Orientador : Michael Georges Albert Vincentz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gauer_Luciane_D.pdf: 3550679 bytes, checksum: 87a2693a27d27965fcd3ac17128f8533 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O locus Opaco-2 codifica um fator de regulação da transcrição do tipo bZIP que atua no controle coordenado do metabolismo do carbono, nitrogênio e da síntese das prolaminas de reserva durante o desenvolvimento da semente de milho. Prováveis proteínas ortólogas e várias bZIPs similares a OPACO-2 foram identificadas e parcialmente caracterizadas em outras monocotiledôneas. A análise filogenética de um grupo e não redundante de bZIPs de plantas, incluindo os quatros genes de A. thaliana, Bzo2h1, Bzo2h2, Bzo2h3 e Bzo2h4, permitiu identificar um grupo de 20 proteínas homólogas à proteína O2, denominada de família O2. Bzo2h2 é um gene único que provavelmente representa uma função comum a monocotiledôneas e dicotiledôneas. Genes quiméricos a fim de promover o silenciamento gênico ou a superexpressão de Bzo2h2, assim como fusões traducionais da seqüência promotora desse gene com o gene marcador gusA foram introduzidos em A. thaliana. Um mutante nulo para Bzo2h2 também foi obtido a partir de um banco de mutantes de inserção de T-DNA. Bzo2h2 encontra-se expresso nos feixes vasculares, mais especificamente no floema de cotilédones, folhas, hipocótilo, raízes, flores e vagens. A localização in situ da presença do mRNA para Bzo2h2 através da técnica de hibridação in situ permitiu confirmar os resultados obtidos através da avaliação da atividade de GUS. Uma análise detalhada do padrão de expressão de Bzo2h2 ao longo do desenvolvimento revelou que a atividade de GUS já se encontra presente no procâmbio no estágio de maturação do embrião, indicando que mesmo antes de haver a diferenciação de xilema e floema, o gene Bzo2h2 já se encontra expresso, caracterizando assim um marcador de diferenciação do floema. A expressão específica de Bzo2h2 no floema sugere um possível envolvimento deste gene em algum aspecto da diferenciação deste tecido, já que ele se encontra expresso no procâmbio e no ápice de raízes, regiões onde o xilema e o floema ainda não se diferenciaram. Entretanto, análises histológicas da anatomia do feixe vascular de plantas superexpressando Bzo2h2 e do mutante nulo bzo2h2-1 não revelaram diferenças na organização e na estrutura do tecido vascular em relação a plantas selvagens. A ausência de fenótipo diferencial nas plantas silenciando Bzo2h2 e no mutante nulo bzo2h2-1 pode estar relacionada com o fato de que as condições testadas não permitiram evidenciar o processo no qual Bzo2h2 está envolvido, ou que as modificações são sutis e consequentemente de difícil percepção, ou ainda que algum grau de redundância funcional pode estar mascarando os efeitos das mutações em Bzo2h2. Juntos, os resultados levam à identificação de um gene que se mantém expresso ao longo de praticamente todos os estágios do desenvolvimento, exceto nos primeiros estágios embrionários, em todos os órgãos; e que parece não responder aos principais reguladores do crescimento e desenvolvimento, como fitohormônios, açúcares e estresses abióticos, como estresse osmótico, ausência de luz e baixa temperatura / Abstract: Opaque-2 (O2) is an important regulatory locus of maize seed endosperm development. O2 is involved in coordinated regulation of storage protein synthesis, nitrogen and carbon metabolism in developing seeds. O2 homologous genes were identified in both monocots and dicots, but probable O2 orthologous were only described in monocots. Phylogenetic analysis of a possible complete and nonredundant collection of angiosperm bZIP factors, including the four genes of A. thaliana, Bzo2h1, Bzo2h2, Bzo2h3 and Bzo2h4, resulted in the identification of 20 angiosperm O2 homologues that define the O2 gene family. Bzo2h2 is a unique gene which represents an ancestral function. Construction containing the cDNA in sense orientation under the control of a strong promoter was obtained for overexpressing Bzo2h2. Quimeric gene aimed at inducing gene silencing through RNA interference mechanism was also constructed. In addition, a construction with the promoter sequence of this gene fused to the reporter gene (gusA) was made, in order to define the expression pattern of Bzo2h2. Knockout mutant of Bzo2h2 was obtained. GUS activity analysis revealed that Bzo2h2 is expressed in vascular tissues of cotyledons, leaves, hypocotyl, primary and lateral roots, flowers and siliques. Cross sections of roots and leaves revealed that its expression is specific of the phloem. In situ hybridization analysis confirmed the previous results. GUS activity also revealed that Bzo2h2 expression is present in the procambial cells during the embryo maturation stage. In this stage the xylem and phloem are not differentiated yet. This suggests that the Bzo2h2 gene may be involved in the differentiation of this tissue. Cross sections of roots and leaves of overexpressing Bzo2h2 and Knockout Bzo2h2 mutant plants revealed that vascular tissue organization and structure was not altered when compared to the wild type plants. The lack of visible phenotypes in knockout mutant and overexpression plants could be attributed to functional redundancy or inability to detect weak phenotipic changes. We have identified a gene that express through the whole life cycle of plant, except in the early embryogenesis, in all organs and doesn¿t respond to the growth regulators such as phytohormones, sucrose and abiotic stress (osmotic stress), darkness and low temperature / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-08T11:15:07Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dheyne de Souza Santos - 2018.pdf: 2411779 bytes, checksum: 5b6adf945b3a7bc73452c0b1f2bb0c52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-08T11:34:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dheyne de Souza Santos - 2018.pdf: 2411779 bytes, checksum: 5b6adf945b3a7bc73452c0b1f2bb0c52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-08T11:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dheyne de Souza Santos - 2018.pdf: 2411779 bytes, checksum: 5b6adf945b3a7bc73452c0b1f2bb0c52 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work aims at analyzing the text “Fluxo”, from the book Fluxo-Floema (1970), by the Brazilian writer Hilda Hilst, considering