Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T12:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 241095.pdf: 2185966 bytes, checksum: 7e64cb9723ad13136833f478365fafc9 (MD5)

PAULA. F. A. R. Efeito de antioxidantes na resistência de união de um sistema adesivo ao esmalte bovino tratado com peróxido de hidrogênio 35%. 2017. 48 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by PPGO UFC (ufcppgo@gmail.com) on 2017-08-28T18:52:44Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_farpaula.pdf: 1374704 bytes, checksum: 610477dd12bb53bcfdbd2e272358b5bb (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-29T11:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_farpaula.pdf: 1374704 bytes, checksum: 610477dd12bb53bcfdbd2e272358b5bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T11:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_farpaula.pdf: 1374704 bytes, checksum: 610477dd12bb53bcfdbd2e272358b5bb (MD5) Previous issue date: 2017-04-20 / When restoration is placed immediately after dental bleaching, the residual oxygen from the hydrogen peroxide degradation inhibits the polymerization of the resinous compounds, reducing the bond strength. Therefore, the objective of this study was to evaluate the influence of the application of antioxidant substances, 10% sodium ascorbate, 5% glutathione and 10% glutathione, on the bond strength of an adhesive system on the bovine enamel previously treated with 35% hydrogen peroxide. The antioxidant activity test by the DPPH free radical was performed to measure the antioxidant power of the experimental substances, using distilled water as a negative control. Enamel blocks of 111 healthy bovine incisors were randomly divided into five groups: without (C+) or with (C-) bleaching, with bleaching and application of solutions of 10% sodium ascorbate (ASC-10), 5% glutathione (GLUT-5) or 10% glutathione (GLU-10), for five minutes, and Filtek Z350 nanohybrid resin was applied in 1mm increments. In the monomers’ degree conversion test of the adhesive system, slices (1mm) of two specimens of each group were used for comparison with the adhesive system in the polymerized and non-polymerized states by Micro-Raman eletroscopy, operating with HeNe laser at 532nm. In the bond strength test, the blocks were sectioned until obtaining sticks of 1.0 mm2. The sticks were subjected to a traction of 0.5 mm/min in an universal testing machine. The fracture mode was analyzed and classified. The one-way ANOVA and Kruskal-Wallis tests, adopting a significance level of 5%, were performed for statistical analysis. ASC-10 showed better antioxidant activity (p<0.05). The application of the antioxidant substances did not influence the degree of conversion of the adhesive monomers (p>0.05). In the test of degree conversion, the C- group statistically inferior to others groups (p<0.05). In the bond strength test, GLUT-5 and GLUT-10 were statistically superior (p<0.05) than the C+. The ASC-10 and C+ groups did not show any statistical differences. Although ASC-10 showed better antioxidant activity and recovered the values of bond strength, GLUT-10 was more efficient than ASC-10 in reversing the effect of decrease of bond strength after the use of bleaching agents. There was prevalence of adhesive failure in all groups. / Quando a restauração adesiva é imediata ao clareamento dentário, o oxigênio residual oriundo da degradação do peróxido de hidrogênio inibe a polimerização dos compostos resinosos, diminuindo a resistência de união. Portanto, o objetivo do estudo foi avaliar a influência da aplicação de substâncias antioxidantes, ascorbato de sódio 10%, glutationa 5% e glutationa 10%, na resistência de união de um sistema adesivo ao esmalte bovino previamente tratado com peróxido de hidrogênio 35%. O teste de atividade antioxidante pelo radical livre DPPH foi realizado para mensurar o poder antioxidante das substâncias experimentais, usando a água destilada como controle negativo. Blocos de esmalte obtidos a partir de 111 incisivos bovinos hígidos foram aleatoriamente divididos em cinco grupos: sem (C+) ou com clareamento (C-), com clareamento e aplicação de soluções de ascorbato de sódio 10% (ASC-10), glutationa 5% (GLUT-5) ou glutationa 10% (GLUT-10), por cinco minutos, e resina nanohíbrida Filtek Z350 foi aplicada em incrementos de 1 mm. No teste do grau de conversão dos monômeros do sistema adesivo, foram utilizadas fatias (1 mm) de dois espécimes de cada grupo para comparação com o sistema adesivo nos estados polimerizado e não polimerizado por eletroscopia Micro-Raman, operando com laser HeNe a 532 nm. No teste de resistência de união, os blocos foram seccionados até obtenção de palitos de 1 mm2. Os palitos foram submetidos a tração de 0,5 mm/min em uma máquina de ensaios universais. O modo de fratura foi analisado e classificado. Os testes ANOVA one-way e Kruskal-Wallis adotando nível de significância de 5% foram realizados para análise estatística. O ASC-10 apresentou melhor atividade antioxidante (p<0,05). A aplicação das substâncias antioxidantes não influenciou no grau de conversão dos monômeros adesivos (p>0,05). No grau de conversão, o grupo C- foi estatisticamente inferior aos demais grupos (p<0,05). No teste de resistência de união, GLUT-5 e GLUT-10 foram estatisticamente superiores (p<0,05) ao C+. Os grupos ASC-10 e C+ não apresentaram diferenças estatísticas. Apesar de o ASC-10 ter apresentado melhor atividade antioxidante e ter recuperado os valores de resistência de união, GLUT-10 foi mais eficiente que o ASC-10 em reverter o efeito de redução da resistência de união após uso de agentes clareadores. Houve prevalência de falhas do tipo adesiva em todos os grupos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-09T03:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349094.pdf: 1891020 bytes, checksum: ade596640a1f6d33af4c10b90f3ec9ef (MD5) Previous issue date: 2017 / Tióis celulares estão entre os principais alvos das espécies reativas de oxigênio (ERO), portanto, estão no centro dos processos redox celulares. A oxidação de tióis proteicos pode levar à perda de função de enzimas, modulação de vias de sinalização e morte celular; assim, a manutenção do estado redox destes tióis é crucial para a homeostasia celular. Os sistemas da glutationa (GSH) e da tiorredoxina (Trx) são considerados os principais tampões redox celulares e são os principais sistemas envolvidos na manutenção do estado redox celular. A contínua reciclagem das formas oxidadas da GSH e Trx pelas enzimas glutationa redutase (GR) e tiorredoxina retudase (TrxR) é crucial para este processo, mantendo o contínuo fluxo de elétrons para