La agroindustria cítrica argentina, que incluye producción, empaque, transporte, tratamiento por frío y producción de jugos concentrados, aceites esenciales, etc.; constituye una de las actividades de fundamental importancia en la economía nacional y regional. Los mercados importadores del mundo y consumidores de productos frescos o industrializados en general, han incrementado considerablemente sus exigencias respecto a los niveles de tolerancia de residuos de agroquímicos en los productos, lo que demanda controles y estrategias de producción adecuadas. Dentro de la amplia gama de plaguicidas de uso corriente en la producción citrícola, los benzimidazoles constituyen un grupo importante de fungicidas sistémicos, que son empleados para el control y tratamiento de enfermedades en citrus. El contenido de residuos de estos fungicidas, constituye un importante parámetro de calidad a controlar al momento de comercializar los frutos, tanto para el consumo fresco como para su empleo como materia prima en la industria cítrica. Las metodologías analíticas tradicionales para la determinación de benzimidazoles, son en general complejas, de elevado costo y tiempo de análisis; lo que llevó a plantear como objetivo del presente trabajo el desarrollo de metodologías alternativas para el análisis de fungicidas benzimidazólicos en matrices cítricas. La propuesta incluyó la aplicación y optimización de metodologías analíticas para la determinación de tiofanato, metiltiofanato y thiabendazole por microextracción en fase sólida y cromatografía gaseosa con detector de nitrógeno-fósforo en frutas, jugos concentrados y productos cítricos fermentados; y la determinación de thiabendazole y carbendazim por extracción en fase sólida y cromatografía líquida de alta resolución con detector de arreglo de diodos en aceites esenciales cítricos. / Visciglio, SB. (2011). Desarrollo de metodologías alternativas para el análisis de fungicidas benzimidazólicos en matrices cítricas [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/14978

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-21T11:47:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3104624 bytes, checksum: 50a15a356c4342cfc4ce54231227dfc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T11:47:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3104624 bytes, checksum: 50a15a356c4342cfc4ce54231227dfc9 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / A assistência técnica inadequada, o manejo incorreto da cultura, a ausência de monitoramento de resíduos de agrotóxicos e, por vezes, a falta de consciência do produtor levam ao uso indiscriminado e irresponsável dos produtos químicos, que geram impactos ao meio ambiente e à saúde humana. Em muitas culturas frutícolas, a falta de produtos registrados para a cultura induz o produtor a procurar respostas em produtos não registrados, com eficácia e dosagens desconhecidas para a cultura. Esse é o caso da goiaba, que apesar de ser alvo de pragas e doenças com potencial para comprometer toda a safra, possui poucos produtos registrados para uso em pré- colheita e nenhum produto registrado para uso em pós-colheita. Os fungicidas imazalil e procloraz são frequentemente usados na cultura da goiaba, em pós- colheita. Para avaliar o comportamento desses princípios ativos na goiaba (epicarpo, mesocarpo e placenta) este trabalho se dividiu em três experimentos. O primeiro experimento teve por objetivo estudar a dissipação e ou migração dos agrotóxicos imazalil e procloraz, aplicados na pós-colheita de goiabas ‘Pedro Sato’, do epicarpo para o mesocarpo e deste para a placenta. Para tanto, os frutos foram imersos em caldas fungicidas em diferentes concentrações. Periodicamente, os frutos foram avaliados, quanto à evolução de cor do epicarpo e, quanto à presença de resíduos dos princípios ativos nas frações do fruto. Foi utilizado o método de extração sólido- líquido com partição em baixa temperatura (ESL/PBT), adaptado e validado para determinação de resíduos destes princípios ativos nas frações do fruto de goiaba por cromatografia gasosa acoplada a um detector por captura de elétrons (CG/DCE). O segundo experimento, teve por objetivo avaliar o efeito de diferentes doses de imazalil na manutenção da qualidade da goiaba. Neste estudo, os frutos foram imersos em caldas fungicidas em quatro concentrações de imazalil e avaliados quanto à perda de massa da matéria fresca, incidência e severidade de doenças, evolução de cor do epicarpo, firmeza do mesocarpo, teor de sólidos solúveis, acidez titulável e quanto à presença de resíduos dos princípios ativos nas frações do fruto. Os resultados foram avaliados por estatística descritiva ou por superfície de resposta. O objetivo do terceiro experimento foi avaliar a influência do tempo de armazenamento de goiabas ‘Pedro Sato’ na determinação de resíduos dos agrotóxicos por cromatografia gasosa. Neste estudo, frutos não tratados foram mantidos por até 13 dias de armazenamento e avaliados quanto à alteração de cor do epicarpo. Posteriormente, os frutos foram processados, separados em frações e estas submetidas ao processo de extração previamente validado. Os extratos foram fortificados em concentrações definidas dos princípios ativos e analisados por CG- DCE. Concomitantemente, foi preparada uma curva analítica dos princípios ativos em acetonitrila, utilizada para comparar com as dos extratos e para o cálculo do efeito de matriz das frações em cada dia de armazenamento. Os resultados foram avaliados por análise de regressão. O método ESL/PBT-CG/DCE validado apresentou seletividade e linearidade satisfatórias, com