the sociopolitical context in which the work was written and published in the country and the barbarities burden in the twentieth century and also having the testimony as a theoretical and methodological subside. For this reading, we firstly established a brief conceptualization about testimony. Then, we traced Hilda Hilst´s literary trajectory pointing at literary fortune and critical reception of her works and highlighting characteristics such as the rereading of the lyrical tradition in her poetry, her theater connected to the necessity of communication with the other and her production known as erotic/pornographic as a literary and political transgression. Afterwards, we propose an analysis of the five texts that compose the book Fluxo-Floema outstanding main points such as the determined necessity of saying, the violence and the clash between the writer and the editorial market. At last, we opted to a literary analysis more focused on the lyric narrative “Fluxo”, observing the fragmentation, the fusion of genres, the dialogical-dramatic character, the systemic oppression, the metalanguage, the paradox, the rhythm, the silence and the silencing among other testimonial marks. In this analysis, the unspeakable is investigated as from the key of trauma, considering the importance of the necessity of saying in its tension with the impossibility of expression, which is linked to the desire of communication with the other. As a conclusion, we identity a language that survived to the catastrophes, therefore a witness-language, which says, in its poetical images marks, the unspeakable. / Este trabalho objetiva analisar o texto “Fluxo”, do livro Fluxo-floema (1970), da escritora brasileira Hilda Hilst, considerando o contexto sociopolítico em que a obra foi escrita e publicada no país e o peso das barbáries do século XX, tendo como subsídio teórico-metodológico o testemunho. Para essa leitura, estabelecemos, primeiramente, uma breve conceituação a respeito do testemunho. Em seguida, buscamos levantar uma trajetória literária de Hilda Hilst, comentando fortuna e recepção crítica de suas obras e destacando características como a releitura da tradição lírica na sua poesia, o seu teatro ligado à necessidade de comunicação com o outro e a produção chamada erótica/pornográfica como uma transgressão literária e política. Posteriormente, propomos uma análise dos cinco textos que compõem o livro Fluxo-floema, destacando eixos entre eles, como a presença marcante da necessidade de dizer, a violência e o embate do escritor com o mercado editorial. Por último, optamos por uma análise literária mais detida da narrativa lírica “Fluxo”, observando a fragmentação, a fusão de gêneros, o caráter dialógico-dramático, a opressão sistêmica, a metalinguagem, o paradoxo, o ritmo, o silêncio, o silenciamento, entre outras marcas testemunhais. Nessa análise, o indizível é investigado a partir da chave do trauma, considerando a importância da necessidade de dizer em tensão com a impossibilidade de se expressar, o que se liga ao desejo de comunicação com o outro. Como conclusão, identificamos uma linguagem que sobreviveu às catástrofes, por isso uma linguagem-testemunha, e que diz, nas marcas de suas imagens poéticas, o indizível.

Orientador: Silvio Aparecido Lopes / Resumo: Huanglongbing (HLB), causada pela bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) que coloniza o floema das plantas cítricas, é considerada a doença mais grave e destrutiva dos citros. Aspectos da patogenicidade de Las ainda não estão compreendidos, dificultado pela condição não cultivável do patógeno. Entender como Las se movimenta internamente na planta para colonizar os diferentes tecidos é fundamental para o controle do HLB e a busca de materiais com potencial de resistência. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a movimentação de Las em plantas de citros. Nos experimentos plantas de laranjeiras foram inoculadas por enxertia de segmentos de ramos de plantas infectadas de 2 - 3 cm de comprimento. Para estudo da velocidade de movimentação de Las nos vasos do floema, foi utilizado duas metodologias. A primeira envolveu poda sequencial do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e avaliação de amostras de folhas seis meses após a inoculação. Já na segunda metodologia foi realizado a coleta de amostras de anéis de casca do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e de raízes fibrosas. Foi avaliado também a influência de novos fluxos de crescimentos na movimentação de Las. Lotes de plantas foram podadas na parte aérea ou no sistema radicular para indução do crescimento. Plantas não podadas foram usadas como controle. Foram amostradas folhas que surgiram na planta após a inoculação, folhas velhas, anel de casca e raízes fibrosas a partir de 15 dias ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Huanglongbing (HLB), caused by the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) which colonizes the phloem of citrus plants, is considered the most serious and destructive disease of citrus. Las pathogenicity aspects are not yet understood, hampered by non-cultured condition of the pathogen. Understanding how Las moves within the plant to colonize the different tissues is fundamental for HLB management and searching for materials with resistance potential. The objective of this research was to characterize the movement of Las in citrus plants. In the experiments orange plants were inoculated using grafting segments from infected plant branches 2-3 cm long. To study the speed of Las movement in phloem, two methodologies were used. The first involved sequential pruning of the stem at different distances from the inoculation site and evaluation of leaf samples six months after inoculation. In the second methodology was collected the ring samples of stem bark at different distances from the point of inoculation until the ground level and fibrous roots. It was also evaluated the influence of the growth flows in the Las movement. Lots of plants were pruned in the aerial part or in the root system to induction of growth. Unpruned plants were used as controls. The plants were evaluated by sampling young leaves, mature leaves, stem bark and roots every 15 days from inoculation. For the study of the movement pattern of Las in the plants, we used totally, partially and non-girdling ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-03-31T03:59:38Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-06T14:47:38Z (GMT) / Submitted by LAUDECIR LEMOS RAIOL JÚNIOR null (laudecir_junior@yahoo.com.br) on 2017-04-07T14:14:25Z No. of bitstreams: 1 Tese_Laudecir_Lemos_Raiol_Júnior.