Resumo: O eucalipto é a arbórea mais plantada no Brasil, devido ao seu amplo uso e após seu corte, os tocos e raízes que permanecem no local, dificultam o manejo da cultura. Com base nessa necessidade, o objetivo do presente estudo foi avaliar as características fisiológicas e funcionais de fungos basidiomicotas, isolados de campos de reflorestamento de Eucalyptus spp., com vistas à possibilidade do uso destes na destoca natural. Os fungos Pycnoporus sanguineus, Lentinus bertieri, Xylaria sp. e Lentinula edodes e um isolado não identificado foram estudados. No primeiro experimento, avaliou-se a patogenicidade dos mesmos em plantas de eucalipto urograndis (10 meses de idade), através da inoculação de disco de meio de cultura colonizado e não colonizado (Testemunha). As avaliações foram feitas aos 30 e 60 dias após a inoculação, com base no tamanho das lesões internas e externas. No segundo experimento, avaliou-se o crescimento micelial dos fungos P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes e S. ostrea, em substrato à base de serragem enriquecida com farelos, e em três composições de meios de cultura, Batata-Dextrose-Ágar (BDA); Malte-Ágar (MA) e Serragem-Dextrose-Ágar (SDA), e incubados a 23, 27 e 31ºC. No terceiro experimento, avaliou-se a produção das enzimas ligninocelulolíticas lacase e celulase, e outras ligadas à degradação de tecidos vegetais, as proteases, pectinases e lipase, em meios de cultura específicos. No quarto experimento, estudou-se, pelo método "soil block", a perda de massa (%) de corpos-de-prova de eucalipto urograndis, inoculados com os fungos P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp. e L. edodes, mantidos sob dois regimes de umidade (50 e 100%), e avaliados aos 30, 60, 90 e 120 após inoculação. Estudaram-se também as características químicas da madeira, após 120 dias da inoculação / Abstract: The Eucalyptus spp. tree is the most planted in Brazil, due to its widespread use and after its use, the stumps and roots that remains in the area, hinder crop management. Based on this need, the purpose of this work was evaluate the physiological and functional characteristics of basidiomycetes fungi, obtained in reforestation fields of Eucalyptus spp., with the possibility of using the fungi in natural stump removal. Pycnoporus sanguineus, Lentinus bertieri, Xylaria sp., Stereum ostrea and a unidentified isolate, were studied. In the first, was evaluate the fungi pathogenicity in eucalipt urograndis plants (10 months old), by means of disk inoculation into culture medium colonized and non-colonized (control) by fungi. Evaluations were performed at 30 and 60 days after inoculation based on the external and internal size of lesions. In experiment 2, the mycelial growth of P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp., L. edodes and S. ostrea was evaluated in bran and sawdust-based substrate, as well as in three culture media: Potato-Dextrose-Agar (PDA), Malt-Agar (MA) and Sawdust-Dextrose-Agar (SDA), and at three incubation temperatures, at 23, 27 and 31ºC. In experiment 3, the production of lignolytic enzymes lacase and cellulase, and other enzymes related to degradation of plant tissues, like protease, pectinases and lipase was assessed in specific culture media. In experiment 4, mass loss (%) and chemical features of eucalipt urograndis wood degraded by the soil block method were evaluated by the P. sanguineus, L. bertieri, Xylaria sp. and L. edodes fungi. Thus, test specimens were inoculated with the fungi and kept under two moisture regimes, 50 and 100%, and incubated at 25 ±2ºC. Mass loss was assessed at 30, 60, 90 and 120 days after inoculation. The chemical features of eucalipt urograndis test specimens were only analyzed at 120 days / Orientador: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Coorientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Celso Garcia Auer / Banca: Elias Taylor Durgante Severo / Mestre

Orientador: Maurício Dutra Zanotto / Coorientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Cesar Junior Bueno / Banca: Juliana Cristina Sodario Cruz / Banca: Adriana Zanin Kronka / Banca: Ivan Herman Fischer / Resumo: A mamoneira (Ricinus communis L.) é uma espécie oleaginosa tropical, cujo principal produto é o óleo extraído de suas sementes, sendo um dos mais versáteis da natureza e com muitas aplicações na indústria. Mesmo considerada uma planta rústica, a mamoneira está sujeita a doenças, dentre elas destacamos o mofo-cinzento, causada pelo fungo Amphobotrys ricini. Apesar de não ter relato no Brasil, o mofo-cinzento causado, também, pelo fungo Botrytis cinerea em mamoneira já foi descrito na Coréia do Sul, podendo vir a ser um patógeno em potencial para a cultura no Brasil. Até 1973, ambos os fungos pertenciam ao gênero Botrytis. Não é fácil distinguí-los em condições de campo. Apesar da importância da doença para a cultura, poucos são os trabalhos envolvendo a caracterização morfo-cultural, enzimática e molecular de A. ricini, bem como ensaios de avaliações de genótipos para resistência a doença e métodos de controle químico e alternativo. Considerado o patossistema R. communis versus A. ricini, o presente trabalho teve os seguintes objetivos: (a) avaliar a patogenicidade de isolados de A. ricini e de B. cinerea em frutos de mamoneira; (b) efetuar a caracterização morfo-culturais, enzimáticas e moleculares de isolados de A. ricini e de B. cinerea; (c) visualizar a colonização do A. ricini e do B. cinerea em frutos de mamoneira, utilizando Microscopia Eletrônica de Varredura; (d) avaliar genótipos de mamoneira para resistência ao mofo-cinzento; (e) investigar princípios ativos de produtos químicos (fungicidas) e de produtos alternativos visando o controle in vitro e in vivo do fungo. Todos os isolados foram patogênicos a frutos de R. communis L. As características morfoculturais analisadas confirmaram que 29 isolados pertenceram a espécie A. ricini e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The tropical oilseed species castor bean (Ricinus communis L.) whose main extracted product