recuperações de extração na faixa de 94,5 a 108% e limites de quantificação (LQ) entre 12,2 a 19,3 μg kg -1 . No primeiro experimento, verificou-se que há dissipação dos princípios ativos do epicarpo com comportamento ajustável a uma cinética de primeira ordem. Verificou- se também que parte dos princípios ativos são dissipados por translocação para o interior do fruto. Estes também foram detectados na placenta, mas em quantidades abaixo do LQ. No segundo experimento, a aplicação de imazalil, nas doses estudadas, não afetou as características de qualidade dos frutos, embora tenham sido eficazes em retardar a incidência e reduzir a severidade dos danos causados por fungos durante o armazenamento. Independente da dose aplicada nos frutos, o imazalil migra do epicarpo para o mesocarpo, não sendo detectado na placenta. Entretanto a maior concentração deste fungicida permanece no epicarpo. Com relação à persistência do princípio ativo no fruto, as menores doses apresentaram resíduos abaixo do limite de referência tolerado, embora com valores muito próximos deste. No terceiro experimento, os resultados indicam que há diferenças no efeito de matriz ao longo dos dias de armazenamento sendo, portanto, necessário empregar curvas analíticas preparadas no extrato das frações para minimizar o efeito de matriz. / Inadequate technical assistance, poor crop management, lack of monitoring of pesticide residues and sometimes lack of producer awareness lead to the indiscriminate and irresponsible use of chemicals, which have an impact on the environment and human health. In many fruit crops, the lack of registered products for the crop induces the producer to seek answers in unregistered products, with efficacy and dosages unknown for the crop. This is the case of guava, which despite being a target of pests and diseases with potential to compromise the whole crop, has few products registered for use in pre-harvest and no product registered for post- harvest use. The imazalil and prochloraz fungicides are often used in postharvest guava crops. To evaluate the behavior of these active principles in guava (epicarp, mesocarp and placenta) this work was divided into three experiments. The first experiment aimed to study the dissipation and/or migration of the imazalil and prochloraz pesticides, applied in the postharvest of 'Pedro Sato' guavas, from the epicarp to the mesocarp and from this to the placenta. For this, the fruits were immersed in fungicidal syrup at different concentrations. Periodically, the fruits were evaluated as to the color evolution of the epicarp and, as to the presence of residues of the active principles in the fractions of the fruit. The low-temperature solid-liquid extraction (ESL / PBT) extraction method was used, adapted and validated to determine residues of these active principles in guava fruit fractions by gas chromatography coupled to an electron capture detector (CG / DCE). The second experiment aimed to evaluate the effect of different doses of imazalil on the maintenance of guava quality. In this study, fruits were immersed in fungicidal syrups at four concentrations of imazalil and evaluated for loss of fresh matter mass, disease incidence and severity, epicarp color development, mesocarp firmness, soluble solids content, titratable acidity and as regards the presence of residues of the active principles in the fractions of the fruit. The results were evaluated by descriptive statistics or by response surface. The objective of the third experiment was to evaluate the influence of 'Pedro Sato' guava storage time on the determination of residues of pesticides by gas chromatography. In this study, untreated fruits were kept for up to 13 days of storage and evaluated for epicarp color change. Subsequently, the fruits were processed, separated into fractions and submitted to the previously validated extraction process. The extracts were fortified at defined concentrations of the active principles and analyzed by GC-DCE. At the same time, an analytical curve of the active ingredients in acetonitrile was used to compare with the extracts and to calculate the matrix effect of the fractions on each day of storage. The results were evaluated by regression analysis. The validated ESL / PBT-CG / DCE method presented satisfactory selectivity and linearity, with extraction recoveries ranging from 94.5 to 108% and limits of quantification (LQ) of 12.2 to 19.3 μg kg -1 . In the first experiment, it was verified that there is dissipation of the active principles of the epicarp with behavior adjustable to a first order kinetics. For the mesocarp, it was verified that part of the active principles are dissipated by translocation into the fruit. These were also detected in the placenta, but in amounts below the LQ. In the second experiment, the application of imazalil at the doses studied did not affect fruit quality characteristics, although they were effective in delaying the incidence and reducing the severity of fungal damage during storage. Regardless of the dose applied to the fruits, imazalil migrates from the epicarp to the mesocarp and is not detected in the placenta. However, the highest concentration of this fungicide remains in the epicarp. Regarding the persistence of the active principle in the fruit, the lowest doses presented residues below the tolerated reference limit, although with very close values. In the third experiment, the results indicate that there are differences in the matrix effect over the storage days, so it is necessary to use prepared analytical curves in the fractions extract to minimize the matrix effect.