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T18:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raioljunior_ll_dr_jabo.pdf: 1991949 bytes, checksum: ea284fe5c7ae6d63472b72e4fc5c107e (MD5) Previous issue date: 2017-01-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Huanglongbing (HLB), causada pela bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) que coloniza o floema das plantas cítricas, é considerada a doença mais grave e destrutiva dos citros. Aspectos da patogenicidade de Las ainda não estão compreendidos, dificultado pela condição não cultivável do patógeno. Entender como Las se movimenta internamente na planta para colonizar os diferentes tecidos é fundamental para o controle do HLB e a busca de materiais com potencial de resistência. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a movimentação de Las em plantas de citros. Nos experimentos plantas de laranjeiras foram inoculadas por enxertia de segmentos de ramos de plantas infectadas de 2 - 3 cm de comprimento. Para estudo da velocidade de movimentação de Las nos vasos do floema, foi utilizado duas metodologias. A primeira envolveu poda sequencial do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e avaliação de amostras de folhas seis meses após a inoculação. Já na segunda metodologia foi realizado a coleta de amostras de anéis de casca do caule a diferentes distâncias do ponto de inoculação e de raízes fibrosas. Foi avaliado também a influência de novos fluxos de crescimentos na movimentação de Las. Lotes de plantas foram podadas na parte aérea ou no sistema radicular para indução do crescimento. Plantas não podadas foram usadas como controle. Foram amostradas folhas que surgiram na planta após a inoculação, folhas velhas, anel de casca e raízes fibrosas a partir de 15 dias após a inoculação. E para o estudo do padrão de movimentação de Las nas plantas, foram utilizadas plantas aneladas totalmente, parcialmente e não aneladas no caule e inoculadas no topo ou na base do caule para avaliar se Las precisa passar pela raiz para colonizar outros pontos da copa. Os resultados permitiram concluir que a velocidade média necessária para Las atingir a raiz de 95% das plantas, localizada 85 cm abaixo do local de inoculação, foi estimado variando entre 2,9 a 6,9 cm dia-1. Foi observado também que fatores ambientais influenciam a velocidade de movimentação da bactéria na planta. No experimento para avaliar a influência das regiões de crescimento, parte aérea ou sistema radicular, na movimentação de Las, a maior probabilidade de detecção da bactéria foi observada em tecidos das regiões que foram estimulados a crescer através da poda, quando comparados com as plantas não podadas. Com relação aos tecidos amostrados, anéis de casca do caule foram as que apresentaram maiores porcentagens de detecção de Las. Além disso, as plantas em que foram estimulados o crescimento do sistema radicular apresentaram 90% a mais de probabilidade de se encontrar Las nas raízes em relação a amostras de casca do caule ou folhas. Os resultados sugerem que a bactéria precisa passar pela raiz para atingir outros pontos da copa. No entanto, esse fator não foi totalmente esclarecido porque o anelamento das plantas provocou acúmulo de amido e alteração no fluxo da seiva, que pode ter influenciado na movimentação da bactéria. / Huanglongbing (HLB), caused by the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) which colonizes the phloem of citrus plants, is considered the most serious and destructive disease of citrus. Las pathogenicity aspects are not yet understood, hampered by non-cultured condition of the pathogen. Understanding how Las moves within the plant to colonize the different tissues is fundamental for HLB management and searching for materials with resistance potential. The objective of this research was to characterize the movement of Las in citrus plants. In the experiments orange plants were inoculated using grafting segments from infected plant branches 2-3 cm long. To study the speed of Las movement in phloem, two methodologies were used. The first involved sequential pruning of the stem at different distances from the inoculation site and evaluation of leaf samples six months after inoculation. In the second methodology was collected the ring samples of stem bark at different distances from the point of inoculation until the ground level and fibrous roots. It was also evaluated the influence of the growth flows in the Las movement. Lots of plants were pruned in the aerial part or in the root system to induction of growth. Unpruned plants were used as controls. The plants were evaluated by sampling young leaves, mature leaves, stem bark and roots every 15 days from inoculation. For the study of the movement pattern of Las in the plants, we used totally, partially and non-girdling plants and inoculated at the top or base of the stem to evaluate if Las must pass through the root to colonize other points of the canopy. The results allowed to conclude that the average speed required for Las to reach the 95% root of the plants, located 85 cm below the inoculation site, was estimated varying from 2.9 to 6.9 cm day-1. It was also observed that environmental factors influence the speed of the bacterium movement in the plant. In the experiment to evaluate the influence of the growth regions, aerial part or root system, in the movement of Las, the highest probability of detection of the bacteria were observed in tissues from the regions that were stimulated to grow through pruning, when compared with unpruned plants. Regarding the sampled tissues, stem bark rings were the ones with the highest percentages of Las detection. Furthermore, the growth of the root system increased the possibility of finding Las in roots samples by 90% than in other sampled tissues. The results suggest that the bacteria must pass through the root to reach other parts of the canopy. However, this factor was not fully understood because the plants girdling caused starch accumulation and change in the sap flow, which may have influenced the movement of the bacteria.