is the oil its from seeds. This is one of the most useful oil that comes from nature and there are many ways to be applied in industry. Even though it's considered a rustic plant, the castor beans trees are submitted diseases, among them gray-mold from fungus Amphobotrys ricini which is highlihted on this paper. The gray mold disease caused by Botrytis cinerea fungus, has already related in South Korea may be a potential pathogen in Brazil crops. Until 1973, both fungi were Botrytis gender. Distingush them on the field is an uneasy task. Despite of the disease be an important point, there are few papers envolving the morpho-cultural characteristics, enzymatic and molecular A. ricini as well the evaluation test of genotypes to get resistance against disease and chemical control or alternative methods. Considering the R. communis versus A. ricini pathosystem, this labor introduces the following objectives: a) evaluate the pathogenicity of isolates .A. ricini and B. cinerea from castor beans fruit. b) getting the morpho-cultural characteristics, enzymatics and moleculars from A. ricini and B. cinerea isolates, c) visualizing the colonization A. ricini and B. cinerea in fruit using scanning eletronic microscope d) evaluating castor beans plant genotypes against gray mold e) exploring active principles from chemical fungicides and alternative products in order to get fungus control in vitro and in vivo. Every isolated became pathogenic fruit of R. communis L. Were confirmed 29 isolated that belonged to A. ricini and 2 to B. cinerea specie as morphocultural characteristics. A. ricini isolated were able to produce cellulase enzymes, pectinase, lipase and protease, which... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Coorientador: Sérgio Antônio De Bortoli / Banca: Antônio Carlos Busoli / Banca: Luís Garrigós Leite / Resumo: O isolamento geográfico de populações de uma mesma espécie de inseto pode resultar em alterações fisiológicas, originando populações com suscetibilidade diferente às diversas táticas de controle. Plutella xylostella, a traça-das-crucíferas é uma praga cosmopolita específica das Brassicaceaes, apresentando problemas de resistência à inseticidas químicos e biológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar a influência da variabilidade populacional da traça-das-crucíferas na eficiência das táticas de controle com micro-organismos entomopatogênicos. Foram utilizados os métodos de sequenciamento do gene COI e ISSR-PCR para aferir a variabilidade populacional entre quatro populações da praga, e estudou-se a suscetibilidade delas às táticas de controle com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (20 isolados), nematoides entomopatogênicos (quatro espécies) e bactérias simbiontes de nematoides entomopatogênicos (dez isolados), avaliando-se o consumo foliar, a multiplicação do entomopatógeno no hospedeiro e estudando os aspectos biológicos em busca de efeitos subletais. . Foram selecionados seis isolados de B. bassiana e as quatro espécies de nematoides, pois foram as mais virulentas à praga. As populações são distintas devido sua variabilidade e isso resulta em diferenças no desenvolvimento de insetos que sobrevivem a aplicação dos entomopatógenos, inclusive na virulência de Steinernema brazilense sobre a população de Jaboticabal. Foi constatada também a redução de consumo foliar nos tratamentos com os entomopatógenos / Abstract: The geographical isolation of same species populations can result in physiological changes, resulting in populations with different susceptibility to various control tactics. Plutella xylostella, is a specific pest of Brassicaceaes widely spread around the globe, presenting problems with chemical and biological insecticides resistance. The aim of this study was to determine the influence of Diamondback moth populational variability in the efficiency of control tactics with entomopathogenic microorganisms. The methods used were sequencing of the COI gene and ISSR-PCR to measure the population variability among four populations of the pest, and the study of their susceptibility to tactics control with the entomopathogenic fungus B. bassiana (twenty strains), entomopathogenic nematodes (four species) and symbiotic bacteria of entomopathogenic nematodes (ten strains), evaluating leaf consumption, the multiplication of the pathogen in the host and studying the biological aspects in search of sub lethal effects. Six isolates of B. bassiana and four species of nematodes were selected, as were the more virulent to the pest. The populations are distinct because due the genetic, variability and and that results in differences in the development of insects that survive the entomopathogens application, including the virulence of Steinernema brazilense on the population of Jaboticabal. It was also found to reduce leaf consumption in the emtomopathogens treatments / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-30Bitstream added on 2014-06-13T21:00:55Z : No. of bitstreams: 1 000758914.pdf: 2991003 bytes, checksum: 814ff86acb3666f81290d8c753174c67 (MD5) / O eucalipto é acometido por diversos patógenos, podendo dificultar o desenvolvimento habitual da planta. Um caso típico e atualmente frequente é a ferrugem do eucalipto, ocasionada pelo fungo fitopatogênico Puccinia psidii G. Winter, responsável por deformações em órgãos, perda de dominância apical e redução de crescimento das plantas. Sendo assim, o presente estudo teve como principal finalidade uma avaliação prospectiva da ação dos fungos sapróbios isolados do Semiárido Nordestino, na ativação de mecanismos latentes de resistência em mudas de eucalipto, de clone suscetível, contra a ação da P. psidii. Para tanto, realizaram-se testes fisiológicos com estes fungos, visando avaliar o crescimento micelial e a concentração de esporos em diferentes meios de cultura e temperaturas de incubação. Avaliou-se o potencial inibitório destes fungos na germinação de urediniósporos do agente causal da ferrugem. Nos testes in vivo, mudas de Eucalyptus do clone H13 foram inoculadas tanto com P. psidii, quanto com os possíveis indutores de resistência, visando avaliar a severidade da doença e determinar a atividade enzimática quando os indutores estão associados ao patógeno no hospedeiro. A ação dos sapróbios no potencial de enraizamento de miniestacas também foi avaliada. Os resultados mostraram que Phialomyces macrosporus apresentou indícios de ser um ótimo indutor biótico para a ferrugem inibindo germinação de urediniósporos de P. psidii, e aumentou a atividade das enzimas Fenilalanina amônia-liase, Peroxidase e β-1,3-glucanase. Outros fungos também apresentaram resultados promissores, como Curvularia eragrostidis que diminui a severidade da ferrugem e induziu enraizamento de estacas; Stachybotrys chartarum que diminuiu a severidade da ferrugem e aumentou a atividade da β-1,3-glucanase; e Curvularia inaequalis que aumentou a atividade da enzima Fenilalanina amônialias / Eucalyptus is affected by many pathogens, which may hinder the normal development of the plant. A typical case is the frequent and currently eucalyptus rust, caused by the plant pathogenic fungus Puccinia psidii G. Winter responsible for malformations in organs, loss of apical dominance and reduced plant growth. Thus, this study had as its main purpose a prospective assessment of the action of saprobe fungi isolated from the semiarid Northeast, the activation of latent resistance in seedlings of Eucalyptus clone susceptible, against the action of P. psidii. Therefore, we tested if physiological with these fungi, to evaluate the mycelial growth and spore concentration in culture media and incubation temperatures. We evaluated the inhibitory potential of these fungi on germination of urediniospores of the causal agent of rust. In in vivo tests, seedlings of Eucalyptus clone H13 were inoculated with either P. psidii as to the possible induction of resistance, to evaluate the severity of the disease and determine the enzymatic activity when the inductors are associated with the pathogen in the host. The action of saprobes in rooting potential of cuttings was also evaluated. The results showed that Phialomyces macrosporus showed signs of being a great biotic inducer for rust inhibiting germination of urediniospores of P. psidii, and increased the activity of the enzyme phenylalanine ammonia-lyase, peroxidase and β-1,3-glucanase. Other fungi also showed promising results, as Curvularia eragrostidis which decreases the severity of rust and induced rooting; Stachybotrys chartarum which reduced the disease severity and increased the activity of β-1,3-glucanase, and Curvularia inaequalis that increased activity the enzyme phenylalanine ammonialyase.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:00:18Z : No. of bitstreams: 1 000758939.pdf: 1540122 bytes, checksum: d22f9c87e9c7253bc25e906de41e8311 (MD5) / O maior entrave à expansão da heveicultura no Brasil é a doença conhecida por mal das folhas causada pelo fungo Microcyclus ulei, cujos sintomas ocorrem nas folhas jovens, causando intensas desfolhas, diminuindo a produção de látex e até mesmo a morte em plantas suscetíveis. Consiste numa ameaça constante aos plantios do Oriente. Com a evolução dos programas de melhoramento genético tradicional, atualmente são utilizados clones híbridos interespecíficos, os quais são mais produtivos e apresentam melhor resistência aos patógenos. Através dos programas de melhoramento genético tradicional, não houve progresso significativo quanto à resistência ao mal das folhas, devido à seleção serem dirigida para clones com resistência completa. Neste patossistema a resistência horizontal (RH) e resistência vertical (RV) podem agir simultaneamente, sendo complexa e de difícil quantificação. Este trabalho teve como objetivo caracterizar o tipo de lesão foliar do patossistema Hevea sp. x M. ulei, verificar a suscetibilidade clonal aos patógenos, analisar a freqüência de infecção visando quantificar a resistência no patossistema Hevea sp. x M. ulei e sugerir clones diferenciadores de seringueira além de quantificar as raças de M. ulei no Brasil. Os parâmetros monocíclicos (período latente e diâmetro de lesão) são aplicáveis na quantificação de resistência no patossistema Hevea sp. x M. ulei. O período de latência teve pouca variação entre os clones. O diâmetro de lesão teve variação ampla entre os clones, sendo um parâmetro discriminante para a resistência horizontal e resistência vertical. Várias raças deste patógeno foram descritas no Brasil, baseada em uma série de clones diferenciadores. Diante disso foi utilizado testes com 11 clones diferenciadores já conhecidos na literatura: MDF 180, Fx 3844, Fx 985, Fx 4098, Fx 2261, Fx 2804, Fx 3899, IAN 6158, IAN 3087,... / The biggest barrier to expansion of rubber cultivation in Brazil is the disease known as leaf blight caused by the fungus Microcyclus ulei whose symptoms occur in young leaves, causing severe defoliation, reducing the production of latex and even death in susceptible plants. Is a constant threat to the plantations of the East. With the evolution of traditional breeding programs currently interspecific hybrid clones are used, which are more productive and have better resistance to pathogens. Through traditional breeding programs, there was no significant progress for resistance to leaf blight, due to selection be directed to clones with complete resistance. This pathosystem horizontal resistance (HR) and vertical resistance (VR) can act simultaneously, being complex and difficult to quantify. This study aimed to characterize the type of leaf injury pathossystem Hevea sp. x M. ulei verify clonal susceptibility to pathogens, to analyze the frequency of infection to quantify the resistance in the pathosystem Hevea sp. x M. ulei and suggest different clones of rubber and quantifies the races of M. ulei in Brazil. Monocyclic parameters (latent period and lesion diameter) are applicable in the quantification of resistance in the pathosystem Hevea sp. x M. ulei. The latency period had little variation among clones. The diameter of the lesion was wide variation between the clones, being a discriminant parameter for horizontal resistance and vertical resistance. Several races of this pathogen have been described in Brazil, based on a number of clones’ differentiators. Grounded on the reactions of 11 different clones already known in the literature: MDF 180, Fx 3844, Fx 985, Fx 4098, Fx 2261, Fx 2804, Fx 3899, IAN 6158, IAN 3087, IAN 717 and PA 31 containing the species Hevea brasiliensis, Hevea benthamiana and Hevea pauciflora, we performed an analysis grouping for the binary data referring to virulence ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-30Bitstream added on 2014-06-13T19:19:11Z : No. of bitstreams: 1 chagas_ha_dr_botfca.pdf: 3340584 bytes, checksum: a5f328a32a900b709ce0bfda495b581c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mamoneira (Ricinus communis L.) é uma espécie oleaginosa tropical, cujo principal produto é o óleo extraído de suas sementes, sendo um dos mais versáteis da natureza e com muitas aplicações na indústria. Mesmo considerada uma planta rústica, a mamoneira está sujeita a doenças, dentre elas destacamos o mofo-cinzento, causada pelo fungo Amphobotrys ricini. Apesar de não ter relato no Brasil, o mofo-cinzento causado, também, pelo fungo Botrytis cinerea em mamoneira já foi descrito na Coréia do Sul, podendo vir a ser um patógeno em potencial para a cultura no Brasil. Até 1973, ambos os fungos pertenciam ao gênero Botrytis. Não é fácil distinguí-los em condições de campo. Apesar da importância da doença para a cultura, poucos são os trabalhos envolvendo a caracterização morfo-cultural, enzimática e molecular de A. ricini, bem como ensaios de avaliações de genótipos para resistência a doença e métodos de controle químico e alternativo. Considerado o patossistema R. communis versus A. ricini, o presente trabalho teve os seguintes objetivos: (a) avaliar a patogenicidade de isolados de A. ricini e de B. cinerea em frutos de mamoneira; (b) efetuar a caracterização morfo-culturais, enzimáticas e moleculares de isolados de A. ricini e de B. cinerea; (c) visualizar a colonização do A. ricini e do B. cinerea em frutos de mamoneira, utilizando Microscopia Eletrônica de Varredura; (d) avaliar genótipos de mamoneira para resistência ao mofo-cinzento; (e) investigar princípios ativos de produtos químicos (fungicidas) e de produtos alternativos visando o controle in vitro e in vivo do fungo. Todos os isolados foram patogênicos a frutos de R. communis L. As características morfoculturais analisadas confirmaram que 29 isolados pertenceram a espécie A. ricini e... / The tropical oilseed species castor bean (Ricinus communis L.) whose main extracted product is the oil its from seeds. This is one of the most useful oil that comes from nature and there are many ways to be applied in industry. Even though it's considered a rustic plant, the castor beans trees are submitted diseases, among them gray-mold from fungus Amphobotrys ricini which is highlihted on this paper. The gray mold disease caused by Botrytis cinerea fungus, has already related in South Korea may be a potential pathogen in Brazil crops. Until 1973, both fungi were Botrytis gender. Distingush them on the field is an uneasy task. Despite of the disease be an important point, there are few papers envolving the morpho-cultural characteristics, enzymatic and molecular A. ricini as well the evaluation test of genotypes to get resistance against disease and chemical control or alternative methods. Considering the R. communis versus A. ricini pathosystem, this labor introduces the following objectives: a) evaluate the pathogenicity of isolates .A. ricini and B. cinerea from castor beans fruit. b) getting the morpho-cultural characteristics, enzymatics and moleculars from A. ricini and B. cinerea isolates, c) visualizing the colonization A. ricini and B. cinerea in fruit using scanning eletronic microscope d) evaluating castor beans plant genotypes against gray mold e) exploring active principles from chemical fungicides and alternative products in order to get fungus control in vitro and in vivo. Every isolated became pathogenic fruit of R. communis L. Were confirmed 29 isolated that belonged to A. ricini and 2 to B. cinerea specie as morphocultural characteristics. A. ricini isolated were able to produce cellulase enzymes, pectinase, lipase and protease, which... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas,Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-27T15:00:37Z No. of bitstreams: 1 2014_MarcoAurelioNinomiaPassos.pdf: 16854510 bytes, checksum: a4998054652f2ebc80b59742693cec5f (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-10-31T15:40:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MarcoAurelioNinomiaPassos.pdf: 16854510 bytes, checksum: a4998054652f2ebc80b59742693cec5f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-31T15:40:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MarcoAurelioNinomiaPassos.pdf: 16854510 bytes, checksum: a4998054652f2ebc80b59742693cec5f (MD5) / A Sigatoka Amarela em banana (Musa spp.), causada pelo fungo Mycosphaerellamusicola, provoca desordem significativa de área foliar e amadurecimento prematuro do fruto. O desenvolvimento de genótipos resistentes a fungos patogênicos é de fundamental importância. A fim de desenvolver um recurso de genômica funcional para essa cultura oferencendo compreensão sobre os mecanismos moleculares das respostas de Musa a estresses bióticos, foi realizado um estudo de pirosequenciamento do transcritoma de Musa acuminata utilizando genótipos contrastantes em resistência ao patógeno M. musicola. Amostras de RNA total foram preparadas a partir do material foliar dos genótipos Calcutta 4 (resistente) e Cavendish Grande Naine (suscetível), ambos não infectados (controles não inoculados) e artificialmente desafiados com o patógeno. O estudo gerou 978.133 seqüências de alta qualidade, com um comprimento médio de 334pb e totalizando 466Mb, das quatro bibliotecas de cDNAseqüenciadas usando o 454 GS-FLX Titanium. A montagem de novo gerou 36.384 e 35.269 seqüênciasunigenes de M. acuminataCalcutta 4 e Cavendish Grande Naine, respectivamente. Seqüências montadas foram funcionalmente mapeadas nos termos do Gene Ontology (GO). As funções do unigenes cobriram uma ampla gama de funções moleculares, processos biológicos e componentes celulares. Os genes oriundos de uma série de vias relacionadas com a defesa foram observadas em transcritos a partir de cada biblioteca de cDNA.Inúmeros fatores de transcrição foram identificados, que são tipicamente envolvidos na regulação do desenvolvimento vegetal, sinalização e resposta ao meio ambiente, entre outros papéis. Muitos deles são também conhecidas por estarem envolvidas na transdução de sinal e regulação da expressão de genes responsivos ao estresse. Mais de 99% dos unigenes mapearam em regiões exônicas no genoma referência de M. acuminata DH Pahang. Além disso, a extração de proteínas foi realizada a partir dos materiais foliares inoculados e não inoculados. A focalização isoelétrica foi realizada utilizando o sistema IPGphor. A segunda dimensão foi realizada utilizando um gel de SDS-PAGE a 12%, com géis corados com solução de azul de Coomassie G-250. Os géis foram digitalizados usando um scanner ImageScanner II (GE Healthcare), e as imagem foram analisadas utilizando o software Imagem Master 2D Platinum 7.0 (GeneBio). Foramfeitastambémanálisesparadetecção de spotscomunsaomesmo cultivar (controle e tratado), bemcomo a identificação de spots com expressãodiferencial, e detecção de spotspresentes em apenasumacondição, denominados de spotsexclusivos. No cultivar resistente Calcutta 4, foramobservados 7 spotscomumaexpressãopelomenos 1,5 vezesmaior no tratadoquandocomparadoaocontrole. O padrão de expressãofoidiferente no cultivar suscetível, onde 1 spotapresentoudiferença de expressão entre o controle e o tratado. Os resultados da análise proteômica desta interação poderá gerar informações importantes, tais como: os tipos de proteínas expressas, as mudanças pós-tranducionais e respostas a diferentes condições ambientais, o que representa um elo entre a informação genotípica e fenotípica. Essa análise proteômica, em sobreposição com as informações transcritômicas geradas pelo seqüenciamentomassal com NGS, podem vir a beneficiar futuros programas de melhoramento genético de Musa na obtenção de genótipos resistentes. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Sigatoka leaf spot disease in banana (Musa spp.), caused by Mycosphaerella mosicola, causes significant reduction in functional leaf area and premature ripening of fruit. The development of genotypes resistant to fungal pathogens is of paramount importance. In order to develop a functional genomics resource for this crop which offers insights into molecular mechanisms of responses in Musa to biotic stresses, we performed a pyrosequencing study of the transcriptome in Musa acuminata genotypes contrasting in resistance to the fungal pathogen M. musicola. Total RNA samples were prepared from whole plant leaf material from genotypes Calcutta 4 (resistant) and Cavendish Grande Naine (susceptible), both uninfected (non-inoculated controls) and artificially challenged with the pathogen. The study generated 846,762 high quality sequences reads, with an average length of 334pb and totaling 283MSb, from four full-length enriched cDNA libraries sequenced using a 454 GS-FLX system pyrosequencer with Titanium chemistry. De novo assembly generated 36,384 and 35,269 unigene sequences for M. acuminate Calcutta 4 and Cavendish Grande Naine respectively. Assembled sequences were functionally mapped to Gene Ontology (GO) terms. Unigene functions covered a diverse range of molecular functions, biological processes and cellular components. Genes from a number of defense-related pathways were observed in transcripts from each library cDNA. Numerous transcription factors were also identified, which are typically involved in regulation of plant development, signaling and response to environment, amongst others roles. Many are also known to be involved in signal transduction and expression regulation of stress-responsive genes. Over 99% of contig unigenes mapped to exon regions in the reference M. acuminata DH Pahang whole genome sequence. Furthermore, protein extraction was conducted from the inoculated and non-inoculated leaf materials. Isoelectric focusing was performed using the IPGphor system. A second dimension was performed using an SDS-PAGE gel at 12%, with gels stained with Coomassie Blue solution G-250. Gels were scanned using a scanner ImageScanner II (GE Healthcare), with image analysis performed using the software Image Master 2D Platinum 7.0 (GeneBio). Assays to detect common spots were also made at the same cultivar (control and treated), as well as the identification of differentially expressed spots, and detection of spots present in only one condition, called exclusive spots. In the resistant cultivar Calcutta 4, 7 spots were observed at least 1,5 times higher expression in the treated compared with the control. The expression pattern was different in the susceptible cultivar which showed 1 spot difference in expression between control and treated. The results of the proteomic analysis of this interaction can generate important information such as: types of expressed proteins, post-translation changes and responses to different environmental conditions, representing a link between genotyp and phenotypic information. Proteomic analysis, overlapping with transcriptome information for this pathosystem, generated by NGS sequencing, can potentially benefit future programs for genetic improvement of Musa in development of resistant genotypes

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-01-21T19:44:20Z No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-11T18:06:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-11T18:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DeniseCarvalhoMello.pdf: 3318901 bytes, checksum: d5b24e27c85cc59c29695c0b5376c58d (MD5) / A técnica mais utilizada para a análise dos fungicidas ditiocarbamatos envolve a determinação indireta do CS2 liberado após digestão ácida da matriz, e não distingue qual ditiocarbamato está presente na amostra. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um método analítico para determinação de etilenobisditiocarbamatos (EBDC) e propinebe em alimentos por HPLC-UV. O mancozebe, ditiocarbamato mais utilizado no Brasil, foi utilizado com composto representante dos EBDC. As culturas testadas incluíram o repolho, couve, brócolis e goiaba. O primeiro método avaliado, de cromatografia de par iônico e detecção em 286 nm, não se mostrou satisfatório devido a dificuldades com o extrato e instabilidade do perfil cromatográfico dos analitos. O segundo método avaliado envolveu a decomposição dos ditiocarbamatos, metilação, extração/clean-up por QuEChERS, e cromatografia em fase reversa (detecção em 270 nm). Foram testados oito fases de clean-up e diferentes parâmetros da fase móvel (pH, vazão e gradiente). Os melhores resultados foram encontrados com clean-up com PSA/MgSO4/carvão ativado, fase móvel água:acetonitrila em gradiente e vazão de 1,1 mL/min (t=36 min). O método foi validado com LOQ de 0,2 mg/kg para o mancozebe e o propinebe (0,11 e 0,10 mg CS2/kg, respectivamente). Dezenove amostras de couve, brócolis, repolho, goiaba e caju foram analisadas pelo método HPLC-UV validado e pelo método convencional espectrofotométrico (CS2). Foram obtidos resultados positivos para CS2 para 4 amostras de goiaba, que foram confirmados como EBDC por HPLC-UV. Resultados positivos para CS2 foram obtidos para 10 amostras de brássicas (0,1-0,9 mg/kg), que não se confirmaram no método HPLC-UV, confirmando que estes alimentos fornecem resultados falsopositivos no método CS2. O método validado ainda precisa ser melhorado para eliminar alguns interferentes das amostras que co-eluem com os analitos de interesse. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The most used method to determine dithiocarbamate fungicides in food involves the quantification of the CS2 generated after acid digestion of the matrix, and do not distinguish among the dithiocarbamates present in the sample. The objective of this study was to develop and validate a method for the direct determination of ethylenebisdithiocarbamates (EBDC) and propineb in food by HPLC-UV. Mancozeb, the most used dithiocarbamate in Brazil, was used as representative of the EBDC group. The matrices tested included cabbage, collard green, broccoli and guava. The first evaluated method, by ion pair chromatography and detection at 286 nm, did not give satisfactory results due to problems with the sample extract and instability of the analytes chromatographic profiles. The second method tested involved the decomposition of the dithiocarbamate, methylation, extraction by QuEChERS and reverse phase chromatography (detection at 270 nm). Eight clean-up phases and different mobile phase conditions (pH, flow and gradient) were tested. The best results were obtained using clean-up with PSA/MgSO4/activate charcoal, water:acetonitrile mobile phase in gradient at 1.1 mL/min (t=36 min). The method was validated at LOQ of 0.2 mg/kg for both mancozeb and propineb (0.11 and 0.10 mg CS2/kg, respectively). Nineteen samples of collard green, broccoli, cabbage, guava and cashew apple were analyzed by the validated HPLC-UV method and by the CS2 spectrophotometric method. Four guava samples gave CS2 positive results, which were confirmed as EBDC by HPLC-UV. Ten brassica samples also gave positive results for CS2 (0.1-0.9 mg/kg), which were not confirmed by HPLC-UV, agreeing with previous studies that show that these vegetable give false positive results for dithiocarbamates as CS2. The validated method still need to be improved to eliminate some matrix compounds that co-elute with the analytes of interest.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-09-20T13:36:50Z No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsStangerlin.pdf: 14158894 bytes, checksum: c1bfe7066feba591dfd67abac94b74a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2012-09-20T20:43:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsStangerlin.pdf: 14158894 bytes, checksum: c1bfe7066feba591dfd67abac94b74a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-20T20:43:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsStangerlin.pdf: 14158894 bytes, checksum: c1bfe7066feba591dfd67abac94b74a8 (MD5) / O objetivo desse estudo foi monitorar as propriedades biológicas, psico-físicas, físicas, químicas e mecânicas de madeiras submetidas ao ataque de fungos apodrecedores. Para tanto, corpos de prova de três espécies, Simarouba amara, Cariniana micrantha e Dipteryx odorata, foram submetidos a ensaios de apodrecimento acelerado com dois tipos de fungos, podridão parda (Gloeophyllum trabeum) e podridão branca (Trametes versicolor), durante 20 semanas, ao empregar metodologia adaptada da ASTM D 2017. A propriedade biológica foi monitorada por meio da determinação de perda de massa, método convencional. As técnicas não destrutivas de colorimetria e DRIFT-MIR foram empregadas no monitoramento dos parâmetros colorimétricos (psico-físicos), de acordo com o sistema CIELab, e químicos, mediante avaliação de diferentes intensidades de bandas relacionadas aos grupos funcionais dos polissacarídeos e lignina, respectivamente. A propriedade física da molhabilidade foi caracterizada com auxilio de goniômetro, por meio do qual foram medidos os ângulos de contato da gota d’água (técnica da gota sessil). E por fim, avaliou-se a perda de resistência mecânica por meio de metodologia destrutiva ao empregar o durômetro de Rockwell. Dentre os resultados expostos e discutidos pode-se destacar que: A madeira de Dipteryx odorata apresentou maior resistência natural, quando comparada a Simarouba amara e Cariniana micrantha. Em relação aos fungos apodrecedores, Gloeophyllum trabeum proporcionou maiores alterações nas propriedades tecnológicas das madeiras avaliadas. O período de 8 a 12 semanas, de acordo com ASTM D 2017, não foi suficiente para caracterização da resistência natural, por meio da perda de massa. O período de tempo necessário para caracterização da resistência natural ao fungo Trametes versicolor foi de 20, 14 e 12 semanas, enquanto que para Gloeophyllum trabeum foi de 20, 18 e 14 semanas para as madeiras de Simarouba amara, Cariniana micrantha e Dipteryx odorata, respectivamente. O ensaio de dureza Rockwell apresentou viabilidade para ser empregado como ferramenta complementar ou principal na caracterização da deterioração da madeira por fungos apodrecedores sendo sensível na predição dos estágios iniciais. Dentre os parâmetros colorimétricos, os principais estimadores da resistência natural aos fungos de podridão branca e parda foram a coordenada b* e a claridade (L*), respectivamente. Por meio do DRIFTMIR verificou-se que o ataque do fungo Trametes versicolor proporcionou redução, de modo indistinto, na intensidade das bandas intrínsecas aos polissacarídeos e a lignina, exceto para a madeira de Cariniana micrantha. Para o fungo Gloeophyllum trabeum, apesar das intensidades de algumas bandas relacionadas a lignina serem decrescidas, a principal característica foi a redução da intensidade das bandas relacionadas aos polissacarídeos. Com relaçãoo a técnica da gota séssil apesar do alto desvio padrão do angulo de contato, as amostras apodrecidas apresentaram tendência de redução do espalhamento da gota d’água, proporcionando menor molhabilidade. De modo geral, as técnicas não convencionais de ensaio foram eficientes na diferenciação dos ataques proporcionados pela podridão branca e parda. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to evaluate biological, psycho-physical, physical, chemical and mechanical properties of wood submitted to decay fungi. For this purpose, samples of three species, Simarouba amara, Cariniana micrantha and Dipteryx odorata, were submitted for accelerated decay with two types of fungi, brown rot (Gloeophyllum trabeum) and white rot (Trametes versicolor), for 20 weeks, using the methodology adapted of ASTM D 2017. The biological property was monitored by determining the weight loss, the conventional method. The non-destructive techniques colorimetry and DRIFT-MIR were used in monitoring the colorimetric (psycho-physical) parameters, according to the CIELab system, and chemicals, through evaluation of different intensities of bands related to the functional groups of the polysaccharides and lignin, respectively. The physical property of wetting was characterized with the aid of a goniometer, by means of which were measured drop of water contact angles (sessile drop technique). Finally, we evaluated the mechanical strength loss by destructive methods to use the Rockwell hardness tester. Among the results presented and discussed may be noted that: The wood Dipteryx odorata showed a higher natural resistance when compared to Simarouba amara and Cariniana micrantha. For rot fungi, Gloeophyllum trabeum resulted in higher changes in technological properties of wood tested. The period 8-12 weeks, according to ASTM D 2017, was not sufficient for characterization of the natural resistance by mass loss. The time required for the characterization of natural resistance to fungi Trametes versicolor was 20, 14 and 12 weeks, while for Gloeophyllum trabeum was 20, 18 and 14 weeks for the wood Simarouba amara, Cariniana micrantha and Dipteryx odorata, respectively. The Rockwell hardness test was viable to be used as a complementary or principal tool in the characterization of deterioration of wood by decay fungi, being sensitive in predicting the early stages. Among the colorimetric parameters, the main estimators of natural resistance to white rot fungi and brown were the coordinate b* and lightness (L*), respectively. Through the DRIFT-MIR was found that the fungus attack Trametes versicolor provided reduction in a similar way, the intensity of bands intrinsic to polysaccharides and lignin, except for wood Cariniana micrantha. To the fungus Gloeophyllum trabeum, although some of the intensities of bands related to the lignin being reduced, the main characteristic was the reduction in intensity of the bands related to the polysaccharides. With respect to the sessile drop technique, although high standard deviation of the contact angle, the decayed samples tended to reduce the scattering drop of water, with lower wettability. In general, the test unconventional techniques were able to differentiate the attacks provided by white and brown rot.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T23:52:18Z No. of bitstreams: 1 2010_FelixGoncalvesSiqueira.pdf: 10129033 bytes, checksum: fa562cbd8a4ce2f241200fa978674cb8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T23:53:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_FelixGoncalvesSiqueira.pdf: 10129033 bytes, checksum: fa562cbd8a4ce2f241200fa978674cb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-16T23:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_FelixGoncalvesSiqueira.pdf: 10129033 bytes, checksum: fa562cbd8a4ce2f241200fa978674cb8 (MD5) / A complexidade e heterogeneidade das estruturas de holoceluloses de diferentes resíduos agrícolas requerem a ação sinérgica de enzimas para a sua completa hidrólise, envolvendo: celulase, hemicelulase e poligalacturonase. Os fungos filamentosos, Penicillium corylophilum, Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Aspergillus awamori, Emericella nidulans, Acrophialophora nainiana, Pleurotus ostreatus, Agaricus brasiliensis e Trichoderma reesei, produzem holocelulases, quando cultivados em meios líquidos e sólidos tendo como fonte de carbono diferentes materiais lignocelulósicos, tais como engaço de bananeira, bagaço de cana-deaçúcar, resíduos do beneficiamento de algodão, resíduos da colheita de milho, entre outros. A purificação parcial em cromatografia de filtração em gel Sephacryl-200 do extrato bruto de P. corylophilum crescido piolho-de-algodão-sujo em meio líquido mostrou um pico de atividade de xilanase com 0,340 UI.mL-1. O extrato bruto de A. flavus crescido em engaço de bananeira apresentou atividades relevantes para xilanase, poligacturonase, porém teve atividade de endoglucase cinco vezes menor que o T. reesei RUT C-30. O fracionamento do extrato bruto do A. flavus (engaço de bananeira) foi realizado por membranas de ultrafiltração (PM: 300, 100, 50 e 30), mostrando multiplicidade de endoglucanase e poligacturonase. Os extratos brutos dos cultivos de A. flavus foram submetidos a um processo de purificação (ultrafiltração, cromatografia de filtração em gel e troca iônica), destacando na produção de xilanase e pectinase. O extrato bruto de A. flavus crescido em engaço de bananeira mostrou no processo têxtil de biopurga resultados semelhantes aos apresentados pelos extratos enzimáticos comerciais Denimax Acid L e Viscozyme. No entanto os processos têxteis de biopolimento e bioestonagem tiveram baixo rendimento, provavelmente em função do manchamento causado pelos pigmentos do extrato bruto e pouca atividade de endoglicanase. A. oryzae, A. terreus e E. nidulans foram isolados de compostagem natural de resíduos do rebeneficiamento de algodão, os quais apresentaram atividades relevantes de holocelulases quando crescidos em engaço de bananeira e piolho-de-algodão-sujo. A cromatografia de filtração em gel S-400 do concentrado em PM 300 do extrato bruto de E. nidulans crescido em piolho-de-algodão mostrou para atividade de 0,509 UI.mL-1 para arabinofuranosidase, como também dois picos de xilanase que foram revelados por meio de zimograma. Os cultivos de A. brasiliensis CS1, P. ostreatus H1 e A. flavus apresentaram atividades de holocelulases relevantes quando cultivados em meio sólido, nas seguintes fontes de carbono: resíduos da colheita de milho, bagaço de cana-de-açúcar e engaço de bananeira. A. oryzae, A. terreus e E. nidulans apresentaram atividades de holocelulases usando fontes de carbono lignocelulósica em cultivo líquido ou sólido, apresentando efeito de temperatura (40 a 65C) e pH diversificado (ácido, neutro e alcalino), dependendo do fungo, tipo de substrato e forma de cultivo. O perfil proteômico desses fungos variou quanto ao tipo de substrato usado como fonte de carbono, presença ou não da enzima PNGase F no gel uni e bidimensional. O fitofissionoma cerradão-floresta mostrou uma diversidade de fungos filamentosos do solo, serrapilheira ou troncos em decomposição, quando isolados em meios de cultura e temperaturas diferentes. O uso de lacases e poli-etileno-glicol 4000 junto com enzimas comerciais em hidrólise enzimática de resíduos da colheita de milho (corn stover) após o pré-tratamento deste material lignocelulósico (Liquid Hot Water – LHW) mostrou um rendimento de 20% a mais quando comparado com a mesma condição sem a presença desses aditivos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The complexity and heterogeneity of structures of holocellulose from different agricultural residues demand the synergistic action of enzymes for complete hydrolysis involving cellulase, hemicellulase and polygalacturonase. The filamentous fungi Penicillium corylophilum, Aspergillus flavus, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Aspergillus awamori, Emericella nidulans, Acrophialophora nainiana, Pleurotus ostreatus, Agaricus brasiliensis and Trichoderma reesei produce holocellulases when grown on liquid and solid media containing as carbon source different lignocellulosic materials such as banana stem, sugarcane bagasse, cotton residues, and corn stover, among others. Partial purification by gel filtration chromatography on Sephacryl-200 of crude extract of P. corylophilum grown on dirty cotton residue and liquid medium showed a peak of xylanase activity with 0.340 UI.mL-1. The crude extract of A. flavus grown on banana stem showed relevant activities of xylanase and polygacturonase, although displayed an endoglucase activity five times smaller than observed from T. reesei RUT C-30. The fractionation of the crude extract of A. flavus (banana stem) was performed using ultrafiltration membranes (PM: 300, 100, 50 and 30), showing the multiplicity of endoglucanase and xylanase. Culture extracts of A. flavus underwent a process of purification (ultrafiltration, chromatography, gel filtration and ion exchange), especially in the production of xylanase and polygalacturonase. In the process of textile bioscouring, the crude extract of A. flavus grown on banana stem showed results similar to those observed with commercial enzyme extracts Denimax Acid L and Viscozyme. However, the processes of textile biostoning and biopolishing had only a low yield, probably as a result of staining by pigments. A. oryzae, A. terreus, and E. nidulans were isolated from natural waste compost-based re-beneficiation of cotton, and showed relevant activities of holocellulase when grown on banana stem and dirtycotton residue. Gel filtration chromatography in Sephacryl-400 of the crude extract of E. nidulans grown in dirty-cotton showed an arabinofuranosidase activity of 0.509 UI.mL-1, as well as two peaks of xylanase that were revealed by zymogram analysis. Cultures of A. brasiliensis CS1, P. ostreatus H1 and A. flavus showed relevant holocellulase activities when grown on solid medium containing corn crop residues, sugarcane bagasse and banana stem as carbon sources. A. oryzae, A. terreus, and E. nidulans showed holocellulase activities over varied temperatures (40-65C) and pH (acid, neutral and alkaline), depending on the substrate type and cultivation form. The proteomic profile in two dimensional gels of these fungi depended of the type of substrate used as carbon source, and the presence or absence of the enzyme PNGase F. The savanna forest phytofisionomy showed a diversity of filamentous fungi from soil, litter or decaying logs, when isolated in culture media and different temperatures. The use of laccases and poly-ethylene glycol 4000 together with commercial enzymes in the enzymatic hydrolysis of corn stover after pretreatment of lignocellulose (Liquid Hot Water - LHW) showed an increased yield of 20% when compared with the same condition without the presence of these additives.