No presente trabalho estudou-se a caracterização morfológica, a esporulação, e a patogenicidade dos fungos Alternaria solani e Alternaria alternata obtidos a partir de lesões foliares de tomateiro, pimentão, berinjela, batata, jiló e fumo; também se avaliou a sua sensibilidade à fungicidas. Para a caracterização morfológica utilizou-se como parâmetros, a mensuração do comprimento e largura do corpo e o comprimento do bico dos conídios. Os resultados obtidos, apesar de variabilidade observada estão de acordo com as caracterizações morfológicas dessas espécies, em literaturas citadas·Para esporulação estudou-se a influência da luz negra (N.U.V.) e escuro, idade do micélio (margem e interno) e a adição suplementar de água ou não no meio de esporulação. O melhor índice de esporulação de A. solani foi obtida com discos de micélio retirados da margem da colônia e incubados em luz negra (N.U.V.) e sem adição suplementar de água, enquanto que para A. alternata somente a luz negra foi suficiente para propiciar ótima esporulação. No estudo de inoculações cruzadas com os isolados de A. solani e A. alternata em tomateiro, pimentão e berinjela, verificou-se que todos os isolados foram patogênicos, exceto o isolado de A. solani de berinjela que não mostrou patogenicidade a pimentão. Entretanto, quando inoculado em sementes de tomate somente o isolado de A. solani de tomateiro foi patogênico no período de pós emergência das plântulas. Os isolados de A. alternata não demonstraram serem patogênicos em pré e pós emergência das plântulas. Porém, quando inoculados em frutos semi-maduros de tomateiro, os isolados de A. alternata de tomateiro, batata, berinjela e pimentão foram mais patogênicos do que os de jiló e fumo. Quanto a fungitoxicidade de 10 fungicidas em diferentes concentrações a um isolado de A. solani e a outro de A. alternata de tomateiro observou-se que o captafol, propiconazol e acetato de trifenil estanho a 100 ppm inibiram totalmente o crescimento micelial de A. alternata, enquanto que para A. solani somente o acetato de trifenil estanho a 100 ppm foi eficiente. / Morphological characteristics, sporulation and pathogenicity of A. solani and A. alternate were estudied. Isolates were obtained from tomato, sweet-pepper, eggplant, potato,"jiló"(Solanum gilo Raddi) and tobacco fungicidal sensibility of these isolates to various fungicidas was also evaluated. For morphological characterization, length and width of the conidium body and length of the conidium beak were measured. The results obtained confirmed the morphological variation between the two species of Altenaria,/i> studied. Influence of NUV, light and darkness, mycelium age and the addition of supplementary water to the medium was studied in relation to sporulation of both species of Alternaria. The best sporulation index for A. solani was obtained with mycelium discs removed from the colony margins, incubation under NUV light conditions and without the addition of supplementary water. For A. alternate only NUV light was enough to induce optimum sporulation. Cross inoculations tests with the various isolates of A. solani and A. alternate which were tested against tomato, pepper and eggplant, showed that all isolates were pathogenic to all hosts, with the exception of the A. solani isolate obtained from eggplant which was not pathogenic to pepper. Seed inoculations 'of tomato with A. solani was positive only for the tomato isolate, during the period of post-emergence of the seedlings. Isolates of A. alternate were not pathogenic to seedlings in pre and post-emergence. However, isolates of A. alternate,/i> from tomato, potato, eggplant and sweet-pepper were most pathogenic, whereas the"jiló"and tobacco isolates were the less agressive ones, when inoculated in semi-matured tomato fruits. With respect to the fungitoxicity of 10 fungicides, at different concentrations, against the isolates of A. solani and A. alternate from tomato, it was found that 100 ppm captafol, propiconazole and phenyltin acetate totally inhibited the mycelial growth of A. alternate, whereas for A. solani only 100 ppm phenyltin acetate was effective.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T14:08:59Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655060 bytes, checksum: 3144beffa2e811543c3dff48280203da (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T14:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655060 bytes, checksum: 3144beffa2e811543c3dff48280203da (MD5) Previous issue date: 2001-11-14 / O presente trabalho avaliou um sistema de previsão e o comportamento da ferrugem do cafeeiro em diferentes altitudes. O sistema de previsão baseou-se no molhamento foliar e na temperatura média durante o período de molhamento, associados à fisiologia da planta e à intensidade da doença em duas lavouras (Catuaí Vermelho) com alta carga pendente de frutos, com seis anos de idade, localizada no município de Coimbra, a 