g/mg 5.9, respectivamente, p=0,23). Tabagismo está associado a um significante aumento de fibras do sistema elástico do tecido prepucial. Estes resultados podem, possivelmente, explicar os altos índices de falha na uretroplastia peniana, com uso de flap de prepúcio em fumantes / It has been speculated by McAninch et al. (1), that smokers might experience worse results after urethral reconstruction. We decided to investigate the extracellular matrix, smooth muscle and vascular density in the foreskin of smoker patients. Foreskin samples were obtained from 20 young adults (ranging in age from 23 to 36 years; mean SD = 27.2 5.8) submitted to circumcision from July 2008 to October 2009. Of the patients analyzed, one group (n=10) had a previous history of chronic smoking (3 to 13 packs/year, mean = 5.8 3.2) i.e., one pack per day for 3 to 13 years. The control group was composed of 10 non-smoker patients. Foreskin samples were studied by histology and biochemistry. Means were compared using the two-tailed t-test (p<0.05). The elastic system fibers in the foreskin of smoker patients increased in 42.5% when compared to the control group. In contrast, the smooth muscle fibers, vascular density and total collagen concentration did not show any significant variation between smokers and controls. Smoking is associated with a significant increase of elastic system fibers in foreskin tissue. These results could possibly explain the high failure rate of penile urethroplasty in smokers by using foreskin flaps

ALVES, Calebe de Andrade. Dinâmica de degradação e reparação de fibras elásticas sob tensão. 2013. 71 f. Dissertação (Mestrado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-23T18:48:28Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_caalves.pdf: 1922274 bytes, checksum: beae2409f015f4b21f8f423815937fa0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-23T19:38:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_caalves.pdf: 1922274 bytes, checksum: beae2409f015f4b21f8f423815937fa0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T19:38:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_caalves.pdf: 1922274 bytes, checksum: beae2409f015f4b21f8f423815937fa0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Extracelular matrix, the biological structure that supports cells in animal tissue, is composed of elastic fibers such as collagen and elastin. It is known that enzymes activity plays an important role in maintenance of these elastic fibers. The imbalance between destruction and repair of the elastic fibers can lead to diseases such as fibrosis and emphysema. In this study, we present a simple model to simulate enzymatic digestion and repair of elastic fibers under tension. The fiber is represented by a chain of linearly elastic springs in series surrounded by two layers of sites along which particles representing enzymes and fragments can diffuse. These particles can biding-unbinding in the fiber simulating the reaction process by changing the local stiffness by a multiplicative factor. We study the distribution of the number of visits of particles to the springs as function of time and the consequent change of the fiber stiffness, under different initial conditions (model parameters). We show that, due to no linearity of the model, the degradation effect prevails even when the concentrations of the two type of agents are the same. There is no relation between the number of degradative and rigidifying particles that garantee that the fiber stiffness remains constant. When an anisotropy factor is included on the model and the system behaviour becomes dependent on the tension applied to the fiber, we show that the increase of tension in general contributes to the increase on enzymatic activity. We believe this study can help better understand progression of diseases such as emphysema and fibrosis. / A Matriz Extracelular, a estrutura biológica que sustenta as células em tecidos animais, é composta de fibras elásticas como colágeno e elastina. Sabe-se que a atividade enzimática desempenha papel fundamental na manutenção dessas fibras elásticas. O desequilíbrio entre destruição e reparo das fibras elásticas pode levar a doenças como fibrose e enfizema. Neste estudo, nós apresentamos um modelo simples para simular digestão enzimática e reparo de fibras sob tensão. A fibra é representada por uma cadeia de molas linearmente elásticas em série. A fibra é cercada por duas camadas de sítios ao longo dos quais partículas representantes de enzimas e fragmentos podem se difundir. Estas partículas podem se ligar e se desligar da fibra, simulando o processo de reação ao alterar a constante elástica local por um fator multiplicativo. Estuda-se a distribuição do número de visitas de partículas degradadoras e enrijecedoras às molas em função do tempo de difusão e a consequente variação da rigidez da fibra, sob diversas condições iniciais (parâmetros do modelo). Mostra-se que, devido a características matemáticas intrínsecas ao modelo, o efeito de degradação prevalece sobre o de enrijecimento ainda quando a concentração de agentes de ambos os tipos é a mesma. Não há relação entre o número de partículas degradadoras e enrijecedoras que garanta a estabilidade da constante elástica da fibra. Quanto um fator de anisotropia é incluído no modelo e o comportamento do sistema passa a depender da tensão aplicada à fibra, mostra-se que o aumento da tensão em geral contribui para o aumento da atividade enzimática. Este estudo poderá ajudar a entender a progressão da degradação de tecidos em doenças como enfisema e fibrose.