Orientador: Vilma Regina Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T15:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cabral_AnaLuciaBeirao_M.pdf: 4525762 bytes, checksum: 29cb33347f03183f3303c34eb2fbdaa3 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Os hormônios glicocorticóides, com conhecida ação antiinflamatória e antitumoral, agem apenas em células com receptores citoplasmáticos específicos ( GR ), portanto se toma extremamente importante conhecer os mecanismos envolvidos na regulação da expressão destes receptores para avaliar a resposta ao hormônio. Trabalhos preliminares realizados pelo nosso grupo em células transformadas pelo oncogene EJ-ras apontam para uma regulação negativa de GR a nível transcricional de GR decorrente desta transformação. Entretanto, a oncoproteína não pode regular diretamente a transcrição gênica já que está ancorada à membrana celular. O promotor do gene de GR possui um elemento similar a AP-I e isto, aliado ao fato de que Ras participa diretamente do processo de fosforilação de c-Jun, sugere que o produto deste proto-oncogene pode ser um dos alvos nucleares de Ras para a regulação do promotor do gene de GR. O presente trabalho teve como objetivo determinar o papel de c-Jun na regulação do promotor do gene de GR e analisar a capacidade de ligação da proteína c-Jun ao elemento AP-l presente neste promotor. Para tanto foram gerados clones de células NIH3 T3 transfectadas com c-jun e estes foram analisados quant.o à expressão do RNA mensageiro ( RNAm ) de c-jun e GR, bem como as respectivas proteínas por eles codificadas. A análise dos dados da expressão de c-Jun e GR, a nível de RNAs mensageiros e de proteínas, mostram que nos clones onde há aumento do RNAm de c-jun há decréscimo do RNAm de GR, sugerindo que a presença de c-Jun possa atenuar a transcrição do gene de GR. Entretanto nem sempre se encontrou uma correlação inversamente proporcional entre o RNAm de c-jun e de GR. Os valores obtidos após a determinação da concentração das proteínas c-Jun e GR evidenciam um padrão de regulação gênica muito mais complexo. Novamente ficou constatado que não havia correspondência entre os valores dos RNAs mensageiros e proteínas c-Jun e GR. Foram realizados ainda ensaios de retardamento de mobilidade eletroforética, utilizando a seqüência AP-l do promotor do gene de GR e extratos nucleares dos clones NIH3 T3 c-jun. Estes experimentos comprovam uma regulação mais complexa, pois mostram que a proteína c-Jun contida nos extratos nucleares não é capaz de se ligar à seqüência similar à AP-l contida no promotor do gene de GR. Concluindo que. a regulação do gene de GR por c-Jun não é dada diretamente por sua interação com o elemento específico contido no promotor deste gene / Abstract: Glucocorticoid receptors ( GR ) mediate the cellular response to glucocorticoid hormones which are known for their anti-inflammatory and anti-tumoral actions. The mechanisms involved on the regulation of GR gene expression are extremely important for the cellular response to the hormone and remain unknow. Using transient transfections, we have previously reported that cells transformed with the oncogene EJ-ras had an attenuation on the GR gene transcription. However, this effect could not be mediated through a direct action of the oncoprotein on the gene transcription, once Ras is anchored at the cellular membrane. An AP-l like site was found in GR gene promoter and the fact that Ras protein activates fosforilation of c-Jun suggests that it might be a Ras' nuclear target and oÍle of the transcription factors responsible for the regulation of GR gene expression. The aim of this work was to settle the role of c-Jun on GR expression and evaluate the c-Jun ability to bind the AP-l like site present on GR gene promoter. In this study we generated NIH3T3 cells dones stabled transfected with c-jun and analyzed their c-Jun and GR mRNA and protein contents. We observed that dones with higher c-jun mRNA levels have lower GR mRNA when compared with non transfected cells suggesting that c-Jun can attenuate the GR gene transcription. We did not find a direct correlation between mRNA and protein levels of both c-jun and GR. These data indicate that a more complex mechanism may be involved. Eletrophoretic mobility shift assays were performed to test the binding of c-Jun to the AP-l like site present on the GR gene promoter. The results showed that this association is much lower than the one observed by the consensus AP-l, suggesting that the GR gene expression regulation by c-Jun does not seem to be due to its interaction with the AP-l like site present on the GR gene promoter / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientador: Antonio Condino-Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LopezQuintero_JuanAlvaro_D.pdf: 7436572 bytes, checksum: eb2963a0c566df32123d4f6057f04520 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: objetivo geral deste projeto foi investigar o desenvolvimento a reguJação do sistema NADPH oxidase na linhagem eosinofilica humana Nos concentramos nos genes CYBB que codifica a gp91-phox, componente principal do heterodímero citocromo b e no gene NCF-I que codifica a p47-phox. A expressão destes, e de outros genes estreitamente relacionados, é reguJada segundo a 1àsede diferenciação celular, sendo específica de células mielóides. Nosso estudo baseou-se em dois modelos experimentais. O primen-o desenvolvido a partir de leucócitos derivados de sangue de cordão umbilical, cuhivados com citocinas que promovem o crescimento e a diferenciação de eosinófilos, especificamente interleucina-3 (IL-3) e interleucina-5 (IL-5) e o segundo, desenvolvido a partir do clone 15 de células da linhagem HL-60, cultivado previamente em condições alcaJina.c;e posteriormente estimulado com ácido butírico. Em paralelo, lItili7amos os mesmos sistemas de diferenciação de eosinófilos, com citocinas que influenciam a função fagocítica, especificamente interferon-gama (IFN-y) e :fàtorde necrose tumoral-alfa (TNF-a). Também estud~mos o efeito dos glicocorticóides, em particuJar a dexametasona sobre a atividade oxidase de células HL-60 clone 15 diferenciadas com citocinas. Examinamos a atividade do sistema NADPH oxidase (por meio da redução do citocromo c especificamente inibida pela superóxido dismutase) e a expressão dos genes que codificam os componentes do sistema NADPH oxidase gp91-phox e p47-phox. Nossos resultados mostraram que as células HL-60 clone 15 se diferenciam numa linhagem eosinofilica quando tratadas com ácido butirico 0,5 mM, expressando um fenótipo eosinófilico maduro, com capacidade para liberar superóxido em quantidades relevantes. Também demonstramos que a cuJtura dessas células com IFN-y e TNF-a é suficiente para induzir sua diferenciação eosinofilica, além de expressar transcritos para os componentes gp91-phox e p47-phox do sistema NADPH oxidase. Verificamos que o ácido butírico, IFN-y e TNF-a. juntos tem a capacidade de aumentar a indução do sistema NADPH oxidase, sugerindo que podem utilizar vias comuns ou distintas para estimuJar o sistema NAPDH oxidase, o qual está relacionado ao estágio de desenvolvimento da diferenciação eosinofilica. Por outro lado, observamos que a dexametasona inibe tanto a atividade NADPHoxidasecomo a expressão do enegp91-phoxquandoadministradaantes,masnão apósa diferenciaçãodas céluJaslllr6O clone 15 com IFN-y e TNF-a. Em relação aos leucócitos derivados do sangue de cordão umbilical cuhivados com IL-3 e IL-5, demonstramos que se diferenciam e demonstram características morfológicas similares a eosinófilos maduros, além de apresentar um incremento significativo na liberação de superóxido e expressão gêniea de gp91-phox no dia 28 de cultura. Os estudos pretendem contribuir para o avanço do conhecimento sobre os mecanismos que reguJam o sistema NADPH oxidase fagocítico humano, em específico na linhagem eosinofilica humana / Abstract: The aim of t1ús study was to investigate the development and regulation of the NADPH oxidase system in the human eosmophilic lineage. We concentrated our studies in the CYBB gene, which encodes the gp91-phox, the main component of the heterodimer cytocbrome b and NCF-I gene, which encodes the p47-phox protein. The expression of these genes js regulated according to the phase of celluJar differentiation, SPeCificof myeloid cells. Our study was basedon two experimentalmodels. The first one, was developed with leukocytes ftom umbilical cord blood, cultured with cytokines tbat promote the eosinophilic growing and differentiation, specifically interleukin-3 (ll.-3) and interleukin-5 (IL-5) and the second one, was established with HL-60 clone 15 ceUs,previously cultured in aIkaline conditions and later stimuJated with butyric acid. In parallel, we used the same systems of eosinophil differentiation, with cytokines tbat influence the phagocytic function, specifically interferon-gamma (IFN-y) and tumor necrosis Jàctor alpba (TNF- a). The effects of the glucocorticoids, particuIary dexamethasone on the oxidase activity of HL-6O clone 15 cells differentiated with cytokines were also studied. We examined the NADPH oxidase system activity (by means of the reduction of cytochrome c specüically inhibited by superoxide dismutase) and the gene expression of gp91-phox and p47-phox, components ofNADPH oxidase system. Our results showed tbat, the HL-60 clone 15 cells were differennated in 3Deosinophilic lineage when were treated with butyric acid 0,5 mM, expressing a mature eosinophils phenotype, able to release superoxide in excellent amounts. We aIso demonstrated, tbat the cuhure of these cells with IFN-y e TNF-a are su:fficient to induce the eosmophilic differentiation, besides expressing 1ranscripts of gp91-phox and p47-phox. We observed tbat butyric acid, IFN-y e TNF-a together are able to increase the NADPH oxidase system induction, which suggests tbat they can use common or distinct pathways to stimuJate the NAPDH oxidase system, which :isrelated with the phase of eosinophilic djfferentiation development. On the other hand, we observed tbat dexamethasone mbibits the NADPH activity oxidase, aswellasgp91-phoxgene expressionwhenadministeredbefure,but not afterHL-6Oclone 15 cells differentiation with IFN-y e TNF-a. Regarding the umbilical cord blood leucocytes cultured with IL-3 and IL-S, similar morphologic characteristics to that of matme eosinoplilis were obsetved, besides presenting a significant Ü1creasein superoxide release and expression of gp9l-phox gene in day 28 of culture. The studies intend to oontribute to the advance of the knowledge on the mecbanisms that reguJate the human phagocytic NADPH oxidase system, specifically in the human eosinophilic Jineage / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T06:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T22:59:41Z : No. of bitstreams: 1 183472.pdf: 3605301 bytes, checksum: ffc5710572e3d382f1897738c15fc260 (MD5) / Estudo do efeito do tratamento local com [citocinas pró-inflamatórias] sobre as respostas mediadas pelos [receptores B1 e B2] para as [cininas] na [pata de rato]. O tratamento com as citocinas [IL-1b] ou [TNFa] foi capaz de induzir um aumento dose-dependente e marcante da [resposta edematogênica] mediada pelos receptores B1, acompanhado de um aumento na [expressão] destes receptores, sem interferir com as respostas mediadas pelos receptores B2. O aumento funcional dos receptores B1 na pata de rato, induzido pela IL-1b e pelo o TNFa, parece depender da produção de metabólitos do [ácido araquidônico], da produção secundária de outras citocinas pró-inflamatórias, da ativação de algumas [quinases], além da estimulação do fator de transcrição nuclear [NF-kB] e de [síntese protéica]. Além disso, o aumento das respostas mediadas pelos receptores B1, na pata de ratos pré-tratados com IL-1b, parece envolver a migração de [neutrófilos], dependente da produção de [PAF] e de [moléculas de adesão]. Estes dados contribuem para esclarecer alguns mecanismos envolvidos na interação entre o sistema de cininas e citocinas durante o processo inflamatório.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T09:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T23:13:54Z : No. of bitstreams: 1 183509.pdf: 2419471 bytes, checksum: 04c50bd7c80ed8a54981d913ba84e96d (MD5) / O presente estudo avaliou, através de técnicas moleculares e farmacológicas, o efeito dos glicocorticóides endógenos sobre a expressão do receptor B1 em ratos. Também foram investigados alguns dos mecanismo envolvidos na indução do receptor B1 para as cininas na aorta isolada de coelhos. Foram obtidas evidências moleculares e farmacológicas adicionais indicando que a expressão do receptor B1 para as cininas pode ser regulada pelos glicocorticóides endógenos através de mecanismo dependente da ativação da via do NF-kB. Além disso, a indução tempo-dependente da contração mediada pela des-Arg9-BK na aorta de colho envolve a ativação da proteína quinase C, da tirosina quinase, com a participação da ciclooxigenase-2 e também da via do NF-kB. Os resultados obtidos com o presente estudo sugerem uma importante participação dos receptores B1 para as cininas mediando respostas inflamatórias. Além disso, sugerem ainda que pelo menos em parte das ações antiinflamatórias dos glicocorticóides pode estar associada com a regulação dos receptores B1 para as cininas.

Orientador: Maria Lucia Furlan Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T08:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_ArnaldoRodriguesdos_M.pdf: 16235737 bytes, checksum: 253e7da352aa44404b2c338171159327 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Células Vero foram cultivadas sobre géis 3D de colágeno tipo I ou em lamínulas de vidro por 48h com 10% de soro fetal bovino (SFB). Após este tempo de cultivo as células passaram a ser mantidas em meio sem SFB, com 10 % de SFB, com 10 % de SFB mais dexametasona (DEX) e com 20 % de SFB. Amostras foram fixadas após 48h, 120h e 240h de cultivo. Os géis foram incluidos em paraplast e cortados com 7Jlm de espessura. As amostras foram coradas com hematoxilina-eosina (HE), cresil violeta (CV), azul de toluidina (A T) e xylidine ponceau (XP). Foi realizado também imunocitoquímcia para colágeno IV (CaL IV) e para fibronectina (FN). Com as células cultivadas sobre lamínulas foram obtidos os índices mitóticos e as curvas de crescimento da cultura. Células cultivadas em colágeno por 24h, foram analizadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Um ensaio em microplacas para a adesão celular com 24h de cultivo também foi realizado. As células que foram cultivadas sobre lamínulas e coradas com CV, em todos os casos analisados, mostravam morfologia irregular e com alguns prolongamentos, exceto nas regiões confluentes onde encontramos apenas células com formas poliédricas. Encontramos também a formação de grumos celulares nas amostras tratadas com DEX. Material bem corado com XP foi evidenciado tanto com 120h quanto com 240h de cultivo. Os grumos celulares nas amostras tratadas com DEX foram os pontos onde encontramos coloração mais intensa. O A T mostrou nas primeiras 48h células com citoplasma, núcleo e nucléolo metacromáticos. Com 120h de cultivo foram detectadas células com núcleos ortocromáticos, nucléolo basófilos e citoplasma levemente metacromático em quase todas as amostras, exceto nas tratadas com DEX, onde encontramos citoplasma intensamente metacromático. Com 240h de cultura encontramos células com citoplasma, núcleo e nucléolos metacromáticos (S/SFB e 10% SFB) e células com núcleos ortocromáticos, nucléolos e citoplasma metacromáticos (10% SFB+DEX e com 20% SFB). A imunocitoquímica mostrou a presença de CaL IV nas amostras mantidas S/SFB, com 10% SFB e com 20% SFB, mas não nas células cultivadas com DEX. Encontramos a presença de FN em todos os casos, porém foi encontrado um arranjo mais homogêneo nas células que cresceram na presença de 10% SFB+DEX e 20% SFB. Dados citoquímicos e imunocitoquímicos mostraram que o DEX interfere no padrão de crescimento de células sobre lamínulas. A MEV mostrou um grande espalhamento celular e deposição de material fibrilar, cuja deposição é estimulada pela variação da concentração dos componentes do SFB. O ensaio com microplacas mostrou que a adesão das células ao substrato também é estimulada pelo SFB. A análise morfológica feita com HE mostrou nos géis nas primeiras 48h uma monocamada de células achatadas, embora em alguns pontos as mesmas mostravam-se com duas ou três camadas de células arredondadas. Ambos os casos mostraram-se bem evidenciados pelo XP e as células apresentavam também metacromasia quando corado com AT. Com 120h e 240h em meio S/SFB ou com 10% de SFB, coradas com HE, foram observadas células formando um estrato com várias camadas arredondadas além de vários pontos de infiltração para o interior do substrato. Estas células apresentavam núcleos e citoplasma metacromáticos, quando corados com A T. Também encontramos granulações metacromáticas ao redor das células no interior do gel. Nesses experimentos o XP mostrou células bem coradas tanto no citoplasma como no núcleo. O gel também foi levemente corado pelo XP. As granulações presentes na matriz colagênica junto as células infiltradas também foram coradas pelo XP. A análise imunocitoquímica mostrou deposição de FN mas não de COL IV. Concluimos que nessas condições experimentais, S/SFB ou com 10% de SFB, as células cultivadas nos géis de colágeno, organizam uma estrutura semelhante a um tecido conjuntivo frouxo. Por outro lado, a HE mostrou que as células que foram tratadas com DEX (um inibidor da síntese de colagenases) e com 20% de SFB (que contém <X2-macroglobulina, um inibidor de atuação de colagenases) não invadiram a matriz colagênica, permanecendo com muitas camadas celulares, com forma arredondada na camada basal e achatada nas superiores. O A T mostrou células com núcleos e citoplasma metacromáticos, além de evidenciar uma camada acelular entre as células e o substrato. Todos as camadas celulares também foram bem coradas pelo XP. A imunocitoquímica mostrou que quando a infiltração foi bloqueada as células não produziram FN mas sim uma camada de COL IV. Os dados citoquímicos e imunocitoquímicos nos demonstraram que quando usamos inibidores de colagenases, as células Vero formam um tecido com características epiteliais e produzem uma estrutura semelhante à membrana basal / Abstract: The Vero celIs were cultured on a colIagen I gel or a glass coverslip with 10% fetal calf serum (FCS) for 48hs. After this incubation time, samples were cultured without FCS, or with 10% FCS, 10% FCS plus dexamethasone (DEX) or 20% of FCS. Samples were harvested after 48hs, 120hs, and 240hs and fixed. The gels were embedded in paraplast and 7J.lm thick sections were obtained. The samples were stained with hematoxilin-eosin (HE), cresil violet (CV), toluidine blue (TB) and xylidine ponceau (XP). Immunocytochemical tests were carried out for colIagen IV (COL IV) and fibronectin (FN). The mitotic index and the growth curve were obtained for celIs cultured on coverslip. The celIs cultured on colIagen gels for 24hs were studied with scanning electron microscopy (SEM). An assay for celIular adhesion during 24hs was also performed on 96 welIs microplate. The celIs cultured on coverslips, stained by CV, showed an irregular morphology with celIular processes, and a poliedric form on the confluent areas in alI the celIs studied. We also found the formation of many celIular aggregates in the samples treated with DEX. AlI samples were stained with XP, after 120hs or 240hs of culture. The celIular aggregates induced by DEX were stained by XP. The TB staining showed celIs with metachromatic cytoplasm, nuc1ei and nuc1eoli in the first 48hs. With 120hs of culture we found celIs with ortochromatic nuc1ei and light metachromasy in nuc1eoli and cytoplasm. With 240hs we found celIs with metachromatic nuc1ei, nuc1eoli and cytoplasm (without FCS and with 10% FCS) and celIs with ortochromatic nuc1ei, metachromatic nuc1eoli and cytoplasm (with 10% FCS + DEX or 20% FCS). The immunocytochemical experiment showed that COL IV was present in the samples cultured without FCS or with 10% FCS and 20% FCS, but it was not found in the celIs cultured with DEX. FN was present in alI samples but in the celIs cultured with 10% FCS + DEX or 20% FCS we found a more homogeneous arrangement. Cytochemical and immunocytochemical data showed that DEX modifies the growth of Vero celIs cultured on a coverslip. The SEM showed that celIular spreading and the synthesis of fibrillar material was stimulated by FCS. The microplate assay showed that celIular adhesion to the substratum is also stimulated by changes in concentration of the serum component. The morphological study of celIs cultured on a colIagen substratum was made with HE. In the first 48hs of culture we found a monolayer of flattened celIs on the colIagen substratum. We observed also the same celIs with a round morphology growing in 2-3 layers. These celIular layers were stained with XP and showed metachromatic cytoplasm when stained with TB. CelIs cultured during 120hs or 240hs without FCS or with 10% of FCS formed many layers of rounded cells capable of invading the collagen substratum. These cells showed a metachromatic cytoplasm and basophilic nuc1ei and nuc1eoli when stained with TE. We could see some metachromatic granulations surrounding the cells in the collagen gel. In these experiments XP staining showed cells with stained cytoplasm and nuc1ei. The collagen gel was also stained with XP. The granulations present in the matrix surrounding infiltrated cells stained with XP. The immunocytochemical tests showed the prodution of FN but not COL IV. We conc1uded that in these cases, the cells form a loose connective tissue like structure. On the other hand, cells cultured with 10% FCS + DEX, a collagenase synthesis inhibitor, or with 20% FCS, which contains a2­macroglobulin, a collagenase activity inhibitor, did not invade the collagen matrix and formed a multiple cell layers, where round cells occur on the basal layers and flattened cells on higher layers. All cells of these extracts were stained with XP. TB staining showed cells with cytoplasmatic metachromasy and basophilic nuc1ei and nuc1eoli. We could see also an acellular layer stained with TB between the cell and the substratum and with a immunocytochemical method we identified in the same areas a COL IV rich region. FN was not found. These cytochemical and immunocytochemical data showed that when we use collagenase inhibitors the Vero cells form a epitheliallike tissue and produce a structure similar to a basement membrane / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Gil Guerra Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T02:05:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freire_PatriciaOliveiradeAlmeida_M.pdf: 12900074 bytes, checksum: b2d91f9c44c91699dcd2fe235e2b4062 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: JUSTIFICA TIVA: A Hiperplasia Congênita das Supra-Renais(HCSR) devido a deficiência clássica da 21-hidroxilase (CYP21A2) caracteriza-se por baixa produção de glicocorticóides acompanhada ou não de insuficiência mineralocorticóide e excesso de andrógenos adrenais. Tão logo é feito o diagnóstico é imprescindível o uso de glicocorticóides de forma substitutiva. A ação antagônica dos glicocorticóides e dos andrógenos sobre a aquisição da massa óssea justifica o estudo da densidade mineral óssea (DMO) dos pacientes com HCSR CYP21A2. OBJETIVOS: Avaliar a DMO em pacientes com HCSR CYP21A2 e procurar determinar os fatores clínicos e laboratoriais envolvidos na mineralização óssea destes pacientes. CASUÍSTICA E METODOLOGIA: Foram avaliados 45 pacientes com diagnóstico de HCSR CYP21A2, confirmado por estudo molecular, em acompanhamento no Ambulatório de Endocrinologia Pediátrica da UNICAMP, sendo 28F:17M, 23 perdedores de sal e 22 com a forma virilizante simples, com idade média de 9,9 anos (variando de 5,1 a 16,3 anos) na época da realização da densitometria óssea. Foi utilizado o método de DEXA com cálculo do z escore areal da DMO em L2-L4. As variáveis analisadas em relação às DMO para idade cronológica (DMO/IC), idade altura (DMO/IA) e idade óssea (DMO/IO) foram o sexo, o tipo de HCSR,o peso (em kg e z escore), a estatura (em cm e z escore), o índice de massa corporal (IMC) em kglm2 e z escore), o desenvolvimento puberal, a idade ao diagnóstico e na realização da densitometria óssea, a idade óssea, o tempo de tratamento, a dose média e o tipo de glicocorticóide utilizado, e os níveis de 17-0H-progesterona 12 e 36 meses antes darealização da densitometria. Na análise estatística utilizou-se dos testes de Fisher, Wilcoxon e Kruskal-WaIlis, com a = 0,05. RESULTADOS: A DMO/IC foi significativamentemenor no sexo feminino e nos pacientes com maior tempo de tratamento. Houve uma associação positiva com os z escores do peso e do IMC, e a idade óssea avançada. Quando analisou-se o z escore areal da DMO/IA, encontrou-se valores significativamentemaiores quanto maior o z escore do peso e do IMC. Em relação à DMO/IO, observou-se valores significativamentemaiores no grupo em que a 10 era mais próxima da IC. A DMO/IO foi significativamente menor quando calculada em relação às idades altura e cronológica. CONCLUSÃO: Na HCSR CYP21A2, a DMO areal em relação às IC e IA pode estar superestimada, sendo importante a avaliação pela 10; nesses pacientes o peso, o IMC e aIO foram as variáveis que mais influenciaramna detenninação da massa óssea / Abstract: INTRODUCTION: Glucocorticoids are essential in the treatment of patients with Congenital Adrenal Hyperplasia (CAH). The opposite actions of glucocorticoids and androgens in bone mass achievement justifies a study of bone mineral density (BMD) inpatients with CAH due to c1assic21-hydroxylase deficiency (CYP21A2). OBJECTIVES: To evaluate BMD in patients with CAH and to investigate the involvement of possible clinieal and laboratory factors. PATIENTS AND METHODS: 45 patients with CAH, 28F:17M, 23 salt losers and 22 with the simple virilizing form, mean age of9.9 years (aged 5.1 to 16.3 years), followed in the Pediatric Endocrinology Unit at State University ofCampinas were studied. Abone densitometry using DEXA teehnique was performed. The values of the L2-L4 BMD z score were calculated in relation to chronologic age (CA) (BMD/CA), height age (RA) (BMDIHA) and bone age (BA) (BMD/BA) and then evaluated aecording compared to sex, CAH type, weight (in kg and z seore), height (in cm and z seore), body mass index (BMI in kglm2 and z score), pubertal development, CA in the diagnosis, CA and BA at the time of bone densitometry, duration of treatment, mean dose and type of glucocorticoids, and 17-hydroxyprogesterone levels 12 and 36 months before bone densitometry. Statistical analysis inc1uded Fisher, Wilcoxon and Kruskal- Wallis tests, with a = 0,05. RESUL TS: BMD/CA areal z score was significant1ylower in females and in patients with longer duration of treatment. Higher values were positively assoeiated with weight and BMI z seores, and with advaneed BA. The BMDIHA areal z score was also positively significant with weight and BMI z scores. BMD/BA areal z score was higher in patients with the smallest differencebetween BA and CA. The BMD/BA was significant1ylower than BMDIHA and BMD/CA, but there was not difference between. CONCLUSION: In patients with CAH CYP21A2 areal BMD/CA and BMDIHA may be overestimated; it in thus important to evaluate BMD in relation to BA. In these patients, weight, BMI and BA were the most important faetors involved in bone mass determination / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientadores: Regina Celia Spadari-Bratfisch, Dora Maria Grassi-Kassisse / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:26:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_ElisangelaFarias_D.pdf: 535822 bytes, checksum: b5d17c78b44dba0874cd49975c0ec270 (MD5) Previous issue date: 2003 / Doutorado

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:17:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Piza_CristinaFriasSartorellideToledo_M.pdf: 4687266 bytes, checksum: 47fba13dfb8be06033ae6890e1424e74 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-17T03:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335947.pdf: 1599167 bytes, checksum: afcd4b3088be34fe3f642cf6549642a4 (MD5) Previous issue date: 2015 / O glicocorticoide (GC) é amplamente aplicado na clínica para o tratamento de doenças inflamatórias. Seu uso prolongado repercurte sobre a homeostase glicêmica podendo levar a resistência periférica à insulina (RI). Mulheres na transição de segunda para a terceira idade iniciam um processo natural de falha ovariana, a menopausa. Na menopausa há ganho de peso e modificações na distribuição da gordura, especialmente na região visceral. A associação entre GCs e menopausa não está bem estabelecida na literatura. Assim, avaliamos as repercussões da perda de função ovariana associada ao tratamento com GC sobre parâmetros relacionados à homeostase glicêmica. Para tanto, ratas Wistar (28 dias de vida) foram submetidas à falha ovariana por meio da administração de 4-vinilciclohexeno diepóxido (4-VCD), i.p. (VCD) ou receberam somente veículo (CTL) e 168 dias após foram tratadas com dexametasona (1 mg/kg, p.c., i.p.) por 5 dias consecutivos (DEX e VCD+DEX) ou veículo (CTL e VCD). O grupos DEX e VCD+DEX demonstraram redução da massa corporal e da ingestão alimentar durante tratamento com dexametasona (p<0,05). As ratas tratadas com dexametasona apresentaram aumento na glicemia, insulinemia, triacilgliceridemia e conteúdo de glicogênio hepático vs. seus respectivos grupos controles (p<0,05) não havendo nenhum efeito do tratamento com 4-VCD per se. O tratamento com 4-VCD não alterou a sensibilidade à insulina, enquanto que os grupos tratados com dexametasona apresentaram redução da sensibilidade comparada aos seus respectivos controles (p<0,05). O grupo VCD exibiu intolerância à glicose (GTT i.p.) vs. grupo CTL (p<0,05) e a intolerância presente no grupo DEX não foi potencializada pelo tratamento com o 4-VCD (VCD+DEX). No desafio glicêmico oral o tratamento com 4-VCD não promoveu nenhuma alteração nos grupos VCD e VCD+DEX em relação aos seus respectivos controles. O tratamento com o 4-VCD não causou nenhuma alteração na massa de células ß no grupo VCD, porém impediu a compensação do incremento compensatório (grupo VCD+DEX) ocorrido no grupo DEX. O tratamento com GC resultou em marcante elevação dos valores de progesterona plasmática vs. grupo CTL (p<0,05). Concluímos que o tratamento com o 4-VCD não promove alterações nos parâmetros metabólicos basais, mas causa intolerância à glicose. O tratamento com o 4-VCD não predispõe às ratas a maiores disfunções metabólicas causadas pelo tratamento com GC, exceto pela atenuação do incremento da massa de células ß induzida pela administração de dexametasona.<br> / Abstract : Glucocorticoids (GC) are widely applied in clinic for the treatment of inflammatory diseases. Its prolonged use influences the glucose homeostasis and may lead to insulin resistance (IR). Women in transition from natural reproductive life to menopause begin a natural process of ovarian failure. In this case, there are weight gain and changes in fat distribution, especially in the visceral region. The association between GCs and menopause is not well established in the literature. We evaluated the impact of the loss of ovarian function associated with GC treatment on parameters related to glucose homeostasis. Wistar rats (28 days old) underwent ovarian failure by administration of 4-vinylcyclohexene diepoxide (4-VCD) i.p. (VCD), while controls received vehicle (CTL). After 168 days rats were treated with dexamethasone (1 mg / kg bw, i.p.) for 5 consecutive days (DEX and VCD+DEX) or vehicle (CTL and VCD). The DEX and VCD+DEX groups showed reduced body weight and food intake during treatment with dexamethasone (p<0.05). The rats treated with dexamethasone showed an increase in glycemia, insulinemia, triglyceridemia and hepatic glycogen content vs. their respective control groups (p<0.05) and there is no effect of treatment with 4-VCD per se. Treatment with 4-VCD does not alter insulin sensitivity, whereas the groups treated with dexamethasone showed a reduction in insulin sensitivity compared to their respective controls (p<0.05). The VCD group exhibited impaired glucose tolerance (GTT ip.) vs. CTL group (p<0.05) and intolerance present in the DEX group was not enhanced by treatment with 4-VCD (VCD+DEX). In oral glucose challenge treatment with 4-VCD did not promote changes in VCD and VCD+DEX groups compared to their respective controls. Treatment with 4-VCD caused no change in the mass of ß cells in the VCD group, but prevented the compensatory increase (VCD+DEX group) occurred in the DEX group. The GC treatment resulted in a marked increase in plasma progesterone values vs. CTL (p<0.05) group. We conclude that treatment with 4-VCD does not cause alterations in the basal metabolic parameters, but causes glucose intolerance. Treatment with 4-VCD dos not predisposes rats to additional metabolic dysfunctions caused by the GC treatment, except for the attenuation of the increase in mass of ß cells induced by administration of dexamethasone.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:13:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328131.pdf: 1599325 bytes, checksum: f477729a91ecf1cf6286c8ffd300fd43 (MD5) Previous issue date: 2014 / O ritmo circadiano sincroniza as fases inativa e ativa do organismo com a luminosidade do ambiente em ciclos de 24 horas, sendo por isso considerado um dos fatores que modula a liberação de endocanabinoides em condições fisiológicas e de estresse que, por sua vez, estão envolvidos no processo de aprendizado e memória. A possível influência do ritmo circadiano sobre o papel dos receptores canabinoides do tipo 1 (CB1) na etapa de consolidação de uma memória aversiva permanece por ser estabelecida. Assim, investigou-se, inicialmente, o efeito do antagonismo de receptores CB1 com AM 251 (0,1-1,0 mg/kg) sobre a consolidação de uma memória de medo contextual em ratos Wistar machos, testados durante o período diurno (7-8 h) ou noturno (19-20 h). Animais tratados com AM 251 (0,3 e 1,0 mg/kg) após o condicionamento e testados de noite, mas não de dia, expressaram uma resposta de medo potencializada, generalizada e persistente. Considerando que a variação circadiana de glicocorticoides poderia explicar os resultados supracitados, a concentração plasmática de corticosterona foi quantificada ao longo do dia em animais com e sem condicionamento. Observou-se uma concentração plasmática de corticosterona maior no período noturno do que no diurno em animais não condicionados, sendo que houve aumento nos grupos condicionados em ambos os períodos investigados. A seguir, investigamos se a supressão do eixo hipófise-pituitária-adrenal com dexametasona (DEXA) durante a noite seria capaz de reproduzir os efeitos que o AM 251 induziu sobre a consolidação de uma memória contextual pela manhã. O pré-tratamento com 0,3 mg/kg de DEXA foi capaz de prevenir os efeitos do AM 251 (0,3 mg/kg) sobre a memória de medo contextual. Para substanciar tais resultados, administrou-se corticosterona (CORT) pela manhã na tentativa de replicar os efeitos induzidos pelo AM 251 durante a noite. O pré-tratamento com 1,0 mg/kg de CORT não foi capaz de fazer com que o AM 251 (0,3 mg/kg) induzisse efeitos significativos sobre a consolidação de memória de medo contextual. Com base nos resultados desses experimentos, pode-se concluir que o ritmo circadiano pode influenciar a transmissão endocanabinoide, modulando o papel dos receptores CB1 na consolidação de uma memória aversiva, e que a oscilação dos níveis de corticosterona ao longo do dia explica, ao menos em parte, tal efeito.<br> / Abstract : The circadian rhythm synchronizes the inactive and active phases of the organism with the brightness of the environment, in cycles of 24 hours, and is thus considered one of the factors that modulate the release of endocannabinoids under physiological and stress conditions that, in turn, are involved in learning and memory processing. The possible influence of circadian rhythm on the role of type 1 cannabinoid receptor (CB1) during the consolidation phase in an aversive memory remains to be established. Thus, we investigated the effect of the antagonism of CB1 receptors with AM 251 (0.1-1.0 mg/kg) on the consolidation of a contextual fear memory in male Wistar rats tested during the diurnal (7-8h) or nocturnal (19-20h) period. Animals treated with AM 251 (0.3 and 1.0 mg/kg) and tested after conditioning at night, but not during the day, expressed a potentiated long-term fear response, which was also generalized. Considering that the circadian variation of glucocorticoids could explain the above results, the plasma concentration of corticosterone was quantified in animals with and without conditioning, either during daytime or night. We observed a higher plasma concentration of corticosterone in nocturnal than diurnal period in unconditioned animals, and this concentration was increased after the conditioning in both periods. Next, we investigated whether the suppression of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis with dexamethasone (DEXA) during the night would be able to reproduce the lack of effects that AM 251 induced on the consolidation of a contextual memory during the morning. Pretreatment with 0.3 mg/kg DEXA was able to prevent the effects of AM 251 (0.3 mg/kg) on contextual fear memory. To substantiate these findings, we administered corticosterone (CORT) during the morning in an attempt to replicate the effects induced by AM 251 during the night. Pretreatment with 1.0 mg/kg CORT was unable to modify the effects of AM 251 (0.3 mg/kg) on consolidation of contextual fear memory. Based on these results, it can be concluded that the circadian rhythm may influence the endocannabinoid system activity, modulating the role of CB1 receptors in the consolidation of aversive memory, and that the fluctuation in corticosterone levels throughout the day might explain, at least in part, this effect .