680 m de altitude, na região da Zona da Mata de Minas Gerais, e com carga média de frutos, com nove anos de idade, localizada no município de Carmo do Paranaíba, a 850 m de altitude, na região do Alto Paranaíba do Estado de Minas Gerais. O sistema de previsão constou do cálculo do valor de severidade da doença (VSD), semelhante ao modelo de Wallin (1962). Na lavoura com alta carga pendente de frutos (101,5 sacas beneficiadas/ha), o melhor resultado do sistema de previsão foi o tratamento que recomendou pulverizações quando a severidade atingia 30 VSDs. Para a lavoura com média carga pendente de frutos (22,4 sacas beneficiadas/ha), o sistema de previsão recomendou apenas uma única pulverização com fungicida sistêmico, para todos os tratamentos. A incidência final de folhas doentes na colheita (11,0%) não atingiu o nível de dano ao cafeeiro e também não diferiu dos tratamentos baseados no calendário (duas pulverizações com fungicida sistêmico e quatro com fungicida de contato). Portanto, o sistema de previsão foi tão eficiente quanto o calendário no controle da ferrugem do cafeeiro, porém utilizando menor número de pulverizações, em pelo menos um dos locais avaliados (Carmo do Paranaíba - Minas Gerais). Para estudo do efeito da altitude sobre o progresso da ferrugem do cafeeiro foram escolhidas lavouras, com alta carga pendente de frutos, da cultivar Catuaí Vermelho, no espaçamento de 2,8 x 0,7 m, em altitudes variando de 660 a 1.275 m, nos municípios de Simonésia e Alto Caparaó, na região da Zona da Mata de Minas Gerais. Observou-se menor incidência da ferrugem nas lavouras plantadas em altitudes mais elevadas, principalmente naquelas acima de 1.000 m. A incidência máxima da ferrugem em 1998 a 2000 foi registrada de julho a outubro, de acordo com a altitude. Quanto maior a altitude mais a máxima incidência da doença tendeu a se deslocar para os meses de setembro a outubro. A maior incidência da ferrugem ocorreu na altitude de 850 m e a menor a 1.275 m, com incidência máxima de 40% de folhas de café com a doença. / The thesis was divided into two chapters. The first was concerned with forecast model of coffee leaf rust, and the second the effect of the altitude on the disease progress curve. The forecast model of coffee leaf rust based on climatic variables leaf wetness, temperature during leaf wetness period, plant physiology and disease intensity. Two coffee growing areas were chosen, both in the state of Minas Gerais: Coimbra in the Zona da Mata at 680 m of altitude, six years old, and Carmo do Paranaíba in the Alto Parananaíba at 850 m of altitude, none years old. Coffee growing plants were selected in november of 1999. The experiment contrasted the usual recommendation to control coffee leaf rust based on the calendar, with recommendation based on the disease incidence and recommendation based on the forecast model of the disease. The forecast model developed and tested was based on the calculus of the disease severity value (DSV), taking into consideration temperature and leaf wetness period favorable or not to the disease, from which a matrix was developed, similar to the matrix of Wallin (1962). The DSV obtained daily was taken and tested in the field, in order to determine which one would give efficient control of the disease. The forecast model associated besides weather data, the initial disease incidence and expectation of coffee berry yield of the plants. In Coimbra, on coffee plantation with expectation of high berry yield, the treatment based on DSV of 29 to 31 was similar to the calendar treatment (two sprays of systemic fungicides). In Carmo do Paranaíba, on coffee plantation with expectation of medium berry yield, the forecast model recommended one application of systemic fungicide. The treatment based on the calendar preconized two applications for the systemic and four application of the protective fungicide. In conclusion, the forecast model developed proved to be efficient on the control of coffee leaf rust fungus. In Carmo do Paranaíba, the forecast model reduced at least one fungicide application. The progress of coffee leaf rust fungus initiated in 1998, in different altitudes from 660 to 1.275 m, on coffee plantations (Catuaí Vermelho 2144) spaced 2,8 x 0,7 m, in the Zona of Mata of Minas Gerais State. The effect of coffee leaf rust on the progress curve showed that, in higher altitudes (above 1.000 m), the disease was less severe. The peak of the disease was obtained from july to october form 1998 to 2000, and varied according to the altitude. The highest incidence of the disease was obtained in the altitude of de 850 m, and the lowest at 1.275 m. The results indicated that different strategies of chemical control of coffee leaf rust should be adopted according to the altitude of the plantation. / Dissertação importada do Alexandria

Os fungicidas são normalmente utilizados para o controle de doenças causadas por fungos fitopatogênicos em diversas culturas, incluindo frutas. Estes compostos, especialmente os descritos com atividade em múltiplos alvos, podem afetar organismos não alvos como leveduras, levando elas à morte por diferentes vias. O objetivo deste trabalho foi determinar o mecanismo de ação e de morte de três diferentes fungicidas utilizados na viticultura (mancozeb, captan e dithianon) sobre Saccharomyces cerevisiae. Os resultados mostraram que leveduras expostas ao mancozeb (100 µM, 6 h) levam a uma drástica redução da viabilidade, mas sem modificações na integridade da membrana celular. As células tratadas com mancozeb apresentaram marcadores apoptóticos como aumento na concentração intracelular de espécies reativas de oxigênio (ROS), hiperpolarização da membrana mitocondrial e externalização de fosfatidilserina, indicando que a morte celular de S. cerevisiae ocasionada por mancozeb é apoptótica e conforme observado pelo comportamento de linhagens mutantes, segue a via metacaspase dependente. Aproximadamente 80% das leveduras tratadas com captan (20 µM, 6 h) apresentaram disfunções na membrana citoplasmática, e a drástica redução na concentração de grupos tiólicos proteicos e não proteicos. Além disso, as células que mantiveram sua integridade de membrana após a exposição ao captan, exibiram externalização de fosfatidilserina e acumulação de ROS. Mutantes com deleção em YCA1 apresentaram resistência parcial ao captan, indicando a ativação da cascata apoptótica metacaspase dependente. Em fermentações vínicas o captan (2,5 µM) atrasa o início da fermentação de maneira dose dependente, devido à drástica redução na viabilidade celular. Porém, em dosagens subletais, as células remanescentes se adaptam ao fungicida e completam a fermentação sem alterações evidentes nas características físico-químicas do produto final. Da mesma forma, leveduras tratadas com dithianon (2 µM; 3 h) mostraram aumento no número de células com permeabilização da membrana citoplasmática, aumento de ROS e redução na quantidade de tióis, mas sem sinais de apoptose. De forma geral, os resultados indicam que o mancozeb induz apoptose em S. cerevisiae via metacaspase dependente, enquanto o captan leva a morte por necrose e apoptose e o dithianon mata as células por necrose. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-05-19T12:14:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Joel Scariot.pdf: 2337872 bytes, checksum: 6074c8b470cfba3f134e8417172b84df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T12:14:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Joel Scariot.pdf: 2337872 bytes, checksum: 6074c8b470cfba3f134e8417172b84df (MD5) Previous issue date: 2017-05-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Fungicides are currently used to control fungal phytopathogenic diseases in many crops, including fruits. These compounds, especially those described as multisite activity fungicides, can affect non-target organisms like yeasts leading to their cell death by different pathways. The objective of this work was determining the mechanism of action and death of three fungicides used in viticulture (captan, dithianon and mancozeb) on Saccharomyces cerevisiae. The results showed that yeast exposition to the mancozeb (100 µM, 6 h) lead to a drastic reduction of cell viability, but no modification of cell membrane integrity. Mancozeb treated cells shown apoptotic markers as increase of intracellular reactive oxygen species (ROS), mitochondrial membrane hyperpolarization, and phosphatidylserine externalization, indicating that mancozeb induced cell death in S. cerevisiae is apoptotic and as shown by mutants strains, follow metacaspase-dependent pathway. Almost 80% of captan treated yeasts (20 µM, 6 h) showed citoplasmatic membrane dysfunction, and a drastic reduction on both non-proteic and proteic thiol concentrations. Moreover, the cells that retain their membrane integrity after exposure to the captan exhibited phosphatidylserine externalization and ROS accumulation, indicating apoptosis. YCA1 deletion mutant exhibited partial resistance to captan, suggesting a metacaspase dependent apoptotic cascade. In wine fermentations captan (2,5 µM) delays the beginning of alcoholic fermentations in a dose dependent manner, associated with a drastic reduction on yeast viability. However, in sub-lethal dosages, the reminiscent viable cells adapted to the fungicide, grow and complete fermentation with non-evident modifications on the physicochemical characteristics of the final product. Similarly, yeast cells treated with dithianon (2 µM; 3 h) showed cell membrane permeabilization, ROS increase, and decrease of cellular thiol compounds, but no signs of apoptosis. In general, the results indicated that mancozeb induces metacaspase dependent apoptotic cell death in S. cerevisiae, where captan leads to a dual necrotic and apoptotic cell death, and dithianon kills cells by necrosis.