peroxidases. A glutationa peroxidase (GPx) e as peroxirredoxinas (Prx) estão entre as peroxidases mais eficientes. As Prx são consideradas sensores de H2O2, participando de vias de sinalização redox, sendo o estado de oxidação de sua cisteína catalítica um marcador de estresse oxidativo. A perda da homeostasia redox tem sido correlacionada com diversas situações patológicas, como inflamação e câncer. Dessa forma, o presente trabalho tem como objetivo analisar a importância dos sistemas da GSH e Trx na proteção de células contra oxidantes, além de estudar a modulação redox das Prx durante a fagocitose em neutrófilos. No primeiro trabalho investigamos o efeito de 2-acetylamino-3-[4-(2-acetylamino-2- carboxyethylsulfanylthiocarbonylamino)phenylthiocarbamoylsulfanyl] propionic acid (2-AAPA), um inibidor da GR, sobre parâmetros de viabilidade celular e balanço redox em células derivadas de glioblastoma humano A172. Nossos dados demonstram que o 2-AAPA, além de inibir a GR, também é um potente inibidor da TrxR. A inibição dessas enzimas por 2-AAPA diminuiu drasticamente a capacidade dessas células em metabolizar peróxidos orgânicos, deixando as células mais vulneráveis a este peróxido. 2-AAPA apresentou um perfil de toxicidade tempo- e concentração-dependente. A oxidação da Prx 1, Prx2 e Prx3 foi observada apenas na concentração tóxica de 100µM, após 30 min de incubação. 2-AAPA também causou uma severa disfunção mitocondrial, afetando o potencial de membrana e respiração acoplada a produção de ATP. Apresentamos evidências de que a oxidação de peroxirredoxinas e disfunção mitocondrial são eventos precoces na toxicidade de 2-AAPA a células A172. Coletivamente, esses dados reforçam a hipótese do papel central dos sistemas da GSH e Trx na proteção de células a agentes oxidantes, e reforça a hipótese de que a inibição conjunta de GR e TrxR pode ser uma estratégia interessante para o tratamento de câncer. No segundo trabalho, estudamos a modulação redox de Prx durante o burst oxidativo em células pró-mielocíticas HL60 diferenciadas em neutrófilos. Demonstramos que a diferenciação dessas células com DMSO diminui a expressão da Prx2 de uma maneira tempo dependente, mas não alterou os níveis de Prx1, indicando um possível papel regulatório da Prx2 na diferenciação dessas células por DMSO. Enquanto isso, a diferenciação com ATRA não alterou os níveis de Prx2. A estimulação das células diferenciadas com forbol miristato acetato ou staphylococcus aureus induziu o burst oxiativo nas células diferenciadas, levando à oxidação da Prx1 de uma maneira tempo-dependente. A oxidação da Prx1 foi dependente da atividade da NADPH oxidase, já que a sua inibição aboliu esse efeito. Além disso, demonstramos que a inibição da NADPH oxidase por Diphenyleneiodonium chloride diminui a oxidação basal da Prx1. Por último, discutimos os resultados apresentados com dados obtidos em neutrófilos durante a minha estadia no Center for Free Radical Research da Nova Zelândia, sob orientação da Christine Winterbourn. Mostramos que as Prx estão completamente oxidadas em condições basais, um fenômeno nunca antes observado. Assim, apresentamos dados relevantes que podem ter implicações importantes para a sinalização redox e, consequentemente, para a função de células inflamatórias. De modo geral, os dados apresentados ressaltam a importância da modulação do ambiente redox na função e morte celular. / Abstract : Thiol groups are amongst the main targets of reactive oxygen species (ERO), therefore they are at the center of all redox processes in the cell. Protein thiol oxidation can lead to loss of function, response signaling and cell death and, hence, the maintenance of thiols in cell is critical for cellular homeostasis. The glutathione (GSH) and thioredoxin (Trx) systems are the main redox buffers in cells. The continuous recycling of the oxidized forms of GSH and Trx is achieved by the action of glutathione reductase (GR) and thioredoxin reductase (TrxR), which keep the constant supply of electrons for the peroxidases. Among these, the peroxiredoxins (Prx) have a special role, acting as a peroxide sensor and marker of oxidative stress. The loss of redox homeostasis has been linked to several pathologies such as inflammation and cancer. Therefore, this work aims at study the importance of the GSH and Trx systems to cell protection against oxidants, and to analyze the redox modulation of Prx during inflammatory processes. In the first work, we investigated the effect of 2-acetylamino-3-[4-(2-acetylamino-2- carboxyethylsulfanylthiocarbonylamino)phenylthiocarbamoylsulfanyl]propionic acid (2-AAPA), an inhibitor of GR and TrxR, on parameters of cell viability and redox balance in A172 glioblastoma cells. The inhibition of these enzymes drastically reduced cell?s capacity to metabolized organic peroxides (but not H2O2) and, consequently, rendered cells more susceptible to organic peroxide. 2-AAPA also displayed a time and concentration dependent toxicity. We observed a marked oxidation of Prx 1, 2 and 3, as well as a severe mitochondrial dysfunction. Collectively, our results highlight the importance of GSH and Trx systems to cell?s protection against oxidants. Also, we present evidence that oxidation of Prx and mitochondrial dysfunction are early events in 2-AAPA toxicity to A172 cells. In the second work, we studied the redox modulation of Prx during oxidative burst in differentiated promyelocytic HL60 cells. We demonstrated that the differentiation of these cells to a neutrophil-like phenotype with dimethylsulfoxide (DMSO) greatlydiminished Prx2 expression in a time-dependent manner, but didn´t change Prx1 expression. Pharmacological stimulation or exposure to microbes induced the oxidative burst in the differentiated cells, leading to Prx1 oxidation in a time-dependent manner. Oxidation of Prx1 was dependent on NADPH oxidase, because inhibition of this enzyme abolished this effect. Furthermore, inhibition of the oxidase by Diphenyleneiodonium chloride reduced the basal oxidation of Prx1 in unstimulated cells. Lastly, we discuss the presented results with data obtained from human neutrophils during my stay at the Center for Free Radical Research in New Zealand under supervision of Christine Winterbourn. We show for the first time that the Prx are completely oxidized under unstimulated conditions. Therefore, the presented results may have important implications for the role of Prx in inflammatory cells function. Overall, this thesis highlights the central role of the modulation of the redox environment to cell function and death, as well as shows, for the first time, a Prx fully oxidized in unstressed conditions.

Urease (EC 3.5.1.5) é uma metaloenzima dependente de níquel que catalisa a hidrólise da ureia à amônia e dióxido de carbono. A Soja (Glycine max) produz duas isoformas de urease: a urease ubíqua (uSBU) e a urease embrião-específica (eSBU). Nosso grupo demonstrou que eSBU apresenta propriedades biológicas independentes da sua atividade ureolítica, como ativação de plaquetas, atividade inseticida e inibição do crescimento de fungos fitopatogênicos, estes últimos sugestivos de envolvimento das SBUs em mecanismos de defesa da planta. Outras ureases também estudadas pelo nosso grupo, são as de Feijão-de-porco (Canavalia ensiformis). O Feijão-de-porco produz três isoformas de urease: Canatoxina, JBU e JBURE-II, que também apresentam atividades biológicas, não relacionadas à sua atividade enzimática. Dentre elas, a atividade inseticida tem sido a mais estudada. A toxicidade das ureases a insetos envolve a liberação de um peptídeo interno tóxico, mediante à hidrólise por enzimas digestivas do inseto. Um peptídeo equivalente foi clonado em Escherichia coli e denominado Jaburetox. Este peptídeo apresenta um amplo espectro de ação contra insetos e toxicidade contra fungos. Nossos objetivos nessa tese foram estudar: 1) as propriedades biológicas da urease ubíqua de soja, fusionada à Glutationa S-Transferase (GST-uSBU), e 2) as propriedades estruturais do peptídeo Jaburetox. No capítulo 1 mostramos que a GST-uSBU é tóxica contra fungos filamentosos, interferindo no metabolismo secundário fúngico e na produção de pigmentos, e também foi tóxica a leveduras, induzindo mudanças morfológicas. A proteína de fusão apresentou ainda atividade inseticida e induziu agregação de plaquetas de coelho e de hemócitos de insetos. Os dados sugerem que GST-uSBU serve de modelo para o estudos futuros de propriedades biológicas de ureases de plantas. No captítulo 2, o peptídeo Jaburetox foi estabilizado em sua forma monomérica, com a utilização do agente redutor TCEP (tris (2-carboxietil) fosfina). O Jaburetox apresentou elevado raio hidrodinâmico, característico de uma proteína intrinsicamente desordenada. Estes dados foram confirmados através de análises de Dicroísmo Circular, de preditores de desordem (PONDR) e por Ressonância Magnética Nuclear. A estrutura do peptídeo em solução foi elucidada, apresentando um motivo α-hélice na região N-terminal e duas estruturas do tipo volta, uma na região central e outra próxima da região C-terminal do peptídeo. O conhecimento da estrutura tridimensional do peptídeo será de grande importância para o entendimento do mecanismo de ação inseticida e fungitóxico do Jaburetox. / Urease (EC 3.5.1.5) is a nickel-dependent metalloenzyme that catalyzes the hydrolysis of urea to form ammonia and carbon dioxide. Soybean (Glycine max) produces two urease isoforms: ubiquitous urease (uSBU) and the embryo-specific urease (eSBU). Our group demonstrated that eSBU displays biological properties independent of its ureolytic activity, such as platelets activation, insecticidal activity and inhibition of phytopathogenic fungi growth. These data suggested that soybean ureases could be involved in plant defense. Other ureases also studied by our group are jack bean (Canavalia ensiformis) ureases. Jack bean produces three isoforms of ureases, Canatoxin, JBU and JBURE-II, which also have biological properties unrelated to enzymatic activity. Among them, the insecticidal activity has been the most studied. The toxicity of ureases against insects involves hydrolysis by insect digestive enzymes and the release of a toxic internal peptide. An equivalent peptide was cloned in Escherichia coli and called Jaburetox. This peptide presents a broad spectrum of activity against insects and is also fungitoxic. In this thesis, our objectives were to study: 1) the biological properties of the soybean ubiquitous urease fused to Glutathione S- Transferase (GST-uSBU), and 2) the structural properties of the peptide Jaburetox. In chapter 1, we show that GST-uSBU is toxic against filamentous fungi, interfering on the fungal secondary metabolism, in the pigments production, and also affected yeasts, inducing morphological changes. GST-uSBU also displayed insecticidal activity and induced aggregation of rabbit platelets and insect hemocytes. Thus, this fusion protein could serve as model for future studies related to biological properties on plant ureases. In chapter 2, the peptide Jaburetox was stabilized in its monomeric form by using the reducing agent TCEP (tris (2-carboxyethyl) phosphine). Jaburetox showed a large hydrodynamic radius, which is characteristic of an intrinsically disordered protein. These data were confirmed by Circular Dichroism analysis, disorder predictors (PONDR) and Nuclear Magnetic Resonance. The structure of the peptide in solution was elucidated, showing a α-helix motif in the N-terminal region and two turn-like structures, one located in the central region and another near the C-terminal of the peptide. The knowledge of Jaburetox’s three-dimensional structure is an important step towards the understanding of its insectidal and fungitoxic mode of action.

FREITAS, Lyara Barbosa Nogueira. Efeito protetor do sesquiterpenóide ß-Ionona na lesão gástrica induzida por etanol em camundongos : envolvimento da via NO/GMPc/Katp e da glutationa. 2013. 84 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-08-27T11:12:42Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lbnfreitas.pdf: 1411890 bytes, checksum: 24fd7a22e45875c2e36513d809e9cd3a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-08-27T11:56:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lbnfreitas.pdf: 1411890 bytes, checksum: 24fd7a22e45875c2e36513d809e9cd3a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-27T11:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lbnfreitas.pdf: 1411890 bytes, checksum: 24fd7a22e45875c2e36513d809e9cd3a (MD5) Previous issue date: 2013 / The β-ionone (4-[2,6,6-cyclohexene-1-trimetill]-3-butene-2-one) is a sesquiterpene (degraded terpenoid - C13) present in the molecular structure of retinol and β-carotene acid retinoic being formed from the mevalonate pathway in different types of plants. Research on the biological activities of β-ionone are still incipient and limited results with this compound are found in the literature. This study aims to investigate the activity of β-ionone in the model of ethanol-induced gastric injury. Handling of animals and experimental protocols were recorded by the Ethics Committee on Animal Research (CEPA) under number 87/2011. Swiss mice (n = 8), fasted 18 hours, were orally treated with BI at doses of 6.25, 12.5, 25, 50 and 100mg/kg. After 60 min of administration BI animals received 0.2 ml of absolute ethanol po. After 60 min this administration, the animals were sacrificed, the stomachs removed and analyzed to determine the rate of injury. Histologic examination of the stomach was performed by assigning scores to the parameters of edema, hemorrhage, loss of epithelial cells and inflammatory infiltrate. To investigate the role of mediators in BI effect, animals received indomethacin (10 mg / kg, po), L-NAME (20 mg / kg, ip) ODQ (10 mg / kg, ip), glibenclamide (5 mg / kg, ip) and capsazepine (5 mg / kg, ip) before treatment with BI (12.5 mg / kg, po). Misoprostol (50 mg / kg po), L-arginine (600 mg / kg, ip), diazoxide (3 mg / kg, ip) and capsaicin (0.3 mg / kg, po) was used positive pattern. The levels of nitrite and glutathione were measured in the stomach mucosa to investigate the effect of BI on the levels of NO and its antioxidant effect, respectively. Treatment of animals with the BI (12.5, 25, 50 and 100 mg / kg) reduced significantly and dose-dependent manner, the area of ethanol-induced gastric lesion to (11.41 ± 2.0, 7 92 * ± 1.8, 6.32 ± 2.0 and 1.43 ± 0.42% respectively). However, the BI lowest tested dose (6.25 mg / kg) showed no significant reduction of the ulcerated area (21.97 ± 1.8%). The administration of BI scores decreased hemorrhage, edema and loss of epithelial cells. The capsazepine and indomethacin were not able to reverse the protective effect of BI. Pretreatment of animals with L-NAME, ODQ and glibenclamide reversed the gastroprotective effect of BI, showing the involvement of NO and KATP channels in its mechanism of action. The group pretreated with BI (12.5 mg / kg po) showed a higher concentration of nitrite (24.18 mM) compared to the control group (17.68 mM). The pretreatment BI was effective in protecting against oxidative damage (346.4 ± 60.32 mg / g of tissue), preventing depletion of GSH levels in tissue. These results indicate that the β-ionone has gastroprotective effect in the model of ethanol-induced gastric injury mediated by the NO cGMP K ATP and terpene through the mediation of the GSH depletion induced by ethanol. / A β-ionona (4-[2,6,6-trimetill-1-ciclohexeno]-3-buten-2-ona) é um sesquiterpeno (terpenoide degradado - C13) presente na estrutura molecular do retinol, β-caroteno e ácido retinóico, sendo formado a partir da via do mevalonato em diferentes tipos de plantas. As pesquisas sobre as atividades biológicas da β-ionona ainda são incipientes e poucos resultados com este composto são encontrados na literatura. Este estudo visa investigar a atividade da β-ionona no modelo de lesão gástrica induzida por etanol. A manipulação dos animais e os protocolos experimentais foram registrados na Comissão de Ética em Pesquisa Animal (CEPA) sob o número 87/2011. Camundongos Swiss (n = 8), em jejum de 18 h, receberam, por gavagem, BI nas doses de 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg. Após 60 min da administração de BI os animais receberam 0,2 ml de etanol absoluto por gavagem. Decorridos 60 min dessa administração, os animais foram sacrificados, os estômagos removidos e analisados para determinação do índice de lesão. A avaliação histopatológica do estômago foi realizada atribuindo escores aos parâmetros de edema, hemorragia, perda de células epiteliais e infiltrado inflamatório. Para investigar o envolvimento de mediadores no efeito de BI, os animais receberam indometacina (10 mg/kg; v.o.), L-NAME (20 mg/kg; i.p.), ODQ (10 mg/kg; i.p.), glibenclamida (5 mg/kg; i.p.) e capsazepina (5 mg/kg; i.p) antes do tratamento com BI (12,5 mg/kg; v.o.). Misoprostol (50 µg/kg v.o), L-arginina (600 mg/kg; i.p.), diazóxido (3 mg/kg; i.p.) e capsaicina (0,3 mg/kg; v.o.) foram utilizados padrão positivo. Os níveis de nitrito e glutationa foram dosados na mucosa do estômago para investigar o efeito da BI sobre os níveis de NO e seu efeito antioxidante, respectivamente. O tratamento dos animais com a BI (12,5; 25; 50 e 100 mg/kg), reduziu significativamente e de forma dose-dependente, a área da lesão gástrica induzida pelo etanol para (11,41 ± 2,0; 7,92 ± 1,8*; 6,32 ± 2,0 e 1,43 ± 0,42 % respectivamente). Entretanto, a BI na menor dose avaliada (6,25 mg/kg), não apresentou redução significativa da área ulcerada (21,97 ± 1,8%). A administração de BI reduziu os escores de hemorragia, edema e a perda de células epiteliais. A Indometacina e capsazepina não foram capazes de reverter o efeito protetor da BI. O pré-tratamento dos animais com L-NAME, ODQ e Glibenclamida reverteu o efeito gastroprotetora da BI, mostrando o envolvimento do NO e canais KATP no seu mecanismo de ação. O grupo pré-tratado com BI (12,5 mg/kg v.o.) mostrou uma maior concentração de nitrito (24,18 mM) quando comparado ao grupo controle (17,68 mM). O pré tratamento com BI foi efetivo em proteger contra o dano oxidativo (346,4 ± 60,32 µg/g de tecido), evitando a depleção nos níveis de GSH no tecido. Estes resultados indicam que a β-ionona possui efeito gastroprotetor no modelo de Lesão Gástrica induzida por Etanol mediado pela via NOGMPcKATP e através da mediação do terpeno na depleção dos níveis de GSH provocado pelo etanol.

GUIMARÃES, Sérgio Botelho. Efeitos do pré-tratamento com dimetilsulfóxido, ácido lipóico ou ternatina sobre o estresse oxidativo em ratos jovens submetidos à torção do cordão espermático. 2005. 127 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-27T11:55:59Z No. of bitstreams: 1 2005_tese_sbguimarães.pdf: 2903887 bytes, checksum: e29f856c370a7325db5245196d310f27 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-27T11:57:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_tese_sbguimarães.pdf: 2903887 bytes, checksum: e29f856c370a7325db5245196d310f27 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-27T11:57:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_tese_sbguimarães.pdf: 2903887 bytes, checksum: e29f856c370a7325db5245196d310f27 (MD5) Previous issue date: 2005 / The protective role of dimethylsulfoxide (DMSO), lipoic acid (LA) and ternatin (TN), known free radical scavengers and cell membrane protectants were evaluated in an experimental model of testis ischemia/reperfusion. One hundred and twenty young male Wistar rats, mean weight 172.5±15g, were randomized in five equal groups (GS - Sham, GC – Control, GD – Dimethylsulfoxide, GA – Lipoic acid and GT/D – Ternatin/DMSO). Rats of each group were distributed into four subgroups (T-0, T-1, T-3 and T-6), each comprising six animals. All surgical procedures were performed under inhalatory ether anesthesia. Experimental rats received intraperitoneal (i.p.) injections of 3% aqueous solution of DMSO (10 ml/kg, GD), LA (10 mg/kg, GA) or TN/DMSO (12 mg/kg, suspended in 3% aqueous solution of DMSO), GT/D) 24, 12 and 4 hours before cord detorsion. Last dose was given 1 hour before ischemia induction or second Sham operation. Sham (GS) and Control (GC) rats received NaCl 0.9% 10 ml/Kg i.p. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and reduced glutathione (GSH) levels (µmol/g wet tissue) were assayed in testis. Total Antioxidant Power (TAP) (µM) was measured in blood plasma. Data were first analyzed by Kolmorogov-Smirnov test to assess differences in the general shapes of distribution. Comparisons between groups were made using the t test for normally distributed data and the Mann-Whitney U test for non-normally distributed data. P values of <0.05 were considered to indicate statistical significance. Comparisons between antioxidant-treated and saline-treated rats (Control group, GC) were made using Dunnett’s test. Spermatic cord torsion induced significant decrease in testis MDA levels during ischemia and reperfusion in DMSO (GD) and LA (GA) and in TN/DMSO (GT/D) treated rats during reperfusion, compared with respective controls. MDA levels were significantly increased in GC compared with Sham (GS) rats at the end of the ischemia and during reperfusion as well as one hour after detorsion (T-1) in GC rats compared with T-0, in the same group, indicating additional damage imposed by the afflux of oxygenated blood (reperfusion) to the ischemic tissues. GSH levels decreased significantly in saline-treated (GC) compared with Sham-operated rats and increased significantly in DMSO and LA treated rats at the end of ischemia and during reperfusion. The model utilized in this study did not induce systemic effects. TAP was significantly increased during reperfusion (T-1) in LA (GA) and TN/DMSO (GT/D) pretreated rats, compared with respective controls. The results of the present study reinforce the hypothesis that ischemia and reperfusion are free radicals generating processes. The different antioxidants studied here have demonstrated great efficacy in cell membrane protection by decreasing lipid peroxidation in all experiments. Increased reduced glutathione levels in DMSO and LA treated rats support the view that these substances can exert a protective effect against testis oxidative stress injury caused by ischemia/reperfusion in rats subjected to torsion of the spermatic cord lasting three hours. TN protective effects in reducing lipoperoxidation were more pronounced in ischemic tissues. / O efeito protetor do dimetilsulfóxido (DMSO), do ácido lipóico (LA) e da ternatina (TN), conhecidos seqüestradores de radicais livres e protetores da membrana celular foram avaliados utilizando um modelo experimental de isquemia/reperfusão do testículo. Cento e vinte ratos Wistar jovens com peso médio de 174 g foram distribuídos ao acaso em cinco grupos (GS - Simulado, GC – Controle, GD – Dimetilsulfóxido. GA – Ácido lipóico e GT/D – Ternatina/DMSO) numericamente iguais e posteriormente redistribuídos em quatro subgrupos (T-0, T-1, T-3 e T-6), com seis animais cada. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob os efeitos da anestesia geral inalatória. Os animais receberam injeções intraperitoniais (i.p.) de solução aquosa de DMSO a 3% (10 ml/kg, GD), LA (10 mg/kg, GA) ou TN+DMSO (12 mg/kg, GT/D, em solução aquosa de DMSO a 3%) 24, 12 e 4 horas antes da destorção do cordão espermático. A última dose foi administrada uma hora antes da indução da isquemia ou da segunda operação simulada (Sham). Os ratos do grupo Simulado (GS) e do grupo Controle (GC) receberam de NaCl 0,9% (10 ml/Kg) i.p. Foram determinadas as concentrações de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e glutationa reduzida (GSH) no tecido (testículo), e a capacidade antioxidante total (CAP) do plasma. Para determinação do padrão de distribuição das amostras utilizou-se o teste de Kolmorogov-Smirnov. As comparações entre os grupos foram feitas utilizando-se o t teste ou o teste U de Mann-Whittney quando assim indicado. Para as comparações dos grupos tratados com antioxidantes ao grupo Controle (GC) utilizou-se o teste de Dunnett. Valores de p<0,05 foram considerados significantes. A torção do cordão espermático induziu uma redução significante das concentrações de MDA, no tempo máximo de isquemia e na reperfusão, em tratos pré-tratados com DMSO (GD) e LA (GA) e durante a reperfusão naqueles pré-tratados com TN/DMSO (GT/D), comparados com seus respectivos controles. Os níveis de MDA estavam significantemente elevados nos ratos do grupo GC comparados aos animais do grupo GS, no tempo máximo de isquemia e durante a reperfusão, bem como uma hora após a destorção (T-1) comparada ao T-0, demonstrando o dano adicional decorrente do afluxo de sangue oxigenado (reperfusão) ao tecido isquêmico. As concentrações de GSH diminuíram nos ratos pré-tratados com solução salina e aumentaram significativamente nos ratos pré-tratados com DMSO ou LA, no tempo máximo de isquemia e durante a reperfusão. O modelo isquêmico utilizado não foi capaz de gerar efeitos sistêmicos. A capacidade antioxidante total aumentou significantemente durante a reperfusão (T-1) nos ratos pré-tratados com LA (GA) e TN/DMSO (GT/D) comparados aos respectivos controles. Esses resultados fortalecem a hipótese de que a isquemia e reperfusão são processos geradores de radicais livres. Os diferentes antioxidantes estudados mostraram grande eficiência na proteção da membrana celular, reduzindo a peroxidação lipídica, em todos os experimentos. O aumento dos níveis de glutationa reduzida, nos ratos pré-tratados com DMSO e LA, mostra que estes antioxidantes exercem uma proteção eficaz contra o estresse oxidativo induzido pela isquemia/reperfusão em ratos submetidos à torção do cordão espermático por três horas. Os efeitos protetores da ternatina se manifestam com maior intensidade no tecido isquêmico, no controle da peroxidação lipídica.

ROCHA, Nayrton Flávio Moura. Estudo dos efeitos farmacológicos do (-)-a-bisabolol em modelos animais de nocicepção, inflamação e úlcera gástrica em camundongos. 2009. 137 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-08T11:57:09Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_nfmrocha.pdf: 1150977 bytes, checksum: 205dc024fd733ba2dd3ae3714fcd9166 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-08T16:53:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_nfmrocha.pdf: 1150977 bytes, checksum: 205dc024fd733ba2dd3ae3714fcd9166 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-08T16:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_nfmrocha.pdf: 1150977 bytes, checksum: 205dc024fd733ba2dd3ae3714fcd9166 (MD5) Previous issue date: 2009 / (-)-a-bisabolol, a sesquiterpenic álcool, is commonly obtained from Matricaria chamomilla and from species of Vanillosmopsis, it was tested in animal standardized models of nociception, inflamation and gastric ulcer in mice. In this assays, (-)-a-bisabolol was used in the doses of 25 and 50 mg/Kg in the models of nociception and 100 and 200 mg/Kg in the models of inflamatiom and gastric ulcers, administered by via oral. (-)-a-bisabolol demonstrated to have an antinociceptive activity in the models of visceral nociception induced by intraperitoneal acetic acid and in the second phase of the test nociception was induced by intraplantar administration of formaline. (-)-a-bisabolol did not demonstrate activity in the thermal nociception model of hot plate. These findings suggests that the antinociceptive action of (-)-a-bisabolol is not linked to central mechanisms and may be related with pre inflamatory process. In the models of paw oedema induced by carragenine and dextran the animals treated with (-)-a-bisabolol showed smaller oedemas as compared to animals treated only with the vehicle. (-)-a-bisabolol was capable to reduce the paw oedemas induced by 5- HT, but not the oedema induced by histamine, so it could relate the antiinflamatory activity of (-)-a-bisabolol to the interference in the action/liberation or in the systesis/metabolism of 5- HT. (-)-a-bisabolol demostrated having gastroprotective activity in the absolute ethanol and indomethacin-induced gastric lesions. The mechanism of this action was pharmacologicaly tested, doing pre-treatments with L-NAME, Glibenclamide and Indomethacin. These experiments demonstrated that tha gastroprotective action of (-)-a-bisabolol seems not to be involved the nitric oxide, potassium channels ATP-dependents or the sysntesis of prostaglandines. By the way, the quantification of GSH in the gastric tissues of not lesioned animals e lesionated by ethanol or indomethacin showed that the treatment with (-)-a- bisabolol atenuate the decrease of GSH associated with the lesive agents, but it did not increase its levels in the animals that not recieve ethanol or indomethacin. This way (-)-a- bisabolol increase the disponibility of GSH in the gastric tissue, having in vivo antioxidant activity, that allows us to associate this finding to its gastroprotective action. / O (-)-a-bisabolol, um álcool sesquiterpenico comumente obtido de Matricaria chamomilla e de espécies do gênero Vanillosmopsis, foi testado em modelos animais padronizado de nocicepção, inflamação e úlcera gástrica em camundongos. Nestes ensaios, o (-)-a-bisabolol foi utilizado nas doses de 25 e 50 mg/Kg nos modelos de nocicepção e 100 e 200 mg/Kg nos modelos de inflamação e úlceras gástricas, administrados por via oral. O (-)-a-bisabolol demonstrou possuir atividade antinociceptiva nos modelos de nocicepção visceral induzida por ácido acético intraperitoneal e na segunda fase do teste de nocicepção induzida pela injeção intraplantar de formalina. O (-)-a-bisabolol não demonstrou atividade no modelo de nocicepção térmica da placa quente. Esses achados sugerem que a ação antinociceptiva do (-)- a-bisabolol não está ligada a mecanismos centrais e deve estar relacionada com o processo inflamatório. Nos modelos de edema de pata induzidos por carragenina e dextrano os animais tratados com (-)-a-bisabolol exibiram edemas menores em comparação com os animais tratados apenas com veículo. (-)-a-bisabolol foi capaz de diminuir os edemas de pata induzidos por 5-HT, mas não os edemas induzidos por histamina, assim, pode-se relacionar a atividade anti-inflamatória do (-)-a-bisabolol a sua interferência na ação/liberação ou na síntese/metabolismo da 5-HT. O (-)-a-bisabolol mostrou ter atividade gastroprotetoras frente às lesões gástricas induzidas por etanol absoluto ou indometacina. O mecanismo dessa ação foi testado farmacologicamente, realizando pré-tratamentos com L-NAME, Glibenclamida e Indometacina. Estes experimentos demonstraram que a ação gastroprotetora do (-)-a- bisabolol parece não envolver o óxido nítrico, os canais de potássio ATP-dependentes ou a síntese de prostaglandinas. Por outro lado, a quantificação de GSH nos tecidos gástricos dos animais não lesionados e lesionados por etanol ou indometacina mostraram que o tratamento com (-)-a-bisabolol atenua o decréscimo de GSH associado as lesões pelos agentes lesivos, mas não aumenta a sua quantidade nos estômagos dos animais não tratados com etanol ou indometacina. Dessa forma o (-)-a-bisabolol aumenta a disponibilidade de GSH no tecido gástrico, possuindo ação antioxidante in vivo, o que nos permite associar esse achado a sua ação gastroprotetora.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-04T04:11:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344573.pdf: 1192073 bytes, checksum: e22f3d3bef1eefc16cfb2ea94ee29b13 (MD5) Previous issue date: 2016 / O metilglioxal (MG) é uma toxina endógena sintetizada em diversas vias metabólicas, sendo a glicólise a principal delas. O aumento nos níveis de MG foi associado a transtornos de humor, como a depressão e a ansiedade, além de ser considerado um dos principais agentes causais do envelhecimento e de doenças neurodegenerativas. Contudo, não se sabe quais são os mecanismos moleculares envolvidos na indução desses efeitos. Assim, no presente trabalho foram avaliados os efeitos comportamentais e neuroquímicos após administração via intraperitoneal (i.p.) aguda e repetida de MG, em camundongos Swiss fêmeas, com 3 meses de idade. Os animais que receberam MG tiveram um aumento de imobilidade no teste da suspensão da cauda (TSC), tanto 15 minutos (25 - 200 mg/kg) ou 4 h após uma única administração de MG (10 e 25 mg/kg). Administrações repetidas de MG (1 injeção diária por 6 dias consecutivos de 10 e 25 mg/kg, seguida do TSC 24 h após a última injeção) também levou a um aumento no tempo de imobilidade no TSC. Este efeito tipo-depressivo não pode ser atribuído a uma alteração na atividade locomotora dos animais, uma vez que esta não foi afetada no teste do campo aberto. O MG 10 mg/kg induziu um efeito ansiolítico no TCA, uma vez que o tempo no centro foi aumentado 4 h após o tratamento com MG, o que já havia sido relatado na literatura. Este efeito ansiolítico também foi observado no teste da caixa claro/escuro, onde os animais tratados com MG (25 mg/kg) permaneceram mais tempo na área clara 4 h após a administração de MG. Este mesmo efeito foi observado no tratamento com doses repetidas de MG. As análises bioquímicas revelaram que o tratamento com MG (10 e 25 mg/kg) não é capaz de alterar os níveis de glutationa, e a expressão das enzimas glutamato-cisteína ligase, glutathiona redutase, glioxalase 1 e tiorredoxina redutase no hipocampo, estriado e cortex cerebral, exceto pelo aumento da atividade TrxR no hipocampo. O comportamento do tipo-depressivo induzido pelo MG não foi encontrado em outros trabalhos com injeção intracerebroventricular e por períodos prolongados, entretanto os testes comportamentais de forma aguda (15 min e 4 h) e administrações repetidas foram bastante consistentes. O conhecido efeito ansiolítico foi confirmado pelos nossos dados experimentais, cujo mecanismo de ação parece envolver os receptores GABAA. O conjunto de dados, juntamente com aqueles apresentados por outros autores, confirmam que o MG está envolvido com a modulação de comportamentos relacionados a depressão e a ansiedade em roedores. Adicionalmente, este trabalho mostrou que o9MG não é capaz de alterar os parâmetros bioquímicos relacionados às defesas antioxidantes 4 h após a sua administração. As buscas por mecanismos de ação do MG ainda precisam ser investigadas em estudos futuros.<br> / Abstract : Methylglyoxal (MG) is an endogenous toxin synthesized in several metabolic pathways, glycolysis is the main one. The increase in MG levels has been associated with mood disorders such as depression and anxiety, besides being one of the main causative agents of aging and neurodegenerative diseases. However, it is not known which are the molecular mechanisms involved in the induction of these effects. In the present study we evaluated the behavioral and neurochemical effects after intraperitoneal (i.p.) acute and repeated MG in Swiss female mice, 3 months old. The animals that received MG had an increased immobility time in the tail suspension test (TST) for both 15 minutes (25-200 mg / kg) or 4 h after a single administration of MG (10 and 25 mg / kg). Repeated administration of MG (1 injection daily for 6 consecutive days of 10 and 25 mg / kg, followed by the TSC 24 h after the last injection) also led to an increase in immobility time in the TST. Such depressant effect can not be attributed to a change in locomotor activity of the animals, since it was not affected in the open field test. The MG 10 mg / kg induced an anxiolytic effect on the OFT, since the time was increased in the center 4 h after MG treatment, which had already been reported in the literature. This anxiolytic effect was also observed in the light /dark box test where the animals treated with MG (25 mg / kg) remained longer in the light area 4 h after MG administration. This same effect was seen in treatment with repeated doses of MG. Biochemical analysis revealed that treatment with MG (10 and 25 mg / kg) is not capable of altering levels of glutathione, and expression of glutamate-cysteine ligase enzyme glutathione reductase, glyoxalase 1 and thioredoxin reductase in the hippocampus, striatum and cerebral cortex, except for increased TrxR activity in the hippocampus. The type-depressant behavior induced by MG has not been found in other studies with intracerebroventricular injection and for prolonged periods, though the behavioral tests acutely (15 min, 4 h) and repeated administration here were quite consistent. The known anxiolytic effect was confirmed by our experimental data, whose mechanism of action appears to involve the GABAA receptor. The data set, along with those presented by other authors, confirm that the MG is involved in the modulation of behaviors related to depression and anxiety in rodents. In addition, this study showed the MG is not able to change the biochemical parameters related to the antioxidant defenses 4 h after administration. The search for MG mechanisms of action still need to be investigated in future studies.

Urease (EC 3.5.1.5) é uma metaloenzima dependente de níquel que catalisa a hidrólise da ureia à amônia e dióxido de carbono. A Soja (Glycine max) produz duas isoformas de urease: a urease ubíqua (uSBU) e a urease embrião-específica (eSBU). Nosso grupo demonstrou que eSBU apresenta propriedades biológicas independentes da sua atividade ureolítica, como ativação de plaquetas, atividade inseticida e inibição do crescimento de fungos fitopatogênicos, estes últimos sugestivos de envolvimento das SBUs em mecanismos de defesa da planta. Outras ureases também estudadas pelo nosso grupo, são as de Feijão-de-porco (Canavalia ensiformis). O Feijão-de-porco produz três isoformas de urease: Canatoxina, JBU e JBURE-II, que também apresentam atividades biológicas, não relacionadas à sua atividade enzimática. Dentre elas, a atividade inseticida tem sido a mais estudada. A toxicidade das ureases a insetos envolve a liberação de um peptídeo interno tóxico, mediante à hidrólise por enzimas digestivas do inseto. Um peptídeo equivalente foi clonado em Escherichia coli e denominado Jaburetox. Este peptídeo apresenta um amplo espectro de ação contra insetos e toxicidade contra fungos. Nossos objetivos nessa tese foram estudar: 1) as propriedades biológicas da urease ubíqua de soja, fusionada à Glutationa S-Transferase (GST-uSBU), e 2) as propriedades estruturais do peptídeo Jaburetox. No capítulo 1 mostramos que a GST-uSBU é tóxica contra fungos filamentosos, interferindo no metabolismo secundário fúngico e na produção de pigmentos, e também foi tóxica a leveduras, induzindo mudanças morfológicas. A proteína de fusão apresentou ainda atividade inseticida e induziu agregação de plaquetas de coelho e de hemócitos de insetos. Os dados sugerem que GST-uSBU serve de modelo para o estudos futuros de propriedades biológicas de ureases de plantas. No captítulo 2, o peptídeo Jaburetox foi estabilizado em sua forma monomérica, com a utilização do agente redutor TCEP (tris (2-carboxietil) fosfina). O Jaburetox apresentou elevado raio hidrodinâmico, característico de uma proteína intrinsicamente desordenada. Estes dados foram confirmados através de análises de Dicroísmo Circular, de preditores de desordem (PONDR) e por Ressonância Magnética Nuclear. A estrutura do peptídeo em solução foi elucidada, apresentando um motivo α-hélice na região N-terminal e duas estruturas do tipo volta, uma na região central e outra próxima da região C-terminal do peptídeo. O conhecimento da estrutura tridimensional do peptídeo será de grande importância para o entendimento do mecanismo de ação inseticida e fungitóxico do Jaburetox. / Urease (EC 3.5.1.5) is a nickel-dependent metalloenzyme that catalyzes the hydrolysis of urea to form ammonia and carbon dioxide. Soybean (Glycine max) produces two urease isoforms: ubiquitous urease (uSBU) and the embryo-specific urease (eSBU). Our group demonstrated that eSBU displays biological properties independent of its ureolytic activity, such as platelets activation, insecticidal activity and inhibition of phytopathogenic fungi growth. These data suggested that soybean ureases could be involved in plant defense. Other ureases also studied by our group are jack bean (Canavalia ensiformis) ureases. Jack bean produces three isoforms of ureases, Canatoxin, JBU and JBURE-II, which also have biological properties unrelated to enzymatic activity. Among them, the insecticidal activity has been the most studied. The toxicity of ureases against insects involves hydrolysis by insect digestive enzymes and the release of a toxic internal peptide. An equivalent peptide was cloned in Escherichia coli and called Jaburetox. This peptide presents a broad spectrum of activity against insects and is also fungitoxic. In this thesis, our objectives were to study: 1) the biological properties of the soybean ubiquitous urease fused to Glutathione S- Transferase (GST-uSBU), and 2) the structural properties of the peptide Jaburetox. In chapter 1, we show that GST-uSBU is toxic against filamentous fungi, interfering on the fungal secondary metabolism, in the pigments production, and also affected yeasts, inducing morphological changes. GST-uSBU also displayed insecticidal activity and induced aggregation of rabbit platelets and insect hemocytes. Thus, this fusion protein could serve as model for future studies related to biological properties on plant ureases. In chapter 2, the peptide Jaburetox was stabilized in its monomeric form by using the reducing agent TCEP (tris (2-carboxyethyl) phosphine). Jaburetox showed a large hydrodynamic radius, which is characteristic of an intrinsically disordered protein. These data were confirmed by Circular Dichroism analysis, disorder predictors (PONDR) and Nuclear Magnetic Resonance. The structure of the peptide in solution was elucidated, showing a α-helix motif in the N-terminal region and two turn-like structures, one located in the central region and another near the C-terminal of the peptide. The knowledge of Jaburetox’s three-dimensional structure is an important step towards the understanding of its insectidal and fungitoxic mode of action.

Urease (EC 3.5.1.5) é uma metaloenzima dependente de níquel que catalisa a hidrólise da ureia à amônia e dióxido de carbono. A Soja (Glycine max) produz duas isoformas de urease: a urease ubíqua (uSBU) e a urease embrião-específica (eSBU). Nosso grupo demonstrou que eSBU apresenta propriedades biológicas independentes da sua atividade ureolítica, como ativação de plaquetas, atividade inseticida e inibição do crescimento de fungos fitopatogênicos, estes últimos sugestivos de envolvimento das SBUs em mecanismos de defesa da planta. Outras ureases também estudadas pelo nosso grupo, são as de Feijão-de-porco (Canavalia ensiformis). O Feijão-de-porco produz três isoformas de urease: Canatoxina, JBU e JBURE-II, que também apresentam atividades biológicas, não relacionadas à sua atividade enzimática. Dentre elas, a atividade inseticida tem sido a mais estudada. A toxicidade das ureases a insetos envolve a liberação de um peptídeo interno tóxico, mediante à hidrólise por enzimas digestivas do inseto. Um peptídeo equivalente foi clonado em Escherichia coli e denominado Jaburetox. Este peptídeo apresenta um amplo espectro de ação contra insetos e toxicidade contra fungos. Nossos objetivos nessa tese foram estudar: 1) as propriedades biológicas da urease ubíqua de soja, fusionada à Glutationa S-Transferase (GST-uSBU), e 2) as propriedades estruturais do peptídeo Jaburetox. No capítulo 1 mostramos que a GST-uSBU é tóxica contra fungos filamentosos, interferindo no metabolismo secundário fúngico e na produção de pigmentos, e também foi tóxica a leveduras, induzindo mudanças morfológicas. A proteína de fusão apresentou ainda atividade inseticida e induziu agregação de plaquetas de coelho e de hemócitos de insetos. Os dados sugerem que GST-uSBU serve de modelo para o estudos futuros de propriedades biológicas de ureases de plantas. No captítulo 2, o peptídeo Jaburetox foi estabilizado em sua forma monomérica, com a utilização do agente redutor TCEP (tris (2-carboxietil) fosfina). O Jaburetox apresentou elevado raio hidrodinâmico, característico de uma proteína intrinsicamente desordenada. Estes dados foram confirmados através de análises de Dicroísmo Circular, de preditores de desordem (PONDR) e por Ressonância Magnética Nuclear. A estrutura do peptídeo em solução foi elucidada, apresentando um motivo α-hélice na região N-terminal e duas estruturas do tipo volta, uma na região central e outra próxima da região C-terminal do peptídeo. O conhecimento da estrutura tridimensional do peptídeo será de grande importância para o entendimento do mecanismo de ação inseticida e fungitóxico do Jaburetox. / Urease (EC 3.5.1.5) is a nickel-dependent metalloenzyme that catalyzes the hydrolysis of urea to form ammonia and carbon dioxide. Soybean (Glycine max) produces two urease isoforms: ubiquitous urease (uSBU) and the embryo-specific urease (eSBU). Our group demonstrated that eSBU displays biological properties independent of its ureolytic activity, such as platelets activation, insecticidal activity and inhibition of phytopathogenic fungi growth. These data suggested that soybean ureases could be involved in plant defense. Other ureases also studied by our group are jack bean (Canavalia ensiformis) ureases. Jack bean produces three isoforms of ureases, Canatoxin, JBU and JBURE-II, which also have biological properties unrelated to enzymatic activity. Among them, the insecticidal activity has been the most studied. The toxicity of ureases against insects involves hydrolysis by insect digestive enzymes and the release of a toxic internal peptide. An equivalent peptide was cloned in Escherichia coli and called Jaburetox. This peptide presents a broad spectrum of activity against insects and is also fungitoxic. In this thesis, our objectives were to study: 1) the biological properties of the soybean ubiquitous urease fused to Glutathione S- Transferase (GST-uSBU), and 2) the structural properties of the peptide Jaburetox. In chapter 1, we show that GST-uSBU is toxic against filamentous fungi, interfering on the fungal secondary metabolism, in the pigments production, and also affected yeasts, inducing morphological changes. GST-uSBU also displayed insecticidal activity and induced aggregation of rabbit platelets and insect hemocytes. Thus, this fusion protein could serve as model for future studies related to biological properties on plant ureases. In chapter 2, the peptide Jaburetox was stabilized in its monomeric form by using the reducing agent TCEP (tris (2-carboxyethyl) phosphine). Jaburetox showed a large hydrodynamic radius, which is characteristic of an intrinsically disordered protein. These data were confirmed by Circular Dichroism analysis, disorder predictors (PONDR) and Nuclear Magnetic Resonance. The structure of the peptide in solution was elucidated, showing a α-helix motif in the N-terminal region and two turn-like structures, one located in the central region and another near the C-terminal of the peptide. The knowledge of Jaburetox’s three-dimensional structure is an important step towards the understanding of its insectidal and fungitoxic mode of action.