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El objetivo de este trabajo es estudiar la influencia de distintos niveles de actividad pineal sobre la inducción y el crecimiento de tumores mamarios hormonodependientes. El aumento de la actividad pineal obtenido por asociación de ceguera con bulbectomía olfatoria, subnutrición o exposición a bajas temperaturas produjo: a) descenso de la incidencia tumoral y aumento del tiempo de latencia de aparición de los tumores; b) descenso en el número de tumores y en la superficie tumoral; c) descenso de la concentración de receptores estrogénicos tumorales y de los niveles circulantes de estradiol; d) inhibición del crecimiento de tumores previamente inducidos. Los efectos antitumorales de la actividad pineal pueden ser explicados por acciones antiestrogénicas directas a nivel del tumor, dado que manteniendo constantes los niveles de estradiol, mediante ovariectomía y administración de estrógenos, la hiperactividad pineal indujo una marcada regresión tumoral acompañada de un descenso de la concentración de receptores estrogénicos en el tejido tumoral. / The aim of this work was to study the influence of different levels of pineal activity on the genesis and growth of hormonodependent mammary tumors. The enhancement of pineal actions by experimental manipulations like blindness+anosmia, blindness+underfeeding or blindness+cold exposure, in relation with pinealectomized animals, produced the following effects: a) a decrease in tumor incidence and an increase in the latency in the appearance of tumors; b) a decrease in tumor number and tumor size; c) a decrease in tumor estrogen receptor concentration and serum estradiol; d) an inhibition of tumors previously induced.. A pineal-induced decrease in serum estradiol levels as well as in the concentration of estrogenic receptors in tumoral tissue could be in part responsible for these pineal antitumoral actions.

La polispermia (entrada de más de un espermatozoide al ovocito) es una condición patológica en mamíferos ya que impide el desarrollo embrionario. En la especie porcina, la polispermia es un problema común y aún sin resolver en los sistemas de fecundación in vitro (FIV). Los gránulos corticales (GCs) de los ovocitos de mamíferos estan implicados en el bloqueo de la polispermia, sin embargo, poco se sabe acerca de la composición y función de estas organelas. Esta ampliamente descrito que las moléculas liberadas de los GCs durante la fecundación o activación ovocitaria mediante estimulación química o eléctrica producen importantes modificaciones, particularmente en la zona pelúcida (ZP), el espacio perivitelino y, probablemente, el oolema del ovocito. Estas modificaciones repercuten directamente en el bloqueo de la polispermia. El conocimiento del contenido de los GCs y proteínas del oolema así como su papel durante la fecundación en la especie porcina es escaso. La mayoría de la información que se tiene en la actualidad se ha obtenido del modelo murino. En la presente tesis doctoral, investigamos la presencia de posibles proteínas de los GCs en ovocitos porcinos así como la presencia de metaloproteasas ADAM-10 y ADAM-17 en ovocitos porcinos y bovinos. Para ello, este estudio se dividió en tres apartados: / Polyspermy (entering of more than a spermatozoon into the oocyte) is a pathological condition in mammals since it avoids the normal embryonic development. In the pig species, Polyspermy is a common problem still unsolved in the current systems of in vitro fertilization (IVF). The cortical granules (CGs) from mammal's oocytes are involved in the block to polyspermy. However, little is known about the composition and function of these organelles. It is widely described that the molecules released of the CGs during the fertilization or oocyte activation, by means of chemical or electrical stimulation, produce important modifications, particularly in the zona pelucida (ZP), the periviteline space and, probably, oolema of the oocyte. These modifications have a direct role in the block to polyspermy. The knowledge about the content of the CGs and the oolema proteins of as well as their role during fertilization in pigs is still scarce. The majority of the information that we currently have it has been obtained from the murine model. In the present Doctoral Thesis, we investigated the presence of possible proteins of the CGs in pig oocytes as well as the presence of metaloproteases ADAM-10 and ADAM-17 in pig and bovine oocytes. For that, this study was divided into three sections

Realizamos estudios hemodinámicos in vivo, in vitro con anillos aórticos y estudios bioquímicos sobre 3 grupos: Ratas SD castradas, con operación simulada y castradas con tratamiento sustitutivo con 17bEstradiol. La ovariectomía indujo un incremento de la Presión Arterial y disminución del Índice Cardíaco, acompañados de una alteración de la vasodilatación arterial por disfunción endotelial. Esta alteración parece deberse a una disminución en la liberación de Óxido Nítrico (NO) y a un alteración del estado redox. La terapia de sustitución con 17bEstradiol previno los cambios hemodinámicos observados tras la ovariectomía, y restauró la función de NO y el estado redox. Tras bloqueo de la síntesis de NO, la administración directa de Estradiol incrementó las resistencias vasculares sistémicas, mediado por una potenciación endógena de la acción de la Angiotensina II. La administración precoz de 17bEstradiol tras la ovariectomía es beneficiosa para el sistema cardiovascular, pero en situaciones de disfunción endotelial es perjudicial. / We did haemodynamic studies in vivo, in vitro with aortic rings and biochemical studies on three groups: SD ovariectomized rats, sham-operated rats and ovariectomized rats with 17bEstradiol replacement therapy. Ovariectomy induced Hypertension and decreased Cardiac Index, accompanied by an alteration of arterial vasodilation secondary to an endothelial dysfunction. This disorder appears to be due to a decrease in the release of Nitric Oxide (NO) and an alteration of redox state. 17bEstradiol Replacement therapy prevented hemodynamic changes observed after ovariectomy, and restored the function of NO and redox state. After blocking the synthesis of NO, the direct administration of Estradiol increased systemic vascular resistance mediated by potentiation of the action of endogenous Angiotensin II. Early administration of 17bEstradiol after ovariectomy is beneficial to the cardiovascular system, but in situation of endothelial dysfunction is detrimental.

La micropropagación de familias de Pinus pinea L. mediante organogénesis adventicia es una herramienta biotecnológica que permite la obtención de individuos clonales así como establecer un sistema experimental adecuado para el estudio de las bases fisiológicas del proceso caulogénico. El objetivo de la Tesis Doctoral ha sido la optimización del protocolo de micropropagación de 6 familias seleccionadas, evaluando su respuesta organogénica y certificando la estabilidad genética de los individuos obtenidos mediante distintos marcadores moleculares (RAPD, AFLP, ISSR y SAMPL), resultados que también apoyan la baja variabilidad genética descrita para esta especie. Además, ensayos de transferencia de medios e histológicos han permitido establecer etapas discretas durante el periodo de inducción caulogénica.

Se evaluó el efecto de la suplementación con harina de cebada y bloque mineral sobre la ganancia de peso, consumo, índice de conversión alimenticia, edad de saca, costo de producción y ratio beneficio costo de cobayos en crecimiento alimentados con alfalfa, empleándose 250 cobayos machos destetados en un diseño de bloques completos al azar con arreglo factorial 2x2 (harina de cebada x bloque mineral) más un quinto tratamiento para fines de contraste (concentrado integral). Los resultados muestran que la suplementación con harina de cebada mejoró significativamente (p menor 0.05) la ganancia de peso, consumo, índice de conversión y consecuentemente la edad de saca. Esta ganancia de peso, así como la edad de saca, son similares a los obtenidos con el concentrado integral, pero con mejores (p menor 0.05) índices económicos. La suplementación con bloque mineral mejora los índices productivos, pero en niveles no significativos (p>0.05), excepto para la edad de saca. Económicamente el forraje sin suplemento todavía tiene los mejores índices. Se concluye que la suplementación con harina de cebada mejora los parámetros productivos, obteniendo similares resultados a la dieta de concentrado integral para ganancia de peso y edad de saca, pero con mayores ventajas económicas. / The effect of supplementation with ground barley and mineral block supplies on weight gain, intake, feeding convertion index, age when animals have one kilogram, production cost and profit/cost index was evaluated. 250 guinea pigs weaning male were used in a design of blocks completely randomized with factorial arrangement 2 X 2 (ground barley x mineral block) and one more treatment for contrast (balanced diet). The barley ground supplementation significantly (p less 0.05) improved the weight gain, intake, feeding convertion index and consequently the age when animals have one kilogram. These weight gain and age when animals have one kilogram are similar to balanced diet response, but with better (p less 0.05) economic index. The block mineral supplementation improved the productive index, but did not significantly (p>0.05), except for age when animals have one kilogram. The forage have better economic index. The barley ground supplementation improve the production index as good as balanced diet, but with better economic advantage.

La Cordillera Yanachaga ubicada en la selva centro oriental del Perú, es considerada como una cadena aislada del macizo oriental de los Andes. Esta cadena montañosa y sus zonas aledañas presentan una alta diversidad de especies silvestres y gran belleza paisajística, motivos por los cuales ha sido establecida como un Área Natural Protegida en la categoría de Parque Nacional. Para conocer si la distribución de especies de mamíferos pequeños a lo largo de un gradiente altitudinal de una cadena montañosa aislada como Yanachaga, es diferente a la presentada en la Cordillera Oriental, se efectuó un análisis de la distribución vertical desde 300 m hasta los 2,800 m, tomando como estudio referencial el realizado en el Parque Nacional Manu, en Cuzco y Madre de Dios. Las especies de mamíferos pequeños consideradas en este trabajo se agruparon en cuatro conjuntos: murciélagos (67 especies), marsupiales (11 especies), roedores múridos (16 especies), y marsupiales y todos los roedores, reunidos como “mamíferos pequeños terrestres” (31 especies). Se analizó estos grupos empleando pruebas de regresión polinomial, análisis de agrupamiento, y calculando perfiles y amplitudes de rango de las distribuciones altitudinales. Para los grupos de murciélagos, marsupiales, y mamíferos pequeños terrestres, la riqueza de especies es mayor en elevaciones bajas, decreciendo conforme se asciende en altitud; en el caso de roedores múridos, la distribución de especies está más relacionada al tipo de bosque, encontrándose mayor riqueza de especies en ambos extremos de la gradiente. Resultados semejantes fueron obtenidos también en Manu. La mayor amplitud de rangos de distribución de especies se observa claramente en murciélagos y marsupiales, siguiendo la regla de Stevens, mientras en roedores múridos y mamíferos pequeños terrestres ésta solo se cumple parcialmente. Estos resultados, similares a los obtenidos en Manu, indican que los patrones de distribución en una cordillera aislada como Yanachaga son semejantes a los hallados en la cordillera principal. Además, en murciélagos se distinguió dos grupos: uno de especies de elevaciones bajas correspondiente a bosque lluvioso de tierras bajas, y otro de elevaciones más altas que comprenden a bosques montanos bajo y de neblina. Ambos grupos separados por una zona de reemplazo incluido en el rango altitudinal (600 – 900 m) que comprende al bosque montano bajo, aproximadamente como se encontró en Manu. De manera similar a lo encontrado en Manu, en roedores múridos se encontró tres grupos de especies, de altitudes bajas que abarcan bosques lluviosos de tierras bajas; de altitudes intermedias con bosque montano bajo y de neblina, y altas con bosque de neblina. Los tres grupos colindan con áreas de reemplazo en los rangos (600 – 900 m) y (1,800 – 2,100 m) correspondientes al bosque montano bajo, y bosque de neblina, respectivamente. Se halló tres especies nuevas, de los géneros Akodon, Thomasomys (Rodentia) y Micronycteris (Chiroptera), que sugieren su posible evolución en aislamiento geográfico en la cordillera Yanachaga. Además, se reporta una especie inédita de Monodelphis, conocida anteriormente de otras cordilleras del centro y sur de Perú. / The Cordillera Yanachaga, located in central-eastern Peru, is a mountain range east of, and isolated from the eastern chain of the Andes. This region and nearby areas is home to a large number of wild species and shows great natural beauty, and for these reasons it has been set aside as a Protected Natural Area in the category of National Park. In order to investigate if the distribution of species of small mammals along an altitudinal gradient in such an isolated mountain range as Yanachaga, is different to that present in the main Eastern Andes, an analysis of the vertical distribution of the species, from 300 up to 2,800 m, was carried out, comparing the results obtained with those found further south, at Manu National Park, in Cuzco and Madre de Dios departments. The species of small mammals studied in this work conform four groups: bats (67 species); marsupials (11 species); murid rodents (16 species); and marsupials and all the rodents, considered together as “terrestrial small mammals” (31 species). These groups were analyzed using tests of polynomial regression and cluster analysis, and range profiles and widths of altitudinal distribution were calculated. For bats, marsupials, and terrestrial small mammals, species richness is largest at low elevations, decreasing with an increase in altitude; for murid rodents, species distribution is related to forest type, being most diverse at both ends of the altitudinal gradient. Similar results were also obtained in Manu. The largest distribution of species range widths is clearly observed among bats and marsupials, supporting Stevens' rule in these two groups, whereas in murid rodents and terrestrial small mammals the rule is only partially supported. These results, similar to those obtained in Manu, indicate that the distribution patterns in an isolated mountain range like Yanachaga are similar to those of the main mountain range. Furthermore, two groups were discriminated in bats, one comprising low-elevation species found in lowland rain forest, the other including species of higher elevations, inhabiting both montane and cloud forest. The species composition of both sets changes at the vegetation belt (600 - 900 m) occupied by low montane forest, in a manner comparable to the situation found in Manu. Also, in a similar way to that seen in Manu, murid rodents are separated in three species groups, of low, intermediate and high elevations, corresponding to lowland rain forest, montane and cloud forest, and only cloud forest. These groups replace each other at the vegetation belts (600 - 900 m, and 1,800 - 2,100 m) corresponding to lower montane forest, and cloud forest, respectively. Three new species of the genera Akodon, Thomasomys (Rodentia) and Micronycteris (Chiroptera) were found, suggesting their possible evolution in geographic isolation in the Cordillera Yanachaga. In addition, an undescribed species of Monodelphis, already known from other mountain ranges in central and southern Peru, was also recorded at Yanachaga.

El oocito de mamífero está rodeado por una matriz denominada zona pelúcida (ZP). Esta envoltura participa en procesos tales como la inducción de la reacción acrosómica, la unión de espermatozoides y también puede estar implicada en la especiación. Estudios recientes han demostrado que la matriz de ZP de ovocitos en varias especies se compone de cuatro glicoproteínas, denominadas ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4, en lugar de las tres descritas en el ratón, cerdo y vaca. En la gata (Felis catus), esta matriz se compone de al menos tres glicoproteínas denominadas ZP2, ZP3 y ZP4. Sin embargo, la presencia de cuatro proteínas en varios mamíferos, sugiere que necesita una reevaluación de la ZP en la gata. Además, en esta tesis, se realizaron investigaciones para determinar la expresión de una cuarta glicoproteína en la ZP de conejo (Oryctolagus cuniculis). Los objetivos de esta investigación fueron analizar la composición de proteínas de ZP gato por medio de análisis proteómico y en el conejo se amplificó ZP1 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). En la ZP aislada de ovarios y ovocitos de gato, se detectaron varios péptidos correspondientes a cuatro proteínas, teniendo una cobertura del 33,17%, 71,50%, 50,23% y 49,64% para ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4, respectivamente. Por otra parte, se confirmó por análisis molecular la expresión de los cuatro genes de ZP a partir de ARN total aislado de ovarios de gato, las ZPs de gato fueron parcialmente amplificadas por RT-PCR. En el conejo la ZP1 incluye un marco de lectura abierto de 1825 nucleótidos que codifican un polipéptido de 608 residuos de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos deducida de ZP1 de conejo mostró una alta identidad con otras especies: 70% de identidad con ZP1 humana y caballo y 67% de identidad con la ZP1 de ratón y rata. A nivel proteómico, fueron detectados por espectrometría de masas péptidos correspondientes a las cuatro proteínas ZP. Además, mediante un análisis filogenético molecular de ZP1 mostró que este gen presenta una pseudogenización de por lo menos cuatro veces durante la evolución de los mamíferos. Los datos presentados en esta tesis proporcionan evidencia, por primera vez, que la ZP de conejo y la ZP de gato se compone de cuatro glicoproteínas. 2 / The mammalian oocyte is surrounded by a matrix called the zona pellucida (ZP). This envelope participates in processes such as acrosome reaction induction, sperm binding, and may be involved in speciation. Recent studies have shown that the ZP matrix of oocytes in several species is composed of four glycoproteins, designated ZP1, ZP2, ZP3 and ZP4, rather than the three described in mouse, pig and cow. In cat (Felis catus), this matrix is composed of at least three glycoproteins called ZP2, ZP3 and ZP4. However, the presence of a fourth protein in several mammals, meaning that a reevaluation of cat ZP is needed. Additionally, in this thesis, investigations were carried out to unveil a fourth glycoprotein in the rabbit (Oryctolagus cuniculis) ZP. The objectives of this research was to analyse of the protein composition of cat ZP by means of proteomic analysis and rabbit ZP1 was amplified by reverse transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR). Using ZP from ovaries and oocytes of cat, several peptides corresponding to four proteins were detected, yielding a coverage of 33.17%, 71.50%, 50.23% and 49.64% for ZP1, ZP2, ZP3 and ZP4, respectively. Moreover, the expression of four genes was confirmed by molecular analysis. Using total RNA isolated from cat ovaries, the complementary deoxyribonucleic acids (cDNAs) encoding cat ZPs were partially amplified by RT-PCR. In the rabbit the ZP1 cDNA contains an open reading frame of 1825 nucleotides encoding a polypeptide of 608 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of rabbit ZP1 showed high identity with other species: 70% identity with human and horse ZP1, and 67% identity with mouse and rat ZP1. At the proteomic level, peptides corresponding to the four proteins were detected by mass spectrometry. In addition, a molecular phylogenetic analysis of ZP1 showed that pseudogenization of this gene has occurred at least four times during the evolution of mammals. The data presented in this thesis provide evidence, for the first time, that the rabbit and cat ZP is composed of four glycoproteins.