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os autores têm como objetivo, investigar a matriz extra celular, musculatura lisa e densidade vascular do prepúcio de pacientes tabagistas. Espécimes de prepúcio foram obtidas de 20 jovens adultos (média de idade= 27.2) submetidos a postectomia. Dentre os pacientes analisados, um grupo (n=10) possui história prévia de tabagismo (3 to 13 maços/ano, média = 5.8 3.2), e outro grupo (n=10) formam o grupo controle, não fumantes. A coloração de Tricrômico Masson foi utilizada para quantificar tecido conectivo, musculatura lisa e vasos. A coloração Resorcina-fucsina de Weigert foi utilizada para estabelecer as fibras do sistema elástico e a coloração, Vermelho de Picrosirius para o estudo do colágeno. O estudo estereológico foi realizado utilizando o software Image J, para determinar as densidades volumétricas. Para a análise bioquímica o colágeno total foi determinado em &#956;g de hidroxiprolina por MG de tecido seco. O estudo estatístico foi realizado lançando mão do t-teste (p<0,05). Fibras do sistema elástico de fumantes apresentaram-se aumentadas em 42.5% quando comparado ao grupo controle (p=0,002). Em contraste, musculatura lisa (p=0,42) e densidade vascular (p=0,16) não mostraram nenhuma diferença estatística. Foi realizado uma análise quantitativa utilizando Vermelho de Picrosirius sob luz polarizada, que evidenciou a presença de colágeno tipo I e III, sem diferença estatisticamente significativa. A concentração total do colágeno não mostrou diferença entre tabagistas e o grupo controle. (73.1&#956;g/mg 8.0 vs. 69.2&#956;g/mg 5.9, respectivamente, p=0,23). Tabagismo está associado a um significante aumento de fibras do sistema elástico do tecido prepucial. Estes resultados podem, possivelmente, explicar os altos índices de falha na uretroplastia peniana, com uso de flap de prepúcio em fumantes / It has been speculated by McAninch et al. (1), that smokers might experience worse results after urethral reconstruction. We decided to investigate the extracellular matrix, smooth muscle and vascular density in the foreskin of smoker patients. Foreskin samples were obtained from 20 young adults (ranging in age from 23 to 36 years; mean SD = 27.2 5.8) submitted to circumcision from July 2008 to October 2009. Of the patients analyzed, one group (n=10) had a previous history of chronic smoking (3 to 13 packs/year, mean = 5.8 3.2) i.e., one pack per day for 3 to 13 years. The control group was composed of 10 non-smoker patients. Foreskin samples were studied by histology and biochemistry. Means were compared using the two-tailed t-test (p<0.05). The elastic system fibers in the foreskin of smoker patients increased in 42.5% when compared to the control group. In contrast, the smooth muscle fibers, vascular density and total collagen concentration did not show any significant variation between smokers and controls. Smoking is associated with a significant increase of elastic system fibers in foreskin tissue. These results could possibly explain the high failure rate of penile urethroplasty in smokers by using foreskin flaps

Orientador: Konradin Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T05:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_Gislaine.pdf: 2072366 bytes, checksum: 051f40f17aea5fcefc3058bc55874b2d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Fibras elásticas são componentes essenciais da aorta e remodelamento é acompanhado em muitas doenças e eventos que ameaçam a vida, como dissecção e rupturas. Fibras elásticas podem ser facilmente visualizadas quando coradas com H&E e examinadas por microscopia de fluorescência. Nosso objetivo foi criar um sistema de análise automática da textura das fibras elásticas comparando aorta de pacientes normotensos e hipertensos. O sistema de análise foi composto por Microscópio invertido Olympus IX-81 equipado com scanner FV 300 que utiliza laser FV-5 COMB2, utilizando laser de argônio a 488 nm, objetiva 40x usando óleo de imersão. A espessura da aorta varia de 2 a 3 mm, e a imagem completa foi composta por justaposição de imagens de 220x220 µm utilizando software Fluoview. Para análise foi utilizado o programa gliding box , que é uma caixa deslizadora de 128x128 pixels, que percorre a imagem da aorta pixel a pixel em toda sua extensão. Para análise computadorizada da textura foram utilizados programas computacionais (entropia, homogeneidade local e segundo momento angular derivado da matriz de co-ocorrência de Haralick). Foram calculados e plotados em diagramas resultados equivalentes à topografia histológica da imagem. Em cada caminho o gliding box percorreu entre 2000 e 3000 pixels da textura, revelando a topografia local e sua variação. Foi comparada a textura de fibras elásticas de cortes histológicos corados com HE de 24 pacientes normotensos e 30 hipertensos, adultos de ambos os sexos oriundos de autópsias realizadas no Depto de Anatomia Patológica. Para comparação entre textura e idade utilizou-se Correlação de Pearson, e a textura foi comparada entre os grupos com o auxílio do teste t. Resultados: Tanto nos pacientes normotensos como nos hipertensos não houve correlação entre: número de fibras elásticas ou distâncias entre elas, para as análises de Haralick e idade dos pacientes. No entanto, a entropia em pacientes normotensos (r=0,60; p=0,004) e a homogeneidade local (r=0,43; p =0,049) demonstraram acréscimo da variação topográfica com o envelhecimento, fato que não ocorreu nos hipertensos. Quando comparadas com aortas normotensas, as hipertensas revelaram menos fibras elásticas (p<0,0001), maior variabilidade e distâncias (p<0,0001), aumento da média da espessura e maior variabilidade da espessuras das fibras ( p<0,0001). Conclusão: Demonstramos que o presente método é uma ferramenta que permite uma análise objetiva da textura de fibras elásticas da aorta com a possibilidade de quantificar processos patológicos. Observamos que em pacientes normotensos, o número médio de fibras elásticas e a distância entre elas são constantes e ocorrem discretas alterações da arquitetura com o aumento da idade. Em hipertensos, o distúrbio arquitetural é mais evidente e ocorrem perdas de fibras elásticas. / Abstract: The elastic fiber network is an essential component of the aorta. Its remodeling accompanies many diseases and may provoke life-threatening events, such as dissection or rupture. Elastic fibers can be easily demonstrated in eosin-stained histologic sections examined by fluorescence microscopy. The aim of our study was to create an automatic texture analysis system of the elastic fibers and to apply it in human aortas comparing normotensive and hypertensive patients. The analysis sytem was composed of an Olympus IX-81 inverted microscope, a FV300 scan head and a FV-5 COMB2 laser combiner. The fluorescence of the hematoxylin and eosin-stained slides was excited with the 488 nm line of an Argon laser using a 40x oil immersion objective. The Fluoview software was used to reconstruct the images. The full image of the whole sample (2 or 3mm long) was composed by several 220x220. Then a gliding box of 128x128 pixels was running in 1-pixel steps along a predefined axis parallel to the bottom line of the image. For every new box, computerized analysis of texture features (entropy, local homogeneity and the second angular moment derived from the gray-level co-occurrence matrix) were calculated and plotted in diagrams, where the position on the x-axis was equivalent to the topography in the histologic picture. In that way for each "run" of the gliding box about 2000 to 3000 values of a texture feature were obtained, thus revealing precisely its topographic postion and its variabilty. We compared the elastic fiber texture in routinely HE-stained histologic slides of the aorta ascendens in 24 normotensive and 30 hypertensive adult patients of both sexes and of similar age from our autopsy files. Pearson correlations were calculated between the texture features and the age. Texture features were compared between both groups with the help of the t-test. Results: In normotensive and hypertensive patients no correlations were found between the number of elastic fibers, their thickness or their distance and the Haralick features and the age of the patients. But in normotensive patients entropy (r=0,60; p=0,004) and local homogeneity (r=0,43; p =0,049) showed increasing topographic variations in patients with advanced age, which was not the case for hypertensive patients. When comparing with normotensive aortas, the hypertensive ones revealed less elastic fiber layers (p<0,0001), a greater variabilty of the fiber distance (p<0,0001), increased mean fiber thickness and a greater varaibilty of the fiber thickness( p<0,0001) Conclusion: We showed that the presented method provides a new tool for an objective automatic texture analysis of the elastic fiber texture of the aorta with the possibility of quantification of the disease process. Although in normotensive patients, the mean number and distance of the elastic fibers is constant, discrete local alterations of the architecture appear with increasing age. In hypertensive patients there are more pronounced architectural alterations with loss of the fiber layers. / Universidade Estadual de Campi / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T23:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Herreros_FernandaOliveiraCamargo_D.pdf: 4370286 bytes, checksum: 0e6f9cf2e309de5fa2e57c9c899541ac (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A intradermoterapia é um processo terapêutico com poucas publicações científicas em revistas indexadas. Em 2005, um estudo duplo-cego randomizado demonstrou os benefícios proporcionados para a pele, cabelos e unhas de mulheres com fotoenvelhecimento pelo consumo de um suplemento oral de silanol. Frente a esses dados, realizou-se um estudo com o objetivo de comparar as alterações histológicas entre a pele humana que recebeu injeção intradérmica de silanol e as encontradas na pele em que foi injetado soro fisiológico. Dez mulheres caucasianas, sadias, com grau moderado de fotoenvelhecimento, voluntariamente receberam dez sessões semanais de injeções com salicilato de silanol 0,1% no antebraço esquerdo, e injeções de soro fisiológico no antebraço direito. No momento da biópsia, duas semanas depois, três pacientes recusaram-se a realizar o procedimento. Os achados histológicos nas áreas injetadas com silanol e com soro fisiológico, encontrados em biópsias, foram avaliados e comparados por um pesquisador de forma cega e as fibras colágenas e elásticas de cada lado foram quantificadas. A análise da textura da derme foi feita a partir das imagens microscópicas digitalizadas, por meio da dimensão fractal de Sarkar e do cálculo das amplitudes (valores de inércia), após a transformada rápida de Fourier. A área injetada com silanol revelou um aumento estatisticamente significativo da densidade de fibras colágenas e elásticas. A análise de textura revelou uma distribuição mais compacta e mais homogênea das fibras de colágeno. O resultado desse estudo sugere que a aplicação de um silício orgânico pode estimular a síntese das fibras elásticas e colágenas, levando a um remodelamento da estrutura da derme, o que pode explicar a melhora da aparência da pele, observada em estudos clínicos. Com base nestes resultados, relatou-se o caso de uma paciente com cicatrizes atróficas resultantes de micobacteriose atípica tratada com doxiciclina por seis meses. A paciente havia se submetido à hidrolipoclasia por ultra-som e a infecção desenvolveu-se nos locais do procedimento. Esta complicação ainda não havia sido descrita na literatura médica associada a tal procedimento. As cicatrizes foram submetidas a cinco sessões de intradermoterapia com salicilato de silanol, apresentando melhora parcial da aparência / Abstract: Mesotherapy is a technique that lacks scientifical clinical trials. In 2005, a controlled double-blind study in patients with photo-aged facial skin demonstrated the beneficial role of oral intake of silanol for skin, hair and nails. Facing it, a study was developed to compare histological alterations in human skin that received intradermal injections of silanol. Ten healthy female caucasian volunteers with a moderate degree of photoaged skin received ten sessions of weekly injections of 0.1% salicylate silanol in the left ventral lateral forearm and physiological solution injections on the right forearm. At biopsy time, three patients denied to receive this procedure. The histological features of punch biopsies of the treated area and the nontreated contralateral arm were compared and the collagen and elastic fibers were quantified by a blind physician. Texture analysis was performed on digitalized microscopic images by analyzing the Sarkar fractal dimension and amplitudes (inertia values) after Fast Fourier transformation. The treated area revealed a statistically significant increase of the density of both collagen and elastic fibers. Texture analysis showed more compact and homogenously distributed collagen fibers after silicon injection. This result suggests that the application of silicon may stimulate the production of collagen and elastic fibers leading to remodeling of the dermal fiber architecture, which may explain the improvement of the skin surface observed in clinical studies. Also, a case report illustrates a mycobacteria infection following an ultrasound hydrolipoclasia procedure, complication not previously reported in medical literature. After the antibiotic treatment, the patient developed atrophic scars, that received five sessions of mesotherapy with silanol, with some improvement in scar appearance / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

A elasticidade do tecido conjuntivo desempenha uma função protetora agindo como uma mola tênsil durante o trabalho muscular, No entanto, existem poucos estudos sobre a distribuição das fibras do sistema elástico no coração. Considerando que: a) o estudo da distribuição destas fibras pode ajudar a compreender a mecânica cardíaca, e b) o rato tem sido usado como o melhor modelo animal para as disfunções cardiovasculares, o objetivo deste estudo é apresentar uma descrição sistemática da distribuição diferencial das fibras do sistema elástico do endocárdio, epicárdio e miocárdio ventricular. Cortes histológicos de ventrículo esquerdo obtido de ratos normais adultos foram estudados pela comparação do padrão ultraestrutural de cada um dos tipos fibrilares com coloração pela técnica da resorcina-fucsina com prévia oxidação, para microscopia de luz. As observações ultra-estruturais foram feitas em tecidos fixados com ácido tânico - glutaraldeído, que permite a identificação mais precisa das fibras oxitalânicas, elaunínicas e elásticas. Foi aplicado um sistema semiquantitativo de avaliação. A análise dos cortes histológicos corados pela Resorcina-fucsina com oxidação prévia mostrou um estrato de fibras elásticas em estreita associação ao endotélio no endocárdio e ao mesotélio no epicárdio. Quando observado ao microscópio eletrônico é possível identificar que nestas ambas localizações as fibras do sistema elástico estão arranjadas em dois estratos dispostos ortogonalmente. Ao nível ultraestrutural, notou-se a distribuição diferencial das fibras do sistema elástico nos três compartimentos do tecido conjuntivo associado ao miocárdio propriamente dito: epimísio, perimísio e endomísio. O epimísio apresenta fibroblastos, fibras colágenas grossas, fibras elaunínicas e elásticas entremeadas à substância amorfa. No perimísio, a microscopia eletrônica mostrou uma grande quantidade de microfibrilas associadas a fibras elásticas, elaunínicas e mesmo fibras colagênicas. Freqüentemente, neste compartimento, as microfibrilas estão compactadas formando feixes que correspondem ao padrão ultra-estrutural das fibras oxitalânicas. O endomísio é rico em fibras oxitalânicas associadas à lâmina basal dos cardiomiócitos. Uma rede microfilamentar conecta os elementos do endomísio entre si. Ainda que as implicações funcionais sejam especulativas, a distribuição diferencial das fibras do sistema elástico nos compartimentos da parede ventricular sugere que diferenças na elasticidade conferem versatilidade biomecânica ao tecido como um todo. A análise ultra-estrutural mostra que as fibras oxitalânicas (menos elásticas) se co-localizam com fibras colagênicas finas no endomísio e perimísio, enquanto que a presença de fibrilas colágenas mais grossas coincide com fibras elásticas e elaunínicas (com mais elasticidade) no endo- e epicárdio. Estas observações sugerem que o sistema elástico, em co-evolução com o sistema colagênico, contribui para acomodar a diversidade funcional / The connective tissue elasticity has a protective function acting as a tensile spring during muscular work. Nevertheless, few is known about the distribution of the elastic system fibers in the heart. Considering that a) the study of the distribution of these fibers may help understand the cardiac mechanics, and b) rat models are used to study cardiac dysfunctions, our aim is to study the distribution of elastic system fibers in the ventricular endocardium, epicardium and myocardium of normal rats. Histological tissue sections of left ventricle (obtained from adult rats) were studied by comparing the typical ultrastructural picture of each of the fiber types with Resorcinfuchsin staining technique for light microscopy. The ultrastructural observation was made in tissues fixed with tannic acid-glutaraldehyde, which provided a reliable means to identify the elastic system fibers, as oxytalan, elaunin and elastic fibers. A semiquantitative evaluation was performed. The analysis of the histological sections stained by Resorcin-fuchsin technique after oxidation shows a stratum of elastic system fibers in close association to the endothelium in the endocardium and to the mesothelium in the epicardium. When observed at the transmission electron microscope, it was possible to see that in both locations the elastic system fibers are arranged in two orthogonally disposed layers. At the ultrastructural level, the epimysium presents fibroblasts, thick collagen, elaunin and elastic fibers interspersed in the amorphous substance. In the perimysium, the electron microscope disclosed a great amount of microfibrils, surrounding all fibrilar components: elastic fibers, elaunin fibers and even collagen fibers. Frequently, at this location, the microfibrils are closely packed, forming bundles devoid of elastin that correspond to the ultrasctructural picture of the oxytalan fibers. The endomysium is rich in oxytalan fibers in a close association with the basal lamina of the myocytes. A microfibrilar network interconnects the endomysium elements each other. In spite of the functional implications being speculative, the differential distribution of the elastic system fibers in the compartments of the ventricular wall suggests that the differences in elasticity provide biomechanical versatility to the intire system. Ultrastructural analysis shows that oxytalan fibres and thin collagen fibrils are co-localized in endomysium and perimysium, whereas, the presence of thicker collagen fibrils coincides with elaunin and elastic fibers in endo- and epicardium. These specific co-localizations suggest that elastic system, in co-evolution with collagen, has contributed to accommodating functional diversity

O prolapso uterino tem sua incidência aumentada na pós-menopausa. O objetivo deste estudo é identificar as alterações na matriz extracelular do ligamento cardinal associadas à menopausa e ao prolapso uterino. Ligamento cardinal de três diferentes grupos de mulheres, pré-menopausa, prolapso uterino e pós-menopausa, foram identificados e biopsiados durante 57 histerectomias abdominais ou vaginais. As amostras foram processadas por métodos bioquímicos para caracterização e quantificação de glicosaminoglicanos sulfatados e colágeno. As concentrações relativas de glicosaminoglicanos foram obtidas por eletroforese. Procedimentos histológicos foram feitos para identificar fibras elásticas (Weigert), distribuição de colágeno (Picro Sirius) e decorin (imunohistoquímica). Nossos resultados mostraram aumento na concentração de GAG de 72,2%, redução na concentração de colágeno de 37% e diminuição de 22% de fibras elásticas no grupo de prolapso uterino quando comparado ao grupo da pós-menopausa (p<0,05, p<0,04 e p<0,05 respectivamente). As concentrações relativas de glicosaminoglicanos sulfatados para condroitin sulfato, heparan sulfato e dermatan sulfato não mostraram diferenças entre os três grupos. A organização do colágeno foi similar entre os três grupos e a marcação do decorin pareceu estar diminuída no grupo de prolapso uterino. Nossos resultados indicam alterações no metabolismo do tecido conjuntivo. O ligamento cardinal da mulher na pós-menopausa possui uma matriz extracelular mais densa. Esta alteração não ocorre na mulher com prolapso uterino. / Uterine prolapse has increase of incidence after menopause. The aim of this study was to identify the changes in extracellular matrix of cardinal ligaments associated to menopause and uterine prolapse. Cardinal ligament of 3 different groups (pre-menopause, menopause and uterine prolapse) are identified and biopsied during 57 womens abdominal or vaginal hysterectomy. Biopsy specimens were assessed by biochemical methods to characterize and quantify sulfated glycosaminoglycans and collagen. Relative concentrations of GAG were obtained by electrophoresis. Histological procedures are made to identify elastic fibers (Weigert) collagen distribution (Picro sirius) and decorin (immunohistochemistry). Our results showed increase in GAG concentration 72.2% in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen concentration was 37% lower in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.04). Relative concentration of GAG: heparan sulfate, chondroitin sulfate and dermatan sulfate showed no differences among three groups. Elastic fibers showed a significant reduction of approximately 22% uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen organization was similar in three groups and the staining pattern of decorin seemed to be decreased in uterine prolapse group. Our results indicate changes in connective tissue metabolism. Cardinal ligament in postmenopausal women has a denser extracellular matrix. This change is not observed in women with uterine prolapse.

As pregas vocais (PV) são estruturas únicas, altamente especializadas na vibração para a produção sonora. Em grande parte, decorrente da estruturação em camadas da lâmina própria (LP). Essa estruturação não está presente ao nascimento, somente após anos de uso vibratório e fonatório da PV é que a LP está finalmente estruturada. As pregas ventriculares (PVT) não são, habitualmente, estruturas vibratórias na produção sonora, e possuem a LP menos organizada em estratos, sendo menos especializadas para a vibração. Até o presente momento, não se tem conhecimento do que ocorre com os constituintes da LP de PVTs de pessoas que as utilizam como fonte produtora de voz. No presente estudo, foram comparados os constituintes colágenos e as fibras elásticas da LP de PVTs de indivíduos que as utilizam como principal fonte vibratória na produção de voz com o grupo controle. Foram selecionados seis indivíduos que utilizavam pelo menos uma das PVTs como fonte de vibração para a produção sonora por ao menos seis anos. Delas, colheu-se pequeno fragmento (0,5 cm2), que após processamento histológico, as fibras colágenas foram coradas com Picrosirus Red e as fibras elásticas com Weigert resorcina-fucsina. Foram obtidas 54 imagens da camada mais superficial da LP de cada PVT para cada coloração. Após a aquisição das imagens, as fibras colágenas tipo I e tipo III, colágenas totais e fibras elásticas foram quantificadas utilizando-se o software Image-Pro Plus, e comparadas com as PVTs dos controles. A análise estatística foi realizada por meio do teste T de Student para amostras não pareadas. A porcentagem de colágeno total na camada mais superficial da LP de PVT utilizada como fonte vibratória para a produção de som foi significativamente maior em relação aos controles. O mesmo ocorreu com a quantidade de colágeno tipo I. Não houve diferenças na quantidade de colágeno tipo III e de fibras elásticas. Como conclusão, pode-se afirmar que a utilização da PVT como fonte vibratória produtora de som leva ao aumento da quantidade de fibras colágenas totais e do tipo I na camada mais superficial da sua LP / The vocal folds (VF) are unique structures, highly specialized in vibrating for sound production. This specialization is mainly due to a layered structure of the lamina propria (LP). This layered structure is not present at birth, and develops only after a several years of phonation. The LP of the mature vocal fold consists of three layers. The ventricular folds (VTF) are not originally vibrating structures for sound production, and in its LP the layers are poorly organized. It is not known what happens to the constituents of the LP in the VTF in subjects that use VTF vibration as a source of voice production. In the present study, the distribution and quantity of collagen and elastic fibers of the lamina propria from VTF of patients that use it as the main source of vibration for voice production were compared with the VTF from control subjects. Six individuals that used at least one of the VTF as source of vibration for sound production for minimum of six years were selected. A small fragment of VTF (0.5 cm2) used as vibration source of sound production was collected from each subject. The samples were processed for histological analysis. Collagen fibers were stained with Picrosirus Red and elastic fibers were stained with Weigert\'s Resorcin-Fuchsin. A total of 54 images were obtained from the superficial layer of the LP from each VTF for each stain. After image acquisition, collagen type I, III, total collagen and elastic fibers were quantified and compared with the VTF from the control group. Quantification was done using Image-Pro Plus software. Statistics were performed using an unpaired Student T test. The amount of total collagen in the most superficial layer of LP when the VTF was used as the source of vibration for the production of sound was significantly higher when compared to controls. The same result was seen for the amount of type I collagen in both groups. There was no difference in the quantity of type III collagen and elastic fibers between the two groups. Vibration of the VTF as a source of sound, for at least six years, leads to an increase in the amount of total collagen fibers and an increase in type I collagen, but does not increase the amount of type III collagen and elastic fibers in the most superficial layer of LP. These results may help elucidate the unique development of the lamina propria of the vocal fold

O prolapso uterino tem sua incidência aumentada na pós-menopausa. O objetivo deste estudo é identificar as alterações na matriz extracelular do ligamento cardinal associadas à menopausa e ao prolapso uterino. Ligamento cardinal de três diferentes grupos de mulheres, pré-menopausa, prolapso uterino e pós-menopausa, foram identificados e biopsiados durante 57 histerectomias abdominais ou vaginais. As amostras foram processadas por métodos bioquímicos para caracterização e quantificação de glicosaminoglicanos sulfatados e colágeno. As concentrações relativas de glicosaminoglicanos foram obtidas por eletroforese. Procedimentos histológicos foram feitos para identificar fibras elásticas (Weigert), distribuição de colágeno (Picro Sirius) e decorin (imunohistoquímica). Nossos resultados mostraram aumento na concentração de GAG de 72,2%, redução na concentração de colágeno de 37% e diminuição de 22% de fibras elásticas no grupo de prolapso uterino quando comparado ao grupo da pós-menopausa (p<0,05, p<0,04 e p<0,05 respectivamente). As concentrações relativas de glicosaminoglicanos sulfatados para condroitin sulfato, heparan sulfato e dermatan sulfato não mostraram diferenças entre os três grupos. A organização do colágeno foi similar entre os três grupos e a marcação do decorin pareceu estar diminuída no grupo de prolapso uterino. Nossos resultados indicam alterações no metabolismo do tecido conjuntivo. O ligamento cardinal da mulher na pós-menopausa possui uma matriz extracelular mais densa. Esta alteração não ocorre na mulher com prolapso uterino. / Uterine prolapse has increase of incidence after menopause. The aim of this study was to identify the changes in extracellular matrix of cardinal ligaments associated to menopause and uterine prolapse. Cardinal ligament of 3 different groups (pre-menopause, menopause and uterine prolapse) are identified and biopsied during 57 womens abdominal or vaginal hysterectomy. Biopsy specimens were assessed by biochemical methods to characterize and quantify sulfated glycosaminoglycans and collagen. Relative concentrations of GAG were obtained by electrophoresis. Histological procedures are made to identify elastic fibers (Weigert) collagen distribution (Picro sirius) and decorin (immunohistochemistry). Our results showed increase in GAG concentration 72.2% in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen concentration was 37% lower in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.04). Relative concentration of GAG: heparan sulfate, chondroitin sulfate and dermatan sulfate showed no differences among three groups. Elastic fibers showed a significant reduction of approximately 22% uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen organization was similar in three groups and the staining pattern of decorin seemed to be decreased in uterine prolapse group. Our results indicate changes in connective tissue metabolism. Cardinal ligament in postmenopausal women has a denser extracellular matrix. This change is not observed in women with uterine prolapse.

Orientador: Cláudio Chrysóstomo Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Denise_M.pdf: 1404386 bytes, checksum: e811cae8e94f35d5b473fe2881261fd8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos, o principal objetivo de nosso laboratório é esclarecer a participação da GlicoProteína Associada a Microfibrila-1 (MAGP-1) na formação de trombos no modelo de trombose arterial fotoquímica. Dados indicam que a MAGP-1 não interage diretamente com as plaquetas, importante componente na trombose arterial, mas que, provavelmente, a MAGP-1 esteja interagindo com uma molécula que tenha participação neste processo. Neste sentido, a interação da MAGP-1 com moléculas importantes na formação do trombo foi estudada. A MAGP-1 tem a capacidade de interagir com o fator de von Willebrand, bem como com fibrinogênio e fibronectina. Além disto, foi verificado que a injeção da MAGP-1 recombinante em camundongos deficientes em MAGP-1 é capaz de reestabelecer o tempo normal de formação de trombos nestes animais. Considerando a ausência da MAGP-1 e seu efeito na formação de trombos, foi questionado se a morfologia dos trombos obtidos em camundongos deficientes em MAGP-1 era diferente dos trombos obtidos em camundongos selvagens. Dados iniciais sugeriam que os trombos de camundongos deficientes em MAGP-1 apresentavam ultraestrutura diferente, onde um número maior de plaquetas apresentavam aparentemente, os seus grânulos e corpos densos intactos, sugerindo uma ativação ineficiente na ausência de MAGP-1. No presente trabalho, além de análise ultraestrutural mais detalhada, foram feitos estudos para determinar qual a região da MAGP-1 é responsável pela atividade trombogênica. Neste sentido, proteínas mutadas, truncadas e peptídeos derivados da MAGP-1 foram obtidos e então injetados nos camundongos selvagens e deficientes em MAGP-1. Como resultados, pudemos observar que os trombos dos camundongos selvagens bem como dos camundongos deficientes em MAGP-1 apresentam basicamente a mesma morfologia, levando em consideração as técnicas utilizadas, microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Em relação ao mapeamento dos domínios, quando utilizada a molécula inteira, seja de camundongo, seja bovina, o tempo normal de oclusão foi reestabelecido. A injeção da forma truncada da região carboxiterminal foi suficiente para obter este mesmo resultado que está principalmente relacionado a um peptídeo também determinado. O mecanismo pelo qual este peptídeo atua normalizando o tempo de oclusão normal ainda não é conhecido e será objeto de estudos futuros / Abstract: In the last years, the main purpose of our laboratory has been to clarify the participation of the Microfibril-Associated GlycoProtein-1 (MAGP-1) in forming thrombus in photochemically-induced artery thrombosis model. It was considered that MAGP-1 does not interact directly with platelets, important component in artery thrombosis and probably MAGP-1 is interacting with a molecule which has participation in this process. In this sense, the interaction of the MAGP-1 with important molecules in the thrombus formation was studied. The MAGP-1 has the ability to interact with von Willebrand factor, as well as with fibrinogen and fibronectin. In addition, it was verified that the injection of recombinant MAGP-1 in MAGP-1-deficient mice was able to restores normal time of thrombus formation in these animals. Considering the MAGP-1 absence and its effect on the thrombi formation, it was questioned whether thrombi morphology obtained from MAGP-1-deficient mice was different from thrombi obtained from wild-type mice. Initial data suggested that the thrombi from MAGP-1-deficient mice had different structure, where platelets apparently showed their intact granules and dense bodies, suggesting an inefficient activation in the MAGP-1 absence. In this work, besides the ultra-structural analysis, more detailed studies have been made to determine which region of the MAGP-1 is responsible for the thrombogenic activity. In this sense, truncated proteins, mutated proteins and peptides, were obtained and then injected into MAGP-1-deficient mice to verify their activities. As result, we noticed that the thrombi have similar structure taking into consideration used techniques, scanning electron microscopy and transmission electron microscopy. Furthermore, in relation to MAGP-1 mapping domains studies when we inject recombinant full-length molecule either mice or bovine, the normal time occlusion was restored. The injection of carboxy-terminal region was enough to get this same result what is mainly related to an also determined peptide. Mechanisms involved in this process are unknown and will be our aim in the future studies / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular