Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 222153.pdf: 549895 bytes, checksum: 3811e5ad2cb3705195be65abfab45c07 (MD5) / Avaliamos a relação entre o aumento do [óxido nítrico] (NO) e a incapacidade dos glicocorticóides (GC) de conterem o desenvolvimento da [resposta inflamatória sistêmica] em animais endotoxêmicos. Observamos que: i) o tratamento de animais com endotoxina (LPS) aumentou os níveis de NOS e diminuiu a capacidade de ligação dos [receptores de glicocorticóides] (GR) em vários órgãos do rato, oito horas após a injeção de LPS; ii) o tratamento de ratos com o inibidor da NOS (nitro-arginina metil éster, L-NAME) durante o desenvolvimento do choque endotoxêmico preveniu a inibição da capacidade de ligação do GR e iii) um doador de NO (S-nitroso-N-acetil-DL-penicilamina, SNAP) injetado previamente em animais tratados com dexametasona e injetados com LPS, interferiu com ações anti-inflamatórias e imunossupressoras da dexametasona. Sabendo da afinidade do NO por sulfidrilas livres presentes em vários alvos protéicos e com base nos nossos resultados, sugerimos que o aumento da produção de NO na endotoxemia seja um dos possíveis mecanismos responsáveis pela redução da capacidade de ligação e funcionalidade do GR, talvez pela interação do NO com sulfidrilas críticas ao funcionamento do GR, via S-nitrosilação. Investigamos também se o NO liberado precocemente após um estímulo inflamatório poderia interferir com reações inflamatórias e cardiovasculares desenvolvidas em quadros de sepse. A supressão da liberação precoce de NO nos modelos experimentais LPS e CLP (ligadura e perfuração do ceco), pelo tratamento dos animais com o inibidor seletivo para [óxido nítrico sintase neuronal] (nNOS) 7-nitroindazol (7-NI) impediu o aparecimento da resposta inflamatória e da hiporresponsividade vasoconstritora à fenilefrina, mostrando que o NO liberado inicialmente pela enzima nNOS é importante na iniciação e perpetuação da resposta inflamatória sistêmica. Considerando que o NO causa inibição da capacidade de ligação do GR (quando produzido em maiores quantidades) e que a ativação da nNOS (liberando pequenas quantidades de NO) é um evento importante para o início da resposta inflamatória, sugerimos que o NO modula a resposta inflamatória sistêmica, ativando-a e diminuindo-a em momentos distintos do seu desenvolvimento.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Ciências Fisiológicas, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-21T03:18:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348348.pdf: 2126727 bytes, checksum: 982419918d302fdc043eb7c5ea9fd1de (MD5) Previous issue date: 2017 / É sabido que a ingestão regular de frutose e o tratamento continuado com glicocorticoide (GC), separadamente, causam efeitos diabetogênicos. Por outro lado, a suplementação com óleo de peixe (OP) parece atenuar alguns destes efeitos adversos. Assim, buscamos avaliar o impacto da administração prolongada e combinada de frutose e prednisolona sobre a homeostase glicêmica e lipídica bem como o impacto da suplementação com OP e da interrupção dos insultos. Para tal, ratos Wistar machos foram divididos em: controle (Ctl), tratados com frutose (20% na água de beber) (Fru), tratados com prednisolona (12,5 µg/ml na água de beber) (Pred), tratados com a combinação de frutose + prednisolona (FruPred) por 90 dias consecutivos e, suplementados com óleo de peixe apenas (1g/Kg p.c., i.g) (Op) ou tratados com FruPred+Op por nos últimos 45 dias experimentais. Um grupo paralelo de animais FruPred (Rev) foi mantido por mais 3 meses após o término do tratamento para o acompanhamento das variáveis analisadas. Foram determinados parâmetros murinométricos e metabólicos e a análise do conteúdo total e fosforilado de proteínas envolvidas no contexto do trabalho em fígado, tecido adiposo e hipotálamo. Os grupos FruPred e Pred apresentaram redução no ganho de peso corpóreo ainda que tenham tido ingestão calórica similar aos demais grupos experimentais, os quais apresentaram ganho de peso continuo ao longo do tratamento. Os ratos FruPred apresentaram normoglicemia associada a hipertriacilgliceridemia a partir da quarta semana de tratamento. O grupo FruPred também desenvolveu aumento no conteúdo de glicogênio e triacilglicerol hepático, alteração no balanço redox hepático, hiperurecemia, aumento da adiposidade abdominal e redução na sensibilidade à insulina com hiperinsulinemia, embora mantiveram-se sem prejuízo na tolerância à glicose. Essas características foram acompanhadas de redução no conteúdo proteíco da AKT total no fígado e diminuição na razão entre o conteúdo fosforilado e total da AMPK em fígado e tecido adiposo. Nenhuma alteração significante foi encontrada na análise do conteúdo total e/ou fosforilado de proteínas envolvidas com a via inflamatória, entre outros alvos investigados. A suplementação com OP resultou em atenuação dos níveis circulantes de triacilglicerol e ácido úrico bem como no conteúdo de glicogênio hepático no grupo FruPredOp. Não houve qualquer efeito positivo da suplementação sobre os parâmetros murinométricos e demais parâmetros metabólicos e moleculares analisados. Noventa dias após o término do tratamento com frutose e prednisolona os ratos do grupo Rev apresentaram recuperação do ganho de peso corpóreo e normalização do perfil lipídico, da sensibilidade à insulina, da hiperurecemia, do conteúdo de gordura hepática e do perfil redox hepático. Além disso, houve recuperação do conteúdo proteico da AKT em fígado e da AMPK em tecido adiposo. Concluímos que a combinação da ingestão de frutose com o tratamento concomitante de GC compromete o crescimento corpóreo e induz um quadro característico de síndrome metabólica enquanto a suplementação com OP parece atenuar algumas alterações hepáticas. Também concluímos que o organismo é capaz de se recompor da maioria dos efeitos adversos com a interrupção dos insultos. Esses achados alertam para os riscos da associação de uma terapia baseada em GC e a ingestão regular de bebidas adoçadas. / Abstract : It is well known that regular ingestion of fructose and continuous treatment with glucocorticoid (GC), separately, cause diabetogenic effects. On the other hand, the supplementation with fish oil (OP) seems to attenuate some of these adverse effects. Thus, we sought to evaluate the impact of prolonged and combined administration of fructose and prednisolone on glycemic and lipid homeostasis as well as the impact of OP supplementation and the interruption of insults. For this, male Wistar rats were divided into: control (Ctl), treated with fructose (20% in drinking water) (Fru), treated with prednisolone (12.5 µg/ml in drinking water), treated with the combination of fructose + prednisolone (FruPred) for 90 consecutive days and, supplemented with fish oil only (1g/kg b.w) (Op) or treaded with FruPred + Op for the last 45 experimental days. A parallel group of FruPred (Rev) animals was maintained for another 3 months after the end of the treatment to monitor the variables analyzed. Functional and metabolic parameters were determined and the total and phosphorylated content of proteins involved in this work in the liver, adipose tissue and hypothalamus were analyzed. FruPred and Pred groups presented reduction in body weight gain even though they had similar caloric intake to the other experimental groups, which presented continuous weight gain throughout the treatment. FruPred rats presented normoglycemia associated with hypertriglyceridemia from at the fourth week of treatment. The FruPred group also developed increase in hepatic glycogen and triacylglycerol content, altered hepatic redox balance, hyperurecemia, increased in abdominal adiposity and reduced insulin sensitivity with hiperinsulinemia, although they remained without prejudice in glucose tolerance. These characteristics were accompanied by reduction in the protein content of total AKT in the liver and decrease in the phosphorylated and total AMPK ratio in liver and adipose tissue. No significant alteration was found in the analysis of the total and/or phosphorylated content of proteins involved with the inflammatory pathway, among other targets investigated. Supplementation with OP resulted in attenuation of circulating levels of triacylglycerol and uric acid as well as in hepatic glycogen content in the FruPredOp group. There was no positive effect of the supplementation on the metabolic and molecular parameters analyzed. Ninety days after the end of treatment with fructose and prednisolone, the Rev group showed recovery of body weight gain and normalization of lipid profile, insulin sensitivity, hyperurecemia, hepatic fat content and hepatic redox profile. In addition, there was recovery of the protein content of AKT in liver and AMPK in adipose tissue. We conclude that the combination of fructose intake and concomitant GC treatment compromises body growth and induces a characteristic metabolic syndrome model, whereas supplementation with OP appears to attenuate some liver changes. We also conclude that the system is able to recover the most adverse effects with the interruption of insults. These findings point to the risks of associating GC-therapy with regular intake of sweetened beverages.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:15:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337874.pdf: 1944270 bytes, checksum: c709b7290458a8082e6d02d0f2f51df6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introdução: Glicocorticoides são amplamente utilizados na prática clínica. Fisiologicamente há um ritmo circadiano bem definido de secreção de cortisol e um envolvimento na resposta aguda ao estresse. Possuem também, importante papel na autopreservação e na homeostasia do sistema nervoso central. O cérebro possui alta taxa metabólica e as funções neuronais são particularmente sensíveis às disfunções mitocondriais. Há uma falta de estudos do efeito dos glicorticoide sobre a atividade das enzimas da cadeia respiratória mitocondrial (ECRM) em estruturas corticais e límbicas em humanos adultos. A atividade destas enzimas pode ser avaliada com sucesso em amostras congeladas. A cirurgia de epilepsia refratária ao tratamento medicamentoso oferece uma oportunidade ética para estudar o tecido cerebral humano. Cirurgias de epilepsia são realizadas sob parâmetros hemodinâmicos e laboratoriais próximos ao fisiológico, mas não há estudos que analisaram a associação entre esses parâmetros e a atividade das enzimas envolvidas na cadeia respiratória mitocondrial. Métodos: Estudo de 24 indivíduos adultos com diagnóstico de epilepsia do lobo temporal mesial associado à esclerose do hipocampo (ELTM-EH)refratários ao tratamento medicamentoso. Todos foram submetidos a neurocirurgia para controle da doença e durante o ato cirúrgico foram removidas amostras do córtex temporal, da amigdala e do hipocampo. Foram obtidos a história clínica e os parâmetros bioquímicos e hemodinâmicos transoperatórios. Realizado regressão linear múltipla para determinar os parâmetros intraoperatórios associados de forma independente com a atividade das enzimas da cadeia respiratória mitocondrial nas três estruturas cerebrais. Foi avaliado também, o efeito de uma dose única (10 mg endovenoso) de dexametasona sobre as enzimas dos complexos I, II, IV e sobre a atividade da succinato desidrogenase da cadeira respiratória mitocondrial, nos mesmos tecidos, coletados até 4 horas após a infusão do corticoide. Resultados: A atividade das ECRM nas amostras do córtex temporal, amigdala e hipocampo foram diferentemente associadas às médias de saturação de oxigênio, hemoglogina sérica e pressão arterial média. Os intervalos de tempo da última crise convulsiva até o ato cirúrgico, do início da anestesia até a 8 coleta das amostras e a média de tempo de seu armazenamento em freezer também foram associadas com as atividades das ECRM. Após o controle das variáveis clínicas, demográficas, neuroradiológias, hemodinâmicas, bioquímicas e transoperatórias dos pacientes do grupo tratado com dexametasona (n=14) e não tratado (n=10); não foi evidenciado diferenças estatisticamente significativas entre as atividades das ECRM nas amostras analisadas. Conclusão: O controle rigoroso dos parâmetros hemodinâmicos, bioquímicos, tempo de armazenamento das amostras, tempo desde a última crise convulsiva e tempo de anestesia são necessários para minimizar vieses confundidores em estudos com amostras cerebrais de adultos coletados em neurocirurgias eletivas. Em condições cirúrgicas estressantes, uma dose farmacológica única de dexametasona não causou mudanças significativas nas atividades das ECRM no córtex temporal, amigdala e hipocampo de pacientes com ELTM-EH. Os resultados indicam uma resistência natural ou um mecanismo rápido de adaptação das enzimas para o efeito do glicocorticoide em estruturas límbicas e neocorticais destes pacientes. O desenho do estudo não é capaz de concluir sobre o efeito da atividade das ECRM na epileptogênese e ictogenese da ELTM-EH. Os nossos resulta dos são relevantes para entendermos a função mitocondrial cerebral durante estados de estresse agudo em pessoas saudáveis e em pacientes com doenças neuropsiquiátricas.<br> / Abstract : Background: Glucocorticoids are widely used in clinical practice. Physiologically there is a clear circadian rhythm of cortisol secretion and involvement in the acute stress response. It also has an important role in self-preservation and the homeostasis of the central nervous system. The brain has a high metabolic rate and neuronal functions are particularly sensitive to mitochondrial dysfunction. There is a lack of studies of the effect of corticosteroids on the mitochondrial respiratory chain enzymes (MRCE) in cortical and limbic structures in adult humans. The activity of these enzymes can be successfully evaluated in frozen samples. The epilepsy surgery to drug refractory treatment offers an ethical opportunity to study human brain tissue. Epilepsy surgeries are performed under hemodynamic and laboratory parameters close to normal but there are no studies that examined the association between these parameters and the activity of enzymes involved in mitochondrial respiratory chain. Methods: Study of 24 adults with diagnosis of mesial temporal lobe epilepsy related to hippocampus sclerosis (MTLE-HS) refractory to drug treatment. All patients underwent neurosurgery for disease control and during surgery samples were removed from the temporal cortex, the amygdala and the hippocampus. They were obtained medical history and biochemical and intraoperative hemodynamic parameters. Performed multiplelinear regression to determine the intraoperative parameter sindependently associated with the activity of MRCE in three brain estrtuturas. Also evaluated the effect of a single dose (10 mgintravenously) dexamethasone on enzymes complexes I, II and IV and the succinate dehydrogenase activity of mitochondrial respiratory chair, in the same samples, collected up to 4 hours after administration the corticosteroids. Results: The activity of MRCE in samples of temporal cortex, amygdala and hippocampus were associated diferentente the average oxygen saturation, serum hemoglogina and mean arterial pressure. The time intervals of the last convulsive crisis to the surgery, the beginning of anesthesia to the collection of samples and the average time of their storage in freezer were also associated with the activities of MRCE. After controlling for clinical, demographic, neuroradiological, hemodynamic, biochemical and transoperative parameters, patients in the group treated with dexamethasone(n=14) and untreated (n= 11) was not evidenced significant differences between the activities of the MRCE samples. Conclusion: Careful control of hemodynamic parameters, biochemical, storage time of the samples, time since last seizureand anesthetic time are needed to minimize confounding biasesin studies of brain samples of adults collected in electiveneurosurgery. In stressful surgical conditions, a singlepharmacological dose of dexamethasone did not causesignificant changes in activities of the MRCE in the temporalcortex, amygdala and hippocampus of patients with MTLE-EH.The results indicate a natural resistance or a quick adjustmentmechanism for enzymes to the effect of glucocorticoids on limbicand neocortical structures of these patients. The study design isunable to conclude on the effect of the activity of MRCE inepileptogenesis and ictogenesis the MTLE-EH. Our results arerelevant for understanding the brain mitochondrial function during acute stress states in healthy people and in patients with neuropsychiatric diseases.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-06-25T19:06:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 307998.pdf: 8139272 bytes, checksum: 576a8f966633f88f91526a5ec22b296e (MD5) / A regulação das respostas emocionais é essencial para a saúde mental e a forma mais simples de regulação destas respostas é a extinção, a qual a resposta condicionada a um estímulo diminui quando o reforço (estímulo) é omitido. Estudos recentes sugerem um papel importante dos sistemas endocanabinóide (eCB) e glicocorticóide na modulação de estados emocionais e extinção de memórias aversivas em animais. Evidências anteriores sugerem que os eCB são liberados no cérebro durante o processo de extinção de memórias de medo enquanto que os hormônios glicocorticóides são liberados pela glândula supra-renal durante eventos estressantes, como nas respostas de medo. Sugere-se que os glicocorticóides podem desencadear a liberação de eCB no cérebro. Por isso, nosso objetivo foi investigar se a interação entre estes sistemas neuromoduladores poderiam contribuir para as respostas de extinção de uma memória aversiva. Nós investigamos a possibilidade dessa interação através de experimentos comportamentais e bioquímicos em ratos. Nos procedimentos comportamentais utilizamos o modelo de extinção do condicionamento aversivo (CA) contextual. Neste modelo os animais foram colocados em uma caixa de condicionamento e passados 3 min. eles receberam um choque nas patas (1,5 mA, 1 s). Posteriormente, os animais foram re-expostos a caixa de condicionamento durante 9 min por três dias consecutivos. Os tratamentos foram realizados sempre antes de cada sessão de extinção. Um teste sem droga de 3 min foi conduzido 24 h após a última sessão de extinção para investigar possíveis efeitos duradouros. A porcentagem do tempo de congelamento foi utilizada como índice de memória. Nos procedimentos bioquímicos investigamos essa possível interação através de experimentos de liberação de GABA e glutamato (em sinaptossomas e fatias do cérebro de ratos) e ensaios de imunohistoquímica. Os resultados comportamentais mostraram que a ação do agonista glicocorticóide (dexametasona) depende dos receptores canabinóides CB1, assim como o sistema eCB depende da síntese de glicocorticóides endógenos para que ambos exerçam seus efeitos facilitatórios sobre a extinção. Já os resultados bioquímicos mostraram que a dexametasona é capaz de reduzir a liberação de GABA e glutamato em fatias do córtex cerebral de forma semelhante ao agonista canabinóide em sinaptossomas. Curiosamente, este efeito da dexametasona foi antagonizado por um antagonista dos receptores canabinóides do subtipo CB1. As imagens obtidas dos ensaios imunohistoquímicos confirmaram a possibilidade de interação observada anteriormente. Com isso, nossos achados sugerem pela primeira vez uma interdependência entre os sistemas eCB e glicocorticóide como um mecanismo para a extinção do CA contextual. Sugere-se que a liberação de glicocorticóides relacionados ao estresse induz a liberação de eCB no cérebro que, por sua vez, atuam ao facilitar a extinção de memórias aversivas. / The regulation of the emotional responses is essential for mental health and the simplest form of regulation of emotional responses is extinction, in which the conditioned response to a stimulus decreases when reinforcement (stimulus) is omitted. Recent studies suggest an important role of the endocannabinoid (eCB) and glucocorticoid systems in the modulation of emotional states and extinction of aversive memories in animals. Previous evidence suggests that endocannabinoids are released in the brain during fear extinction. Glucocorticoid hormones are released by adrenal glands during stress events. It is suggested that glucocorticoids may trigger the release of endocannabinoids in the brain. Hence, our objective was to investigate whether the interaction between these neuromodulatory systems contributes to the contextual fear extinction. We investigated the possibility of this interaction using behavioral and biochemical experiments in rats. In the behavioral procedures we used the extinction of contextual fear conditioning model. In this model rats were placed into the conditioning chamber and 3 min later received an electric-footshock (1.5 mA, 1 s). Subsequently, they were re-exposed to the chamber for 9 min in 3 consecutive days. Treatments were performed before each extinction trial. A 3-min drugfree test of contextual memory was performed 24 h after the last extinction session to investigate lasting effects. The percentage of freezing was used as an index of fear memory. In addition we investigated this possible interaction through GABA and glutamate releasing experiments (in synaptossomes and slices from rat brain) and immunohistochemistry assays. Our behavioral results showed that glucocorticoid agonist (dexamethasone) needs the CB1 cannabinoid receptor in the same way as endocanabinoid system requires endogenous glucocorticoids synthesis to exert its facilitative effects on extinction of contextual fear conditioning. Biochemistry results demonstrate that dexamethasone reduces GABA and glutamate release in slices from brain cortex in a similar way to cannabinoid agonist in synaptossomes. Interestingly, this dexamethasone effect was antagonized by CB1 cannabinoid antagonist. Immunohistochemistry images confirmed the possible interaction observed previously. Thus, our present findings suggest an interdependency of the glucocorticoid and endocannabinoid systems as a mechanism for contextual fear extinction. It is suggested that stress-related glucocorticoids drive the release of endocannabinoid in the brain, with a final impact on the extinction of aversive memories.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319875.pdf: 1757870 bytes, checksum: c9ef7faaa36479defa0ea1027117f86f (MD5) Previous issue date: 2013 / Quando organismos entram em contato com uma fonte de perigo, uma ameaça ou uma situação desagradável, mecanismos comportamentais e neuroendócrinos de defesa são ativados para proteger e reduzir possíveis danos ao indivíduo. Após um evento estressante, hormônios como a corticosterona são liberados em grandes quantidades, modulando processos de memória e aprendizado relacionados ao evento traumático. Concentrações muito baixas de corticosterona também têm demonstrado interferir nos processos de formação e expressão de memórias aversivas. Para compreender os mecanismos envolvidos na formação e expressão destas memórias, muitos estudos têm utilizado condicionamentos aversivos como modelo experimental. No presente estudo, o pentilenotetrazol (PTZ) foi empregado como um estímulo aversivo relevante (estímulo incondicionado; EI) e apresentado em associação com um odor neutro (estímulo condicionado 1; EC1) para promover o condicionamento olfatório aversivo (COA). Desta forma, o propósito do presente estudo foi verificar o papel do glicocorticoide exógeno, dexametasona, na formação e na expressão da memória aversiva condicionada ao odor (condicionamento de 1ª ordem) promovida pelo PTZ e condicionada ao contexto (condicionamento de 2ª ordem) promovida pelo odor condicionado. Para isto, a dexametasona, um agonista seletivo dos receptores glicocorticoides (GR), foi administrada 60 min antes da aquisição e da expressão do COA e/ou do condicionamento contextual aversivo (CCA). Os resultados obtidos demonstraram que os níveis baixos de corticosterona, induzidos pela supressão do eixo HPA por dexametasona, foram capazes de prejudicar tanto a formação como a expressão da memória aversiva condicionada ao odor. Entretanto, embora a dexametasona tenha prejudicado a formação da memória contextual aversiva, a dexametasona não foi capaz de impedir a expressão da resposta defensiva frente ao contexto condicionado. Ainda, quando o CCA já foi estabelecido e a dexametasona foi administrada antes da expressão da resposta defensiva condicionada ao contexto, não se observou quaisquer prejuízos na expressão da resposta defensiva frente ao contexto. Entretanto, ao se injetar dexametasona 60 min antes da aquisição e da expressão do CCA (condicionamento de 2ª ordem), a expressão da resposta defensiva relacionada ao contexto condicionado (teste EC2) foi prejudicada. Assim, o presente trabalho demonstrou que a dexametasona é capaz de prejudicar a aquisição/formação e a expressão da memória olfatória aversiva promovida pelo PTZ. Entretanto, o prejuízo na expressão da resposta defensiva relacionada ao contexto condicionado (condicionamento de 2ª ordem) foi observado apenas quando a dexametasona foi administrada antes da aquisição e da expressão da memória contextual aversiva, evidenciando diferenças sutis entre o processamento da memória aversiva de 1ª e 2ª ordem neste modelo experimental. <br>

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T05:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T22:59:27Z : No. of bitstreams: 1 183470.pdf: 2453428 bytes, checksum: eda21befa64120ff686c47632c0453f7 (MD5) / Tendo em conta que na [sepse] a forma cálcio-independente da óxido nítrico sintase (iNOS) é induzida, que os níveis de [glicocorticóides] circulantes estão aumentados na sepse e que o tratamento com corticóides sintéticos não funciona em pacientes sépticos o objetivo deste estudo foi avaliar [in vivo] a relação entre o [óxido nítrico] e o efeito da dexametasona em animais tratados com LPS. Assim, observamos que: i) o tratamento de animais com endotoxina aumentou os níveis de NOS cálcio-independente no pulmão, baço e rim e os níveis de NOS cálcio-dependente na musculatura esquelética; ii) a injeção prévia de dexametasona inibiu a expressão de NOS nos órgãos estudados, exceto no rim; iii) um doador de NO (SNAP) injetado previamente em animais tratados com dexametasona + LPS decresceu o efeito inibitório do glicocorticóide na expressão das NOS no pulmão, baço e na musculatura esquelética; e iv) o mesmo pré-tratamento com SNAP antes de dexametasona e LPS fez retornar os níveis séricos de NOx e a apoptose de células linfóides do baço aos valores obtidos com a administração de LPS somente. Sabendo da afinidade do NO por sulfidrilas livres presentes em vários alvos proteicos e com base nos nossos resultados, sugerimos que a redução do efeito da dexametasona causado pelo NO é um dos possíveis mecanismos responsáveis pela falha do efeito anti-inflamatório dos glicocorticóides em pacientes sépticos, talvez pela interação do NO com sulfidrilas críticas ao funcionamento do [receptor] de glicocorticóides, via [S-nitrosilação].

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Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-23T22:29:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tássia Karin Ferreira Borba.pdf: 3354461 bytes, checksum: 7228a0d46320d10124cb1683fac7625b (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-29T22:05:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tássia Karin Ferreira Borba.pdf: 3354461 bytes, checksum: 7228a0d46320d10124cb1683fac7625b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T22:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Tássia Karin Ferreira Borba.pdf: 3354461 bytes, checksum: 7228a0d46320d10124cb1683fac7625b (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / FACEPE / Há algumas décadas a ciência vem dando particular atenção às relações do homem atual com o alimento e seu estilo de vida, emergindo, nas últimas décadas, alta incidência de patologias, tais como obesidade e síndrome metabólica. Elas, associam-se diretamente ao balanço energético positivo crônico. Entretanto, o controle do balanço energético não se constitui num sistema fechado e recebe influencia de outros sistemas fisiológicos. Assim, disfunções em sistemas, como o eixo Hipotálamo Pituitária Adrenal (HPA) e o de relógios circadianos, podem repercutir sobre o balanço energético, contribuindo para a etiologia da obesidade. Neste sentido, destaca-se a participação de dois receptores nucleares, os de glicocorticoides e o REV-ERBα, pertencentes ao eixo HPA e sistema circadiano, respectivamente. Diante do exposto, o atual trabalho teve como objetivo, analisar os efeitos da utilização de agonistas dos receptores de glicocorticoides e do REV-ERBα, sobre o balanço energético. Para isto, foram utilizados ratos wistar albinos, aos 60 dias de idade. Em uma primeira etapa do estudo, foi administrado o agonista para os receptores de glicocorticoides (dexametasona) por duas vias de administração; intraperitoneal e intracerebroventricular. Observou-se que quando administrado por via intraperitoneal (5 mg/kg) a dexametasona promoveu aumento do consumo alimentar, sem alterações no ponto de saciedade, além de redução do gasto energético. Quando administrado por via intracebebroventricular (10 μg/rat), o grupo tratado com o agonista apresentou aumento do consumo alimentar associado ao retardo no ponto de saciedade e redução do gasto energético. Juntos, esses resultados demonstram que os glicocorticoides contribuem para o balanço energético positivo. Em uma segunda etapa do estudo, foi utilizado o agonista para os receptores REV-ERBα. Quando administrados por via intracerebroventricular (10 μg/rat) resultou em aumento no consumo alimentar, ganho de massa corporal, da eficiência alimentar e bem como redução da tolerância à glicose. Entretanto, em animais sob alimentação ad libitum, a ativação central desses receptores promoveu aumento da atividade locomotora e consequentemente do gasto energético, sem alterações no consumo alimentar e eficiência energética. Esses resultados evidenciam que a função dos receptores REV-ERBα sobre o balanço energético pode ser influenciada pelo status energético da célula. De uma maneira geral, conclui-se que os receptores nucleares influenciam, cada um a sua maneira, o controle do balanço energético, podendo contribuir, quando em desequilíbrio, para a etiologia da obesidade e dosordens metabólicas. Os receptores de glicocorticoides promovem balanço energético positivo, enquanto os receptores REV-ERBα influencia o balanço energético a depender do tecido ou estado energético do organismo. / Science has been paying particular attention to man's relationships with food and his lifestyle, given the high incidence of pathologies such as obesity and metabolic syndrome in the last decades. They are associated directly with the chronic positive energy balance. However, energy balance control does not constitute a closed system and is influenced by other physiological systems. Thus, dysfunctions in systems such as the Hypothalamic Pituitary Adrenal axis (HPA) and circadian clocks can affect the energy balance, contributing to the etiology of obesity. In this sense, we highlight the participation of two nuclear receptors, glucocorticoids and REV-ERBα, belonging to the HPA axis and circadian system, respectively. In view of the above, the present work aimed to analyze the effects of the use of glucocorticoid receptor agonists and REV-ERBα on the energy balance. For this, albino wistar rats were used at 60 days of age. In a first part of the study, the glucocorticoid receptor agonist (dexamethasone) was administered by two routes of administration; Intraperitoneal and intracerebroventricular. It was observed that when administered intraperitoneally (5 mg / kg) dexamethasone promoted an increase in food intake, without changes in the satiety point, in addition to a reduction in energy expenditure. When administered intravenously (10 μg / rat), the group treated with the agonist presented an increase in dietary intake associated with delay at the satiety point and reduction of energy expenditure. Together, these results demonstrate that glucocorticoids contribute to a positive energy balance. In a second stage of the study, the agonist for the REV-ERBα receptors was used. When administered intracerebroventricularly (10 μg / rat) resulted in increased food intake, body mass gain, food efficiency and reduced glucose tolerance. However, in animals fed ad libitum, central activation of these receptors promoted increased locomotor activity and consequently energy expenditure, without alterations in food intake and energy efficiency. These results show that the role of REV-ERBα receptors on the energy balance can be influenced by the energetic status of the cell. In general, it is concluded that the nuclear receptors influence, in their own way, the control of energy balance, and may contribute, when unbalanced, to the etiology of obesity and metabolic disorders. Glucocorticoid receptors promote positive energy balance, whereas REV-ERBα receptors influence the energy balance depending on the tissue or energetic state of the organism.

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T07:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DalBelo_CharistonAndre_M.pdf: 1727180 bytes, checksum: d1158c558ef761a445d61af6e05ceef1 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações induzidas pelo glicocorticóide prednisolona sobre os processos fisiológicos normais da junção neuromuscular de ratos e camundongos, através de técnica miográfica e eletrofisiológica in vitro e in vivo. Prednisolona, na concentração de 0,3 mM, antagonizou os efeitos bloqueadores produzidos pela d-Tubocurarina (1,45 ~M) tanto in vitro como in vivo. Nesta mesma concentração, produziu um aumento na força de contração muscular induzida pela ß -BuTx 1 µM em preparação nervo frênico-diafragma de camundongo e também alterou o padrão de resposta contrátil da guanidina. Além disso, Prednisolona causou efeitos pré¬ sinápticos como demonstrado pelo discreto aumento da freqüência dos potenciais de placa terminal em' miniatura (270 :t 4%) além do aparecimento de potenciais gigantes. Contudo a prednisolona', não determinou qualquer alteração sobre os valores do potencial de membrana. Assim, estes resultados confirmam os dados da literatura que apontam para uma indução por parte do glicocorticóide prednisolona, de efeitos diretos sobre a transmissão neuromuscular, possivelmente aumentando a liberação de acetilcolina no terminal nervoso motor / Abstract: The neuromuscular effects of glucocorticoids have been studied extensively since the clinical benefits of these hormones in the myasthenia gravis were reported by WARMOLTs et aI. in 1970. In this work we examined neuromuscular effects of the synthetic glucocorticoid prednisolone in isolated mammalian preparations in vitro and in vivo with supramaximal stimuli of the 0,1 Hz and 0,2 ms duration. Prednisolone (0.3 mM) antagonized the blockade produced by d¬ tubocurarine in vitro and in vivo. At this same concentration prednisolone increased in the muscle twitch tension responses to ß BuTx 1 µM in isolated phrenic nerve-diaphragm preparations but did not alter the contractile responses to 3,4-diaminopyridine; prednisolone also dimi~uished the neuromuscular effects induced by guanidine. In addition, prednisolone acted presynaptically to increase the amplitude and frequency of m.e.p.ps and generated a considerable number of giant m.e.p.ps without altering the resting membrane. These results suggest that a direct action of prednisolone on the neuromuscular transmission may increase the release of acetylcholine from the nerve terminal / Mestrado / Mestre em Farmacologia

O uso crônico de altas doses de glicocorticoides (GC) aumenta tecidos adiposos (TA) centrais. Essa pesquisa visou verificar os efeitos do uso contínuo de GC em doses mais baixas sobre diferentes TAs. Ratos Wistar machos com 10 semanas de vida foram divididos em 2 grupos: controle (CON) e cortisol (CORT) e foram implantados com minibomba osmótica, pela qual o grupo CORT recebeu 0,6 mg/kg/d de cortisol e o grupo CON recebeu salina, por 6 semanas. Os resultados mostram um aumento da gordura subcutânea (SC) abdominal dos animais CORT, acompanhada de: aumento da atividade máxima das enzimas ATP-citrato-liase e glicose-6-fosfato desidrogenase; redução da expressão da enzima AMPK; aumento da expressão da enzima 11&#946;HSD1 e das triglicérides circulantes. Esses dados sugerem que a intervenção aumentou a SC abdominal devido maior atividade de enzimas lipogênicas e de um possível aumento da captação de lipídeos séricos por esse tecido, o que pode ter resultado do aumento da concentração local de GC provocado pela expressão aumentada da 11&#946;HSD1. / Chronic use of high doses of glucocorticoids (GC) increases central adipose tissue (AT). This research aimed to verify the effects of continuous use of lower doses of GC on different TAs. Male Wistar rats, 10 weeks old, were divided into 2 groups: control (CON) and Cortisol (CORT), and were implanted with osmotic minipump, whereby CORT group received 0.6 mg/kg/d of cortisol and CON group received saline, for 6 weeks. The results show an increase in abdominal subcutaneous fat (SC) of CORT animals accompanied by: increased maximum activity of ATP citrate lyase and glucose 6-phosphate dehydrogenase enzymes; reduced expression of AMPK enzyme; increased expression of 11&#946;HSD1 enzyme and circulating triglycerides. These data suggest that the intervention increased abdominal SC due to increased activity of lipogenic enzymes and a possible increase in the uptake of serum lipids through this tissue, which may have resulted from increased local GC concentration caused by increased expression of 11&#946;HSD1.