Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Durante o tratamento ortodôntico, a resposta inicial dos tecidos periodontais ao estímulo mecânico envolve várias alterações estruturais e bioquímicas que permitem a movimentação do dente. As metaloproteinases da matriz (MMPs) parecem desempenhar um papel importante na manutenção da integridade funcional da matriz extracelular periodontal. O objetivo do presente estudo foi avaliar, em diferentes intervalos de tempo, os níveis de metaloproteinases da matriz -1, -2, -3, -7, -8, -12 e -13 no fluido gengival (FG) de caninos superiores submetidos ao movimento de distalização e testar a hipótese de possíveis alterações nos níveis destas MMPs com o emprego de forças ortodônticas. Amostras de FG foram obtidas de dezesseis pacientes ortodônticos saudáveis (nove do sexo masculino e sete do sexo feminino, com idades entre 13 e 27 anos, média de idade 17,7 anos) que possuíam indicação de exodontias dos primeiros pré-molares superiores e tiveram os caninos distalizados como parte da terapia ortodôntica. Um dos caninos superiores foi distalizado ortodonticamente, sendo considerado dente teste. O canino contralateral não foi submetido a nenhuma força, no entanto foi incluído na aparatologia ortodôntica e utilizado como controle. A coleta de FG foi realizada nos sítios mesial (tensão) e distal (pressão) dos dentes testes e controles 7 dias antes da montagem da aparatologia ortodôntica, imediatamennte após a aplicação da força ortodôntica, e após 1 h, 24 h, e 7, 14 e 21 dias, respectivamente denominados -7d, 0h, 1h, 24h, 7d, 14d e 21d. A arcada superior de cada paciente foi dividida em um lado teste e um lado controle. Os resultados mostraram que foram encontradas diferenças significativas no volume do FG apenas nos intervalos de tempo entre -7d e 0h nos lados controle-pressão (CP), teste-tensão (TT) e teste-pressão (TP). Em TP foi observado ainda aumento do volume entre os tempos 0h e 14d. Foi possível detectar no FG as MMPs estudadas nos lados controle/teste e lados pressão/tensão, em todos os intervalos de tempo. As flutuações dos níveis das MMPs apresentaram poucas alterações significativas nos diferentes intervalos de tempo, nos lados controle/teste e lados pressão/ tensão. As diferenças intergrupos (TT, TP, CT e CP) em cada tempo não mostraram resultados significativos assim como as comparações entre os lados pressão e tensão para cada tempo individualmente. Os níveis de expressão da MMP-8 foram muito superiores aos das outras MMPs avaliadas, porém sem diferenças signficativas entre os lados teste e controle. / During orthodontic treatment, the initial response of periodontal tissues to mechanical stress involves several structural and biochemical changes that allow the tooth movement. The matrix metalloproteinases (MMPs) seem to play an important role in maintaining the functional integrity of periodontal extracellular matrix. The aim of this study was to evaluate, in different periods, the levels of matrix metalloproteinases -1, -2, -3, -7, -8, -12 and -13 in gingival crevicular fluid (GCF) of the superior caninessubmitted to distalization movement and test the hypothesis of possible changes in these MMPs levels with the use of orthodontic forces. GCF samples were obtained from sixteen healthy orthodontic patients (nine males and seven females with ages ranging between 13 and 27 years, mean age 17.7 years) who had indication of first superior bicuspids extraction with cuspids distalization as part of orthodontic treatment. One maxillary canine was subjected to a distalizing force, and considered as the test tooth. The contralateral canine, which was not subjected to any force but was included in an orthodontic appliance, was used as a control. GCF sampling was performed at both mesial (tension) and distal (pressure) sites of the controls and tests teeth 7 days before applying the orthodontic appliance, immediately before applying the orthodontic force, and after 1 h, 24 h, and 7, 14 and 21 days, respectively called -7d, 0h, 1h, 24h, 7d, 14d and 21 d. The results showed significant differences in the GCF volume only in time intervals of 0h-7d on control-pressure (CP), test-tension (TT) and test-pressure (TP) sides. In TP side was observed an increase in volume between the time 0h and 14d. It was possible to detect in GCF all MMPs studied on control/test sides and pressure/tension sides at all periods. Fluctuations in levels of MMPs showed few significant changes in different periods on the sides control/test and pressure/tension. The differences between the groups (TT, TP, CT and CP) in each time showed no significant results as well as the comparisons between pressure and tension sides for each period individually. The expression levels of MMP-8 were much higher than those of other MMPs evaluated, but with no significant differences between sides test and control.

Sabe-se que o controle do biofilme supragengival por meio da escovação dentária é fundamental para prevenção de gengivite e cárie dentária. Entretanto, a literatura ainda é escassa quanto a características de um modelo de escova manual ideal, que seja t.1o efetiva no controle de placa, quanto segura. O objetivo desta dissertação foi avaliar a eficácia de duas escovas manuais na remoção do biofilme supragengival, bem como investigar a relação entre dureza de cerdas e formato da ponta de escovas manuais quanto a efeitos adversos da escovação. Esta dissertação é compost.'l por dois estudos, um ensaio clínico randomizado (ECR) e uma revisão sistemática da literatura. O ECR comparou a eficácia na remoção de biofilme supragengival de duas escovas macias em 70 voluntários que foram randomizados para os grupos Colgate SlimSoft ou Curaprox CS5460. O exame de placa por meio do Índice de Placa da Marinha, modificado por Rustogi foi realizado no momento inicial pré- e pósescovação supervisionada por 1 minuto, bem como após 7 dias de utilização da escova e dentifrício fornecidos. A escova SlimSoft apresentou uma maior redução de escores de placa interproximais e de boca toda, tanto na pós-escovação inicial (p<O.OS), quanto após 7 dias, em que houve um incremento na redução de placa dessas áreas, quando comparado a escova Curaprox (p<O.OS). Assim, a escova SlimSoft apresentou uma maior eficácia para remoção do biofilme supragengival quando comparada à Curaprox. A revisão sistemática da literatura investigou se a dureza e a ponta das cerdas de escovas manuais estão associadas com efeitos adversos da escovação. Para isso, três bancos de dados eletrônicos foram acessados utilizado uma estratégia de busca pré-estabelecida. Dois pesquisadores analisaram a inclusão dos títulos, resumos, leitura completa e extração de dados dos artigos e, se um consenso não fosse possível. um terceiro pesquisador estaria incluído neste processo. De 126 artigos lidos na íntegra, 11 foram elegíveis para inclusão. Cinco estudos analisaram ponta das certas das escovas, dois a dureza e quatro investigaram tanto a ponta da cerda quanto a dureza de escovas. Ainda, quatro estudos apresentaram efeito adverso como desfecho primário. Observou-se mais lesões gengivais quanto maior a dureza das cerdas das escovas. As lesões de recessão gengiva! permaneceram estáveis ao longo do tempo e o número de lesões de abrasão gengiva! foram semelhantes com o uso de escovas macias, tanto com cerdas afiladas, quanto arredondadas. Os estudos que tiveram segurança como desfechos secundários não reportaram efeitos adversos. Assim, sugeriu-se que o uso de escovas macias e extra-macias, independentemente da ponta da cerda, pareceram não apresentar riscos clínicos relevantes para os tecidos moles bucais. / Jt is known that toothbrushing is an excellent method for mechanical supragingival biofilm remova! and it is associated with prevention of both gingivitis and dental caries. However, the literature is still scarce regarding the characteristics of an ideal manual toothbrush, which is as effective in plaque contrai as safe. The aim o f this dissertation was to evaluate the efficacy oftwo manual toothbrushes in supragingival biofihn remova), as well as to investigate the relation of bristle stiffness and bristle end-shape with potential adverse effects. The present work is composed of two studies, a randomized controlled trial (RCT) and a systematic review of the literature. The RCT compared the efficacy in supragingival plaque remova! of two soft-bristle toothbrushes in 70 volunteers that were randomly allocated to the Colgate SlimSoft or Curaprox CS5460 toothbrush groups. Subjects underwent plaque examination using the Rustogi Modification of the Navy Plaque Index with pre- and post-brushing examinations under supervision at baseline and after 7 days of daily oral hygiene with their assigned toothbrush and dentifrice provided. The mean plaque score presented a greater reduction of whole-mouth and interproximal plaque scores in the SlimSoft group after a single toothbrushing at baseline (p<O.OS) and after 7 days compared to the Curaprox group (p<O.OS). Thus, the SlimSoft toothbrush presented greater efficacy in supragingival plaque remova) than did the Curaprox CS5460 toothbrush. The systematic review investigated if bristle stiffness and bristle end-shape of manual toothbrushes are associated with toothbrushing adverse effects. Three electronic data bases were searched and a pre-established search strategy was performed. Inclusion of titles, abstracts, full textanalysis and data extraction was dane by two reviewers, and when a consensus was not possible, a third researcher was included in this process. From 126 potentially relevant articles for full-text analysis, only 11 were included. Five studies analyzed toothbrush endendshape, two studies investigated toothbrnsh bristle stiffness and four articles examined both the end-shape and bristle stiffness ofmanual toothbrushes. Moreover, four studies presented safety as a primary outcome. Hard toothbrush appeared to produce more gingival lesions when compared to soft and medium bristles. The majority of gingival recessions remained stable over time and new gingival abrasion lesions were observed with the use of both endrounded and tapered toothbrushes. Nane of the studies that evaluated safety as a secondary outcome presented adverse effects. Thus, soft and extra-soft toothbrushes tended to be safe and both tapered and end-rounded bristles might not present a clinically relevant concern to oral soft tissues.

A doença periodontal tem sido frequentemente associada ao parto pretermo. A plausibilidade biológica para tal associação baseia-se na hipótese de uma inflamação sistêmica de baixa intensidade de origem periodontal. Entretanto, os estudos de intervenção que investigaram o efeito da terapia periodontal durante a gestação não observaram reduções significativas na incidência de prematuridade. Como diversas citocinas têm sido associadas tanto a doença periodontal quanto ao parto pretermo, cogita-se que elas desempenhem um papel importante na associação observada. Até o presente momento, pouco se sabe a respeito da correlação entre os níveis de citocinas no soro e no fluído crevicular gengival (FCG), assim como do efeito da terapia periodontal sobre esses marcadores de inflamação em gestantes. O objetivo desta tese foi avaliar a relação entre níveis sistêmicos e periodontais de biomarcadores inflamatórios relacionados com a resposta imune periodontal e também com os mecanismos de parto. Também investigou-se o efeito da terapia periodontal sobre os níveis dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Esta tese é composta por dois estudos que utilizaram uma sub-amostra de mulheres que haviam sido recrutadas para um ensaio clínico randomizado maior que investigou o efeito da terapia periodontal sobre a incidência de prematuridade. Mulheres entre 18-35 anos e com até 20 semanas de gestação foram aleatoriamente alocadas para receber tratamento periodontal não cirúrgico completo até a 24a semana de gestação (grupo teste) ou apenas uma consulta de uma remoção de cálculo supragingival (grupo controle). Dados clínicos e amostras de sangue e FCG foram coletadas no início do estudo, entre 26-28 semanas de gestação e 30 dias após o parto. Quatro sítios periodontais por paciente foram aleatoriamente selecionados para coleta de FCG entre aqueles com maior profundidade de sondagem. Os níveis de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL- 12p70 e FNT-α foram analisados por citometria de fluxo. No estudo 1, investigou-se a correlação e concordância entre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas em 100 pacientes, utilizando dados coletados até a 20a semana de gestação. As pacientes apresentaram extensa inflamação e limitada destruição periodontal. A correlação entre os níveis de citocinas no soro e no FCG foi baixa e não significativa, com exceção da IL-12p70 que mostrou uma correlação moderada, porém significativa, entre as duas fontes (r=0.32, p=0.001). Os níveis de citocinas observados no FCG explicaram menos de 10% dos respectivos níveis observados no soro, com exceção da IL-12p70 em que eles foram responsáveis por 23% dos níveis séricos (p=0.0001, r2=0.23). A profundidade de sondagem e o sangramento a sondagem estiveram significativamente associados com os níveis de IL-1β, IL-6 e IL-8 no FCG, mas tiveram efeitos limitados sobre os níveis sistêmicos de todas as citocinas. No estudo 2, comparou-se o efeito da terapia periodontal durante a gestação (n=30) com uma consulta única de remoção de cálculo supragingival (n=30) sobre os níveis periodontais e sistêmicos dessas citocinas durante a gestação e 30 dias após o parto. Após o tratamento, uma redução drástica da inflamação periodontal foi observada no grupo teste, com o percentual de sangramento a sondagem reduzindo de 49.62% para 11.66% dos sítios (p<0.001). A terapia também reduziu significativamente os níveis de IL-1β e IL-8 (p<0.001) no FCG. Entretanto, nenhum efeito significativo do tratamento foi observado em relação aos níveis sistêmicos dessas citocinas. Após o parto, os níveis periodontais de IL-1β no grupo teste permaneceram significativamente menores que no grupo controle, enquanto que nenhuma diferença foi observada em relação aos níveis sistêmicos das outras citocinas avaliadas. Pode-se concluir que os níveis de citocinas no soro e FCG não estão significativamente associados em mulheres com extensa inflamação mas limitada destruição periodontal. Embora a terapia periodontal durante a gestação reduza significativamente o nível de citocinas no FCG, ela parece não ter um impacto considerável sobre os níveis sistêmicos desses biomarcadores. / Periodontal disease has been frequently associated with preterm birth. The biological plausibility for this association relies on the hypothesis of a low-grade systemic inflammation originated from periodontal disease. However, clinical studies that investigated the effect of periodontal therapy during pregnancy did not observe significant reductions in the incidence of prematurity. Several cytokines have been associated with both periodontal disease and preterm birth, and might play a key role in the observed association. To date, little is known about the correlation between serum and gingival crevicular fluid (GCF) cytokine levels, as well as the effect of periodontal therapy on these inflammatory markers in pregnant women. The aim of this thesis was to investigate the relationship between periodontal and systemic levels of inflammatory biomarkers related to periodontal immune response and also with the mechanisms of delivery. We also investigated the effect of periodontal therapy on serum and GCF cytokine levels during pregnancy and 30 days postpartum. This thesis consists of two studies that used a sub-sample of women who had been previously enrolled in a larger randomized controlled trial investigating the effect of periodontal therapy on the incidence of preterm birth. Women aged between 18-35 years and up to 20 weeks of gestation were randomly assigned to receive comprehensive nonsurgical periodontal treatment before the 24th gestational week (test group) or a single appointment of supragingival calculus removal (control group). Clinical data, blood and GCF samples were collected at baseline, between 26-28 weeks of gestation and 30 days postpartum. Four periodontal sites per patient were randomly selected for GCF collection among those with deepest probing depth. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 and TNF-α levels were analyzed using a cytometric bead array. In the study one, we investigated the correlation and agreement between periodontal and systemic levels of these cytokines in 100 patients, using data collected until 20 weeks of gestation. Patients presented widespread periodontal inflammation but limited destruction. The correlation between serum and GCF cytokine levels was low and not significant, except for IL-12p70, which showed a moderate but significant correlation between the two sources (r = 0.32, p = 0.001). The GCF cytokine levels observed explained less than 10% of the respective serum levels observed, except for IL-12p70, which was responsible for 23% of serum levels (p = 0.0001, r2 = 0.23). Probing depth and bleeding on probing were significantly associated with IL-1β, IL-6 and IL-8 GCF levels, but had limited effects on systemic levels of all cytokines. In the study two, we compared the effect of periodontal therapy during pregnancy (n=30) or a single appointment for supragingival calculus removal (n=30) on periodontal and systemic levels of these cytokines during pregnancy and 30 days postpartum. After treatment, a remarkable reduction of periodontal inflammation was observed in the test group, with bleeding on probing reducing from 49.62% to 11.66% of the sites (p<0.001). Periodontal therapy also significantly reduced IL-1β and IL-8 GCF levels (p<0.001). However, no significant differences due to therapy were observed regarding systemic levels of these cytokines. After delivery, IL-1β GCF levels in the test group remained significantly lower than in the control group, whereas no difference was observed for systemic levels of any other cytokine evaluated. It can be concluded that serum and GCF cytokine levels are not significantly associated in women with widespread periodontal inflammation but limited destruction. Although periodontal therapy during pregnancy significantly reduces GCF cytokine levels, it seems to have a negligible impact on systemic levels of these biomarkers.

Introdução: Fibroblastos gengivais desempenham um importante papel na regeneração de tecidos moles de proteção. Mucograft® (MCS-3D) é um substituto xenógeno novo que vem sendo utilizado na periodontia em técnicas de recobrimento radicular e aumento de tecido queratinizado. O objetivo do presente estudo foi avaliar morfológica e imunohistoquimicamente, se a MCS-3D é uma matriz tridimensional adequada, por meio de sua resposta à cultura de fibroblastos gengivais. Material e Métodos: Fibroblastos gengivais humanos (FGH) foram obtidos pela técnica do explante a partir de tecido conjuntivo gengival de três indivíduos. Os FGH foram cultivados sobre colágeno bovino bidimensional (ColB-2D), colágeno bovino tridimensional (ColB-3D) e matriz colágena suína tridimensional (MCS-3D) por até 10 dias. Em 3, 7 e 10 dias, os seguintes parâmetros foram avaliados: número, morfologia e distribuição de FGH por fluorescência direta; viabilidade celular por MTT; proliferação celular e expressão de proteínas citoesqueléticas: actina e tubulina e proteínas da matriz extracelular não colágena: fibronectina imunofluorescência indireta. Os dados quantitativos foram submetidos aos testes estatísticos de Friedman para comparação intra e intergrupos para as variáveis da análise de expressão das proteínas: fibronectina, actina e tubulina. O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para comparações intra e intergrupos, seguido do teste de Tukey para as variáveis das análises de viabidlidade, proliferação e número total de células. Resultados: A epifluorescência revelou que em 3 dias os FGH apresentavam-se aderidos em todos os grupos experimentais. FGH cultivados sobre ColB-2D exibiram forma menos alongada, ampla e achatada com maior quantidade de projeções e numerosas fibras de estresse em 3, 7 e 10 dias. Por outro lado, os FGH cultivados sobre ColB-3D e MCS-3D demonstraram, em todos os períodos experimentais, fenótipo fusiforme, alongado ou cilíndrico com menor quantidade de projeções do que observado no substrato 2D, com algumas das células cultivadas sobre MCS-3D demonstrando aspecto estrelado. O ensaio de MTT revelou viabilidade celular significantemente superior no ColB-2D e MCS-3D do que no ColB-3D (p<0,001), em todos os períodos experimentais. Em 3 dias, foi observado maior número de FGH cultivados sobre ColB-2D seguido por MCS-3D e ColB-3D respectivamente, havendo diferença estatística entre ColB-2D e MCS-3D (p<0,001) e entre ColB-2D e ColB-3D (p<0,001). No sétimo dia houve redução no número de células no ColB-2D e aumento na MCS-3D e ColB-3D, em que o número de células foi significantemente superior no ColB-2d com relação a MCS-3D (p=0,002). Ao final do período experimental, foi observado aumento no número de células em todos os grupos experimentais, sendo o número de células, mais uma vez, significantemente superior no ColB-2D do que na MCS-3D (p=0,002). Maior porcentagem de FGH no ciclo celular pode ser observado em ColB-2D seguido por ColB-3D e MCS-3D, respectivamente, em todos os períodos experimentais. Na MCS-3D praticamente não houve marcação por Ki-67 e o ColB-2D apresentou redução significativa de FGH ciclando entre o período de 3 e 10 dias (p=0,036). A expressão de proteínas não colágenas e citoesqueléticas foi similar em ambas as matrizes experimentais durante todo o estudo. Conclusão: Podemos concluir que a MCS-3D constitui uma matriz adequada para o cultivo de fibroblastos gengivais humanos, uma vez que, no interior da matriz, importantes propriedades foram verificadas, dentre as quais, morfologia, proliferação, e expressão de proteínas, semelhantes a uma matriz colágena tridimensional já consagrada na literatura. / Introduction: Gingival fibroblasts play a central role in oral soft tissue regeneration. Mucograft® (PCM-3D) is a new xenogeneic substitute that has been used in periodontics in techniques such as root coverage and increasing keratinized tissue. The aim of this investigation was to verify if PCM-3D is a suitable three-dimensional matrix though its in vitro response to the culture of HGF. Methods: Human gingival fibroblasts (HGF) culture was established by the explant technique of gingival connective tissues of three healthy patients. HGF were seeded on bidimensional bovine collagen matrix (BCol-2D), three-dimensional bovine collagen matrix (BCol- 3D) and three-dimensional porcine collagen matrix (PCM-3D). HGF were grown for up to 10 days. At 3, 7 and 10 days the following parameters were assessed: HGF number, morphology and distribution by direct fluorescence; cell viability by MTT; cell proliferation and expression of proteins of the extracellular matrix non-collagenous fibronectina and cytoeskeletic - proteins actin and tubulin by indirect immunofluorescence. Quantitative data were submitted to Friedman and Kruskal- Wallis test, and the last one was followed by Tukeys test. Results: Epifluorescence revealed that at 3 days HGF grown on BCol-2D were broader, more flattened and had more cell protrusions and stress fibers in all experimental times. On the other hand, HGF seeded on BCol-3D and PCM-3D displayed a spindle-shaped, elongated, or cylindrical phenotype with fewer protrusions as well as less total cell spread area than on the 2D matrix, with some cells on PCM-3D showing stellate appearance. MTT assay showed cell viability higher in cultures grown on BCol-2D and PCM-3D than in BCol-3D (p<0,001). At 3days a greater number of cells in BCol-2D samples followed by PCM-3D and BCol-3D, respectively, was observed with statistical difference between BCol-2D and PCM-3D and between (p<0,001). At 7 days, there was a decrease in cell number grown on BCol-2D and an increase in BCol-3D and PCM-3D, where the number of cells were significantly higher in BCol-2D in relation to PCM-3D (p=0.002). At the end of the experimental period, there was an increase in total cell number in all of the experimental groups, and it was again significantly greater in BCol-2D than in PCM (p=0.005). Between 3 and 10 days, there was an increase in total cell number in ColB-3D (p<0.001), which showed higher counts within 10 days. Higher percentage of HGF in the cell cycle could be seen in BCol-2D followed by BCol-3D and PCM-3D, respectively, in all of the experimental groups. In PCM-3D there was almost no expression of Ki-67. BCol-2D showed a decrease in HGF cycling between 3 and 10 days (p=0,036). The expression of non-collagenous and cytoskeletal proteins were similar in both matrices during all the period of the study. Conclusion: PCM-3D is suitable for HGF culture, since, within the matrix, important properties were found, among them, morphology, proliferation andprotein expression, similar to those observed in a 3D collagen matrix well established in the literature.

O Sistema Renina-angiotensina (SRA), e um sistema capaz de gerar hormonios peptideos com grande impacto na regulacao cardiovascular e na patogenese das doencas cardiovasculares. Este sistema opera, por meio das acoes da Angiotensina II, tanto em nivel sistemico (endocrino) quanto tecidual (local, paracrino/autocrino) controlando importantes funcoes, varias delas relacionadas a facilitacao da instalacao e progressao do processo inflamatorio. Por este motivo, a producao desta proteina nos tecidos pode estar relacionada a patogenese de muitas doencas, dentre elas a doenca periodontal (DP), tendo em vista seu carater infeccioso-inflamatorio e os achados da literatura que mostram que a inibicao da formacao de Ang II, diminui a perda óssea da DP em animais. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivos: Avaliar in vitro, a) A expressao de componentes do SRA (ANGT, RENINA, ECA, ECA-2, AT1, AT2 e Mas) por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por RT-qPCR; b) A producao de componentes do SRA (RENINA, ECA, ECA-2) no sobrenadante de culturas de fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por ELISA; c) A producao dos receptores do SRA (AT1, AT2 e Mas), nestes fibroblastos, por Imunofluorescencia e d) Se a expressao e a producao dos componentes do SRA por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, se alteram com a estimulacao por LPS de P. gingivalis e E. coli. Apos a coleta, os dados foram analisados com o auxilio do programa GraphPad Prism 5.0. por meio da analise de variancia a 2 criterios (ANOVA-two way) seguida do pos teste de Bonferroni, com nivel de significancia de 5% para a verificacao das possíveis diferencas. Foi detectada a expressao genica para alguns dos componentes do SRA (ANGT, RENINA, ECA, AT1) por fibroblastos tanto de gengiva quanto de ligamento periodontal. Foi detectada ainda uma expressao genica diferenciada entre fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal para a ECA, sendo significativamente maior nos fibroblastos da gengiva. Houve imunomarcacao positiva tanto nos fibroblastos de gengiva quanto de ligamento periodontal compativel com a presenca dos receptores AT1 e Mas. Pode-se observar por fim que o contato com LPS de P. gingivalis e E. coli, na concentracao de 10 g/mL/24 h, nao alteram a expressão dos componentes do SRA. Portanto, pode-se concluir que os fibroblastos tanto de gengiva quanto de ligamento periodontal apesar de nao expressarem e produzirem todos oscomponentes do SRA necessarios para a formacao local de Ang II, poderiam contribuir, ainda que parcialmente, com outras celulas do microambiente dos tecidos periodontais para a formacao e acao locais da Ang II, e assim, para a instalacao e progressao da DP. / The Renin-angiotensin system (RAS) can generate hormones that have a high-impact on cardiovascular regulation as well as in the pathogenesis of cardiovascular disease. This system acts through both systemic (endocrine) and local (paracrine/autocrine) effects of Angiotensin II, controlling important functions related to the facilitation of installation and progression of the inflammatory process. For this reason, this proteins production in tissues can be associated to the pathogenesis of many diseases, including periodontal disease (PD). In the PD setting, a infectious-inflammatory characterized disease, the literature findings shows that inhibition of the Ang II formation can decrease the bone loss in animals. In this context, the aims of the present study were: to investigate in vitro: a) the expression of RAS components (ANGT, RENIN, ECA, ECA- 2, AT1, AT2 and Mas) by human gingival and periodontal ligament fibroblasts by RT-qPCR; b) the production of RAS receptors (AT1, AT2 and Mas) by human cultured gingival and periodontal ligament fibroblasts by Immunofluorescence and d) the production of RAS components (RENIN, ECA, ECA-2) if the expression and production of RAS components by gingival and periodontal ligament fibroblasts modify under P. gingivalis and E. coli LPS stimulation. After collected, the data were analysed using GraphPad Prism 5.0, by the two way ANOVA followed by Bonferroni post test with a significance level of 5%. Gene expression was detected for some of the RAS components (ANGT, RENIN, ECA, AT1) by both gingival and periodontal ligament fibroblasts. It was detected a differential gene expression between gingival and periodontal ligament fibroblasts for ECA, being significantly higher in gingival fibroblasts. There was a stain in Immunofluorescence compatible with the production of RAS receptors (AT1 and Mas). It must be noted that the stimulation with P. gingivalis and E. coli LPS, in a concentration of 10 g/mL/24 h, did not altered the expression of RAS components. In conclusion, despite of neither gingival or periodontal ligament fibroblasts express all components of RAS, needed to local formation of Ang II, they might also contribute to the local formation and action of Ang II and in consequence, to the installation and the progression of DP.

Orientador: Ricardo Della Coletta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-09T19:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sobral_LaysMartin_M.pdf: 14271407 bytes, checksum: 448e55c30e66d3c36643955fe6ab0225 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Miofibroblastos são células especializadas que exercem funções importantes em processos fibróticos através da síntese elevada de macromoléculas da matriz extracelular, proteases e citocinas. O exato mecanismo do surgimento (transdiferenciação) dos miofibroblastos permanece desconhecido, porém inúmeros estudos sugerem que o fator de crescimento transformante-'beta'1 (TGF-'beta'1) exerça um papel importante neste processo via ativação do fator de crescimento de tecido conjuntivo (CTGF). Em oposição aos efeitos de TGF-'beta'1, algumas citocinas inflamatórias, incluindo interferon 'gama' (IFN'gama'), parecem inibir a transdiferenciação dos miofibroblastos. O uso da droga imunossupressora ciclosporina A (CsA) é freqüentemente associada a inúmeros efeitos colaterais, sendo o aumento gengival fibrótico o de maior interesse para a área odontológica. Linhagens celulares de fibroblastos de gengiva normal tratadas com CsA expressam níveis elevados de TGF-'gama'1 e colágeno, que são intrínsecos do fenótipo miofibroblástico. Os objetivos deste estudo foram compreender a participação de TGF-'beta'1 e IFN'gama' na transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos e entender os mecanismos de ação destes fatores neste processo. Adicionalmente, nós verificamos a presença de miofibroblastos em aumentos gengivais induzidos por CsA. Nossos resultados demonstraram, através de 4 diferentes ensaios: transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RTPCR), western blot, imunofluorescência e citometria de fluxo, que TGF-'beta'1 induz e FNg bloqueia a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos metabolicamente ativos em uma maneira dependente da dose e tempo. Nas células onde a expressão de CTGF foi significantemente reduzida por seqüências específicas de RNA de interferência, TGF-'beta'1 não foi capaz de promover a transdiferenciação dos miofibroblastos, revelando que TGF-'beta'1 é dependente da ativação de CTGF para induzir a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos. IFN'gama' bloqueou a transdiferenciação dos miofibroblastos por estimular a expressão de Smad 7, uma proteína que regula negativamente a atividade de TGF-'beta'1. Interessantemente, miofibroblastos não foram associados aos aumentos gengivais induzidos por CsA, como revelado pelos modelos in vivo de injeções diárias de CsA em ratos Wistar e in vitro de tratamento de fibroblastos gengivais com CsA. Embora CsA tenha induzido a expressão de TGF-'beta'1, não demonstrou nenhum efeito na modulação dos níveis de CTGF. Nossos resultados demonstram que a indução da transdiferenciação dos miofibroblastos por TGF-'beta'1 é dependente da estimulação de CTGF. Adicionalmente, este estudo sugere que IFN'gama' pode ser clinicamente efetivo no tratamento de alterações fibróticas associadas à presença de miofibroblastos, pois atenua a excessiva produção de colágeno tipo I por estas células / Abstract: Myofibroblasts are the main cellular type involved in extracellular matrix deposition in fibrotic diseases. Relatively little is known about the underlying mechanisms that regulate myofibroblast emergence (transdifferentiation), however the regulatory cytokine transforming growth factor-beta 1 (TGF-'beta'1) has been traditionally considered an inducer of the myofibroblastic phenotype via activation of connective tissue growth factor (CTGF)-dependent pathway. Some inflammatory cytokines, particularly interferon g (IFN'gama'), show opposite effects to TGF-'beta'1, inhibiting myofibroblast transdifferentiation. Cyclosporin A (CsA) is a widely used immunosuppressant drug that causes significant side effects such as gingival overgrowth. Normal gingival fibroblast cell lines treated with CsA express high levels of TGF-'beta'1 and collagen, which are intrinsic of myofibroblasts. In the present study we examined whether TGF-'beta'1 and IFN'gama' can modulate transdifferentiation of gingival fibroblasts into myofibroblasts, and the biologic mechanisms behind those factors in this process. Additionally, we have analyzed the presence of myofibroblasts in CsA-induced gingival overgrowth. Our results demonstrated throughout a modality of experiments that included reverse trancriptasepolymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, immunofluorescence and flow citometry analysis, that TGF-'beta'1 induces and IFN'gama' blocks fibroblast-myofibroblast transdifferentiation in a dose- and time-dependent manner. In fibroblasts with CTGF levels know-down by specific small interference RNA, TGF-'beta'1 effect on transdifferentiation was significantly reduced, revealing that CTGF plays a crucial role in mediating TGF-'beta'1 myofibroblast transdifferentiation. IFN'gama' blocked myofibroblast transdifferentiation by stimulating Smad 7 levels, a protein that negatively regulates TGF-'beta'1 signaling. Interestingly, myofibroblasts were not found in CsA-induced gingival overgrowth, as revealed by the in vivo model of daily injections of CsA in Wistar rats and by the in vitro model of gingival fibroblast cultures treated with CsA. Although CsA treatment stimulated TGF-'beta'1 expression by NG fibroblasts, it lacked to induce CTGF levels. Our results demonstrate that TGF-'beta'1 induction of transdifferentiation of gingival fibroblasts to myofibroblasts occurs via a CTGF dependent pathway. Additionally, this study suggests that IFN'gama' may be clinically effective in the treatment of fibrotic diseases associate with myofibroblast / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

Foi desenvolvido projeto de pesquisa clínica e radiográfica para avaliar a influência do ângulo formado entre a superfície dental e a crista óssea na determinação da profundidade de sondagem do sulco gengival e complementarmente no comportamento da margem gengival por vestibular de dentes molares inferiores inclinados para mesial. Para tanto foram incluídos 30 sítios mesiais e 30 distais no grupo teste, com igual número de sítios controles de molares inferiores com inclinação normal. Nos dentes que forneceram esses sítios também foi feita a determinação da profundidade do sulco gengival na região vestibular central do dente, identificando-se a qualidade e quantidade de gengiva ceratinizada, respectivamente pela metodologia de Kan et al. (2010) e pela mensuração com sonda periodontal da distância da margem gengival à junção mucogengival. Foram incluídos pacientes periodontal e sistemicamente saudáveis, excluindo-se pacientes que tivessem sido submetidos a procedimentos ósseos regenerativos prévios nas áreas de interesse, diabéticos relutantes ao controle médico, usuários de drogas e/ou álcool, portadores de alterações sistêmicas que interfiram no metabolismo ósseo (como por exemplo, osteoporose e hiperparatireoidismo). Os exames foram realizados por examinador competente, devidamente calibrado. Para análise radiográfica as imagens foram transferidas para o computador, realizando-se as mensurações dos ângulos interessados com o programa de computador MB-Ruler Pro (MB-Software solutions). A análise estatística foi realizada no programa GraphPad Prism versão 5.03 para Windows (GraphPad, Usa). Os resultados obtidos em linhas gerais mostraram que houve influência significativa do ângulo entre a superfície dental e a crista óssea (p > 0,0001) na determinação do sulco gengival proximal em áreas de dentes inclinados, porém não há essa influência na profundidade de sondagem do sulco gengival por vestibular para áreas com qualidade e quantidade de gengiva comparáveis ao controle (p=0,08). A despeito desses resultados, não se encontrou correlação definida entre nenhum dos parâmetros de interesse analisados. Dentro dos limites do estudo os resultados também evidenciaram que, embora possam ocorrer variações desses parâmetros, a saúde periodontal pode ser mantida pelo indivíduo nas condições analisadas. / A clinical and radiographic research project was developed to assess the influence of the angle formed between the tooth surface and the alveolar bone crest in determining the probing depth of the gingival sulcus and complementary also to evaluate the behavior of the buccal gingival margin of mesially inclined molars. Therefore, 30 mesial and 30 distal sites of inclined lower molars were included in the test group, with an equal number of sites of lower molars with normal inclination in the control group. In addition in all the teeth of both test and control groups the depth of the clinical gingival sulcus at the central buccal region of the tooth was assessed by measuring with a periodontal probe, identifying the quality of the keratinized gingiva through the methodology of Kan et al. (2010) and determining the width of keratinized gingiva by measuring the distance from the free gingival margin to the mucogingival junction. The study was done in systemic and periodontally healthy individuals, excluding patients who had undergone bone-regenerative procedures in the areas of interest, diabetics reluctant to medical control, alcohol and / or drug users, and individuals suffering from systemic conditions that might interfere with bone metabolism (like osteoporosis and hyperparathyroidism). The examinations were performed by a competent and properly calibrated examiner. The radiographic images were then transferred to a computer in order to analyze the measurements of the involved angles with the computer program MB-Ruler Pro (MB-Software solutions). Statistical analysis was performed using GraphPad Prism version 5.03 for Windows (GraphPad, Usa). The results in general showed that there was significant influence of the angle between the tooth surface and the alveolar bone crest on the depth of the gingival sulcus in proximal areas of inclined teeth (p > 0,0001), but there was no such influence in the probing depth of the buccal gingival sulcus of these inclined molars provided that the quality and quantity of gingiva were similar to controls comprised by molars with normal inclination (p=0,08). Despite this significance, there was no definite correlation between any of the analyzed parameters of interest. The results also showed that, although there may be variations of these parameters, within the limits of this study the conditions of periodontal health can be maintained by the individual.

Este estudo teve o objetivo de comparar os efeitos da biomodificação radicular por ácido cítrico associado à tetraciclina (AC) ou terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) no recobrimento de recessões gengivais pela técnica do enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS). Para o estudo paralelo foram selecionados 60 sítios em 17 pacientes com recessões de classe I e II de Miller de 2 a 5 mm, múltiplas e isoladas, as quais foram divididas em 3 grupos: grupo controle (C) - apenas raspagem, grupo AC raspagem e, aplicação de gel de ácido cítrico associado à tetraciclina (90s) e o grupo aPDT - raspagem e aplicação da terapia fotodinâmica antimicrobiana (Azul de toluidina O 100g/ml + laser vermelho). Os parâmetros clínicos profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), altura da recessão (AR), largura mucosa ceratinizada (LMC), espessura de mucosa ceratinizada (EMC), índice de sangramento à sondagem (ISS), índice de placa (IPI) e porcentagem de recobrimento radicular (%REC) foram avaliados por um examinador cego e calibrado no baseline e 3, 6 e 12 meses de pós-operatório. Avaliou-se a hiperestesia dentinária (HIPER) e a percepção estética (EST) do paciente através de escala analógica visual no baseline e após 7 e 14 dias e 1, 3, 6 e 12 meses. A análise estatística dos dados de NCI foi feita pelo teste ANOVA complementado por Tukey. O teste de Friedman complementado por Wilcoxon foi aplicado para análise intra-grupos. O teste de Kruskal-Wallis foi aplicado para as diferenças entre os grupos, complementado por comparações múltiplas entre os três grupos. Para a %REC foi realizado o teste de Kruskal-Wallis complementado por Dunnet (p<0,05). Observou-se ganho do NCI em todos os grupos, mas este ganho foi maior para os grupos AC (0,55±1,68) e aPDT (0,80±2,11) em relação ao C (2,50±1,99) (p<0,05). Houve redução na AR em todos os grupos, porém o grupo AC (0,40±0,62) teve maior redução quando comparado C (1,15±1,04) (p<0,05). Houve aumento na LMC em todos os grupos e aumento na EMC também em todos os grupos, sendo que a EMC nos grupos aPDT (2,80±0,733) e AC (2,33±0,60) foram iguais com melhores resultados que o C (1,99±0,65) (p<0,05). Para a PS não foram observadas diferenças significantes entre os grupos e nem entre os períodos (p>0,05). A %REC foi maior nos grupos AC (82%±30%) e aPDT (82%±28%) do que no grupo C (58%±40%) (p<0,05). De maneira geral C, AC e aPDT foram semelhantes entre si e entre eles ao longo do tempo para o ISS e IPI (p>0,05). Houve redução significante da HIPER ao longo do tempo e entre os grupos, sendo que em AC (1,20±2,23) e aPDT (0,70±1,15) a diminuição da sensibilidade foi maior do que em C (2,63±2,22) (p<0,05). Houve melhora na EST ao longo do tempo e para o grupo AC (9,40±0,96) foi maior do que o C (8,58±1,07) (p<0,05), sendo que o grupo aPDT foi igual ao C. Concluiu-se que o uso de biomodificadores radiculares, como o AC e aPDT favorecem o recobrimento de recessões, resultando em redução da hipersensibilidade dentinária, maior porcentagem de recobrimento radicular e mais sítios com recobrimento completo, mantendo os resultados a longo prazo. / The aim of this study was to compare root biomodification by a combination of citric acid with tetracycline (CA) or antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) on root coverage by subepithelial connective tissue graft (SCTG). Sixty sites with Millers class I or II recessions were divided in three groups: Control (C) scaling only, CA scaling and root conditioning with a combination of citric acid and tetracycline (gel 90s), aPDT scaling and antimicrobial photodynamic therapy (toluidine blue O 100 g/ml and red laser). Periodontal clinical parameters as probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), recession height (RH), keratinized mucosa height (KMH), keratinized mucosa width (KMW), bleeding on probing (BOP), plaque index (PI) and percentage of root coverage (%RC) were evaluated by a blinded calibrated examiner at baseline, 3, 6, 12 months. Dentinal hyperestesia (HYPER) and patient esthetic perception (EST) were recorded in a visual analogic scale at baseline, 7 and 14 days, 1, 3, 6,and 12 months. Statistical analysis of CAL values was done with ANOVA complemented by Tukey. Friedmans complemented by Wilcoxons test evaluated intragroup data, while Kruskal-Wallis was applied for intergroup data. Comparison for %RC was done by Kruskal-Wallis complemented by Dunnet (p<0.05). Reduction in CAL was observed in all groups, with higher numbers for CA (0.55±1.68) and aPDT (0.80±2.11) in relation to C (2.50±1.99) (p<0.05). A higher reduction in RH was observed for CA (0.40±0.62) compared to C (1.15±1.04) (p<0.05). There was an improvement of KMH and KMW for all groups, but with higher values of KMW for aPDT (2.80±0.733) and CA (2.33±0.60) in relation to C (1.99±0.65) (p<0.05). There were no differences for PD (p>0.05). There was a significant higher %RC for CA (82%±30%) and aPDT (82%±28%) in relation to C (58%±40%) (p<0.05). In general, BOP and PI were similar for all groups and periods (p>0.05). There was a significant reduction in hyperestesia along time, but for CA (1.20±2.23) and aPDT (0.70±1.15) the reduction was higher than C (2.63±2.22) (p<0.05). Esthetic perception was improved along time with higher values for CA (9.40±0.96) than C (9.40±0.96) (p<0.05). In conclusion, root biomodification agents as CA and aPDT favored recession coverage by STCG, resulting in reduction of dentin hypersensitivity, higher percentage of root coverage and more sites with total coverage. Additionally, these results had a long-term stability.

O presente estudo submeteu três cães ao afastamento gengival comparando a técnica de afastamento e moldagem com anel de cobre e godiva de baixa fusão com a técnica de afastamento gengival com cordão de algodão associado a cristais de cloreto de alumínio, e moldagem única com silicona de condensação. O objetivo foi comparar a biocompatibilidade periodontal entre as duas técnicas. Foram obtidas amostras nos períodos de 0 (zero), 3, 7, 14 e 21 dias, as quais foram avaliadas histologicamente, utilizando-se a técnica de coloração hematoxilina e eosina. Como resultado, para todos os métodos testados, as conseqüências histológicas para o periodonto foram consideradas reversíveis. / This study carried out three dogs to gingival displacement comparing the copper band and compound gingival displacement and impression technique with string impregnated in aluminium chloride with gingival displacement technique, and single impression by condensing silicone impression material. The objective was to compare the periodontal biocompability between the two techniques. Blocks specimens including the teeth and the soft tissue were taken immediately, 3, 7, 14 e 21 days, and had histological analysis with stain hematoxilin and eosin. The results showed that all groups had reversible histological consequences.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-13T11:30:14Z No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T11:51:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T11:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) Previous issue date: 2011-06-20 / O objetivo deste estudo foi verificar a presença e abertura dos túbulos dentinários em pacientes portadores de recessão gengival com e sem hipersensibilidade dentinária por microscopia eletrônica de varredura. Foram selecionados 11 pacientes onde foram avaliados os dentes sensíveis e não sensíveis, sendo constituídos dois grupos (n = 11), onde GE – experimental, onde foram considerados os dentes com hipersensibilidade e GC – controle, os dentes não sensíveis. Para a seleção dos dentes do GE, utilizou-se jato de ar por 3 segundos, sendo escolhido aquele em que o paciente relatou maior dor e para o GC utilizou-se o mesmo procedimento, sendo selecionado, aleatoriamente, um dos dentes em que o paciente não relatou dor. No exame periodontal foi mensurado o nível clínico de inserção no sítio vestibular, sendo o exame realizado por um único examinador devidamente calibrado. A partir das moldagens com silicona de adição foram obtidas réplicas negativas para análise em microscópio eletrônico de varredura para verificação da presença e características dos túbulos dentinários frente aos GE e GC. A medida de 2 mm do nível clínico de inserção foi prevalente com 63,60% (n = 7) para o GC, seguida de 3 mm com 45,50% (n = 5) para o GE. O nível clínico de inserção dos dentes do GC atingiu uma média de 2,45 ± 0,69 mm e do GE, 3,18 ± 1,16 mm. Quanto à presença e características ultramicroscópicas dos túbulos dentinários, a Prova dos Sinais demonstrou que a média de abertura dos túbulos dentinários do GE foi maior que do GC, 57,72 Rm e 34,82 Rm, respectivamente. Quanto ao número de túbulos dentinários, a situação se repetiu, porém com uma média de 1,45 para o GC e 3,18 para o GE (p = 0,044). Portanto, com base nos resultados obtidos neste estudo, foi possível concluir que pacientes portadores de recessão gengival com hipersensibilidade dentinária cervical apresentam túbulos dentinários em maior número e abertos ou semiabertos com diferentes diâmetros e que a técnica da réplica negativa analisada por microscopia eletrônica de varredura demonstrou ser uma importante ferramenta para visualização de túbulos dentinários. / The aim of this study was to determine the presence and opening of dentinal tubules, by scanning electron microscopy, in teeth of patients with gingival recession with and without dentin hypersensitivity. Eleven patients were selected, and sensitive and non-sensitive teeth were evaluated and divided into two groups (n = 11), where GE – experimental, which were considered hypersensitive teeth and GC – control, non-sensitive teeth. For the selection of the teeth of GE, air blast was used for 3 seconds, and was chose the one which the patient reported increased pain and the GC used the same procedure, selecting randomly, a tooth where the patient reported no pain. Periodontal examination measured the clinical attachment level at buccal side, and the examination was performed by a single examiner calibrated. From the impressions with vinyl polysiloxane, negative replica was obtained for analysis in scanning electron microscope to detect the presence and characteristics of dentinal tubules compared to the GE and GC. The measurement of 2 mm of clinical attachment level was prevalent in 63.60% (n = 7) for the GC, followed by 3 mm with 45.50% (n = 5) for GE. The clinical attachment level of the teeth of GC averaged 2.45 ± 0.69 mm and GE, 3.18 ± 1.16 mm. Regarding the presence and ultramicroscopic characteristics of dentinal tubules, the Statistical Test Signals showed that the average opening of dentinal tubules of GE was higher than the GC, 57.72 3m and 34.82 3m, respectively. Regarding the number of dentinal tubules, the situation was repeated, but with an average of 1.45 for GC and 3.18 for GE (p = 0.044). Therefore, based on the results of this study, it can be concluded that patients with gingival recession and dentin hypersensitivity present dentinal tubules in greater numbers and open or half-open with different diameters and that the technique of negative replica analyzed by scanning electron microscopy is an important tool for visualization of dentinal tubules.