Caesalpinia echinata Lam (Leguminosae) é a espécie símbolo do Brasil, muito importante historicamente para o país. A árvore de pau brasil foi intensamente explorada no período do descobrimento, durante o século XVI, para a extração de corante e, atualmente, a sua madeira é utilizada na fabricação de arcos para instrumentos de corda. Neste trabalho foi estudada a espécie em três áreas: Mogi Guaçu, em São Paulo, num bosque experimental; em Ilhéus, na Bahia, em uma fazenda de cacau, e em Campo Grande no Mato Grosso do sul, na Reserva do campus da Universidade Federal. Pretendeu se neste trabalho comparar a sazonalidade da atividade cambial, o xilema e floema secundários, assim como descrever a formação e a diferenciação dos tecidos vasculares secundários. Para isso, um método não destrutivo de coleta foi usado, além de várias técnicas de observação do material, como microscopia de luz, eletrônica de varredura e transmissão, e confocal de varredura a laser. Foi realizado o acompanhamento fenológico da espécie assim como dados ambientais, tal como pluviosidade, temperatura e fotoperíodo. A atividade cambial foi observada a partir da presença de figuras mitóticas e fragmoplastos nas células cambiais. O câmbio é ativo em Mogi Guaçu por seis meses, enquanto que em Ilhéus por cerca de dez meses. A atividade cambial é principalmente influenciada pela pluviosidade, e os períodos de inatividade estão relacionados com o déficit hídrico no solo. No desenvolvimento do xilema secundário, os elementos de vaso são as primeiras células a se diferenciarem. Após a expansão celular, há o rompimento do tonoplasto, e posteriormente, ocorre a deposição da parede secundaria e lignificação, com formação das pontoações e das guarnições, e delimitação da placa de perfuração. A última etapa é a lise do núcleo e hidrólise do conteúdo citoplasmático. A anatomia comparada do xilema coletado em Mogi Guaçu e em Ilhéus mostrou diferenças significativas para os seguintes parâmetros: diâmetro tangencial do elemento de vaso, relação diâmetro e comprimento do elemento de vaso, freqüência dos elementos de vaso por mm2, espessura da parede da fibra, comprimento da fibra. Os raios mostram uma tendência a serem mais largos nos espécimes de Ilhéus, embora esta diferença não seja estatisticamente significativa. Quanto às guarnições das pontoações intervasculares tem se que na abertura externa da pontoação são similares, sendo ramificadas e longas nos espécies das três regiões analisadas; porém na abertura interna da pontoação as guarnições são mais abundantes e ramificadas em indivíduos coletados em Mogi Guaçu e Campo Grande, onde há um maior período de déficit hídrico no solo por ano. O floema é composto por uma porção não condutora e uma porção condutora, que corresponde a 1/4 a 1/6 do floema secundário. Os elementos de tubo crivado e as células do parênquima floemático apresentam um arranjo tangencial alternado em muitos dos espécimes analisados. No floema não condutor são observadas esclereides. No início de sua diferenciação, ainda possuem núcleo, e a proteína P não dispersa. No floema de pau brasil não foi detectada a presença de marcadores de crescimento, como já visto em algumas espécies tropicais. / Caesalpinia echinata Lam (Leguminosae) is the species symbol of Brazil, historically very important to the country. The Pernambuco wood tree was intensely exploited in the period of the discovery, during XVI century, for the pigment extraction and, nowadays, the wood is extensively used in the production of bows for string instruments. In this work it was studied the species in three areas, in Mogi Guaçu, São Paulo; in an experimental forest; in Ihéus, Bahia, in a cocoa farm, and in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, in the Reserve of the Federal University campus. The goal of this work was to compare the seasonality of cambium activity, secondary xylem and phloem, as well as describing the formation and differentiation of secondary vascular tissues. For that, a non destructive collection method was employed and, several techniques were used to analyze the samples, including optic, scanning, transmission and confocal scanning laser microscopy. The phenology of the species was followed correlated to environmental variables, such as precipitation, temperature and photoperiod. Cambium activity was observed from the presence of mitotic figures and phragmoplasts in cambium cells. Cambium is active in Mogi Guaçu for six months, while in Ilhéus is for about ten months. Cambial activity is mostly influenced by precipitation, and inactivity periods are related to water deficit in the soil. In the secondary xylem development, vessel elements are the first cells to differentiate. After cellular expansion, there is the breakdown of the tonoplast, and later, the walls undergo lignification with pits and vestures formation, and the delimitation of the perforation plate. The last stage is the nucleus lise of the nucleus and hidrolysis of cytoplasm contents. Compared anatomy of xylem between Mogi Guaçu and Ilhéus showed significant differences regarding the following parameters: vessels tangential diameter, vessels diameter and length rate, vessel elements frequency mm2, fiber walls thickness and length Rays show a tendency to be wider in the specimens of Ihéus, although not statistically significant Regarding vessels, there is no difference between vestures of the external pit aperture; however vestures are more abundant in the internal apertures in samples collected in Mogí Guaçu and Campo Grande, where there is a longer period of water deficit in the soil per year. Phloem is composed of conductive and non conductive portions, corresponding to 1/4 up to 1/6 of secondary phloem. Sieve tube elements and parenchyma cells have a tangential alternate arrangement. In non conductive phloem sclereids are observed In the beginning of its differentiation, sieve tube elements still possess nucleus, and non disperse protein P. In Pernambuco wood phloem there is no growth markers, as already detected some other tropical species.

A citricultura brasileira é a maior produtora e exportadora de citros e tem sido afetada por doenças que causam sérios prejuízos a produção e a qualidade dos frutos. No entanto, a cultura apresenta grandes problemas, entre eles, os fatores fitossanitários, que vem dizimando milhares de plantas e afetando a produtividade e a competitividade do setor. Atualmente, o huanglongbing (HLB), associado às bactérias de floema Candidatus Liberibacter spp., é considerado uma das mais destrutivas doenças de citros. A inexistência de cultivares de laranja doce resistentes ao HLB torna a transformação genética de citros uma ferramenta importante no controle desta doença. Para se defender do ataque de pragas e patógenos as plantas desenvolveram, durante o processo evolutivo, uma série de mecanismos de defesa, no qual pode-se incluir a produção de peptídeos com atividade antimicrobiana. As defensinas vegetais são peptídeos pequenos relacionadas à patogênese (PR), que possuem atividade antimicrobiana associada aos mecanismos de defesa das plantas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de laranja doce (Citrus sinensis L.) cvs. \'Hamlin\', \'Natal\', \'Valência\' e \'Pera\', via Agrobacterium tumefaciens, superexpressando o gene codificador de defensina (def), isolado de Citrus sinensis cv. \'Valência\', dirigido pelo promotor com expressão preferencial no floema AtSUC2 (transportador de sacarose, clonado de Arabidopsis thaliana) ou pelo promotor constitutivo CaMV 35S (clonado do vírus do mosaico da couve-flor). Os explantes utilizados na transformação genética foram segmentos de epicótilo obtidos de plantas germinadas in vitro. A identificação das plantas transgênicas foi realizada por meio da análise da PCR, utilizando-se primers para a detecção do fragmento do gene de seleção nptII. As plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação. A análise de Southern blot confirmou a integração do transgene em 36 plantas. Foram obtidas 7 plantas transgênicas da cultivar \'Hamlin\', 9 da cultivar \'Natal\', 1 da cultivar \'Pera\' e 9 da cultivar \'Valência\' contendo a construção gênica pC35S/def, e 3 plantas transgênicas da cultivar \'Hamlin\', 6 da cultivar \'Natal\' e 1 da cultivar \'Valência\' contendo a construção gênica pcAtSUC2/def. Os resultados obtidos neste trabalho serão importantes para futura avaliação e estudo visando o controle de Candidatus Liberibacter spp.. / The Brazilian citrus industry is the world\'s largest producer and exporter of citrus, however, it has been affected by diseases that cause serious production losses and damages to fruit quality. However, the culture faces problems, namely phytosanitary issues that have been damaging thousands of plants, affecting yield and competitiveness of the sector. Currently, Huanglongbing (HLB), associated with phloem bacteria Candidatus Liberibacter spp., is considered one of the most destructive citrus diseases. The lack of sweet orange cultivars resistant to HLB makes genetic transformation an important tool in the disease control. To defend from pest and pathogen attack, plants developed a series of defense mechanisms during the evolutionary process, which may include the production of peptides with antimicrobial activity. Plant defensins are small peptides related to pathogenesis (PR) which have antimicrobial activities, associated with plant defense mechanisms . The objective of this study was to obtain transgenic plants of sweet orange (Citrus sinensis L.) cultivars \'Hamlin\', \'Natal\', \'Valência\' and \'Pera\' with Agrobacterium tumefaciens overexpressing the defensin gene (def), isolated from Citrus sinensis cv. \'Valência\', controlled by the promoter with preferential expression in the phloem AtSUC2, (sucrose transporter, cloned from Arabidopsis thaliana) or by the constitutive promoter CaMV 35S (cloned from the mosaic virus of cauliflower). The explants used in genetic transformation were epicotyl segments obtained from germinated plants in vitro. The identification of transgenic plants was accomplished by PCR analysis using primers for the detection of nptII gene fragment. The PCR+ plants were acclimatized and transferred to greenhouse. The analysis of Southern blot confirmed the transgene integration in 36 plants. Seven transgenic plants were obtained for the cultivar \'Hamlin\', nine for \'Natal\', one for \'Pera\' and nine for \'Valência\' containing the gene construct pC35S/def and three transgenic plants for \'Hamlin\', six for \'Natal\' and one for \'Valência\' containing the gene construct pcAtSUC2/def. The results obtained in this work are important for future evaluation of the plants for resistance to Candidatus Liberibacter spp..

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-11T17:18:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1845175 bytes, checksum: 81666d114b976fa74a0143514c789a59 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T17:18:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1845175 bytes, checksum: 81666d114b976fa74a0143514c789a59 (MD5) Previous issue date: 2005-05-24 / Em plantas, a energia luminosa é transformada em energia química na forma de carboidratos, os quais são alocados entre os diferentes tecidos vegetais através do floema. Durante este processo, a sacarose, principal carboidrato transportado em plantas superiores, é “carregada” e “descarregada” no floema com o auxílio de transportadores localizados na membrana plasmática. A proteína SBP (“sucrose binding protein”) foi inicialmente identificada pela sua capacidade em ligar a sacarose e, pelo menos, dois homólogos da proteína, SBP1 e SBP2, têm sido descritos em soja. Neste trabalho, nós analisamos a função de SBP2 em plantas transgênicas de tabaco expressando o cDNA na orientação antisenso e caracterizamos os cis-elementos presentes no promotor que controlam a expressão espacial do gene SBP. Plantas anti- senso na geração T2 apresentaram crescimento e desenvolvimento reduzidos. Este fenótipo, característico de plantas com inibição do transporte de sacarose a longa distância, foi associado a alterações fisiológicas e metabólicas ocorridas, principalmente, na fase vegetativa do desenvolvimento. As plantas apresentaram reduzida fotossíntese e alteração no particionamento de carboidratos, com preferência para o acúmulo de amido nas folhas em detrimento à síntese de sacarose. Nossos dados suportam a hipótese que SBP provavelmente atua no transporte de sacarose a longa distancia no floema, alterando a expressão ou a atividade de proteínas envolvidas em sistemas alternativos de transporte de carboidratos, já que a manipulação dos níveis de SBP também alterou a atividade da invertase e da sintase da sacarose. Consistente com o papel da proteína no transporte de sacarose, um fragmento de 2 kb do promotor de SBP2 dirigiu a expressão do gene repórter de β- glicuronidase (GUS) para as células do floema de folhas, caules e raízes. A caracterização dos cis-elementos presentes no promotor de SBP2 foi realizada por deleções sucessivas na região 5’ e por deleções internas. A deleção da seqüência de - 2000 a -703 causou o acúmulo de GUS em todos os tecidos de folhas, caule e raízes analisados, indicando a presença de cis-elementos que reprimem a atividade do promotor em tecidos, que não o floema, a jusante da posição -703 pb. Deleções sucessivas até a posição -92 indicaram que a atividade tecido-específica do promotor é coordenada pela interação complexa entre elementos negativos e positivos. De fato, elementos negativos fortes foram identificados na seqüência delimitada pelas posições -495 e -370, os quais foram confirmados por experimentos de ganho de função, e também, entre -243 e -193. Foi identificada também uma região silenciadora do meristema radicular na região entre -136 e -92. Uma seqüência curta de 92pb a partir do códon de iniciação de tradução foi capaz de manter altos níveis de expressão basal em todos os tecidos analisados e, portanto, provavelmente representa um promotor eucariótico mínimo em plantas. / The plants are autotrophic organisms with specialized organs that transform the sun light energy in chemical energy as organic compounds, the carbohydrates, which are transported in part to the other organs by phloem. In plants, sucrose is the major transported form of photoassimilated carbon and its translocation involves loading and unloading of the phloem by membrane specific transporters. A sucrose binding protein, SBP, was initially identified by its capacity to bind sucrose and, at least, two SBP homologues, SBP1 and SBP2, have been described in soybean. Here, we analyzed the SBP2 homologue function in tobacco transgenic plants expressing the cDNA in the antisense orientation and characterized the cis-acting elements involved in spatial regulation of the SBP2 promoter. Typical phenotypes of an inhibition of long distance sucrose translocation were observed in the antisense T2 transgenic lines. In general, the growth and development of the transgenic lines was retarded when compared with control plants. This growth-related phenotype was associated with physiological and metabolic alterations during the early plant development. The photosynthetic rate was decreased and the leaf starch content was higher in antisense lines in comparison with control plants. Our data support the hypothesis that SBP may have a regulatory role in phloem sucrose transport by regulating the expression or activity of alternative carbohydrate uptake systems, since the manipulation of the level of the SBP homologue also altered invertase activity and sucrose synthase activity. Consistent with the involvement of SBP in long-distance sucrose transport, the SBP promoter directed the expression of the β-glucuronidase (GUS) reporter gene with high specificity to phloem of leaves, stems and roots of the transgenic tobacco plants. In order to identify potential cis-regulatory elements controlling the spatial expression of SBP promoter, we performed 5’ and internal deletion promoter analyses in transgenic tobacco. The repression of the SBP2 promoter activity in all other tissues of root, stem and leaf is alleviated by deletion of sequences upstream of -703. This indicates that the phloem-specific expression of SBP2 promoter is contributed by tissue-specific silencers in distal sequences as well as phloem-specific elements within proximal sequences of SBP2 promoter. Further deletions of 5’ flanking sequences indicate that SBP2 promoter activity and tissue-specificity is coordinated by negative and positive combinatorial modules that interact to each other in a complex way. Strong negative elements were found in sequences delimited by positions -495 to -370, which were further confirmed by gain-of-function experiments and also between positions -243 and -193. In addition, a root meristem-specific silencer was identified within the region between -136 and -92. A short sequence, spanning from -92 to the start codon, was able to maintain high level of basal expression and may represent a potential eukaryotic minimal promoter. / Tese importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:54Z : No. of bitstreams: 1 000865641_20170301.pdf: 156033 bytes, checksum: 305d3d58e227bb3dab815893138e70d3 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-03T11:01:34Z: 000865641_20170301.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-03T11:02:42Z : No. of bitstreams: 1 000865641.pdf: 1581001 bytes, checksum: 3b640de54758f10bba3e166471a8e8ff (MD5) / Este estudo abordou a sazonalidade da atividade cambial e da fenologia vegetativa, a relação existente entre estes dois eventos e a relação destes com fatores climáticos e ambientais, bem como os efeitos de anelamento caulinar na estrutura do xilema secundário em espécies de cerrado. Para o estudo da sazonalidade da atividade cambial, amostras do caule principal de Kielmeyera grandiflora (Wawra) Saddi (Calophyllaceae) foram coletadas mensalmente, entre setembro de 2011 e dezembro de 2012. No mesmo período, foram feitas observações mensais das fases fenológicas vegetativas para avaliar a sazonalidade na produção de folhas e comparar estes dados com a atividade cambial. Para verificar quais os fatores ambientais e climáticos relacionados com a brotação e com o início da atividade cambial, foram calculadas as médias de temperatura e do fotoperíodo, e obtido o somatório da precipitação em uma escala de tempo que variou de 1 a 30 dias antes da brotação e do início da atividade cambial. Em seguida, foi calculado o coeficiente de variação das médias para avaliar a variabilidade entre os anos. Para o estudo do efeito de anelamento caulinar na estrutura do xilema secundário foi montado um experimento em campo com a espécie Aegiphila verticillata Vell. (Lamiaceae). O experimento foi composto por dois grupos, anelamento e controle. No grupo anelamento, a casca e o câmbio vascular foram removidos completamente do caule principal na porção central do tronco, formando um anel completo. O objetivo do anelamento foi interromper o fluxo polar de auxina produzido na copa para avaliar os efeitos dessa interrupção na estrutura do xilema secundário. No grupo controle, o caule não foi anelado. Para identificar o xilema secundário formado antes do anelamento do formado posteriormente ao tratamento foi feita uma incisão na casca, nas porções acima e abaixo do anelamento, até atingir o câmbio vascular. Esta incisão... / This study approached the seasonality in cambial activity and vegetative phenology, the relationship between these events and their relation with wheater and environmental factors, and also the effects of stem girdling in the structure of secondary xylem in Cerrado species. In order to study of seasonality in cambial activity, monthly samples from main stem of Kielmeyera grandiflora (Wawra) Saddi (Calophyllaceae) were collected from September 2011 to December 2012. In the same period, observations of vegetative phenological phases were made to assess the seasonality in leaf production, and to compare these data with cambial activity. In order to certify which environmental and weather features are related with bud opening and onset of cambial activity, it was calculated the mean value of temperature and photoperiod, and obtained the sum of rainfall in a time scale that ranged from 1 to 30 days before bud opening and the onset of cambial activity. After that, the coefficient of variation was calculated to assess the variability between years. In order to evaluate the stem girdling effect in the structure of secondary xylem was conducted an experiment in field with the species Aegiphila verticillataVell (Lamiaceae), composed of two groups, girdling and control. In girdling group, bark and cambium were completely removed from the central portion of main stem, forming a complete ring. The purpose of girdling was to interrupt the polar flow of auxin produced in the crown, and to assess the effect of its disruption in the structure of secondary xylem. In control group, it has not made a girdling in the stem. To distinguish the xylem formed before girdling from xylem formed after the treatment, an incision (03 cm in length) was made in the regions above and below girdling until reaches the vascular cambium. In the same way, in control group an incision in the bark was made at a central point of the ...

Orientador: Carmen Regina Marcati / Banca: Veronica Angylossy / Banca: Patricia Soffiatti / Banca: Silvia Rodrigues Machado / Banca: Fábio Akira Mori / Resumo: - Este estudo abordou a sazonalidade da atividade cambial e da fenologia vegetativa, a relação existente entre estes dois eventos e a relação destes com fatores climáticos e ambientais, bem como os efeitos de anelamento caulinar na estrutura do xilema secundário em espécies de cerrado. Para o estudo da sazonalidade da atividade cambial, amostras do caule principal de Kielmeyera grandiflora (Wawra) Saddi (Calophyllaceae) foram coletadas mensalmente, entre setembro de 2011 e dezembro de 2012. No mesmo período, foram feitas observações mensais das fases fenológicas vegetativas para avaliar a sazonalidade na produção de folhas e comparar estes dados com a atividade cambial. Para verificar quais os fatores ambientais e climáticos relacionados com a brotação e com o início da atividade cambial, foram calculadas as médias de temperatura e do fotoperíodo, e obtido o somatório da precipitação em uma escala de tempo que variou de 1 a 30 dias antes da brotação e do início da atividade cambial. Em seguida, foi calculado o coeficiente de variação das médias para avaliar a variabilidade entre os anos. Para o estudo do efeito de anelamento caulinar na estrutura do xilema secundário foi montado um experimento em campo com a espécie Aegiphila verticillata Vell. (Lamiaceae). O experimento foi composto por dois grupos, anelamento e controle. No grupo anelamento, a casca e o câmbio vascular foram removidos completamente do caule principal na porção central do tronco, formando um anel completo. O objetivo do anelamento foi interromper o fluxo polar de auxina produzido na copa para avaliar os efeitos dessa interrupção na estrutura do xilema secundário. No grupo controle, o caule não foi anelado. Para identificar o xilema secundário formado antes do anelamento do formado posteriormente ao tratamento foi feita uma incisão na casca, nas porções acima e abaixo do anelamento, até atingir o câmbio vascular. Esta incisão... / Abstract: This study approached the seasonality in cambial activity and vegetative phenology, the relationship between these events and their relation with wheater and environmental factors, and also the effects of stem girdling in the structure of secondary xylem in Cerrado species. In order to study of seasonality in cambial activity, monthly samples from main stem of Kielmeyera grandiflora (Wawra) Saddi (Calophyllaceae) were collected from September 2011 to December 2012. In the same period, observations of vegetative phenological phases were made to assess the seasonality in leaf production, and to compare these data with cambial activity. In order to certify which environmental and weather features are related with bud opening and onset of cambial activity, it was calculated the mean value of temperature and photoperiod, and obtained the sum of rainfall in a time scale that ranged from 1 to 30 days before bud opening and the onset of cambial activity. After that, the coefficient of variation was calculated to assess the variability between years. In order to evaluate the stem girdling effect in the structure of secondary xylem was conducted an experiment in field with the species Aegiphila verticillataVell (Lamiaceae), composed of two groups, girdling and control. In girdling group, bark and cambium were completely removed from the central portion of main stem, forming a complete ring. The purpose of girdling was to interrupt the polar flow of auxin produced in the crown, and to assess the effect of its disruption in the structure of secondary xylem. In control group, it has not made a girdling in the stem. To distinguish the xylem formed before girdling from xylem formed after the treatment, an incision (03 cm in length) was made in the regions above and below girdling until reaches the vascular cambium. In the same way, in control group an incision in the bark was made at a central point of the ... / Doutor

Caesalpinia echinata Lam (Leguminosae) é a espécie símbolo do Brasil, muito importante historicamente para o país. A árvore de pau brasil foi intensamente explorada no período do descobrimento, durante o século XVI, para a extração de corante e, atualmente, a sua madeira é utilizada na fabricação de arcos para instrumentos de corda. Neste trabalho foi estudada a espécie em três áreas: Mogi Guaçu, em São Paulo, num bosque experimental; em Ilhéus, na Bahia, em uma fazenda de cacau, e em Campo Grande no Mato Grosso do sul, na Reserva do campus da Universidade Federal. Pretendeu se neste trabalho comparar a sazonalidade da atividade cambial, o xilema e floema secundários, assim como descrever a formação e a diferenciação dos tecidos vasculares secundários. Para isso, um método não destrutivo de coleta foi usado, além de várias técnicas de observação do material, como microscopia de luz, eletrônica de varredura e transmissão, e confocal de varredura a laser. Foi realizado o acompanhamento fenológico da espécie assim como dados ambientais, tal como pluviosidade, temperatura e fotoperíodo. A atividade cambial foi observada a partir da presença de figuras mitóticas e fragmoplastos nas células cambiais. O câmbio é ativo em Mogi Guaçu por seis meses, enquanto que em Ilhéus por cerca de dez meses. A atividade cambial é principalmente influenciada pela pluviosidade, e os períodos de inatividade estão relacionados com o déficit hídrico no solo. No desenvolvimento do xilema secundário, os elementos de vaso são as primeiras células a se diferenciarem. Após a expansão celular, há o rompimento do tonoplasto, e posteriormente, ocorre a deposição da parede secundaria e lignificação, com formação das pontoações e das guarnições, e delimitação da placa de perfuração. A última etapa é a lise do núcleo e hidrólise do conteúdo citoplasmático. A anatomia comparada do xilema coletado em Mogi Guaçu e em Ilhéus mostrou diferenças significativas para os seguintes parâmetros: diâmetro tangencial do elemento de vaso, relação diâmetro e comprimento do elemento de vaso, freqüência dos elementos de vaso por mm2, espessura da parede da fibra, comprimento da fibra. Os raios mostram uma tendência a serem mais largos nos espécimes de Ilhéus, embora esta diferença não seja estatisticamente significativa. Quanto às guarnições das pontoações intervasculares tem se que na abertura externa da pontoação são similares, sendo ramificadas e longas nos espécies das três regiões analisadas; porém na abertura interna da pontoação as guarnições são mais abundantes e ramificadas em indivíduos coletados em Mogi Guaçu e Campo Grande, onde há um maior período de déficit hídrico no solo por ano. O floema é composto por uma porção não condutora e uma porção condutora, que corresponde a 1/4 a 1/6 do floema secundário. Os elementos de tubo crivado e as células do parênquima floemático apresentam um arranjo tangencial alternado em muitos dos espécimes analisados. No floema não condutor são observadas esclereides. No início de sua diferenciação, ainda possuem núcleo, e a proteína P não dispersa. No floema de pau brasil não foi detectada a presença de marcadores de crescimento, como já visto em algumas espécies tropicais. / Caesalpinia echinata Lam (Leguminosae) is the species symbol of Brazil, historically very important to the country. The Pernambuco wood tree was intensely exploited in the period of the discovery, during XVI century, for the pigment extraction and, nowadays, the wood is extensively used in the production of bows for string instruments. In this work it was studied the species in three areas, in Mogi Guaçu, São Paulo; in an experimental forest; in Ihéus, Bahia, in a cocoa farm, and in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, in the Reserve of the Federal University campus. The goal of this work was to compare the seasonality of cambium activity, secondary xylem and phloem, as well as describing the formation and differentiation of secondary vascular tissues. For that, a non destructive collection method was employed and, several techniques were used to analyze the samples, including optic, scanning, transmission and confocal scanning laser microscopy. The phenology of the species was followed correlated to environmental variables, such as precipitation, temperature and photoperiod. Cambium activity was observed from the presence of mitotic figures and phragmoplasts in cambium cells. Cambium is active in Mogi Guaçu for six months, while in Ilhéus is for about ten months. Cambial activity is mostly influenced by precipitation, and inactivity periods are related to water deficit in the soil. In the secondary xylem development, vessel elements are the first cells to differentiate. After cellular expansion, there is the breakdown of the tonoplast, and later, the walls undergo lignification with pits and vestures formation, and the delimitation of the perforation plate. The last stage is the nucleus lise of the nucleus and hidrolysis of cytoplasm contents. Compared anatomy of xylem between Mogi Guaçu and Ilhéus showed significant differences regarding the following parameters: vessels tangential diameter, vessels diameter and length rate, vessel elements frequency mm2, fiber walls thickness and length Rays show a tendency to be wider in the specimens of Ihéus, although not statistically significant Regarding vessels, there is no difference between vestures of the external pit aperture; however vestures are more abundant in the internal apertures in samples collected in Mogí Guaçu and Campo Grande, where there is a longer period of water deficit in the soil per year. Phloem is composed of conductive and non conductive portions, corresponding to 1/4 up to 1/6 of secondary phloem. Sieve tube elements and parenchyma cells have a tangential alternate arrangement. In non conductive phloem sclereids are observed In the beginning of its differentiation, sieve tube elements still possess nucleus, and non disperse protein P. In Pernambuco wood phloem there is no growth markers, as already detected some other tropical species.