Orientador: Maria Lucia Ribeiro / Banca: Gilberto Casadei de Baptista / Banca: Rosalinda Carmela Montone / Banca: Ângela Regina Araújo / Banca: Alberto José Cavalheiro / Resumo: Fungicidas, como pirimetanil, fluquinconazol e procloraz, e acaricidas, como clofentezina e cihexatina, são aplicados tanto no período de pré-colheita, como para preservar a qualidade e as características de cor e sabor das frutas durante a armazenagem, o transporte e a comercialização (procloraz). Contudo, devido à persistência dos seus resíduos nas frutas, monitoramentos devem ser realizados, empregando-se técnicas analíticas sensíveis, para avaliar se os resíduos de tais pesticidas atendem aos limites estabelecidos pelas legislações dos países exportadores e importadores. Um número reduzido de métodos para análise de resíduos dos fungicidas pirimetanil, procloraz e fluquinconazol e dos acaricidas cihexatina e clofentezina, usados no controle de doenças e pragas em culturas de frutas, estão descritos na literatura. Aliando este dado à importância econômica da produção de frutas em nosso país, foram desenvolvidos e/ou adaptados métodos eficientes, rápidos e simples para a determinação destes fungicidas e acaricidas na casca e na polpa de mamão (papaia), manga e laranja e no fruto inteiro de morango e uva. As metodologias são baseadas em extração líquido-líquido e análise individual por cromatografia a gás com detecção por captura de elétrons para procloraz e cihexatina e detecção termiônica...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungicides, as pyrimethanil, prochloraz and fluquinconazole, besides acaricides, as clofentezine and cyhexatin, have been used to preserve the quality of perishable fruits during their production, storage and commercialization. Also, these fungicides and acaricides are employed in the pre-harvest period. However, the presence of pesticide residues in fruits representes a serious problem, once the pesticides could become a risk to human consumption. So, the development of analytical methods looking for a rapid screening can ensure that the pesticide concentrations are below of the maximum residue limits allowed by the regulatory agencies. In the literature, some methods for the determination of pyrimethanil, prochloraz, clofentezine and cyhexatin in fruit matrices have been described. Respecting fluquinconazole, there is only a German review. Considering the subjects mentioned and that Brazil plays an important role in the worldwide production of fresh fruit, the purpose of this work was to develop simple and efficient methods for the determination of these fungicides and acaricides in peel and pulp of papaya, mango and orange, besides in grape and strawberry (entire fruit). The methodologies are based on liquid-liquid extraction. The analyses were performed by means of gas chromatography with thermionic specific detection for pyrimethanil and electron-capture detection for prochloraz and cyhexatin. In addition, pyrimethanil, prochloraz, fluquinconazole and clofentezine were analyzed employing a liquid...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Os fungicidas são normalmente utilizados para o controle de doenças causadas por fungos fitopatogênicos em diversas culturas, incluindo frutas. Estes compostos, especialmente os descritos com atividade em múltiplos alvos, podem afetar organismos não alvos como leveduras, levando elas à morte por diferentes vias. O objetivo deste trabalho foi determinar o mecanismo de ação e de morte de três diferentes fungicidas utilizados na viticultura (mancozeb, captan e dithianon) sobre Saccharomyces cerevisiae. Os resultados mostraram que leveduras expostas ao mancozeb (100 µM, 6 h) levam a uma drástica redução da viabilidade, mas sem modificações na integridade da membrana celular. As células tratadas com mancozeb apresentaram marcadores apoptóticos como aumento na concentração intracelular de espécies reativas de oxigênio (ROS), hiperpolarização da membrana mitocondrial e externalização de fosfatidilserina, indicando que a morte celular de S. cerevisiae ocasionada por mancozeb é apoptótica e conforme observado pelo comportamento de linhagens mutantes, segue a via metacaspase dependente. Aproximadamente 80% das leveduras tratadas com captan (20 µM, 6 h) apresentaram disfunções na membrana citoplasmática, e a drástica redução na concentração de grupos tiólicos proteicos e não proteicos. Além disso, as células que mantiveram sua integridade de membrana após a exposição ao captan, exibiram externalização de fosfatidilserina e acumulação de ROS. Mutantes com deleção em YCA1 apresentaram resistência parcial ao captan, indicando a ativação da cascata apoptótica metacaspase dependente. Em fermentações vínicas o captan (2,5 µM) atrasa o início da fermentação de maneira dose dependente, devido à drástica redução na viabilidade celular. Porém, em dosagens subletais, as células remanescentes se adaptam ao fungicida e completam a fermentação sem alterações evidentes nas características físico-químicas do produto final. Da mesma forma, leveduras tratadas com dithianon (2 µM; 3 h) mostraram aumento no número de células com permeabilização da membrana citoplasmática, aumento de ROS e redução na quantidade de tióis, mas sem sinais de apoptose. De forma geral, os resultados indicam que o mancozeb induz apoptose em S. cerevisiae via metacaspase dependente, enquanto o captan leva a morte por necrose e apoptose e o dithianon mata as células por necrose. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Fungicides are currently used to control fungal phytopathogenic diseases in many crops, including fruits. These compounds, especially those described as multisite activity fungicides, can affect non-target organisms like yeasts leading to their cell death by different pathways. The objective of this work was determining the mechanism of action and death of three fungicides used in viticulture (captan, dithianon and mancozeb) on Saccharomyces cerevisiae. The results showed that yeast exposition to the mancozeb (100 µM, 6 h) lead to a drastic reduction of cell viability, but no modification of cell membrane integrity. Mancozeb treated cells shown apoptotic markers as increase of intracellular reactive oxygen species (ROS), mitochondrial membrane hyperpolarization, and phosphatidylserine externalization, indicating that mancozeb induced cell death in S. cerevisiae is apoptotic and as shown by mutants strains, follow metacaspase-dependent pathway. Almost 80% of captan treated yeasts (20 µM, 6 h) showed citoplasmatic membrane dysfunction, and a drastic reduction on both non-proteic and proteic thiol concentrations. Moreover, the cells that retain their membrane integrity after exposure to the captan exhibited phosphatidylserine externalization and ROS accumulation, indicating apoptosis. YCA1 deletion mutant exhibited partial resistance to captan, suggesting a metacaspase dependent apoptotic cascade. In wine fermentations captan (2,5 µM) delays the beginning of alcoholic fermentations in a dose dependent manner, associated with a drastic reduction on yeast viability. However, in sub-lethal dosages, the reminiscent viable cells adapted to the fungicide, grow and complete fermentation with non-evident modifications on the physicochemical characteristics of the final product. Similarly, yeast cells treated with dithianon (2 µM; 3 h) showed cell membrane permeabilization, ROS increase, and decrease of cellular thiol compounds, but no signs of apoptosis. In general, the results indicated that mancozeb induces metacaspase dependent apoptotic cell death in S. cerevisiae, where captan leads to a dual necrotic and apoptotic cell death, and dithianon kills cells by necrosis.

No presente trabalho estudou-se a caracterização morfológica, a esporulação, e a patogenicidade dos fungos Alternaria solani e Alternaria alternata obtidos a partir de lesões foliares de tomateiro, pimentão, berinjela, batata, jiló e fumo; também se avaliou a sua sensibilidade à fungicidas. Para a caracterização morfológica utilizou-se como parâmetros, a mensuração do comprimento e largura do corpo e o comprimento do bico dos conídios. Os resultados obtidos, apesar de variabilidade observada estão de acordo com as caracterizações morfológicas dessas espécies, em literaturas citadas·Para esporulação estudou-se a influência da luz negra (N.U.V.) e escuro, idade do micélio (margem e interno) e a adição suplementar de água ou não no meio de esporulação. O melhor índice de esporulação de A. solani foi obtida com discos de micélio retirados da margem da colônia e incubados em luz negra (N.U.V.) e sem adição suplementar de água, enquanto que para A. alternata somente a luz negra foi suficiente para propiciar ótima esporulação. No estudo de inoculações cruzadas com os isolados de A. solani e A. alternata em tomateiro, pimentão e berinjela, verificou-se que todos os isolados foram patogênicos, exceto o isolado de A. solani de berinjela que não mostrou patogenicidade a pimentão. Entretanto, quando inoculado em sementes de tomate somente o isolado de A. solani de tomateiro foi patogênico no período de pós emergência das plântulas. Os isolados de A. alternata não demonstraram serem patogênicos em pré e pós emergência das plântulas. Porém, quando inoculados em frutos semi-maduros de tomateiro, os isolados de A. alternata de tomateiro, batata, berinjela e pimentão foram mais patogênicos do que os de jiló e fumo. Quanto a fungitoxicidade de 10 fungicidas em diferentes concentrações a um isolado de A. solani e a outro de A. alternata de tomateiro observou-se que o captafol, propiconazol e acetato de trifenil estanho a 100 ppm inibiram totalmente o crescimento micelial de A. alternata, enquanto que para A. solani somente o acetato de trifenil estanho a 100 ppm foi eficiente. / Morphological characteristics, sporulation and pathogenicity of A. solani and A. alternate were estudied. Isolates were obtained from tomato, sweet-pepper, eggplant, potato,"jiló"(Solanum gilo Raddi) and tobacco fungicidal sensibility of these isolates to various fungicidas was also evaluated. For morphological characterization, length and width of the conidium body and length of the conidium beak were measured. The results obtained confirmed the morphological variation between the two species of Altenaria,/i> studied. Influence of NUV, light and darkness, mycelium age and the addition of supplementary water to the medium was studied in relation to sporulation of both species of Alternaria. The best sporulation index for A. solani was obtained with mycelium discs removed from the colony margins, incubation under NUV light conditions and without the addition of supplementary water. For A. alternate only NUV light was enough to induce optimum sporulation. Cross inoculations tests with the various isolates of A. solani and A. alternate which were tested against tomato, pepper and eggplant, showed that all isolates were pathogenic to all hosts, with the exception of the A. solani isolate obtained from eggplant which was not pathogenic to pepper. Seed inoculations 'of tomato with A. solani was positive only for the tomato isolate, during the period of post-emergence of the seedlings. Isolates of A. alternate were not pathogenic to seedlings in pre and post-emergence. However, isolates of A. alternate,/i> from tomato, potato, eggplant and sweet-pepper were most pathogenic, whereas the"jiló"and tobacco isolates were the less agressive ones, when inoculated in semi-matured tomato fruits. With respect to the fungitoxicity of 10 fungicides, at different concentrations, against the isolates of A. solani and A. alternate from tomato, it was found that 100 ppm captafol, propiconazole and phenyltin acetate totally inhibited the mycelial growth of A. alternate, whereas for A. solani only 100 ppm phenyltin acetate was effective.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-01-21T19:44:20Z No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-11T18:06:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-11T18:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / A técnica mais utilizada para a análise dos fungicidas ditiocarbamatos envolve a determinação indireta do CS2 liberado após digestão ácida da matriz, e não distingue qual ditiocarbamato está presente na amostra. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um método analítico para determinação de etilenobisditiocarbamatos (EBDC) e propinebe em alimentos por HPLC-UV. O mancozebe, ditiocarbamato mais utilizado no Brasil, foi utilizado com composto representante dos EBDC. As culturas testadas incluíram o repolho, couve, brócolis e goiaba. O primeiro método avaliado, de cromatografia de par iônico e detecção em 286 nm, não se mostrou satisfatório devido a dificuldades com o extrato e instabilidade do perfil cromatográfico dos analitos. O segundo método avaliado envolveu a decomposição dos ditiocarbamatos, metilação, extração/clean-up por QuEChERS, e cromatografia em fase reversa (detecção em 270 nm). Foram testados oito fases de clean-up e diferentes parâmetros da fase móvel (pH, vazão e gradiente). Os melhores resultados foram encontrados com clean-up com PSA/MgSO4/carvão ativado, fase móvel água:acetonitrila em gradiente e vazão de 1,1 mL/min (t=36 min). O método foi validado com LOQ de 0,2 mg/kg para o mancozebe e o propinebe (0,11 e 0,10 mg CS2/kg, respectivamente). Dezenove amostras de couve, brócolis, repolho, goiaba e caju foram analisadas pelo método HPLC-UV validado e pelo método convencional espectrofotométrico (CS2). Foram obtidos resultados positivos para CS2 para 4 amostras de goiaba, que foram confirmados como EBDC por HPLC-UV. Resultados positivos para CS2 foram obtidos para 10 amostras de brássicas (0,1-0,9 mg/kg), que não se confirmaram no método HPLC-UV, confirmando que estes alimentos fornecem resultados falsopositivos no método CS2. O método validado ainda precisa ser melhorado para eliminar alguns interferentes das amostras que co-eluem com os analitos de interesse. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The most used method to determine dithiocarbamate fungicides in food involves the quantification of the CS2 generated after acid digestion of the matrix, and do not distinguish among the dithiocarbamates present in the sample. The objective of this study was to develop and validate a method for the direct determination of ethylenebisdithiocarbamates (EBDC) and propineb in food by HPLC-UV. Mancozeb, the most used dithiocarbamate in Brazil, was used as representative of the EBDC group. The matrices tested included cabbage, collard green, broccoli and guava. The first evaluated method, by ion pair chromatography and detection at 286 nm, did not give satisfactory results due to problems with the sample extract and instability of the analytes chromatographic profiles. The second method tested involved the decomposition of the dithiocarbamate, methylation, extraction by QuEChERS and reverse phase chromatography (detection at 270 nm). Eight clean-up phases and different mobile phase conditions (pH, flow and gradient) were tested. The best results were obtained using clean-up with PSA/MgSO4/activate charcoal, water:acetonitrile mobile phase in gradient at 1.1 mL/min (t=36 min). The method was validated at LOQ of 0.2 mg/kg for both mancozeb and propineb (0.11 and 0.10 mg CS2/kg, respectively). Nineteen samples of collard green, broccoli, cabbage, guava and cashew apple were analyzed by the validated HPLC-UV method and by the CS2 spectrophotometric method. Four guava samples gave CS2 positive results, which were confirmed as EBDC by HPLC-UV. Ten brassica samples also gave positive results for CS2 (0.1-0.9 mg/kg), which were not confirmed by HPLC-UV, agreeing with previous studies that show that these vegetable give false positive results for dithiocarbamates as CS2. The validated method still need to be improved to eliminate some matrix compounds that co-elute with the analytes of interest.

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Resumo: As abelhas melíferas são importantes agentes polinizadores em cultivos agrícolas e áreas de vegetação nativa e diretamente responsáveis pela produção apícola. Entretanto, grandes perdas de colônias manejadas vêm sendo registradas mundialmente, sendo a ampliação do uso de agrotóxicos uma das principais causas que pode estar associada a esse fenômeno. No presente trabalho, observou-se por meio de análises morfológicas, que a exposição de abelhas nutrizes em colônias, durante seis dias, a pastas de pólen contaminadas com doses ambientalmente relevantes do inseticida sistêmico fipronil (2,5 ppb) e fungicida piraclostrobina (850 ppb), isolados ou em associação, promoveu redução na altura das células secretoras das glândulas mandibulares; e que a associação dos agrotóxicos também reduziu o reservatório dessas glândulas. Nas glândulas hipofaringeanas, o número de ácinos que compõem a glândula não foi alterado, porém, a exposição aos agrotóxicos ocasionou redução na área dessas estruturas. Em conjunto, essas alterações podem reduzir a capacidade de secreção de geleia real pelas abelhas nutrizes. Estudos do proteoma da cabeça das abelhas utilizando a técnica 2D-PAGE para o fracionamento de proteínas, com identificação das proteínas em spots que apresentaram diferença de expressão (comparando grupos expostas e não-expostos aos agrotóxicos) por ESI-MS/MS, demonstraram alterações na expressão de proteínas pertencentes a família das principais proteínas geleia real (MRJPs); e de proteínas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor