Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-02-24T18:15:15Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InvestigaçãoInfluenciaAmigdala.pdf: 1530873 bytes, checksum: dc627f173f61c1bdd2168e350fd02e41 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-02-25T16:53:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InvestigaçãoInfluenciaAmigdala.pdf: 1530873 bytes, checksum: dc627f173f61c1bdd2168e350fd02e41 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T16:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InvestigaçãoInfluenciaAmigdala.pdf: 1530873 bytes, checksum: dc627f173f61c1bdd2168e350fd02e41 (MD5) Previous issue date: 2014 / A amígdala tem sido associada a uma grande variedade de funções ligadas a respostas fisiológicas, comportamentais e endócrinas, relacionadas a estímulos emocionais. Esta região encefálica é composta por vários sub-núcleos, que embora pertencentes à mesma estrutura, podem se envolver em funções diferentes, o que torna o estudo de cada sub-núcleo de grande importância. Nesse sentido, alguns deles vêm sendo ao longo dos anos bem estudados e caracterizados, mas o enfoque a um dos sub-núcleos, o basomedial (BMA), é ainda muito pequeno. O hipotálamo é uma importante região que também vem sendo relacionada ao comportamento emocional. Um grande número de evidências indica uma importante participação do hipotálamo dorsomedial (DMH) na integração das respostas fisiológicas oriundas do estresse emocional. Foi constatado que os estressores de origem psicológica e social são os mais comuns no ser humano. Neste sentido, alguns estudos em animais demonstraram que a perda temporária do controle social é uma importante condição que pode levar a alterações psicopatológicas. Diante disso, o nosso objetivo é avaliar a influência da amígdala basomedial no controle cardiovascular durante estresse social e sua possível interação com o hipotálamo dorsomedial. Para isso, ratos Wistar (300 ± 20g) foram anestesiados (cetamina-xilazina) e cânulas guia foram implantadas na BMA unilateralmente ou bilateralmente, em regiões próximas a BMA (NBMA) e no DMH bilateralmente. Após seis dias, os animais foram re-anestesiados (2% do isoflurano em 3l de O2) e um cateter inserido na artéria femoral para aferição de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC). Demos início aos procedimentos experimentais 48 horas após o último procedimento cirúrgico. Nossos resultados mostraram que a inibição química da BMA pela microinjeção do agonista GABAA, muscimol (100pmol/100nL) promove aumento da PAM e FC, enquanto a inibição química da NBMA não alterou tais parâmetros cardiovasculares. Observamos, também, que ao ativar quimicamente esta região, pela microinjeção bilateral do antagonista GABAA, bicuculline methiodide (10pmol/100nL), os aumentos de PAM e FC provocados pelo estresse social por rato intruso foram bloqueados. Adicionalmente, a resposta de inibição da BMA foi abolida pela inibição química do DMH através da microinjeção de muscimol. Sabendo-se que o DMH é tonicamente inibido, estes resultados sugerem que a BMA está constantemente ativada, participando integralmente do controle cardiovascular durante situações de estresse, exercendo influência na inibição tônica recebida pelo DMH nestas condições. ______________________________________________________________________________ / ABSTRACT : The amygdala has been associated with a variety of functions linked to physiological, behavioral and endocrine responses related to emotional situations. This brain region is comprised of multiple sub-nuclei, which although belonging to the same structure may be involved in different functions, which makes the study of each sub-nuclei of great importance. In this sense, some of them have been well studied and characterized over the years, but the approach to one of the sub-nuclei, the basomedial (BMA), is still very small. The hypothalamus is an important region which also has been related to emotional behavior. It was found that psychological and social origin stressors are the most common in humans. In this sense, some studies in animals have shown that the temporary loss of social control is an important condition that can lead to psychopathology. Therefore, our aim is to evaluate the influence of basomedial amygdala in cardiovascular control during social stress and its possible interaction with the dorsomedial hypothalamus. For this, male Wistar (300 ± 20g) were anesthetized (ketamine-xylazine) and guide cannulae were implanted bilaterally or unilaterally in the BMA, in nearby regions the BMA (NBMA) and bilaterally in the DMH. Six days later, the animals were anesthetized (2% isoflurane in O2 3l) and a catheter was inserted into the femoral artery for recording of mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR). We began the experimental procedures 48 hours after the last surgical procedure. Our results showed that chemical inhibition of BMA by microinjection of the GABAA agonist, muscimol (100pmol/100nL), promotes increased in MAP and HR, whereas chemical inhibition of NBMA did not alter such cardiovascular parameters. We also noted that when this region is chemically activated by bilateral microinjection of the GABAA antagonist, bicuculline methiodide (10pmol/100nL), the increases in MAP and HR caused by a intruder rat social stress were blocked. Additionally, the response of BMA inhibition was abolished by chemical inhibition of the DMH by microinjection of muscimol. Knowing that the DMH is tonically inhibited, these results suggest that the BMA is constantly active, participating fully in the cardiovascular control during stress situations, influencing the tonic inhibition received by the DMH in these conditions.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2013-07-16T04:02:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:38:18Z : No. of bitstreams: 1 279015.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Estudos realizados em nosso laboratório mostraram que regiões encefálicas estão envolvidas na coordenação de respostas comportamentais e metabólicas em pombos, com envolvimento de receptores de serotonina (5-HT). No entanto, até o momento, não tem sido investigado em aves o papel de aferências serotoninérgicas para o arcopallium no controle do comportamento ingestivo. O presente trabalho tem por objetivo investigar o envolvimento dos receptores serotoninérgicos localizados em regiões arcopaliais sobre o controle central da ingestão de alimento e água e de comportamentos ingestivos em pombos. Foram utilizados pombos adultos (Columba livia), de ambos os sexos, saciados, com cânulas-guia cronicamente implantadas em regiões do arcopallium de aves: Núcleo Taeniae da amígadala (TnA), arcopallium Intermédio (AI), Amígdala subpalial (SpA) e parte lateral do Núcleo Intersticial da Estria Terminal (BSTL). Os animais foram tratados, de forma aleatória, com veículo (ácido ascórbico a 5%) ou metergolina (MET, antagonista de receptor 5-HT1,2,7, nas doses de 7 e 20 nmol) ou GR46611 (GR, agonista de receptor 5-HT1B/1D nas doses de 2 e 6 nmol). Após o tratamento, as aves retornaram às suas gaiolas, que continham alimento e água previamente medidos. Durante 1 hora foram realizados registros de latência, duração e frequência dos comportamentos ingestivos (alimento e água) e dos comportamentos de autolimpeza, locomoção, imobilidade alerta, posturas típica de sono e exploração do ambiente. Ao final de 1, 2, 3 e 24 horas de observação, o consumo de alimento e água foi quantificado. Os resultados obtidos mostraram que, no TnA, a dose mais alta de MET provocou resposta hiperfágica de curta duração, sem afetar a ingestão de água ou os comportamentos não-ingestivos durante a primeira hora após a injeção. Ao contrário, a dose mais baixa de MET no AI e a mais alta, na SpA, aumentaram prontamente a ingestão hídrica, sem afetar o consumo alimentar; este efeito foi evidente nas 3 e 24 horas após o tratamento. Quando injetado no TnA e SpA, as doses mais alta e mais baixa de GR, respectivamente, elevaram imediatamente a ingestão de alimento e água; esses efeitos foram de longa duração (observados nas 3 e 24 h). O tratamento com GR (2 nmol) no AI também provocou aumento de longa duração na ingestão hídrica, sem modificar o consumo alimentar. Injeções dessas drogas no BSTL não ocasionaram significantes efeitos ingestivos. Esses dados indicam a presença de uma influência inibitória e tônica de aferências serotoninérgicas, parcialmente mediadas pelos receptores 5-HT1B/1D, em circuitos no TnA e na SpA relacionados à ingestão alimentar e hídrica e em mecanismos que controlam a ingestão de água no AI. Semelhante aos dados publicados sobre a amígdala medial de roedores, nossos resultados sugerem que um controle serotoninérgico inibitório e tônico da ingestão de alimento (mas não de água), mediado por receptores 5-HT1/2 e exercido na área amigdaloide medial, deva representar um atributo funcional conservado no encéfalo de amniotas, mas provavelmente envolvendo muitos mecanismos neurais taxa-específicos. / Studies made in our laboratory showed that serotonergic circuits acting in several hypothalamic regions are involved in the coordination of behavioral and metabolic responses in pigeons. However, the role of serotonergic inputs to the arcopallium in the control of feeding behaviour has not been investigated in birds. This work aims to look for a possible role of serotonergic receptors located in arcopalial regions in the central control of food and water intake and ingestive behaviors in pigeons. Freefeeding adult pigeons (Columba livia) of both sexes, had guide cannulae chronically inserted in regions of the arcopallium: nucleus taeniae of the amygdala (TnA), intermediate arcopallium (AI), subpallial amygdaloid area (SpA) and bed nucleus of the stria terminalis, lateral part (BSTL). The animals were treated with VEI icle (ascorbic acid 5%) or Metergoline (MET, 5-HT1/2 receptor antagonist; 7 and 20 nmol), GR46611 (GR, 5-HT1B/1D agonist; 2 and 6 nmol). After treatment, the birds were return to their cages, which contained food and water previously measured. The latency, duration and frequency of feeding (food and water) behavior and preening, locomotion, alert immobility, typical sleep positions and food exploration were recorded for 1 hour. Food and water were weighed 1, 2, 3 and 24 hours after treatments. The results showed that, in the TnA, the highest MET dose elicited a short-lived hyperphagy, without affecting drinking or non-ingestive behaviours during the first hour after injection. In contrast, the lowest dose in the AI and the highest dose in the SpA promptly increased drinking without affecting food intake, this effect was still evident 3 and 24 hours after treatment. The highest GR dose in the SpA and the lowest GR dose in the TnA promptly increased both food and water intake, and these effects persisted 24 h after treatment. GR (2 nmol) injections in the AI evoked long-lasting increases in drinking, but not in feeding. Injections of these drugs in the BSTL evoked no significant ingestive effects. These data indicate the presence of a tonic inhibitory influence of serotonergic inputs partly mediated by 5-HT1B/1D receptors, on feeding- and drinking-related TnA and SpA circuits and on mechanisms controlling drinking in the AI. Compared to data from the rodent medial amygdala, a tonic inhibitory 5-HTergic control of feeding (but not drinking) behaviour, mediated by 5-HT1/2 receptors and exerted in the medial amygdaloid area, may represent a broadly conserved functional attribute in the amniote brain, but probably involves many important taxa-specific neural mechanisms.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:15:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337874.pdf: 1944270 bytes, checksum: c709b7290458a8082e6d02d0f2f51df6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introdução: Glicocorticoides são amplamente utilizados na prática clínica. Fisiologicamente há um ritmo circadiano bem definido de secreção de cortisol e um envolvimento na resposta aguda ao estresse. Possuem também, importante papel na autopreservação e na homeostasia do sistema nervoso central. O cérebro possui alta taxa metabólica e as funções neuronais são particularmente sensíveis às disfunções mitocondriais. Há uma falta de estudos do efeito dos glicorticoide sobre a atividade das enzimas da cadeia respiratória mitocondrial (ECRM) em estruturas corticais e límbicas em humanos adultos. A atividade destas enzimas pode ser avaliada com sucesso em amostras congeladas. A cirurgia de epilepsia refratária ao tratamento medicamentoso oferece uma oportunidade ética para estudar o tecido cerebral humano. Cirurgias de epilepsia são realizadas sob parâmetros hemodinâmicos e laboratoriais próximos ao fisiológico, mas não há estudos que analisaram a associação entre esses parâmetros e a atividade das enzimas envolvidas na cadeia respiratória mitocondrial. Métodos: Estudo de 24 indivíduos adultos com diagnóstico de epilepsia do lobo temporal mesial associado à esclerose do hipocampo (ELTM-EH)refratários ao tratamento medicamentoso. Todos foram submetidos a neurocirurgia para controle da doença e durante o ato cirúrgico foram removidas amostras do córtex temporal, da amigdala e do hipocampo. Foram obtidos a história clínica e os parâmetros bioquímicos e hemodinâmicos transoperatórios. Realizado regressão linear múltipla para determinar os parâmetros intraoperatórios associados de forma independente com a atividade das enzimas da cadeia respiratória mitocondrial nas três estruturas cerebrais. Foi avaliado também, o efeito de uma dose única (10 mg endovenoso) de dexametasona sobre as enzimas dos complexos I, II, IV e sobre a atividade da succinato desidrogenase da cadeira respiratória mitocondrial, nos mesmos tecidos, coletados até 4 horas após a infusão do corticoide. Resultados: A atividade das ECRM nas amostras do córtex temporal, amigdala e hipocampo foram diferentemente associadas às médias de saturação de oxigênio, hemoglogina sérica e pressão arterial média. Os intervalos de tempo da última crise convulsiva até o ato cirúrgico, do início da anestesia até a 8 coleta das amostras e a média de tempo de seu armazenamento em freezer também foram associadas com as atividades das ECRM. Após o controle das variáveis clínicas, demográficas, neuroradiológias, hemodinâmicas, bioquímicas e transoperatórias dos pacientes do grupo tratado com dexametasona (n=14) e não tratado (n=10); não foi evidenciado diferenças estatisticamente significativas entre as atividades das ECRM nas amostras analisadas. Conclusão: O controle rigoroso dos parâmetros hemodinâmicos, bioquímicos, tempo de armazenamento das amostras, tempo desde a última crise convulsiva e tempo de anestesia são necessários para minimizar vieses confundidores em estudos com amostras cerebrais de adultos coletados em neurocirurgias eletivas. Em condições cirúrgicas estressantes, uma dose farmacológica única de dexametasona não causou mudanças significativas nas atividades das ECRM no córtex temporal, amigdala e hipocampo de pacientes com ELTM-EH. Os resultados indicam uma resistência natural ou um mecanismo rápido de adaptação das enzimas para o efeito do glicocorticoide em estruturas límbicas e neocorticais destes pacientes. O desenho do estudo não é capaz de concluir sobre o efeito da atividade das ECRM na epileptogênese e ictogenese da ELTM-EH. Os nossos resulta dos são relevantes para entendermos a função mitocondrial cerebral durante estados de estresse agudo em pessoas saudáveis e em pacientes com doenças neuropsiquiátricas.<br> / Abstract : Background: Glucocorticoids are widely used in clinical practice. Physiologically there is a clear circadian rhythm of cortisol secretion and involvement in the acute stress response. It also has an important role in self-preservation and the homeostasis of the central nervous system. The brain has a high metabolic rate and neuronal functions are particularly sensitive to mitochondrial dysfunction. There is a lack of studies of the effect of corticosteroids on the mitochondrial respiratory chain enzymes (MRCE) in cortical and limbic structures in adult humans. The activity of these enzymes can be successfully evaluated in frozen samples. The epilepsy surgery to drug refractory treatment offers an ethical opportunity to study human brain tissue. Epilepsy surgeries are performed under hemodynamic and laboratory parameters close to normal but there are no studies that examined the association between these parameters and the activity of enzymes involved in mitochondrial respiratory chain. Methods: Study of 24 adults with diagnosis of mesial temporal lobe epilepsy related to hippocampus sclerosis (MTLE-HS) refractory to drug treatment. All patients underwent neurosurgery for disease control and during surgery samples were removed from the temporal cortex, the amygdala and the hippocampus. They were obtained medical history and biochemical and intraoperative hemodynamic parameters. Performed multiplelinear regression to determine the intraoperative parameter sindependently associated with the activity of MRCE in three brain estrtuturas. Also evaluated the effect of a single dose (10 mgintravenously) dexamethasone on enzymes complexes I, II and IV and the succinate dehydrogenase activity of mitochondrial respiratory chair, in the same samples, collected up to 4 hours after administration the corticosteroids. Results: The activity of MRCE in samples of temporal cortex, amygdala and hippocampus were associated diferentente the average oxygen saturation, serum hemoglogina and mean arterial pressure. The time intervals of the last convulsive crisis to the surgery, the beginning of anesthesia to the collection of samples and the average time of their storage in freezer were also associated with the activities of MRCE. After controlling for clinical, demographic, neuroradiological, hemodynamic, biochemical and transoperative parameters, patients in the group treated with dexamethasone(n=14) and untreated (n= 11) was not evidenced significant differences between the activities of the MRCE samples. Conclusion: Careful control of hemodynamic parameters, biochemical, storage time of the samples, time since last seizureand anesthetic time are needed to minimize confounding biasesin studies of brain samples of adults collected in electiveneurosurgery. In stressful surgical conditions, a singlepharmacological dose of dexamethasone did not causesignificant changes in activities of the MRCE in the temporalcortex, amygdala and hippocampus of patients with MTLE-EH.The results indicate a natural resistance or a quick adjustmentmechanism for enzymes to the effect of glucocorticoids on limbicand neocortical structures of these patients. The study design isunable to conclude on the effect of the activity of MRCE inepileptogenesis and ictogenesis the MTLE-EH. Our results arerelevant for understanding the brain mitochondrial function during acute stress states in healthy people and in patients with neuropsychiatric diseases.

Orientador: Donizeti Cesar Honorato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T11:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Veronez_DjaniraAparecidadaLuz_D.pdf: 1713916 bytes, checksum: 0bb9082c7d06dda2f3716d4715c53cd9 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A epilepsia do lobo temporal (ELT) apresenta-se em um percentual elevado de pacientes que são refTatários ao tratamento clínico. Fato este que faz da ELT a epilepsia que melhor responde ao tratamento cirúrgico baseado na lobectomia do lobo temporal e na amígdalo-hipocampectomia. Esta última técnica cirúrgica consiste na ressecção parcial do corpo amigdalóide, do hipocampo e do giro para-hipocampal; estruturas consideradas epileptogênicas. Destas estruturas, o corpo amigdalóide é o único ainda com volume morfológico e morfométrico indeterminado. Com base nestes fatos, este trabalho apresenta como objetivos, determinar em cérebros de cadáveres humanos, parâmetros quantitativos e tridimensionais do corpo amigdalóide a partir da análise de cortes bidimensionais; definir os limites topográficos macroscópicos do corpo amigdalóide; estabelecer as distâncias entre o como temporal do ventrículo lateral e as superficies utilizadas nos acessos cirúrgicos; expressar os resultados em escalas métricas, da análise morfométrica e estereológica e sugerir o uso destas nas amígdalo-hipocampectomias. Para isto realizamos análise de cortes seriados, coronais e parassagitais do corpo amigdalóide, que foram avaliados através de um sistema de processamento e análise de imagem. O método de Cavalieri foi utilizado para estabelecer o volume absoluto do corpo amigdalóide. Por último, foram feitas análises estatísticas e apresentação gráfica dos resultados. Os hemisférios cerebrais, direitos e esquerdos foram analisados separadamente, para verificar a morfometria do corpo amigdalóide. Foram observadas diferenças inter-hemisféricas na volumetria do corpo amigdalóide. Nos cortes coronais a média do volume absoluto do corpo amigdalóide direito foi de 1.870mm3 e do corpo amigdalóide esquerdo foi de 1.807mm3, com índice de assimetria de 3,4%. Nos cortes parassagitais a média do volume absoluto do corpo amigdalóide direito foi de 1.927mm3 e do corpo amigdalóide esquerdo foi de 1.878mm3, com índice de assimetria de 2,6%. Não foi identificada variabilidade anatômica significativa na topografia dos ventrículos laterais e do corpo amigdalóide. Nossos resultados demonstram que a análise morfométrica e estereológica aplicada ao corpo amigdalóide e as medidas obtidas na topografia do lobo temporal constitui instrumento confiável, que pode auxiliar nas cirurgias de amígdalo-hipocampectomias / Abstract: The temporallobe epilepsy (TLE) has a high percentage of patients who are reffactory to a clinical treatment. This fact makes TLE the epilepsy that best responds to a surgi cal treatment. It is based on lobectomy of temporallobe and on amygdalohippocampectomy. This surgi cal technique consists of a partial resection of the amygdaloid complex, hippocampus, and gyrus parahippocampal. These structures are considered as epileptogenics. Among these structures, the amygdaloid complex is the only with undetermined morphological and morphometric volume. Based on these facts, this study will have the following objectives: to determine in brains of human corpses the quantitative and three-dimensional parameters of the amygdaloid complex obtained ITom analyses of two-dimensional slices; to define the topographic macroscopic limits of the amygdaloid complex; to establish the distances between the temporal hom of the lateral ventricles and the surfaces used for the surgi cal approaches; to express the results in metrical scales of morphometric and estereological analysis of the amygdaloid complex, and to suggest the use of them in an amygdalohippocampectomy. In order to do this, we have accomplished analysis of serial, coronary and parasagital slices of the amygdaloid complex, which were evaluated through a processing system and an image analysis. The Cavalieri Method was used to establish the absolute volume of the amygdaloid complexo Finally, estatistics analyses and a graphical presentation of the results were done. Right and left brain hemispheres were analyzed separately in order to verify the morphometry of the amygdaloid complexo The inter-hemispherical differences in the volumetry of the amygdaloid complex were observed. In the coronal slices the absolute medium volume of the right amygdaloid complex was 1.894mm3, and the left was 1.837mm3 with an index of asymmetry of 3,4%. In the parassagital si ices the absolute medium volume of the right amygdaloid complex was of 1.927mm3 and the left amygdaloid complex was 1.878mm3 with an index of asymmetry of 2,6%. We have verified that there was no significant anatomical variation in the topography of lateral ventricles and the amygdaloid complexo Our results demonstrate that a morphometric and estereological analysis applied to the amygdaloid complex and measurements obtained in the topography of the temporallobe is a reliable instrument, which can help in surgeries ofthe amygdalohippocampectomy / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Neurociências, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279407.pdf: 1202924 bytes, checksum: a3af176b012a1e575f9569b7cd9ae5aa (MD5) / O presente trabalho examinou os efeitos da microinjeção de MK-801 (antagonista de receptor NMDA), nas doses de 1,8 e 6 nmol e de DNQX (antagonista de receptor AMPA-kainato), nas doses de 0,8 e 2,7 nmol em pombos alimentados ad libitum no arcopalio intermédio (AI), região lateral do núcleo intersticial da estria terminal (BSTL) e núcleo taeniae da amígdala (NtA). Os resultados demonstraram que a administração da maior dose de DNQX no AI foi capaz de desencadear efeito hiperfágico na 3ª h, sem alterar duração, freqüência e latência para iniciar o comportamento ingestivo. A ingestão hídrica não foi afetada por ambas as doses de DNQX, da mesma forma os comportamentos não ingestivos mantiveram-se inalterados. A microinjeção da menor dose de MK-801 no AI causou elevação no consumo de alimento na 2ª e 3ª h e elevou a duração e freqüência desse comportamento. Na 1ª, 2ª e 3ª h após a injeção da menor dose de MK-801 houve incremento na ingestão hídrica, sem modificar a duração, freqüência e latência para iniciar o comportamento. Os comportamentos não ingestivos não foram afetados por ambas as doses de MK-801. Na região do BSTL, a administração da menor dose de DNQX causou hipofagia na 2ª h, entretanto, na 1ª e 3ª h de sessão experimental não houve alteração na quantidade de alimento ingerido, da mesma forma a latência para iniciar o comportamento, a duração e a frequência não foram modificadas. A ingestão de água e os comportamentos não ingestivos permaneceram inalterados após o tratamento com ambas as doses de DNQX no BSTL. A injeção da menor dose de MK-801 no BSTL elevou o consumo hídrico ao final da 1ª h de sessão experimental, acompanhado de elevação na duração e frequência, e redução na latência para iniciar o comportamento. Na 2ª e 3ª h não houve alteração no consumo de água. O comportamento de ingestão de alimento não foi afetado por ambas as doses de MK-801 administradas no BSTL. Dos comportamentos não ingestivos analisados, houve diminuição na sonolência e elevação da exploração do ambiente após a injeção da menor dose de MK-801 no BSTL, enquanto, a maior dose desencadeou diminuição na sonolência e atividade locomotora e elevação da exploração do ambiente. No NtA a administração da menor dose de DNQX provocou efeito hipofágico tardiamente, somente na 2ª h de sessão experimental, sem alterar a duração, freqüência e latência para iniciar esse comportamento. A maior dose de DNQX não afetou a quantidade de alimento consumido ao longo das 3 h, mas foi capaz de aumentar o tempo despendido pelo animal no comedouro. Ambas as doses de DNQX não afetaram o consumo de água no NtA. Com a injeção da menor dose de MK-801 houve maior consumo de hídrico ao longo de 2 h, sem modificar duração, freqüência e latência para iniciar o comportamento. Ambas as doses de MK-801 no NtA não causaram modificação nos comportamentos não ingestivos. Estes resultados indicam que em pombos os circuitos glutamatérgicos participam da modulação do comportamento de ingestão de alimento no AI, com participação de receptores do tipo AMPA-kainato e NMDA. Enquanto, na região do BSTL e NtA o consumo de alimento parece ser modulado por receptores AMPA-kainato. Já o consumo de água parece também ser regulado via neurotransmissão glutamatérgica, mediada por receptores NMDA no AI, BSTL e NtA. Vale ressaltar ainda que os receptores tipo AMPA-kainato parecem não exercer influência nesse comportamento.

Orientador: Patrícia de Oliveira Prada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:18:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_Giselede_M.pdf: 1355339 bytes, checksum: 9e121a8d79b7d1be25b7e55dcea89b10 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A obesidade é uma doença caracterizada pelo acúmulo excessivo de gordura corporal, acarretando diversas alterações metabólicas. Estas alterações influenciam o controle do balanço energético. O hipotálamo é considerado o órgão chave para o controle do balanço energético. Recebe informações da periferia por meio de nutrientes, sinais neurais e hormônios. Dentre estes hormônios, a insulina participa do controle da ingestão alimentar, tendo efeitos anorexigênicos. Esta regulação ocorre pela ativação de sua via de sinalização IR/PI3q/Akt. Em animais obesos ocorre uma menor ativação desta via como consequência ao estresse do retículo endoplasmático e ativação de proteínas da via inflamatória. No presente estudo destacamos a amígdala como uma importante região do sistema nervoso central envolvida na regulação da ingestão alimentar em resposta à insulina. Essa regulação foi dependente da ativação da via PI3q, pois a injeção de LY aboliu os efeitos da insulina no controle da ingestão. A insulina diminuiu os níveis de RNAm do neuropeptídeo orexigênico NPY e aumentou os níveis do RNAm do neuropeptídeo anorexigênico ocitocina na amígdala de animais controles via PI3q, o que pode ter contribuído para a hipofagia. Além disso, em animais obesos não houve redução na ingestão alimentar em resposta a insulina e a fosforilação da Akt foi diminuída na amígdala, sugerindo resistência à insulina nessa região do sistema nervoso central. A resistência à insulina foi associada com o estresse do retículo endoplasmático e inflamação na região da amígdala. A inibição do estresse do retículo endoplasmático com PBA (ácido fenil butírico), inibidor do estresse de retículo, reverteu a ação e sinalização da insulina, diminuindo a expressão do RNAm do NPY e aumentando a expressão do RNAm da ocitocina na amígdala de animais obesos. Em conjunto, os resultados sugerem que a amígdala é sensível a ação anorexigênica da insulina, sendo este efeito dependente da via PI3q. A ação da insulina na amígdala provavelmente modula a ingestão por alterar os níveis de neuropeptídeos como NPY e ocitocina. Animais obesos apresentam resistência à ação e sinalização da insulina em amígdala. O mecanismo molecular pelo qual ocorre resistência à insulina parece estar relacionado à ativação da via inflamatória e ao estresse de retículo endoplasmático / Abstract: Insulin acts in hypothalamus decreasing food intake (FI) by IR/PI3K/Akt pathway. This pathway is impaired in obese animals and endoplasmic reticulum (ER) stress and low grade inflammation are possible mechanisms involved in this impairment. Here, we highlighted amygdala as an important brain site of FI regulation in response to insulin. This regulation was dependent on PI3K/AKT pathway similar to the hypothalamus. Insulin was able to decrease NPY and increase oxytocin mRNA levels in the amygdala via PI3K, which may contribute to hypophagia. Additionally, obese rats did not reduce FI in response to insulin and AKT phosphorylation was decreased in the amygdala, suggesting insulin resistance. Insulin resistance was associated with ER stress and low grade inflammation in this brain region. The inhibition of ER stress with PBA reverses insulin action/signaling, decreases NPY and increases oxytocin mRNA levels in the amygdala from obese rats, suggesting that ER stress is probably one of the mechanisms that induce insulin resistance in the amygdala / Mestrado / Metabolismo e Biologia Molecular / Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientador: Patrícia de Oliveira Prada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:26:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Areias_MariaFernandaCondes_D.pdf: 914463 bytes, checksum: a03d2c15dfaa827247604af7078cc199 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A insulina tem efeitos anorexigênicos, reduzindo o peso corporal. Entretanto, a maior parte dos estudos teve como foco a ação e sinalização de insulina no hipotálamo. Assim, o primeiro objetivo do trabalho foi investigar a expressão e grau de fosforilação das proteínas da via de sinalização de insulina (IR/Akt), assim como a modulação da ingestão alimentar após estímulo com insulina na região da amígdala em animais controles. No segundo objetivo, investigamos se o bloqueio farmacológico da via da insulina com LY24002 na amígdala alterou a ingestão alimentar em resposta à insulina. O consumo de dieta hiperlipídica tem sido associado à resistência à insulina no hipotálamo. Assim, o terceiro objetivo foi investigar se a obesidade induz resistência à insulina nessa região e em adição investigar se a via inflamatória IKK/NFkB e o ER stress estavam alterados em amígdala de animais obesos. Obervou-se que após a injeção de insulina na amígdala, não houve diferença no peso corpóreo após 24 horas em animais controles. Em relação à ingestão alimentar, quatro horas após a injeção de insulina na amígdala, não houve diferença, entretanto, após 8, 12 e 24 horas houve uma diminuição na ingestão alimentar em animais controles. Após o bloqueio da PI3q com o inibidor farmacológico LY (240002), trinta minutos antes da injeção de insulina, observou se que a insulina não foi capaz de reduzir a ingestão alimentar. Verificou-se, após a injeção de insulina na região da amígdala, um aumento da fosforilação do receptor de insulina (IR) e da AKT em animais controles. Para confirmação da dissecção da amígdala, testou-se a expressão protéica FKBP5, que é expressa especificamente na região da amígdala. Os animais foram submetidos à dieta hiperlipídica e padrão por 3 meses e realizou-se um ITT (Teste Tolerância Insulina) para verificar a resistência à insulina dos animais. Observou-se que os animais obesos ficaram resistentes à insulina. Em relação ao peso corpóreo, houve um aumento de peso entre os obesos. Já em relação à ingestão alimentar, não houve diferença na ingestão após 4, 8, 12 e 24 horas entre os animais obesos. Após a injeção de insulina na região da amígdala, não se observou diferença na fosforilação da AKT de animais obesos quando comparada ao controle. Observou-se um aumento da fosforilação da JNK, da IKK alfa e beta, além da PERK e IRE1 no grupo submetido à dieta hiperlipídica quando comparada ao controle. Sendo assim, concluí-se que: o controle da ingestão alimentar é realizado, pelo menos em parte, pela ação da insulina na amígdala; e que o efeito da insulina na amígdala é via IR/PI3q/Akt. Os animais obesos apresentam resistência à ação da insulina na amígdala e esta é associada à redução da ativação da via IR/Akt. Acredita-se também que a dieta hiperlipídica aumenta a ativação, na amígdala, de serinas quinases que participam da via inflamatória e do stress do retículo endoplasmático, o que pode justificar a resistência à insulina / Abstract: Insulin has anorexigenic effects, reducing body weight. However most part of the studies has focused on hypothalamic insulin signaling. Thus the aim of the study was too investigated if insulin activates IR/Akt pathway in the amygdale and if this activation controls feeding. Besides this, it was investigated if the inhibition of PI3K by LY294002 alters food intake. In obese animals models insulin induces IR/PI3K/Akt pathway is impaired in the hypothalamus. Low grade inflammation characterized at cellular level by an activation of IKK/IKB/NF-KB pathway and JNK activation, and also induce of endoplasmatic reticulum (ER) stress are molecular mechanisms involved in insulin resistance in the hypothalamus of obese roedents. So, it was investigated if high fat diet impairs insulin signaling and action in the amygdale and if low grade inflammation and ER stress were present in this brain region. Food intake is decreased and IR and Akt phosphorylation were increased in response to insulin in the amygdale of control rats. In order to confirm whether the dissections of amygdale were corrected, the membranes with anti-co-chaperone FK506 binding protein 51 (FKBP5) antibody were re-blotted. FKBP51 is expressed in the amygdale region but not in striatum. It was observed the presence of FKBP5 in their membranes, indicating that the dissections of amygdale were appropriated. The administration of LY prior to insulin in the amygdale abolished this effect and also impaired Akt not IR phosphorylation in response to insulin. Body weight was increased in rats fed with HFD compared to control rats. Insulin tolerance test showed that obese rats were insulin resistant in comparison to control rats. Insulin injected in the amygdale did not decrease food intake after 4, 8, 12, 24 h. The IR and Akt phosphorylation were blunted in rats on HFD. The IKK and JNK phosphorylation were also increased in the amygdale of obese rats. In order to evaluate ER stress, it was investigated whether high fat feeding alters the protein expression of RNA-activated protein kinase-like ER resident kinase (PERK) and inositol-requiring kinase (IRE1). PERK and IRE1 protein expression were increased in the amygdale of rats fed a HFD compared to control rats, suggesting increased ER stress in the amygdale of obese rats Summing up, it was suggested that amygdale is an important region for food intake regulation in response to insulin and this regulation is disrupted in obese rats. It was also shown that food intake is regulated in a PI3K/Akt manner in the amygdale similarly to what occurs in the hypothalamus. Besides, data were provided suggesting that obese rats may have low grade inflammation and ER stress in parallel to insulin resistance in the amygdale / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Ciências

Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T18:07:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_RodolfoSouza_D.pdf: 4131498 bytes, checksum: 19063a2cb7dfffa9e3e542eeb3359cfc (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) participa de processos de plasticidade sináptica subjacentes à aprendizagem e memória. A ação do BDNF no hipocampo e na amígdala é necessária para à formação de memória emocionais, incluindo a memória de medo. Além disso, foi demonstrado em roedores que a persistência da memória aversiva depende um pico tardio na expressão de BDNF-maduro que ocorre no hipocampo. Contudo, ainda são necessárias investigações sobre o papel do BDNF-maduro na plasticidade sináptica e processos de memória em aves. Neste estudo o Experimento 1 investigou se o condicionamento som-choque induz um ciclo tardio de expressão do BDNF-maduro no hipocampo e amígdala de pombos. Pombos adultos receberam implante bilateral de microcânula intra-hipocampal e, sete dias após foram treinados com três pareamentos som-choque e designados para um dos três grupos: condicionamento e anisomicina (CondANI) , condicionado e salina (CondSAL) e condicionado não tratado (Cond). O grupo NAIVE não teve tratamento ou condicionamento. O Experimento 2 investigou se o bloqueio da ação do BDNF-maduro por infusão intra-hipocampal de anisomicina, e do antagonista do receptor TrkB, K252a, interferem na persistência da memória de medo condicionado ao contexto e ao som. Foram usados grupos de pombos que receberam infusão intra-hipocampal 11 h após o treino de salina (CondSAL2 e CondSAL7), anisomicina (CondANI2 e CondANI7), ou K252a (CondK2 e CondK7), e também controles não tratados (Cond2 e Cond7). Os animais foram testados ao contexto e a som 2 ou 7 dias após treino. No Experimento 1 a análise por Western blotting indicou que os valores de BDNF-maduro no hipocampo dos pombos Cond e CondSAL foram maiores do que nos pombos CondANI e NAIVE (p < 0,05). Os valores de BDNF-maduro na amígdala não diferiram entre os grupos condicionados (p > 0,05). No Experimento II não houve diferenças significativas entre grupos no teste ao contexto realizado 2 dias após o treino (p > 0,05), mas no quando testados 7 dias após o treino os grupos CondANI7 e CondK7 apresentaram menor ocorrência de congelamento do que Cond7 e CondSAL7 (p < 0,05). Não houve diferenças significativas entre grupos nos testes ao som realizados 2 e 7 dias após o condicionamento (p > 0,05). Os dados do Experimento I indicaram que o treino em condicionamento clássico aversivo induziu o aumento tardio da expressão BDNF-maduro no hipocampo e na amígdala, enquanto que os dados do Experimento 2 demostraram que a infusão intra-hipocampal de anisomicina e de K252a prejudicaram a persistência da memória de medo condicionado ao contexto, mas não a memória de medo condicionado ao som. Esses resultados estariam relacionados com uma dissociação entre o hipocampo e amígdala no processamento das informações contextuais e sonoras no medo condicionado. Em conjunto nossos dados evidenciam que a experiência do condicionamento ativa uma série de eventos moleculares que levam ao aumento da expressão do BDNF-maduro no hipocampo e na amígdala, garantindo a regulação fina da plasticidade neuronal necessária para a memória / Abstract: The Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF) participates in processes of synaptic plasticity underlying learning and memory. The action of BDNF in the hippocampus and amygdala is necessary for the formation of emotional memory, including fear memory. Furthermore, it was demonstrated that rodent aversive memory depends on persistence of a late peak in the expression of mature BDNF, which occurs in the hippocampus. However, we still need further investigations on the role of mature BDNF in synaptic plasticity and memory processes in birds. In this study, Experiment 1 investigated whether the tone-shock conditioning induces a late cycle-expression of mature - BDNF in the hippocampus and amygdala of pigeons. Adult pigeons underwent bilateral implantation of intra-hippocampal microcanullae and seven days later were trained with three tone-shock pairings and assigned to one of three groups: conditioning and anisomycin (CondANI), conditioning and saline (CondSAL) and untreated conditioning (Cond). The NAIVE group had no treatment or conditioning. Experiment 2 investigated whether blockade of the action of mature-BDNF with intra-hippocampal infusion of anisomycin or of TrkB receptor antagonist, K252a, interferes with the persistence of memory of conditioned contextual fear and conditioned tone fear. Groups of birds that at 11 h after the training received intra-hippocampal infusion of saline (CondSAL2 and CondSAL7) anisomycin (CondANI2 and CondANI7) or K252a (CondK2 and CondK7) as well as untreated controls (COND2 and Cond7) were used. Tests to the context and to the tone were conducted 2 days or 7 days after training. In Experiment 1 analysis by Western blotting indicated values of mature-BDNF in the hippocampus of pigeons and Cond CondSAL that were higher than in CondANI and NAIVE pigeons (p < 0.05). The values of mature-BDNF in the amygdala did not differ between the conditioned groups (p > 0.05). In Experiment II there were no significant differences between groups in the context test conducted 2 days after training (p > 0.05), but when tested 7 days after training both the CondANI7 and CondK7 groups showed lower occurrence of freezing than Cond7 and CondSAL7 (p < 0.05). There were no significant differences between groups in the tests to the tone conducted 2 or 7 days after conditioning (p > 0.05). The data of Experiment I indicated that training in classical aversive conditioning induced increase in late expression of mature-BDNF in the hippocampus and amygdala, whereas the data from Experiment 2 showed that intra-hippocampal infusion of anisomycin and K252a disrupted persistence of the memory of contextual fear conditioning, but not of fear memory to the tone. These results could be related to a dissociation between the hippocampus and amygdala in processing auditory and contextual information in fear conditioning. Taken together our data show that the conditioning experience activates a series of molecular events that lead to increased expression of mature-BDNF in hippocampus, and amygdala, which guarantee regulation of neuronal plasticity required for memory / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular